LABORATORIO No.

6 FISIOLOGIA CELULAR
INTRODUCCIN La existencia de la membrana plasmtica que rodea las clulas, funciona como una especie de "muro comunicante" que separa dos compartimentos, el extracelular y el intracelular. Esta separacin trae como consecuencia que las diferentes molculas e iones se distribuyan de manera asimtrica estableciendo diferenciales de concentracin y cargas elctricas que promueven el intercambio entre ambos compartimentos. Estas molculas e iones, pueden atravesar las membranas biolgicas mediante diferentes mecanismos, dependiendo de la naturaleza polar, el tamao de ellas y la diferencia de concentracin. Dentro del grupo de molculas que pueden atravesar las membranas, el paso de agua es muy importante para las clulas, porque utiliza un mecanismo particular que puede contribuir a disminuir diferencias extremas en las concentraciones de las sustancias disueltas entre los compartimentos, permitir la adaptacin celular al medio ambiente o causar la destruccin de la misma. Este flujo de agua y/o de diferentes sustancias puede traer como consecuencia cambios en la morfologa de clula que pueden ser apreciables al microscopio y que el estudiante aprender a identificar en esta prctica. Es por esto, que antes de iniciar este laboratorio los alumnos debern consultar con anterioridad acerca de los diferentes mecanismos de transportes de molculas por las membranas con permeabilidad selectiva. 6.1 OBJETIVOS: 6.1.1 OBJETIVO GENERAL: Comparar los procesos fsicos de difusin, osmosis y dilisis con el proceso fisiolgico mediante el cual las molculas se transportan a travs de las membranas celulares. Mida el tiempo de difusin en cada caso (ver Figura No 6.1). Para ello anote el tiempo inicial cuando se agreg el colorante y el tiempo final en que se difundi totalmente. La diferencia entre ambos es el tiempo de difusin. Haga una grfica en papel
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6.1.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS: Visualizar y diferenciar los fenmenos de osmosis y dilisis en clulas y modelos celulares Demostrar la importancia que tienen las concentraciones de distintas soluciones en el mantenimiento de la integridad de las clulas vegetales y animales. 6.2 MATERIALES: Microscopios Porta y cubre objetos Tubo de ensayo Gradilla para tubos de ensayos Papel milimetrado Hojas de Elodea Lancetas estriles Cuchillas Hojas de lirio Sangre Alcohol antisptico Algodn Vaso de precipitado de 250mL Papel celofn Solucin de almidn Solucin de lugol Soluciones hipo, iso e hipertnicas de cloruro de sodio Solucin de permanganato de potasio Suero ringer al 0.9 % Goteros 6.3 PROCEDIMIENTO: 6.3.1 Difusin: Coloque en tres tubos de ensayo 5 ml de agua destilada, a igual temperatura y numrelos. Agregue en cada tubo un nmero de gotas de permanganato de potasio en la siguiente forma: Tubo No. 1 = 1 gota Tubo No. 2 = 3 gotas Tubo No. 3 = 5 gotas

milimetrado de concentracin (# de gotas) vs. tiempo de difusin.

b c Figura No. 6.3 Clula vegetal en: a. Medio hipertnico; b. Medio isotnico y c. Medio hipotnico

Figura No 6.1. Tiempo de difusin de KMnO4 6.3.2 Osmosis: a. Deposite una hojita de Elodea en un porta objeto, adicinele tres gotas de solucin hipotnica, pngale el cubreobjeto y observe con menor y mayor aumento. Dibuje. Observa algn movimiento en los cloroplastos? Que nombre recibe este fenmeno? Segn el concepto de osmosis en qu sentido se debe difundir el agua?

6.3.3 Plasmolisis: a. Extraiga con una cuchilla un pedacito de epidermis del envs de una hoja de lirio, trate que quede libre de clorofila. Cuidando que no se arrugue depostela en el porta objeto y adicinele tres gotas de solucin hipotnica. Ponga el cubre objeto y observe. Dibuje b. Haga un nuevo montaje de epidermis de hoja de lirio, pero con una solucin hipertnica. Observe y dibuje. En cual de las dos muestras, elodea y epidermis de hoja de lirio, se observa mejor el fenmeno de plasmlisis? Explique Por qu?

Figura No. 6.2 Movimiento de cloroplastos

b. Deposite una hojita de Elodea en un porta objeto y agrguele tres gotas de una solucin hipertnica de cloruro de sodio, pngale el cubre objeto y observe con menor y mayor aumento. Haga un esquema de lo observado. Que cambios se presentan en el citoplasma de las clulas que usted observa? Que nombre recibe este fenmeno?

Figura No. 6.4 Vacuolas reducidas en clulas de epidermis de cebolla en medio hipertnico. c. Coloque una gotita de sangre en un porta objeto, agrguele unas gotas de suero fisiolgico 0.9%. Observe y dibuje Que forma tienen las clulas?

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CUESTIONARIO: S se vara la temperatura del agua en los tubos del numeral 6.3.1: a) Qu efecto tiene la temperatura sobre la velocidad de difusin? a. b. c. Figura No. 6.5 Eritrocitos en: a. Medio hipertnico; b. Medio isotnico y c. Medio hipotnico d. Siguiendo el procedimiento anterior observe sendas gotas de sangre, pero con soluciones hipotnicas e hipertnicas respectivamente. Que diferencias morfolgicas observ entre las clulas sanguneas ubicadas en las soluciones isotnicas, hipotnicas e hipertnicas? Interprete que sucede en cada una de las tres preparaciones sanguneas 6.3.4 Dilisis: b) Cul es el efecto de la concentracin sobre la velocidad de difusin? c) Investigue la ley de difusin de Graham y la primera ley de Fick. Qu diferencia observ entre las clulas de elodea y la epidermis de lirio? Como se llaman las estructuras respiratorias que hacen parte del tejido de epidermis de lirio? Defina que son soluciones iso, hipo, e hipertnicas? Como se podra desplasmolizar una clula? Por que no estalla una clula vegetal cuando se encuentra en un medio hipotnico? Qu es permeabilidad diferencial? Qu es presin osmtica? Qu es presin de turgencia? Por que no estallan los glbulos rojos cuando estn circulando por nuestros vasos sanguneos? Qu es crenacin? Qu es homestasis? A que se le llama transporte pasivo? En que consiste el transporte activo y el facilitado? Cual es la diferencia entre smosis ydilisis? Como regula el organismo humano el mantenimiento de la concentracin de sales en la sangre?

Figura No. 6.5 Montaje para dilisis a. Usando papel celofn, elabore una bolsa (tubo de dilisis) y coloque en ella una solucin de almidn. b. Amarre fuertemente el otro extremo de la bolsa y suspndala en un beaker o tubo de ensayo con agua destilada (ver figura No 6.5). c. Luego aada solucin de yodo (lugol) al agua de dicho beaker o tubo de ensayo. Tome nota de la coloracin caracterstica.

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ENLACES: http://cellbio.utmb.edu/cellbio/cell sch.htm: Curso interactivo sobre biologa celular con numerosos esquemas y microfotografas. http://www.bioanim.com/ Interesante pgina la que se pueden encontrar numerosos modelos interactivos en 3D sobre biologa celular e histologa http://www.biologie.unihamburg.de/b-online/e00/contents.htm Microscopa, citologa, histologa y bioqumica vegetal, con numerosas imgenes al ME y modelos moleculares en 3D, que pueden girarse en el espacio. Retornar a tabla de contenido.

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