1 Deteco simultnea de diuron e hexazinona em gua de fonte de abastecimento na rea rural da Microbacia Hidrogrfica do Crrego Rico, Jaboticabal (SP)

Fernanda de R. Pinto a*, Laudicia G. Lopes b, Carolina de F. Sampaio a, Anderson S. Malta a, Luiz A. do Amaral a

Faculdade de Cincias Agrrias e Veterinrias (FCAV), Universidade Estadual

Paulista, Via de Acesso Prof. Paulo Donato Catellane, s/n, 14884-900 , Jaboticabal, Brasil. f_rezendevet@yahoo.com.br, biologia.carol@yahoo.com.br, andersonmalta@hotmail.com, lamaral@fcav.unesp.br
b

Servio Autnomo de gua e Esgoto de Jaboticabal (SAAEJ), Rua Monte Alto, 345,

14871-570, Jaboticabal, Brasil: laudiceia_lopes@globo.com

* Autor para correspondncia: + 55 16 3209 2646. f_rezendevet@yahoo.com.br

Palavras-chave: gua subterrnea, cromatografia gasosa, herbicida

Ttulo abreviado: Deteco de diuron e hexazinona em gua

ABSTRACT

The use of herbicides causes a negative ambient impact that can affect the water sources in the rural area. The aim of the study was to develop a method for simultaneous detection of diuron and hexazinone in water supplies, and use the method for evaluate the presence of this products in the water of wells and springs in rural properties of

2 Crrego Rico Microbasin. The validation parameters (limit of quantification 2 g.L-1 for the two products, recoveries from 102,2 to 129,2% and from 67,1 to 83,61% for diuron and hexazinone, respectively) showed that the method can be used for determination of the herbicides. Residues of the herbicides were not detected in samples; however, it is important to continue the monitoring to guarantee the quality of the water.

RESUMO

O uso de agrotxicos provoca um impacto ambiental negativo que pode afetar as fontes de gua no meio rural. Este trabalho teve como objetivos desenvolver um mtodo cromatogrfico para deteco simultnea de diuron e hexazinona em gua de fontes de abastecimento, e aplic-lo na gua de poos e nascentes de propriedades rurais da Microbacia do Crrego Rico. Os parmetros da validao indicam que o mtodo pode ser utilizado para o fim proposto: limite de quantificao de 2 g.L-1 para os dois produtos, porcentagem mdia de recuperao de 102,2 a 129,2% e de 67,1 a 83,61% para diuron e hexazinona, respectivamente e preciso menor que 20%. No foram detectados resduos dos herbicidas nas amostras analisadas, mas destaca-se a importncia da continuidade do monitoramento para garantir a qualidade da gua.

INTRODUO

Os sistemas agrcolas de produo intensivos aumentam a necessidade de uso de agroqumicos, os quais elevam os nveis de fosfatos, nitratos e as concentraes de resduos de agrotxicos ou de seus metablitos que podem alcanar os corpos hdricos e comprometer a qualidade das guas superficiais e subterrneas (Ferracini et al., 2005).

3 O estado de So Paulo responsvel por 60,2% da produo brasileira de canade-acar, o que representa cerca de 252 milhes de toneladas, ocupando uma rea de trs milhes de hectares. O municpio de Jaboticabal destaca-se neste cenrio, produzindo cerca de 14 milhes de toneladas de cana, em uma rea destinada cana de 155 mil hectares (Instituto de Economia Agrcola, 2007). Em relao aos agrotxicos utilizados nesta cultura, 95 % das vendas se referem a um nico herbicida a base de diuron e hexazinona. Salienta-se que estes herbicidas, que podero ser carreados para os mananciais, no so regulados pela legislao brasileira para gua de consumo humano vigente (Brasil, 2004). O diuron [3-(3,4diclorofenil)1,1dimetilureia] um herbicida do grupo dos derivados da uria, sendo recomendado no controle de plantas daninhas mono e dicotiledneas (Rodrigues & Almeida, 1998). Embora apresente baixa a moderada lixiviabilidade pode contaminar o lenol fretico devido aos baixos valores de coeficiente de adsoro (Kd) que permitem eficiente movimentao no perfil do solo (Gooddy et. al., 2002). Alm do transporte para guas superficiais e subterrneas, a degradao bitica e abitica do diuron tambm pode ocorrer; neste caso, o principal o produto gerado a 3,4-dicloroanilina (3,4 DCA) que possui maior toxicidade e persistncia no ambiente que o composto de origem (Giacomazzi & Cochet, 2004). A hexazinona [3-ciclohexil-6-dimetilamina-1-metil-1,3,5-triazina-2,4 (1-H,3-H)diona], herbicida pertence famlia das triazinas. Apresenta baixo coeficiente de adsoro, alta solubilidade na gua e meia-vida de hidrlise superior a 56 dias, fatores que o tornam mvel no solo e capaz de contaminar guas subterrneas (Prichard, et al., 2005; Ganapathy, 2007). Existem divergncias quanto concentrao mxima permissvel para pesticidas em corpos dgua. Os pases da Comunidade Europia consideram que a Concentrao

4 Mxima Admissvel (CMA) de um pesticida individual na gua potvel de 0,1 g.L-1, sem, no entanto, ultrapassar 0,5 g.L-1 considerando-se a soma de todos os pesticidas (Filizola et al., 2002). J a legislao norte-americana apresenta os padres aceitveis de potabilidade para esses herbicidas de 200 g.L-1 e de 10 g.L-1 para a hexazinona e diuron, respectivamente (Pesticideinfo, 2007). No Brasil, a Resoluo Conama n 357 (Brasil, 2005) e a Portaria n 518 do Ministrio da Sade (Brasil, 2004), que estabelecem os limites mximos de contaminantes em guas, no contemplam a maioria dos pesticidas em uso atualmente como o diuron e a hexazinona (Dores & DeLamonica-Freire, 2001). A partir do exposto, os objetivos do estudo foram desenvolver um mtodo de deteco simultnea de diuron e hexazinona em amostras de gua por cromatografia gasosa e determinar as concentraes desses herbicidas na gua das fontes de abastecimento de propriedades rurais da Microbacia Hidrogrfica do Crrego Rico, Jaboticabal, SP.

METODOLOGIA

Desenvolvimento do mtodo para deteco de diuron e hexazinona em gua

Anlise Cromatogrfica e preparo dos padres As anlises cromatogrficas foram realizadas em um cromatogrfo gasoso da marca Varian, modelo CP 3800 e foi utilizada uma adaptao do mtodo descrito por Berrada et al. (2001) que envolve a extrao em fase slida dos herbicidas, seguida da separao por cromatografia capilar e deteco por detector terminico seletivo (TSD), tambm conhecido como detector de nitrognio e fsforo (NPD). As condies

5 cromatogrficas foram adaptadas do mesmo autor: i) coluna capilar em slica fundida CP Sil 8CB (95% metilsilicone, 5% fenil, 30 m x 0,25 mm i.d., 0,25 m de espessura de filme; ii) temperatura do injetor: 300 C; iii) temperatura do detector: 300 C; iv) temperatura da coluna: 100 C, aquecimento de 5 C.min-1 at 240 C, onde a temperatura foi mantida por 30 minutos; v) gs de arraste (N2): 2,7 mL.min-1; vi) corrente da prola: 3,0 A. As solues estoques dos padres de diuron e de hexazinona foram preparadas em acetato de etila (grau cromatogrfico) individualmente, na concentrao 100 mg.L-1. A partir destas solues estoque foram preparadas as concentraes padro 20 mg.L-1, 15 mg.L-1, 10 mg.L-1, 5 mg.L-1 e 2 mg.L-1 para cada herbicida. A partir dessas solues, foram preparadas as solues contendo os dois padres, pipetando-se 1,0 mL de cada padro em um vial, para cada uma das concentraes. Essas solues foram utilizadas na obteno das curvas analticas e nas fortificaes das amostras para o ensaio de recuperao dos analitos. Para a obteno das curvas analticas, 2 L das concentraes 20 mg.L-1, 15 mg.L-1, 10 mg.L-1, 5 mg.L-1 e 2 mg.L-1 contendo os dois padres foram injetados, nas condies cromatogrficas descritas acima, em triplicata (Anvisa, 2008).

Validao do mtodo cromatogrfico Para realizao do teste de validao, por meio do ensaio de recuperao, foram escolhidas trs concentraes da curva analtica, sendo elas a menor, a mdia e a maior concentraes (2 mg.L-1, 10 mg.L-1 e 20 mg.L-1). Para isso, 1,0 L de gua deionizada foi fortificada individualmente com 0,5 ml de cada concentrao padro contendo os dois herbicidas. Estas amostras fortificadas foram filtradas em filtro de fibra de vidro GF/F para remoo dos slidos suspensos; em seguida foram extradas em fase slida utilizando-se cartuchos contendo C18 como fase estacionria previamente

6 condicionados com metanol (grau cromatogrfico), em fluxo de 4 a 6 mL min-1 (Brondi & Lanas, 2005). Aps a extrao, o cartucho foi submetido secagem pela passagem de ar durante 30 minutos, com suco feita com bomba de vcuo. A eluio foi realizada com 10 mL de acetato de etila, em fluxo de 1,0 a 2,0 mL min-1. O eluato foi levado secagem com fluxo de N2 gasoso. O resduo foi redissolvido em 500 L de acetato de etila (grau cromatogrfico) e uma alquota de 2,0 L foi analisada por cromatografia gasosa segundo as condies citadas para a obteno das curvas analticas. A partir dos resultados obtidos foi possvel analisar a exatido do mtodo, pela concordncia deste com o resultado terico (calculado a partir da quantidade de padro adicionado). Os resultados obtidos foram expressos em percentagem de recuperao, que consiste na percentagem de padro adicionado gua inicialmente e que atingiu o final do procedimento experimental. Por meio das repeties do ensaio (triplicatas) foi possvel conhecer a preciso do mtodo para cada concentrao de padro atravs do clculo do desvio padro relativo conhecido como coeficiente de variao (CV). Admitiu-se o mtodo confivel desde que a exatido seja expressa por meio de uma de uma recuperao entre 70 e 120% da concentrao adicionada (Thier & Zeumer, 1987) e a preciso por meio de coeficiente de variao, estivesse abaixo de 20% (Anvisa, 2003).

Caracterizao da rea de estudo A rea de desenvolvimento deste projeto est vinculada ao Comit de Bacias do Rio Mogi-Guau constituindo-se, em parte, da bacia hidrogrfica do Crrego Rico. Esta Bacia est localizada na poro centro-norte do Estado de So Paulo, regio administrativa de Ribeiro Preto, e abrange, em sua totalidade, os municpios de Monte

7 Alto, Jaboticabal, Santa Ernestina, Taquaritinga e Guariba. A posio geogrfica definida pelas coordenadas latitudes 21o10S e 21o27S e longitude 48o08WGr e 48o33WGr, com extenso de aproximadamente 541 km2 entre altitudes de 410 m a 740 m, conforme as Cartas Topogrficas do Instituto Geogrfico e Cartogrfico do Estado de So Paulo, elaboradas em 1971 (Italiano et al., 2003). Para o estudo, foram colhidas amostras de gua das fontes de abastecimento de 30 propriedades rurais localizadas na Microbacia Hidrogrfica do Crrego Rico (25 poos e seis nascentes). As amostras foram coletadas tanto na estao de seca (junho a setembro de 2008) como na de chuva (fevereiro a abril de 2009), para verificar se ocorre influncia da chuva na percolao dos resduos dos herbicidas no solo. As amostras de gua foram colhidas em galo de vidro mbar de 1,0 L e mantidas refrigeradas at serem analisadas dentro de 24 horas, para evitar a decomposio dos analitos.

RESULTADOS E DISCUSSO

Validao do mtodo cromatogrfico para deteco simultnea de diuron e hexazinona Aps a otimizao das condies de extrao e cromatogrficas, o mtodo utilizado foi validado, uma vez que a validao necessria para garantir a confiabilidade dos resultados obtidos. Na validao, a linearidade foi avaliada por regresso linear pelo mtodo dos mnimos quadrados e verificou-se se o coeficiente de determinao (R2) foi adequado, ou seja, se encontrava com valores prximos a 1.

8 Tabela 1. Curvas analticas, intervalo de trabalho e coeficiente de correlao dos herbicidas.

Intervalo de trabalho Herbicida (mg.L-) Diuron Hexazinona 2 a 20 2 a 20 Y = 98.741 x + 167.41 Y = 960.12 x + 115 Equao correlao (R2) 0.9905 0.9975 Coeficiente de

Os limites de quantificao do mtodo (LQ) determinados para gua deionizada foram de 2 g.L-1 para o diuron e para a hexazinona. Para a determinao desses valores foi considerada a menor concentrao de fortificao a apresentar rea reprodutvel em injees sucessivas dentro do intervalo de trabalho, com recuperao entre 70 e 120% (Thier & Zeumer, 1987) e coeficiente de variao (CV) inferior a 20% (Anvisa, 2003). Pela Tabela 1 verifica-se que as curvas analticas dos dois herbicidas mostraramse lineares na faixa do LQ do instrumento (2 g.L-1) pois apresentaram valores de R2 0,9905 e 0,9975 para diuron e hexazinona, respectivamente. No Brasil, embora a legislao vigente que estabelece os limites mximos de contaminantes em guas para consumo humano no contemple a maioria dos pesticidas em uso atualmente, dentre eles o diuron e a hexazinona, o LQ do mtodo utilizado estava abaixo dos nveis aceitveis para o padro de potabilidade da Agncia de Proteo Ambiental norte-americana que de 10 g.L-1, para diuron e 200 g.L-1 para a hexazinona (Extoxnet, 2007), comprovando que o mtodo pode ser utilizado para detectar concentraes inferiores aos limites aceitveis da legislao norte-americana.

Figura 1. Cromatograma da curva analtica para a concentrao 20 g.L-1 de padro contendo diuron e hezaxinona, sendo 1 = diuron, 2 = 3,4 DCA e 3 = hexazinona.

Figura 2. Cromatogramas das amostras A) branco, B) fortificada com 10 g.L-1 de diuron e hexazinona, sendo 1 = diuron, 2 = 3,4 DCA e 3 = hexazinona.

Segundo os cromatogramas da curva analtica e das amostras fortificadas utilizadas no ensaio de recuperao, o tempo de reteno (tr) do diuron variou entre 6,03

10 a 6,06 minutos. O metablito 3,4 DCA foi identificado no tr entre 8,51 e 8,53 minutos e a hexazinona entre 27,42 a 27,49 minutos (Figuras 1 e 2).

Tabela 2. Percentuais de recuperao (intervalo e mdia), desvio padro (DP) e coeficiente de variao (CV) das amostras de gua deionizada fortificadas (n = 3) com diuron e hexazinona.
Concentrao Herbicida (g.L-1) 2 Diuron 10 20 2 Hexazinona 10 20 Intervalo 96.3 - 115.5 123.8 - 136.9 98.7 - 108.6 69.7 - 94.2 61.4 - 71.2 82.5 - 85.7 Mdia 104.3 129.2 102.2 79.1 67.1 83.6 (g.L-1) 0.2 0.7 1.1 0.3 0.5 0.4 (%) 9.5 5.3 5.5 16.7 7.7 2.2 Recuperao (%) DP CV

A exatido do mtodo foi obtida por meio da determinao da porcentagem de recuperao mdia das amostras fortificadas em triplicatas. Os resultados obtidos esto dentro da faixa de 70 e 120% (Thier & Zeumer, 1987) para as concentraes entre 2 e 20 g.L-1 para os dois herbicidas, e com valores bem prximos na concentrao 10 g.L-1 (Tabela 2). A preciso do mtodo foi calculada por meio das repeties (n = 3) nas trs concentraes estudadas, e os resultados foram < 20%, indicando que o mtodo est de acordo com a literatura (Anvisa, 2003) (Tabela 2).

Determinao dos herbicidas diuron e hexazinona na gua das fontes de abastecimento

11 Nas 30 propriedades rurais visitadas, as amostras de gua da fonte de abastecimento, seja poo ou nascente, apresentaram concentrao de diuron e hexazinona inferior ao LQ de 2,0 g.L-1, pois no foi possvel identificar e quantificar os picos caractersticos dos herbicidas nas amostras de gua nas duas estaes do ano. De modo contrrio ao presente trabalho, Lennartz et al. (1997) em estudos realizados em regio do Mediterrneo, nas pocas da chuva, detectaram altas concentraes de diuron em amostras de gua provenientes de solo arado, ou seja, com facilidade para infiltrao. Em solos compactados foram detectadas baixas concentraes, justificando que a infiltrao foi menor neste tipo de solo. No presente estudo, a no deteco dos herbicidas nas guas dos poos pode estar relacionada ao fato de que em solo arenoso, como o da regio estudada, arenoarigloso ou argiloso h absoro e translocao de diuron por plantas de cana-de-acar (Musumeci, 1995), o que no disponibiliza a molcula de diuron para o solo e para uma posterior infiltrao at o lenol fretico. A movimentao dos agrotxicos no solo ocorre pela difuso e pelo fluxo de gua associado s transformaes qumicas e biolgicas e pelos processos de adsoro do produto. Uma vez no ambiente, os herbicidas podem sofrer decomposio pela luz solar e pela ao de microrganismos, sendo a primeira mais intensa na hexazinona, e a segunda no diuron (Ganapathy, 2007; Moncada, 2007). A adsoro do diuron est relacionada a presena de matria orgnica no solo, e consequentemente, sua percolao alta em solos com pouca cobertura orgnica (Moncada, 2007). Queiroz et al. (2005) em monitoramento do herbicida hexaninona em guas subterrneas na microbacia do Crrego Espraiado, regio de Ribeiro Preto, SP, no detectaram o produto por meio de cromatografia lquida de alta eficincia e todos os valores encontrados eram inferiores ao limite de deteco do mtodo, que era de 0,02

12 g.L-1. Gomes et al. (2006), em estudo na mesma rea, para deteco do diuron em guas subterrneas, indicaram que no h comprometimento das fontes, pois os resultados estavam abaixo do limite de deteco do mtodo, que era de 10 g.L-1. Uma vez que no existem valores mximos permitidos pela Portaria 518 (Brasil, 2004) para esses herbicidas na gua de consumo humano, segundo a Agncia de Proteo Ambiental norte-americana, cujos valores mximos na gua so 10 g.L-1, para diuron e 200 g.L-1 para a hexazinona (Pesticideinfo, 2007), as amostras de gua das fontes de abastecimento analisadas estavam apropriadas para o consumo humano.

CONCLUSES

O mtodo cromatogrfico desenvolvido mostrou, aps a anlise dos parmetros de validao, ser eficiente para determinao simultnea dos herbicidas diuron e hexazinona em amostras de gua. O estudo no revelou a presena desses herbicidas nas guas dos poos e nascentes na Microbacia do Crrego Rico, no entanto, o monitoramento deve ter continuidade para se assegurar a qualidade da gua.

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AGRADECIMENTOS Fapesp (auxlio pesquisa proc.07/54939-5), CATI de Jaboticabal e ao SAAEJ.