4.

Elaboracin de un Manual de Procedimientos de Laboratorio de Anlisis Clnicos de la Facultad de Medicina de la UNSA El laboratorio de Anlisis Clnicos de la Facultad de Medicina de la UNSA viene funcionando desde el mes de setiembre de 1995, fue aprobado por Resolucin Rectoral N 173-97 del 31-03-97, y por Resolucin Rectoral N 503-97 del 08-07-1997. Dependemos del Decanato de la Facultad de Medicina CUYOS OBJETIVOS SON: Proceso de enseanza aprendizaje a nivel de Pre y Postgrado Aporte a la Investigacin Cientfica y Tecnolgica Prestar servicio de Anlisis Clnicos Capacitacin de Docentes, Tcnicos Egresados, Alumnos de la facultad y/o afines, personas naturales Generar equipamiento Ser el primer Laboratorio de referencia externa Acreditado y Certificado SECCIONES ESTA INTEGRADO POR LAS SIGUIENTES SECCIONES A. B. C. D. E. F. G. H. SECRETARIA TOMA DE MUESTRAS I Y II BIOQUIMICA HEMATOLOGIA INMUNOLOGIA MICROBIOLOGIA PARASITOLOGIA ANATOMIA PATOLOGICA (BAJO LA SUPERVISIN DE LA SECCIN DE PATOLOGIA DEL DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIA Y PATOLOGIA DE LA FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNSA Ingresos econmicos para su funcionamiento y

A. SECRETARIA RESPONSABLE: Sr. GUILLERMO ALCIDES VENGOA BUTRON La secretaria es un rgano de apoyo de la Direccin del Centro de Produccin de Bienes y/o Prestacin de Servicios, esta a cargo de un(a) secretario(a), funcin que es designada por resolucin especifica de la Oficina Universitaria de Personal. Las funciones de secretaria son: DE GESTION: Con la autorizacin expresa del Sr. Dr. Director del Laboratorio Elabora los Estados Financieros, Elabora los flujos de Caja, los Planes Operativos, Elabora los presupuestos anuales, Solicita y recepciona de los responsables de rea sus pedidos de necesidades Elabora el cuadro de requerimientos de las necesidades, Elabora el consolidado de las propuestas con precios referenciales, Elabora el cuadro comparativo, Elabora la propuesta final de las compras sea Directa o por Licitacin, para su aprobacin por el Dr. Jefe del Laboratorio y el Visto Bueno del Sr. Decano de la Facultad de Medicina y elevarlo para su aprobacin final por el Sr. pliego Mantiene actualizado el Kardex de los reactivos e insumos con los precios actualizados y los costos de ellos por prueba ,Elabora el cuadro general de los costos de los exmenes para la actualizacin en el TUPA Institucional de la Universidad Por orden expresa del Sr Director del Laboratorio, realiza las compras, con dineros provenientes de Caja Chica rindiendo cuentas al Sr. Director del Laboratorio y a la Oficina de Economa segn directiva N 001-2009V.R.AD optimizando el gasto y la calidad en beneficio del Laboratorio Rector responsable del

Actualiza diariamente la estadstica del nmero de pacientes, el consolidado anual dentro de las metas por resultados de lo planificado Realizar labores de secretariado, y las ordenadas por el Director Responsable del Centro. Ejecuta los trmites administrativos. Controlar y mantener actualizada la documentacin y archivarla. Controlar los registros (notas, libros, actas, firmas, recibos, otros) Proporcionar en forma oportuna la informacin requerida con relacin al personal. Por orden expresa se la asigna la responsabilidad de la custodia de las llaves del laboratorio y de los ambientes internos, apertura y cierra las instalaciones, Vela y hace velar por la custodia ,la conservacin de las instalaciones, maquinarias y equipo del Centro de Produccin de Bienes y/o Prestacin de Servicios, a cargo suyo y de los responsables de las diferentes reas del laboratorio

Realizar tramites urgentes correspondientes al Centro de Produccin de Bienes y/o Prestacin de Servicios, Tramitar los recibos de caja y realizar los depsitos de los ingresos en la caja central de la UNSA. Organizar y actualizar archivos. Brindar servicios a los Docentes, Administrativos, alumnos y pblico en general. Se sujeta a la normatividad de la 276 /005 y las normativas internas observando la reserva absoluta sobre la funcin y gestin asignada Otras funciones inherentes al cumplimiento de sus funciones

OPERATIVAS Es responsable de la recepcin, orientacin y atencin de las personas que acudan a UPSIPROBI - LABORATORIO DE ANLISIS CLNICOS. Elaboracin de las solicitudes de exmenes auxiliares solicitados. Responsable del cobro por concepto de exmenes auxiliares, respetando las tarifas establecidas.

Vaciado de resultados de los exmenes solicitados, en el formato pre establecido, debiendo verificar la concordancia de los resultados que transcribe con los que se encuentran en la ficha de solicitud del examen, someter a nueva verificacin del vaciado al tcnico del rea respectiva y luego de la correcciones a que hubiera lugar, someter a nueva verificacin por el medico responsable de dicha rea luego de la nuevas correcciones a que hubiera lugar proceder a su validacin final a travs de su firma siendo este ultimo el responsable final de tal resultado

Proporciona con ayuda del SISTEMA la informacin del nmero de exmenes procesados por seccin y el monto de dinero recaudado por cada examen a la Jefatura UPSIPROBI - LABORATORIO DE ANLISIS CLNICOS.

Informar a la Jefatura de UPSIPROBI - LABORATORIO DE ANLISIS CLNICOS sobre las ocurrencias y actividades producidas en su unidad. Participar en la capacitacin del personal. Velar por el mantenimiento y conservacin de la planta fsica y equipo de su seccin. bajo su responsabilidad, segn directiva 005-2009 V.R. AD.Usuario Responsable.- Para efectos de la presente directiva, se entiende como usuario responsable al funcionario, servidor administrativo, servidor docente, o contratado bajo cualquier modalidad, que se encuentre en posesin de los bienes muebles asignados

Cumplir con los roles de trabajo y vacaciones de la seccin. Otras que le asigne la Jefatura de UPSIPROBI - LABORATORIO DE ANLISIS CLNICOS. Depende directamente de la Jefatura de UPSIPROBI - LABORATORIO DE ANLISIS CLNICOS.

B. TOMA DE MUESTRA I RESPONSABLES: Qum. OLGA GAONA PUERTAS Blga. ROSS MERY CAHUANA CHIPANA INDICACIONES: Acercarse en ayunas al Laboratorio Clnico. El ayuno ideal es de 10 a 12 horas. No fumar antes ni durante la realizacin de exmenes de laboratorio. No ingerir bebidas alcohlicas tres das antes de la realizacin de los exmenes de Laboratorio. Si est tomando algn medicamento, debe informar en la toma de muestras. Si se ha realizado un examen de radiologa con medio de contraste, NO se realice ningn examen del Laboratorio hasta despus de tres das. No realice ninguna actividad fsica (trotar, ejercicios) antes de la realizacin de los exmenes. Las muestras que entrega en el laboratorio, deben estar bien marcadas con el nombre del paciente a quien pertenecen. MATERIALES: Bandeja. Algodn. Antisptico (Alcohol yodado). Jeringa (segn cantidad de muestra). Ligadura.

Esparadrapo. Guantes. Tubos de ensayo de recogida de muestras. Tubos cnicos graduados Frascos con anticoagulante Impreso de peticin de analtica. Etiquetas identificativas. Resguardo informativo (cuaderno de registro). Contenedor de objetos punzantes. Lancetas. Papel higinico. ANTICOAGULANTES: Anticoagulante de Wintrobe - hemogramas y hemoglobinas, velocidad de Citrato de sodio - tiempo de protrombina; en un tubo cnico graduado se Anticoagulante EDTA - se recomienda para realizar pruebas generalmente en sedimentacin. coloca 1 parte de solucin de citrato de sodio por 9 partes de sangre venosa. equipos computarizados. PROCEDIMIENTO DE TOMA DE MUESTRAS Identificacin positiva del paciente. Revisar la peticin de analtica y comprobar cantidad (una o ms

peticiones), determinaciones, datos del paciente, datos mdicos como diagnstico o tratamiento. Explicar el procedimiento al paciente. Sentar al paciente. Preguntar si viene en ayunas o cualquier otro dato necesario previo a la Reunir todo el material necesario y llevarlo al lado del paciente. Colocarse los guantes. Colocar la ligadura entre 7,5 cm o 10 cm por encima del punto de puncin.

extraccin.

Forma de hacer el torniquete: se coloca la ligadura alrededor del brazo con

los dos extremos hacia nosotros; se cruza el extremo izquierdo sobre el derecho y tire del extremo izquierdo hacia el hombro, manteniendo la tensin mientras que se hace un lazo en la seccin del torniquete que rodea el brazo; esta forma de asegurarlo permite soltarlo con una sola mano. Tensin del torniquete: el torniquete debe asegurarse con la tensin suficiente para que ponga las venas prominentes pero que no comprometa la circulacin. Si est muy apretado la piel se pondr blanca alrededor y si est muy flojo se escurrir, sultelo y asegralo otra vez. El uso prolongado de la ligadura obstruye el flujo de la sangre y causa la acumulacin anormal de fluidos y elementos de la sangre que puede afectar el resultado del anlisis. codo. Seleccionar la vena por palpacin cuidadosamente. La palpacin se har con el dedo ndice, palpando con suavidad y firmeza. Las venas tienen una consistencia esponjosa y rebotar bajo la presin del dedo. Las arterias se encuentran a mayor profundidad y palpitan; los tendones estn duros, son como cuerdas, resistentes a la presin. Antes de elegir una vena hay que ver su tamao, direccin y profundidad. Con Nunca asuma que una lnea azul es una vena que le dar sangre. Desinfectar la zona elegida con alcohol yodado para evitar la contaminacin Debe hacerse con una torunda en forma circular, desde dentro hacia fuera. Dejar secar el alcohol o secarlo antes de puncionar; ya que si se deja hmeda el paciente sentir quemazn durante la puncin y si el alcohol penetra en el la experiencia se desarrolla un buen sentido del tacto para escoger la adecuada. ms Pedirle al paciente que cierre la mano, esto hace que la vena sea ms Tiempo del torniquete: la ligadura no debe ponerse ms de 1 minuto y si en ese En caso de trastorno de la piel o excesivo vello la ligadura se puede poner encima de la manga. Colocar el brazo hiperextendido, de manera que la mano est ms baja que el prominente. tiempo no se localiza la vena, sultelo y pngalo de nuevo pasados minutos. 3

bacteriana o qumica.

sistema de extraccin de sangre se producir una hemlisis que alterar los resultados. Si tiene que volver a palpar la vena, lim pie su dedo con alcohol pero no toque Encaje la aguja firmemente. En ambos casos compruebe que la aguja no Inmovilice la vena seleccionada colocando el pulgar debajo de la zona de la zona de puncin. contenga bordes speros o toscos, pero nunca la toque. puncin y tense la piel; as se impide que la vena se escurra en el momento de la puncin, el resto de los dedos se ponen detrs del codo para evitar que ste se doble o prevenir cualquier movimiento. Con el bisel hacia arriba puncione la piel. La pared superior de la vena debe ser puncionada y el bisel debe quedar en el interior de la vena; cuando la aguja est asegurada se conecta el primer tubo o se aspira para que sangre la fluya; una vez que empiece a salir soltar el torniquete. Todos los tubos con anticoagulante hay que agitarlos suavemente invirtiendo los tubos. Si se hace muy fuerte o muchas veces se puede producir hemlisis y si no lo hacemos suficientemente producir coagulacin Retiraremos la aguja, con un movimiento rpido y suave hacia atrs y se aprieta la zona con el fin de evitar la formacin de un hematoma. La presin en la zona se har durante ms de cinco minutos o el tiempo necesario segn el tipo de paciente, manteniendo recto el brazo. Se retira todo el material, colocando cada uno en el contenedor correspondiente. INDICACIONES PARA LA CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA: Efectuar la toma de muestra para una glicemia basal. Proceder con la suministracin del carbohidrato 75 gr. De glucosa anhidra. Realizar la segunda toma de muestra 30 minutos despus de haber ingerido la Realizar la tercera toma de muestra 1 hora despus de la segunda toma de Realizar la tercera tom a de muestra 1 hora despus de la segunda toma de

solucin de Glucosa. muestra. muestra.

INDICACIONES

PARA

PROTEINURIA

DE

24

HORAS,

DEPURACIN DECREATININA: Descarte la primera orina de la maana para dejar la vejiga totalmente Guarde TODA la orina eliminada durante las 24 horas siguientes, incluyendo La muestra debe tenerse en refrigeracin o en un lugar fresco. La ingesta de lquidos debe ser norm al. Llevar la m uestra al laboratorio lo ms pronto posible, para su procesam iento. Si tiene alguna duda por favor com unquese con el laboratorio. desocupada. la prim era orina de la maana del da siguiente, en el recipiente entregado.

TOMA DE MUESTRAS 2 RESPONSABLE: Blga. MARY LUZ MAMANI BARREDA I.

II. INDICACIONES
De acuerdo al examen solicitado

A.

MATERIALES

Guantes quirrgicos Contenedores para la recoleccin y traslado de las muestras Frascos esterilizados de plstico o vidrio de boca ancha y tapa rosca Laminas con cinta adhesiva para el test de Graham. Etiquetas adhesivas Baja lenguas estriles Tubos de vidrio conteniendo hisopos estriles Palitos de chupete Papel higinico Bolgrafos Impreso de peticin u hoja de solicitud Resguardo informativo (cuaderno de registro)

B.

PROCEDIMIENTO Identificacin positiva del paciente Revisar la peticin analtica y comprobar cantidad (una o ms peticiones), determinaciones, datos del paciente, datos mdicos como diagnostico o tratamiento.

Explicar el procedimiento al paciente de acuerdo al examen solicitado Entregar al paciente el material necesario previamente etiquetado y codificado para el caso de muestras de orina, heces y test de Graham En el caso de exmenes en el que el paciente viene preparado de acuerdo a las indicaciones previas y requiere ser tomadas, este ser realizado por el propio personal muestras entrenado del laboratorio y las

Recepcionar las muestras previamente identificadas y codificadas de acuerdo al impreso de peticin u hoja de solicitud Colocar las muestras en el contenedor respectivo para su posterior traslado al rea correspondiente del laboratorio. Anotar los exmenes en el cuaderno de registro

INSTRUCCIONES PARA LA TOMA DE MUESTRA INSTRUCCIONES PARA RECOGER UNA MUESTRA DE ORINA El frasco tiene que ser suministrado por el Laboratorio. Es preferible que la orina sea la primera orina de la maana. Practicar previo aseo genital, con agua y jabn. Deje escapar la porcin inicial de la miccin al inodoro, a continuacin recolecte en el frasco la porcin media y descarte la porcin final de la miccin nuevamente en el inodoro. Tape bien el frasco y entrguelo rpidamente al Laboratorio. NO recoger la muestra durante el Periodo Menstrual PARA RECOGER UNA MUESTRA PARA

INSTRUCCIONES UROCULTIVO

De Usted depende que el resultado de este examen sea CONFIABLE, por lo tanto le rogamos seguir las instrucciones para recoger la muestra

con todo cuidado: El frasco tiene que ser estril, suministrado por el Laboratorio. Es preferible que la muestra sea la PRIMERA de la maana. Para que la muestra no salga contaminada deber practicarse un lavado de la zona genital con una solucin antisptica suave y luego se enjuaga con abundante agua estril; la mujer debe separar los labios de la vulva en el momento de la miccin y en el hombre debe practicarse antisepsia del prepucio. Deje escapar la porcin inicial de la miccin al inodoro; a continuacin recolecte en el frasco la porcin media y descarte la porcin final de la miccin nuevamente al inodoro. Tape bien el frasco y entrguelo rpidamente al Laboratorio (no deben transcurrir ms de 20 minutos en entregarla).

INSTRUCCIONES ESPERMOGRAMA

PARA

RECOGER

UNA

MUESTRA

DE

Recoger en recipiente de vidrio suministrado por el Laboratorio. Abstinencia sexual de cinco (5) das exactamente. Mtodo: Masturbacin (no recoger con condn ni con relaciones sexuales). La muestra se puede recoger en el Laboratorio o en la casa pero no deben transcurrir ms de 20 minutos entre la recogida y la entrega al Laboratorio.

III. INSTRUCCIONES PARA LA SANGRE OCULTA EN HECES.

Explicar al paciente en que consiste el procedimiento Dieta Especial: tres das antes de la recoleccin de la

muestra se debe suspender carnes rojas, pescados, embutidos, remolacha y alimentos con colorantes, tomate, vitamina C, brcoli, coliflor, rbanos, nabos, espinacas, manzana banano, uvas, alcohol,

caf, t, menestras y frmacos (aspirina, hierro, etc.) que puedan interferir con la prueba. El 4 da recoger en un frasco bien limpio de boca ancha

suministrado por el Laboratorio, 2 o 3 cucharadas de materia fecal tratando de seleccionar las partes oscuras de la misma. Si el mdico solicita muestras seriadas la dieta deber

continuarse hasta completar la recoleccin. Nota: No cepillarse los dientes durante el perodo que dure la

prueba para evitar la posible contaminacin por sangrado de las encas.

INSTRUCCIONES PARA RECOGER MUESTRA PARA BK EN ORINA. Solicitar recipiente estril en el laboratorio Recoger muestra de orina segn orden: - Orina al Azar: Primera Orina de la maana, miccin completa. - Orina Seriada: Primera Orina de la maana, miccin completa durante tres das seguidos. Entregar las muestras en el Laboratorio lo ms pronto posible. NO recoger muestras si esta tomando antibiticos

INSTRUCCIONES PARA LA OBTENCIN DE EXPECTORACIN PARA BK Hacer grgaras con agua y escupirlas. Expectorar y depositar la muestra en un recipiente estril de boca ancha. Si no fuera posible una verdadera expectoracin entonces: - Sobre la cama colocar 2 almohadas y recostarse colocando el abdomen sobre ellas con la cabeza colgada. - Respirar aire suficiente, levantar el tronco lo ms que se pueda y regresar bruscamente a la posicin anterior. - Depositar la expectoracin en el recipiente estril (suministrado por el laboratorio).

Se recomienda que la muestra sea la primera de la maana y en ayunas para evitar partculas de alimentos. Reclame el recipiente en el Laboratorio.

INSTRUCCIONES PARA EL COPROCULTIVO

Recoja la muestra de una evacuacin espontnea en recipiente limpio suministrado por el laboratorio o farmacia. NO contamine la muestra con orina o agua.

Si usted ha tenido un estudio radiogrfico con bario, deje transcurrir 3 das para recoger la muestra No tomar antibiticos tres das antes de la toma de la muestra. Lleve la muestra al Laboratorio en el menor tiempo posible o consrvela en un lugar fresco. NO debe refrigerar. Las muestras diarreicas o lquidas se deben entregar y procesar una vez se recolecten. Si es un bebe y tiene diarrea, tomar la muestra colocando el paal al revs para evitar que el algodn absorba la muestra. Pasar a muestra al recipiente lo ms pronto posible.

INSTRUCCIONES PARA EL SECRECIONES VAGINALES

NO debe aplicarse vulos ni medicamentos intravaginales 8 das antes de la toma de la muestra. NO debe hacerse bao con ducha vaginal el da de la toma de la muestra. NO tenga relaciones sexuales 3 das antes de la toma de la muestra. NO realizar la toma de la muestra durante el perodo menstrual. Espere 8 das. Si usted desea repetirse una Citologa para verificar tratamiento se debe esperar 3 meses entre cada muestra

INSTRUCCIONES PARA RECOLECCION DE ESPUTO

Lave boca y dientes con agua hervida fra o con suero fisiolgico el paciente debe estar en ayunas, NO utilice crema dental NI enjuagues. No se debe usar ningn antisptico oral.

Recoja la muestra de secrecin bronquial en ayunas preferiblemente la primera de la maana. Evite que la muestra sea saliva o secrecin nasofarngea. Reclame recipiente adecuado en el Laboratorio. No tomar antibiticos tres das antes de la toma de la muestra.

INSTRUCCIONES PARA EL CULTIVO FARINGEO

NO use enjuague bucal el da de la toma de la muestra. Debe estar preferiblemente en ayuno o tener, como mnimo, dos horas sin ingerir alimentos ni bebidas. NO tomar antibiticos tres das antes de la toma de la muestra

INSTRUCCIONES PARA EL CULTIVO DE HONGOS EN PIEL

Abstngase de aplicar o consumir medicamentos antimicticos, 10 das antes de la toma de la muestra o segn indicaciones de su mdico. No se aplique talcos ni cremas desde el da anterior a la toma del examen.

INSTRUCCIONES PARA EL CULTIVO DE HONGOS EN UAS

Remueva el esmalte de uas, tres das antes de la toma de la muestra. NO aplique tratamiento antimictico local, 15 das antes de la toma de la muestra o segn indicaciones de su mdico. NO se aplique cremas, ni lociones desde el da anterior a la toma del examen.

INSTRUCCIONES PARA EL CULTIVOS DE GERMENES COMUNES DE HERIDAS Y LESIONES EN PIEL

NO aplique cremas de ninguna clase en el sitio de la lesin, mnimo dos das antes de la toma de la muestra. Indique a la persona que le tome la muestra los medicamentos que consume y si ha tomado antibiticos en la ltima semana.

INSTRUCCIONES PARA EL CULTIVO DE LQUIDO SEMINAL

Orine antes de obtener la muestra.

Obtenga la muestra por medio de masturbacin en la casa. Entregue la muestra en el Laboratorio inmediatamente dentro de la hora de su recoleccin, mantenindolo a temperatura ambiente en verano y protegindolo del fro en invierno

NO tomar antibiticos tres das antes de la toma de la muestra.

INSTRUCCIONES PARA LA SECRECION URETRAL

NO tenga relaciones sexuales el da anterior a la toma de la muestra. NO realice aseo genital de ninguna clase el da de la toma de la muestra. Retenga orina mnimo 4 horas antes de la toma de la muestra.

INSTRUCCIONES PARA LA TOMA DE MUESTRAS DE: CULTIVOS DE HERIDAS Y LESIONES DE PIEL PARA GRMENES COMUNES. Informar al personal que toma la muestra, si est tomando algn No aplique ningn tipo de crema en la lesin, por lo menos 3 tipo de medicamento o antibitico. das antes de la toma de la muestra. INSTRUCCIONES PARA EL EXAMEN PARASITOLOGICO DIRECTO DE HECES EN FRESCO Entrguese al paciente lo siguiente: Debe indicrsele al paciente la realizacin de un rgimen alimentario 4872 hs. antes de realizarse el estudio, libre de frutas, verduras y grasas, dado que preparaciones con abundantes residuos o grasas, obstaculizan la visualizacin microscpica, pudiendo ser causa de falsos negativos. Un recipiente o frasco de plstico de boca ancha, cuya tapa encaje bien y varillas aplicadoras o palitos de madera. Pdase al paciente que defeque espontneamente y directamente en el recipiente o que lo haga en un trozo de papel y utilice las varillas aplicadoras para introducir la muestra en el recipiente limpio

suministrado por el laboratorio o farmacia. NO contamine la muestra con orina, agua u otras sustancias. Si usted ha tenido un estudio radiogrfico con bario, deje transcurrir 3 das para recoger la muestra No tomar antibiticos tres das antes de la toma de la muestra. No usar antiparasitarias por lo menos una semana Las muestras diarreicas o lquidas se deben entregar y procesar una vez se recolecten. Si es un bebe y tiene diarrea, tomar la muestra colocando el paal al revs para evitar que el algodn absorba la muestra. Pasar a muestra al recipiente lo ms pronto posible. Algunos microorganismos, especialmente los trofozoitos de amebas, comienzan a desintegrarse o alterarse al poco tiempo de ser excretados y se vuelven irreconocibles las muestras deben llegar al laboratorio tan pronto como sea posible (al cabo de media hora) despus de la defecacin. INSTRUCCIONES PARA EL EXAMEN PARASITOLOGICO DE HECES SERIADO El paciente debe defecar en un recipiente limpio y seco, sin mezclar con orina. Si es lactante, tomar del paal la muestra recin emitida. Coloque una porcin del tamao de una nuez dentro del frasco y mezcle con el lquido que contiene (formol salino), hasta obtener una emulsin homognea utilizando la paleta. Las muestras deben obtenerse da por medio hasta completar las tres. En caso de no poder obtener las muestras da por medio, puede saltarse uno o dos das y traerlas cuando complete la ltima muestra recin emitida; Si observa algn parsito (gusano), debe colocarlo en un frasco limpio con agua de la llave, no usar alcohol, y traerlo junto con las cajas con deposicin. Dejar las muestras a temperatura ambiente en un lugar fresco

INSTRUCCIONES PARA EL TEST DE GRAHAM

No se deben aplicar pomadas o polvos-talco en la regin anal durante la noche anterior. La toma de muestra se debe efectuar a primera hora de la maana, antes de baarse, orinar y/o defecar.

C. BIOQUMICA RESPONSABLES: Dr. Luis Vsquez Huerta Blga. Ross Mery Cahuana Chipana

INTRODUCCIN.La bioqumica sangunea mantiene su importancia en la ayuda al diagnstico de muchas enfermedades y tambin para su seguimiento y evaluacin postratamiento. Por ello es necesario mantener niveles de calidad en el procesamiento de muestras con protocolos estrictos en su cumplimiento. PROPSITO.Este Manual tiene como propsito el uniformizar y controlar el cumplimiento de rutinas de trabajo y facilitar las labores de auditoria. OBJETIVOS Cuantificar los niveles de la bioqumica sangunea en pacientes sanos y con enfermedades. PROCEDIMIENTOS Obtencin de muestras de sangre: Ver Manual de Procedimientos de toma de muestras. Centrifugacin de la muestra: Una vez recibida la muestra sangunea, dejarla reposar en el tubo en posicin vertical, en una gradilla por un lapso de 30 a 120 minutos, se puede dejar en bao mara por 15 minutos; luego centrifugar la sangre a 2000 a 2500 r.p.m. durante 5 minutos, de esta manera se separa el suero. Destapar el tubo y aspirar el suero con una pipeta Pasteur y luego verter el contenido en un tubo de ensayo limpio y seco. Operaciones preliminares: Las informaciones detalladas para el uso del espectro fotocolormetro Microlab 200 estn accesibles en su respectivo manual de trabajo. Para la reconstitucin de los calibradores, estndares, reactivos y controles, las metdicas deben permanecer en su caja. Verificacin de equipos: Verificar la correcta conexin elctrica del equipo y la ausencia de riesgo (humedad)

Encender el equipo con el interruptor especfico. Esperar que los programas operativos estn cargados. Verificar que se tenga todo lo necesario para realizar los procesos (reactivos, agua destilada, cuaderno para el registro de resultados, muestras, etc.

Disponer del manual especfico del equipo. Si hay algn problema con el funcionamiento del equipo, llamar al tcnico para el mantenimiento y proceso correctivo. Para cualquier problema muy grave, es preciso informar al Director del Laboratorio.

Inspeccin diaria por parte del analista antes de empezar a trabajar con: Espectrofotmetro Pipetas Reactivos Balanza

Verificacin de reactivos: Verificar que los reactivos sean suficientes e idneos en cantidad fecha de preparacin y vencimiento, no usar si est vencido. Usar siempre el reactivo ms cercano a vencerse. Usar preferiblemente reactivos del mismo lote para evitar la re calibracin del equipo. Preparar los reactivos para el uso diario con los siguientes procedimientos: Llevar a temperatura ambiente (si es necesario) Abrir delicadamente el frasco de reactivo sin crear aerosol (si es liofilizado) Pipetear la cantidad necesaria de lquido para reconstituir el liofilizado, haciendo bajar suavemente por la pared del frasco y nunca crear vrtices.

Esperar, al menos 30 segundos antes de volver a tapar el frasco de reactivo. Despus de los primeros 15 minutos, agitar suavemente invirtiendo el frasco de tanto en tanto. Si es posible, utilizar agitadores especficos otros 15 minutos. Calibradores, estndares y controles: Antes de usar calibradores, estndares y controles verificar: La fecha de vencimiento, si est vencido no se puede utilizar por motivo alguno. Usar siempre los calibradores con el vencimiento ms cercano. Usar preferiblemente el mismo lote (indispensable para los controles). Si se usan productos congelados, descongelar rpidamente a 37C y luego agitar unas cuantas veces por inversin del recipiente. Evitar absolutamente el descongelamiento y congelamiento. Preparar los calibradores, estndares y controles conforme los siguientes procedimientos: Llevar a temperatura ambiente Destapar suavemente el frasco de reactivo, sin crear aerosol. Aadir pipeteando suavemente la cantidad necesaria de lquido para reconstituir el liofilizado, hacindolo por las paredes del frasco sin crear vrtices. Esperar, al menos, 30 segundos antes de volver a tapar el frasco de reactivo. Dejar en reposo el tiempo necesario, normalmente entre 10 a 15 minutos. Despus de 10 minutos, mezclar suavemente de tanto en tanto por inversin, o usar los agitadores especficos durante otros 15 minutos. Calibracin: Si no es necesario efectuar una nueva calibracin, verificar Fecha de la ltima calibracin Nmero del lote del reactivo

Es obligatorio proceder con una nueva calibracin cada vez que se cambia el lote delos reactivos.

Terminada la calibracin, es necesario: Verificar que las reacciones son lineales Verificar que los valores de la calibracin son aquellos esperados Verificar que no hay variaciones significativas entre los valores de las calibraciones de los ltimos 15 das. Archivar los valores de las calibraciones para un eventual control. En caso que las calibraciones no sean aceptables, se precisa repetirlas buscando de forma individual el problema. Errada la reconstitucin o el uso de los calibradores. Errada la reconstitucin o el uso de los reactivos. Errado el funcionamiento del equipo (temperatura, limpieza, etc.)

Control: Para evaluar el correcto funcionamiento de los sistemas analticos, se precisa evaluar con el suero control (Standatrol 2 niveles) con valores conocidos. En cada caso, el examen de los controles tiene que efectuarse en un tiempo lo suficientemente breve para lograr las medidas correctivas antes de la validacin de la entrega de los resultados. Para su valoracin, el resultado del control se confronta con los valores esperados, verificando si una o ms reglas establecidas son violadas. Pruebas requeridas: Realizar las pruebas requeridas de acuerdo a los protocolos de trabajo que vienen en la caja de de cada reactivo (Ver Anexos). Transcribir los resultados en las respectivas rdenes tomando en cuenta los valores referenciales para cada prueba realizada, en caso de duda de los resultados debe repetirse la prueba. Si se repite el valor entonces el resultado es correcto. Anotar las solicitudes y resultados en el cuaderno de registro.

Fin de la sesin: La sesin de trabajo se puede considerar terminada cuando: Todos los exmenes para aquel equipo estn terminados segn las reglas. Los resultados estn controlados y validados para el instrumento. Los controles estn archivados. Los equipos estn en perfecto estado de uso para el da siguiente. Slo cuando todas las instrucciones estn ejecutadas, es posible apagar el equipo. El material se encuentra limpio y disponible para su posterior uso. Los reactivos han sido guardados a la temperatura correcta ( la que indica en la caja del reactivo) Recomendaciones: Cambio de agua de bao mara. semanalmente Calibracin de espectrofotmetros pipetas mensualmente. Descongelamiento y limpieza de refrigeradores trimestralmente. Equipos: Centrfuga Espectrofotmetro Bao mara Cronmetros Pipetas automticas 10 a 50 ul Pipetas automticas 50 a 200 ul Pipetas automticas 10 ul Pipetas automticas de 100 ul Pipetas automticas de 250 ul Pipetas automticas de 500 ul Destilador Materiales: Tubos de ensayo 13 x 10 mm. Tubos de ensayo 16 x 100 mm.

 Puntas de pipetas 10 a 100 ul Puntas de pipetas 50 a 500 ul. Guantes descartables no estriles. Detergente neutro para el lavado del equipo. Agua destilada. LINHA LQUIDA

Uricostat enzimtico AA
Mtodo enzimtico para la determinacin de cido rico en suero o plasma SIGNIFICADO CLNICO El cido rico es un metabolito de las purinas, cidos nuclicos nucleoprotenas. Normalmente la concentracin de cido rico en suero varia de un individuo a otro conforme a diversos factores tales como: sexo, dieta, origen tnico, constitucin gentica, embarazo Niveles normales de cido rico en suero son ndice de desorden en el metabolismo de las sustancias que lo originan o de inadecuada eliminacin. PROCEDIMENTO I. TECNICA CON REACTIVOS SEPARADOS En tres tubos o cubetas espectrofotomtricas marcadas B (Blanco), S (Standard o calibrador) y D (Desconocido), Colocar: Standard o calibrador Muestra Reactivo A Reactivo B B 800 ul 200 ul S 20 ul 800 ul 200 ul D 20 ul 800 ul 200 ul

Mezclar suavemente e incubar 5 minutos en bao se agua a 37oC o 20 minutos a temperatura ambiente (18-25oC). Retirar, enfriar y leer en espectrofotmetro a 505 nm o en fotocolormetro con filtro verde (490-530 nm), llevando el aparato a cero con el Blanco. II-TECNICA CON REACTIVO UNICO

Proceder como en la tcnica I pero utilizando 1 ml de Reactivo nico preparado en proporcin 4+1 de acuerdo a lo indicado en instrucciones para su uso VALORES DE REFERENCIA Hombres: 2,5 6,0 mg/l Mujeres: 2,0 5,0 mg/l

LINHA LQUIDA

Amilasa 405 AA
Mtodo cintico a 405 nm para la determinacin de amilasa en suero, plasma u orina. Sustrato CNPG3 SIGNIFICADO CLNICO La amilasa, producida principalmente en el pncreas excrino y en las glndulas salivales, escinde los enlaces 1-4 glucosdicos de los polisacridos (almidn y glucgeno). Se encuentra elevada en pacientes con pancreatitis aguda, encontrando los valores ms elevados entre 24 e 30 horas posteriores al ataque, declinando luego para volver a los niveles normales entre las 24 e 48 horas siguientes. Tambin se ve aumentada en este caso la excrecin urinaria de la enzima, persistiendo la hiperamilasria por 3 a 5 das, luego de que la actividad srica ha alcanzado los niveles normales. Tambin es posible encontrar valores aumentados en cualquier caso de abdomen agudo o intervencin quirrgica en regiones prximas al pncreas. La parotiditis bacteriana y paperas se asocian tambin con elevaciones en los niveles de amilasa srica. PROCEDIMENTO A) 25-30 C En una cubeta mantenida a la temperatura seleccionada, colocar: Reactivo A Preincubar por 3-4 minutos. Luego agregar: Muestra 2 ml 100 ul

Mezclar inmediatamente y leer la absorbancia luego de 1 y 2 minutos. Determinar la diferencia entre la segunda y la primera lectura. Utilizar este valor para los clculos. Se puede disminuir proporcionalmente los volmenes utilizando 1 ml de reactivo A y 50 ul de muestra.

B) 37 C Como la actividad a esta temperatura es mayor, emplear 50 ul de muestra. Seguir el procedimiento segn A). Se puede disminuir los volmenes utilizando 1 ml de Reactivo A y 20 ul de muestra. VALORES DE REFERNCIA Temperatura Suero hasta Orina ocasional hasta 25 c 84 U/l 455 U/l 30 C 100 U/l 540 U/l 37 c 125 U7l 680 U/l

Creatinina directa
Mtodo colorimtrico cintico de punto final sin desproteinizacin, para la determinacin de creatinina en suero o orina SIGNIFICADO CLNICO La creatinina, compuesto sumamente difusible, se elimina del organismo casi exclusivamente por filtracin renal. Su determinacin en suero, as como el clearance de creatinina endgena constituyen parmetros importantes para el diagnstico de variadas afecciones renales. Sin embargo debido a los problemas prcticos inherentes a la determinacin del clearance (recoleccin de orina en nios, etc.) la determinacin de creatinina srica es ms utilizada como ndice de funcionalismo renal. PROCEDIMENTO En tres tubos de fotocolormetro marcados B (Blanco) S (Standard) y D (Desconocido), colocar: Agua destilada Standard Muestra Reactivo de trabajo B 0,1 ml 1 ml S 0,1 ml 1 ml D 0,1 ml 1 ml

Mezclar. Incubar 10 minutos en bao a 37oC. Dentro de los 15 minutos de retirado del bao, leer el Standard (S) y el Desconocido (D1) en espectrofotmetro a 510 nm o en fotocolormetro con filtro verde (500-520 nm) llevando a 0,000 D.O. con el Blanco. Luego agregar: Stopper 50 ul 50 ul

Mezclar. Dejar los tubos 5 minutos a temperatura ambiente y volver a leer el Desconocido (D2), llevando a 0,000 D.O. con el Blanco. Los valores de referencia y le Mtodo de Control de calidad son comunes para ambas tcnicas. Ver el punto correspondiente en Tcnica Cintica. VALORES DE REFERNCIA Suero: 8 -14 mg/l Orina: 0,9 - 1,5 g/24 hs D.C.E.: 80 - 140 ml/min (promedio 125 ml/min) para adultos hasta 60 aos

Ca-Color

AA

Mtodo colorimtrico directo para la determinacin de calcio srico y urinario SIGNIFICADO CLNICO El calcio es esencial en la mayora de las reacciones de la coagulacin

sangunea y en la regulacin de la excitabilidad de las fibras musculares. Su concentracin en suero y orina est regulada por la accin de factores tales como niveles de parathormona, vitamina D y fsforo; observndose fluctuaciones fisiolgicas debidas a la edad, sexo, embarazo, actividad fsica, cambios estacionales (por accin de la luz solar). La hipercalcemia est relacionada con distintas patologas: hiperparatiroidismo, neoplasias seas, intoxicaciones con vitamina D. La hipocalcemia se asocia con desordenes tales como hipoparatiroidismo, deficiencia de vitamina D, mala absorcin. PROCEDIMENTO I- TCNICA CON REACTIVOS SEPARADOS En tres tubos de fotocolormetro marcados B (Blanco), S (Standard) y (Desconocido) colocar: B 50 ul 1,0 ml 1,0 ml S 50 ul 1,0 ml 1,0 ml D 50 ul 1,0 ml 1,0 ml D

Agua destilada Standard Muestra Reactivo de color Buffer

Mezclar, incubar 5 minutos a temperatura ambiente (15- 25oC) y leer la absorbancia en espectrofotmetro a 570 nm o en fotocolormetro con filtro rojo (560-590 nm). Microtcnicas Seguir el procedimiento indicado en la Tcnica I, pero usando 25 ul de muestra, 0,5 ml de Reactivo de Color y 0,5 ml de Buffer II- TCNICA COM REAGENTE NICO (PRE-MEZCLADO) En tres tubos de fotocolormetro marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido) colocar:

Agua destilada Standard Muestra Reactivo nico

B 50 ul 2,0 ml

S 50 ul 2,0 ml

D 50 ul 2,0 ml

Mezclar, incubar 5 minutos a temperatura ambiente (15- 25oC) y leer la absorbancia en espectrofotmetro a 570 nm o fotocolormetro con filtro rojo (560-590 nm). Microtcnicas Seguir el procedimiento indicado en la Tcnica II, pero usando 25 ul de muestra y 1 ml de Reactivo nico. En caso de muestras lipmicas o hemolizadas es necesario procesar un blanco de muestra de la siguiente manera: Mezclar 50 ul de muestra con 2 ml de agua destilada. Medir la absorbancia levando a cero con agua destilada. Restar esta absorbancia de la obtenida inicialmente y utilizar esta diferencia para los clculos. VALORES DE REFERNCIA Suero: 8,5 - 10,5 mg/dl Orina: hasta 300 mg/24 hs (para una dieta normal)

Colestat enzimtico AA
Mtodo enzimtico para a determinacin de colesterol en suero o plasma SIGNIFICADO CLNICO La determinacin de colesterol en forma aislada, tiene utilidad diagnstica limitada. Sin embargo, su concentracin vara de manera ms o menos predecible en un gran nmero de condiciones clnicas. Se ha visto que el colesterol es uno de los factores contribuyentes a la formacin de ateromas dado que las complicaciones arteriosclerticas prevalecen en los individuos hipercolesterolmicos. Diversos estudios epidemiolgicos han permitido observar, Adems, que el riesgo de contraer enfermedad cardiaca coronaria (ECC) para los individuos varones de ms de 40 aos con colesterolemia menor o igual a 2,10 g/l es 3 veces menor que entre individuos con mas de 2,30 g/l y 6 veces menor que entre individuos con mas de 2,60 g/l. PROCEDIMENTO En tres tubos de fotocolormetro o cubetas de espectrofotomtricas marcadas B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar: B 1 ml S 10 ul 1 ml D 10 ul 1 ml

Standard Muestra Reactivo de trabajo Incubar 5 minutos en

bao de agua a 37oC o 20 minutos a temperatura

ambiente (25oC). Leer en espectrofotmetro a 505 nm o en fotocolormetro con filtro verde (490-530 nm), llevando el aparato a cero con el Blanco. VALORES DE REFERENCIA Deeable < 2,00 g/l Moderadamente alto: 2,00 - 2,39 g/l Elevado: >=2,40 g/l

TG Color

GPO/PAP AA

Mtodo enzimtico para a determinacin de triglicridos en suero o plasma SIGNIFICADO CLNICO Los triglicridos son lpidos absorbidos en la dieta y tambin producidos en forma endgena a partir de los carbohidratos. Su medicin es importante en el diagnstico y manejo de las hiperlipidemias. Estas enfermedades tienen origen gentico o ser secundarias a otras tales como: nefrosis, diabetes mellitas y disfunciones endocrinas. El aumento de triglicridos se ha identificado como un factor de riesgo en enfermedades arteriosclerticas. PROCEDIMENTO Homogeneizar la muestra antes de utilizar, especialmente frente a sueros lechosos. En tres tubos de fotocolormetro o cubetas espectrofotomtricas marcadas B (Blanco), S (Stantandard) e D (Desconocido), colocar: Muestra Standard Reactivo de trabajo B 1 ml S 10 ul 1 ml D 10 ul 1 ml

Mezclar, incubar durante 5 minutos a 37oC o 20 minutos a temperatura ambiente (18-25oC). Enfriar y leer en espectrofotmetro a 505 nm o en fotocolormetro con filtro verde (490-530 nm) llevando el aparato a cero con agua destilada. VALORES DE REFERENCIA Deseable u optimo: < 1,50 g/l Moderadamente elevado a elevado: 1,50 - 1,99 g/l Elevado: 2,00 - 4,99 g/l Muy elevado: >=5,00 g/l

LDL Colesterol

Reactivo Precipitante para la separacin de las lipoprotenas de baja densidad (LDL) en suero SIGNIFICADO CLNICO El contenido aproximado de colesterol en cada familia de lipoprotenas es (en % por unidad de peso): 1% En los quilomicrones, 18% en las VLDL, 50% en las LDL y 23% en las HDL. Dado que cada familia posee diferentes actividades biolgicas, el significado clnico de un aumento de colesterol depende de la o las lipoprotenas que se encuentran en exceso. Por otra parte los mecanismos reguladores de los niveles plasmticos de lipoprotenas son muy complejos y pueden ser afectados por variados factores (genticos, ambientales, fisiolgicos o patolgicos), siendo posible encontrar valores de colesterol total cercanos al rango normal acompaados alteraciones en las fracciones lipoproteicas. Las HDL y LDL han sido las ms estudiadas por su importante actividad biolgica: - Las LDL, producto del metabolismo de las VLDL en plasma, son las encargadas del transporte de colesterol exgeno (y en mucho menos proporcin, endgeno) hacia el interior de las clulas; - Las HDL, sintetizadas en el hgado, remueven el colesterol no utilizado por las clulas (dentro de ciertos lmites de concentracin), transportando hacia el hgado para su degradacin. Diferentes estudios epidemiolgicos han confirmado que el exceso de colesterol de LDL con respecto a un valor crtico (1,9 g/l) debe ser considerado como un factor de riesgo para el desarrollo de enfermedades cardacas coronarias, considerando que el efecto protector de las HDL solo parece tener relevancia dentro cierto rango de concentraciones de colesterol circulante. Tales hallazgos permiten deducir que los valores aislados de colesterol de HDL o de LDL no pueden tomarse como ndices predicativos de riesgos, sino que es necesario conformar un perfil lipdico con os valores de colesterol total, colesterol de HDL y colesterol de LDL. PROCEDIMENTO En un tubo de Kahn, colocar: de

Muestra 200 ul Reactivo Precipitante 100 ul Homogenizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos y dejar 15 minutos en un bao de agua a 20-25oC. Centrifugar 15 minutos a 3.000 r.p.m. Separar inmediatamente el sobrenadante. Ver LIMITACIONES DE PROCEDIMENTO. Utilizar EL sobrenadante como muestra para el ensayo colorimtrico. En tres tubos de fotocolormetro marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar: B 2 ml S 20 ul 2 ml D 100 ul 2 ml

Sobrenadante Standard Reactivo de trabajo

Mezclar e incubar 5 minutos a 37oC

si se usa el reactivo de trabajo de

Colestat enzimtico AA/lquida o 15 minutos a 37oC si se usa el Colestat enzimtico. Retirar del bao y enfriar. Leer en espectrofotmetro a 505 nm o en fotocolormetro con filtro verde (490-530 nm), llevando el aparato a cero de absorbancia con el Blanco.

VALORES DE REFERENCIA - Riesgo de contraer enfermedad cardiaca coronaria: Riesgo bajo o nulo (sujetos normales): valores de LDL colesterol < 1,29 g/l. - Riesgo moderado a elevado (indivduos con probabilidad de contraer ECC): valores entre 1,30 e 1,89 g/l - Riesgo muy elevado (indivduos sospechosos de padecer ECC): valores de LDL colesterol >=1,90 g/l.

HDL Colesterol FT
Reactivo precipitante (cido fosfotngstico) para la separacin De las Lipoprotenas de Alta Densidad (HDL) en suero o plasma SIGNIFICADO CLNICO

Las lipoprotenas plasmticas son partculas esfricas que contienen cantidades variables de colesterol, triglicridos, fosfolipdios y protenas. Los fosfolpidos, colesterol libre y las protenas constituyen la superficie externa de la partcula lipoproteica, mientras que su core contiene mayor proporcin colesterol eterificado y triglicridos Estas partculas solubilizan y transportan el colesterol en el torrente sanguneo. La proporcin relativa de protena y lpidos determina la densidad de estas lipoprotenas y proveen las bases sobre las cuales establecer una clasificacin. Estas clases son: quilomicrones, protenas de muy baja densidad (VLDL), protenas de baja densidad (LDL) y protenas de alta densidad (HDL). Diferentes estudios clnicos han demostrado que las diferentes clases de lipoprotenas tienen distintos y variados efectos en el riesgo de enfermedad coronaria. La funcin principal de las HDL en el metabolismo lipdico es la captacin y transporte de colesterol desde los tejidos perifricos al hgado en un proceso conocido como transporte reverso de colesterol (mecanismo cardioprotectivo). El HDL colesterol bajo, esta asociado con un alto riesgo de enfermedad cardiaca. Por este motivo la determinacin de HDL colesterol es una herramienta til en la identificacin de individuos con alto riesgo.

PROCEDIMENTO En un tubo de Kahn medir 200 ul de muestra, y agregar 500 ul de Reactivo precipitante. Homogeneizar agitando (sin invertir) durante 20 segundos y dejar 10 minutos en reposo a temperatura ambiente. Centrifugar 15 minutos a 3.000 r.p.m. o 2 minutos a 12.000 r.p.m. Usar el sobrenadante lmpido como muestra. En tres tubos de fotocolormetro marcados B, S y D, colocar: Sobrenadante Standard Reactivo de trabajo B 2 ml S 20 ul 2 ml D 200 ul 2 ml

Mezclar e incubar durante 5 minutos a 37oC si se usa Reactivo de Trabajo de Colestat enzimtico AA/lquida o 15 minutos a 37oC cuando se usa Colestat enzimtico. Retirar del bao e enfriar. el

Leer a 505 nm en espectrofotmetro o en colormetro con filtro verde (490-530 nm), llevando a cero con el Blanco. VALORES DE REFERENCIA valores de HDL colesterol: 0,40-0,60 g/l .

Bilirrubina
Mtodo colorimtrico para la determinacin de bilirrubina directa y total en suero y otros lquidos biolgicos SIGNIFICADO CLNICO La bilirrubina, compuesto de degradacin de la hemoglobina, es captad por el hgado para su conjugacin y excrecin en la bilis. Las alteraciones hepatocelulares u obstrucciones biliares pueden provocar hiperbilirrubinemias. La eritroblastosis fetal o anemia hemoltica del recin nacido es una patologa provocada por incompatibilidad materno-fetal, en la que se produce una excesiva de glbulos rojos, esto resulta en un severo aumento de la bilirrubina srica con el consecuente riesgo de difusin del pigmento al sistema nervioso central. Por lo que la determinacin de la bilirrubina en estos nios recin nacidos resulta sumamente importante.

PROCEDIMENTO I- TCNICA PARA SUERO En tres tubos de fotocolormetro marcados B (Blanco), D (Directa) y T (Total) colocar: Muestra(suero) Agua destilada Desarrollador Reactivo sulfanilico Diazorreactivo B 200 ul 2,5 ml 200 ul D 200 ul 2,5 ml 200 ul T 200 ul 2,5 ml 200 ul

Mezclar de inmediato cada tubo por inversin. Luego de 5 minutos, leer en espectrofotmetro a 530 nm o en fotocolormetro con filtro verde (520-550 nm)

llevando el aparato a cero con agua destilada. Las lecturas pueden realizar entre 4 a 15 minutos, excepto para la bilirrubina direta que deve leer a los 5 minutos exactos. Si se lee antes, habr subvaloracin de los resultados por reaccin incompleta. Si se lee despus, habr sobre valoracin por que comienza a reaccionar la bilirrubina libre. Sueros ictricos: debe emplearse la tcnica descrita, pero con menores cantidades de muestra, de acuerdo a la severidad de la ictericia. De tal forma en caso de ictericia moderada se usarn 50 ul de suero. Mientras que frente a una ictericia intensa se requieren solo obtenidos por 3,79 y 9,38 respetivamente. II- TCNICA PARA LQUIDO AMNITICO Se determina bilirrubina total. En dos tubos de fotocolormetro marcados B (Blanco) y T (Total) colocar: Muetra (liquido amniotico) Agua destilada Desarrollador Reactivo Sulfanlico Diazorreactivo B 1 ml 1,5 ml 0,5 ml T 1 ml 1,5 ml 0,2 ml 20 ul. Multiplicar los resultados

Proceder de la misma manera que en la tcnica I. Dividir el resultado final por 5,37. VALORES DE REFERNCIA Bilirrubina en suero o plasma - Adultos: Directa: hasta 2 mg/l Total: hasta 10 mg/l

Fosfatasas Alcalina
SIGNIFICADO CLNICO

Optimizada

Para la determinacin de la actividad de fosfatasa alcalina en suero

La fosfatas alcalina es una enzima ampliamente distribuida en el organismo. Hidroliza los monosteres del cido ortofosfrico en medio alcalino. En el adulto, proviene en parte del hgado (fraccin termoestable) y en parte del hueso, sistema retculoendotelial y vascular (fraccin termolbil), dando lugar a diferentes isoenzimas.

La actividad srica de fosfatasa alcalina sea, en condiciones normales, alcanza su mayor actividad en los nios edad de crecimiento (llegando a triplicar los niveles del adulto) debido a que esta enzima se localiza en los osteoblastos (relacionados con la calificacin y formacin de las estructuras seas). Tambin es fisiolgico el aumento que se produce al final del primer trimestre del embarazo, a expensas de la isoenzima placentaria que en este perodo alcanza niveles mximos (aproximadamente el doble de los valores normales). Entre las patologias que afectan a atividad srica da fosfatasa alcalina, se pueden citar: carcinomas metastsicos en hgado y en hueso (productores de enzima), colestasis biliar, fenmenos osteoblsticos, transtornos de mala absorcin acompaados de lesiones ulcerosas (donde a deficiencia de vitamina D produce osteomalacia con el consecuente aumento de fosfatasa alcalina sea) e incluso lesiones en vas de reparacin tales como infarto agudo de miocrdio, infarto pulmonar o renal. PROCEDIMENTO En tres tubos de fotocolormetro marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido) colocar: Sustrato B 0,5 ml P 0,5 ml D 0,5 ml

Preincubar en bao de agua a 37oC unos minutos. Luego agregar: Suero 50 ul Standard 50 ul Mezclar, incubar exactamente 10 minutos (cronmetro) y adicionar: Reactivo de 2,5 ml 2,5 ml 2,5 ml color Mezclar de inmediato cada tubo. Retirar los tubos del bao y leer en espectrofotmetro a 520 nm o en fotocolormetro con filtro verde, llevando el aparato a cero de absorbancia con gua destilada. VALORES DE REFERENCIA Adultos: 68 - 240 UI/l Nios: 100 - 400 UI/l

Transaminasas 200
Mtodo colormetro para la determinacin de la actividad De Transaminasa glutmico Oxalactica (GOT) y Transaminasa Glutmico Pirbica (GPT) en suero SIGNIFICACION CLNICO Las Transaminasas GOT y GPT son enzimas ampliamente difundidas en el organismo con elevada concentracin en corazn, Hgado, msculo esqueltico, rin y eritrocitos, La actividad srica en condiciones normales es baja o nula un dao o enfermedad en cualquiera de estos tejidos conduce A un aumento en los niveles sricos, As luego de un infarto de miocardio se produce en suero un marcado aumento de la actividad de GOT (abundante en msculo cardiaco) en hepatitis virales y otras formas de enfermedad heptica Que involucren necrosis tisular, predominar la actividad srica de GPT (abundante en tejido heptico) una elevada actividad de transaminasas puede detectarse tambin en traumas accidentales o quirrgicos y en distrofias musculares o miositis PROCEDIMENTO A) 30 o 37C I- MACROTCNICA En dos tubos de fotocolormetro marcados B (Blanco) y D (Desconocido), colocar: Sustrato (GOT o GPT) B 0,5 ml D 0,5 ml

Colocar en bao de agua a 37C +- 0,5 C unos minutos Suero Agua destilada 100ul

100 ul -

Mezclar por agitacin suave e incubar exactamente 30 minutos y agregar: Reactivo 2,4 -DNFH 0,5 ml 0,5 ml Mezclar. Dejar 10 minutos a37 C. Luego agregar Diluyente para enzimas 5 ml

5 ml

Mezclar por inversin y retirar del bao. Despus de 2 minutos leer la absorbancia En fotocolormetro con filtro verde (500 a 550 nm); en espectrofotmetro a 505 nm o Hg 546, llevando el aparato a cero D.O. con agua destilada VALORES DE REFERENCIA GOT: 12 U/I GPT: 12 U/I

Protenas Totales AA
Mtodo colorimtrico para la determinacin de protenas totales En suero SIGNIFICADO CLNICO Las protenas son compuestos orgnicos macromoleculares, ampliamente distribuidos en el organismo esencial para la vida. Actan como elementos estructurales y de transporte y aparecen bajo la forma de enzimas, hormonas, anticuerpos, factores de de coagulacin, etc. En el plasma las protenas contribuyen a mantener el volumen del fluido circulante Transportan sustancias relativamente insolubles y actan en la inactivacin de compuestos txicos y en la defensa contra agentes invasores La determinacin de protenas totales es til para el monitoreo de cambio ocasionado por diversos estados de enfermedad en condiciones patolgicas como prdidas renales, desnutricin, infecciones prolongadas, etc., suele presentarse hipoproteinemias, mientras que en otras como mieloma mltiple, endocarditis bacteriana y hemoconcentraciones de diversos orgenes, (Ej.: deshidratacin) se observan hiperproteinemias PROCEDIMENTO Em tres tubos de fotocolormetro marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar:

Suero Patrn

B -

S 20 ul

D -

Muestra Reactivo

2,0 ml

2,0 ml

20 ul 2,0 ml

Mezclar con varilla. Incubar

durante 15 minutos a 37oC. Leer en el

espectrofotmetro a 540 nm o en fotocolormetro con filtro verde (520-560 nm) llevando a cero con el Blanco de Reactivo. VALORES DE REFERNCIA Protenas totales: 6,1 a 7,9 g/dl Relascin A/G: 1,2 a 2,2

Glicemia

enzimtica AA

Mtodo enzimtico para la determinacin de glucosa en suero o plasma SIGNIFICADO CLNICO La patologa ms comn relacionada con el metabolismo de los hidratos de carbono en la diabetes mellitus. El diagnstico precoz y el control de los pacientes diabticos, tiene por objeto evitar la cetoacidosis las complicaciones resultantes de la hiperglicemia, mediante eltratamiento adecuado. Dado que existen mltiples factores causales de hiper o hipoglicemia, deben considerarse en cada caso la condicin fisiolgica y/o patologa presente en el paciente. PROCEDIMENTO En tres tubos de fotocolormetro marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar: Standard Muestra Reactivo de Trabajo B 1 ml S 10 ul 1 ml D 10 ul 1 ml

Incubar 5 minutos en bao de agua a 37C o 25 minutos a 15-25C Luego leer en espectrofotmetro a 505 nm o en fotocolormetro con filtro verde (490-530 nm) llevando el aparato a cero con el blanco. VALORES DE REFERNCIA Suero o plasma: 70 - 110 g/l

D. HEMATOLOGA RESPONSABLES: Dr. OSCAR LINARES Y BUSTAMANTE Quim. OLGA GAONA PUERTAS HEMOGRAMAEl hemograma de Shilling constituye uno de los exmenes de laboratorio ms usados en el campo de la hematologa. Comprende las siguientes pruebas: RECUENTO LEUCOCITARIO Principio La sangre anti coagulada se deposita en un lquido que permite evidenciar los leucocitos, mantenindolos visibles, mientras que los eritrocitos son hemolizados. El recuento del nmero de leucocitos o glbulos blancos se expresa por mm3 (milmetro cbico). Procedimiento Una vez obtenida la sangre con anticoagulante o sangre capilar del dedo, se procede a aspirar la sangre con la pipeta de glbulos blancos hasta la marca de 0,5 y a limpiar la punta con papel absorbente. Introducir la pipeta en el tubo que contenga solucin de Turk y absorber hasta la marca de 11 (no debe haber burbujas). Tapar ambos extremos y proceder a mezclar manualmente o en un rotador automtico por 2 3 minutos. Monte la laminilla de vidrio en la cmara para recuento que debe estar limpia y seca. Agitar la pipeta y descartar las cuatro primeras gotas para luego colocar una gota pequea de esta solucin en la cmara. Deje reposar por espacio de 3 minutos para que las clulas se sedimenten. Enfocar con objetivo de 10x y contar en 4 cuadrados grandes angulares. Cuando se usa la pipeta automtica, se toma 20 mL (0,02

mL) de sangre total con anticoagulante o sangre capilar con anticoagulante y se diluye en un tubo que contenga 380 mL de solucin de Turk (aqu tenemos una dilucin 1:20). Valores de referencia 5000 - 10 000 leucocitos / mm3 LEUCOCITOS Neutrfilos segmentados Neutrfilos abastonados Eosinfilos Basfilos Monocitos Linfocitos VALORES RELATIVOS (%) 55 - 65 3-5 O,5 4,0 0 0,5 4-8 25- 35 VALORES ABSOLUTOS (%) 3000 -5000 150 - 400 20 - 350 10 - 60 100 - 500 1500 - 4000

Manual de TEC. BASICAS HEMATOLOGIA. PM 4d 2 10/05/2005, 14:12 RECUENTO DE GLBULOS ROJOS Principio La sangre se diluye en un lquido que nos permite observar claramente los Hemates, luego esta dilucin se coloca en una cmara de Neubauer con la ayuda de una pipeta automtica o pipeta Pasteur y se cuentan en el microscopio a un objetivo de 40x para calcular el nmero de glbulos rojos por mm3. Procedimiento Mezclar la sangre obtenida con el anticoagulante o tomar sangre capilar. Llenar la pipeta de glbulos rojos con sangre hasta la marca de 0,5 para realizar una dilucin de 1/200, y si se carga hasta 1, la dilucin ser 1/100. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Introducir la pipeta en el tubo o frasquito conteniendo diluyente (Hayem) y llenar de lquido de dilucin hasta la marca de 101.

Se coloca en un rotador automtico o se hace rotar manualmente de 2 a 3 minutos. Agitar bien la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequea cerca de un extremo de la cmara para que por capilaridad se llene exactamente.

Hacer el recuento con objetivo de 40x. Se puede realizar con la pipeta automtica, se toma 20 mL (0,02mL) de sangre total con anticoagulante, o sangre capilar y se deposita en un tubo de 12 x 75 que contenga 4 mL de solucin de Hayem (aqu se tiene una dilucin de 1:200). Se deja reposar aproximadamente 5 minutos y se procede a cargar la cmara con la misma pipeta usando un nuevo tip. El inconveniente aqu es el gasto de reactivo (4 mL) pero las medidas son ms exactas.

Dejar en reposo por 3 minutos. Enfocar la cuadrcula a 10x, luego con el objetivo de 40x contar sobre el cuadrado grande central de la cmara slo en 5 cuadrados pequeos: uno central y cuatro angulares (80 cuadraditos en total). En el recuento se incluyen las clulas que cubren o tocan por dentro o por fuera las lneas limitantes superior e izquierda en el cuadrado pequeo de recuento y no se consideran los correspondientes a los Lmites inferior y derecho.Se hace el recuento en los puntos ABCD y E y se sigue los mismos parmetros del recuento de leucocitos. Valores de referencia (Unidades tradicionales millones de clulas/mm3). Hombres 4 500 000 - 5 500 000 Mujeres 4 000 000 - 5 000 000 Nios (4 aos) 4 200 000 - 5 200 000 Lactantes (1 - 6 meses) 3 800 000 - 5 200 000 Recin nacidos 5 000 000 - 6 000 000 Fuente: Manual de tcnicas bsicas para un laboratorio de salud. OPS, N 2.

VOLUMEN GLOBULAR (Hematocrito) Mide la fraccin que comprende a los glbulos rojos (masa globular), respecto al volumen total de la muestra de sangre venosa o capilar. Puede expresarse en porcentaje o como valor decimal. a) Mtodo de Wintrobe Procedimiento: Llenar la sangre extrada con anticoagulante con una pipeta pasteur, comenzando desde el fondo hasta la marca superior de 100 mm, teniendo cuidado de no provocar espuma. Tapar el tubo con un tapn de goma para evitar la evaporacin. Centrifugar a 3000 rpm por 30 minutos Valores de referencia: Hombres: 40% - 54% Mujeres: 38% - 48% b) Mtodo de micro hematocrito Procedimiento: Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del pulpejo del dedo, o utilizar capilares azules sin heparina para sangre venosa con anticoagulante de Wintrobe o EDTA. Debe llenarse aproximadamente 70% - 80% del capilar. Ocluir (tapar) un extremo del capilar con plastilina. Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal de una centrfuga de micro hematocrito, con el extremo ocluido adherido al reborde externo de la plataforma. Centrifugar por 5 minutos entre 10 000 - 12 000 rpm

Valores de referencia: Hombres 40% - 50%

Mujeres 38% - 44% Nios (5 aos) 38% - 44% Lactantes (3 meses) 37% - 42% Recin nacidos 50% - 58% HEMOGLOBINA Principio La sangre se diluye en lquido de Drabkin, el cual bemoliza los hemates y convierte la hemoglobina en cianometahemoglobina (cianuro de hemoglobina). La solucin que se produce se lee por medio de un espectrofotmetro o fotocolormetro. Su grado de absorbancia es proporcional a la cantidad de hemoglobina que contenga la sangre. Procedimiento En un tubo de 13 x 100 colocar exactamente 5 ml de reactivo de Drabkin. La sangre que puede utilizarse es de puncin del dedo (sangre capilar) o de sangre venosa recin extrada. Con una pipeta automtica o pipeta de Salhi se toma exactamente 0,02 ml (20 ml) de sangre total, limpiar luego la punta de la pipeta y se vierte en el tubo que contenga reactivo de Drabkin. Se enjuaga 3 veces y se mezcla. Dejar en reposo por espacio de 5 a 15 minutos. Leer en absorbancia con filtro verde a 540 nm llevando a cero el fotmetro con agua destilada / Drabkin. Valores de referencia: Nios al nacer 13,6 - 19,6 g/dl Nios de 1 ao 11,3 - 13,0 g/dl Nios de 10 -12 aos 11,5 - 14,8 g/dl Mujeres 11,5 - 16,5 g/dl Hombres 14,0 - 18,0 g/dl

VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR La velocidad de sedimentacin es un examen hematolgico que no est incluido en el desarrollo de un hemograma; sin embargo, es una prueba muy importante por su gran sensibilidad, pues resulta normal en las enfermedades funcionales, as como en los procesos inactivos o estrictamente locales. a) MTODO DE WESTERGREN Fundamento Este examen mide la tendencia de los eritrocitos a sedimentar, al colocar sangre anticoagulada en un tubo en posicin vertical. Se lee macroscpicamente la columna de plasma al cabo de una hora de reposo. Procedimiento En un tubo que contiene 0,5 ml de anticoagulante citrato de sodio al 3,8% se extrae sangre venosa, se mezcla mediante movimientos rotatorios sobre una superficie lisa. Se vierte mediante una pipeta Pasteur o una jeringa de metal en el tubo de Westergren, el cual tiene una graduacin de 0 a 200 mm de arriba hacia abajo y presenta ambos extremos abiertos. La sangre debe llenarse hasta la marca cero, se coloca en posicin vertical sobre una gradilla especial que obtura ambos extremos. Valores de referencia Hombres: 1 - 10 mm de altura/hora Mujeres: 3 - 14 mm de altura/hora b) MTODO DE WINTROBE

Fundamento Al igual que el mtodo de Westergren, este mtodo mide la tendencia de los eritrocitos a la sedimentacin al colocar sangre anti coagulada en un tubo pequeo. Se lee la columna de plasma al cabo de una hora de reposo. Procedimiento El mismo que para el mtodo de Westergren. Valores de referencia Hombres: 0 - 5 mm/hora Mujeres: 0 - 10 mm/hora TIEMPO DE SANGRA a) Mtodo de Ivy Principio Mediante esta prueba se estudia la adhesin de las plaquetas al endotelio vascular y su capacidad para formar el trombo plaquetario que detiene la hemorragia a nivel de un vaso de pequeo calibre. Consiste, por tanto, en realizar una pequea herida y medir el tiempo que tarde en dejar de sangrar. Tcnica Exponer el antebrazo del paciente y escoger una zona libre de vnulas, hematomas, heridas y otros. Si el paciente tiene marcada cantidad de vellos, afeite la zona. Limpie con alcohol la zona escogida. Coloque el tensimetro en el brazo del paciente y reglelo a 40 mm Hg Se extrae la lanceta de su reservorio estril y se quita el seguro. No deben pasar ms de 30 a 60 segundos entre la inflada del tensimetro y la produccin de la incisin. Se presiona el disparador al mismo tiempo que el cronmetro y un segundo despus retire el dispositivo. Cada 30 segundos secar con el papel de filtro, no tocar los bordes de la incisin para no interferir con el tapn plaquetario. Se anota el

tiempo que tarda en cesar la hemorragia, lo que corresponde al tiempo de sangra. b) Mtodo de Duke Con una lanceta se hace una pequea incisin en el lbulo de la oreja. La sangre fluye por esta incisin y se mide el tiempo que transcurre hasta que se detiene el sangrado. Este ensayo se lleva a cabo: Para diagnosticar ciertos padecimientos hemorrgicos. Antes de realizar operaciones quirrgicas. Antes de efectuar una puncin en el hgado o el bazo. Mtodo Limpie con suavidad el lbulo de la oreja utilizando una pieza de algodn embebida en ter. No frote. Djese secar Haga la incisin en el lbulo de la oreja con cierta profundidad, al mismo tiempo cronometrar. La sangre deber fluir libremente sin que se necesite exprimir el lbulo de la oreja. Despus de 30 segundos. Recoja la primera gota de sangre en una esquina del papel secante. No toque la piel con el papel Espere otros 30 segundos y recoja la segunda gota de sangre con el papel secante, un poco ms adelante de la primera cuando las gotas de sangre dejen de fluir, detener el cronmetro (o anote el tiempo transcurrido segn el reloj, o contar el nmero de gotas recogidas en el papel secante y multiplicarlo por 30 segundos) El valor de referencia del tiempo de sangra segn este mtodo es de 1 a 4 segundos. TIEMPO DE PROTROMBINA (Prueba de Quick) Principio Mide el tiempo que tarda en coagular una muestra de plasma, desprovisto de plaquetas y anti coagulado con citrato sdico, al ponerlo en contacto con una suspensin de tromboplastina clcica (sustituto de la tromboplastina tisular fisiolgica). El resultado se da en porcentaje referido al de un plasma testigo.

Mtodo El tubo conteniendo la tromboplastina clcica (Ortho) debe ser incubado a 37 C (dependiendo del volumen 5 a 10 minutos En un tubo de 10 x 75 mm aadir 0,1 mL de plasma del paciente. Incubar a 37 C por 1 2 minutos. Aadir 0,2 mL de tromboplastina previamente calentada en el tubo con el plasma del paciente; simultneamente, disparar el cronmetro. Mover el tubo para mezclar los reactivos. Dejar el tubo en reposo a 37 C por aproximadamente 8 10 segundos. Remover el tubo del bao mara y mover el tubo por inclinacin hasta que el cogulo se forme. Anotar el tiempo. Repetir duplicado del paciente y control. Valores de referencia 12 a 14 segundos RECUENTO DE RETICULOCITOS Los reticulocitos son glbulos rojos inmaduros formados por ARN y protoporfirina en el citoplasma. Fundamento Los reticulocitos contienen una fina red de ARN y protoporfirina que se puede teir con el azul de cresil brillante. Este colorante en combinacin con una misma cantidad de sangre anti coagulada se mezcla y con la ayuda de la temperatura (bao mara) se produce la coloracin de estos eritrocitos jvenes visualizndose en los frotices sanguneos por microscopa Procedimiento En el tubo de ensayo colocar dos gotas de sangre total con anticoagulante. Inmediatamente adicionar con la ayuda de una pipeta Pasteur la misma cantidad de colorante. Mezclar la solucin. Se coloca luego en bao mara por espacio de 10 a 15 minutos. Se realizan frotices sanguneos. Se lee con objetivo de 100x.

Valores de referencia

Adultos 0,5 - 1,5% Al nacer 2,5 - 6,0% RECUENTO DE PLAQUETAS Principio El recuento de plaquetas se realiza directamente en un microscopio de contraste de fases, previa lisis de los hemates, o tambin se puede observar en un microscopio convencional. Mtodo Mezclar bien la muestra de sangre obtenida con EDTA. Hacer una dilucin de 20 uL de sangre total con 380 uL de solucin de procana en un tubo de plstico de 12 x 75 (dilucin 1/20). Dejar en reposo por 15 minutos en una gradilla. De esta dilucin, llenar en cmara de Neubauer. Dejar en reposo por 15 minutos en cmara hmeda. Enfocar con objetivo de 45x y contar las plaquetas en el retculo central de 1 mm2 cuadrado. Calcular el nmero total de plaquetas segn la frmula que se lee a continuacin Valores de referencia 150 000 - 450 000 plaquetas/mm3 Recuento en lmina Se cuentan 10 campos con objetivo de 100x y se multiplica por 1000 que es la frmula convencional para recuento de plaquetas. Valores de referencia 150 000 - 450 000 plaquetas/mm3

E. INMUNOLOGA RESPONSABLE: Dr. Luis Vsquez Huerta Blga. Ross Mery Cahuana Chipana INTRODUCCIN.El avance en el diagnstico de las enfermedades se debe fundamentalmente al desarrollo tecnolgico en el campo de la Inmunologa, que permite la identificacin de antgenos y/o anticuerpos en el suero de los pacientes. En tal sentido las tcnicas serolgicas son de aplicacin rutinaria en cualquier laboratorio de patologa clnica. PROPSITO.Este Manual tiene como propsito el uniformizar y controlar el cumplimiento de rutinas de trabajo y facilitar las labores de auditora. OBJETIVOS Identificar anticuerpos o antgenos correspondientes a diversas enfermedades. PROCEDIMIENTOS Obtencin de muestras de sangre:

Ver Manual de Procedimientos de toma de muestras. Centrifugacin de la muestra: Una vez recibida la muestra sangunea, dejarla reposar en el tubo en posicin vertical, en una gradilla por un lapso de 30 a 120 minutos, se puede dejar en bao mara por 15 minutos; luego centrifugar la sangre a 2000 a 2500 r.p.m. durante 5 minutos, de esta manera se separa el suero. Destapar el tubo y aspirar el suero con una pipeta Pasteur y luego verter el contenido en un tubo de ensayo limpio y seco. Si se quiere guardar el suero, ste debe ser almacenado en un vial y colocarlo en refrigeracin a 20C. Operaciones preliminares: Verificar el correcto funcionamiento de los equipos Dejar atemperar los reactivos por lo menos 30 minutos antes de usarlos. Las metdicas (protocolos de trabajo) deber permanecer en sus cajas. Pruebas requeridas: Realizar las pruebas requeridas de acuerdo a los protocolos de trabajo que vienen en la caja de de cada reactivo (Ver Anexos). Transcribir los resultados en las respectivas rdenes tomando en cuenta los valores referenciales para cada prueba realizada, en caso de duda de los resultados debe repetirse la prueba. Si se repite el valor entonces el resultado es correcto. Anotar las solicitudes y resultados en el cuaderno de registro. Fin de la sesin: La sesin de trabajo se puede considerar terminada cuando: Los equipos estn en perfecto estado de uso para el da siguiente. El material se encuentra limpio y disponible para su posterior uso. Los reactivos han sido guardados a la temperatura correcta ( la que indica en la caja del reactivo) Recomendaciones: Calibracin de pipetas mensualmente Descongelamiento y limpieza de refrigeradores trimestralmente. Equipos: Centrfuga Espectrofotmetro para lectura de ELISA

 Estufa a 37C Cronmetros Pipetas automticas 10 a 50 ul Pipetas automticas 50 a 200 ul Pipetas automticas 0.5 a 10 ul Pipetas automticas de 500 ul Agitados Destilador Materiales: Tubos de ensayo 13 x 10 mm. Puntas de pipetas 10 a 100 ul Puntas de pipetas 50 a 500 ul. Guantes descartables no estriles. Agua destilada.

ASLO _ (ASTO- ASO) Turbidimetra Ltex

FUNDAMENTO Las partculas de ltex sensibilizadas con estreptolisina O (SLO), son aglutinadas cuando reaccionan con anticuerpos especficos anti-estreptolisina O (ASO) presentes en la muestra. La aglutinacin de las partculas de ltex es proporcional a la concentracin de ASO en la muestra y puede ser medida por turbidimetra1. VALORES DE REFERENCIA Adultos: hasta 200 UI/ml. Nios (< 2 aos): hasta 150 UI/ml. Nios (edad escolar): hasta 250 UI/ml.

PCR Turbidimetra Ltex

FUNDAMENTO

Las partculas de ltex sensibilizadas con anti-PCR, son aglutinadas cuando reaccionan con la Protena C-Reactiva (PCR) presente en la muestra. La aglutinacin de las partculas de ltex es proporcional a la concentracin de PCR en la muestra y puede ser medida por turbidimetra. VALORES DE REFERENCIA Adultos: hasta 5 mg/L.

FR Turbidimetra Ltex
FUNDAMENTO Las partculas de ltex sensibilizadas con gammaglobulina humana, son aglutinadas cuando reaccionan con factores reumatoides (FR) presentes en la muestra. La aglutinacin de las partculas de ltex es proporcional a la concentracin de FR en la muestra y puede ser medida por turbidimetra. VALORES DE REFERENCIA Adultos: hasta 30 UI/mL.

IV.
V.

RPR

slide test

FUNDAM ENTOS DEL M TODO En la prueba rpida para reaginas plasmticas (RPR), "reaginas" las presentes en el suero de individuos infectados con Treponem a pallidumse , detectan por accin de las mismascon antgeno de cardiolipina, lecitina y colesterol adsorbido sobre partculas de carbn. La reaccin produce una aglutinacin visible macroscpica mente, favorecida por las partculas de carbn. Las reacciones inespecficas se evitan con el empleo de antgeno altamente purificado y el agregado de cloruro de colina, por lo que no es necesario inactivar la muestra. PROCEDIMIENTO I. PRUEBACUALITATIVA Llevar a temperatura ambiente los reactivos y la mues tra antes de realizar el ensayo.

En cada uno de los crculos de la tarjeta de reaccin colocar con un gotero plstico provisto: Muestra o Controles 1gota (50ul)

Con el extremo cerrado de gotero distribuir la muestra uniformemente en todo e! crculo. Con el gotero metlico provisto, en posicin vertical, agregar en el centro del crculo: Muestra o Controles 1gota (17ul)

Sin m ezclar, hacer rotar horizontalm ente la tarjeta cin de reac en form a m anual o con agitador relativo a 100 rpm durante 8 minutos. Observar la presencia o ausencia de aglutinacin al cabo de este tiem po. Tiem pos lectura de mayores pueden dar lugar a falsos resultados. II- PRUEBA SEM ICUA NT ITAT IVA Efectuar diluciones seriadas 1:2, 1:4,1:8, hasta 1:64 empleando solucin fisiolgica y proceder do la misma manera quo en la tcnica cualitativa. El ttulo estar dado por la Inversa de la ltim a dilucin que se observe reactiva.

HBsAg
Principio de la prueba Para la deteccin de HBsAg, el kit de HBsAg ELISA de Wantai em plea m todo el "sandwich" de doble anticuerpo, en la cual hay tiras de m icroplacas polestireno de prerevestidas con anticuerpos m onoclonales especficos HBsAg. al El suero o plasm a del paciente se adiciona a los pozos conjuntam ente con un segundo anticuerpo conjugado con peroxidasa de rbano picante (HRP) y dirigido contra un eptope diferente del HBsAg. Durante la incubacin, inm el unocom plejo especfico form ado en caso de la presencia de HBsAg en la m uestra, es capturado en la tase slida. Luego del lavado para retirar las seroprotenas de las m uestras y el conjugado HRP no adherido, se le a adiciona los pozos las soluciones de crom geno que contienen tetram etilbenzidine (TMB) y el perxido de

urea. En presencia del inm unocom plejo "sandwich" anticuerpo-antgeno-anticuerpo (HRP), los crom genos incoloros son hidrolizados por el conjugado HRP-conjugado unido a un producto de color azul. El color azul se tom a am arillo luego de parar la reaccin con cido sulfrico. La intensidad de color puede m edirse y es proporcional a la de cantidad antgeno capturado en los pozos y en las m uestras respectivam ente. Los pozos que contengan m uestras negativas para el HBsAg perm anecen incoloros. PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA Paso 1. La preparacin de los reactivos: Dejar que los reactivos alcancen una temperatura ambiente de (18-30C) por al menos 15-30 minutos. Verificar el concentrado del buffer de lavado por la presencia de cristales de sal. Si los cristales se han formado en la solucin, resolubflizar calentando a 37C ' la que se disuelvan los cristales. Diluir el buffer de lavado 1:20 con =^a destilada o agua deionizada. Emplear slo envases limpios para la dilucin del buffer de lavado. Paso 2. La numeracin de los pozos: Colocar las tiras requeridas en el receptculo y numerar suficientes nmeros de pozos incluyendo tres controles negativos (Por Ej. B1,C1,D1), dos controles positivos (por Ej. El,Fl) y un blanco(Al, Ni las muestras ni los conjugados-HRP deben ser adicionados en el pozo blanco). Si los resultados van a ser determinados usando un lector de placa de longitud de onda dual, se puede omitir el uso del pozo blanco. Emplear slo la cantidad de tiras requeridas para la prueba. F. MICROBIOLOGA RESPONSABLES Dra. BLANCA MAYORCA PALOMINO Blga: LOURDES IRAIDA RUIZ JIMENEZ INTRODUCCIN: Los exmenes de laboratorio permiten sugerir y establecer un diagnostico, por ser una parte del estudio clnico y todos los componentes de este estudio debern de realizarse con mucho cuidado e interpretarse y correlacionarse correctamente , ya que todo trabajo de anlisis clnicos que es realizado representa una ayuda al diagnostico tratamiento de pacientes PROPOSITO:

Tiene como propsito el uniformizar y controlar el cumplimiento de rutina de trabajo. OBJETIVOS: Identificar a los diversos microorganismos que causan diversas enfermedades PROCEDIMIENTOS: Obtencin de muestras diversas (orina, heces, secreciones, hongos,etc.) Procesamiento de muestras Ver manual de procedimiento de muestras de microbiologa OPERACIONES PRELIMINARES: Verificar el correcto funcionamiento de los equipos Dejar atemperar los medios de cultivo Preparar los medios de cultivo Verificar la limpieza de todo el material de trabajo Cotejar las muestras a trabajar con las rdenes Tener mayor cuidado al procesar las muestras Usar batas protectoras para el trabajo Realizar las pruebas requeridas para cada una de las distintas muestras (orina, heces, secreciones, etc.) Transcribir los resultados en las respectivas rdenes Anotar las solicitudes y resultados en el cuaderno de registro Al finalizar la sesin de trabajo se puede considerar terminada cuando: Los equipos estn en perfecto estado de uso para el da siguiente El material se encuentra limpio estril y disponible para su posterior uso Los medios de cultivo han sido colocados en la temperatura correcta (37C) La mesa de trabajo se descontaminara al terminar la jornada de laboral RECOMENDACIONES:

PRUEBAS REQUERIDAS:

Verificacin de fecha de vencimiento de medios de cultivo y discos de sensibilidad Mantenimiento trimestral de equipos Hacer uso de la lmpara ultravioleta cada cuatro meses Se debe de usar guantes con riesgo de contacto a material infeccioso EQUIPOS: Estufa a 37c Refrigeradora Microscopio ptico Centrifuga Autoclave Cronometro Destilador Cocina elctrica Mechero Bunssen Balanza Placas petri estriles Tubos de ensayo 13x10 mm Aza de Khole Aceite de Inmersin Laminas portaobjetos Laminillas cubreobjetos Esptulas Pinzas Medios de cultivo deshidratados Probetas 50, 100 ml Gradillas Mechero Lpiz de cera, plumn indeleble Batera de la coloracin de Gram Batera de la coloracin de Ziehl-Neelsen

MATERIALES

Alcohol comercial Frascos estriles de boca ancha Agua destilada Aplicadores de madera (baja lenguas) Mascarillas Guantes descartables no estriles, etc. SECRECIONES PRINCIPIO GENERAL INDICACIONES

SECRECIONES FARINGEAS Cepillarse los dientes la noche anterior Venir en ayunas Istopos de algodn estril en tubos de ensayo, para recolectar las muestras, deben de estar estriles Baja lengua estril Una mascarilla protectora El paciente debe permanecer sentado en la posicin mas cmoda lengua hisopo Luego introducir el hisopo con la muestra en el tubo estril SECRECIN PTICA MATERIALES Frotar con firmeza en la parte inflamada (amgdalas o pilares) haciendo girar, y si existen membranas, recjalas con el Indicar al paciente que abra la boca y que diga AHHHH Mientras el paciente dice AHHH, bajar las 2/3 anteriores de la lengua con el baja lengua, con la mano izquierda Introducir el hisopo con la mano derecha. Evitar tocar la

MATERIALES

MTODO

 MTODO

Hisopos de algodn en tubos de ensayo estril Introducir el hisopo en el conducto auditivo externo siguiendo una direccin ligeramente oblicua de atrs hacia adelante y de abajo hacia arriba

o MTODO

Introducir el hisopo con la muestra en el tubo estril SECRECIN URETRAL

MATERIALES Asa bacteriolgica estril Guantes quirrgicos Solucin Salina estril Tubo con medio de transporte Tomar la muestra a primera hora de la maana, antes de que el paciente haya orinado Limpiar el meato con algodn humedecido con solucin Salina estril Aplicar al pene una ligera presin desde atrs , de manera que salga una gota de secrecin por el meato Tomar el pus con el hisopo e introducirlo en el tubo con medio de transporte o SECRECIN VAGINAL La muestra debe de ser tomada de conducto cervical La Trichomona Vaginalis es un protozoario que puede causar secreciones genitourinarias en la mujer y el hombre MATERIALES Hisopo estril d alambre delgado Guantes quirrgicos estriles Especulo estril Tubo con medio de transporte

MTODO Colocar a la paciente en posicin ginecolgica Entreabrir la vulva Introducir un espculo humedecido en agua tibia en la vagina Introducir el hisopo estril dentro del canal cervical rotndolo suavemente Retira y colocar en un tubo estril

PRINCIPIO PARA ENCONTRAR SANGRE OCULTA EN HECES PRINCIPIO GENERAL Cuando la hemoglobina se pone en contacto con perxido de hidrogeno se libera oxgeno, este entra en contacto con la aminopirina y se forma una coloracin azul INDICACINES: Durante tres das (03) el paciente: No deber comer carnes de ninguna clase No deber tomar medicamentos que contengan compuestos a base de hierro No deber ingerir verduras que contengan hierro, ni color (betarraga, tomates, huevos, lenteja, espinaca) MATERIALES Kits comercial para Sangre oculta en heces Aplicadores Agua corriente Muestra de heces (pequea cantidad) MTODO Con el aplicador obtener una cantidad pequea de heces, colocarla sobre la ventanilla formando una capa delgada Aplicar un gota de agua sobre la muestra anterior luego agregar dos gotas del revelador sobre la muestra Leer a los 60 segundos

LECTURA REACCIN POSITIVA ENTRE LAS DOS CAPAS DE LIQUIDO APARECE UNA COLORACIN AZUL REACCIN NEGATIVA
NO OCURRA CAMBIO ALGUNO EN EL COLOR

HEMOCULTIVOS PRINCIPIO GENERAL Es la prueba mas til y las mas usada para demostrar la presencia de bacterias en la corriente sangunea. INDICACIONES El paciente no debe recibir terapia antimicrobiana. Obtener la muestra de sangre, en el momento en que la temperatura del paciente se encuentra elevada. MATERIALES Medio de cultivo: Infusin corazn _ cerebro con agar, este medio permite el desarrollo de bacterias tanto aerobias como anaerobias. METODO das. LECTURA Observar el frasco cada tres das para detectar la aparicin de turbidez en el medio, hemlisis, produccin de gas, etc. Si, el hemocultivo es visualmente positivo debe subcultivarse. Si, el hemocultivo es negativo debe estar en observacin. Extraer sangre del pliegue del codo (asepsia) 8 ml. Se introduce la aguja con la jeringa a travs del tapn y se expulsa la sangre en el medio. Se mezcla el contenido del frasco. El frasco debe rotularse: nombre, fecha. Colocar el frasco inmediatamente a incubarse a 37 C por 10

PREPARACION DE FROTIS El examen microscpico directo de frotis teidos constituye una manera eficiente para estudiar la presencia de bacterias. MATERIALES Asa de siembra. Portaobjetos. Mechero de bunssen Flamear el asa de siembra hasta que se ponga al rojo vivo. Dejar en friar. Tomar una porcin de la muestra que se a examinar. Colocar el asa sobre el portaobjetos y aplanar, ligeramente en el centro de este. Flamear de nuevo el asa hasta que este al rojo vivo para destruir las bacterias que se encuentren. Proceder a fijar pasando el portaobjetos tres veces por el mechero de Bunssen con la muestra hacia arriba. Dejar en friar, antes de aplicar la tincin.

METODO

ANTIBIOGRAMAS PRINCIPIOS GENERALES Es una prueba que se pide cotidianamente al laboratorio a fin de seleccionar el antibitico ms eficaz en el tratamiento a una infeccin determinada. Consiste en efectuar un cultivo del microorganismo en el medio mas apropiado y despus diseminarlo en placa petri con agar, al que se le colocan discos de papel filtro impregnados con solucin de antibitico. METODO Despus de prepara las placas petri con el medio slido se distribuye sobre la placa el microorganismo previamente cultivado en forma uniforme y abundante con una asa de siembra

Colocar los discos sobre este medio slido con pinzas estriles dejando 2 cm. entre cada uno de ellos Inmediatamente, llevar a la estufa e incubar a 37 durante 12-18 horas Una zona de inhibicin indicar sensibilidad o resistencia de antibitico correspondiente

LECTURA

BACILOSCOPA PRINCIPIOS GENERALES TBC Debe de aplicarse las normas de bioseguridad para el manejo de nuestras infectantes INDICACIONES Una buena muestra es aquella que proviene del rbol bronquial y se obtiene despus de un esfuerzo de tos Hay dos maneras de expectoracin 1. Espontnea Indicar al paciente que se ponga de pie, que haga un movimiento inspiratrio profundo, llenando de aire los pulmones, luego que vace los pulmones con una sol espiracin tosiendo tan fuerte como pueda de manera que escupa en el interior del recipiente rotulado, taparlo y llevarlo al laboratorio 2. Inducida Cuando el paciente no logra expectorar .Se le indica que se acueste el paciente boca abajo sobre una cama haciendo que su cabeza rebase el borde. As mismo que deje caer ambos brazos y la cabeza hacia el piso. Luego que inspire retenga el aire y lo expulse con fuerza hasta obtener la expectoracin, escupirla en la recipiente rotulado que deber estar sobre un papel peridico en el piso MATERIALES La bacilos copia es la tcnica fundamental para el diagnostico de la tuberculosis Debe emplearse en toda nuestra tanto pulmonar como extra pulmonar y para el control mensual de tratamiento y retratamiento por

 MTODO

Laminas porta objetos nuevas Aplicadores de madera Mechero de alcohol Lpiz para marcar vidrio Colocar sobre la meza de trabajo una doble hoja Colocar los envases conteniendo la muestras de esputo previamente rotuladas al igual que los envases Destapar cuidadosamente el envase manteniendo la boca de envase, cerca del mechero encendido Coger un aplicador con la mano, para seleccionar y extraer la porcin muco-purulenta de color amarillo verdoso Terminado el extendido, extendido, descartar los aplicadores en el recipiente de incineracin COLORACIN DE BK EXTEDIDO: Tcnica de ZIEL NEELSEN Coloracin sobre los bordes del lavadero las 2 varillas de vidrio unidad por sus extremos , por un tubo de goma Sobre este soporte colocar la serie de laminas fijadas con el extendido Cubrir la totalidad de la superficie del extendido con el colorante fucsina bsica fenicada Calentar suavemente con la llama del mechero por debajo de cada lamina, hasta la emisin de vapores El tiempo mnimo de de coloracin con fucsina es de 5 minutos Lavar con agua cuidadosamente Cubrir la totalidad de la superficie del extendido con la solucin de alcohol cido, durante 2 minutos Lavar con agua corriente con cuidado Luego cubrir la superficie del extendido con colorante azul de metileno, durante 30 segundos Lavar con agua para eliminar el azul de metileno

 o o o o o o

Dejar secas el medio ambiente La observacin microscpica tiene por objeto, determinar si en el extendido hay bacilos alcohol acido resistentes (BAAR) Antes de observar se coloca una gota de aceite de inmersin sobre el extendido En la observacin microscpica los BAAR presentan la siguientes caractersticas: Son de color rojo fuerte, destacan sobre un fondo azul Tienen forma recta o como bastoncitos delgados ligeramente curvos Son muy pequeos(1-4 u m) Se disponen en grupos de 3 10 bacilos Observar un mnimo de 100 campos tiles, empleando el objetivo de 100 x Apuntar el nmero de Bacilos observados y el nmero de campos observados LA LECTURA SE INFORMA CON LA SIGUIENTE ESCALA - NEGATIVO. No se encuentran BAAR por campo + MENOS. de 1 BAAR por campo ++ 1 a 10 BAAR por campo ++++ Mas de 10 BAAR por campo

LECTURA

TINCION DE GRAM PRINCIPIOS GENERALES La Tincin de Gram sirve para clasificar la bacterias en dos grupos Bactrias Gram positivas, que se tien de azul violceo oscuro Bactrias Gram negativas, que se tien de rojo grosella o rosado Solucin de cristal violeta al 1% Solucin Safranina Solucin de Lugol Alcohol Acetona

REACTIVOS

 MTODO

Agua corriente Fijar el frotis por calor suave y dejarlo enfriar Cubrir el frotis con cristal violeta al 1% dejando que le colorante actu por un minuto Enjuague suavemente la preparacin con agua corriente y dejarla escurrir Cubrir el frotis son solucin de Lugol, dejando actuar por 2 minutos Enjuagar suavemente la preparacin con agua corriente Cubrir el frotis con alcohol acetona por un minuto Enjuagar suavemente con agua comn Cubrir el frotis con solucin de Safranina por 30 segundos Enjuagar suavemente con agua corriente preparacin al aire libre y dejar secar la

LECTURA Observar al microscopio, utilizando el lente de inmersin, se debe buscar Bacterias Gram positivas se tien de azul violceo oscuro como Staphylococo, Estreptococos, Neumococos, Enterococos Bacterias Gram negativas, se tien de color rojo grasella o rosado, como Gonococos, Vibrios, Entero bacterias. EXAMEN COMPLETO DE ORINA El examen completo de orina o urinalisis en una de las primeras pruebas usadas para la identificacin d patologa en las vas urinarias, incluye un examen fsico, qumico y una observacin microscpica del sedimento A. EXAMEN FISICO: Incluye Color, Aspecto y Densidad de la orina B. EXAMEN QUIMICO: Comprende PH: Oscila entre 4.6 a 8.0 con una media de 6.0 Orina acida de PH > 7.0 Orina Alcalina PH >7.0 PROTEINAS. alteracin renal Puede ser el indicador ms importante de una

GLUCOSA. Aparece cuando el nivel de glicemia supera 180 mg/dl CETONAS. Aparece como parte del metabolismo incompleto de los cidos grasos SANGRE. Presencia de hematuria en algunas patologas enfermedades hemorrgicas PIGMENTOS BILIARES. Aparece en la orina debido a la obstruccin del tracto biliar UROBILOGENO. Sirve para conocer el estado de la funcin heptica NITRITOS. Indica la presencia de bacterias en la orina o

C. SEDIMENTO DE ORINA Observacin Microscpica Incluye: LEUCOCITOS. Su nmero aumenta en casi todas las enfermedades de las vas urinarias ERITROCITOS. Hay un aumento significativo en algunos trastornos como hemoglobinuria o sangra oculta en orina CRISTALES. Contienen datos sobre el desarrollo de litos o enfermedades metablicas CILINDROS. Estn relacionados con la presencia de protena renal PIOCITOS. Indican infeccin en cualquier lugar del sistema urinario CELULAS. Provienen del sistema excretor y se observan varios tipos BACTERIAS. La presencia de estas indica bacteriuria asintomtico o contaminacin En casi de presentarse bacteriuria se procede a realizar el respectivo cultivo en los siguientes medios de cultivo, para luego poder identificarlos mediante la pruebas bioqumicas AGAR SANGRA AGAR Mc CONKEY

PRUEBAS BIOQUIMICAS El metabolismo microbiano es el conjunto de procesos por los cuales un microorganismo obtiene la energa y los nutrientes (carbono) que necesita para vivir y reproducirse, estos medios son: MEDIO TS I. (Triple Sugar trn) MEDIO LIA . (lisine Iron Agar ) MEDIO SIM . (S= H 2 S ,I = Indol, M=Movilidad)

Cuando en la medio de cultivo se desarrolla la bacteria (Mc Onkey) se procede a realizar un antibiograma, colocndose los respectivos discos de sensibilidad para luego de 24 horas se proceda a realizar la respectiva lectura. El antibiograma determina la sensibilidad o resistencia de un microorganismo frente a determinadas concentraciones de antibiticos CONCLUSIN: La investigacin de la orina es un mtodo til para el medico y de esta manera pueda obtener un diagnostico preventivo MUESTRA MICOLOGICA Son estructura incolora d forma ovalada que con frecuencia presentan evaginaciones tubulares ofilamentosas (hifas) MATERIALES MUESTRA PROBLEMA MEDIO DE CULTIVO Agar Sabourand AGAR SELECTIVO PARA DERMATOFITOS (DTM) HIDROXIDO DE POTASIO AL 20 % LAMINAS PORTA OBJETOS Y LAMINILLAS CUBREOBJETOS PLACAS PETRI GLICERINA CASERA

PROCEDIMIENTO Se toma la muestra de la zona afectada por el hongo con una lmina, raspando suavemente Luego se cultiva en el medio DTM, se rotula y se coloca en una gradilla para que se desarrollen por un lapso de un mes Aparte se coloca un porcin de muestra en una lamina porta objetos sobre una gota de KOH 20% ,se mezcla, luego se le agrega una gota de

glicerina para colocarle encima una laminilla cubreobjetos y observarla el microscopio a la 24 horas COPROCULTIVO El mtodo Bacteriolgico es la ruta a seguir para identificar el micoorganismo desconocido que forma parte de la muestra problema La recoleccin de muestra es la fase ms importante en el aislamiento de microorganismos, para ello se empleara dispositivos esterilizados apropiadamente, la finalidad es la de identificar al microorganismo ya sea este benfico y/o patgeno MATERIALES MUESTRA PATOLOGICA (HECES) MEDIO DE CULTIVO DC (DESOXICOLATO CITRATO) MEDIO LIQUIDO DE ENRIQUESIDO CALDO SELENITO MEDIO DE CULTIVO SABOURAND AGAR SALMONELLA SIGUELLA (S-S) MEDIOS DE CULTIVO TSI, LIA, INDOL Se coge la muestra y se cultiva sta en el medio DC y Sabourand, aparte se toma otra muestra y se la coloca en el caldo selenito previamente roturado, todo ello se lleva a la incubacin a 37 C por 24 horas Al da siguiente se procede a realizar las pruebas bioqumicas (TSI,LIA Y INDOL) cogiendo con la punta de la aguja bacteriolgica la colonia y se inocula sta por el centro del tubo de TSI , luego se hace movimientos de ZIG-ZAG , sobre la superficie del medio de cultivo , lo mismo se realiza con los dos otros medios y se pone a 37 C por 24 horas del medio Caldo Selenito se toma una asada de cultivo y sembrarlo en el medio de Agar Salmonella Shiguella (S-S) por aislamiento previo rotulado, poner a incubacin a 37 C por 24 horas Al cabo de 24 horas se procede a leer

PROCEDIMIENTO

Las pruebas bioqumicas para identificar la bacteria y del medio (S-S) Se procede a realizar el antibiograma respectivo la cual determina la sensibilidad o resistencia del microorganismo

G. PARASITOLOGIA

VI.

RESPONSABLES

Dr. Miguel ngel Neira Esquivel Blga. Mary Luz Mamani Barreda

C.

INTRODUCCION

El avance en el diagnstico de enfermedades parasitarias se debe fundamentalmente al desarrollo tecnolgico en el campo de Parasitologa, que permite la identificacin de estructuras macroscpicas y microscpicas parasitarias en muestras de los pacientes. En tal sentido las tcnicas parasitolgicas son de aplicacin rutinaria en cualquier laboratorio patologa clnica. de

D.

PROPOSITO

Este manual tiene como propsito el uniformizar y controlar el cumplimiento de rutinas de trabajo y facilitar las labores de auditoria.

E.

OBJETIVOS

Identificar las estructuras macroscpicas (parsitos adultos eliminados espontneamente, segmentos o progltidas) y microscpicas parasitarias (huevos, larvas, trofozoitos, quistes y Ooquistes) en muestras de los pacientes correspondientes a diferentes enfermedades parasitarias

F.

PROCEDIMIENTOS

Obtencin de las muestras en fresco o preservadas en formol salino y lminas de test de Graham. Ver manual de procedimientos de toma de muestras II

G.

Operaciones preliminares

Verificar la exacta identificacin de las muestras Verificar el correcto funcionamiento de los equipos

H.

Pruebas requeridas

Realizar las pruebas requeridas de acuerdo a los protocolos de trabajo Anotar las solicitudes y resultados en el cuaderno de registro. Fin de la sesin: La sesin de trabajo se puede considerar terminada cuando: Los equipos estn en perfecto estado de uso para e l da siguiente El material se encuentra limpio y disponible para su posterior uso.

VII.

Recomendaciones

Mantenimiento y limpieza del Microscopio, Centrifuga y Estufa Control de calidad los reactivos. Equipos: Microscopio ptico binocular Centrifuga Estufa Cronometro

VIII.

Materiales

Guantes descartables Gradillas Pipetas Pasteur Laminas portaobjetos Laminillas cubreobjetos Tubos cnicos para centrifuga de capacidad de 15 ml Palitos de chupetes Cinta adhesiva transparente de 1X72 Yds Chupones de jebe Placas petri Tijera Esptula Vasos de vidrio Frascos de plstico de boca ancha y tapa rosca Coladores Malla de alambre

I.

Reactivos Suero fisiolgico Solucin iodada Formol comercial Cloruro de sodio Yoduro de potasio Yodo metlico resublimado Aceite de inmersin

PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA DE HECES EN LA SECCION DE PARASITOLOGIA Las muestras en la seccin de Parasitologa deben ser examinadas inmediatamente dando preferencia a las de consistencia diarreica y/o disentricas. Los pasos que se siguen en la seccin son las siguientes:

EXAMEN MACROSCOPICO Este examen se practica en toda muestra, pues permite, adems de observar la consistencia de la muestra, encontrar parsitos adultos eliminados en forma espontnea o provocada. Estos parsitos deben ser remitidos a la seccin de parasitologa del Laboratorio para su identificacin en caso de ser observados por el paciente, el mdico o la enfermera. Si el laboratorio queda cerca es deficiente hacerlo en agua; si queda distante, en formol al 10% los progltidos de tenias, y en .alcohol al 70% los nemtodos.

EXAMEN MICROSCOPICO METODO DIRECTO AL FRESCO o Colocar una gota de solucin salina sobre una lamina portaobjeto. Coger con un palillo una pequesima porcin de la muestra y homogenizarla con .la solucin salina de la lmina. o Colocar una laminilla cubreobjeto sobre la preparacin anterior, evitando la formacin de burbujas. o Observar al microscopio los estadios de protozoos y helmintos que poseen movimiento (trofozotos y larvas) Este mtodo se realiza en todas las muestras y su valor depende de que se practique en muestras recientemente emitidas.

METODO DIRECTO COLOREADO o Colocar una gota de solucin iodada sobre una lamina portaobjeto. Coger con un palillo una pequesima porcin de la muestra y homogenizarla con .la solucin iodada de la lmina. o Colocar una laminilla cubreobjeto sobre la preparacin anterior, evitando la formacin de burbujas. o Observar al microscopio huevos, quistes y otros estadios de resistencia de helmintos y protozoos.

METODOS DE CONCENTRACION BAERMAN MODIFICADO Material: Copa cnica, malla de alambre, gasa, solucin salina Procedimiento: o o o Colocar en la malla de alambre un trozo de gasa. Utilizando un palillo, dejar caer sobre la gasa una porcin de la muestra de heces, ms o menos del tamao de un limn pequeo. Colocar la malla con las heces dentro de una copa cnica.

o o o o o

Por las paredes de la copa, aadir solucin salina calentada a 37C, teniendo cuidado que solo alcance el nivel del borde inferior de la malla. Colocar la copa en estufa a 37C y esperar 30 minutos. Transcurrido el tiempo, con una pipeta Pasteur y un cupn, extraer cuidadosamente unas gotas del sedimento del fondo de la copa. Colocar el sedimento extrado sobre una lmina portaobjeto, cubrirla con una laminilla. Observar al microscopio las formas mviles de protozoos y helmintos.

SEDIMENTACION RAPIDA Material: Copa cnica, vasos corrientes, colador, agua calentada a 50-60C, azul de metileno Procedimiento: o Diluir 4 a 8 gramos de heces en un vaso corriente con ms o menos 30 ml de agua corriente calentada a 50-60C. o Vaciar a una copa cnica a travs de un colador y seguir agregando agua calentada hasta completar la capacidad de la copa. o Dejar en reposo 20 minutos. o Vaciar el sobrenadante y agregar nuevamente agua calentada. o Dejar en reposo 20 minutos. o Repetir esta operacin hasta que el sobrenadante este claro. o Eliminar el sobrenadante; tomar con una pipeta Pasteur una cantidad suficiente del sedimento. o Colocar este sedimento en una lmina de vidrio de 4X6 cm., adicionar una gota de azul de metileno. o Diluir el sedimento con el colorante (azul de metileno); repartirlo uniformemente en la lamina y llevarlo al microscopio. o Observar con el objetivo de menor aumento, la presencia de huevos de helmintos. TELEMAN MODIFICADO Material:

Vasos corrientes, colador, formol salino, palitos, tubos de centrifuga, ter, tapones de jebe, centrifuga, pipeta Pasteur, solucin iodada. Procedimiento: o Homogenizar 6 a 8 gramos de heces con la solucin de formol salino, en un vaso corriente. o Tamizarla a travs de un colador a otro vaso de vidrio corriente. o Trasvasar la muestra a un tubo de centrifuga: llenar hasta las partes del tubo; agregar 1 ml de ter. Sulfrico; tapar el tubo con un tapn de jebe; agitar vigorosamente o Sacar con cuidado el tapn. o Centrifugar a 2500 r.p.m., durante 5 minutos. o Sacar el tubo, vaciar el sobrenadante, y con una pipeta Pasteur extraer una pequea parte del sedimento. o Colocar una gota del sedimento en una lamina portaobjeto; aadir una gota de solucin iodada; mezclar con una laminilla cubreobjeto y luego cubrirla con la misma. Llevar al microscopio o Observar con objetivo de 10X todo tipo de estructuras: huevos, quistes, larvas, etc.

METODO O TEST DE GRAHAM:

Preparacin de las lminas: Cubrir uno de los lados de un portaobjetos corriente con una cinta adhesiva (Scotch), adhiriendo una pequea tira de papel en uno de sus extremos para identificar la lmina.
Instrucciones: Se entregan al paciente tres portaobjetos ya preparados con las siguientes instrucciones para su aplicacin:

Aplicacin: o En el momento de usar despegar la cinta engomada del portaobjetos hasta sus 2/3 partes y doblarla sobre uno de sus extremos o Separar con el dedo ndice y el pulgar de la mano izquierda, los glteos de la persona por examinar, estando en posicin de flexin del tronco sobre los miembros inferiores. o Poner en contacto la cinta engomada con el margen anal y retirarla cuidadosamente para volver a su posicin original.
o Tomar las 3 muestras en das seguidos. o Una vez obtenidas las 3 muestras, enviar rpidamente al laboratorio.

o Examinar al microscopio con 10X y finalmente con 40X.

MTODO DE RASPAJE EN PIEL PARA LA OBTENCIN DE CAROS Materiales: Placas petri, Portaobjetos, hojas de bistur, lminas con cinta adhesiva Procedimiento: o Escoger una zona de piel afectada y realizar un intenso raspaje, con una hoja de bistur o con el borde filo de una lmina portaobjetos. Se seleccionar preferentemente, las zonas en la que se observen microppulas, trayectos, surcos o vesculas perladas. Si se observan lesiones en cara anterior de puo o espacios interdigitales de manos o regin inguinal, se seleccionarn estas zonas. o Realizar el raspaje hasta que desprenda escamas, recibirlas en una placa petri. o Despejar la cinta adhesiva que contiene la lmina portaobjetos o Pegar la cinta adhesiva sobre la piel raspada y presionar con firmeza de un extremo al otro haciendo pasar varias veces durante 3 segundos. Esta operacin deber realizarse con dos o tres lminas, para aumentar las posibilidades diagnsticas. o Retirarla la cinta adhesiva cuidadosamente para volver a su posicin original para ser examinadas con el microscopio con el objetivo de menor aumento (panormico) o Las muestras de escamas recibidas en la placa petri debern ser examinadas con el estereoscopio o con una lupa simple.

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
COLORACIONES ESPECIALES
LABORATORIO DE ANATOMIA PATOLOGICA
FACULTAD DE MEDICINA UNSA

DR CARLOS MANCHEGO VERA BLGA. MILADE LAZO VERA

J.

K. PROCEDIMIENTO
Nombre: Control del cono cervical uterino. Definicin: Seleccin de fragmentos representativos de las reas exo-endocervicales. Objetivo

Determinar la precisin diagnstica en los preparados histolgicos seleccionados para el estudio de la extensin del carcinoma del cuello uterino.

Materiales: El cono cervical uterino. Pinzas, bistur, cuchillos, alfileres. Descripcin: 1. Conociendo el labio anterior, marcado por el cirujano (ideal) o sin sta identificacin, preferentemente el espcimen en fresco es abierto longitudinalmente en la posicin 12 horaria y extendida sobre madera o cartn fijndola mediante alfileres, con la cara mucosa hacia fuera, se le sumerge en formol aldehdo por varias horas, luego se describe el tamao del espcimen, la presencia de masas (tamao, forma, localizacin), quistes (tamao y contenido) erosiones o irregularidades o laceraciones recientemente hechas por biopsias. 2. Se hacen cortes paralelos de 2 3 mm. A lo largo del plano exoendocervical de tal manera que cada fragmento contenga la unin escamocolumnar y as mismo cada fragmento debe ser identificado para poder reconstruir y orientar los bordes quirrgicos comprometidos por la neoplasia.

L.
Nombre

PROCEDIMIENTO : Control de biopsia endocervical por curetaje endouterino.

Definicin: Seleccin de fragmentos representativos de las alteraciones tisulares endometriales, conociendo si se trata de un aborto, hiperplasia, neoplasia o verificar el da del ciclo para estudio de esterilidad. Objetivo Determinar la precisin diagnstica de los preparados seleccionados. Materiales : El tejido endouterino. Bistur, tijeras, pinzas. Descripcin: 1. Medir y pesar en conjunto todo el espcimen. 2. Verificar: color, consistencia y presencia de cogulos hemticos, tisulares

estableciendo la proporcin entre stos y el endometrio. 3. Verificar: Tejido placentrio (esponjoso, membranoso, vesicular, embrionrio sacular o partes fetales). 4. Verificar: Tejidos slidos fibromiomatosos o globulares polipoideos. Seleccin de muestras: 1. Suministrar todo el tejido biopsico, si se trata de diagnstico del ciclo o legrado con cureta de Noback, de hiperplasias. 2. Si se trata de aborto: Seleccionar cortes representativos de vellosidades placentarias, decidua y partes fetales. 3. a) b) Si se trata de neoplasias: Seleccionar cortes representativos de: Fibromiomas (Tejido blanco grisceo arremolinado). Mola y Coriocarcinoma: (Tejido vesicular, reas slidas,

necrticas y hemorrgicas). c) Adenocarcinoma: Suministrar todo el tejido biopsico (esponjoso, polipoideo).

M. PROCEDIMIENTO
Nombre : Control de Oforectoma. OVARIO. Definicin: Seleccin de fragmentos representativos de las alteraciones tisulares del rgano en mencin. Objetivo: Determinar la precisin diagnstica de los preparados seleccionados. Materiales: El rgano correspondiente. Tijeras, pinzas, bistur y cuchillos. Descripcin: 1. Conociendo si se trata del derecho o del izquierdo. Medir y pesar el rgano, describir la forma, color, el aspecto de la superficie externa e interna si es qustica; grosor de la cpsula, adherencias, hemorragias o soluciones de continuidad capsular. Si es slido detallar el color de la superficie de corte, aspecto y compromiso capsular, calcificaciones, quistes y su contenido (lquido, untuoso, piloso, gelatinoso, papilar, etc.) 2. Si tiene apariencia tumoral: Volumen, apariencia lisa o papilar, slido o qustico, contenido del material qustico; necrosis hemorragia o calcificaciones. Compromiso capsular por la tumoracin. 3. Seleccin de muestras: Para Oforectoma incidental: a) Hacer un corte sagital, del borde externo hacia el hilo ovrico y tomar una seccin. Para Oforectoma qustica: a) Tomar 3 secciones de la pared del quiste, particularmente del rea de aspecto papilar. Para Oforectoma tumoral: a) Tomar cortes representativos de la masa tumoral que comprometan la cpsula, lmite tumoral slido o qustico. b) Tomar cortes representativos de los diferentes aspectos que caracterizan la masa tumoral (remeimos, amarillentas, tisulares

anaranjadas,

hemorrgicas-necrticas,

cebroides,

mixoides,

mucoides, etc.).

N. PROCEDIMIENTO
Nombre: Control de Trompa de Falopio. Definicin: Seleccin de fragmentos representativos de las alteraciones tisulares de la Trompa uterina: conociendo si se trata de embarazo ectpico, tumoraciones qusticas slidas o biopsia por ligadura. Objetivo: Determinar la precisin diagnstica de los preparados seleccionados. Materiales Trompa uterina (o biopsia). Tijeras, pinzas, bistur y cuchillos. Descripcin: 1. Medir la longitud y dimetro del espcimen. 2. Verificar: a) b) Serosa: presencia de fibrina, hemorragia, adherencias. Pared: Anormalidades del grosor, rupturas y tortuosidades. Ligaduras c) d) Mucosa: Atrofia, hiperplasia y fimbria invertida o adherente. Lumen: Dilataciones, dimetro, contenido: sangre fluida o en cogulos, placenta, embrin. e) Tumoraciones: Slidos (Tamao, contenido lquido/slido, tisulares

aspecto: sesiles/pedunculadas; localizacin y grosor de la pared). Seleccin de muestras: 1.- Si se trata de biopsia por ligadura: suministrar todo el espcimen. 2.- Si se trata de trompa sin mayores alteraciones: suministrar 3 fragmentos en rodajas transversales de 2 a 3 mm. de grosor de la parte mas proximal, media y distal del rgano.

3.- Si se trata de embarazo ectpico: suministrar 2 3 cortes transversales que involucren serosa y contenido placentario o cogulos hemticos de 2 a 3 mm. de espesor. 4.Si se trata de tumoraciones: suministrar cortes representativos de las lesiones slidas o qusticas que involucren la serosa del rgano o del mesosalping.

O. PROCEDIMIENTO
Nombre: Control de Miembro Inferior. Definicin: Seleccin de fragmentos tisulares representativos de las alteraciones encontradas, sabiendo si se trata de Amputacin por gangrena o por tumor. Objetivo: Determinar la precisin diagnstica de los preparados seleccionados. Materiales : Miembro inferior. Tijeras, bistur, sierra elctrica. Descripcin: Identificar y medir el miembro inferior, a nivel de amputacin. Describir, lesiones cutneas ulcero-necrticas o tumorales; localizacin, extensin, as como compromiso de partes blandas u seas; ya sea se trate amputacin por gangrena o tumoral. 1. a) Si se trata de amputacin por GANGRENA: Remover y muestrear cada uno de los segmentos arteriales (femoral, poplitea, tibial anterior y posterior, as como peronea. Mediante incisin cutnea longitudinal posterior hasta tercio medio de pierna y luego incisin oblicua hacia el malolo interno del tobillo: separando fasias, msculos, quedaran expuestos los paquetes vasculonerviosos en ellos se buscara tortuosidades, calcificaciones u oclusiones intraluminales, las que sern muestreadas correctamente identificadas. b) Tomar muestras de las lesiones cutneas ulcero-necrticas, comprometiendo los lmites lesivos y sanos; hacer extensiones de material supurativo y coleccionar muestras para cultivos. Tomar muestras de los bordes digitales que comprendan los paquetes vasculares. c) 2 Tomar muestras de partes blandas absedadas o en necrosis al igual que del tejido seo si estuviera comprometido. Si se trata de amputacin por TUMOR: tisulares

a) Seccionar longitudinalmente el miembro inferior, comprometiendo la masa tumoral en su dimetro mayor, el mismo que ser medido y descrita su localizacin precisa ya sea de origen seo o de partes blandas. Se examinarn las cavidades articulares para objetivar el compromiso de las mismas. b) Tomar muestras del tumor siempre en el lmite entre el tumor y tejido sano ya sea su origen de partes blandas u seas. c) Tomar muestras de otras estructuras tisulares, comprometidas por el tumor ajeno al origen tumoral (piel, msculos, fasias, paquetes vasculo-nerviosos, hueso). d) Tomar muestras de todos los ganglios linfticos regionales y dstales a la neoplasia, contrarios y medirlos an estn aglutinados.

IX. PROCEDIMIENTO
Nombre: Control de tero y anexos. Definicin: Seleccin de fragmentos representativos de las alteraciones titulares, conociendo, si se trata de Ca in situ o infiltrante fibromatosis u otros. Objetivo: Determinar la precisin diagnstica de los preparados seleccionados. Materiales: El rgano en mencin. Tijeras, pinzas, bistur, cuchillos. Descripcin: 1. Medir y pesar el espcimen. Reconocer e identificar las caras anterior y posterior del rgano, as como los anexos derecho e izquierdo, ya se trate de histerectoma total, radical o subtotal. 2. 3. 4. 5. Forma del tero. Deformado. Tumores subserosos. Adherencias. Pared del tero. Engrosada. Alteraciones y anormalidades. Endometrio: Apariencia, grosor, plipos (tamao y forma), quistes, tumores. Crvix: Apariencia exocervical y endocervical y de la unin escamocolumnar: erosiones, plipos, quistes. tisulares

6. 7. 8.

Miometrio:

Miomas,

nmero,

localizacin,

tamao,

sesiles

penduculados. Hemorragias, necrosis, calcificaciones, otras. Ovarios: Volumen, forma, adherencias, tumores, quistes y su contenido. Hemorragias, necrosis y calcificaciones. Trompas: Longitud y dimetro, serosa: Fibrina, adherencias. Ligaduras. Rupturas: Fimbrias, apariencia, retracciones y adherencias. Lumen: Contenido y grosor en sus paredes. Masas: Tamao, apariencia. Quistes cara-tubarios, volumen contenido, pendiculados cesiles Descripcin para Histologa: 1) Cuerpo uterino: 2 secciones que comprendan fondo incluyendo endometrio, miometrio y serosa. Cortes adicionales de tumoraciones, quistes de chocolate u otras anormales. 2) Crvix: Secciones de localizacin horaria 1,5,7,11, si se trata de Ca. In situ. De 16 a 22 secciones horarias de todo el cuello uterino, si se trata de Ca. Infiltrante, secciones representativas de la masa tumoral teniendo en cuenta los bordes quirrgicos, plipos: se incluyen en su totalidad. 3) Endometrio: Plipos, se incluyen en su totalidad. Hiperplasia: Se incluyen en su totalidad. De secciones que comprometan tumor, miometrio y serosa. 4) Ovarios: 2 secciones que comprometan cpsula corteza medula e hilio tumoral: secciones representativas que comprometan los lmites de la serosa. Quistes: Secciones de serosa y contenido, as como proyecciones papilares intraquisticas. 5) Trompas: 3 secciones transversales de istmo, media y fimbria. Gestacin ectpica: secciones representativas del contenido gestacional y del embrin. 6) Ca. Paramtricos: 2 secciones de cada parametrio cuando se trate de

X. PROCEDIMIENTO
Nombre: Examen macroscpico de una Nefrectoma por Patologa no Tumoral

Definicin: Estudio morfolgico Objetivos: Diagnosticar la Patologa infecciosa o degenerativa renal, motivo de la Nefrectoma. Materiales: Instrumental: Reactivos: Xilol, Alcohol, Colorantes, Formol. Lminas de vidrio, blsamo. Procedimientos: 1. Medir y pesar el rgano. 2. Cortado sagitalmente a travs de la cpsula y abrir cuidadosamente la pelvis, clices, urter, o previamente inyectarle formalina a travs de urter o arteria renal (si es posible) y ligarlos, fijarlos durante la noche. Al da siguiente cortar el rgano sagitalmente, (esta tcnica se usa especialmente en casos de hidronefrosis). 3. Tomar dos fotos identificando alguna zona en especial. Descripcin: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Peso y medida del rin. Cpsula: Tejido Peri capsular, grosor, adherencias. Serosa: Lisa, cicatricial, medida forma, de las cicatrices quistes (# contenido, medida). Corteza: Color estriaciones, apariencia glomerular. Mdula: Color y consistencia. Pelvis: Medida, dilataciones, clices, hemorragia, depsito de cristales, clculos (#, medida, forma). Urter: Dimetro, medida, evidencia de dilatacin. Arteria y vena renal: apariencia, contenido.

CORTES PARA ESTUDIO HISTOLOGICO: 1. 2. 3. Rin: 3 cortes que incluye corteza y mdula. Pelvis: 2 cortes. Urter.

XI. PROCEDIMIENTO
Nombre: Examen macroscpico de una Nefrectoma por Patologa Tumoral Definicin: Estudio morfolgico Objetivos: Diagnosticar la Patologa Tumoral, extensin, tipo, bordes quirrgicos, posible denervacin a travs de los trombos encontrados en la vena. Materiales: fijador de lminas. Procedimientos: 1. 2. 3. 4. 5. Investigar la presencia de Ganglios Perirrenales y disecarlos. Abrir la vena renal longitudinalmente Cortar el rin sagitalmente, abrir la pelvis, clices, urter. Disecar la cpsula y con extensin del tumor a la cpsula. Tomar fotos, identificando alguna zona en especial. Descripcin: 1. 2. Peso y dimensin del espcimen, longitud y dimetro del urter. Caractersticas del tumor, medida, forma, extensin homogenicidad, necrosis, hemorragia, invasin a la cpsula, tejido perirrenales, clices, pelvis y vena renal. 3. 4. 5. Caractersticas del tejido renal extra tumoral, corteza, mdula. Pelvis: Dilatada, clices, clculos... Presencia: nmero, medida y apariencia de los ganglios. Reactivos: Xilol, Alcohol, Parafina. Formol, Colorantes, Lminas de vidrio, blsamo,

CORTES PARA ESTUDIO HISTOLOGICO: 1. Tumor: 3 cortes que incluye tejido adyacente.

2. 3. 4. 5. 6. 7.

Tejido renal no tumoral: 2 cortes. Pelvis: 1 corte. Arteria y vena renal. Urter. Ganglios linfticos si estn presentes. Borde quirrgico: urter, arteria y vena renal.

XII.

PROCEDIMIENTO

Nombre: Examen macroscpico del Testculo. Definicin: Estudio morfolgico Objetivos: Diagnostico de la Patologa Tumoral Infecciosa o degenerativa, motivo de la Orquectoma. Materiales: Instrumental: fijador de lminas. Procedimientos: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 1. Abrir la tnica vaginal. Pesar y medir el testculo. Cortar el testculo en dos mitades antes de fijarlo en formalina Tomar dos fotos, identificando alguna zona en especial. Cortar el rgano laminando cada 3 mm. en sentido perpendicular al corte original. Cortar el epiddimo longitudinalmente. Hacer varios cortes del cordn espermtico a varios niveles. Peso y dimensin del testculo. Reactivos: Xilol, Alcohol, Parafina. Formol, Colorantes, Lminas de vidrio, blsamo,

Descripcin:

2. 3.

Medida del cordn espermtico. Caractersticas del tumor si esta presente, medida, color, consistencia homogeniosidad, quistes, necrosis, hemorragia, extensin a la albuguinea epiddimo y otras estructuras.

4. 1. 2. 3. 4. 5.

Caractersticas del testculo no neoplsico: Atrofia, fibrosis, ndulos. Tumor: 3 cortes o uno por cada cm. del tumor. Testculo no tumoral: 2 cortes. Epiddimo. Cordn espermtico y tejido que rodea. Borde quirrgico, cordn espermtico un corte transversal.

CORTES PARA ESTUDIO HISTOLOGICO:

XIII. PROCEDIMIENTO
Nombre: Examen macroscpico de Vejiga. Definicin: Estudio morfolgico Objetivos: Estudiar la patologa tumoral, infecciosa u otro motivo de la cistectoma Materiales: Procedimientos: 1. Se tiene dos opciones dependiendo de la Patologa y el estado del rgano. Abrir el rgano en forma de Y por la pared anterior, colocando sobre un corcho o madera apretndolo con alfileres y fijarlos. Llenar el rgano con formalina a travs de la uretra y fijarlo por toda la noche y dividirlo en 2 mitades, anterior y posterior iniciando el corte por la Uretra. 2. 1. Tomar fotos. Descripcin: Medidas de la vejiga, longitud del urter, otros rganos. Reactivos: Xilol, Alcohol, Colorantes, Formol. Instrumental quirrgico.

2. 3. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.

Caractersticas del Tumor: Medida (incluyendo el grosor) localizacin extensin, invasin, forma papilar ulcerado. Apariencia de la mucosa no neoplsico: grosor de la pared vesical. Tumor: 3 cortes, incluyendo la pared vesical. Cuno de la vejiga: 1 corte. Trigono: 2 cortes. Pared Anterior: 2 cortes. Pared Posterior: 2 cortes. Cualquier rea normal. Uretra: 3 cortes. En varones: Prstata vesical seminal (si es que hubiera). Otros rganos presentes. Ganglios linfticos.

CORTES PARA ESTUDIO HISTOLOGICO:

XIV. PROCEDIMIENTO
Nombre: Examen macroscpico de la Mastectoma por Cncer. Definicin: Examen morfolgico del cncer de mama. Objetivos: Determinar la patologa tumoral, tipo de diferenciacin, metstasis, bordes quirrgicos Materiales: Reactivos: Xilol, Alcohol, Formol. Instrumental quirrgico. Procedimientos: Primer da: 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8) 9) 10) Peso del espcimen. Orientacin de la mama para separar la diseccin axilar. Diseccin de ganglios axilares en grupos I, II, III. Grupo I Grupo II Grupo III : Inferior (Por debajo de los vasos mamarios). : Radio Axilar. : Ganglio de axila superior.

Evaluar las caractersticas y medida. Cortar verticalmente la mama en lminas paralelas de 1 cm. Examinar cada corte cuidadosamente, tomar fotografas, tomar muestras para receptores hormonales y estudios de Inmunohistoqumica. Tomar cortes de cada cuadrante (4), tumor, pezn, piel y lecho tumoral y fijarlos durante toda la noche.

Segundo da: 1) 2) Cortar los ganglios, estudiarlos e incluirlos (cortarlos opcionalmente). Reexaminar los cortes de tumor y cuadrantes, pezn y piel e incluir cortes finos de 3 mm. de grosor. Descripcin: 1) 2) 3) El tipo de mastectoma. Listar las estructuras incluidas en el espcimen: piel, pezn, ganglios, msculos, etc. Peso y dimensiones.

XV.

Procedimiento

Nombre: Examen macroscpico de una biopsia quirrgica de mama. Definicin: Examen morfolgico. Objetivos: 1) 2) 3) 4) 5) 1) 2) Diagnosticar la enfermedad neoplasia, inflamatoria u otra. Materiales: Reactivos: xilol, alcohol, colorantes, lminas de vidrio. Procedimientos: Medir el espcimen. Tomar una Rx si es necesario y/o posible. Tomar una mucosa para estudio de receptores hormonales si es necesario y/o posible. Fijar el tejido durante la noche con un mnimo de 4 horas. Cortar en lminas de 3-4 mm. De grosor. Dimensin y consistencia del espcimen. Apariencia al corte: fibrosis, quistes. (#, medida), calcificaciones, masa tumoral. (medida, color, bordes, consistencia). Cortes para estudio histolgico: 1) 2) 3) 4) 5) En un espcimen pequeo: incluir toda la muestra. En espcimen grande: 2-3 cortes. Si se toma Rx cortar e incluir todas las zonas sospechosas, con presencia de calcificaciones. Caractersticas de la apariencia externa. Color del aspecto de la piel. Localizacin y cambios de color (cicatrices, puncin, eritema. Edema, retraccin, ulceracin). Apariencia del pezn y areola (inversin, retraccin). Localizacin del tumor en funcin del cuadrante y del pezn ( a 2 cm del pezn en el cuadrante) Caractersticas del tumor:

Descripcin:

 6)

Tamao, color, consistencia, infiltracin, nmero. Consistencia, necrosis, hemorragia, calcificacin, relacin con la piel, si esta pegada a la piel, al msculo. Caractersticas del tejido mamario no tumoral: quistes, medida,

contenido, nmero. Cortes para estudio histolgico: 1) 2) 3) 4) 5) 6) Tumor: 3-4 cortes incluyendo el algn tejido no tumoral. Mama no tumoral: 4-5 cortes de cada cuadrante. Si, se, ii, ie, y el 5to. De alguna patologa no tumoral relevante. Fibrosis, fibroma, quistes. Pezn: 1 corte. Piel: 1 corte de la piel supra yacente al tumor. Ganglios: i, ii, iii: 1-2 cortes por cada ganglio. Msculos: si el espcimen los incluye.

XVI. PROCEDIMIENTO
Nombre: Examen macroscpico de una lobectoma por patologa no tumoral. Definicin: Examen morfolgico. Objetivos: Diagnosticar la patologa pulmonar si es de causa infecciosa parasitaria (quiste Materiales: Reactivos ad-hoc (formol, alcoholes, xilol, parafina, lminas, coloraciones convencionales h/e y especiales, etc.). Procedimientos: 1. 2. 3. 4. 1. pesar y medir el espcimen. tomar cortes sagitalmente a travs de la cpsula y determinar cuidadosamente si existen ganglios, calcificaciones, necrosis, etc. ilustracin iconogrfica si el caso es de inters cientfico o acadmico. tomar cortes a diferentes niveles de la lobectoma. Peso y medidas del espcimen: (lobectoma o segmectectoma). hidatdico), mictica (aspergilonas), abscesos de etiologa bacteriana o de otra patologa motivo de la lobectoma.

Descripcin:

2. 3. 4. 1. 2. 3. 4.

Observar como est la cpsula, tejido peri capsular, si existe o no adherencias. Observar como est la serosa, si es lisa, rugosa, si existe cicatrices, bridas, etc. Si hay reas de consolidacin o no. Si se trata de un quiste hidatdico incluir por separado la membrana cuticular y la adventicia Incluir tejido peri qustico incluyendo parnquima sano. Si se trata de una tuberculosa y/o aspergiloma. Tomar muestras para examen bacteriolgico. Si hay malformaciones congnitas o hamartomas documenta mediante fotografas.

Cortes para estudio histolgico:

XVII. Procedimiento
Nombre: Examen macroscpico de una tiroidectoma por patologa no tumoral. (Tiroiditis de hashimoto, bocio, etc.) Definicin: Estudiar la patologa tiroidea si es de causa infecciosa, degenerativa, metablica, etc. Materiales: Reactivos ad-hoc (formol, alcoholes, xilol, parafina, lminas, coloraciones convencionales h/e y especiales, etc.). Procedimiento: a) b) c) d) sano. Descripcin: 1. 2. Peso y medidas del espcimen. Observar si existe adherencias en la superficie del espcimen si esta lisa, rugosa, etc. pesar y medir el espcimen. tomar cortes representativos incluyendo la cpsula del rgano. ilustracin fotogrfica si el caso lo amerita con fines cientficos o acadmicos. tomar cortes a diferentes niveles del espcimen incluyendo tejido

3. 4.

Si existe al corte zonas con hemorragia, necrosis, calcificaciones. Finalmente seleccionar los cortes adecuados siempre incluyendo parnquima sano.

XVIII. PROCEDIMIENTO
Nombre: Examen macroscpico de una neumonectoma lobectoma o segmectoma Definicin: Estudios morfolgicos Objetivo: Determinar la patologa infecciosa, tumoral parasitaria, etc. Materiales: Reactivos ad-hoc (formol, alcoholes, xilol, parafina, lminas de vidrio (porta y cubre objetos), blsamo de canad fijados de lminas de alcohol, ter, etc. Procedimiento: a) b) c) d) e) f) g) h) i) j) k) Examen macroscpico del espcimen. peso y medidas Conseguir los caracteres organolpticos del espcimen: color, consistencia, reas de calcificacin, necrosis. Verificar si hay o no compromiso de la cpsula. Observar si hay compromiso macroscpico del borde de seccin del bronquio correspondiente. Describir si hay o no ganglios en el hilio pulmonar. Determinar si la neoplasia pulmonar es central o perifrica. Determinar las caractersticas del tejido pulmonar extra tumoral. Tomar los cortes adecuados para el estudio histolgico del tumor por lo menos 4 cortes. Antes del tejido pulmonar no tumoral 3 cortes. Tomar cortes de los ganglios del hilio, vasos, etc. Del bronquio comprometido por la neoplasia.

PROCEDIMIENTO Nombre: Examen macroscpico de una tiroidectoma parcial o total por neoplasia maligna. Definicin: Estudio morfolgico del cncer de tiroides. Objetivo: Evaluar la patologa tumoral maligna tipo histolgico tamao compromiso de la cpsula o no, consistencia, color, reas de necrosis, metstasis ganglionar y bordes quirrgicos. Materiales: Formol, alcoholes, xilol, parafina, etc. Instrumental: Quirrgico. Procedimiento: a) b) c) d) e) f) Examen macroscpico del espcimen, tiroidectoma parcial o total con o sin direccin ganglionar radical uni o bilateral. Medir el espcimen en sus tres dimensiones: largo, ancho y espesor. Mencionar su consistencia: elstica, resistente y ptria... Diseccin ganglionar uni o bilateral con aclaracin y separacin de los grupos ganglionares. Seleccionar los cortes del espcimen para su inclusin en parafina identificando los correspondientes al tumor. (T) y a los grupos ganglionares. Tomar los cortes adecuados del tumor y del parnquima sano correspondiente incluyendo la cpsula del rgano.

XIX. PROCEDIMIENTO
Nombre: control de apndice cecal Definicin: Seleccin de fragmentos representativos de alteraciones tisulares. Objetivo: Determinar la precisin diagnstica de los preparados histolgicos titulares seleccionados. Materiales: rgano: tijeras, pinzas, bistur, cuchillas. Procedimiento: a) b) medicin del rgano. superficie externa: fibrina?, pus ?, hemorragia ?, perforacin ?, condicin del mesenterio. Secciones para histologa: Alteraciones transversales: uno en el primer tercio proximal, otro en la parte media y uno longitudinal en el tercio distal.

XX.

PROCEDIMIENTO

Nombre: Control de esfago Hay 20 opciones: 1. Disecar en fresco, abrir longitudinalmente en toda su extensin por el lado opuesto al tumor. a) Si se incluye porcin de estomago, abrir a lo largo de la curvatura mayor en continuidad con el esfago y acompaando un dibujo. b) Disecar grasa peri esofgica y buscar ganglios, dividir en 3 porciones adyacentes, proximales y distales al tumor, el ltimo puede incluir los ganglios cardioesofgicos. c) Fijar con el espcimen en una madera o corcho: mucosa hacia fuera y pasar en un contenedor con formol, sumergir el espcimen y fijar toda la noche. d) Tomar 2 fotografas polaroid e identificar en uno de ellos los sitios de donde se tomarn las secciones.

e) Pintar los especimenes con tinta india, despus que los especmenes sean fijados; este incluye los bordes de la mucosa y el tejido blando alrededor del tumor. f) Rellenar la luz con gasa y algodn impregnando con formol, fijar toda la noche, cortar con tijeras longitudinalmente por el lado opuesto al tumor y terminar el corte con cuchillo. Descripcin: 1. 2. Longitud y dimetro o circunferencia del espcimen, incluyendo el estomago proximal si es necesario longitud de curvatura mayor y menor. Tumor: volumen, aspecto (polipoide), bordes, ulceraciones. Compromete toda la circunferencia?, profundidad del tumor, extensin en el estomago y rganos adyacentes, distancia de los bordes de seccin. 3. 4. 5. 6. 1. 2. Mucosa: aspecto de la mucosa no neoplsica, reconocimiento de la mucosa. Esofgica distal al tumor, luz dilatada proximal al tumor. Pared: engrosada?, vrices ? Estomago: si esta presente, aspecto de la unin cardio-esofgica y de la mucosa gstrica. Ganglios linfticos: nmero, volumen del mayor aspecto tumoral. Tumor: 4 secciones longitudinales, 1 que incluya mucosa no neoplasica, proximal al tumor y otra de la porcin distal del tumor. Mucosa no neoplasica: 2 3 cortes transversales, a diferentes distancias del borde tumoral, proximal y/o distal, dependiendo de la localizacin del tumor. 3. 4. 5. 6. a) b) c) Si esta el estomago en las secciones, 1 que incluya la unin gastroesofgica. Borde proximal. Borde distal. Ganglios linfticos: Adyacentes al tumor. Proximales al tumor. Distales al tumor. Secciones para histologa:

XXI. PROCEDIMIENTO
Nombre: control de vescula biliar: Procedimiento: 1. Abrir el rgano longitudinalmente tan pronto como sea posible despus de su extirpacin de lo contrario la mucosa sufre rpidamente cambios antoliticos. 2. 3. 4. Si hay clculos, lavarlos, calcular el nmero y el porte de los mayores, cortar uno o varios de ellos con el bistur. Revisar ganglios linfticos a lo largo del cuello de la vescula. En caso de carcinoma el rgano tambin puede ser estudiado por extraccin de la bilis con una jeringa, llenar la luz con formalina, fijando toda la noche a 4c y cortar el espcimen con tijeras y un bistur. Clasificacin: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Medir dimetro longitudinalmente y transversalmente. Serosa: engrosada?, alteraciones fibrosas ? Pared: engrosada? : focal o difusa?, hemorragia ? Mucosa: color, apariencia, ulcerada?, hiperplsica ? Conducto cstico: dilatado?, con clculos ?, ganglios linfticos presentes ?, porte y apariencia. Volumen aproximado, color y consistencia de la bilis. Calcular: aproximadamente el nmero, forma y variaciones o de volumen, color y apariencia al corte. SECCIONES PARA HISTOLOGIA: 1. 2. Los cortes desde la mucosa aserosa tomadas a travs de las reas macroscpicamente son de aspecto normal. Corte del conducto cstico y ganglios linfticos, si ellos aparecen macroscpicamente anormales. CONTROL DE COLON: Colectoma por razn no tumoral. PROCEDIMIENTO: 1. Disecar ganglios y separar el mesenterio con el espcimen fresco.

2.

Dos opciones hay para el estudio del intestino, dependiendo del tipo de anormalidad presente y el estado del espcimen al recibirlo en el Laboratorio. a) b) Abierto el espcimen longitudinalmente, fijarlo con alfileres en corcho o madera, fijarlo en formol toda la noche. Inyectar especmenes). el espcimen con formol (ver masaje inyeccin externo de del Evacuar heces mediante,

espcimen, lavar cuidadosamente la luz con solucin salina (no agua) formol. Amarrar un extremo, llenar con formol y amarrar el otro extremo (verificar tied ott). Si existe alguna constriccin verificar que el formol pase a todo lo largo si no asegura esto la masa no quedar fijada por lo tanto abrir el espcimen y fijar como se seala el # 2. Esto es muy importante en casos de diverticulosis. 3.- Tome 2 fotografas polaroid para identificar los lugares de las secciones que van a ser tomados. 4.En general tomar las secciones perpendiculares a descripcin de los pliegues de la mucosa. Descripcin: 1. 2. 3. 4. 5. Lugar del intestino resecado, longitud, cantidad de mesenterio. Mucosa: tipo de lesin, catersin, ulceracin lineal o transversal, profundidad, pseudopolipos, hemorragia, fisuras. Pared: grosor (forado difuso) atrofia, fibrosis, necrosis. Serosa, fibrina, pus fibrosis, adherencias al mesenterio. Divertculo: Nmero de dimensiones, localizacin en relacin a las tenias, constituido, evidencia de inflamacin, hemorragia o perforacin. SECCIONES PARA HISTOLOGIA: 1.- Tantos como sean necesarios como ejemplos de los ascos anormales. 2.- Proximal y distal, zonas de seccin en casos de colitis. 3.- Apndice, si estuviera incluido en el espcimen coloril. COLECTOMIA POR TUMOR: Procedimiento: 1. Disecar ganglios y remover el mesenterio con el espcimen en fresco.

2. Dos opciones para el estudio dependiendo del volumen y localizacin del tumor y estado del espcimen al ser incluido en el Laboratorio. a) Abrir el coln longitudinalmente, tratando de no cortar a travs del tumor, fijar con alfileres en un corcho o tabla, dejar en formol toda la noche. b) Inyectar formol al espcimen. 3. Tomar 2 fotos polaroid para identificar los sitios a tomarse de las secciones. 4. En casos de penetracin profunda del tumor disecar cuidadosamente las venas por posible invasin tumoral. 5. En general tomar las secciones perpendiculares a la diseccin de pliegues de la mucosa. Descripcin: 1. a) Parte del coln resecado, longitud y cantidad del mesenterio. Caractersticas del tumor: parte (incluyendo grosor); extensin alrededor del intestino, forma (polipoide, plana, ulcerada) presencia de la necrosis hemorragia, extensin a travs de la pared abdominal, compromiso de la serosa, ganglios satlites evidencia de invasin vascular, invasin de rganos adyacentes. b) 2. 3. Distancia del tumor a la lnea pectnea reflejo peritenial. Otras lesiones en el intestino y apariencia del compromiso de la mucosa, si hay o no plipos. Estimar el nmero de ganglios encontrados si parecen o no estn comprometidas, volumen de los ganglios. SECCION PARA HISTOLOGIA: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Tumor: 3 secciones. Secciones representativas del tejido conectivo subseroso grasa y masa alrededor del tumor. Otras lesiones en el intestino. Reseccin del borde proximal. Reseccin del borde distal. Reseccin del intestino entre el tumor y la lnea distal de reseccin (la mitad 0.5 cm). Apndice si estuviera incluido. Ganglios:

a) Alrededor del tumor. b) Distal del tumor. c) Proximal del tumor. d) Punto ms alto de reseccin (reas que rodean la ligadura de los vasos). 9. a) En resecciones abomino perineales. Unin ano rectal.

COLON - POLIFECTOMIA PROCEDIMIENTO: 1. 2. 3. 4. 5. 1. 2. Fijar en formol por varias horas. Medir el dimetro del tumor y longitud del tallo. Para plipos con tallo corto o sin tallo, identificar el borde de seccin y cortar longitudinalmente. Para plipos con tallo largo (1 cm ms), cortar seccin transversal cerca del margen de seccin quirrgica y cortar el plipo longitudinalmente. Si el plipo mide ms de 3 mm cortar por el lado convexo. Eliminacin del plipo, dimetro transversal y longitud del tallo. En serie o pediculado?, ulcerado?, superficie lisa o papilar ?, hay quistes al corte ?, el tallo es de aspecto normal. SECCIONES PARA HISTOLOGIA: 1. 2. Una seccin longitudinal (incluyendo el margen quirrgico) en plipos con tallo corto o sin tallo. Seccin transversal en la base del tallo (en plipos) con tallo largo (pedicuro). PANCREAS PANCREATECTOMIA Procedimiento: 1. 2. 3. Disecar ganglios con el espcimen en fresco y dividirlos de acuerdo a los grupos. Llenar el estomago y duodeno con gasa o algodn con formol. Fijar con alfileres en corcho o tablas conservando las relaciones anatmicas. DESCRIPCION:

4. 5.

Poner en recipiente y cubrir con formol toda la noche a 4C. Colocar con tina india o china el conducto biliar comn en su margen quirrgico as como el margen quirrgico pancretico es el procedimiento de Whipple.

6.

Dividir el espcimen en mitades: anterior y posterior consigue: con tijeras, cortes curvativos menos del estomago y el borde libre del duodeno, con tijeras cortar curvatura mayor por encima del pncreas, as como la cuarta porcin del duodeno, con un cuchillo largo cortar el borde peri pancretico del duodeno y el pncreas. La orientacin del ltimo corte puede mejorar controlando introduciendo un catter a travs del conducto comn biliar. Si fuera necesario fijar las dos mitades otra noche antes de proceder a diseccin.

DESCRIPCION: 1. 2. 3. Tipo de operacin: Procedimientos de Whipple, pancreoctoma total, o pancreoctoma parcial. rganos: el espcimen y sus dimensiones. Caractersticas del tumor: Compromiso de la ampolla, mucosa duodenal, estomago, conducto biliar, conducto pancretico y pncreas: porte, forma (papilar?, aplanado?, ulcerado?), color y consistencia. 4. 5. 6. Conductos biliar comn y pancretico: dilatado?, clculos?, tumor? Localizacin, nmero y apariencia de los ganglios linfticos. (Whippple: duodentomia). PANCREACTECTOMIA TOTAL Pancreatectoma total + gastrectoma parcial + duodectoma + esplenetoma. PANCREACTECTOMIA REGIONAL Pancreatectoma total + gastrectoma parcial + colecistectoma + duodectoma + esplenetoma reseccin de vena portal, con o sin colectoma transversa, meso colon, epipln y ganglios regionales. SECCIONES PARA HISTOLOGIA: 1. 2. Tumor: 3 o ms cortes. Pncreas: 3 secciones, una al margen distal quirrgico. pancreactetomia parcial + gastrectoma parcial e

3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14.

Conducto biliar comn: 2 cortes transversales, uno del margen quirrgico distal. Duodeno no comprometido: 2 cortes, uno del borde, distal de reseccin. Estomago: 2 secciones, incluyendo el borde proximal. Ganglios: Peri pancreticos (superiores e inferiores). Pancretico duodenal (anterior y posterior) Conducto biliar comn y conducto cstico. Estomago: curvatura menor. Estomago: curvatura mayor. Esplnicos. Otros grupos si estuvieran presentes (yuyunal, colnicos mediales y epiplnicos). Otros rganos si estuvieran presentes (vescula biliar, bazo, vena porta, colon, epipln).

ESTOMAGO GASTRECTOMIA POR TUMOR PROCEDIMIENTO: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Abrir el espcimen a lo largo de la curvatura mayor (a menos que la lmina este en esta zona, si as es abrir por curvatura menor). Disecar grupos ganglionares de acuerdo al diagrama y separar el espcimen. Si incluye esplemectoma disecar ganglios hiliares, medir y pesar el bazo, cortando en secciones longitudinales de 1 cm. Fijar con alfileres en tabla o corcho dejar toda la noche en formol. Tomar 2 fotos polaroid para identificar los lugares de donde se toman las secciones. Distar los mrgenes quirrgicos con tinta india o china. En general, tomar las secciones perpendiculares a la direccin de los pliegues de la mucosa.

8.

Otra forma es como sigue: Inyectar el estmago con formol (en casos de gastrectoma total) o llenado con gasa o algodn con formol (en gastrectomas parciales). Fijar toda la noche, cortar por el lado opuesto al tumor con tijeras, y el borde lateral del tumor con cuchillo largo.

DESCRIPCION: 1.- Tipo de reseccin (total o subtotal) longitud de curvatura mayor, curvatura menor y mango duodenal. 2.- Caractersticas del tumor: Localizacin, parte (incluyendo el grosor), forma (fungosa, infiltrante, ulcerada) profundidad de la invasin, presencia de compromiso de serosa, invasin de vasos, extensin en el duodeno, distancia de ambos bordes de seccin quirrgicos. 3.- Apariencia de la mucosa no neoplsica. SECCIONES PARA HISTOLOGIA: 1.- Tumor: 4 secciones a travs de la pared incluyendo al borde del tumor. 2.- Mucosa no neoplsica: parte medida del estmago: 2 secciones 3.- Borde proximal a lo largo de curvatura menor: 2 secciones. 4.- Borde proximal a lo largo de curvatura mayor: 2 secciones. 5.- Borde de seccin distal (a lo largo del piloro y duodeno si esta presente), 2 secciones. 6.- Bazo si esta presente. 7.- Pncreas siesta presente. 8.- Ganglios linfticos: a) Pilricos. b) Curvatura menor. c) Curvatura mayor. d) Epipln. e) Periesplnicos. ESTOMAGO GASTRECTOMIA POR ULCERA PROCEDIMIENTO: 1.- Examinar el espcimen en fresco.

2.- Abrir a lo largo de curvatura mayor (a menos que la seccin este en esta zona, si as fuera abrir por curvatura menor). 3.- Disecar grosor ganglionar y separar el epipln. 4.- Buscar cuidadosamente en mucosa pequeos erosiones e irregularidades, que modular mesocoros o intramurales. 5.- Fijar el rgano con alfileres en tabla o corcho, recipiente con formol, toda la noche. 6.- Tomar 2 fotos polaroid para identificar los mrgenes de done se toma las secciones. DESCRIPCION: 1.- Tipo de reseccin, longitud por curvatura mayor, curvatura menor y margen duodenal. 2.- Caractersticas de la ulcera: Localizacin, porte, forma, profundidad de penetracin, color de los bordes (planos o elevados), pliegues convergentes), presencia de grandes vasos y/o perforacin en la base de la ulcera, apariencia de la serosa (si el diagnstico clnico es ulcera y en el espcimen no se objetiva). 3.- Apariencia de la mucosa no comprometida, atrfica, edema, hemorragia, etc.

SECCIONES PARA HISTOLOGIA: 1.- Ulcera: 4 secciones. 2.- Curvatura menor: 2 secciones cortados donde el borde proximal (pintar el borde con tinta china). 3.- Curvatura mayor: 2 secciones a partir del margen proximal (pintar el borde con tinta china). 4.- Piloro y duodeno: 2 secciones, incluyendo el borde distal de reseccin. 5.- Otras lesiones si estuvieran presentes. 6.- Ganglios linfticos: hasta 3 cortes. RUTINA PROCEDIMIENTO PARA RECEPCION E IDENTIFICACION DE MUESTRAS EN EL SERVICIO DE ANATOMIA PATOLOGICA quirrgico

I.- RECEPCION DE MUESTRAS: 1.1 Biopsias 1.2 Piezas Operatorias Pequea Mediana Grande Oncolgica 1.3 Recepcin de muestras para trabajos de investigacin 2.- Verificacin de datos tales como: Apellidos, Nombres, Fecha de Nacimiento, Procedencia y Tipo de Muestra. 3.- Poner fecha y nmero de orden a la solicitud de examen. 4.- Numerar solicitud de examen y muestra. 5.- Anotar Apellidos, Nombres y procedencia en cuaderno de ingreso diario del Servicio. 6.- Poner precio y enviar al paciente a Caja para el pago respectivo. 7.En caso de ser muestra Histolgica pasa a la mesa de control, si es muestra Citolgica se procesa para su examen posterior.

II. FIJACION DE MUESTRAS: Las muestras vienen fijadas en formol; de lo contrario las fijamos en el Laboratorio en formol al 10% III. PROCESAMIENTO DE MUESTRAS 3.1 Deshidratacin: Alcohol 95% , 4 cambios. Alcohol 100% ,2 cambios 3.2 Aclaramiento: Xilol , 2 cambios 3.3 Infiltracin: Parafina, 2 cambios ( To 56-60) Esquema corto (biopsias y fragmentos pequeos de tejido) Tiempo total de procesamiento: de 3 a 4 horas Tiempo mnimo de fijacin: 3 horas 1.- enjuague brevemente en agua corriente 2.- Si es necesario, colocar en alcohol de 80% por 15-20 minutos

3.- Alcoholes al 95% ,3 cambios, por 15-20 minutos cada uno 4.- Alcohol absoluto ,2 cambios, por 15-20 minutos cada uno 5.- Xilol , 2 cambios, por 15-20 minutos cada uno 6.. Parafina, 2 cambios, por 15-20 minutos , cada uno 7.- Inclusin (confeccin de bloques) - Abrir cuidadosamente las canastillas y ponerlas en la estufa. - preparar los ngulos de metal, sobre pequeas bases de lminas de fierro, formando cubos, segn el tamao de la muestra. - Agregar la parafina en los moldes formados con los ngulos de metal y proceder a incluir el fragmento de tejido con una pinza en el centro. - Etiquetar el taco procesado con su nmero correspondiente - Retirar los tacos de parafina de los ngulos y enfriar en la refrigeradora. Esquema largo (para muestras grandes) 1.- Alcohol 95%, 4 cambios, 1 hora en cada uno. 2.- Alcohol absoluto 100%, 2 cambios, 1 hora encada uno. 3.- Xilol, 2 cambios, de 1 hora cada uno. 4.- Parafina, 2 cambios de 1 hora cada uno. 5.- Inclusin.

IV.- CORTE: 1.- Retirar los tacos de la refrigeradora. 2.- Desgastar los tacos hasta llegara la muestra usando micrtomo. 3.- Proceder al corte del tejido en micrtomo digital seleccionando 4 a 5 micras de grosor. 4.- Los cortes obtenidos se pasan por una solucin de agua destilada y alcohol (en partes iguales), para ayudar a estirar el tejido. 5.- Colocarlos a bao mara a 46C. (Flotador de tejidos). 6.- Escoger los tejidos ms delgados y completos ubicndolos en el centro de lmina porta-objetos preparadas con albmina de Mayer. 7.- Fijar las lminas en estufa por 15' a 20', para su coloracin. 8.- Sellar los bloques de parafina y archivar el orden correlativo.

COLORACION DE RUTINA DE LOS CORTES HEMATOXILINA - EOSINA 1.- DESPARAFINIZACION: Colocar las lminas en xilol durante 15 minutos. 2.- HIDRATACION: - Alcohol absoluto.2 a 3 minutos - Alcohol corriente.2 a 3 minutos - Agua corriente..5 a 8 minutos. 3.- COLORACION DEL NUCLEO: Del bao de agua pasar a hematoxilina y dejar de 3 a 5 minutos, algunas veces se requiere de ms tiempo de acuerdo al uso del colorante luego pasar a un bao de agua corriente para enjuagar por 3 minutos. 4.- DIFERENCIACION: Pasar las secciones a un bao rpido en la solucin cida (HCL al 1%), siendo suficiente sumergirla de 1 a 3 segundos, enjuagar en un bao de agua corriente para eliminar el resto de cido. 5.- AZULAMIENTO: Pasar a la solucin de amoniaco al 0.5%, siendo suficiente una sumergida, el empleo de mayor tiempo puede traer consigo el desprendimiento de las secciones histolgicas, enjuagar con agua del cao. 6.- COLORACION DE CONTRASTE: Pasar las secciones a la solucin de eosina y dejarlas de uno a tres segundos, algunas veces se emplea ms tiempo. 7.- DESHIDRATACION: - Dos alcoholes de 95 grados..1 a 2 minutos en cada alcohol. - Dos alcoholes absolutos.1 a 2 minutos en cada alcohol. 8.- ACLARAMIENTO: - Xilol..2 minutos. - Xilol..2 minutos. 9.- MONTAJE: - Limpiar bien las laminillas cubre-objetos con una gasa limpia y colocar en ellas una gota de Blsamo de Canad.

- Limpiar las lminas con la seccin hasta un milmetro de este y finalmente recogerla la laminilla, haciendo contacto con la gota de Blsamo con el centro de la seccin presionar lentamente la laminilla y limpiar con una gasa el blsamo en exceso. - Dejar secar la lmina, para su examen microscpico. COLORACIONES ESPECIALES 1.- ROJO DE CONGO (AMILOIDE) SOLUCIONES: - ROJO DE CONGO - AGUA DESTILADA 1 GR. O 0.5% EN ALCOHOL AL 50% 100 CC. 1.3 GR. 100 CC.

SOLUCION SATURADA DE CO3 Li - CARBONATO DE LITIO - AGUA DESTILADA METODO: 1.- Desparafinar e hidratar. 2.- Rojo depongo (10 30 minutos). 3.- Virar en CO3Li (15 segundos o KOH). 4.- Agua corriente (15 minutos). 5.- Hematoxilina de Harris (1 3 minutos). 6.- Diferenciar el alcohol cido al 1%. 7.- Lavar en agua corriente. 8.- Virar en agua amoniacal. 9.- Lavar en agua corriente. 10.- Deshidratar y montar. RESULTADOS: Amiloide palo de rosa o ncleos azul 2.- TRICROMICA DE MASSON: SOLUCION DE BOUIN: SOLUCION SATURADA DE ACIDO PICRICO ACUOSA75 CC. FORMOL DE 37A 40%.................................................................25 CC. ACIDO ACETICO GLACIAL..5 CC.

HEMATOXILINA DE WEIGERT

SOLUCION A: - HEMATYOXILINA - ALCOHOL DE 95 SOLUCION B: CLORURO FERRICO AL 29% ACUOSO..4 CC AGUA DESTILADA95 CC. ACIDO CLORHIDRICO CONCENTRADO.1 CC. 1 GR. 100 CC.

SOLUCION DE TRABAJO: PARTES IGUALES DE SOLUCION A Y SOLUCION B. BIEBRICK ESCARLET ACIDO FUESIN BIEBRICK ESCARLET ACUOSA AL 1%.............................................90 CC FUCSINA ACIDA ACUOSA AL 1%......................................................10 CC ACIDO ACETICO GLACIAL.1 CC SOLUCION DE ACIDO FOSFOMOLIBDICO Y FOSFOTUNGSTICO ACIDO FOSFOMOLIBDICO..5 GR. ACIDO FOSFOTUNGSTICO.5 GR. AGUA DESTILADA..200 CC. SOLUCION DE ANILINA AZUL: ANILINA AZUL..2.5 GR. ACIDO ACETICO.2 CC. AGUA DESTILADA..100 CC. VERDE CLARO: LIGHT GREEN.5 GR. AGUA DESTILADA.250 CC. ACIDO ACETICO GLACIAL2 CC. Calentar el agua, disolver el verde, enfriar y filtrar y agregar el cido. AGUA ACIDA AL 1% ACIDO ACETICO GLACIAL.1 CC. AGUA DESTILADA.100 CC. METODO: 1.- Desparafinar e hidratar. 2.- Fijar en Bouin por 1 hora a 56C o toda la noche a la temperatura de la habitacin.

3.- Enfriar y lavar en agua hasta que el color amarillo desaparezca. 4.- Enjuagar en agua destilada. 5.- Hematoxilina ferrica (10 minutos). 6.- Lavar a chorro por 10 minutos. 7.- Enjuagar en agua destilada. 8.- Biebrick escarlet por 15 minutos. 9.- Agua destilada. 10.- Acido fosfomolibdico-fosfotungstico (10 a 15 minutos). 11.- Anilina azul (5 a 10 minutos) o con la solucin verde claro (1 minuto) 12.- Agua destilada. 13,- Agua actica al 1% (3 a 5 minutos). Si se usa verde claro: diferenciar con acido fosfotungstico al 5%. 14.- Deshidratar, aclarar y montar. RESULTADOS: Ncleos de color negro, citoplasma, queratina, msculo, fibras intercelulares de color rojo, colgeno y mucus de color azul. 3.- VAN GIESON (COLAGENO): HEMATOXLINA FERRICA DE WEIGERT SOLUCION A: HEMATOXILINA F.1 GR. ALCOHOL ABSOLUTO.100 GR. SOLUCION B: CLORURO FERRICO AL 29%............................................................4 CC. AGUA DESTILADA95 CC. ACIDO CLORHIDRICO CONCENTRADO 1 GR. SOLUCION DE TRABAJO: Mezclar partes iguales de las soluciones A y B. VAN GIESON CONTRASTE: FUCSINA ACIDA AL 1%.......................................................................2.5 CC ACIDO PICNICO SOLUCION SATURADA.97.5 CC METODO: 1.- Desparafinar e hidratar.

2.- Lavar en agua destilada. 3.- Hematoxilina de WEIGERT (10 minutos). 4.- Lavar en agua destilada. 5.- Contrastar con la solucin de Van Gieson (1 a 3 minutos). 6.- Deshidratar, aclarar y montar en Blsamo. RESULTADO: Colgeno de color rojo. Msculo y epitelio cornificado de color amarillo, ncleos de color negro o azul. 4.- VERHOEFF (ELASTICO): Disolver 1 gr. de hematoxilina en 22 cc. De alcohol en prex con ayuda de calor, enfriar y filtrar, aadir 8 cc. De solucin acuosa de cloruro frrico al 10% y 8 cc. De solucin de yodo (2gr. de yodo, 4 gr. de yoduro de potasio en 100 cc. de agua destilada). Nota.- Para mejores resultados preparar la solucin algunos das antes. 5.- PAS: Fucsina bsica 2 gr. se disuelven en192 cc. De agua destilada con ebullicin se filtra y enfra y agregar 5 gr. De bisulfito de sodio y 8 cc. De cido clorhdrico concentrado. Guardar en oscuridad por 24 a 48 horas hasta que tome un color pardo, agregar 1 gr. De carbn activado, agitar y filtrar, debe quedar completamente incoloro.

ACIDO PERIODICO AL 5% (ACIDO PICNICO AL 5%) ACIDO PERIODICO..5 GR. AGUA DESTILADA100 CC. BAO SULFUROSO: METASULFITO DE SODIO AL 10%.................................................... 6 CC. ACIDO CLORHIDRICO NORMAL...5 CC. AGUA DESTILADA.100 CC. ACIDO CLORHIDRICO NORMAL PM CONC P.E. 1 36.46 36.5 1.18 1.18 9900 83.8 84 CC. 100 X 36.5 36.4 3640.0 36.5 99 GR

X -

99

1.18

Se toman 84 cc- de cido clorhdrico concentrado y amasar a 1.000 cc. De agua destilada: METODO: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. Desparafinar e hidratar. Lavar en agua destilada. Oxidar en cido peridico al 5% (5 minutos). Lavar en agua destilada. Reactivo de Schiff (30 minutos) 3 baos sulfurosos de2 minutos. Lavar en agua corriente (30 minutos). Agua destilada (5 minutos). Contrastar en Hematoxilina de Harris (30 segundos), controlar al microscopio. Lavar en agua destilada. Lavar en agua corriente (5minutos). Deshidratar, aclarar y montar en blsamo.

RESULTADOS: Amiloide de color rosado intenso. Ncleos de color azul. 6.- ZIELH NIELSEN (BK): SOLUCIONES: CARBOL FUCSINA ACIDO CARBOLICO ALCOHOL FUCSINA BASICA AGUA DESTILADA ALCOHOL ACIDO AL 1% ACIDO CLOHIDRICO CONCENTRADO ALCOHOL 70 1 CC. 99 CC. 2.5 CC. 5 CC. 0.5 GR. 50 CC.

Se disuelve al calor, se filtra y se usa.

AZUL DE METILENO AZUL DE METILENO ACIDO ACETICO GLACIAL AGUA DESTILADA CARBOL FUCSINA ALCOHOL 95 FUCSINA BASICA FENOL EN AGUA 100 CC. 10 GR. 900 CC. 0.5 GR. 0.5 CC. 100 CC.

Disolver la fucsina en el alcohol, agregar la solucin de fenol y dejar la mezcla en reposo toda la noche. ALCOHOL ACIDO AL 3% ACIDO CLOHIDRICO ALCOHOL 95 AZUL DE METILENO O LIGHT GREEN COLORANTE AGUA DESTILADA METODO: 1. Desparafinar e hidratar. 2. Zeel Nelson (5 a 10 minutos con 3 reposos). 3. Decolorar con alcohol cido hasta obtener el color rosa plido. 4. Azul de metileno o light Green (5 a 10 minutos). 5. Lavar con agua corriente. 6. Deshidratar y montar en blsamo. RESULTADOS: BACILOS ACIDO RESISTENTES GLOBULOS ROJOS OTROS ELEMENTOS 7.- ALCIAN BLUE: SOLUCIONES: ALCOHOL ACETICO AL 3% ACIDO ACETICO ALCOHOL 95 3 CC. 97 CC. (ROJO BRILLANTE). (AMARILLO-NARANJA). (AZUL PALIDO A VERDE PALIDO). 1 GR. 100 CC. 3 CC. 97 CC.

ALCIAN BLUE ALCIAN BLUE ACIDO ACETICO AL 3% NUCLEAR FAST RED Disolver 0.1 gr., de nuclear fast red en 100 cc., de sulfato de aluminio al 5% METODO: 1. Desparafinar e hidratar. 2. Agua destilada. 3. Acido actico al 3% (3 minutos). 4. Alcian blue (30 minutos). 5. Lavar en agua corriente (10 minutos). 6. Agua destilada. 7. Nuclear fast red (5 minutos). 8. Lavar con agua corriente (1 minuto). 9. Deshidratar y montar en blsamo. RESULTADOS: Mucopolisacaridos cidos (azul). Ncleos (rosado o rojo). NOTA.- Para controlar se usa el cordn umbilical. 8.- MAY GRUMUVAL GIEMSA: Disolver 0.5 gr., de Giemsa en polvo en 33 cc. De glicerina a 55C o 60C por espacio de 1 a 2 horas. A esta mezcla se le agrega 33 cc., de alcohol metlico absoluto. Para el uso, una gota de esta solucin por centmetro cbico de agua destilada. MAY GRUMUVAL: EOSINATO DE AZUL DE METILENO ALCOHOL METILICO METODO: 0.5 GR. 100 CC. con ayudadle calor, filtrar y aadir 1 gramo de timol como preservativo 0.1 GR. 100 CC.

Ajustar el pH a 2.5 filtrar y aadir un gramo de timol como preservativo.

1. Lavar bien, los cortes en agua menta. 2. MAY GRUMUVAL (15 minutos a 37C) 3. Sin lavar Giemsa R (40 minutos a 37C) 4. Lavar en agua destilada. 5. Diferenciar con agua ligeramente acida (20 cc., de agua destilada, una gota de cido actico). 6. Deshidratar con alcohol acetona partes iguales. 7. Tolueno. 8. Esencia de Bengamota. 9. Montar en blsamo. RESULTADOS: Ncleos Citoplasma Bacterias (Azul). (Rosado). (Azul).

COLORACIONES EN CITOLOGIA COLORACION DE PAPANICOLAOU I.- COMPOSICION DEL COLORANTE: 1.- Colorante nuclear: Hematoxilina de Harris. 2- Colorante Citoplasmtico: Orange G EA-36

II.- PROCEDIMIENTO DE LA COLORACION: 1.- El extendido fijado colocarlo en la rejilla transportadora y a continuacin sumergirlo en alcohol de 95C. 2.- Enjuagar en agua corriente. 3.- Hematoxilina de Harris (5 minutos). 4.- Lavar con agua corriente. 5.- Sumergir en agua cida (entrada y salida). 6.- Lavar en agua corriente. 7.- Sumergir en agua carbonatada hasta diferenciacin. 8.- Lavar con agua corriente.

9.- Pasar por alcoholes de 95C (dos veces). 10.- Orange-G (1 minuto). 11.- Pasar por alcoholes de 95C (dos veces). 12.- EA-36 (1 minuto). 13.- Pasar por alcoholes de 95C (dos veces). 14.- Alcohol absoluto (dos veces). 15.- Pasar por xilol (dos veces). 16.- Montar con blsamo de Canad. NOTA: Esta batera se coloracin debe ser renovada y filtrada cada semana con el fin de evitar la precipitacin, contaminacin y desnaturalizacin de los diferentes colorantes, enfatizndose que se debe cambiar especialmente el agua acidulada y el agua carbonatada. BLOCK CELLS Se realiza en lquidos patolgicos como derrame pleural o peritoneal, lquido asctico, contenido de un quiste, etc. TECNICA: Recoger en tubos de centrfuga alrededor de 10 ml., del lquido a estudiar. Colocarlos en la centrfuga de forma paralela y centrifugar, durante 5 minutos a 2000 revoluciones por minuto. Eliminar el lquido sobrenadante y extraer el sedimento con una pipeta capilar o una esptula de madera o una asa de platino. Extender el sedimento sobre lminas porta-objetos, (aproximadamente4 lminas), impregnadas con albmina de Mayer. Fijar con alcohol (15 minutos) aproximadamente. Secar y colorear con la coloracin de Papanicolaou. Una vez obtenidas las lminas, se repite la misma accin (centrifugado) hasta aproximadamente 50 80% del volumen del lquido en estudio, colectando el sedimento en el recipiente inicial o envaso de precipitado. Terminada la recoleccin de sedimento, se agrega el doble del volumen de ste, con formol al 10% y se deja por aproximadamente 24 horas. Transcurrido este tiempo, se procede a filtrar esta solucin, obtenindose as el precipitado, el cual es colocado en papel filtro dentro de una canastilla para muestras histolgicas, rotulado adecuadamente, para ser procesado como una muestra histolgica.

Luego de ser coloreado, con Hematoxilina Eosina, se monta y rotula y es entregado al Mdico Patlogo, junto con las 4 lminas citolgicas preparadas anteriormente. PROCEDIMIENTO DEL CONTROL MACROSCOPICO DE MUESTRAS El control macroscpico de muestras quirrgicas lo realiza el Mdico Patlogo, con la asistencia de un tcnico: El tcnico ordena las muestras rotuladas para su control de acuerdo al nmero de orden de ingreso. El tcnico prepara las canastillas y sus respectivas tapas. El Patlogo de turno realiza el control macroscpico de cada una de las muestras, dictando al tcnico la descripcin de la pieza operatoria, registrndose el tamao, forma, consistencia y color de las mismas en el. Reverso de cada orden, tomando el Patlogo los cortes representativos que crea por conveniente y colocando estos en las canastillas para su proceso. El tcnico se encarga de llenar la orden del control macroscpico de muestras quirrgicas, anotando en ella el nmero de muestra , el espcimen, el nmero de cortes que toma el Mdico Patlogo, rotulando el nmero de muestra en su respectiva canastilla, cerrando sta. Teniendo cuidado de separar las muestras crudas de las fijadas y colocando estas ltimas en la canastilla del autotecnicon. Las muestras crudas se fijan en el frasco con formol hasta el da siguiente. Anotndose en lagartilla que la muestra queda fijndose. As mismo, las muestras de los huesos que estn descalcificando (probando su textura con la ayuda de una pinza), si est descalcificado ser colocado en su canastilla con el rtulo correspondiente, pasando luego al proceso. Los huesos no descalcificados en este lapso, continuarn en la solucin de 1 a 4 das ms segn sea el caso. Una vez terminado el control se lleva las canastillas de las muestras para inicien su proceso histolgico. PREPARACION DE ALBUMINA DE MAYER Se retira la clara de los huevos que se desee tomar, se mide un contenido, se echa en un depsito, luego un contenido igual de glicerina y se agrega en el

mismo depsito, se mezcla y se filtra, est listo para usarlo si se quiere se puede agregar un poco de formol o alcanfor. PREPARACION DE SOLUCION DESCALSIFICADORA Agua Formol puro Acido ntrico 300 cc. 30 cc. 10 cc.

Dejar la pieza hasta que se ablande, lavar con agua corriente.

RUTINA DE ALMACENAMIENTO DE PIEZAS OPERATORIAS Finalizado el control o seleccin de fragmentos para el estudio histolgico de los Patlogos Se coloca todo en una repisa adecuada. Se ordena correlativamente para su fcil identificacin, cuando sea nuevamente requerido para estudio. RUTINA DE LA DEPURACION DE ESPECIMENES QUIRURGICOS Se verifica la hoja de diagnsticos realizados por los Patlogos. Verificar el Nro. Re estudio de Anatoma Patolgica. Identificar la Pieza o espcimen con el nmero correspondiente. Retirar el espcimen a una bolsa negra, para su transporte al crematorio. RUTINA DE ARCHIVO DE LAMINAS HISTOLOGICAS 1.- Secado de las lminas al medio ambiente en fuentes adecuadas 2.- Identificar los nmeros de las lminas. 3.- Archivar cada una de las lminas en forma correlativa, en cajas adecuadas. 4.- Identificar cada una de las cajas con membrete de la existencia correlativa de los nmeros de lminas que se almacena. RUTINA DE ARCHIVO DE BLOQUES DE PARAFINA 1.- Identificar cada uno de los bloques de parafina mediante el nmero correspondiente. 2.- Almacenarlos correlativamente en las cajas acondicionadas para tal fin. 3.- Rotular cada una de las cajas con referencia de la existencia correlativa de los nmeros de los bloques de parafina. RUTINA DE PREPARACION DE MATERIAL QUIRURGICO Entrega de material quirrgico para el control quirrgico a los Patlogos. Limpieza y esterilizacin del material quirrgico despus del control. RUTINA DE PROCESAMIENTO DELAMINAS HISTOLOGICAS DE

AUTOPSIAS Control de los fragmentos de la autopsia realizada por los Patlogos. Inclusin de parafina a los fragmentos.

Cortado de los bloques de parafina de las mismas. Se desparafina las lminas ya cortadas en la estufa. Coloracin de las lminas. Montaje de las lminas y etiquetado. Entrega de las lminas histolgicas al Patlogo para su estudio correspondiente. PROCESAMIENTO DE MUESTRAS CITOLOGICAS RECEPCION DE MUESTRAS: Ingreso por numeracin correlativa, apellidos, nombres, servicio y lugar de origen. FROTIS CERVICAL: La toma de muestra se realiza en un Consultorio Externo o Particular, y es recepcionado ya en lminas porta por el Servicio de Anatoma Patolgica (1 lmina). ESPUTO: Se recibe la muestra y examinamos su contenido cuidadosamente. Si hay sangre, pus o algn fragmento de tejido, tomamos una pequea cantidad y la colocamos entre 2 lminas porta, apretndolos a la vez para que se impregnen, al mismo tiempo efectuamos un movimiento de deslizamiento circular. Extender el material tan uniformemente como sea posible hasta lograr una extensin que sea tan delgada, como si se tratase de una extensin de sangre (4 lminas). LIQUIDOS ORGANICOS: Lquido pleural, asctico, sinovial, aspirado bronquial, contenidos de quiste, etc.). Se colocan los lquidos en tubos para centrifugar. Extraer la mayor cantidad posible del lquido sobre nadante en la superficie y proceder a hacer las extensiones del sedimento de la forma habitual. FIJACION DEL MATERIAL El que una extensin sea lo suficientemente buena para el citodiagnstico depende de la fijacin. El primer paso para una buena preparacin es una fijacin rpida y adecuada.

Una fijacin adecuada evita que las clulas se deformen y degeneren, ayudando para la tincin. El fijador ms frecuente es una solucin de alcohol al 95% y ter a partes iguales. DURACION DE LA FIJACION: Como mnimo son necesarios 15 minutos, pero es mejor fijar la extensin durante ms de una hora.