MANUAL DE

METODOLOGIA

PARA NUTRIENTES E OUTRAS VARIVEIS FSICAS, QUMICAS E BIOLGICAS DA GUA

Metodologias utilizadas no Laboratrio de Limnologia - DEBE - Universidade Federal de So Carlos;

JOS VALDECIR DE LUCCA (Tcnico Qumico, UFSCar) e-mail JVLUCCA@ZIPMAIL.COM.BR FONE: 0XX16-260-8322

METODOLOGIA PARA NUTRIENTES E OUTRAS VARIVEIS FSICAS, QUMICAS E BIOLGICAS

NITROGNIO
O nitrognio est sempre presente nos ecossistemas aquticos e mais abundantemente como um gs. Existem quantidades relativamente prequenas em formas combinadas de amnia, nitrato, nitrito, uria e compostos orgnicos dissolvidos (GOLDMAN & HORNE, 1983)

NITRITO (NO2-N) - Mtodo Bendschneider & Robinson (1952) - Determinao

segundo GOLTERMAN et al. (1978).
O nitrito, a forma reduzida parcialmente do nitrato, est presente na gua em quantidades insignificnates (GOLDMAN & HORNE). O nitrito em guas anxicas convertido em amnia. O nitrito como produto intermedirio da oxidao da amnia nitrato, provavelmente tenha sua produo dificultada nos ambientes onde ocorra falta de condies oxidantes. Crregos poludos podem conter at 2 mg/l de NO 2-N O nitrito pode causar um problema respiratrio pela formao de metahemoglobina, a qual reduz a capacidade de transporte de oxignio no sangue. Esta falta de oxignio nos tecidos pode produzir uma condio fatal conhecida como blue baby.

Princpio do Mtodo: Este mtodo baseia-se na reao do nitrito em meio cido com sulfanilamida e bicloridrato de n - 1 naftil etilenodiamina formando um composto colorido rseo, o qual determinado espectrofotomicamente a 543 nm.
REAGENTES: a) Sulfanilamida Dissolver 5 g de sulfanilamida em 50 ml de HCl concentrado + 300 ml de H 2O deionizada (esta soluo deve ser preparada antes de adicionar a sulfanilamida). Em seguida diluir at 500 ml de gua deionizada ( 150 ml, aproximadamente). Esta soluo estvel por vrios meses; estocar em frasco mbar na geladeira. b) Bicloridrato - N - (1-naftil) - etilenodiamida Dissolver 0,5 g de Bicloridrato - N - (1-naftil) - etilenodiamida em 500 ml de gua deionizada. Estocar em frasco mbar na geladeira. Deve-se renov-lo mensalmente ou quando se desenvolver uma cor marrom. c) Soluo Padro de Nitrito de Potssio (KNO2) a 0,05 M (0,7 mg/ml de NO2-N) Secar em estufa a 105 C durante 1 hora 2 gramas de KNO 2. Aps o resfriamento pesar 1,064 g de KNO 2 e dissolver em gua deionizada. Adicionar 1 ml de NaOH 5 N e diluir at 50 ml. Estocar em frasco escuro e em geladeira.

KNO2

K = 39,1020 N = 14,0067 O = 15,9994

39,1020 14,0067 15,9994 85,1075

85,1075 14 N-NO2 1,064 x x

= 0,175 ou 175 mg/250 ml ou 700mg/1000 ml = 0,7 mg/ml

Testar a soluo periodicamente por uma titulao de oxi-reduo, utilizando a seguinte tcnica: 10 ml da soluo de KNO2, 25 ml da soluo padronizada de KMnO4 0,1 N. Acidificar com 10 ml de soluo H2SO4 4 N. Aps 15 minutos uma quantidade conhecida de excesso de cido oxlico. Fazer a titulao com KMnO 4 0,1 N. Utilizar a soluo padro diluda 200 vezes para obter 3,5 g/l de N-NO 2. A soluo original contm 700 g/l de N-NO2. Diluir 0,5 ml da soluo padro em 100 ml de gua destilada, que ser utilizada nas diluies da curva padro. Estoque (ml) 0,25 0,5 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 Procedimento: 25 ml da amostra 0,5 ml de sulfanilamida - Agitar Repouso de 2 (mnimo) a 8 (mximo) minutos 0,5 ml de n-1 naftil etilenodiamina - Agitar Leitura a 543 nm em cubeta de 5 cm. Obs: Estvel por 2 horas. Preparar o branco (referncia) com gua deionizada CURVA PADRO - NITRITO Diluio (ml de gua Concentrao deionizada) desejada (g/l) 500 1,75 500 3,50 500 7,00 500 14,00 500 21,00 500 28,00 500 35,00

NITRATO

(NO3-N) - determinao segundo MACKERETH et al (1978)

A taxa de NO3-N para NH4-N em gua doce varivel em relao s fontes de ambas as formas de nitrognio combinado. Em reas onde as fontes naturais de NO3-N so baixas, a taxa pode aproximar em 1:1; onde ocorre de leve a moderada contaminao por despejos ou por onde h aplicao de fertilizantes nitrogenados contaminando guas, taxas na faixa de 1:10 so encontradas comumente (WETZEL, 1983). Segundo GOLDMAN & HORNE (1983) o nitrato, em contraste com outras formas nutrimentais como amnia, fosfato ou ons metlicos, move-se livremente pelo solo com as superfcies aquticas. a forma mais altamente oxidada de nitrognio e usualmente a forma mais abundante de nitrognio inorgnico combinado. O nitrato no txico nas quantidades encontradas em lagos e rios (cerca de 1 mg por litro). gua potvel padro para os humanos devem apresentar menos de cerca de 10 mg/l de NO3-N; e mesmo em altos nveis os malefcios sade provocados pelo nitrato so aparentemente pequenos. Princpio do Mtodo: O NO3-N quantitativamente reduzido a NO2-N por cdmio amalgamado (Elliot & Porter, 1971). O NO2-N assim produzido ento complexado por sulfanilamida e Bicloridrato - N - (1-naftil) - etilenodiamida, formando um composto nitrogenado altamente colorido. A quantidade de nitrito originalmente produzido dever ser deduzido do total obtido. Este mtodo foi descrito inicialmente por Morris & Reluy (1963) e modificado por Shichlend (1968) e Mackereth et al (1978). Reagentes: a. Soluo de HgCl2 a 1 % Dissolver 10 gramas de HgCl2 em 300 ml de gua deionizada. Depois de dissolvido completar para 1000 ml em balo volumtrico. Guardar em frasco mbar em temperatura ambiente. b. Cdmio metlico p grosso (fraes entre 0,5 e 2,0 mm) Limar uma poro de cdmio (Cd) P.A. com lima grossa para metais e coletar a frao que passa atravs de uma peneira com malha de 2 mm, e seja retirada por outra malha de 0,5 mm. (fraes entre 0,5 e 2,0 mm) c. Cloreto de Amnia (NH4Cl) 2,6 % - (2,6 g/100 ml) Dissolver 26 g de NH4Cl em 1000 ml de gua deionizada. Guardar em frasco de polietileno em temperatura ambiente d. Brax 2,1 % (2,1 g/100ml) Dissolver 21 g de Brax (Na2B4O7.10H2O - di Sdio tetraborato) em 1000 ml de gua deionizada

e. Soluo de Sulfanilamida Dissolver 5 g de sulfanilamida em 50 ml de HCl concentrado + 300 ml de H 2O deionizada (esta soluo deve ser preparada antes de adicionar a sulfanilamida). Em seguida diluir at 500 ml de gua deionizada ( 150 ml, aproximadamente). Esta soluo estvel por vrios meses; estocar em frasco mbar na geladeira. f. Bicloridrato - N - (1-naftil) - etilenodiamida Dissolver 0,5 g de Bicloridrato - N - (1-naftil) - etilenodiamida em 500 ml de gua deionizada. Estocar em frasco mbar na geladeira. Deve-se renov-lo mensalmente ou quando se desenvolver uma cor marrom. g. Soluo padro de Nitrato de Potssio (KNO3) 100g/ml Dissolver 0,3564 de KNO3 (seco durante uma hora a 105 C) em gua deionizada e diluir para 500 ml. Esta soluo estvel indefinidamente se no sofrer evaporao. CURVA PADRO - NITRATO Estoque Diluio (ml de gua (ml) deionizada) 500 500 500 500 500 500 500 Concentrao desejada (g/l) 10,0 20,0 40,0 80,0 100,0 200,0 400,0

0,05 0,1 0,2 0,4 0,5 1,0 2,0

Procedimento Em frascos plsticos apropriados, colocar: 0,60 g de cdmio amalgamado 10 ml de amostra 3,0 ml de soluo de cloreto de amnia 2,6 % 1,0 ml de soluo de brax 2,1 % Fechar e levar para agitar 20 minutos A seguir: Transferir para tubos de ensaio 7 ml de amostra 1 ml de sulfanilamida. Agitar (Aguardar 4 minutos) 1 ml de N - (1-naftil) - etilenodiamida Leitura no espectrofotmetro a 543 nm em cubeta de 1 cm Como amalgamar o cdmio: Trocar a soluo de NH4Cl Lavar com soluo de HgCl2 2 vezes Lavar com soluo de NH4Cl (15 ml NH4Cl completar para 40 ml com gua deionizada) 3 vezes Para reamalgamar o cdmio (aps utilizao) Retirar o cdmio dos frascos com gua deionizada (pinceta), lavando bem Lavar com soluo de HgCl2 2 vezes e na 3 deixar a soluo por 3 minutos. Lavar com soluo de NH4Cl (25 ml NH4Cl completar para 100 ml com gua deionizada) 2 vezes, deixando na 3 vez a soluo para guardar o cdmio A soluo deve cobrir todo o cdmio.

AMNIO

(N-NH4+) - determinao segundo KOROLEFF (1976)

A amnia na gua est presente como NH 4+ (ons amnio) e NH4OH no dissociado, e gerada como produto primrio final da decomposio de matria orgnica por bactrias heterotrficas (diretamente de protenas ou de outros compostos nitrogenados). Os ons amnio so muito mais reativos do que nitrato devido a sua alta energia

qumica. A importncia da amnia est na sua assimilao pelo fitoplncton com menor gasto energtico que a assimilao de nitrato, o que requer ainda presena de enzima. (WETZEL, 1983; PAYNE, 1986). A toxicidade da amnia para animais e plantas aquticas de grande importncia. O gs amnia (NH 3) dissolve muito facilmente na gua e forma hidrxido de amnia (NH 4OH), o qual dissocia produzindo amnio (NH 4+) e ons hidroxila (OH-). Em condies cidas a porcentagem de NH 4OH decresce e em condies alcalinas ela aumenta. O NH4OH no dissociado txico, mas o on NH 4+ no perigoso. A toxicidade do NH 4OH varia no somente com o pH, mas tambm com a temperatura, oxignio dissolvido, dureza e contedo de sais da gua (GOLDMAN & HORNE, 1983). Princpio do Mtodo Em soluo moderadamente alcalina (pH entre 8,0 e 11,5) o radical amnio reage com hipoclorito de sdio formando monocloramina. Este produto formado em presena de fenol e um excesso de hipoclorito catalizado por nitroprussiato inico forma o azul de indofenol, o qual obedece a lei de Beir com concentraes inferiores a 500 g/l de N-NH3. Reagentes: a. Todos os reagentes devem ser preparados em gua livre de amnia (gua bideionizada ou deionizada fervida) Koroleff recomenda o seguinte mtodo: Para cada litro de gua contido em um balo de destilao, adicionar 15 ml de soluo 0,5 N de NaOH e 1 g de H2S2O8. Ferver durante 10 minutos e ento conectar ao condensador e destilar at a obteno de um resduo de aproximadamente 150 ml. Preferivelmente utilizar um sistema fechado. O destilado recente livre de nitrognio e amnia. A gua deionizada pode ser usada, mas dever ser tratada antes de sua utilizao. Pode-se alternativamente ferver a gua deionizada durante dez minutos. Evitar contaminao por fumaa. b. Soluo de NaOH 0,5 N Dissolver 20 g de NaOH em gua deionizada livre de amnia e diluir para 1000 ml em balo volumtrico. Estocar em frasco de polietileno em temperatura ambiente. c. Reagente Fenol Dissolver 38 g de Fenol (C6H5OH), 400 mg (4 g) de nitroprussiato de sdio dihidratado (Na 2Fe(CN)5 NO. 2H2O) em 1000 ml de gua livre de amnia. O fenol pode apresentar leve colorao Estocar em frasco de vidro mbar em refrigerador bem fechado. Este reagente estvel durante 1 ano. d. Soluo de Citrato trissdico Dissolver 240 g de C6H5Na3O7 . 2H2O em aproximadamente 500 ml de gua deionizada livre de amnia. Tornar a soluo alcalina com 20 ml de NaOH 0,5 N. Adicionar algumas prolas de vidro e remover a amnia por fervura at a obteno de um volume inferior a 500 ml. Resfriar e diluir para 500 ml com gua deionizada livre de amnia. Estocar em frasco mbar fora da geladeira. e. Reagente de Hipoclorito Diluir 5,0 ml de soluo de Hipoclorito de Sdio P.A. em 95 ml de soluo de NaOH 0,5 N soluo que deve ser preparada na hora. Esta soluo dever ser padronizada frequentemente com tiossulfato de sdio para testar a quantidade de cloro disponvel. Proceder da seguinte maneira: Dissolver aproximadamente 0,5 g de KI ou NaI em 50 ml de H 2SO4 0,1 N. Adicionar 10 ml de soluo de hipoclorito e titular o iodo liberado com soluo NaS 2O3 0,1 N, de maneira usual, utilizando soluo de amido como indicador. 10 ml desta soluo de tiossulfato de sdio corresponde a 3,54 mg de cloro ativo. f. Soluo estoque de Cloreto de Amnio (10 g ~ 140 gN/ml) Secar 60 mg (0,06 g) de NH4Cl a 100 C, durante 2 horas, resfriar em dessecador, pesar 53,5 mg e dissolver em 100 ml de gua deionizada livre de amnia. Preserv-la com uma gota de clorofrmio. Manter em frasco de vidro no refrigerador. Esta soluo estvel por vrios meses. CURVA PADRO - AMNIO e N TOTAL

Estoque (ml) 0,025 0,05 0,1 0,2 0,4 0,5 1,0 2,0

Diluio (ml de gua deionizada) 500 500 500 500 500 500 500 500

Concentrao desejada (g/l) 7,0 14,0 28,0 56,0 112,0 140,0 280,0 560,0

Procedimento 35,0 ml da amostra 1,0 ml da soluo de citrato trissdico. Agitar 1,0 ml da soluo de fenol. Agitar 1,0 ml do reagente de hipoclorito. Agitar Manter no escuro ,em repouso, no mnimo durante 3 horas. Leitura a 630 nm em cubeta de 1 cm.

NITROGNIO TOTAL - Metodologia descrita em VALDERRAMA (1981)

O nitrognio total representa todas as formas de nitrognio da gua, o que inclui as formas dissolvidas (nitrito, nitrato, ons amnio, uria), inorgnicas e orgnicas (nitrognio orgnico dissolvido, aminocidos e protenas); e at um certo ponto pode indicar a produtividade do sistema. * A curva padro para leitura espectrofotomtrica a mesma efetuada para ons amnio Procedimento: 30,0 ml da amostra sem filtrar 4,0 ml de reagente de oxidao (RO). Agitar Tampar com rolha e papel alumnio Autoclavar a 1 atm, 120 C, durante 30 minutos. Esfriar Em frascos plsticos apropriados, colocar: 0,60 g de cdmio, amalgamado recentemente 10 ml de amostra autoclavada 3,0 ml de soluo de cloreto de amnia 2,6 % 1,0 ml de soluo de brax 2,1 % Fechar e levar para agitar 20 minutos (bandeja agitadora) A seguir: Transferir para tubos de ensaio 7 ml de amostra 1 ml de sulfanilamida. Agitar 1 ml de N - (1-naftil) - etilenodiamida (Aguardar 4 a 6 minutos) Leitura no espectrofotmetro a 543 nm em cubeta de 1 cm

FSFORO
O fsforo na gua ocorre em formas orgnicas e inorgnicas. A maior parte do fosfato inorgnico presente est na forma de ortofosfato (PO4-3), com menores quantidades de monofosfato (H PO4-2) e dihidrogeno fosfato (H2 PO4-). Fsforo orgnico dissolvido usualmente representa o volume do fstoro solvel total. Uma pequena frao do fsforo total comumente presente na forma coloidal com alto peso molecular. Na maioria dos ambientes aquticos, o fsforo total particulado presente em quantidades muito maiores que o fsforo solvel. (GOLDMAN & HORNE, 1983).

FOSFATO TOTAL DISSOLVIDO e FOSFATO INORGNICO

- PTD e PI - Segundo metodologia descrita em STRICKLAND & PARSONS (1960) Digesto com Persulfato de Potssio (K2S2O8) para fosfato total dissolvido. Princpio do Mtodo Em soluo cida o on ortofosfato (PO4-3) forma um complexo amarelo com o molibdato o qual reduzido a um complexo azul pelo cido ascrbico. ons antimnio so utilizados para estimular esta reduo. A sensibilidade do mtodo pode ser aumentada extraindo o complexo azul em um solvente orgnico. Reagentes: a. Soluo de Tartarato de Potssio e Antimnio (K5 C4H4O6. H2O) Dissolver 0,34 g de tartarato de antimnio e potssio em 250 ml de gua deionizada. Aquecer se necessrio. Estocar em frasco de polietileno ou vidro em temperatura ambiente, a soluo estvel por muitos meses. b. Soluo de Molibdato de Amnia ((NH4)6 Mo7O24 . 4 H2O) Dissolver 15 g de Paramolibdato P.A. em 500 ml de gua deionizada. Estocar em frasco de polietileno no escuro, em temperatura ambiente. Soluo estvel indefinidamente. c. Soluo H2SO4 140:900 Adicionar 140 ml de H2SO4 em 900 ml de gua deionizada. Estocar em frasco mbar na geladeira. d. Soluo de cido Ascrbico Dissolver 2,7 g de cido ascrbico P.A. em 50,0 ml de gua deionizada. Esta soluo deve ser preparada na hora da anlise. e. Reagente Misto (Deve-se preparar na hora) 25 ml de tartarato de antimnio e potssio (soluo a) 50 ml de molibdatode amnia (soluo b) 125 ml de H2SO4 140:900 (soluo c) 50 ml de cido ascrbico (soluo d) Obs: para 10 amostra (com rplicas) preparar apenas metade do reagente misto (12,25: 25: 62,5: 25) f. Soluo Padro Estoque de Fosfato Monobsico de Potssio (KH2PO4 40 g/ml de P-PO4-3). Dissolver 0,1757 g de KH2PO4 anidro em gua deionizada. Adicionar para preservar, 2,5 ml da soluo de H2SO4 1:1, algumas gotas de clorofrmio e diluir para 1000 ml com gua deionizada. Estocar em frasco mbar no escuro. CURVA PADRO - FSFORO Estoque Diluio (ml de gua (ml) deionizada) 0,025 200 0,05 200 0,1 200 Concentrao desejada (g/l) 5,0 10,0 20,0

0,2 0,3 0,4 0,5 1,0 Procedimentos:

200 200 200 200 200

40,0 60,0 80,0 100,0 200,0

FOSFATO TOTAL DISSOLVIDO - STRICKLAND & PARSONS (1960) O fosfato dissolvido composto pelo ortofosfato, polifosfatos, originados de detergentes sintticos, colides orgnicos ou fsforo combinado com colides absorsivos e steres-fosfatos de baixo peso molecular. O fsforo orgnico dissolvido representa usualmente o volume do fsforo total solvel. Esta frao orgnica composta por diferentes clases de compostos, embora no haja concordncia de quais sejam mais importantes, as melhores estimativas so de que dominado por vrios cidos nucleicos. Procedimento: 30 ml da amostra 3 ml de soluo de K2S2O8 Saturada Fechar com papel alumnio Autoclavar por 1 hora, 1 atm, 120 C Esfriar bem 3,0 ml de reagente misto Leitura a 882 nm em cubeta de 5 cm, aps 30 min. Estvel por 2 a 3 horas.

FOSFATO INORGNICO - STRICKLAND & PARSONS (1960) No ambiente aqutico o fosfato inorgnico apresenta-se em pequenas quantidades, constituindo uma frao do fsforo total, e sua maior parte se encontra na forma de ortofosfato (PO4-3), e em quantidades menores de fosfatos de hidrognio (HPO4-2 e H2PO4-). Procedimento: 30,0 ml da amosta 3,0 ml do reagente misto Leitura a 882 nm em cubeta de 5 cm, aps 30 min. Estvel por 2 a 3 horas. FSFORO TOTAL R.O. - De acordo com VALDERRAMA (1981) O fsforo total alm de conter as formas dissolvidas, tratadas anteriormente, apresenta as formas de fsforo particuladas no disponveis absoro imediata pelo fitoplncton, ou seja, d uma medida do contedo de todas as formas de fsforos presentes na gua. Reagentes: Reagente de Oxidao (RO) Preparar a soluo de NaOH 1M da seguinte maneira: Dissolver 40 gramas de NaOH em 1000 ml de gua deionizada. Dissolver 50 g de Persulfato de Potssio (K 2S2O3) e 30 g de cido brico (H 3BO3) em 350 ml da soluo de NaOH 1M (preparada anteriormente), completar at 1000 ml com gua deionizada. Estocar em frasco mbar em temperatura ambiente (Estvel por 6 a 8 meses). * A curva padro a mesma utilizada para o fosfato total dissolvido e fosfato inorgnico Procedimento 30,0 ml da amostra sem filtrar 4,0 ml de reagente de oxidao (RO). Agitar Tampar com rolha e papel alumnio Autoclavar a 1 atm, 120 C, durante 30 minutos. Esfriar Adicionar 3,4 ml de reagente misto. Agitar Leitura aps 30 minutos, a 882 nm, em cubeta de 5 cm.

SLICA
Existem duas maiores fontes de slica nos lagos, uma de fontes externas (entradas) e outra abaixo da zona euftica. Certas algas diatomceas liberam acima de 15 % de slica que elas absorvem; estas algas apresentam 25 a 60% do seu peso seco como slica.

SILICATO (SiO ) - De acordo com GOLTERMAN et al. (1978).

2

Princpio do Mtodo Entre pH 3 e 4 o silicato forma um complexo amarelo (cido slico molibdico) pela adio de molibdato de sdio. Este composto posteriormente reduzido do azul heteropolar de molibdnio pelo cloreto estanhoso, tornando o mtodo muito mais sensvel. a. Soluo de H2SO4 0,5 N (Deve ser preparada na hora) Dissolver 14 ml de H2SO4 em 1000 ml de gua deionizada Dependendo do cido verificar sua densidade e ttulo. Ex: d = 1,84; T = 96% = 0,96 C = d x t = 1,84 x 0,96 = 1,77 1 N 1 mol de H2SO4/l H2O 1 N mol ( 2 = n de H ionizveis) 0,5 N mol 2 ~ 0,5 N 98/2 g 2 de H2SO4/l H2O 0,5 N 24,5 g 1 ml 1, 77 g x 24,5 g ~ x = 13,84 ml 14 ml de H2SO4/l H2O b. Soluo de Molibdato de Sdio (Na2MoO4) a 5 % Dissolver 5,0 g de Na2MoO4 em 100 ml de H2SO4 0,5 N. Filtrar se necessrio. Estocar em frasco de polietileno, deixando em repouso durante 48 horas. Se uma grande quantidade de precipitado branco se formar na parede do frasco, no despresar a soluo, utilizar s o sobrenadante. c. Soluo de H2SO4 1:1 Dissolver vagarosamente 500 ml de H2SO4 P.A. em 500 ml de gua deionizada. d. Soluo de Cloreto Estanhoso (SnCl2) - Estoque Dissolver 4,0 g de SnCl2 em HCl 12 N. Elevar a temperatura at a temperatura ambiente e completar o volume at 10,0 ml com HCl 12 N. Estocar em frasco de polietileno pequeno, bem fechado, no refrigerador Usar 1,0 ml da soluo estoque de SnCl2, para 100 ml com gua deionizada. Usar imediatamente. Se acaso formar um precipitado branco, jogar fora.

Soluo Padro de Fluorsilicato de Sdio (Na2SiF6) - 100 g/ml Si-SiO2-2 Dissolver 0,6714 g de Na2SiF6 em 400 ml de gua deionizada, aquecer at completar a dissoluo. Resfriar e diluir com gua at um volume final de 1000 ml. Estocar em frasco de polietileno. CURVA PADRO - SILICATO (SiO2-2) Estoque Diluio (ml de gua Concentrao (ml) deionizada) desejada (mg/l) 100 0,5 100 1,0 100 1,5 100 2,0 100 2,5 100 3,0 100 5,0 100 10,0 100 20,0

0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 5,0 10,0 20,0

* 0,1 a 5,0 mg de Si-SiO2-2 usar SnCl2 * 5,0 a 20,0 mg de Si-SiO2-2 no usar SnCl2 Procedimento: 20,0 ml da amostra 2,0 ml de soluo de molibdato de sdio Agitar e deixar em repouso durante 15 minutos 5,0 ml de H2SO4 1:1 Agitar muito bem Leitura a 365 nm, em cubeta de 1 cm * Se a soluo ficar com a colorao AMARELA MUITO CLARA, no possivel a leitura no espectrofotmetro, ento fazer a reduo com SnCl2: Adicionar 1 ml da soluo diluda de SnCl2. A soluo apresentar colorao azul. Leitura, aps a reduo a 815 nm, em cubeta de 1cm.

Mtodo dos Mnimos Quadrados para Ajuste de Curva Padro Y = a.X + b onde Y a concentrao (g/l) e X a absorbncia (%)
a= n ( xi.yi) - xi yi n xi ( xi)
2 2

b=

1 ( yi a xi) n

n o nmero de concentraes (ou absorbncias) a serem trabalhados; a deve ser calculado primeiro, pois b depende de a.

DETERMINAO DE

CLOROFILA a e FEOFITINA

Conforme metodologia descrita em NUSH (1980) Extrao com Etanol 80 % a quente Procedimento com a amostra Filtrar determinado volume da amostra (500 ml = 0,5 l), em filtro AP-20 ou GF-C. Manter os filtros no freezer em temperatura menor que 0 C, envoltos em papel alumnio com as informaes sobre a amostra (local, data, profundidade, estao, hora, e volume filtrado). Conservar o Etanol a 80 % na geladeira. Para Etanol P.A. 95% usar 760 ml de etanol e diluir para 1000 ml. Procedimento da extrao Tirar os filtros, no mnimo 6 horas (mximo 12 horas) do freezer antes da determinao Transferir os filtros para frascos (tubos) com volume aferido Anotar tubos (no) e local, data, estao, etc., e volume filtrado em litros Colocar o filtro dobrado no tubo e 10 ml da soluo de Etanol 80% Colocar os tubos em bequer com gua (banho maria), deixar a gua atingir 75 C, mantendo durante 5 minutos (75 C) Aps isto dar choque trmico, ou seja, passar os tubos direto para gua fria Depois de resfriadas, as extraes devem ser mantidas de 6 a 24 horas em geladeira Trasferir para frascos de 10 ml com tampa (escuros ou com envoltura de papel alumnio), descartar os filtros Leitura espectrofotomtrica CLOROFILA A Ler a 665 nm, em cubeta de 1 cm, para clorofila (para o branco utilizar etanol 80% puro) Ler a 750 nm (sequencialmente), para feofitina, (zerar o espectrofotmetro novamente neste comprimento de onda com etanol) Voltar a amostra para o frasco original FEOFITINA Para determinao da feofitina colocar 0,05 ml de HCl 0,4 N (pH entre 2,6 e 2,8), aferir o pH e aps colocar o cido, agitar. Ler a 665 nm e em seguida, Ler a 750 nm Para preparar HCl 0,4 N, adicionar 3,36 ml de HCl para 100 ml da gua: HCl , D = 1,19, PM = 37 1 mol HCl 37 g 0,4 M x x = 14,8 g/l 1000 ml 14,8 g 100 ml 1,48 g %p = %V x D %p = 37 x 1,19 %p = 44,03 100% 44,03 x 3,36 ml HCl/100 ml gua para sol. 0,4 N Obs: Para HCl PM = 36,46, T = 0,37 e d = 1,19, usa-se 33,12 ml de HCl/1000ml. Clculos das concentraes de clorofila e feofitina O clculo feito utilizando-se as equaes apresentadas a seguir: Clorofila a = 27,9 x (Eb - Ea) x Vs

Feofitina = 27,9 x { (1,7 x Ea) - Eb} x Vs onde Eb = Eb" - Eb' Ea = Ea' - Ea" Vs o volume filtrado dividido pelo volume de etanol utilizado O exemplo apresentado a seguir de vrias profundidades (com rplicas) de uma determinada data no Reservatrio de Barra Bonita (SP). Notar que as maiores concentraes esto abaixo de 0,75 m. Os resultados so expressos em g/l (x 10-3 mg/l) No exemplo Vf (vol. filtrado) = 0,5 l; e Ve (vol. de etanol) = 10 ml,
Vf Ve Vs Eb Eb" V. V. (Vf/Ve) filtrado etanol (m) (litros) (ml) (Eb" - Eb') 665 nm 0.0<20 0,5 10 20 0,058 0,059 0.0<20 0,5 10 20 0,055 0,058 0,00 0,5 10 20 0,108 0,110 0,00 0,5 10 20 0,104 0,105 0,75 0,5 10 20 0,124 0,130 0,75 0,5 10 20 0,105 0,107 1,50 0,5 10 20 0,132 0,136 1,50 0,5 10 20 0,131 0,135 2,25 0,5 10 20 0,122 0,127 2,25 0,5 10 20 0,116 0,117 3,00 0,5 10 20 0,128 0,131 3,00 0,5 10 20 0,128 0,136 4,00 0,5 10 20 0,131 0,133 0,00 0,5 10 20 0,129 0,135 5,00 0,5 10 20 0,127 0,129 5,00 0,5 10 20 0,125 0,136 10,00 0,5 10 20 0,079 0,082 10,00 0,5 10 20 0,079 0,082 15,00 0,5 10 20 0,066 0,072 15,00 0,5 10 20 0,060 0,067 20,00 0,5 10 20 0,042 0,042 20,00 0,5 10 20 0,037 0,037 22,00 0,5 10 20 0,049 0,052 22,00 0,5 10 20 0,049 0,052 Note que Eb" > Ea > Eb Prof.. Ea' 665 nm acidif. 0,040 0,039 0,079 0,072 0,084 0,069 0,089 0,086 0,083 0,078 0,084 0,090 0,086 0,088 0,084 0,088 0,056 0,056 0,049 0,044 0,029 0,027 0,035 0,042 Eb' 750 nm 0,001 0,003 0,002 0,001 0,006 0,002 0,004 0,004 0,005 0,001 0,003 0,008 0,002 0,006 0,002 0,011 0,003 0,003 0,006 0,007 0,000 0,000 0,003 0,003 Ea" 750 nm acidif. 0,001 0,002 0,006 0,000 0,003 0,001 0,004 0,003 0,005 0,003 0,002 0,006 0,002 0,007 0,002 0,007 0,004 0,002 0,006 0,004 0,001 0,002 0,002 0,006 Ea Cl a
(Ea' - Ea")

Feofit. g/l 4,631 4,408 8,984 10,267 7,645 5,915 6,975 5,636 5,915 6,417 6,361 8,258 6,584 4,855 6,919 7,087 5,245 7,142 3,962 4,464 3,125 3,069 3,962 6,808

0,039 0,037 0,073 0,072 0,081 0,068 0,085 0,083 0,078 0,075 0,082 0,084 0,084 0,081 0,082 0,081 0,052 0,054 0,043 0,040 0,028 0,025 0,033 0,036

g/l 10,602 10,044 19,530 17,856 23,994 20,646 26,226 26,784 24,552 22,878 25,668 24,552 26,226 26,784 25,110 24,552 15,066 13,950 12,834 11,160 7,812 6,696 8,928 7,254

Media Media Cl a Feofit g/l g/l 10,323 4,520 18,693 9,625 22,320 6,780 26,505 6,305 23,715 6,166 25,110 7,310 26,505 5,719 24,831 7,003 14,508 6,194 11,997 4,213 7,254 8,091 3,097 5,385

OXIGNIO DISSOLVIDO (Winckler, modificado)

Segundo Golterman et al (1978)

A concentrao de oxignio dissolvido muitas vezes limitante em ambientes de gua doce. Apesar de ser mais solvel na gua que o nitrognio, o oxignio se encontra em volumes muito menores. A quantidade de OD afetada por dois fatores principais: temperatura e condutividade. Uma diminuio na temperatura acarretar um aumento na solubilidade do oxignio na gua, enquanto que uma elevao na salinidade (condutividade) acarretar uma diminuio na solubilidade do oxignio na gua. O OD, na gua, proveniente de duas fontes: difuso do ar e fotossstese de plantas aquticas. Na gua o suprimento de OD reduzido pela respirao dos animais e plantas e decomposio da matria orgnica. Principio do Mtodo Fixao do OD (na hora da coleta) Mn+2 SO4-2 e NaOH, NaI, NaNz (azida)

Mn +2 + OH - + O 2 MnO 2 + H 2 O precipitado escuro dependendo do teor

A seguir dissolver este precipitado com cido fosfrico ou sulfrico. guas poludas possuem grande quantidade de nitritos (NO2) que do interferncia.

NO 2 - + I - + H + N 2 O 2 + I 2 + 2H 2 O
O nitrito em presena de iodeto e de um meio cido, forma iodo como produto de reao Eliminao de interferncia

NaNz + H + HNz + Na + H + + HNOz + NO 2 N 2 + N 2 O + H 2 O

Estes compostos so estveis e no interferem na reao Precipitao do I2

MnO 2 + H + + I Mn +2 + I 2 + H 2 O
Obtivemos I2 atravs da adio de O2. Titulao

Na 2 S 2 O z + I 2 2NaI + Na 2 S 4 O 6

feita atravs do amido. Este em presena de iodo, fica azul Coleta A coleta de gua deve ser feita em frasco mbar de boca esmerilhada de volume aferido ( 250 ml), e durante a realizao deve-se evitar a formao de bolhas de ar dentro do frasco. Portanto recomenda-se o uso de garrafa de Van Dorn ou de Jorg para coleta da gua. Com o frasco mbar cheio, pipetar 2 ml de sol. de sulfato manganoso e 2 ml de sol. de azida sdica, fechar o frasco e agitar bem. Estvel de 24 a 48 horas. Procedimento da titulao Adicionar na amostra, antes da titulao, 2 ml de cido sulfrico PA ou 4 ml de cido fosfrico PA. Agitar e aguardar 20 minutos para proceder a titulao. Lavar a bureta de titulao com gua e soluo de tiossulfato de sdio 0,0125 N. Utilizando-se um balo de 100 ml, adicione 100 ml de amostra em erlenmeyer de 250 ml (fazer rplicas), coloque o erlenmeyer no agitador e ligue o agitador (com a barra magntica de agitao dentro do erlenmeyer). Titular com tiossulfato de sdio 0,0125 N, at que a amostra apresente uma colorao amarelo-palha, em seguida adicione 1,0 ml de soluo de amido (a amostra vai ficar escura), recomece a titular o tiossulfato aos poucos at o ponto de viragem (de azul para totalmente incolor). Ler o volume gasto de tiossulfato de sdio. Clculo

mgOD / l =

vol. gasto tiossulfato N tiossulfato 8 1000 vol. frasco - 4 vol. titulado vol. frasco

onde: Ntiosulfato = 0,0125 N Vtitulado = 100 ml 8 = equivalente qumico do oxignio 1000 = quantidade de mililitros em 1 litro 4 = nmero de ml utilizado na fixao (sulfato manganoso + azida) Padronizao do tiossulfato de sdio

100 ml de gua deionizada 5,0 ml de KIO3 0,025 Normal 1,0 ml de Azida sdica 2,0 ml de H3PO4 concentrado 1,0 ml de Amido Fazer 3 titulaes (como para a determinao de OD) e obter a mdia N1 x V1 = N2 x V2 0,125 = N2 x V2

pH e ALCALINIDADE
O pH de guas naturais varia numa taxa ampla. gua cuidadosamente destilada (ou deionizada), exposta ao ar apresenta um valor de potencial hidrogeninico prximo ou acima de 6. Sua acidez moderada devida presena de uma pequena quantidade de CO2 dissolvido, que pode combinar com a gua e formar cido carbnico, o qual ionizado levemente. A alcalinidade total das guas naturas, expressas em equivalente de CaCO 3, varia desde quase zero at algumas centenas de mg/l, e a capacidade que a gua apresenta de neutralizar cidos. As flutuaes diurnas de pH em superfcie de guas naturais podem resultar da atividade fotossinttica de algas e de outras plantas aquticas submersas. Durante as horas de luz, estas plantas utilizam o CO 2 livre e extraem algum CO2 do on bicarbonato. Dois ons bicarbonatos podem produzir um on carbonato, uma molcula de CO 2 e uma molcula de hidrognio. O pH da gua ento aumenta devido a hidrlise aumentada, mas sua alcalinidade total no aumenta, um on carbonato no pode reagir com nenhum on hidrognio. A precipitao e o estabelecimento de CaCO3 pode resultar numa perda de alcalinidade titulvel, embora geralmente esta variao da alcalinidade total despresvel, o carbonato permanecendo na soluo ou suspenso at o processo ser reversvel noite. A fotossstese termina noite, mas a respirao das plantas e dos animais continua, aumentando a concentrao de CO2, ento resulta uma diminuio do pH. O pH um fator importante para a vida das plantas e dos animais, embora geralmente no dominante. Os organismos aquticos podem ser prejudicados quando condies de poluio levam a valores de pH alm da mdia normal do seu ambiente. Mas geralmente no a mudana no pH propriamente dito, mas outras mudanas associadas que so prejudiciais para a vida aqutica. Determinao do pH e Alcalinidade Medir a condutividade da amostra (no prprio frasco) Com auxlio de balo volumtrico, adicione 100 ml de amostra em bquer e fazer rplica Calibrar o medidor de pH (potencimetro) Medir o pH Utilizando o agitador, a barra magntica, colocar amostra no bequer e introduzir o eletrodo do medidor de pH dentro da amostra. Adicione H2SO4 0,01 N na amostra, at que o pH seja igual a 4,35. Anotar o volume de cido utilizado.

Alcalinidade (meq / l) =

vol. gasto acido N acido 1000 vol. amostra titulado

onde Nacido a normalidade do cido sulfrico (0,01N) 1000 o nmero de ml em 1 litro O resultado expresso em miliequivalentes por litro (meq/l) Para converter a alcalinidade de meq/l para mg/l basta multiplicar o resultado obtido por 50, o qual o peso molecular do CaCO3, dividido pela carga do Ca (+2).

Padronizao do cido sulfrico 0,01 N Lavar a bureta com cido sulfrico a ser padronizado (3 vezes) Calibrar o potencimetro (4 e 7) Tome 100 ml de gua destilada (fazer rplicas), coloque num bquer de 250 ml e com uma pipeta adicione 5 ml de carbonato de sdio (Na2CO3 0,02 N) Ligue o potencimetro e mergulhe o eletrodo na soluo, coloque a barra magntica, ligue o agitador. Comece a adicionar cido com a bureta, aos poucos, at que o potencimetro marque 4,35. Anote o volume de cido gasto Clculo N1 x V1 = N2 x V2 0,02 x 5 = N2 x V2 onde N2 a normalidade a ser determinada e V2 o volume gasto de cido.

PRODUO PRIMRIA DO FITOPLNCTON

Para determinao da produo primria fitoplanctnica utiliza-se a metodologia descrita em VOLENWEIDER (1974), e ser baseada no mtodo das trocas gasosas. Tal metodologia consiste em determinar a concentrao de oxignio dissolvido presente na gua no incio do experimento e em frasco claro e frasco escuro aps um determinado tempo de incubao. Para as determinaes das concentraes de oxignio dissolvido (inicial, claro e escuro) utilizado o mtodo titulomtrico de Winker (modificado pela azida), conforme descrito em GOLTERMAN et al (1978). A produtividade primria a quantidade de matria orgnica acumulada pelos vegetais, durante um certo intervalo de tempo num determinado volume (ou rea). A produo primria do fitoplncton dentro de um viveiro a base de toda a cadeia alimentar, alimentando direta ou indiretamente todos os organismos dentro deste ambiente. Ela varia conforme: o perodo de luz, condies meteorolgicas (sol ou chuva), profundidade, taxa de renovao das clulas do fitoplncton, herbivoria pelo zooplncton e peixes fitoplanctfagos. A produtividade uma taxa sendo, normalmente, expressa em mgO2/m3.h ou mgC/ m3.h Determinao: Mtodo das trocas gasosas (frascos claros e escuros) Mtodo do traador radioativo carbono 14 (C14) Mtodo das trocas gasosas: Frasco claro (C), frasco escuro (E), concentrao inicial de O.D. (I) C e E - incubados por um tempo em uma dada profundidade. I - a concentrao inicial de O.D. no momento da inclubao de C e E. a medida do OD no instante t0 (inicial), e a concentrao de OD presente como resultado de: fotossntese, respirao e difuso atmosfrica (e entre camadas adjacentes). Faz-se a determinao da concentrao de O.D. dos frascos C e E aps ter passado um intervalo de tempo (normalmente 3 horas, aps incubao). C - ganho e perda de O.D. - produo (fotossntese) e consumo (respirao). a concentrao de OD, consumido (resprirao) e produzido (fotossntese) durante t (3 horas) E - perda de O.D. - consumo (respirao). o OD consumido (respirao) por produtores, consumidores e decompositores. Produtividade primria lquida = C - I Produtividade primria bruta = C - E Respirao = I - E Para converso da produo primria de mgO2/m3.h para mgC/m3.h, utiliza-se do fator de converso desenvolvido por STRICKLAND (1960): mgO2/m3.h = (mgC / m3. h) x

0,375 = (mgC / m3. h) x 0,3125 1,2

Em viveiro de larvicultura de pacam (20 x 30 m) - dia 20/12/95 Valor mdio entre superfcie e fundo, dados de Estao de Piscicultura de Trs Marias - CODEVASF: Unidade (mgO2/m3.h) (mgC/m3.h) PPL 661,43 248,04 PPB 872,91 327,34 Respirao 211,48 79,30

DUREZA TOTAL
Os ctions de clcio e magnsio so os principais responsveis pela dureza da gua, embora seja tambm influenciada pela alcalinidade, os sulfatos, os cloretos e outros compostos. A alcalinidade e a dureza esto amplamente relacionadas. Quando a dureza da gua menor ou igual a alcalinidade, a dureza de carbonato igual a dureza total (WALKER, 1978). De acordo com o grau de dureza utilizado nos pases como Estados Unidos e Canad, a dureza da gua pode variar de suave (< 50 mg/l de CaCO 3), a moderadamente suave (> 50 e < 150 mg/l), at dura (> 150 mg/l). Determinao atravs de titulometria com EDTA 100 ml da amostra 2 ml de soluo tampo (pH = 10) uma pitada de indicador Negro Ericromo T Titular com EDTA 0,02 M (de vinho para azul)

Dureza Total (mg / l de CaCO 3 ) =

onde: 100,09 o peso molecular do CaCO3 1000 o nmero de ml em 1 litro

VgastoEDTA Molalidade EDTA 100,09 1000 Vamostra

Soluo pH 10 Dissolver 64 g de Cloreto de Amnia (NH4+Cl-) em aproximadamente 200 ml de gua deionizada. Adicionar 570 ml de NaOH, e completar o volume para 1000 ml em balo volumtrico. Soluo endotrmica (coloque gua aos poucos e agite, pois aumenta de volume). Preparar na capela (txica) Soluo EDTA 0,02 M Pesar 10 g de EDTA PA (colocar na estufa 60 a 80 C, durante duas horas), em seguida Dissolver 7,44 g de EDTA PA em 1000 ml de gua deionizada. Sal - indicador Negro Ericromo T Em 100 g de NaCl (P.A. ou comercial) adicionar 0,5 g de Negro Ericromo T, misturar at homogeneizar.

MATERIAL EM SUSPENSO
Define-se por slidos totais, aquelas matrias que permanecem como resduo aps submetermos a amostra a uma temperatura de 100 a 105 C. Estes slidos totais, tambm chamamos de resduos da evaporao e so classificados como: slidos em suspenso (material em suspenso) ou slidos filtrveis, sendo que os slidos em suspenso so todos aqueles presentes na gua e que, em geral, so partculas superiores a 1 mcron. Estes

slidos em suspenso podem ser tambm classificados de acordo com sua volatilidade a 500 C. Nesta temperatura, a matria orgnica presente nos slidos em suspenso se volatiliza transformando-se em CO 2. A matria inorgnica, por sua vez permanece como cinzas, sendo chamada de slido suspenso fixo. Coleta: As amostras para se medir o material em suspenso devero ser coletadas em gales, sendo que o volume da amostra a ser filtrada varia de acordo com o local de coleta. Se a gua for residuria ou industrial, filtra-se de 50 a 100 ml, e para amostras no poludas at 1000 ml. Procedimento Queimar os filtros (AP-20) na mufla a 480C durante 1h. Esfriar no dessecador em cadinhos de porcelana. Nunca abra a mufla em temperatura acima de 200 C. Em seguida pese os filtros: utilize pina para manuse-los (Ex: Peso= 0,1300 = P1) Marcar o nmero do filtro na embalagem (previamente confeccionada para tal) Agitar bem o frasco de amostra antes de filtrar Anotar o volume filtrado, data, profundidade, local, etc. No laboratrio colocar os filtros numa estufa (se forem analizados imediatamente) se no deixar no dessecador. Tirar o filtro, esperar secar, dobre-o e guarde nas respectivas embalagens no dessecador (manter at 15 dias) com vcuo e slica. Passar os filtros para cadinhos de porcelana (marcar com lpis no 2, o nmero do filtro) Levar os filtros para estufa (deixar 24 horas a temperatura de 60C) Retirar e colocar no dessecador at que esfrie Em seguida pesar novamente (Ex: Peso= 0,1500 = P2)

(P2 - P1) 1000 = SLIDOS TOTAIS (Mat. Suspenso Total) = 0,0200 mg/l, com Vamostra = 1000 ml Vamostra
onde P1 o peso inicial do filtro, P2 e o peso do filtro+amostra, Vamostra o volume filtrado e, 1000 a transformao de g por mg Em seguida levar aos cadinhos e colocar na mufla por 1 hora a 480 C Abrir a mufla somente quanto a temperatura for menor que 200 C, e colocar novamente no dessecador Pesar novamente

(P2 - P3) 1000 = Mat. Suspenso Inorgnico = P4 Vamostra

P2 - P4 = Mat. Suspenso Orgnico DETERMINAO DE Em espectrofotmetro de absoro atmica

Cd, Cu, Pb (extrao com metil isobutilcetona)

(A0) 10 ml de amostra (acertar o pH entre 6,5 e 7,5 com H2SO4 ou NaOH) 1 ml de APDC (ditiocarbonato de pirolidina de amnio 2%) 10 ml de MIBK (metil isobutilcetona) 4 ml de gua deionizada Agitar durante 6 minutos Centrifugar por 2 minutos (Ap) 10 ml de amostra (acertar o pH entre 6,5 e 7,5 com H2SO4 ou NaOH) 1 ml de APDC (ditiocarbonato de pirolidina de amnio 2%) 10 ml de MIBK (metil isobutilcetona) 4 ml de padro estoque Agitar durante 6 minutos Centrifugar por 2 minutos

Padro estoque: 0,15 ppm de Cd, 1,5 ppm de Pb e 0,15 ppm de Cu Leitura: Cd a 228,8 nm, Pb a 283 nm e Cu a 324,7 nm. Zn leitura direta a 213,618 nm. Clculos:

0,06 AbsAmostra ( AbsAp - AbsA0) 0,06 AbsAmostra Pb (ppm) = ( AbsAp - AbsA0) 0,06 AbsAmostra Cu (ppm) = ( AbsAp - AbsA0) Cd (ppm) =

SOLUES GERAIS
SOLUO ESTOQUE TIOSSULFATO DE SDIO 0,1 N (para O.D.) Dissolver 24,82 g de tiossulfato de sdio (Na 2S2O3 . 5H2O) em aproximadamente 500 ml de gua deionizada e dilua para 1000 ml em balo volumtrico. Preserve a soluo adicionando 5 ml de clorofrmio ou 1 g de NaOH P.A. (gua livre de amnia). SOLUO DE TIOSSULFATO DE SDIO 0,025 N (para O.D.) Tomar 250 ml de soluo estoque de tiossulfato de sdio 0,1 N, dilua para 1000 ml em balo volumtrico com gua deionizada. Preserve a soluo adicionando 4 g de NaOH P.A. (gua livre de amnia). SOLUO DE TIOSSULFATO DE SDIO 0,0125 N (para O.D.) Tomar 125 ml de soluo estoque de tiossulfato de sdio 0,1 N, dilua para 1000 ml em balo volumtrico com gua deionizada (gua livre de amnia). SOLUO DE SULFATO MANGANOSO (para O.D.) Dissolver 364,0 g de sulfato manganoso (MnSO4 . H2O) em aproximadamente 500 ml de gua deionizada e dilua para 1000 ml em balo volumtrico. Aps completar o balo, filtrar a soluo com funil de vidro e filtro de papel, passando para outro balo. SOLUO DE AZIDA SDICA (para O.D.) Dissolver 400 g de hidrxido de sdio (NaOH P.A.) em aproximadamente 600 ml de gua deionizada. Deixe esfriar. Dissolver 135 g de iodeto de sdio (NaI) ou 150 g de iodeto de potssio (KI) em aproximadamente 300 ml de gua deionizada. Dissolver 10 gramas de azida sdica em aproximadamente 50 ml de gua deionizada. Aps dissolver os sais, proceda da seguinte maneira: Adicionar a soluo de NaI (ou KI) a soluo de NaOH, e em seguida adicione a soluo de azida. Aps a mistura coloque em balo de 1000 ml e complete com gua deionizada. SOLUO DE LUGOL (para fixao de fitoplncton) 200 ml de cido actico 200 ml de gua deionizada 20 g de iodeto de potssio (KI) 10 g de iodo P.A. (I2)

Dissolva o iodo no cido actico e o iodeto de potssio na gua deionizada. A seguir misture tudo. SOLUO ESTOQUE DE H2SO4 0,1 N (para Alcalinidade) Em 1000 ml de gua deionizada e fervida (livre de amnia), adionar 3 ml de cido sulfrico. SOLUO ESTOQUE DE H2SO4 0,01 N (para Alcalinidade) Em 900 ml de gua deionizada, adionar 100 ml de soluo estoque H2SO4 0,1 N. SOLUO DE AMIDO (para O.D.) Em bquer de 1000 ml, adicione 800 ml de gua deionizada, coloque na chapa e deixe ferver at comear a ebolir. A seguir tire da chapa e coloque 5 gramas de amido, coloque de volta na chapa, deixe ferver at comear a ebolir novamente. Retire da chapa e tampe o bequer com vidro de relgio, enrole com papel alumnio para proteger da luz. Deixe em repouso durante 24 horas. Em outro bquer de 1000 ml, adicione a soluo preparada anteriormente, deixando um pouco no fundo do bquer, para dissolver 1,25 g de cido acetil saliclico (AAS comercial). A seguir junte as duas solues. SOLUO ESTOQUE DE KIO3 0,1 N (para padronizao do tiossulfato de sdio) Dissolva 3,567 g de KIO 3 (seco a 105C por 2 h) em gua deionizada. Complete para 1000 ml em balo volumtrico SOLUO DE KIO3 0,025 N (para padronizao do tiossulfato de sdio) Pipetar 250 ml da soluo estoque de KIO 3 0,1 N (preparada anteriormente) e complete para 1000 ml em balo volumtrico, com gua deionizada SOLUO DE HCl 10 % (para lavagem de vidrarias) Em uma proveta de 1000 ml, adicione 900 ml de gua deionizada e 100 ml de HCl P.A. ou cido muritico. SOLUO DE NaOH 10 % (usado na lavagem de materiais utilizados para amnia) Dissolver 100 g de NaOH em 1000 ml de gua deionizada. SOLUO SULFOCRMICA Dissolver 15 g de dicromato de potssio em 100 ml de gua deionizada na chapa, a seguir retire da chapa, espere esfriar, a seguir adicione 1000 ml de H2SO4 P.A. SOLUO DE H2SO4 0,5 N Em uma proveta de 1000 ml, adicione 1000 ml de gua deionizada e 14 ml de cido sulfrico SOLUO DE Na2CO3 0,02 N Dissolver 1,06 g de carbonato de sdio (anidro a 140 C, 2 h), em 1000 ml de gua deionizada livre de amnia SOLUO ESTOQUE DE NaOH 0,1 N Pese 4,2 g de NaOH e dissolva em 400 ml de gua deionizada. Transfira a soluo para um balo volumtrico de 1000 ml. Homogenize. Afira novamente. Homogenize novamente. Esta soluo estoque aproximadamente 0,1 N.

SOLUO DE NaOH 0,02 N Transferir 200 ml de soluo estoque de NaOH 0,1 N para um balo de 1000 ml e complete com gua deionizada, homogeneizando a seguir. Determine a normalidade da soluo de NaOH 0,02 N por meio de soluo H2SO4 0,02 N, utilizando fenolftalena como indicador. Tome 50 ml da soluo de NaOH 0,02 N e introduza em erlenmeyer de 250 ml. Adicione 3 gotas de fenolftaleina e titule com H2SO4 0,02 N.

Normalidade do NaOH =
SOLUO DE NaOH 0,05 N

ml de acido 0,02 50

Transferir 500 ml de soluo estoque de NaOH 0,1 N para um balo de 1000 ml e complete com gua deionizada, homogeneizando a seguir. Determine a normalidade da soluo de NaOH 0,05 N por meio de soluo H2SO4 0,05 N, utilizando fenolftalena como indicador. SOLUO INDICADORA DE FENOLFTALENA Dissolva 5 g de fenolftalena em 500 ml de lcool etlico ou isoproplico, e complete para 1000 ml com gua deionizada. SOLUO DE KCl 1,0 N Dissolver 74,5 g de KCl em 1000 ml de gua deionizada SOLUO DE KCl 2,0 N Dissolver 149,5 g de KCl em 1000 ml de gua deionizada

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
GOLDMAN, C.R., HORNE, A.J. Limnology. New York: McGraw-Hill Book Company, 1983. 464 p. GOLTERMAN, H.L., CLYMO, R.S., OHNSTAD, M.A.M. Methods for chemical analysis of freshwater. (IBP Handbook, n. 8 2nd ed.). Oxford: Blackwell Scientific Publications, 1978. 213 p. KOROLEFF, F. Determination of nutrients. In: GRASSHOFF, K., Ed. Methods of sea water analysis. Verlag. Chemie Weinhein., 1976. p. 117-181. MACKERETH, F.J.H., HERON, J., TALLING, J.F. Water analysis: Some revised methods for limnologists. Freshwater Biological Association. Scientific Association. Kendall: Titus Wilson & Son Ltd, 1978. 117 p. NUSH, E.A. Comparison of different methods for chlorophyll and phaeopigment determination. Arch. Hydrobiol. Beih. (Ergebn. Limnol.), v. 14, p. 14-36, 1980 PAYNE, A.I. The ecology of tropical lakes and rivers. Chichester: John Wiley & Sons Ltd., 301 p. 1986. STRICKLAND, J.D.H., PARSONS, T.R. A manual of seawater analysis. Bull. Fish. Res. Board Can., v. 125, p. 1-18, 1960. STRICKLAND, J.D.H. Measuring the production of marine phytoplankton. Bull. Fish. Res. Board Can., v. 122, p. 1-172, 1960

TALLING, J.F. Primary production of freshwater microphytes. IN: COOPER, J.P. (ed.). Photosynthesis and productivity in diferent environments. Cambridge: Cambridge Univ. Press, 1975. p. 225-247. VALDERRAMA, J.C. The simultaneous analysis of total nitrogen and phosphorus in natural waters. Marc. Chem., v. 10, p. 1109-122, 1981. VOLENWEIDER, R.A. A manual on methods for measuring primary production in aquatic environments. Oxford: Blackwell Scientific Publications, 2nd ed., 1974. 225 p. (IBP Handbook n 12). WALKER, R. Water supply, treatment and distribuition. Englewood Cliffs, New Jersey: Prenctice-Hall Inc., 1978. 420 p. WETZEL, R.G. Limnology. Philadelphia: Saunders College Publishing, 1983.