Introduccion

Las enzimas son protenas que actan como aceleradores de las reacciones qumicas, de sntesis y degradacin de compuestos, stas se encuentran en todos los seres vivos y son piezas esenciales en su funcionamiento. stas tienen muchas aplicaciones en diversos tipos de industrias, entre las que se destaca la alimenticia, por ejemplo en la obtencin de yogurt, o la produccin de cerveza o de vino, ya que el proceso de fermentacin se debe a las enzimas presentes en los microorganismos que intervienen en su produccin. Sin embargo, para mejorar los procesos de produccin, pueden utilizarse enzimas aisladas, sin incluir a los microorganismos que las producen. Desde hace unas dcadas se dispone de enzimas relativamente puras extradas industrialmente de bacterias, hongos, plantas y animales, con una gran variedad de actividades, pero hoy en da se han desarrollado ms fuentes para la produccin de enzimas que permiten su aplicacin en diversos procesos, lo cual ha originado un rea interdisciplinaria llamada ingeniera enzimtica, como nuevo enfoque de la biotecnologa. En la actualidad se ha logrado obtener enzimas ms puras, con varias ventajas: accin ms especifica en su funcin cataltica; actividad predecible y controlable, uso de concentraciones ms elevadas del sustrato.

La imagen muestra la accin enzimtica, que al unirse son el sustrato adecuado, se produce la reaccin. La enzima no afecta el producto, solo cataliza la reaccin y se puede volver a obtener al terminar el proceso en el cual fue usada*.

Justificacin
La implementacin de microorganismos en los diversos procesos biotecnolgicos ha incrementado progresivamente, debido a que stos pueden complementar, y en algunas ocasiones reemplazar los procesos anteriormente usados, causando un menor impacto negativo en la naturaleza y proporcionando ms ventajas, ya que representan una disminucin en los costos de produccin y mayor rendimiento. Son muchas las aplicaciones de los microorganismos, sin embargo, est encaminado a la produccin de enzimas, actividad de gran importancia en la optimizacin los procesos que necesitan ser catalizados y en el control de enfermedades por deficiencia enzimtica, por ello, es preciso ampliar el conocimiento acerca de dicha accin microbiana en los procesos biotecnolgicos de la industria y la salud. La informacin contenida en ste artculo busca dar a conocer el papel de los microorganismos en la produccin de enzimas con la intencin de motivar a todas aquellas personas interesadas en el tema a profundizar en este proceso que despierta gran inters en la actualidad.

Importancia de la produccin de enzimas a partir de microorganismos

La sustitucin de los procesos qumicos, por naturales, es el principio bsico de la biotecnologa, la cual busca reducir el impacto negativo de dichos procesos en el medio ambiente, ya que adems de requerir gran inversin de capital, demandan condiciones especiales para la obtencin de productos de gran inters como las enzimas; para remediar esta situacin la investigacin cientfica ha desarrollado nuevas fuentes de los productos mencionados anteriormente de origen microbiolgico para contribuir en el desarrollo sostenible. La necesidad de acelerar los procesos con baja velocidad gener la bsqueda de alternativas para agilizarlos, dando como resultado la utilizacin de enzimas, principalmente obtenidas a partir de microorganismos, las cuales permiten la realizacin de un proceso ms sencillo, la optimizacin del producto al generar, mayor calidad, mayor utilidad en su aplicacin, mayor rentabilidad, y la obtencin de un producto diferente o en mayor cantidad que sirva para compensar su reducida disponibilidad. Los procesos en los cuales son necesarias las enzimas generalmente comprenden baja concentracin e inestabilidad de los productos formados y obtencin de mezclas complejas que impiden conseguir el producto deseado, por lo cual ste debe ser recuperado; por ello, el aislamiento de microorganismos, como recursos renovables, para su uso en la produccin de enzimas es muy usual en la industria y la salud, debido a los beneficios que stos ofrecen como estabilidad, especificidad y la aplicacin general viable. El uso de enzimas microbianas proporciona grandes ventajas en actividades necesarias como en la biorremediacin del agua, en la industria alimentaria y en la produccin de antibiticos. La actividad biocataltica de los microorganismos hace que stos, como seres unicelulares, sean usados de forma eficaz como enzimas extracelulares, las cuales facilitan su aislamiento y purificacin, generan mayor volumen, son ms puras y estables, porque poseen puentes disulfuro. Tambin se pueden obtener enzimas intracelulares, pero es un proceso ms complejo, ya que se debe provocar una lisis celular, separar sus restos y purificar el extracto de la enzima. Otras fuentes de enzimas son las plantas y animales, pero es preferible usar las originadas por microorganismos, ya que poseen diversas actividades catalticas, se pueden obtener en gran cantidad, son econmicas, se producen de forma regular, son ms estables y su proceso de produccin es ms factible y seguro, debido a que son fciles de cultivar por sus simples exigencias nutritivas y su tiempo de generacin es ms reducido. Adems, las plantas no son fuentes satisfactorias de enzimas porque acumulan productos de desecho en las vacuolas que inactivan la accin enzimtica.

Aplicacin de las enzimas producidas por microorganismos

Aplicaciones bioqumicas
Determinar la composicin en nucletidos, como lo hicieron Zingard y Uziel, usando la enzima fosfatasa alcalina inmovilizada para el anlisis secuencial de RNAt , por endonucleasas. Reasociacin e hibridacin, usando una subunidad inmovilizada de una enzima y las subunidades libres a estudiar. Cromatografa de afinidad, para aislar inhibidores enzimticos y pptidos marcados, por afinidad con determinado sustrato, separndolos. Simular acciones bioqumicas de forma ms acelerada, por ejemplo, Storelli utiliz un complejo de la enzima sacarasa-isomaltasa y la uni a una mezcla de fosfolpidos, que formaron una bicapa lipdica, para simular el transporte activo de la membrana celular, dando como resultado un proceso igual, pero de mayor velocidad.

Aplicaciones en anlisis
Las propiedades de las enzimas como su elevada afinidad con el sustrato puede ser la base de dispositivos analticos sin reactivos que pueden aportar datos sobre la pureza ptica de un compuesto qumico, as como de su identidad qumica y concentracin La fabricacin de electrodos indirectos de enzimas, que implican la deteccin de un reactante enzimtico, mediante un electrodo especfico, usualmente selectivo a un in. Las enzimas estn ligadas a un transductor que consiste en una capa de enzimas en contacto con ste. El sustrato se difunde hacia la solucin en la que est colocado el electrodo, se produce la reaccin y el transductor mide la aparicin del producto, por ejemplo los electrodos selectivos de pH y de in amonio. La cuantificacin de sustancias, por ejemplo, Hicks y Updike atraparon la enzima lactato deshidrogenasa y la glucosa oxidasa en poliacrilamida para cuantificar lactato y glucosa mediante espectrofotometra de un colorante acoplado. A partir de ello se crearon dispositivos sensores de DBO, biomasa, gastrina, glucosa, NADH, iones sodio, sacarosa, sulfato, bacterias de sfilis y urea, entre otros. El anlisis de trazas en la determinacin de concentracin de nitrato, a travs de la reduccin y oxidacin generada por enzimas Los dispositivos analticos basados en enzimas, que se caracterizan por su sensibilidad, tiempo de respuesta y lmites de deteccin, como ocurre al emplear enzimas en el agitador con enzimas inmovilizadas, o en los anlisis quimiluminomtricos, que usan la enzima luciferasa para analizar reacciones que usan NADH, NADPH o ATP, que al detectar una catalizacin emite una luz.

Aplicaciones en la medicina
Estas aplicaciones se basan en el fenmeno general de que las clulas enfermas pierden una parte de sus enzimas que ocasionalmente van a parar a la sangre, provocando la elevacin de la actividad enzimtica del suero, dependiendo de la gravedad de la enfermedad. Las enzimas se usan como reactivos para control y seguimiento de enfermedades y para la observacin de la respuesta de los pacientes en terapia. Por ejemplo para el anlisis del colesterol del suero se usa la enzima colesterol oxidasa, que se obtiene a partir de Pseudomonas fluorescens, que al ser suministrado un inductor, el enzima se acumula en forma intra- y extracelular y se purifica. Diagnstico enfermedades, como ocurre con ELISA. Las tcnicas enzimticas tambin se utilizan en la deteccin de drogas, anlisis de antibiticos, deteccin de antgenos o anticuerpos o en la deteccin de enzimas y metabolitos en los fluidos intracelulares y son usualmente ms rpidas, especificas y econmicas que otras pruebas. El uso de enzimas microbianas en la cuantificacin de drogas quimioteraputicas toxicas en el suero, como en el anlisis colorimtrico. En el tratamiento de enfermedades, por ejemplo, las enzimas tripsina o colagenasa, que se usan para eliminar los tejidos muertos de heridas, quemaduras, etc, para acelerar el crecimiento de nuevos tejidos e injertos de piel e inhibir el crecimiento de organismos contaminantes. Actividad antitumoral, como la enzima pterin-desaminasa desamina la pterina, el cido pteroico y el cido flico. Antiinflamatorio, como la enzima superxido dismutasa.

Inhibicin de la actividad O6-alquilguanina-ADN alquiltransferasa

Aplicacin industrial
En la fabricacin de jarabes de maltosa, que se usa en mermeladas y en pastelera por su resistencia a la aparicin de color, por no ser absorbente y no cristalizar tan fcilmente como los jarabes de glucosa; tambin se usa en la cervecera y panadera porque su contenido de azcar fermentable es alto y se mantiene estable durante el almacenamiento, por ejemplo, se usan enzimas como la pulalanasa. Refinado de azcar, para ello se usa la rafinosa que se obtiene del moho Mortierella vinacea raffinosutilizer o laa- amilasa producida por B. licheniformis. La hidrlisis enzimtica de celulosa a glucosa, a travs de la celulasa, obtenida del Trichoderma viride, que sirve como endulzante, como fuente de energa o para transformarla en productos valiosos como el etanol. Las aplicaciones comerciales son como auxiliar de alimentos vegetales y degradador de desechos domsticos. Fermentacin alcohlica, recientemente se han aadido enzimas bacterianas para suplementar enzimas endgenas asociadas con el almidn, para disminuir la viscosidad del almidn; en la elaboracin de cerveza se usan enzimas para el remojo y acondicionamiento, degradando el almidn de la cebada y dando lugar al mosto de cerveza, formando azcares fermentables y dextrinas lmites que no fermentan y permanecen en la cerveza aumentando su valor calrico; tambin hacen que resista la refrigeracin, alargue su vida til y para filtrar la levadura. Panadera, las enzimas catalizan el abultado y maduracin del pan , aumentado su volumen; la harina se suplementa con enzimas como la a-amilasa y la proteasa, para elevar la velocidad de fermentacin y reducir la viscosidad, mejorando el volumen y textura del producto y generando azcares que mejoran el sabor y la calidad. En la industria lctea, en la hidrlisis de la lactosa en glucosa y galactosa, para que pueda ser consumida por personas con intolerancia a la lactosa; para evitar la prdida de nutrientes en el suero del queso, stos problemas se pueden eliminar o reducir con la hidrlisis enzimtica de la lactosa por medio de la enzima galactosidasa inmovilizada, obtenida principalmente de Saccharomyces lactis y Escherichia coli. Para el cuajo de la leche se emplean enzimas provenientes de Mucor pusillus. Tambin algunas enzimas producen un olor y sabor que identifica el producto, y aceleran la maduracin del queso, como el Bacillus spp y lipasas para generar aromas agradables en productos como la mantequilla. Aminocidos, para suplementar los alimentos, enzimas como la aminocido acilasa ayudan a su apropiada produccin; la enzima aspartasa del E. coli ayuda en el proceso de produccin de cido asprtico. Antioxidantes; la oxidacin de productos genera la prdida de valor nutritivo y calidad y formacin de toxinas, para solucionarlo, algunas enzimas con propiedades antioxidantes son: la glucosa oxidasa, la superxido dismutasa, la catalasa la glutatin peroxidasa y la colesterol oxidasa. Detergentes; dado que la proteasa derivada de Bacillus subtillis, tolera un medio alcalino, se emplea para hidrolizar los residuos alimentarios que contienen protenas y almidn.

Industria textil, para elevar la resistencia en el tejido, se usa almidn adhesivo y para el tratamiento del cuero, se emplea la tripsina pancretica que solubiliza las grasas y gomas y mejora la absorcin del agua. Tambin se usan proteasas para evitar la degradacin de elastinas y queratinas y la desnaturalizacin del colgeno.

En la descomposicin de lactosa se usaa la enzima lactasa para actuar sobre el sustrato de lactosa para que al descomponerse en glucosa y galactosa, se hagan texturas de los quesos con agujeros.

Microorganismos productores de enzimas

A pesar de los avances biotecnolgicos en la eleccin de enzimas, an hace falta explorar ambientes nuevos o exticos para encontrar microorganismos que desarrollen enzimas con propiedades excepcionales. La mayora de las enzimas microbianas se producen a partir de aproximadamente 25 organismos, sin embargo, solo alrededor del 2% de los microorganismos se han ensayado como fuente de enzimas. A pesar de la multiplicidad de los microorganismos, un nmero limitado se usa como fuente de enzimas, frecuentemente porque es ms fcil llevar a cabo la purificacin de varias enzimas a partir de un microorganismo, para reducir costos. Los microorganismos adecuados para la produccin de enzimas deben ser estables y aceptados por las autoridades de control, tener facilidad y rapidez de crecimiento con nutrientes sencillos y relativamente baratos, producir una enzima de alto rendimiento, que sea fcil de aislar, purificar y concentrar sin contaminantes o txicos. Tradicionalmente, el objetivo es maximizar la velocidad de formacin de la enzima para minimizar los costos de produccin de la enzima. En los microorganismos, el rendimiento es igual a la masa de clulas obtenida, multiplicada por el volumen, por ello, lo adecuado es combinar de la mejor manera la cepa seleccionada, las condiciones de recuperacin y fermentacin y el equipo ms apropiado. Habitualmente los microbios se sumergen en fermentadores bien agitados y aireados o en fermentadores slidos o semislidos, por ejemplo, los que producen lactasa, a-amilasa, proteasa, entre otros. Lo ms adecuado es usar enzimas termostables, que a mayor temperatura, producen mayor velocidad de reaccin, menor viscosidad del sustrato, mayor solubilidad del reactivo y menor contaminacin. Adems, para liberar ms rpido la enzima se aaden surfactantes al medio de cultivo que aceleran la liberacin. Las reacciones enzimticas se llevan a cabo por numerosas enzimas con distintas funciones, por ello, una pequea cantidad de enzimas son necesarios, inclusive a escala industrial; los preparados enzimticos necesitan poco espacio de almacenamiento y las reacciones son controladas de forma sencilla y pueden detenerse cuando se ha alcanzado el grado deseado de conversin de sustrato. Las enzimas microbianas se consideran seguras porque son extractos naturales, adems las enzimas txicas son muy raras. La introduccin de nuevas enzimas requiere una demostracin de que no son txicas. Los microorganismos ms comunes usados en el sector comercial son los hongos y bacterias, entre ellos se destacan los Aspergillus niger, A. oryzae y Bacillus subtilis.

Enzima Amilasa

proteasa

Invertasa Glucosa oxidasa Glucosa isomerasa pectinasa renina celulasa ligasa lactasa DNA polimerasa

Fuente Hongos Bacterias hongos Bacterias hongos bacterias bacterias hongos Bacterias Bacterias Bacterias Bacterias bacterias levadura hongos bacterias hongos hongos bacterias hongos hongos Bacterias Archea

Aplicacin industrial Pan Revestimientos Fabricacin de jarabes y glucosa Almidonado en frio de la ropa Ayuda digestiva Eliminacin de revestimiento Eliminacin de manchas;detergentes Pan Eliminacin de manchas Ablandador de carne Limpieza de las heridas Eliminacionde revestimiento Detergente domestico Relleno de caramelos Eliminacin de glucosa y oxigeno, papeles para pruebas de la diabetes Jarabe de cereales rico en glucosa Prensado, clarificacin de vinos Coagulacin de la leche Suavizante y abrillantador de tejidos, detergente Degradar la grasa Degrdarla lactosa a glucosa y galactosa Replicacin del ADN por PCR

Industria Panaderia Papelera Alimentaria Almidon farmaceutica textil lavanderia Panaderia Limpieza en seco Crnica Medicina Textil Lavandera Confitera Alimentaria Farmaceutica Bebidas refrescantes Zumos de frutas quesera Lavandera Lechera, lavandera Lechera, alimentos Investigacin bologica y forence

En la tabla se muestran los productos obtenidos por enzimas microbianas

Hongos productores de enzimas

Frecuentemente las enzimas fngicas tienen un pH cido o neutro y no son termoestables. Los ms usados son: Penicillium lilacinum Penicillium funiculosom Saccharomyces cerevisiae Aspergillus niger (cepas como: A. awamori, A. foetidus, A. phoenicis, A. saitoi y A. usumii) Aspergillus oryzae (cepas como: A. sojae y A. effusus) Mucor javanicus Rhizopus arrhizus Rhizopus oligosporus

Kluyveromyces fragilis Rhizopus oryzae Kluyveromyces lactis

Bacterias productoras de enzimas

Las enzimas bacterianas tienden a tener un pH alcalino o neutro y con frecuencia son termoestables. Las ms usadas son: Bacillus subtilis (cepas como: B. mesentericus, B. natto y B. amyloquefaciens) Leuconostoc oenos

Avances en la produccin de enzimas a partir de microorganismos

Principales empresas productoras de enzimas a nivel mundial
El mercado de la produccin de enzimas est abarcado por 20 compaas de Europa, Japn y Estados Unidos, principalmente por: Novo Nordisk de Dinamarca, Gist Brocades de Neatherlands y Rhom and Haas de Alemania. En Latinoamrica hay empresas productoras de enzimas en Mxico, Brasil, Argentina y Uruguay, que son subsidiadas por empresas internacionales, como la empresa Pfizer en Mxico y Brasil y Novo en Brasil; pero en Colombia se importan las enzimas debido a que no existe produccin a nivel industrial.

Descubrimientos importantes respecto al uso de enzimas

Dos tipos de bacterias producen energa a partir de restos de comida

El hidrgeno tiene ms energa potencial que el petrleo, lo que le denomina el combustible con mayor contenido energtico. Se ha empleado el uso de bacterias para su produccin debido a la dificultad de los asuntos energticos. En Reino Unido, en la Universidad de Birmingham, la Unidad de Bionanomateriales Funcionales ha montado dos biorreactores que recrean las condiciones ideales para que dos bacterias, la cimgena y la prpura, produzcan hidrgeno a partir de desperdicios orgnicos; el proceso consiste en que las bacterias cimgenas usan carbohidratos para producir hidrgeno y cidos por fermentacin, cuando no hay oxgeno; mientras que la bacteria prpura utiliza la luz para producir energa a travs de la fotosntesis y fabrican hidrgeno para ayudarlas a romper molculas como las de los cidos. Estas dos reacciones se complementan, ya que la bacteria prpura puede utilizar los cidos producidos por la bacteria cimgena. Las enzimas hidrogenasas de las bacterias sobrantes pueden recuperar metales de los catalizadores y ayudar en la fabricacin de celdas de combustible. As no se desperdicia biomasa y se convierte la basura en fuente de energa.

Enzimas que convierten cualquier sangre en tipo O Henrik Clausen, de la Universidad de Copenhague de Dinamarca y sus colaboradores de ZymeQuest probaron ms de 2500 tipos bacterias y hongos, buscando enzimas ms eficientes para encontrar enzimas capaces de cambiar el tipo de sangre. Finalmente encontraron una enzima producida por el bacteroides fragilis que elimina el antgeno B y otra producida por elizabethkingia meningosepticum que elimina el antgeno tipo A. Las enzimas son glicosidasas, que son muy eficientes depues de ser purificadas. La combinacin de las dos enzimas convierte cualquier grupo sanguneo en grupo O, la cual puede ser la clave para producir sangre tipo O a partir de los grupos A, B y AB, para evitar la escasez de este tipo de sangre, que a pesar de ser la ms comn, presenta dficit debido a su carcter de donante universal y receptor slo del mismo tipo. Obtencin de celulosa sin contaminacin secundaria La contaminacin provocada por la industria del papel puede ser reducida por el uso de enzimas producidas por hongos que degradan naturalmente madera. La produccin de celulosa genera desechos muy contaminantes, lo cual implica la implementacin de procesos muy costosos para reducir contaminantes en el agua. Para obtener la celulosa, principal componente de la madera, sta se debe separar de la lignina, que le proporciona rigidez al rbol, usando tratamientos qumicos muy txicos, un nuevo mtodo que reduce dicha contaminacin es la utilizacin de enzimas ligninolticas, sintetizadas por los hongos de pudricin blanca, que degradan la lignina de forma natural, no provocan dao ambiental, pueden extraer la lignina de distintos tipos de rboles y tienen un costo menor.

Citacin bibliogrfica 1. Wiseman, Alan. Manual de biotecnologa de los enzimas. Zaragoza, Espaa : Acribia S.A., 1985. 2. Kelly, Catherine T. Fogarty, William M. Microbial enzymes and biotechnology 2nd edition. England : ELSEVIER SCIENCE PUBLISHERS LTD, 1990.

Citacin pginas web

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2. College, Occidental. Bio. 130 Intro. to celular chemistry. Translation and Signal Sequence. [En lnea] 17 de octubre de 2000. [Citado el: 3 de octubre de 2008.] http://departments.oxy.edu/biology/bio130/lectures_2000/11-17-00_lecture.htm. 3. NeoFronteras. NOTICIAS DE CIENCIA Y TECNOLOGIA. Unas enzimas convierten cualquier sangre en tipo O. [En lnea] 10 de Abril de 2007. [Citado el: 6 de 2008 de Octubre.] http://neofronteras.com/.