Esterilizao

Rita de Cassia Siqueira Curto Valle

Esterilizao
Operao que tem por finalidade remover ou destruir todas as formas de vida existentes no meio, ar ou equipamentos. de fundamental importncia para o sucesso de muitos tipos de bioprocesso. Grau de esterilizao varia conforme o processo

ESTERILIZAO X processo
Totalmente dispensvel
Tratamento biolgico de resduos

Processos pouco exigentes

Fermentao alcolica Produo de leveduras de panificao Produo de vinagre

Processos altamente exigentes

Produo de antibiticos, vitaminas e enzimas

contaminao
Perda da produtividade Produo de compostos que dificultem ou impeam a recuperao do produto de fermentao Degradao de produto Perda de $$$$$$$

Controle da contaminao
Usar inculo puro Esterelizar o meio Esterelizar o fermentador Esterelizar todo material a ser adicionado no processo Esterelizar o ar Manter condies asspticas durante todo processo.

Tcnicas de esterilizao
Esterilizao fsica Calor seco Calor mido Filtrao (ar) Ultrafiltrao (acima de 10000 rpm) Radiaes UV Ultrasons
Lquidos ou gases autoclaves Estufas flambagem

Esterilizao qumica

Algumas indicaes de esterilizao

Reatores bioqumicos e tubagens Equipamento destinado ao processamento de produtos de fermentao (bombas, filtros, centrifugas, colunas cromatogrficas) Material laboratrio Meios de Cultura
calor hmido ou agentes qumicos autoclaves, fornos, radiaes calor mido, filtrao em membranas vapor saturado

Algumas indicaes de esterilizao

Ar do processo fermentativo
filtrao

Embalagens
radiao gama, calor mido Agentes qumicos

Mecanismos de esterilizao
O mecanismo letal varia conforme o processo de esterilizao empregado Calor seco
processo oxidativo Tempo e temperatura altos Indicado quando o material no pode receber umidade Estufas

Mecanismos de esterilizao
Calor mido
Desnaturao de protenas celulares Fuso dos lipdios da membrana celular Morte das clulas exponencial Maior temperatura menor o tempo Prefervel

pelo seu alto contedo de calor por unidade de peso ou de volume cede facilmente calor a uma temperatura constante e controlvel; fcil produo e distribuio temperatura final do equipamento podem ser controladas.

Mecanismos de esterilizao
Radiao
Atuam sobre protenas e cidos nuclicos se manifesta uma inibio do poder de multiplicao dos mo.

Mecanismos de esterilizao
Qumico
Inativar ou bloquear enzimas essenciais para a sobrevivncia do mo. Oxidao Alteraes de DNA (propionolactona, cido nitroso) Realizada a temperatura ambiente afetado por
tempo de contato, temperatura, pH, matria orgnica, Estabilidade ao oxignio umidade

Mecanismos de esterilizao
Qumico

detergentes, Lquidos

Gases e vapores

cidos e lcalis, glutaraldedo, formaldedo, Iodfors, cido peractico oznio, brometo de metila, formaldedo, -propionolactona, xido de etileno, cido peractico

Esterilizao dos bioreatores vazios

Injeo de vapor

Esterilizao dos bioreatores com meio de cultura

Durante o processo o meio de cultura deve ser agitado 1- fazer circular vapor pela serpentina at temperatura 96-97C; vlvulas, filtros, tubagens so esterilizados por vapor fluente 2- injeo de vapor diretamente no meio de cultura at aos 100C Reactor fechado at 121C e 1 atm.

Esterilizao dos biorreatores com meio de cultura

3- a injeo direta pode ento ser cortada e controlada a temperatura e presso atravs da serpentina 4- O arrefecimento conseguido com circulao de gua.

Variveis da esterilizao
Microrganismo
Populao microbiana contaminante Caractersticas do mo.

Calor
Tempo e temperatura

Qumico
Tempo de contato

Tempo de esterilizao
Depende: Presena de slidos (conduz a uma transferncia de calor mais lenta) Volume utilizado Nmero inicial de clulas contaminantes; Nmero final de clulas aceitveis; Microrganismo alvo.

Esterilizao
Contnua Descontnua

Esterilizao descontnua
3 10 5 9 8 6 8 7 1 vapor 2 gua fria 3 ar comprimido 4 dreno 5 ladro 6 termmetro 7 manmetro 8 sangrador 9 vlvula de segurana 10 vlvula de exausto 1 Esquema de uma autoclave

Esterilizao descontnua
Composta de 3 etapas
I - Aquecimento II - Tempo de esterilizao III - Resfriamento
Temperaturas letais
Termfilos Mesfilos Psicrfilos

Curvas de esterilizao descontnua

Temperaturas de crescimento
Termfilos Mesfilos Psicrfilos

A morte dos mo. Se d a partir do momento que a temperatura seja superior ao mnimo letal

Esterilizao descontnua
Vantagens
Fcil controle das variveis Pode-se esterilizar meios particulados e slidos Baixo custo do equipamento Baixo risco de recontaminao Pode-se esterilizar equipamentos no mesmo processo

Maior tempo em temperaturas superiores 100C

Esterilizao descontnua
Desvantagens
Maior tempo em temperaturas superiores 100C Maior consume energtico Maior tempo improdutivo

Esterilizao contnua
Utiliza trocador de calor a placas

Trocador de calor a placas

Temperatura de esterilizao: 130 165 C

Curvas de esterilizao contnua

Esterilizao contnua
Vantagens
Atua com fluido de resfriamento Aumento de a temp. quase instantneo Tempos de aquecimento e resfriame so rpidos Sofre um resfriamento gradual at chegar ao fermentador O tempo de residncia = tempo de esterilizao Pequenas perdas Fcil automao Fcil ampliao de escala

CINTICA DE DESTRUIO MICROBIANA PELO CALOR

Velocidade de destruio depende:
tipo de microrganismo
espcie Clulas vegetativas ou Esporuladas

Idade da cultura Caractersticas do meio

pH slidos em suspenso

Temperatura

CINTICA DE DESTRUIO MICROBIANA PELO CALOR

A taxa de clulas vivas diminui com o tempo (T>Tletal) Reao de primeira ordem -dN/dt = N - K.N
Onde: N = Nmero de microrganismos viveis presentes no meio t = Tempo de esterilizao K = constante de velocidade de reao
Taxa especifica de crescimento Taxa especifica de morte

= velocidade especfica de crescimento

CINTICA DE DESTRUIO MICROBIANA PELO CALOR

-dN/dt = N - K.N Nt/N0 = e -K.t Ou ln Nt/N0 = -K . t K tambem e denominado constante de velocidade de destruicao e para um determinado mo. em determinado meio depende apenas de T. N0 = nmero de microrganismos viveis Nt = Nmero de microrganismos viveis aps tempo t

-dN/dt = - K.N

CINTICA DE DESTRUIO MICROBIANA PELO CALO

-dN/dt = K.N

graficando
Nt/N0 = e -K.t ln Nt/N0 = -K . t

Nt/N0

ln Nt/N0

tempo

tempo

CINTICA DE DESTRUIO MICROBIANA PELO CALOR

Numero de organismos vivos (N) aps um tempo t a uma temperatura T.

CINTICA DE DESTRUIO MICROBIANA PELO CALOR A dependncia de k com a T e dada pela equao de Arrhenius: k = A e-E/RT A = constante emprica R = Constante universal dos gases E = energia de ativao de destruio do mo. -Um pequeno aumento na temperatura tem mais efeito em quem tem E maior.

CINTICA DE DESTRUIO MICROBIANA PELO CALOR k = A e-E/RT

CINTICA DE DESTRUIO MICROBIANA PELO CALOR

esporos de Bacillus stearothermophilus pH 7 temp. 105C

ln Nt/N0 = -K . t
T (min) 25 50 100 200 250 N 8,5 .104 3,5.104 6,0.103 2,0.102 40

lnN= 12,1626-0,0341.t

CINTICA DE DESTRUIO MICROBIANA PELO CALOR

Tempo de esterilizao decimal

Tempo necessrio para reduzir o n de microrganismos a 1/10 do valor inicial = destruir 90% dos microrganismos vivos existentes
T=cte Mo = cte

CINTICA DE DESTRUIO MICROBIANA PELO CALOR

Tempo de esterilizao decimal

ln Nt/N0 = -K . t

Como D se refere destruio decimal quando N=0,1 N0 D=2,303/K

fazendo t = D

Constante de resistncia trmica - Z

O valor "z" corresponde ao intervalo da temperatura que ocasiona uma variao de 10 vezes no valor D. numericamente igual ao numero de graus necessrio para a curva de resistncia trmica atravessar um ciclo logaritmo.

Constante de resistncia trmica - Z

Quando se aumenta a temperatura do processo em 1 valor Z, o tempo do processo diminudo em 1 ciclo logaritmo ou 10 vezes. Ex. Um produto processado a 118C/15 min. E o valor Z do mo. alvo 8C, se aumentarmos a temperatura para 126C o tempo equivalente ser de 1,5 minutos

Valor F
o tempo, em minutos, que designa o tratamento trmico equivalente em relao temperatura de referncia

Dref = valor D a 121C N0 = numero inicial de mo. N = nmero final de mo.

exemplos
Os seguintes dados foram obtidos a partir de um experimento de resistncia trmica conduzido com uma suspenso de esporos 112C. Determine o D deste mo.
Tempo (min) 0 4 8 12 sobreviventes 106 1,1 x 105 1,2 x 104 1,2 x 103

exemplos
O tempo de reduo decimal D para uma suspenso de esporos foi medida a diferentes temperaturas como segue
Temperatura (C) 104 107 110 113 116 D (min) 27,5 14,5 7,5 4 2,2

Calculo do tempo de esterilizao

Ex. um produto submetido a 115C e o mo. Alvo apresenta Z=10C TDT= 3,9 minutos