You are on page 1of 2

Reprodutibilidade: foram realizadas 20 dosagens, durante 20 dias consecutivos, obtendo-se os seguintes resultados:

Amostra 1 Amostra 2 2,24 0,07 3,07 4,28 0,13 2,97

Concentrao (mg/dL) Desvio padro (mg/dL) Coeficiente de variao (%)

Especificidade: o fosfato presente no sangue existe como fosfato livre (fosfato inorgnico) ou em combinao com um grupo orgnico (fosfato orgnico). Esse ltimo encontra-se especialmente nos eritrcitos. Estudos com a presente metodologia (Gomori modificado) demonstram que a tcnica especfica para determinao do fosfato inorgnico, quando utilizada em amostras isentas de hemlise. A precipitao das protenas permite que o reagente de molibdato em meio cido reaja somente com o fosfato inorgnico, formando um complexo fosfomolibdato, que posteriormente reduzido em meio alcalino pelo cido ascrbico. Sensibilidade: a absorvncia encontrada, de 0,013, corresponde a 0,25mg/dL de concentrao de fosfato inorgnico, quando realizados os testes em espectrofotmetro, a 660nm. A sensibilidade do sistema est diretamente relacionada com a do aparelho utilizado no laboratrio. Diluio da matriz: estudos sucessivos de diluio da matriz mostraram que no h interferncia na sensibilidade diagnstica da presente metodologia de Gomori modificado. Substncias interferentes: amostra hemolisada, vidraria com resduo de detergente, hiperbilirrubinemia ou desproteinemia podem causar valores elevados de fsforo. Certas drogas podem alterar os nveis de fsforo inorgnico. Para controle de tal interferncia, recomendado que o paciente seja questionado quanto ao uso de medicamentos. BIBLIOGRAFIA CONSULTADA Fiske, C.H. e Subarruw, Y.: Biol. chem. 66:375, 1925. Gomori, G. J.: Lab. clin. med. 27:955, 1942. Baginski, E.S.: Am. J. med. tech. 35:475, 1969.

Tibrcio, H.M.: Controle interno da qualidade analtica, 1aed. maro/1995. Doles: dados de arquivo. TERMOS E CONDIES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO As garantias do fabricante ao consumidor seguem estritamente as relacionadas na Lei no 8.078, de 11 de setembro de 1.990 - Cdigo de Defesa do Consumidor. Os reagentes que compem este sistema para diagnstico so garantidos na sua performance, reprodutibilidade e qualidade at a data de vencimento. Os produtos que apresentarem problemas tcnicos comprovados sero substitudos, sem nus para o consumidor. Doles Reag. Equip. para Laboratrios Ltda. CNPJ: 01.085.513/0001-05 Rodovia BR 153, Km 493, Lt.07 Chcara Retiro, Conjunto Palmares. CEP: 74775-027 Goinia - GO Brasil e-mail: doles@doles.com.br M.S.: no 10231810026 Reviso: 11 (05/2011)

FOSFATO

BIOQUMICA CLNICA

FINALIDADE ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DOS Sistema colorimtrico para determinao do REAGENTES cido Ascrbico: armazenar temperatura fsforo inorgnico. de 20-30oC. Estvel at a data de vencimento Somente para uso diagnstico in vitro. indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. PRINCPIO O fsforo inorgnico reage com molibdato em meio cido Ascrbico 0,084M - soluo de uso: cido, formando um complexo fosfomolibdato. A armazenar em frasco ombar, ao abrigo da luz, adio de uma soluo alcalina permite que esse sob refrigerao (2-8 C). Estvel por 1 ano aps complexo seja reduzido pelo cido Ascrbico, dando sua reconstituio, obedecidas as condies de origem a um novo complexo fosfomolibdato de cor preparo e armazenamento. Reagente molibdato:armazenar temperatura azul. Paralelamente, as protenas anteriormente de 20-30oC. Estvel at a data de vencimento precipitadas se dissolvem. indicada no rtulo do frasco, obedecidas as PARTICULARIDADES DO SISTEMA Fosfato Doles mtodo prtico, de alta preciso, para dosagem do fsforo inorgnico. Baseia-se numa simplificao das tcnicas de Gomori e Baginski. Os reagentes so estveis. Utiliza-se 100L de soro e o tempo total gasto inferior a 5 minutos. METODOLOGIA Gomori modificado. REAGENTES cido Ascrbico: frasco contendo 2g de cido Ascrbico. Aps reconstituio, tem-se uma soluo 0,084M de cido Ascrbico. Reagente molibdato : soluo 0,018M de Molibdato de Amnio em cido Sulfrico 1,5M. Soluo alcalina:soluo 16M de Monoetanolamina. Soluo padro 5mg/dL: soluo aquosa contendo 5mg/dL de fsforo. APRESENTAO cido Ascrbico Reagente molibdato Soluo alcalina Soluo padro 5mg/dL NMERO DE TESTES 90 testes condies de armazenamento. Soluo alcalina: armazenar temperatura de 20-30oC. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. Soluo padro 5mg/dL : armazenar temperatura de 20-30oC. Aps aberto conservar entre 2-8C. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento.

CUIDADOS E PRECAUES COM O USO DOS REAGENTES Todos os reagentes so somente para uso diagnstico in vitro. Seu manuseio deve ser cuidadoso, evitando-se contato com pele e mucosas. Os reagentes contm material custico. Caso ocorra contaminao acidental, lavar a rea afetada em gua corrente. O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendose aos critrios de biossegurana estabelecidos pelo laboratrio, de acordo com as normas locais, estaduais ou federais.
Observar ainda a simbologia

2x 2g constante nos rtulos do produto: Irritante Corrosivo 1 x 90mL 1 x 45mL AMOSTRA 1 x 3mL Soro, plasma (colhido com heparina), urina, lquido amnitico. Estvel por 2 dias, temperatura de 20-30 oC, ou 7 dias, entre 2-8oC. Se congelada (20oC negativos), a amostra permanece estvel por 3 meses. EQUIPAMENTOS E MATERIAIS NECESSRIOS O sangue deve ser colhido com o mnimo de estase. Separar imediatamente o soro ou plasma NO FORNECIDOS (mximo 1 hora). Espectrofotmetro ou fotocolormetro capaz Evitar hemlise, pois o fsforo inorgnico de medir a absorvncia em 660nm ou filtro encontra-se sete vezes mais concentrado nos vermelho. eritrcitos do que no plasma. Alm disso, a Tubos de ensaio. hemoglobina interfere na reao. Pipetas graduadas. A amostra urinria dever ser coletada durante 24 Pipetas semiautomticas 100L. horas. Separar uma parte dessa amostra (20mL) Frasco mbar com capacidade para 150mL. e acidificar com cido clordrico at atingir pH 2-3. Todas as amostras biolgicas devem Cronmetro. ser consideradas como potencialmente Ponteiras descartveis. infectantes. gua deionizada.

4/4

SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goinia) SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)

SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goinia) SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)

1/4

PROCEDIMENTO TCNICO Preparo do cido Ascrbico 0,084M (soluo de uso): Dissolver o contedo (p) de um frasco de cido Ascrbico em 130mL de gua deionizada. Guardar em frasco mbar, identificando com o rtulo anexo. Armazenar temperatura de 2-8oC. Permanece estvel por 1 ano aps sua reconstituio. A presena de precipitado na soluo de uso no implica em deteriorao da mesma. Se preciso, agitar antes de usar. Identificar 3 tubos de ensaio com B (branco), T (teste) e P (padro). Proceder como segue:
cido Ascrbico 0,084M (uso)

3mL
-

3mL 100L
-

3mL
-

Amostra Soluo padro Reagente molibdato

100L

1mL

1mL 1mL

As protenas se precipitam. Deixar repousar durante 1 minuto.

A curva de calibrao demonstra a linearidade da reao at uma determinada concentrao, na qual pode ser determinado um fator de calibrao (F), de acordo com a Lei de Beer. A reao linear at 12mg/dL (ver curva acima). Obtendo-se valores mais elevados, dilui-se a amostra com soluo fisiolgica e procede-se nova dosagem. Multiplicar o valor encontrado pelo fator de diluio. O kit de Fosfato Doles possui padro no intervalo de linearidade da metodologia adotada. O laboratrio deve realizar o ensaio com o padro que acompanha o kit e calcular seu fator de calibrao (F), de acordo com o exemplo estabelecido nos clculos. O fator deve ser refeito periodicamente e a cada lote do produto. Os padres utilizados na montagem da curva foram ajustados tendo como referncia: Calibrador Roche, lote T 1237A, trabalhandose com o Sistema Cobas Mira plus. CLCULOS
absorvncia teste Fosfato (mg/dL) = absorvncia padro Exemplo: (T) = 0,255 x 5

URINA
vol. urinrio 24 hs (mL) Fosfato/urina 24hs = fosfato (mg/dL) x

100

Exemplo: (F) = 19,2 Vol. urinrio 24 hs = 1.500mL Diluio da amostra = 1:20 Leitura: Teste = 0,105

VALORES DE REFERNCIA recomendado que cada laboratrio estabelea sua prpria faixa de valores de referncia na populao atendida. Como orientao, sugerimos os seguintes valores: Soro Recm-nascidos Crianas Adultos Urina

Fosfato (mg/dL) = absorvncia teste x F x 20 = Fosfato (mg/dL) = 0,105 x 19,2 x 20 = 40,3 1500
Fosfato/urina 24 hs = 40,3 x = 604,5mg fosfato/urina 24hs

3,5 - 8,6mg/dL 3,0 - 7,0mg/dL 2,5 - 4,5mg/dL

350 - 1000mg fsforo/urina 24 hs

100

A excreo de fsforo na urina est diretamente relacionada com a ingesto de fosfatos. SIGNIFICADO CLNICO A causa mais frequente de hiperfosfatemia a insuficincia renal. Outras condies incluem: hipoparatireoidismo, hipervitaminose D, fraturas sseas em consolidao, leso muscular grave, aumento da ingesto de fosfato durante terapia com laxativos contendo fosfatos. A hipofosfatemia est presente nas deficincias de vitamina D, hiperparatireoidismo, sndrome de Fanconi, hiperinsulinismo e alcoolismo crnico. CARACTERSTICAS DO SISTEMA Foram realizados 44 testes em amostras cujos teores de Fosfato situavam-se no intervalo de 1,6 a 6,8mg/dL. Esses ensaios foram realizados em paralelo com uma metodologia de referncia. A comparao do kit Fosfato Doles (Y) com a metodologia acima mencionada (X) deu origem seguinte equao de regresso linear: Y= 0,14 + 1,007X, sendo o coeficiente de correlao 0,99. Testes de recuperao, realizados com adio de quantidades conhecidas de fosfatos em 8 amostras de soros com teores diversos de fosfato, mostraram recuperao mdia entre 97,5 a 102,5%. O erro da mdia foi de 1,26%. Repetitividade: foram realizadas 20 dosagens sucessivas, com 2 amostras, obtendo-se os seguintes resultados:

EXPRESSO DOS RESULTADOS EM UNIDADES S.I. Fosfato (mmol/L) = fosfato (mg/dL) x 0,323 Exemplo: Fosfato 4,0mg/dL = 0,323 x 4,0 = 1,29mmol/L LIMITAES DO SISTEMA Para se obter timo desempenho do sistema, necessrio que o procedimento tcnico seja rigorosamente seguido conforme instrues de uso. Qualquer alterao poder levar resultados errneos. Laxativos contendo Fosfato de Sdio podem aumentar os nveis de fosfato srico. Algumas drogas, como manitol e vitamina D em excesso, podem elevar os nveis de fosfato. Amostra hemolisada, vidraria com resduo de detergente, hiperbilirrubinemia ou desproteinemia podem ser causa de valores falsamente elevados de fsforo. CONTROLE DE QUALIDADE DO SISTEMA 1.A limpeza e a secagem adequada do material a ser utilizado so de fundamental importncia para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. 2.A gua utilizada na limpeza do material, no preparo dos reagentes e na dosagem, deve ser de boa qualidade. 3.Colunas deionizadoras saturadas liberam ons diversos, aminas e agentes oxidantes, que deterioram os reagentes. 4.As pipetagens devem ser precisas. 5.Usar somente gua deionizada para dosagem de ons. 6.O uso de soro controle de referncia deve ser uma prtica rotineira do laboratrio. Recomenda-se utilizar um soro controle com valor na faixa de normalidade (soro controle N - Doles) e outro soro controle de valor elevado (soro controle P - Doles) .

Soluo alcalina

0,5mL 0,5mL 0,5mL

Agitar e deixar repousar por 2 minutos. Ler as absorvncias do T (teste) e P (padro), ajustando o zero com o B (branco) , em espectrofotmetro ou fotocolormetro, em 660nm ou filtro vermelho . A cor final permanece estvel por 15 minutos. URINA 1.Coletar urina de 24 horas. 2.Acidificar uma amostra de urina com cido clordrico at atingir pH 2-3. 3.Diluir a urina 1:20 e proceder de maneira idntica ao soro, multiplicando o resultado encontrado pelo fator de diluio. CURVA DE CALIBRAO

(P) = 0,260

0,255 Fosfato (mg/dL) = x 5 = 4,9 0,260 Como a reao segue estritamente a lei de Beer, basta a determinao de um fator (F) para clculo dos resultados. 5 Fator (F) = absorvncia P Fosfato (mg/dL) = absorvncia teste x F

Padro Absorvncia

Conc. (mg/dL)

1 2 3 4 5 6 7

0.000 0.132 0.260 0.393 0.512 0.615 0.720

0 2.5 5 7.5 10 12 15

Para a obteno do fator (F), recomenda-se dosar em triplicata o padro, ler as absorvncias e tirar a mdia aritmtica das mesmas. Exemplo: Padro : 0,260; 0,259; 0,261 Teste : 0,255 0,260 + 0,259 + 0,261 Mdia aritmtica= = 0,260 3 5 Fator (F) = = 19,2 0,260 Fosfato (mg/dL) = 0,255 x 19,2 = 4,9

Obs.: No utilizar esta curva para determinar o resultado de seu ensaio. A curva de calibrao a representao grfica da relao entre os valores das absorvncias com os valores das concentraes de um conjunto de solues padro.

Amostra 1 Amostra 2 2,56 0,04 1,63 4,83 0,06 1,30

Concentrao (mg/dL) Desvio padro (mg/dL) Coeficiente de variao (%)


2/4

SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goinia) SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)

SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goinia) SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)

3/4

You might also like