Micologia

SUMRIO O crescimento fngico. Nutrio. Diferenciao. Condies ambientais para crescimento e tolerncia. Metabolismo. Gentica.

Maria Manuel Lopes

FFUL

Crescimento da hifa
Sabemos que o crescimento das hifas se d na regio apical que estruturalmente e funcionalmente diferente do resto da hifa Sabemos que a regio apical (tal como o resto da hifa) est envolvida por uma parede, apesar da parede ser mais fina e mais simples na estrutura do que a parede lateral madura da hifa nas regies sub-apicais Tambm sabemos que o crescimento da hifa est intimamente ligado presena de vesculas que formam a Apical Vesicular Cluster (AVC)

Esta parede rgida

S na extremidade a parede plstica e estica

Crescimento da hifa

Sabemos que as vesculas se deslocam na direco de crescimento das hifas

Quando as hifas crescem para a frente, as vesculas posicionam-se no centro do apex da hifa Movimento das vesculas para o lado esquerdo ou direito da hifa acompanhado pela alterao de direco de crescimento da hifa

Sabemos que as vesculas so muito abundantes na regio apical

Sabemos que as vesculas tm um papel fundamental no crescimento apical

Crescimento apical
Organizao da parede na regio apical

Aumento das ligaes dos componentes da parede Diminuio do citoesqueleto de actina

G M

Apex
V

Vesculas (V) derivadas do aparelho de Golgi (G) so transportadas at ao apex, talvez por sistemas mediados por microtbulos (M); a rede de actina no apex fina para promover um suporte estrutural onde a parede mais fina ou onde no existem polmeros da parede ou so muito poucos; atrs do apex, a parede progressivamente rigidificada pelos polmeros

Crescimento apical
Um modelo hipottico da organizao do trfico das vesculas numa hifa em crescimento

endossoma

vacolo RE

Spitzenkrper

mitocndria

cisterna do Spitzenkrper AG satlite

Crescimento apical
Componentes da sntese da parede na regio apical

Libertados do citosol?

activadores, inibidores enzimticos manoprotenas plasmalema

glucano sintetase

parede

Componentes libertados pelas vesculas de ligao membrana

enzimas lticas da parede, activadores das proteases citossomas (quitina sintetase) corpos multivesiculares

Libertados do citosol?

substratos parietais

Crescimento apical
As vesculas transportam transportam: :
Polmeros da parede - manoprotenas Enzimas de sntese da parede que ajudam a construir novos compostos parietais e, assim, aumentam o tamanho da parede ex: quitina sintetase, glucano sintetase Activadores das proteases Enzimas lticas da parede que ajudam a quebrar e a separar os componentes da parede ex; quitinase, -1,3-glucanase

2 modelos propostos para explicar os mecanismos de crescimento apical: MODELO 1 (Robertson, 1958) (envolvimento das enzimas lticas da parede)
De acordo com este modelo, se a hifa comea a ter capacidade de sofrer extenso na regio apical, ter de acontecer: alguma lise da parede existente sntese e incorporao de novo material parietal

Mas estes processos, devem ser finamente balanceados caso contrrio, a parede torna-se demasiado frgil ou rgida

Extenso apical (Robertson, 1958)

Envolve 2 fenmenos que ocorrem ao mesmo ritmo: - extenso da regio terminal nascente da hifa plstica e deformvel - solidificao da parede adjacente zona de crescimento
protena quitina + protena Vesculas contendo enzimas lticas ou precursores da parede movem-se atravs do citoplasma Parede at zona apical, onde se fundem com a membrana plasmtica, Membrana libertando os seus contedos na vescula contendo plasmtica parede enzimas lticas da parede As enzimas lticas libertadas na parede comeam a degradar os polmeros fibrilares

Ligaes entre os componentes quebrados

Os polmeros fibrilares esticam e comeam a separar-se uns dos outros devido turgidez e presso do citoplasma

Extenso apical (Robertson, 1958)

As enzimas sintetases e os precursores da parede constroem novas polmeros fibrilares e sintetizam compostos adicionais da parede extenses da parede

vescula contendo sintetases da parede

precursores da parede

A rea de superfcie da parede hifal aumenta. A fuso das vesculas com a membrana plasmtica assegura o aumento da rea de superfcie

Modelo steady-state para crescimento da parede (Wessels, 1990) MODELO 2 (no envolvimento das enzimas lticas da parede)
enzimas lticas NO esto envolvidas no crescimento apical regio do apex vista como VISCOELSTICA assim que novos componentes so adicionados no apex, a parede flutua para trs e para a frente a parede RIGIDIFICA medida que se formam novas ligaes nas regies atrs da zona apical Modelo consistente com a ideia original de Robertson de um apex com uma parede fina, plstica e deformvel que rigidifica atrs do apex vesculas fundindo com a membrana citoplasmtica para libertar os contedos

fluxo dos novos componentes parietais

Progressiva reduo do fluxo medida que os componentes da parede se interligam

Modelo steady-state para crescimento da parede (Wessels, 1990) MODELO 2 (no envolvimento das enzimas lticas da parede)
Como a hifa com uma parede viscoelstica resiste presso de turgor?

Tratamento da parede com citochalasina E (causa disrupo da actina) Conduz inicialmente a um aumento da taxa de extenso apical mas, a seguir, o apex incha e rebenta A regio mais frgil do apex, mais susceptvel de rebentar, no o extremo onde a actina mais densa mas nos rebordos do apex onde a actina menos densa e onde a parede no rigidificou o suficiente para compensar o fraco citoesqueleto

Como se inicia a extenso apical?

Os fungos respondem a factores ambientais
Estudos em germinao de esporos (influncia da temperatura)
Alguns fungos tm um ponto fixo de germinao denominado poro de germinao onde a parede mais fina Mas, muitos esporos so capazes de germinar a partir de qualquer ponto
Aspergillus niger Em condies normais (30C), o esporo incha por hidratao e so incorporados novos materiais de parede sobre quase toda a superfcie da clula O tubo germinativo (hifa jovem) emerge de um ponto localizado da superfcie celular, e todo o crescimento subsequente est localizado nesta regio O 1 sinal de que um apex vai emergir o desenvolvimento localizado de AVC A emergncia do tubo germinativo atravs do poro da parede devida combinao da degradao enzimtica de uma pequena regio localizada do esporo e a presso fisiolgica exercida pelo protoplasma

30C vesculas 30C tubo germinativo

novas camadas de material parietal

apical vesicular complex(AVC)

Como se inicia a extenso apical?

Os fungos respondem a factores ambientais
Estudos em germinao de esporos (influncia da temperatura)
A 44C, o esporo continua a inchar por um processo metablico activo e so incorporados novos materiais de parede sobre quase toda a superfcie da clula, produzindo uma clula gigante de parede fina O tubo germinativo emerge s se a temperatura baixar para 30C, e a seguir comea a esporular

44C vesculas 30C tubo germinativo

novas camadas de material parietal

apical vesicular complex(AVC)

Como se inicia a extenso apical?

Tropismo na germinao dos esporos
Geotrichum candidum Os esporos germinam tipicamente de um ou do outro plo mas o local de emergncia do tubo germinativo influenciado pela presena de esporos vizinhos (quando os esporos so semeados em gar e cobertos com uma lamela) Os tubos germinativos emergem sempre longe de tocar outro esporo (autotropismo negativo) devido libertao de auto-inibidores que se acumulam na zona de contacto de 2 esporos mas que podem difundir para longe das extremidades livres levando germinao naquele lugar (a-d) Por outro lado, a depleo de oxignio na zona de contacto com os esporos pode ser um factor crtico para G. candidum porque os esporos germinam sempre em direco fonte de oxignio (e) Este tropismo positivo para o oxignio pode superar o autotropismo negativo

Os fungos respondem a factores ambientais

b a

Como se inicia a extenso apical?

Os fungos respondem a factores ambientais
Tropismo das hifas
Os fungos requerem nutrientes orgnicos para o crescimento Alguns fungos exibem tropismo para os nutrientes (aminocidos) Outros fungos exibem tropismo para factores no nutricionais (metabolitos volteis, metanol, esferomonas sexuais, luz)

Num meio pobre em nutrientes, as hifas fazem uma volta de 180 em direco a um disco contendo casena ou cidos aminados

Crescimento dos fungos

O ciclo celular das leveduras
iniciao separao das clulas duplicao do spindle pole body iniciao da sntese do ADN

diviso nuclear

separao do spindle pole body

Saccharomyces cerevisiae

migrao nuclear

Crescimento de uma levedura crescimento de uma hifa Est localizado no stio da gemulao Presena de pequenas vesculas e componentes do citoesqueleto no apex do local de gemulao ou quando se forma o septo para separar a gmula da clula me

Crescimento dos fungos

Fungos filamentosos tm um ciclo celular?
Ciclo de duplicao celular
(a)-(b) Uma clula apical estende e sintetiza protoplasma, durante o crescimento apical (c) quando o volume protoplasmtico atinge um valor crtico, o ncleo divide-se e forma-se um septo no ponto da diviso nuclear e formamse 2 clulas

(d)-(e) a nova clula apical cresce repetindo o processo; a clula sub-apical, que foi isolada por um septo completo, forma uma ramificao e o protoplasma migra para esta, formando outra clula apical Formam-se dois apexs hifais a partir da hifa original e existe uma relao entre o volume de citoplasma, diviso nuclear e ramificao como nas leveduras

Basidiobiolus ranarum

Crescimento dos fungos

Ramificao das hifas
P MC As ramificaes surgem pelo desenvolvimento de novos apexs Os novo apexs podem surgir em qualquer ponto ao longo da hifa, embora se desenvolvam preferencialmente perto da hifa apical, a no ser que tenha sido destruda Podem tambm surgir imediatamente atrs de um septo porque os septos interrompem o fluxo de citoplasma a tal grau que as vesculas podem acumular-se aqui Formam-se sempre a partir de uma parede hifal madura H libertao localizada de enzimas lticas da parede mas tambm podem estar sempre presentes na parede, espera de activao CL V

Ramificao
N M

VC

Zona apical

Poro septal

RE

AG

Crescimento dos fungos

Ramificao das hifas

Quando os fungos crescem em meios pobres em nutrientes, eles formam colnias pouco ramificadas Quando os fungos crescem em meios ricos em nutrientes, eles formam colnias densamente ramificadas O fungo responde disponibilidade de nutrientes pela produo de mais ou menos ramificaes mas os apexs continuam a estender-se, arrastando citoplasma a partir das regies mais velhas Um fungo rizomrfico cresce a partir das razes jovens de uma rvore numa turfa no nutritiva (ele cresce em extenso mas ramifica pouco - estratgia de procura de nutrientes) Mas o fungo forma densas ramificaes em pontos localizados onde existem pequenos fragmentos de folhas que fornecem alimentos - estratgia de explorao de nutrientes

Crescimento fngico
Cintica de crescimento de um fungo unicelular

Curva tpica de uma cultura produzida de uma s vez

c d e Log peso seco ou n clulas

a, fase arranque b, fase exponencial ou logartmica de crescimento c, fase de desacelerao d. fase estacionria d, fase de autlise ou morte da clula

Tempo

Crescimento fngico
Cintica de crescimento de um fungo unicelular

Durante a fase exponencial, 1 clula produz 2 clulas por unidade de tempo, 2 produzem 4, 4 produzem 8 at que um nutriente essencial e o oxignio se tornam limitados ou produtos do metabolismo acumulam-se a nveis inibitrios (taxa especfica de crescimento durante a fase exponencial) max (taxa de crescimento mximo) O valor de calculado medindo o log10 do nmero de clulas (N0) ou a biomassa a cada tempo (t0) e o log10 do nmero de clulas (Nt) ou biomassa a um tempo mais tarde (t):

log10 Nt - log10 N0

2,303 (t - t0) 2,303 loge2 0,693 1,15

N0 = 103 cl/ml Nt = 105 cl/ml t = 4 h mais tarde

(log10 Nt - log10 N0) (t - t0) (5 - 3) 2,303 4

1,15

h-1

0,60 h

g = tempo de gerao de um microrganismo

Crescimento fngico
Cintica de crescimento de um fungo filamentoso

Fungo filamentoso tambm cresce exponencialmente porque tm um ciclo duplicativo: eles crescem como hipotticas unidades, 1produzindo 2num dado intervalo de tempo, 2 produzem 4 e Mas difcil manter um crescimento exponencial num fungo filamentoso porque as hifas no se separam umas das outras Numa cultura sob agitao, as colnias tendem a formar pellets esfricos com crescimento restringido s margens dos pellets porque os nutrientes e oxignio difundem muito lentamente nos pellets e os produtos do metabolismo difundem lentamente para o exterior Este problema pode ser obviado pela adio de compostos que alteram o perfil de ramificaes das hifas (pode ser desejvel em determinados processos industriais mas no noutros) Produo de cido fumrico por Rhizopus arrhizus e enzimas pptidas por Aspergillus niger = necessrio filamentos dispersos Produo de cido itacnico e cido ctrico por Aspergillus niger = prefervel crescimento em pellets

Diferenciao
Alterao regulada de um organismo de um estado para outro

Dimofismo
Leveduras e fases leveduriformes: vivem em ambientes com elevados nveis de acares solveis que podem difundir at s clulas, ou onde as clulas se possam dispersar (lquidos ou fluidos); tm pouca ou nenhuma capacidade para degradar polmeros insolveis e no tm poder de penetrao Fungos filamentosos e fases filamentosas: quase todos apresentam estas capacidades

Forma de levedura

Forma hifal

2 estratgias de crescimento diferentes adequadas a ambientes particulares

Diferenciao
Alterao regulada de um organismo de um estado para outro Dimofismo
Candida albicans: cresce como levedura nas mucosas do homem mas converte-se a hifa para invadir os tecidos do hospedeiro Beauveria: um patogneo dos insectos, penetra a cutcula do insecto sob a forma hifal mas produz clulas nicas para circular nos tecidos do hospedeiro
Forma H Patogneos humanos Histoplasma capsulatum Blastomyces dermatitidis Paracoccidioides brasiliensis Sporotrix schenckii Coccidioides immitis Candida albicans Saprfitas Mucor rouxii e outros zigomicota Patogneos das plantas Ophiostoma ulmi 20-25C 20-25C 20-25C 20-25C 20-25C soro Aerobiose Forma L ou similar 37C 37C 37C 37C 37C Nveis altos de acar Anaerobiose

Clcio Algumas fontes de nitrognio

Baixo nvel de clcio

Gaeumannomyces graminis Patogneos dos insectos Metarhizium anisopliae Beauveria bassiana Meio slido Meio slido

Colnias em gua Cultura em meio lquido Cultura em meio lquido

Diferenciao
Alterao regulada de um organismo de um estado para outro Dimofismo

Diferenas na composio da parede

M. rouxii: forma L tem mais manose do que a forma H P. brasiliensis: forma L tem (1,3)-glucano e a forma H tem (1,3)-glucano C. albicans: a forma H tem mais quitina do que a forma L H. capsulatum e B. dermatitidis: a forma H tem menos quitina do que a forma L

Diferenas nos factores reguladores e de sinalizao celular

Ophiostoma ulmi: forma H com clcio e calmodulina (protena de ligao ao clcio); caso contrrio, cresce em forma de L Nveis intracelulares altos de cAMP esto associados com crescimento na forma de L de C. albicans, Mucor spp., Histoplasma capsulatum, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis Alteraes no pH citoslico: transio H-L em C. albicans

Diferenciao
Alterao regulada de um organismo de um estado para outro Dimofismo

Diferenas na expresso de genes

Alguns polipptidos esto mais associados com a forma H e outros com a forma L Nos fungos dimrficos parece no haver nenhum caso em que um gene ou o seu produto esteja obrigatoriamente envolvido na gerao da forma da clula

Um tema unificador: VSC

A alterao da forma depende da localizao espacial das VSC A chave da morfognese pode estar ligada taxa de deslocao das VSC e outras variaes na forma e tamanho podem ocorrer se a taxa de libertao das vesculas do complexo VSC for alterada relativamente sua taxa de movimentao (Spitzenkrper exibe oscilaes no apex associadas com oscilaes na direco do crescimento, e pode dividir-se para libertar VSC filhas para uma futura ramificao) Se permanece fixa = a clula expande-se uniformemente como uma esfera Se se move rapidamente e continuamente = produz-se uma estrutura alongada, semelhante a uma hifa Se se move mais lentamente = produz-se uma clula elipsoidal Se se move para um lado da hifa = pode provocar uma curvatura

Diferenciao Dimofismo
Levedura

Hifa

Diferenciao
Estruturas de infeco das plantas

Os fungos muitas vezes penetram directamente atravs da superfcie intacta do hospedeiro Algumas vezes usam aberturas naturais que eles localizam e reconhecem atravs de sinais da superfcie do hospedeiro Em qualquer caso, a infeco precedida pela produo de estruturas especializadas de pr-penetrao

A mais simples; uma protuberncia terminal denominada apressrio se ocorre nos tubos germinativos ou hifopdio se se desenvolve nas ramificaes laterais e curtas das hifas Podem ser formadas muitas almofadas de infeco complexas se o fungo infecta um hospedeiro que oferece resistncia; neste caso o fungo penetra em vrios pontos ao p da almofada de infeco, para oprimir as defesas do hospedeiro

Diferenciao
Estruturas de infeco das plantas

Diferenciao
Estruturas de infeco das plantas

Todas estas estruturas servem para ancorar o fungo superfcie do hospedeiro, normalmente pela secreo de uma matriz mucilaginosa (enzimas como a cutinase so secretadas nesta matriz) O processo de penetrao iniciado por uma hifa estreita, denominada prego de infeco Enzimas esto envolvidas localmente para ajudar penetrao do prego atravs da parede celular do hospedeiro, mas no provocam a dissoluo generalizada Foras mecnicas so canalizadas no prego de infeco do apressrio porque a parede da superfcie superior est muito melaninizada e resiste deformao; ao contrrio, a parte inferior do apressrio tem uma parede muito fina ou talvez nenhuma, mas a substncia adesiva libertada pelo apressrio extremamente robusta e forma uma chancela em forma de anel na superfcie do hospedeiro O processo de infeco acaba quando o fungo penetra a clula do hospedeiro para formar um haustrio, uma estrutura especializada para absorver nutrientes

Diferenciao
Estruturas de infeco das plantas
Apressrio: inchao da hifa entre duas clulas adjacentes da epiderme da raiz. Estes so os locais onde as hifas primeiro penetram nas clulas da raiz exercendo presso e / ou actividade enzimtica

Diferenciao
Estruturas de infeco das plantas
Arbsculos so haustrios ramificados que se formam dentro das clulas do crtex da raiz que se parecem com pequenas rvores so formados pela repetio da ramificao dicotmica e redues na largura das hifas a partir de uma hifa inicial que termina numa proliferao de hifas muito finas so considerados o principal local de intercmbio com a planta hospedeira

Diferenciao
Os esclercios

So corpos hifais especializados envolvidos numa estrutura de sobrevivncia latente So estruturas complexas, densas, tridimensionais de mais de 1 cm, com uma zona interna claramente definida Exemplos de fungo produtor: Claviceps purpurea Formao:

Ramificaes das hifas localizadas e repetidas Adeso das hifas e anastomose das ramificaes As hifas exteriores podem cobrir-se com uma crosta e formam uma casca, enquanto o interior do esclercio diferencia-se num crtex semelhante a tecido de clulas de parede fina, melaninizadas, e uma medula central constituda por hifas com muitos nutrientes de reserva como glicognio, lpidos ou trealose

Os esclercios podem sobreviver perodos muito grandes (at anos) no solo Eles germinam em condies favorveis, quer produzindo hifas ou por produo de corpos de frutificao sexuais

Diferenciao
Translocao de rgos

Todos os fungos deslocam nutrientes nas suas hifas Mas alguns fungos produzem rgos diferenciados notveis para transporte em massa de nutrientes Dependendo da sua estrutura e modo de desenvolvimento, estas estruturas so denominadas cordes miceliais ou rizomorfos Fungos produtores:

fungos apodrecedores da madeira incluindo os patogneos apodrecedores das razes das rvores que estendem uma raiz para outra, translocando nutrientes para estabelecimento num novo local fungos ectomicorrzicos das razes das plantas, translocando carbohidratos das razes para o miclio e translocando minerais e gua para as razes

Diferenciao
Translocao de rgos

Cordes miceliais ou rizomorfos so agregados lineares de hifas paralelas podem ter um aspecto semelhante ao das razes das plantas e, frequentemente, tm funes similares so compostos por hifas amplas, vazias, envolvidas por "hifas bainha" mais estreitas desenvolvem-se geralmente em resposta ao stress de nutrientes so capazes de conduzir nutrientes a longas distncias - por exemplo, para canalizar os nutrientes para uma rede de hifas de um corpo de frutificao em desenvolvimento, ou permitir aos fungos decompositores de madeira de crescerem atravs do solo a partir de uma base alimentar estabelecida em busca de novas fontes de alimento para fungos ectomicorrzicos, tambm podem servir para canalizar as guas das zonas hmidas do solo para as razes mais prximas da superfcie do solo

Diferenciao

Reproduo assexuada
Esporangisporos Condios

Reproduo sexuada
Mating e controlo hormonal Esporos sexuais

Desenvolvimento de corpos de frutificao

Basidiocarpos Ascocarpos

Nutrio
Adaptaes fngicas para a captura de nutrientes

Crescimento apical
Necessidade de obter nutrientes empedra o caminho para o fungo crescer O apex estende-se, movendo continuamente o seu protoplasma para novas zonas de substrato e descarregando as zonas mais velhas O crescimento apical tambm confere um notvel poder de penetrao nos tecidos vivos ou noutros materias slidos (madeira)

Campos elctricos
H+
ATPase ATPase

H+

aminocido

H+ aminocido

absoro de nutrientes

H+

Durante o crescimento, as bombas de ies so mais activas atrs do apex enquanto o simporte parece ser mais activo junto ao apex Esta separao espacial explica porque as hifas geram um campo elctrico externo A absoro de nutrientes ocorre no apex que se estende continuamente ( energizada pelo transporte de ies) enquanto as bombas de ies so mais activas atrs do apex onde as mitocndrias so abundantes para fornecer o ATP necessrio actividade das bombas

Nutrio
Adaptaes fngicas para a captura de nutrientes

Secreco de enzimas
Os fungos s podem absorver pequenos nutrientes solveis (monossacridos, aminocidos, ou pptidos compostos por 2 a 3 aminocidos) A nutrio dos fungos depende da actividade de enzimas degradativas Isto impe algumas restries porque algumas enzimas so molculas muito grandes (celulases, por ex.) e no se difundem para longe da superfcie da hifa

Os fungos criam zonas localizadas de eroso de exausto de substratos insolveis (amido, celulose, etc) e as hifas podem estender-se continuamente para novas zonas de nutrientes, mais ainda do que quando crescem em substratos solveis As leveduras nunca produzem despolimerases para o amido, celulose, etc porque no tm maneira de escapar das zonas de eroso que criaram As leveduras vivem em ambientes ricos em nutrientes solveis simples (dependem de um contnuo fornecimento de nutrientes do substrato subjacente ou de correntes de gua que trazem novos nutrientes)

Nutrio
Adaptaes fngicas para a captura de nutrientes

Secreco de enzimas
O grande tamanho das molculas cria outro problema em termos da sua libertao atravs da parede da hifa, o que requeria a presena de poros de tamanho significativo A parede tem poros mas de tamanho muito inferior (estudos em leveduras) As enzimas podiam ser dobradas at ser possvel passarem atravs da parede

Estudos mais recentes mostram que: as enzimas so libertadas principalmente e, talvez exclusivamente, nas zonas de crescimento da nova parede As enzimas destinadas a serem libertadas atravs da membrana so transportadas em vesculas do AG at ao pex da hifa, onde so libertadas por exocitose e podem fluir para o exterior com os prprios componentes da parede, de acordo com o modelo de steady state Algumas destas enzimas podem alcanar a superfcie da clula e serem libertadas no ambiente exterior, enquanto outras podem ficar trancadas na parede para servir de enzimas de ligao parede

Estratgias fngicas para crescimento em polmeros insolveis

HIFA LEVEDURA

Zonas de eroso de exausto do substrato

HIFA

absoro de nutrientes

libertao de antibiticos

absoro de nutrientes

secreo de enzimas

Nutrio
Adaptaes fngicas para a captura de nutrientes

Defesa do territrio
A libertao de enzimas para degradar substratos representa um substancial investimento de recursos Este fenmeno est acoplado com alguns mecanismos de defesa do territrio Caso contrrio, qualquer organismo poderia crescer na zona de eroso do substrato, partilhando os produtos j degradados

Fungos no celulolticos que crescem em associao (como simbiontes) com fungos degradadores da celulose

3 factores podem ajudar a defender o territrio: Sntese de enzimas despolimerase regulada por mecanismos de feedback, de modo que a taxa de produo de enzima corresponde taxa de utilizao dos produtos degradados As etapas finais de quebra do polmero so realizadas por enzimas de ligao parede de modo que os monmeros mais facilmente utilizveis no esto disponveis para outros organismos Os fungos degradadores do polmero podem produzir antibiticos ou outros metabolitos supressores do crescimento

Nutrio
Os nutrientes requeridos pelos fungos

Os fungos mais comuns: sais minerais, glucose Outros exigem:

Vitaminas (tiamina, biotina) Nitrognio (no utilizam o nitrato) Esteris Ferro, cistena

Nutrio
Carbono e fontes de energia

Gama de compostos orgnicos que podem ser utilizados pelos fungos, o que no implica que todos possam us-los

a grande maioria

muitos fungos usam o amido (produzem amidase)

alguns fungos crescem em celulose usando proteases alguns fungos alguns fungos crescem em lpidos usando lipases grande nmero de fungos Candida spp. alguns fungos filamentosos (produtos do petrleo) algumas leveduras

Nutrio
Carbono e fontes de energia

Os fungos degradam a lactose a glucose e galactose pela galactosidase Crescem rapidamente custa da glucose enquanto a galactose permanece no meio (a) Quando a glucose acaba, a taxa de crescimento baixa enquanto a protena transportadora da galactose sintetizada e inserida na membrana (b) A taxa de crescimento aumenta novamente (c); aqui clivada a glucose e frutose pela invertase; ento a glucose utilizada antes da frutose

c b Log n clulas

Tempo

Nutrio
Carbono e fontes de energia

A utilizao dos acares depende das protenas transportadoras de membrana que tm uma determinada especificidade de substrato Fungos tm um transportador constitutivo da glucose que transporta, de preferncia, a glucose numa mistura de acares Na ausncia de glucose, ele transporta outros acares (baixa especificidade) A chegada destes acares conduz induo das suas protenas transportadoras especficas Os fungos no conseguem crescer em manitol ou outros acares lcoois porque eles no sintetizam as protenas necessrias ao seu transporte e estes acares so abundantes como componentes internos dos fungos, onde so produzidos e metabolizados facilmente A utilizao dos polmeros requer enzimas especficas Alguns fungos especializados degradam estruturas mais complexas como a linhina Similarmente, a queratina degradada por alguns fungos ditos queratinoflicos, incluindo os dermatfitos (fungos patognicos do homem)

Nutrio
Degradao da celulose um caso de enzimas extracelulares

Degradao da celulose polmero natural mais abundante na natureza representa 40% do material presente na parede das plantas

Complexo enzimtico (celulase) para a degradao da celulose nos fungos celobiohidrolase que cliva em unidades dissacardicas (celobiose) das extremidades no reduzidas da cadeia endo--1,4 glucanase que ataca o centro da cadeia em fragmentos mais pequenos -glucosidase ou celobiase que cliva a celobiose em glucose

Nutrio
Degradao da celulose

Celulose: -1,4 cadeias de 3.00010.000 resduos de glucose

Nutrio
Nitrognio, fsforo e ferro
Fungos necessitam de muitos minerais pelo menos vesticiais Nitrognio, fsforo e ferro: importantes para as actividades do fungo e interaces dos fungos na natureza
Nitrognio requerido em grandes quantidades e pode ser um factor limitante para o crescimento dos fungos os fungos no fixam o nitrognio atmosfrico usam outras formas de nitrognio (nitratos, aminocidos, amnio) Ferro essencial como dador e receptor de electres em processos celulares (respirao aerbia)

O ferro pode ser capturado do ambiente atravs d libertao de compostos quelantes de ferro, os siderforos Estes compostos quelam o Fe3+, so reabsorvidos atravs de uma protena de membrana especfica e o Fe3+ reduzido a Fe2+ dentro da clula, causando a sua libertao porque o siderforo tem menor afinidade para o Fe2+ do que para o Fe3+; por fim, o siderforo exportado novamente para captar mais ferro

Nutrio
Nitrognio, fsforo e ferro

Fsforo todos os organismos precisam de fsforo para produzir cidos nucleicos, ATP, fosfolpidos de membrana pouco disponvel na natureza pois existe em complexos orgnicos ou inorgnicos extremamente insolveis os fungos esto adaptados para obter fsforo de vrias maneiras:

respondem a nveis baixos de fsforo disponvel aumentando a actividade dos seus sistemas de captura de fsforo libertam fosfatases que clivam o fosfato de fontes orgnicas solubilizam fosfatos inorgnicos as suas hifas com uma grande rea de superfcie acumulam e armazenam fosfatos em excesso como polifosfatos nos vacolos

Nutrio
Fungos que no podem ser cultivados

So chamados de parasitas obrigatrios (parasitas biotrficos) Algumas espcies j crescem em cultura axnica (cultura separada dos seus hospedeiros) sob condies muito especficas Mas quando mudam para a forma saproftica, perdem a capacidade de voltar a infectar o hospedeiro

Fungos micorrzicos (zigomicota) Fungos da ferrugem (basidiomicota) Fungos do odio (ascomicota) Pseudofungos do mldio (oomicota) Todos os que formam haustrios ou estruturas equivalentes nas clulas hospedeiras

Condies ambientais de crescimento e tolerncia

Temperatura
psicrfilos (cold-loving) (poucos fungos) 0C -10C mesfilos (T moderadas, 10 - 35C) termfilos (heat-loving) (cerca de 100 fungos) - Mnima (20C),ptima (40C),mxima (50-60C) alta ou baixa temperatura pode podem fazer com que os fungos entrem em dormncia, e o regresso temperatura original pode ser insuficiente para restaurar a actividade metablica 0
Thermomyces lanuginosus Chaetomium thermophile Humicola insolens Mucor pusillus Aspergillus fumigatus Aspergillus flavus Penicillim chrysogenum Clasdoporium herbarum Botrytis cinerea Rhizopus nigricans Penicillium expansum Penicillium brevicaulis

10

20

30

40

50

60

Condies ambientais de crescimento e tolerncia Concentrao de hidrognio

os fungos alteram o pH medida que crescem o pH do meio importante porque influencia a disponibilidade de minerais, a actividade enzimtica e a funo da membrana os fungos podem crescer a um pH de 4,0-8,5 outros crescem mesmo a 3,0-9,0 pH ptimo: 5,0-7,0 alguns fungos so cido-tolerantes (leveduras que crescem no estmago dos animais e filamentosos que podem crescer a pH 2,0 Aspergillus, Penicillium e Fusarium mas, em cultura, o pH ptimo de 5,5-6,0) os verdadeiros acidoflicos so raros Acontium velatum cresce em 1,25 M cido sulfrico

Oxigenao
alguns fungos so aerbios obrigatrios muitos so aerbios facultativos alguns fungos aquticos so fermentativos obrigatrios alguns so anaerbios obrigatrios (crescem no rmen dos bovinos)

Condies ambientais de crescimento e tolerncia gua

os fungos precisam de gua para a difuso dos nutrientes nas clulas, para a libertao de enzimas extracelulares e para manter o citoplasma a maioria dos fungos exige disponibilidade de gua muito alta (humidade relativa), e rapidamente secam ou senescem em condies secas ADN desnaturado sob uma actividade de gua de 0,55 (actividade de gua da gua pura 1) alguns esporos sobrevivem por muitos anos sob uma actividade de gua acima de 0,55

Luz
luz visvel tem pouco efeito no crescimento somtico, embora cause um zoneamento de alguns fungos (zonas circulares de crescimento denso, muito ramificado, alternam com zonas de crescimento normal) luz afecta profundamente a reproduo ou outros efeitos da diferenciao (alguns fungos produzem zonas circulares de esporulao assexuada no gar, correspondendo a alteraes dirias de luz e sombra)

Condies ambientais de crescimento e tolerncia Esporulao

o ambiente tem um papel importante em determinar se um fungo forma esporos sexuais ou assexuais os esporos so formados quando um fungo esgota as suas fontes de energia uma variedade de causas ambientais podem estar envolvidas na determinao do tipo de esporo que formado para alm de factores ambientais, a presena de mating-types compatveis so necessrias para a formao de estruturas sexuais

Os factores ambientais mais importantes incluem: baixas concentraes de nutrientes ( resposta varivel) luz (envolvida na iniciao de estruturas sexuais) oxignio (esporulao requer condies aerbicas) temperatura (intervalo mais estreito)

Metabolismo
todos os fungos so de vida livre, ou seja, eles no so parasitas intracelulares obrigatrios. eles no contm clorofila e no podem sintetizar macromolculas a partir de dixido de carbono e energia proveniente da luz (so heterotrficos - vivem em matria orgnica pr-formada) para fins clnicos, os aspectos importantes do metabolismo de fungos so:
1. 2. a sntese de quitina e outros compostos envolvidos na formao da parede celular (induzem hipersensibilidade imunitria) a sntese do ergosterol para incorporao na membrana plasmtica. Isso faz com que a membrana plasmtica seja sensvel a antifngicos que bloqueiam a sua sntese ou impedem a sua incorporao na membrana a sntese de protenas nos ribossomas, que so diferentes dos encontrados em bactrias. Isso faz com que os fungos sejam imunes aos antimicrobianos dirigidos contra os ribossomas bacterianos, por exemplo, cloranfenicol a capacidade de determinados metabolitos alterarem a morfologia das leveduras e /ou serem assimilados por ela com efeitos na sua identificao a sntese de metabolitos secundrios

3.

4. 5.

Metabolismo
Metabolismo secundrio
Descreve uma gama de reaces cujos produtos no esto envolvidos no crescimento normal tm sido descritos milhares de metabolitos secundrios nos fungos a sua produo tende a ser especfica de gnero, espcie ou mesmo estirpe so produzidos no final da fase de crescimento Agentes psicotrpicos (psilocibina, psilocina e LSD) produzidos pelo gnero Psylocibe, entre outros e provocam flashbacks and bad trip Alcalides ergticos produzidos por Claviceps purpurea e causam um bloqueio alfaadrenrgico

Antibiticos penicilina cefalosporina griseofulvina

Hormonas sexuais Melanina Micotoxinas

Metabolismo secundrio Micotoxinas

Principais alimentos Amendoins, oleaginosas Gros, oleaginosas Gros, oleaginosas Amendoim, cereais Cereais Sementes Cereais Sementes mas

Toxina Aflatoxinas Esterigmatocistina Ocratoxinas Citrininas cido peniclico Rubratoxinas Tricotecenos Patulina

Fungo envolvido Aspergillus flavus A. parasiticus A. versicolor A. ochraceus Penicillium citrinum P. cyclopium Fusarium spp. A. clavatus P. expansum

Efeitos Danos hepticos Danos hepticos Danos hepticos Danos renais Toxina cardaca Hemorrgica Vrios (estrognicos, abortivos) Neurotoxina

Gentica
Estrutura e organizao do genoma fngico

Genes cromossomais

Genes mitocondriais

Plasmdeos

Genes virais

Gentica
Variao gentica
Variao no sexual: a heterocariose
(existncia de mistura de ncleos geneticamente diferentes no citoplasma da hifa) hifa)

Como aparece?
1
quando a mutao ocorre num dos ncleos da hifa e os ncleos mutados proliferam juntamente com os ncleos do tipo selvagem processo frequente mas um heterocarion estvel e funcional s se desenvolver se os ncleos geneticamente diferentes proliferarem nas clulas apicais assim, todas as novas hifas contm ambos os tipos

2
quando as hifas de 2 estirpes fundem no ponto de contacto (anastomose) Os ncleos esto presentes no citoplasma comum os ncleos geneticamente diferentes devem proliferar nas clulas apicais para se formar um heterocarion estvel e funcional

Gentica
Variao gentica
Variao no sexual: a heterocariose
(existncia de mistura de ncleos geneticamente diferentes no citoplasma da hifa) hifa)

Como acaba?
1 uma ramificao que, por acaso, contem um s gentipo, pode produzir outras ramificaes e, eventualmente, originar um sector homocaritico na colnia se o homocarion mais favorecido que o heterocarion , ento ele expandese e torna-se dominante 2 automaticamente, durante a esporulao assexuada se os esporos so mononucleados

Variao no sexual: a heterocariose

Como acaba?
Aspergillus
durante a produo de esporos uninucleados (s 1 ncleo entra na filide)

durante a ramificao das hifas

Fusarium b

condios produzidos directamente de apexs multinucleados e estes esporos podem ser hetero ou homocariticos, dependendo se a clula de origem hetero ou homocaritica

colnia originalmente melaninizada que produziu sectores no melaninizados

condios multinucleados em que todos os ncleos derivam de um nico ncleo que se divide

Neurospora c

Gentica
Variao gentica
Variao no sexual: a heterocariose

Importncia
permite que o fungo acumule mutaes que se proteja contra presses selectivas imediatas que altere a sua relao nuclear como resposta a condies predominantes uma colnia pode tornar-se um mosaico de diferentes tipos nucleares

Vegetative (somatic) compatibility groups (VCGs) = heterocariose s ocorre quando 2 estirpes do mesmo VCG so emparelhadas

Gentica
Variao no sexual: a parassexualidade

Pontecorvo props um ciclo parassexual, parassexual, envolvendo 3 etapas: muitos fungos no se reproduzem sexuadamente (Fungos Mitospricos) outros podem ser induzidos a faz-lo no laboratrio mas no na natureza existem como populaes essencialmente clonais e com reproduo assexuada alguns destes fungos podem desenvolver alternativos meios de recombinao gentica

Parassexualidade

Gentica
Variao no sexual: a parassexualidade

Homocarions (haplides)

2
Heterocarions

Haploidizao 5

3
Diplides heterozigticos

Diploidizao

4
Parental e gentipos recombinantes

Mitose

Gentica
Variao no sexual: a parassexualidade
1
Diploidizao alguns ncleos haplides no heterocarion podem fundirse para formar ncleos diplides um evento raro mas, uma vez um ncleo diplide formado, este muito estvel e divide-se para formar ncleos diplides, juntamente com os ncleos haplides normais o heterocarion consiste numa mistura de ncleos haplides originais e ncleos diplides

2
Formao do quiasma mittico os cromossomas no emparelham com um arranjo regular, eles permanecem adjacentes um ao outro criao de cromossomas que so hbridos dos cromossomas parentais atravs de trocas cromossmicas devido ao crossing-over durante as divises

3
Haploidizao ocasionalmente ocorre a no disjuno dos cromossomas de tal forma que um dos ncleos filho tem 2n+1 cromossomas e o outro tem 2n-1 cromossomas estes ncleos com mltiplos incompletos de n so denominados aleuplides (em oposio aos ncleos euplides, com n ou mltiplos completos de n) estes ncleos so instveis e podem perder cromossomas durante as subsequentes divises mittica (o ncleo 2n+1 pode reverter a 2n, enquanto o ncleo 2n-reverte progressivamente a n)

Cromossomas recombinantes

Perda aleatria de cromossomas

Ncleos com cromossomas que provm de diferentes progenitores

Meiose vs ciclo parassexual

seleco independente de cromossomas

descendncia haplide

ncleo haplide diplide Meiose ou

No disjuno ocasional durante a mitose Novas perdas de cromossomas 2n+1 2n-1 ou

etc.

ou ncleos aneuplides ou descendncia haplide

Gentica
Variao no sexual: a parassexualidade

Importncia
uma ferramenta para a biotecnologia para produzir estirpes com determinadas propriedades evento que ocorre a qualquer momento durante o crescimento somtico normal, sem as condicionantes exigidas pela reproduo sexuada apesar de ser um evento raro, existem milhares de ncleos numa mesma colnia e as hipteses do ciclo parassexual ocorrer so elevadas

Gentica
Variao gentica
Variao sexual

O sexo o maior mecanismo para a produo de recombinantes genticos