ECOTOXICOLOGIA TERRESTRE-ECOTOXICIDADE AGUDA METODO DE ENSAIO COM MINHOCAS

REAGENTES E MATERIAIS Todos os reagentes utilizados devem ser de grau analtico p.a. As vidrarias novas, utilizadas no ensaio ou no cultivo dos organismos, devem ser lavadas com soluo de acido ntrico 10% ou acido clordrico 10%, gua de torneira e gua processada. A vidraria utilizada no ensaio deve ser lavada conforme segue: detergente neutro, gua de torneira, acetona, soluo de acido ntrico 10 % ou acido clordrico 10%, gua de torneira e gua processada. MATERIAIS UTILIZADOS NA EXECUO DO EXPERIMENTO: a) Areia industrial peneirada; b) Balana analtica; c) Balana semi-analitica; d) Balo volumtrico; e) Caulim; f) Esfagno modo seco, turfa ou p de casca de coco; g) Estufa de secagem h) Frasco de coleta i) Luximetro j) Medidor de pH; k) Peneiras (tamis) com abertura de malha entre 0,05 mm e 0,2 mm; l) Pipeta volumtrica ou automatica; m) Termmetro;

SUBSTRATO Para a realizao dos ensaios, solo natural ou artificial podem sem utilizados como substrato. O solo artificial pode ser preparado a partir dos componentes descritos na Tabela 1, previamente secos e misturados nas devidas propores, de forma a apresentar uma massa homognea.
Tabela 1 Componentes para preparo do solo artificial

Componente Esfagno modo, ou turfa ou p de casca de coco Caulim

Proporo (%) 10 20

Preparo Remover restos granulados Lavar com agua processada, secar e peneirar para obteno de areia com mais de 50% das partculas entre 0,05 mm e 0,2 mm de vegetais ou

Areia industrial

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CALCULO DA UMIDADE DO SUBSTRATO CONFORME A SEGUINTE FORMULA: Umidade inicial (%) = (Pu Ps)/100*100 Onde: PU a massa de 10 g do substrato; Os a massa resultante aps a secagem de PU em estufa com temperatura aproximada de 105 C por 24 horas. A umidade final requerida para a realizao do ensaio deve estar entre 35% e 45%. Caso a umidade do substrato no esteja nessa faixa, adicionar gua processada para a correo da umidade, conforme a seguinte formula: Volume de gua processa necessrio (ml) = (umidade final umidade inicial)xM/100 Onde M a massa de substrato mido por recipiente-teste, expressa em gramas (g). O substrato deve apresentar pH entre 5,5 e 7,0. A determinao do pH do solo deve ser efetuada conforme a seguir:

a) Preparar uma suspenso na proporo de 1:5 de substrato com gua processada ou soluo de cloreto de potssio (KCL) a 1 mol/L. Homogeneizar a suspenso e deixar em repouso no mnimo por 2 h e no Maximo por 24h b) Medir o pH do sobrenadante. c) Caso seja necessrio ajustar o Ph do substrato, adicionar quantidades crescentes de carbonato de clcio ate o pH atingir a faixa especifica( entre 5,5 e 7,0) na pasta. Com base na quantidade de carbonato de clcio utilizada em 50 g de pasta, calcular a quantidade proporcional desse reagente a ser adicionados na massa total do substrato ou diretamente nas replicatas das concentraes-testes.