UNIVERSIDAD AUTNOMA DE AGUASCALIENTES DEPARTAMENTO DE FISIOLOGA Y FARMACOLOGA CENTRO DE CIENCIAS BSICAS

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO

Materia: Fisiologa General Carrera: Mdico Veterinario Zootecnista Semestre: Segundo

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE AGUASCALIENTES DEPARTAMENTO DE FISIOLOGA Y FARMACOLOGA CENTRO DE CIENCIAS BSICAS

REGLAMENTO Y MEDIDAS DE SEGURIDAD A SEGUIR EN LOS LABORATORIOS DE PRCTICAS DOCENTES

Sobre el uso del laboratorio:

Con anterioridad a la realizacin de la prctica, los alumnos debern leer el texto completo de la misma, y llevar por escrito los pasos experimentales a desarrollar. El uso de bata es obligatorio durante todo el desarrollo de la prctica. Est prohibido comer, fumar, beber o masticar chicle dentro del laboratorio. Usar guantes de ltex desechables y cubre-bocas cuando se trabaje con muestras biolgicas y /o material patolgico. Se deber informar inmediatamente al profesor o al tcnico de laboratorio de cualquier accidente que ocurra durante la prctica. Slo se llevarn a cabo los procedimientos descritos en los instructivos de la prctica. Al terminar cualquier experimento el profesor o el tcnico indicarn a los estudiantes donde deben colocarse los residuos segn su naturaleza (peligrosos, punzocortantes, biolgico-infecciosos,etc.). Los alumnos siempre consultarn al profesor responsable, instructor o tcnico encargado, para aclarar cualquier duda. Antes de retirarse del laboratorio los alumnos debern dejar limpio su lugar de trabajo.

Recomendaciones en caso de contaminacin con materiales biolgico infecciosos. 1. Retirar la ropa contaminada y colocarla en un contenedor de material biolgicoinfeccioso, lavar la zona contaminada con abundante agua y jabn, y luego desinfectar con alguna solucin antisptica. 2. Si se ocasion alguna herida, oprimir suavemente la zona circundante a la misma hasta que salgan algunas gotas de sangre, y luego proceder como en el paso anterior.

Acudir a revisin mdica de manera inmediata, y despus en caso de que se presente cualquier sntoma de infeccin. 3. En caso de derramamiento de alguna muestra biolgica, desinfectar el rea con hipoclorito de sodio al 5%. Depositar los material biolgico-infecciosos utilizados en los contenedores correspondientes. Recomendaciones en caso de shock y traumatismo. No dar de beber a la persona. No sobrecalentarlo. Solicitar ayuda mdica de inmediato. Sntomas: piel plida, fra y hmeda, de color moteado. La respiracin es dbil o profunda, pero irregular; apata y nusea. 1. Acostar a la persona. Colocar una cobija debajo si la superficie est fra o hmeda, pero NO moverla si tiene (o se sospecha ) de alguna lesin en cuello o espalda. 2. Si la persona accidentada presenta alguna lesin en la cabeza, elevarle el cuello y hombros. 3. Elevarle las piernas 30 centmetros a menos que le cause dolor o tenga una lesin. 4. Cubrirla suavemente con una cobija.

Recomendaciones en caso de envenenamiento por ingestin. Inmediatamente llamar al centro de salud ms cercano y solicitar ayuda mdica, informando detalladamente sobre la naturaleza de la sustancia txica ingerida. Guardar el recipiente en el que se encontraba la sustancia txica y guardar el vmito en caso de presentarse. Observar la respiracin cuidadosamente.

Recomendaciones en caso de shock elctrico. No tocar a la persona directamente mientras se encuentre en contacto con la corriente elctrica. Solicitar ayuda mdica de inmediato. 1. Tratar de desconectar la corriente quitando el fusible o desenchufando el cable elctrico. Si eso no es posible , subirse sobre algo seco (una cobija, tapete de hule, peridicos, etc.) y jalar o empujar a la persona accidentada con una tabla o palo seco. 2. Si es necesario comenzar a darle respiracin artificial inmediatamente, y segn el caso, dar tratamiento para quemaduras, shock y traumatismo.

DEPARTAMENTO DE FISIOLOGA Y FARMACOLOGA CENTRO DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE PRCTICAS LABORATORIO DE FISIOLOGA MEDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA AGOSTO - DICIEMBRE 2007

CARRERA: SEMESTRE: MAESTRO:

PRCTICA ANATOMA MACROSCOPICA DE LA RATA FISIOGRAFO POTENCIAL DE ACCIN COMPUESTO MUSCULO ESQUELETICO UNIN NEUROMUSCULAR MUSCULO LISO MUSCULO CARDIACO CICLO CARDIACO CONTROL SIMPATICO Y PARACIMPATICO DE LA PRESIN ARTERIAL FORMACIN DE ORINA MODELO MECNICO DEL PULMN

MATERIAL BIOLOGICO 6 MACHOS Y HEMBRAS 2 RANAS 3 RANAS 3 RANAS 1 CONEJO 3 TORTUGAS 1 PERRO 1 PERRA ---

FECHA PROBABLE

ANATOMIA MACROSCOPICA DE LOS SISTEMAS DE ORGANOS

INTRODUCCION: Para estudiar muchos fenmenos fisiolgicos que intervienen en la funcin del organismo humano, se emplean mtodos que desde luego, no pueden aplicarse al hombre. Casi siempre los fisilogos utilizan animales que van desde primates hasta las formas ms elementales de vida animal, tanto en enseanza como en investigacin. La prctica que ahora se presenta, permite que el estudiante empiece a conocer a la rata como modelo experimental de mamfero, se percate de la anatoma macroscpica de los principales sistemas de rganos y adquiera prctica en ciertas manipulaciones para otros experimentos. La rata constituye un excelente modelo de estudio desde el punto de vista anatmico y en gran parte fisiolgico, debido a la considerable similitud que tiene con el ser humano. OBJETIVOS: 1) 2) 3) 4) Manejo de la rata en el laboratorio. Observaciones bsicas en la rata anestesiada. Aprender a aplicar inyecciones subcutneas, intramusculares e intraperitoneales. Identificar y disecar los diferentes rganos que conforman a cada sistema orgnico (msculo esqueltico, cardiovascular, respiratorio, digestivo, excretor, reproductor, endocrino e inmune) 5) Correlacionar los diferentes sistemas de rganos con sus respectivas funciones.

MATERIAL: 1) Rata, 2) jaula para rata, 3) balanza para animales pequeos, 4) mesa de disecciones, 5) hilo camo doble cero, 6) algodn, 7) cmara de anestesia, 8) mascarilla para anestesia, 9) ter etlico, 10) jeringas de 1 y 10 ml, 11) solucin salina isotnica, 12) estuche de disecciones, 13) tubo para ventilacin pulmonar, 14) aguja metlica del # 18 con punta de plstico, 15) guantes de tela, 16) corazn de res. MANEJO DE LA RATA ALBINA Durante hace muchas generaciones las ratas de laboratorio se han habituado a ser manejadas por el hombre. Recuerde pues, que si ste es su primer contacto con la rata albina, el novicio es usted. Las ratas muerden, sin embargo, las criadas en el laboratorio raramente lo hacen mientras no se les trate mal. Las siguientes maniobras le permitirn manejar las ratas sin riesgo. La cola es un apndice muy conveniente para el manejo del animal y permite levantarlo sin hacerle dao. Incluso, cuando se sujeta de la cola, la rata trata de alejarse; en este estado inmvil y ocupada en otra cosa, se sujeta poniendo el dedo ndice y el dedo medio de la otra mano alrededor de la cabeza y extendindolos por debajo de la mandbula inferior y no sobre la garganta, pues la rata no suele comprender por qu debera cooperar con quien intenta estrangularla.

Es aconsejable no levantar las ratas por la cola, pues son bastante giles para girar en el aire y trepar por su propia cola. No es muy sorprendente, que una rata en estas condiciones se sienta inclinada a morder. Doblando un poco la mano que sujeta a la cabeza, el cuerpo de la rata queda acostado sobre la palma de la mano. No debe agarrarse o apretarse el cuerpo del animal con los otros dedos, pues esta presin resulta molesta y puede desencadenar movimientos de defensa. No es tiempo perdido, sino muy bien invertido, aquel que se gasta en manejar a la rata, pasndola de una jaula a otra, o de ah a la mesa, acostumbrndose tanto el animal como el estudiante al conocimiento mutuo. Una rpida comparacin entre la rata y alguno de sus compaeros mostrar de inmediato ms diferencias que similitudes. Las diferencias ms notables son el tamao y el peso. El peso que guarda relacin con el tamao, es un parmetro til para dosificar frmacos y comparar fenmenos fisiolgicos en distintas especies. Para pesar a la rata, conviene una balanza de resortes con un rango 0 a 2 000 g. y una exactitud del orden de 1 g. Siempre debe pesarse el animal de experimentacin y anotar el sexo y la edad en la hoja de resultados. ANESTESIA En esta prctica se utilizar el ter etlico como anestsico. El ter es un lquido voltil y muy inflamable por lo que cuando se utiliza debe haber una ventilacin adecuada y no deben existir llamas libres en el laboratorio ni se debe fumar. Como cmara de anestesia se usar un frasco de boca ancha con tapa, en cuyo fondo se ha colocado un trozo de algodn empapado con ter etlico y se coloca una malla de alambre sobre el algodn. Antes de anestesiar a la rata deber tomar en cuenta lo siguiente: una buena anestesia requiere de una vigilancia constante y estrecha. Por lo tanto, en cada prctica la responsabilidad debe recaer en un solo estudiante. Dicha funcin pues, ser rotatoria entre los miembros del grupo en las distintas prcticas. El estudiante que resulte anestesista en algn experimento, ser responsable del nivel de anestesia durante la duracin del mismo y no deber en ningn momento relegar esta responsabilidad a otro miembro del grupo. Pese a la rata y observe y retenga en su memoria las caractersticas de la rapidez y la profundidad de las respiraciones. Meta al animal en el frasco de anestesia tapndolo inmediatamente. Observe como disminuye la frecuencia y la profundidad de las respiraciones al irse instalando la anestesia. Cuando la rata se ha quedado dormida squela inmediatamente y contine la anestesia con la mascarilla de anestesia (frasco pequeo con algodn humedecido con ter en el fondo). Mantenga la anestesia humedeciendo de cuando en cuando el algodn con algunas gotas de ter. Debe vigilarse continuamente el plano de anestesia para que el animal no se despierte ni llegue a un plano tan profundo que las respuestas fisiolgicas por estudiar dejen de presentarse. Ya que la funcin fundamental de la anestesia es la abolicin del dolor, determine la respuesta a los estmulos dolorosos pinchando las orejas o la cola y buscando reflejos de flexin o cualquier otro movimiento. Otro buen criterio para conocer el nivel de anestesia (profunda, superficial o quirrgica) es la observacin de la frecuencia y profundidad de la respiracin. Para esto, usted ya tomo nota de la frecuencia y profundidad

de las respiraciones en la rata despierta, y esas caractersticas se comparan con los cambios que muestra la respiracin al instalarse la anestesia. Cuando los movimientos respiratorios son muy lentos y superficiales, la anestesia es demasiado profunda. Si la respiracin se hace rpida y profunda, la anestesia es demasiado superficial. En caso de anestesia demasiado profunda, esta puede progresar hasta provocar la muerte del animal. Si se juzga que la anestesia ha ido demasiado lejos, retire la mascarilla. Acerque o retire la mascarilla segn las necesidades. Mdase el tiempo que se requiere para profundizar la anestesia hasta que aparezca una respiracin lenta y poco aparente, mdase luego el tiempo para que el nivel pase al correspondiente a una respiracin rpida y profunda (anestesia superficial). Se deja que la rata se estabilice en un plano medio (quirrgico) que deber mantenerse en los pasos siguientes. Los dems aspectos de la prctica, no deben distraernos al punto de que la mascarilla quede lejos de los animales hasta que ste se despierte. INYECCIONES Aunque la inyeccin de sustancias qumicas y medicamento puede hacerse por mltiples vas, aqu practicaremos las siguientes: subcutnea, intramuscular e intraperitoneal. a) Inyeccin subcutnea. Si la rata est despierta se necesitan dos personas, una que sujeta al animal y la otra que aplica la inyeccin. Al llegar a este punto se supone que usted es capaz de manejar al animal sin riesgos de ser mordido por l. Por lo tanto, para aplicar la inyeccin subcutnea, el animal estar sujeto por el cuello con los dedos ndice y medio de una mano y recostado sobre la palma de la misma, despus con la mano libre tome las extremidades posteriores del animal y extindalas lo suficiente hasta evitar movimientos, la presin que ejerza sobre ellas no debe lastimar al animal. El compaero prepara la jeringa con solucin salina isotnica, a una dosis de 0.1 ml/100 g de peso corporal. Proceda a exponer la rata al compaero que va a inyectar. Este, levantar un pliegue de la piel en el sitio escogido e introducir la aguja de la jeringa hasta llegar al espacio subcutneo en donde inyectar el lquido de la jeringa. Se saca la aguja y se frota el lugar de la inyeccin para cerrar el orificio hecho por la aguja. Cada integrante del equipo debe realizar varias inyecciones subcutneas de prctica sobre la rata anestesiada, hacerse luego de una rata despierta y realizar cuando menos una inyeccin subcutnea exitosa. b) Inyeccin intramuscular. Sujete al animal segn se describi, tome una de las extremidades inferiores y exponga el muslo en forma lateral. El estudiante que aplicar la inyeccin ya tendr la jeringa con la dosis de solucin salina preparada (0.1 ml/100 g. de peso corporal); a continuacin palpara el muslo para reconocer la zona de mayor masa muscular y colocando la aguja en posicin oblicua al muslo, la introducir aproximadamente hasta la mitad de la masa muscular y lentamente introducir la solucin. Saque la aguja en la misma direccin en la que fue introducida. c) Inyeccin intraperitoneal: Sujete al animal con una mano y con la otra tmela de las patas posteriores y extindalas de tal manera que el abdomen del animal quede tenso y expuesto al compaero que realizar la inyeccin. El compaero que inyecta deber

identificar el cuadrante inferior izquierdo del abdomen, ya que en esta zona no hay rganos vitales, excepto el intestino delgado. Aplique la punta de la aguja en el sitio escogido y con un movimiento rpido introduzca la aguja con la jeringa, previamente preparada, a travs de la pared abdominal, al hacerlo se percibe claramente cuando la pared cede al empuje de la aguja. Tenga cuidado de introducir solamente la punta de la aguja en la cavidad peritoneal, ya que existe el riesgo de perforar el intestino. Una vez en el peritoneo, inyecte la solucin y saque la aguja en la misma direccin en la cual entr. Los lquidos inyectados en el peritoneo no tienen que estar a la temperatura del cuerpo, pero es mejor calentarlos. Cada integrante del grupo debe practicar cada tipo de inyeccin sobre la rata anestesiada y luego cuando menos una en una rata despierta. SISTEMAS DE RGANOS Como el hombre, la rata posee diferentes sistemas de rganos (msculo-esqueltico, cardiovascular, urinario, respiratorio, digestivo, nervioso, endocrino, reproductor, inmune y hematopoytico. Desde muchos puntos de vista, puede considerarse que estas divisiones son arbitrarias, pues la funcin total del organismo requiere de la actividad integrada de todos los sistemas. En la presente prctica no se sigue el orden mencionado anteriormente, ya que la comodidad de diseccin y la conveniencia de observar ciertos rganos mientras el animal todava vive obligan a proceder diferente. Sin embargo, una vez que se ha terminado, se revisar toda la anatoma de la rata y se harn esquemas simples de los sistemas de rganos para compararlos con los esquemas de texto referentes al ser humano. Continuando con la anestesia es la misma rata, extindala boca arriba sobre la mesa de disecciones, amarre las patas con hilos del doble cero y sujtelas a los lados de la mesa. Anatoma externa de la rata: Proceda a identificar las diferentes estructuras externas. En la cabeza, identifique las ventanas nasales, vibrisas, labio leporino, boca, incisivos superiores e inferiores, el pabelln auricular y meato auditivo externo. En las extremidades anteriores los dedos y el pulgar vestigial. Identifique sobre el trax y el abdomen las lneas mamarias. En la parte baja del abdomen localice la abertura del prepucio y el escroto en el macho y en la hembra la abertura urinaria, la vulva y el orificio genital, y en ambos casos el ano. En las extremidades posteriores observe los cojinetes plantares, la rodilla y el muslo. Finalmente observe la cola con sus escamas. Diseccin de la rata: Con la rata an anestesiada, se hace una incisin en la lnea media a travs de la piel de la superficie ventral, desde el ngulo anterior del maxilar inferior hasta la snfisis del pubis. Se separan los bordes de la piel y se retraen hacia los lados. A continuacin se introduce la punta de las tijeras directamente en la lnea media en el extremo inferior de la caja torcica a un lado del apndice xifoides. Al abrir la cavidad torcica los pulmones ya no pueden funcionar, por lo que debe suspenderse la anestesia. El efecto del ter residual en la rata, bastar para mantener un nivel aceptable de anestesia y evitar que la rata perciba los estmulos dolorosos. El sistema nervioso central pronto deja de funcionar en condiciones de anoxia y la muerte se produce rpidamente.

Sistema respiratorio y sistema cardiovascular. Apoyndose en el esquema de las figura 39, abra la cavidad torcica. Para esto, use como referencia el orificio hecho a nivel del apndice xifoideo y pegndose lo ms posible a la pared costal, crtela hacia arriba siguiendo primero una de las lneas mamarias (a un lado del esternn), hasta la clavcula del mismo lado. Repita la maniobra en el lado opuesto. Levante y separe la parrilla costoesternal. Esta maniobra deja expuesta toda la cavidad torcica. Observe los pulmones que se han retrado y el corazn que contina latiendo. El animal hace algunos intentos por respirar. Observe la contraccin de los msculos respiratorios, en especial el abombamiento y aplanamiento del diafragma que separa el trax del abdomen. Meta el hocico de la rata en el tubo de ventilacin pulmonar y sople con cuidado. Observe la distensin pulmonar. Quite el tubo y note como el aire sale de los pulmones. Observe los latidos del corazn conforme progresa la anoxemia en el animal. Identifique el timo sobre el corazn y la cara anterior de la parte baja del cuello. Seprelo y comente con sus compaeros las funciones de este rgano. Siguiendo la lnea media extienda hacia arriba la incisin, desde la cavidad torcica hasta el maxilar inferior. Identifique en el cuello las glndulas salivales submaxilares y sublinguales y los ganglios linfticos. Extrpelos. Localice la trquea y sgala hacia abajo desde la laringe hasta su divisin en bronquio derecho e izquierdo y contine, si es posible, hasta los bronquiolos pequeos, que corresponden a cada segmento grande del pulmn. Evite cortar los grandes vasos cardiacos. Una vez expuestos los lbulos pulmonares, corte un fragmento pequeo del pulmn y exprmalo fuertemente entre los dedos. Perciba la sensacin tctil de crepitacin. Corte otro fragmento pequeo y junto con el anterior pngalos en un vaso con agua. Observe si flotan o se hunden. Identifique la glndula tiroides (Fig. 45), localizada por abajo de la laringe delante de la trquea. Corte la traquea transversalmente un poco por debajo de la glndula tiroides y brala longitudinalmente hacia arriba incluyendo la laringe. Obsrvela cuidadosamente e identifique la epiglotis y las cuerdas vocales. Con una tijera fuertes corte por el centro la mandbula inferior. Identifique el nacimiento de la aorta y los vasos que emergen del cayado; diseque la aorta torcica hasta el diafragma (figuras 45 y 41). Observe las venas yugulares en el cuello y sgalas hacia abajo. Identifique sucesivamente la subclavia, la vena cava superior y la aurcula derecha. Diseque la vena cava inferior desde el diafragma al corazn. Observe el nervio frnico derecho a un lado de la vena cava inferior y sgalo hasta su penetracin en la mitad derecha del diafragma. Extirpe el corazn, los pulmones y los grandes vasos (Fig. 45), lvelos con agua y colquelos sobre la tabla de disecciones. Diseccin del corazn de res. Identifique la arteria aorta y crtela longitudinalmente hasta llegar al ventrculo izquierdo abrindolo tambin. Identifique las

valvas de la vlvula artica. Localice la vlvula aurculo-ventricular izquierda (mitral) con sus valvas y msculos papilares y cuerdas tendinosas. Abra la aurcula izquierda e identifique la desembocadura de las venas pulmonares, Identifique en la aurcula derecha la desembocadura de las venas cavas inferior y superior. Abra la aurcula y el ventrculo derechos. Identifique la vlvula aurculo-ventricular derecha (tricspide) y la emergencia de la arteria pulmonar desde el ventrculo derecho. Observe la disposicin de las valvas de la vlvula pulmonar. Corte el corazn transversalmente, identifique el tabique interventricular y observe la diferencia en el grosor de las paredes de los ventrculos derecho e izquierdo. Sistema digestivo. Abra la cavidad abdominal siguiendo la lnea alba. Observe como el diafragma divide a ambas cavidades. Corte el msculo diafragma evitando cortar el esfago. Con la ayuda de las Figs. 29, 35 y 36 identifique las estructuras de la cavidad abdominal. Observe la lengua y la faringe bucal hasta la epiglotis. Introduzca un estilete por la faringe e identifique el esfago y el estmago. Con los dedos jale suavemente hacia fuera el intestino delgado e identifique el duodeno el yeyuno y el leon. Identifique el bazo y comente con sus compaeros sus funciones. Localice el ciego y el apndice vermiforme del intestino grueso e identifique sus diversas porciones hasta llegar al ano. Estudie el hgado, encuentre las vas biliares y siga su trayectoria hasta su desembocadura en el intestino delgado. Note la ausencia de la vescula biliar. El pncreas tiene la forma de numerosas masas tisulares diseminadas en el mesenterio del intestino delgado junto con los respectivos conductos secretores. Observe a contra luz, como estos confluyen en la parte alta del intestino delgado donde desembocan. Corte el transversalmente el esfago a nivel de la faringe y diseque todo el tubo digestivo hacia abajo. Corte el diafragma respetando el esfago, y ayudndose con los dedos y tijeras, jale y desprenda suavemente el estmago, y los intestinos delgado y grueso hasta llegar al ano. Corte transversalmente a nivel del recto. Mida y compare las longitudes de los intestinos delgado y grueso. Una vez que ha disecado el tubo digestivo y el hgado, colquelos en la mesa y dispngalos lo ms parecido a como se encontraban en el animal. Sistema urinario. Con la maniobra anterior, queda expuesta la pared posterior de la cavidad abdominal. Ayudndose de los esquemas de las Figs. 35 y 36, localice los riones y encima de ellos a las glndulas suprarrenales. Identifique en ambos riones la pelvis renal, los urteres y su desembocadura en la vejiga. Trate de identificar la arteria y vena renales. Extirpe un rin, crtelo en dos longitudinalmente y observe como la pirmide renal se proyecta en la pelvis (Fig. 34). Separe del cuerpo las diferentes estructuras del sistema excretor y organcelas sobre la mesa.

Sistema reproductor (Figs. 35 y 36). Los rganos de la reproduccin dependern, claro est, del sexo del animal. En el macho pueden encontrarse los testculos en el abdomen o en el escroto. Identifique la cabeza, cuerpo y cola del epiddimo y el conducto deferente hasta la uretra interna. Identifique las vesculas seminales y la prstata ventral. Diseque un testculo, bralo en dos y se observe su contenido. Si la rata es hembra, los ovarios se localizarn en ambos lados de la pared posterior del abdomen, justo por debajo de los riones. Identifique los ovarios, las trompas de Falopio y los cuernos uterinos hasta su desembocadura en la vagina. Diseque un ovario y trate de identificar los folculos ovricos. Observe los pequeos oviductos y como estos se continan con los respectivos cuernos uterinos (tero bicorne). Sistema nervioso. Para exponer el sistema nervioso central proceda de la siguiente manera: con unas tijeras fuertes, corte la cabeza del animal entre el agujero occipital y la primera vrtebra cervical. Para retirar la calota, identifique el agujero occipital e introduzca una de las ramas de la tijera, de tal manera que la porcin superior del hueso occipital queda entre las ramas. Teniendo cuidado de no lastimar al cerebelo y dems tejido nervioso, corte lateralmente, hacia arriba y adelante (del occipucio hacia el hueso frontal) los huesos del crneo. Repita la maniobra en lado opuesto. De esta manera, la calota queda prcticamente desprendida. Levntela hacia la nariz y seprela del crneo. As, el cerebro queda expuesto, pero unido al crneo por la base. Para separar el cerebro de la base del crneo, seccione transversalmente los bulbos olfatorios y los nervios pticos que se encuentran inmediatamente por debajo, pegados a la base del crneo. Levante con cuidado la masa enceflica de adelante hacia atrs y observe a la glndula hipfisis (o pituitaria) en el piso del crneo y fija a l por su cubierta de meninges. Identifique el tallo hipofisiario que une a la glndula con el hipotlamo. Al seguir levantando el cerebro, el tallo hipofisiario se rompe, as como los nervios de los diferentes pares craneales. Contine levantando el cerebro hasta llegar al agujero occipital. El cerebro ha quedado desprendido del crneo. Colquelo sobre la mesa y con la ayuda de la Fig. 49, proceda a identificar los hemisferios cerebrales, el cerebelo, la glndula pineal, el bulbo raqudeo, el puente y el hipotlamo. Haga un corte transversal e identifique los ventrculos cerebrales. Para extraer la mdula espinal, proceda a cortar transversalmente los huesos da la columna vertebral, entre las vrtebras lumbares 3 y 4. Con una jeringa de 10 ml y una aguja del # 18 unida a un tubo de plstico del mismo calibre, proceda a inyectar agua a presin en el canal raqudeo de abajo hacia arriba. La mdula saldr intacta. Identifique los diferentes niveles medulares, la emergencia de los nervios perifricos y la cola de caballo. Extirpe uno de los ojos del animal, abra la esclertica y con cuidado extraiga el cristalino. Mire a travs de l y vea como las imgenes se observan invertidas. RESULTADOS: En el dorso de cada hoja, haga un esquema de cada uno de los siguientes sistemas de rganos: cardiovascular, respiratorio, digestivo, excretor, reproductor, nervioso, endocrino e inmune), Identifique a cada uno con los nombres de los respectivos rganos que los conforman.

De una breve explicacin de la funcin de cada uno de los sistemas. BIBLIOGRAFA Armstrong G.G. Anatoma Macroscpica de los Sistemas de rganos. En: Manual de Prcticas de Fisiologa. Editorial Interamericana. Mxico. pp 3-12. 1970. Chiasson R.B. Laboratory Anatomy of the White Rat. WM. C. Brown Company Publishers. Iowa. 1978. Hebel R, and Stromberg M.W. Anatomy of the Laboratory Rat. Williams and Wilkins Co. Baltimore. 1976. Olds R.J. and Olds J.R. A Colour Atlas of the Rat. Dissection Guide. Wolfe Medical Publications Ltd (Ed). 1979. Quintanar Stephano J.L. Anatoma Macroscpica de los Sistemas de rganos. En: Manual de Prcticas de Laboratorio. Universidad Autnoma de Aguascalientes (Ed). pp 5-10. 1989. Sharp P.E. and LaRegina M.C. Experimental Methodology. In: The Laboratory Rat. Suckow M.A. (Ed). CRC Press Boca Raton. 1998. van Dongen J.J., Remie R., Rensema J.W. and van Wunnik G.H.J. Anesthesia of the labotarory rat and General techniques. In: Manual of Microsurgery on the Laboratory Rats. Techniques in the Behavioral and Neural Sciences Vol. 4.. Huston J.P. (Ed). Elsevier. Amsterdam. pp 61-95. 1990. Waynforth H.B. and Flecknell P.A. Administration of Substances. In: Experimental and Surgical Techniques in the Rat. Academic Press. London. pp 1-67. 1992. Wells T.A.G. The Rat. A dissection manual. Dover Publication, Inc. New York. 1964. Revisado: Enero 31, 2003 Dr. Andrs Quintanar Stephano

-- EL FISIOGRAFO--

OBJETIVOS: 1. Describir los diferentes elementos que conforman el FISIOGRAFO y conocer las caractersticas funcionales de cada uno de ellos. 2.- Aprender a operar el FISIOGRAFO: a) Manejando un canal. En esta prctica, utilizando el transductor migrafo tipo C para hacer una curva de calibracin con pesas de valor conocido. b) Comprobando la funcin de la UNIDAD DE DESPLAZAMIENTO DEL PAPEL. c) Manejando el ESTIMULADOR. INTRODUCCIN EL FISIOGRAFO ( fisios= funcin, grafos= escritura), es un aparato diseado para registrar grficamente fenmenos fisiolgicos. Con l se pueden registrar, dependiendo del nmero de CANALES, desde un fenmeno aislado empleando un canal, o bien registrar 2, 3 o 4 variables fisiolgicas simultneamente. En nuestro laboratorio contamos con el FISIOGRAPH FOUR B (NARCO BIO-SYSTEMS) que tiene cuatro canales. EL FISIOGRAFO nos permite reconocer y caracterizar los diversos componentes de un fenmeno fisiolgico, as como los cambios que este sufre a travs del tiempo, por ejemplo, en el estudio de las propiedades del msculo cardaco nos permite caracterizar la sstole y la distole, su duracin, as como determinar cambios en la fuerza de contraccin cuando se somete a traccin, o bien, observar el efecto del nervio vago sobre la frecuencia cardiaca y fuerza de contraccin, etc. Ahora bien, cuando se emplean varios canales simultneamente, se hace con el objeto de estudiar las relaciones que existen entre diferentes fenmenos fisiolgicos y las caractersticas cambiantes de stos a travs del tiempo, por ejemplo, al estudiar las funciones del corazn podemos hacer el registro simultneo del electrocardiograma, ruidos cardiacos, presin auricular derecha y presin de la arteria aorta, analizando primero las caractersticas del registro de cada canal y comprendiendo su significado funcional, para despus pasar a establecer las relaciones que existen entre los diferentes fenmenos. As, el registro simultneo de diferentes fenmenos, nos permiten obtener una visin de conjunto de la funcin cardiaca a travs del tiempo. En el proceso de captura de un fenmeno fisiolgico, hay tres componentes bsicos que componen el sistema de registro. Cada uno tiene una funcin especial y caractersticas distintivas. Estos componentes son: EL TRANSDUCTOR, EL PROCESADOR Y EL REPRODUCTOR. A la combinacin de estos tres elementos se le llama CANAL DE DATOS o CANAL DE REGISTRO, ms simplemente CANAL. Fig. 1. EL TRANSDUCTOR o RECOLECTOR, detecta la informacin proveniente del medio ambiente y la convierte en una seal elctrica (transduccin), la cual es ms fcilmente manejada o procesada que la informacin original. EL PROCESADOR o AMPLIFICADOR recibe la seal transducida y opera con ella. La operacin puede

consistir en amplificar, atenuar o extraer la raz cuadrada, o el logaritmo o algn otro procedimiento matemtico para producir una seal aceptable para el reproductor. En la mayora de los casos una menor distorsin de la amplificacin de la seal transducida en todo lo que se requiere. EL REPRODUCTOR o SISTEMA DE REGISTRO es el dispositivo que convierte la seal en una forma adecuada para que sea percibida por nuestros sentidos. Un ejemplo familiar de este sistema de tres elementos es el reproductor de discos compactos. El transductor es el detector ptico de los rayos laser reflejados desde la superficie del disco compacto, convirtindolos en seales elctricas, las cuales pasan a travs de una conexin adecuada al amplificador. El amplificador o procesador aumenta la seal a una intensidad tal que pueda ser reproducida por la bocina. La bocina o los audfonos constituyen el reproductor que convierte la seal elctrica en ondas sonoras, las cuales son percibidas por los rganos sensoriales, en este caso el odo. ELEMENTOS DE UN CANAL: TRANSDUCTOR (TRANSDUCER). Los transductores son dispositivos que convierten una forma de energa en otra forma de energa. Existen transductores para convertir casi cualquier fenmeno fisiolgico conocido en seales elctricas proporcionales y apropiadas para ser procesadas y registradas por el fisigrafo. Fig. 1a. ACOPLADOR DEL TRANSDUCTOR (TRANSDUCER COUPLER o PREAMPLIFICADOR). El acoplador se usa para conectar el transductor o la seal que viene del sujeto o preparacin experimental al AMPLIFICADOR DEL CANAL. El acoplador se usa tambin para variar la sensibilidad y calibrar el sistema. Fig. 1b. AMPLIFICADOR DEL CANAL (CHANNEL AMPLIFIER). El amplificador del canal aumenta la seal del acoplador para proporcionar el incremento requerido en la intensidad de la seal para mover el motor de la plumilla (reproductor). Adems contiene los controles e interruptores necesarios para procesar seales adicionales. Fig. 1c. MOTOR DE LA PLUMILLA o REPRODUCTOR (PEN MOTOR). El motor de la plumilla convierte la seal que sale del amplificador del canal en un registro de tinta que puede ser rectilneo o curvilneo. Las excursiones verticales de la plumilla a travs del papel que se est deslizando son proporcionales a la actividad fisiolgica. Uno de los reproductores ms tiles en el laboratorio de fisiologa es la PLUMILLA DE REGISTRO montada sobre un galvanmetro de Darsonval. Esto se debe a que la mxima rapidez de cambio de muchos fenmenos fisiolgicos no exceden la rapidez de respuesta de la plumilla que se desliza sobre el papel de registro. As, usando una plumilla entintada, se obtiene un registro grfico instantneo el cual describe la amplitud y curso temporal del evento fisiolgico. Fig. 1d. OPERACIN DEL FISIOGRAFO Antes de seguir adelante es necesario hacer las siguientes consideraciones:

a)

b)

Todos los interruptores de encendido-apagado de los AMPLIFICADORES (Fig.1c) se encuentran en la parte inferior izquierda de las unidades individuales (botn rojo). Todos los interruptores que inician o interrumpen el registro del evento fisiolgico (Fig. 1c) se localizan en la parte inferior derecha de los AMPLIFICADORES (botn blanco).

Las perillas de control se operan girndolas. Cuando se giran en sentido de las manecillas del reloj; esto es, de izquierda a derecha se incrementa el tamao de las ondas (aumenta la amplitud) o bien haciendo que la plumilla se mueva hacia arriba. La rotacin en contra de las manecillas del reloj reduce la amplitud. Todos los tinteros, cables y conexiones son semejantes. Ninguna conexin errnea puede hacerse. Cualquier unidad opera normalmente en cualquier abertura o no opera en ninguna abertura del fisigrafo. PROCEDIMIENTO Para poner el fisigrafo en condiciones de registro haga las siguientes maniobras: 1.- Suba las plumillas con la PALANCA DE LAS PLUMILLAS. Fig. 2 2.- Coloque un paquete de papel de registro bajo las plumillas e inserte el papel en las guas correspondientes. 3.- Baje la PALANCA DE TENSIN DEL PAPEL (Fig. 2), as como la palanca de las plumillas, permitiendo que la punta de las mismas se pongan en contacto con el papel. 4.- Cheque que los TINTEROS (Fig. 2) estn a la mitad de su capacidad y elevados de tal manera que el nivel de tinta quede justo por arriba de la superficie del papel del fisigrafo. 5.- La tinta se hace fluir colocando el dedo ndice sobre el agujero del tintero y apretndolo. 6.- Asegrese de quitar el dedo antes de dejar de presionar. De esta manera el fisigrafo queda listo para trabajar cuando el INTERRUPTOR PRINCIPAL se encienda. El interruptor est localizado a la izquierda de la UNIDAD DE CONTROL DEL DESPLAZAMIENTO DEL PAPEL. El foco rojo adyacente indica que el fisigrafo est encendido o apagado. (Fig. 2). REVISIN DEL DESPLAZAMIENTO DEL PAPEL Gire la perilla de CONTROL DE LA VELOCIDAD DE DESPLAZAMIENTO DEL PAPEL (PAPER SPEED) (Fig 2) y observe el movimiento del papel de registro. Para controlar la velocidad con la que se desplaza el papel, gire la perilla a la velocidad deseada, la cual puede ser desde 0.0025, 0.01, 0.025, 0.05, 0.1, 0.25, 0.5, 1, 2.5, 5.0 y 10 cm/seg. El papel esta rayado en forma cuadriculada con las rayas verticales separadas 0.5 cm. entre si. Las rayas horizontales son de tres tipos y alternadas entre si; unas delgadas cuya distancia entre ellas es de 1 mm, una gruesa cada 0.5 cm. y otra ms gruesa cada 2.5 cm, las cuales se toman como referencias para facilitar la lectura de la amplitud de los registros. Localizada a un lado del interruptor principal se encuentra la perilla del CONTROL DE INTERVALOS DE TIEMPO (TIME MARKER). Seleccione en orden creciente los puntos 1, 5, 30 y 60

seg. y observe como que la PLUMILLA DE TIEMPO (5 plumilla), se desplaza hacia arriba con cada intervalo elegido. Verifique los intervalos usando su reloj. Fig. 2. A la derecha de la PLUMILLA DE TIEMPO se encuentra un pequeo botn rojo llamado MARCADOR DE EVENTOS (EVENT MARKER), el que al ser presionado provocar que la PLUMILLA DE TIEMPO se desve hacia arriba. Oprima este botn para probar su operacin. El marcador de eventos permite sealar puntos especficos en el papel durante el registro del fenmeno fisiolgico. Usando varios grupos de Intervalos de tiempo y el Control de la velocidad del papel, verifique la operacin de la unidad. OPERACIN DE UN CANAL DE REGISTRO AMPLIFICADOR (CHANNEL AMPLIFIER) Fig. 3 1. Gire completamente en favor de las manecillas del reloj la perilla de VARIABLE (Fig. 3), el cual se encuentra superpuesta a la perilla de SENSIBILIDAD (Amplificacin) (MV/CM). 2. Ponga la perilla de AMPLIFICACION MV/CM en 1000. 3. Ponga la palanca de POLARIDAD (POLARITY) en positivo (+). 4. Encienda el botn rojo (POWER). 5. Con la perilla de CONTROL DE POSICIN (POSITION) desplace la PLUMILLA DE REGISTRO a una LINEA BASAL (generalmente al centro de los extremos del desplazamiento vertical de la PLUMILLA). 6. Con la perilla de CONTROL DE POSICIN desplace la plumilla 1.5 cm hacia abajo de la lnea basal. 7. Gire la perilla de MV/CM al punto de ADJ 3 cm. La plumilla se desplazar 3 cm hacia arriba (1.5 cm por arriba de la lnea basal). En caso de que la plumilla sobrepase o no llegue a los 3 cm, con un desarmador gire el TORNILLO de ADJ hacia la derecha para subir la plumilla o gire a la izquierda para bajar la plumilla. 8. Repita la maniobra de poner la perilla MV/CM en 1000 y ADJ 3 cm alternativamente y gire el tornillo de ADJ hacia donde sea necesario hasta que el desplazamiento de la plumilla sea de 3 cm exactamente. De esta manera el amplificador queda calibrado. 9. Gire la perilla del FILTRO (FILTER) al punto apropiado para eliminar (filtrar) el ruido (frecuencias) indeseables que pueden entrar y alterar o impedir el registro adecuado de los fenmenos bajo estudio. CALIBRACIN DEL COUPLER 7173) PREAMPLIFICADOR (ACOPLADOR) (TRANSDUCER

Una vez calibrado el amplificador con el reproductor, proceda a: 1. Gire la perilla MV/CM al punto 2 MV/CM (mxima amplificacin). 2. Gire el botn de posicin y coloque la plumilla de registro en la lnea basal apropiada.

3. Encienda el botn blanco de REGISTRO (RECORD). 4. Restablezca la lnea basal utilizando la perilla de BALANCE DEL PREAMBPLIFICADOR. Con estas maniobras se han ajustado funcionalmente el amplificador con el acoplador y el reproductor, de tal manera que las seales elctricas que pasen del acoplador al amplificador sern proporcionales a la magnitud de las seales elctricas que salen del acoplador. 5. Apague el botn blanco (RECORD) del amplificador. 6. Conecte el transductor migrafo tipo C (Miograph Transducer Type C) al acoplador con un cable conector No. 9. 7. Si la magnitud de la seal por registrar es conocida, gire la perilla MV/CM al punto adecuado. Si no es as, gire la perilla al punto 1000 MV/CM. 8. Encienda el botn de RECORD. 9. Calibre el sistema de registro del fisigrafo utilizando las unidades adecuadas de deflexin de la plumilla. NOTA: El registro de una seal conocida se llama calibracin del registro. Ningn registro puede considerarse completo sin que la calibracin de amplitud y tiempo. CALIBRACIN DE UN REGISTRO ELEMENTOS ACCESORIOS TILES DEL FISIOGRAFO ESTIMULADOR S1-10 (Fig. 4) Instalacin.- El estimulador puede instalarse en cualquier compartimiento del fisigrafo. Antes de instalarlo asegrese de que las clavijas del estimulador y el enchufe del fisigrafo estn limpios y bien alineados. Una vez instalado se pueden dar estmulos que son automticamente indicados por una deflexin hacia arriba de la plumilla de tiempo (5a. plumilla). 1. Ponga el interruptor CONT-OFF-SINGLE (estmulos continuos- apagadoestmulos nicos) en la posicin OFF. 2. Gire la perilla de voltaje (VOLTS) a 0 voltios. 3. Ponga el interruptor ON-OFF (encendido-apagado) en la posicin ON. Prender el foco adjunto. 4. Gire la perilla de frecuencia (FRECUENCY) y el MULTIPLICADOR (X) en los puntos deseados y la palanca de CONT-OFF-SINGLE en la posicin CONT (continuo). 5. Gire el control de duracin (DURATION) y el multiplicador en los puntos aplicado. Pulsos de corta duracin pueden requerir voltajes altos para producir la respuesta deseada. 6. Ponga el control de voltaje (VOLTS) y el multiplicador en los puntos deseados. Estos determinarn el voltaje de los estmulos. Normalmente el control del voltaje debe iniciarse desde 0 y avanzar lentamente hasta lograr la respuesta deseada.

7. Coloque el interruptor MONOPHASIC-BIPHASIC en la posicin apropiada. En la posicin monofsica indica uni directa desde la unidad de aislamiento del estimulador con las terminales de salida, y proporciona un pulso en una sola direccin; en la posicin bifsica, indica unin desde el capacitor de la unidad de aislamiento del estimulador con las terminales de salida. Los pulsos bifsicos reducen la polarizacin del electrodo ya que los promedios de las corrientes positivas y negativas son iguales. 8. El estimulador debe ser probado antes de que los electrodos sean conectados. Coloque el interruptor CONT-OFF-SINGLE en la posicin SINGLE. Un pulso nico ser aplicado a travs de las terminales de salida. La lmpara de nen indicar que un pulso ha salido por los postes de salida. Si el estimulador est instalado en el fisigrafo, la plumilla de tiempo indicar el estmulo con una deflexin momentnea hacia arriba. Cuando el interruptor se coloca en la posicin CONT (continuo): a) Un tren de pulsos se esta aplicando a travs de las terminales de salida. b) La lmpara de nen prendera por cada pulso dado. c) La plumilla marcadora de tiempo se desplazara hacia arriba y se mantendr en esa posicin durante el tiempo que dure el tren de pulsos. 9. Conecte los cables estimuladores en los postes de salida, y el otro extremo a los electrodos de estmulo. Observe la polaridad. ROJO (+), NEGRO (-). 10. Aplique estmulos colocando el interruptor CONT-OFF-SINGLE en cualquiera de las posiciones; CONT para pulsos continuos, o en SINGLE para pulsos aislados. Ponga el interruptor en la posicin OFF cuando no se desee estimular. Si tiene duda de que el estmulo se est aplicando de una manera efectiva al sujeto de experimentacin, desconecte los electros de estmulo y con los dedos hmedos de una mano presione ligeramente sobre los electrodos e incremente lentamente el voltaje hasta que perciba los estmulos. 11. Disparador externo: a) TRIG IN: Para usar un disparador externo, coloque el interruptor CONTOFF-SINGLE en la posicin OFF. Conecte el disparador externo en el enchufe TRIG IN usando un fono conector. El estimulador acepta pulsos disparados desde dispositivos externos y generarn un pulso por cada pulso recibido. Cuando un tren de pulsos es aplicado, el correspondiente tren de pulsos es producido con la duracin y voltaje controlados por los botones del estimulador. El pulso externo debe ser un pulso positivo de al menos 5 volts y 20 microsegundos de duracin. b) TRIG OUT: El estimulador puede utilizarse para sincronizar otros aparatos tales como: otro estimulador, un osciloscopio o una cmara. Cuando un disparo es requerido, conecte el TRIG OUT usando un fono conector a un mecanismo disparador del aparato externo. La seal de TRIG-OUT es un pulso positivo de 20 volts y 50 microsegundos de duracin de una fuente de 10 kilohom por cada estmulo aplicado a las terminales de salida.

Cada miembro del grupo deber familiarizarse con la operacin de todos los controles del fisigrafo antes de proceder con los experimentos del laboratorio. Cuando estos conocimientos sean completos, el fisigrafo puede apagarse usando el interruptor de la lnea principal. Eleve la polea de tensin del papel y la palanca de las plumillas. Las plumillas deben quedar limpias, esto se efecta haciendo la operacin contraria al llenado de las mismas, es decir, presionando el recipiente que contiene la tinta primero y despus tapando con el dedo ndice el orificio de entrada de la tinta y dejando de presionar lentamente el recipiente.

ESTIMULADOR S1-10

OPERANDO EL ESTIMULADOR S1-10

1. El estimulador puede instalarse en cualquier compartimiento del Fisigrafo. Antes de instalarlo asegrese de que las clavijas del estimulador y el enchufe del Fisigrafo estn limpios y bien alineados. Una vez instalado se pueden dar estmulos que son automticamente indicados por una deflexin hacia arriba de la plumilla de tiempo (5a plumilla). Ponga el interruptor CONT-OFF-SINGLE (CONT = CONTINUOS, OFF = APAGADO, SINGLE = AISLADOS) en la posicin APAGADO. Gire la perilla de voltaje (VOLTS) a 0 voltios. Ponga el interruptor ON-OFF (encendido-apagado) en la posicin ON. Prender el foco ROJO adjunto.

2.

3. 4.

5. Gire la perilla de frecuencia (FRECUENCY) y su multiplicador (X) en los puntos deseados y la palanca de CONT-OFF-SINGLE en la posicin CONT (continuo). 6. Gire el control de duracin (DURATION) y su multiplicador en los puntos deseados. Pulsos de corta duracin pueden requerir voltajes altos para producir la respuesta deseada. 7. Ponga el control de voltaje (VOLTS) y su multiplicador en los puntos deseados. Estos determinarn el voltaje de los estmulos. Normalmente el control del voltaje debe iniciarse desde 0 y avanzar lentamente hasta lograr la respuesta adecuada.
8. Coloque el interruptor MONOPHASIC-BIPHASIC en la posicin apropiada. En la posicin monofsica indica unin directa desde la unidad de aislamiento del estimulador con las terminales de salida, y proporciona un pulso en una sola direccin; en la posicin bifsica, indica unin desde el capacitor de la unidad de aislamiento del estimulador con las terminales de salida. Los pulsos bifsicos reducen la polarizacin del electrodo ya que los promedios de las corrientes positivas y negativas son iguales. 9. El estimulador debe ser probado antes de que los electrodos sean conectados. Coloque el interruptor CONT-OFF-SINGLE en la posicin SINGLE. Un pulso nico ser aplicado a travs de las terminales de salida. La lmpara de nen indicar que un pulso ha salido por los postes de salida. Si el estimulador est instalado en el Fisigrafo, la plumilla de tiempo indicar el estmulo con una deflexin momentnea hacia arriba.

10. Conecte los cables estimuladores en los postes de salida, y el otro extremo a los electrodos de estmulo. Respete la polaridad de los postes y cables; ROJO (+) y NEGRO (-). 11. Aplique estmulos colocando el interruptor CONT-OFF-SINGLE en cualquiera de las posiciones; CONT para pulsos continuos, o en SINGLE para estmulos aislados. Ponga el interruptor en la posicin OFF cuando no se desee estimular. Si tiene duda de que el estmulo se est aplicando de una manera efectiva al sujeto de experimentacin, desconecte los electros de estmulo y con los dedos hmedos de una mano presione ligeramente sobre los electrodos e incremente lentamente el voltaje hasta que perciba los estmulos.

Peso (g) x

Desplazamiento vertical del registro (g) y

0 ________________________________ 5 ________________________________ 10 ________________________________ 20 ________________________________ 40 ________________________________ 50 ________________________________ 100

Con los datos obtenidos haga una grfica en papel cuadriculado, en la que al eje de las x correspondan los valores crecientes de las pesas y al eje de las y a los valores verticales mximos del registro. Una los puntos y observe la recta que se forma.

POTENCIAL DE ACCION COMPUESTO

INTRODUCCIN La funcin principal de las fibras nerviosas es la conduccin del impulso nervioso (potencial de accin). En el caso de la fibras sensoriales (aferentes) el potencial de accin es generado en la terminal nerviosa perifrica y es conducido hacia la terminal nerviosa central. El potencial de accin en las fibras motoras (eferentes) es generado en el cono axnico y es conducido hacia la periferia hasta su efector. Conduccin ortodrmica significa la conduccin del impulso nervioso en la direccin adecuada. La conduccin antidrmica significa lo opuesto. Los nervios perifricos estn constituidos por un grupo heterogneo de fibras nerviosas. La heterogeneidad de las fibras nerviosas se debe tanto a sus caractersticas geomtricas (dimetro), histolgicas (presencia o ausencia de mielina), pertenencia (somticas o autnomas), funcionales (sensoriales o motoras). Tambin son heterogneas en cuanto a propiedades de excitabilidad como sera la magnitud del estmulo umbral y la duracin de su perodo refractario, tanto absoluto como relativo. Considerando todas estas caractersticas las fibras nerviosas pueden ser clasificadas de diversas maneras. La clasificacin ms general las clasifica como A (alfa, beta, gamma y delta), B y C. Otra clasificacin, la cual es utilizada principalmente para fibras sensoriales musculares, las clasifica en fibras tipo Ia y Ib, II, III y IV. Independientemente del tipo de fibra nerviosa, la generacin y la conduccin del potencial de accin tiene los mismos principios. La generacin del potencial de accin es debida a un potencial electrotnico producido ya sea por actividad sinptica o por el estmulo aplicado directamente sobre la terminal nerviosa, libre en muchos casos, o asociada a una estructura con caractersticas especficas. Este potencial electrotnico activa canales inicos operados por voltaje generando corrientes catinicas entrantes y salientes que se propagan a travs y a lo largo de la membrana (axolema) y de los lquidos intersticial e intracelular (axoplasma). Los responsables de las corrientes inicas son canales de sodio y de potasio operados por voltaje que se activan de manera secuencial, produciendo corrientes inicas que dan lugar al cambio transitorio del potencial de membrana conocido como potencial de accin, el cual una vez producido, con caractersticas todo o nada, se propaga a lo largo de la fibra nerviosa activando automticamente a los canales inicos, influidos por el campo elctrico del mismo potencial de accin. El potencial de accin es conducido tanto activamente como pasivamente, la conduccin pasiva se realiza en segmentos de membrana que carecen de canales inicos operados por voltaje, en la conduccin pasiva intervienen los canales inicos. Cuando un nervio es dispuesto sobre electrodos de registro y se aplica un estmulo de magnitud suficiente, es posible registrar la suma (por sumacin espacial) de los potenciales de accin de todas las fibras que lo constituyen (potencial de accin compuesto). El registro obtenido de esta manera (electroneurograma) muestra diversos componentes que corresponden a los diferentes tipos de fibras que constituyen al nervio y

que son separados en base al estmulo umbral y en base a la latencia relativa (debido a su diferente velocidad de conduccin) con que aparecen. Adems de investigar el tipo de fibras que constituyen al nervio, este modelo es til para ilustrar conceptos fisiolgicos relacionados con las propiedades de excitabilidad de las fibras nerviosas y de otros tejidos excitables, investigar el efecto de frmacos y xenobiticos sobre la conduccin nerviosa, estudios sobre regeneracin y enfermedades degenerativas (desmielinizantes), etc.

OBJETIVOS 1) Determinar el estmulo umbral para diferentes poblaciones de fibras nerviosas. 2) Investigar el estmulo mximo para una poblacin de fibras nerviosas. 3) Reclutar espacialmente diferentes tipos de fibras nerviosas. 4) Determinar la velocidad de conduccin de diferentes tipos de fibras nerviosas. 5) Determinar los parmetros de excitabilidad de reobase y cronaxia para un tipo de fibras nerviosas. 6) Observar el efecto de los anestsicos locales (xilocana) sobre la conduccin nerviosa.

MATERIAL Y METODOS Material y equipo Material biolgico: Rana (aunque tambin pueden emplearse otras especies como la rata o el gato Material. 1) Instrumental de diseccin y disectores de vidrio. Es importante contar con pinzas y tijeras finas (aunque no indispensable) 2) Cmara para nervio, de preferencia de lucita 3) Estimulador 4) Osciloscopio equipado con amplificador AC/DC. Pueden utilizarse amplificadores acoplados a convertidores analgico/digital si se cuenta con tal equipo 5) Microscopio estereoscpico (puede ser suficiente una lupa). Soluciones. 1) Ringer rana. (puede ser suficiente solucin salina isotnica) 2) Solucin de Xilocana al 2%. 1) Obtencin del nervio citico de rana. La rana es sacrificada por decapitacin, en seguida se destruye la mdula espinal, utilizando para ello un estilete. Esta ltima maniobra es con el fin de evitar los reflejos motores medulares durante la diseccin del nervio. Se abre cavidad abdominal hasta visualizar la pared posterior, donde podrn distinguirse la

columna vertebral y las ltima races nerviosas que emergen de ella, y de las cuales se origina el nervio citico. Se procede a la diseccin del nervio citico, desde su origen en la mdula espinal hasta el tobillo (figura 1A-G). El nervio se refiere con un trozo de hilo en su extremo proximal, se corta y se diseca hasta su emergencia hacia la parte posterior, donde se hace un orificio para poder pasarlo hacia la parte posterior, se voltea a la rana y se prosigue con la diseccin del nervio citico hasta la altura de la rodilla, donde se divide en dos ramas principales, ambas pueden ser disecadas, o bien optar por una de ellas, siguiendo su trayecto hasta la altura del pie de la rana. Es conveniente obtener la mayor longitud posible del nervio, que en ranas de mediano tamao sobrepasa los 60 mm. Se recomienda manipular al nervio con disectores de vidrio, evitando al mximo tocarlo con metales. Una vez separado el nervio es conveniente retirar restos de vasos sanguneos y el tejido conectivo extraneural con el fin de evitar contactos deficientes con los electrodos de registro.

Figura 1. Secuencia de fotografas que ilustra la obtencin del nervio citico de la rana. A: vista de la parte inferior del cuerpo de la rana despus de haber retirado las vsceras abdominales; B: Acercamiento que ilustra las ltimas races nerviosas, donde se origina el nervio citico; C: lustracin de la manera como se refiere el nervio citico para su diseccin; D: ilustracin de la pared posterior de la cavidad abdominal con el nervio citico referido; E: ilustracin del nervio citico disecado hasta la altura de la rodilla; F: en este caso se ha seleccionado el nervio tibial, cuya diseccin se contina hasta el tobillo (G). 2) Montaje de la preparacin en la cmara para nervio. Una vez obtenido el nervio, se coloca sobre los electrodos dispuestos en la cmara, cuidando de que estos se

encuentren limpios (Figura 2 A-B). Se vierte un poco de Ringer o solucin salina sobre el fondo de la cmara y en seguida se sella con la tapa (aplicando un poco de vaselina). El sello de la cmara es importante para que el nervio se mantenga hmedo durante todo el curso de la prctica. 3) Procedimiento para la estimulacin y registro. Una vez que se ha montado el nervio citico en la cmara para nervio, se procede a conectar los electrodos para estimulacin y para registro (Figura 2A-D). Los electrodos para estimulacin se conectan al extremo proximal (ms grueso) del nervio y los electrodos para registro se conectan al extremo distal (ms delgado).

D
o

Figura 2. Fotografas que ilustran las caractersticas de la cmara para nervio y su disposicin para el estmulo del nervio y registro del electroneurograma. A: cmara de lucita y la placa para sellarla despus de colocar el nervio; B y C: nervio montado sobre los electrodos de estmulo y registro; D: dispositivo para la estimulacin y el registro (e: estimulador; u: unidad aisladora de estmulos y o: oscilocopio). REGISTRO DE DATOS 1. Determinacin del estmulo umbral y el estmulo mximo. Se selecciona un estmulo cuya duracin sea de 0.01 ms. Se selecciona la escala de la base de tiempo del osciloscopio en 0.5 ms/divisin. Se incrementa de manera gradual la amplitud del estmulo hasta obtener la respuesta mnima observable (en el caso de utilizar un osciloscopio la escala de la amplitud para esta maniobra debe de ser de 0.5 a 1 mv/divisin). Cuando se obtenga el estmulo umbral se cambia la polaridad del estmulo para seleccionar el tipo de corriente (andica o catdica) ms adecuada a utilizar. En seguida se aplican estmulos de amplitud creciente y se miden las amplitudes de las respuestas obtenidas (podr ser necesario modificar la escala de la amplitud en el osciloscopio). Con estos resultados construya una grfica: amplitud del estmulo versus amplitud de la respuesta. Con esta grfica se ilustran los conceptos de estmulo umbral, estmulo mximo, subumbral, y supraumbral. Nota: cuando la magnitud del estmulo es suficientemente grande aparecern

varios componentes (distinguidos con latencias diferentes) en nuestro registro. Se recomienda hacer el anlisis en el primer componente, el cual corresponde a la poblacin de fibras ms rpidas. Describa sus observaciones en la hoja de resultados 2. Determinacin de los parmetros de reobase y cronaxia. Con el componente que aparece primero. Se selecciona un estmulo con 5 ms de duracin y se busca la amplitud del estmulo que nos dar la respuesta mnima (estmulo umbral), en seguida se reduce gradualmente la duracin del estmulo y se busca la amplitud necesaria para la respuesta umbral. De esta manera se obtienen varios puntos. Con estos datos construya una grfica: duracin del estmulo versus amplitud del estmulo. En esta grfica (curva de excitabilidad) se analizan los conceptos de reobase, cronaxia y estmulos subumbrales y supraumbrales. Describa sus observaciones en la hoja de resultados. 3. Determinacin de la velocidad de conduccin. Se aplica un estmulo mximo de corta duracin y se selecciona el primer componente del registro para la determinacin de este parmetro. Se aplican estmulos mximos variando la distancia entre los electrodos de estimulacin y los electrodos de registro (los electrodos de estimulacin pueden irse acercando gradualmente a los electrodos de registro o viceversa. Se construye una grfica: distancia entre electrodos versus latencia. En esta grfica se calcula la velocidad de conduccin y se demuestra adems que esta es constante a lo largo de la fibra nerviosa. 4. Identificacin del tipo de fibras en base a su velocidad de conduccin. Con la escala de la base de tiempo del osciloscopio seleccionada en 1.0 ms/divisin seleccionado un estmulo de duracin de 0.05 ms se procede a ir incrementando gradualmente su amplitud hasta observar el mayor nmero de componentes posibles, se mide la latencia de cada uno de ellos y se calcula su velocidad de conduccin. Esta maniobra ilustrar (en base a su velocidad de conduccin) los principales grupos que constituyen el nervio citico de la rana. Calcule las diferentes velocidades de conduccin y pase los datos a la hoja de resultados. 5. Efecto de los anestsicos locales sobre la conduccin nerviosa. Finalmente, se procede a colocar un trozo de algodn impregnado con xilocana al 2% entre los electrodos de registro y los de estimulacin (se recomienda colocarlo en la parte media del nervio). Se selecciona un estmulo mximo y se estimula repetitivamente con una frecuencia de 0.1 Hz, midiendo la amplitud del potencial de accin compuesto cada minuto hasta la desaparicin de la respuesta. Se grafica el tiempo versus la amplitud de la respuesta, esta grfica nos ilustrar el curso temporal del bloqueo con este anestsico local. Despus de haberse obtenido el bloqueo completo, el nervio se retira de la cmara y se coloca en un vaso de precipitado conteniendo un volumen suficiente de Ringer o solucin salina, dejndolo unos 5 minutos, tiempo despus del cual se retira y se vuelve a colocar sobre la cmara de registro. Se vuelve a estimular y se observar la recuperacin de la respuesta, lo cual ilustra el efecto reversible del bloqueo con la xilocana.

RESULTADOS Describa y discuta las observaciones realizadas y enumere las conclusiones correspondientes a cada objetivo.

BIBLIOGRAFA 1) Guyton, A.C. and Hall, J.E. Membrane Potentials and Action Potentials. In Textbook of Medical Physiology. 10a ed., Saunders. Philadelphia. pp 52-66. 2000. 2) Ganong, W.F. Excitable tissue: Nerve. In: Review of Medical Physiology. 20a edition. Lange Medical Books/McGraw-Hill. New York. pp 49-61. 2001 3) McCormick, D.A. Membrane Potential and Action Potential. In Fundamental Neuroscience. (Zigmond, M., Bloom, F., Landis, S., Robertis, J. and Squire, L. eds). Ist. ed. Pp. 129-154. Academic Press, London UK. 4) Koester, J. and Siegelbaum, S.A. Propagated Signaling: The Action Potential. In Principles of Neural Science.(Kandel, E., Schwartz, J. and Jessell, T. eds.). 4th. ed., pp. 150-170. Mc Graw Hill.

PROPIEDADES DEL MUSCULO ESQUELETICO INTRODUCCIN El msculo esqueltico se caracteriza por presentar estriaciones transversales cuando se observa con el microscopio. Las fibras individuales son relativamente largas en relacin a su dimetro y contiene muchos ncleos a lo largo de toda la fibra. Cada clula (fibra) muscular est rodeada de una membrana, el sarcolema, y grupos de fibras musculares se agrupan formando haces o fascculos musculares que se mantienen unidos por tejido conectivo. Los fascculos se agrupan para formar los msculos. (Fig. 1) La caracterstica ms notable del msculo esqueltico es la capacidad que tiene de contraerse (acortarse) y al hacerlo producir tensin y trabajo. Los msculos esquelticos estn unidos al esqueleto y su contraccin causa que los huesos articulados se muevan y realicen todos los movimientos corporales. La energa para la contraccin se deriva de la degradacin del trifosfato de adenosn (ATP) que desencadena una cascada de eventos fisicoqumicos que involucran el deslizamiento de los filamentos de la contraccin (actina y miosina) dentro del msculo. Como en cualquier proceso bioqumico, la temperatura juega un papel muy importante en estas reacciones. Cuando una fibra muscular es activada por un impulso nervioso proveniente de una motoneurona, la fibra se contrae completamente (RESPUESTA TODO O NADA). La graduacin de la contraccin tan caracterstica del msculo completo, est determinada por variaciones en el nmero de fibras musculares que participan en la contraccin. Bajo circunstancias normales, la fuerza de la contraccin se lleva a cabo dependiendo del nmero de fibras que se activan. Siempre debe tenerse en mente que la relacin entre fibras musculares que inerva una neurona motora es mayor que la unidad; es decir, una motoneurona inerva siempre ms de una fibra muscular, la relacin de inervacin vara para cada unidad motora desde 1/100 hasta 1/600 en el msculo esqueltico. En un animal experimental en el que la activacin del msculo se lleva a cabo por la aplicacin directa de estmulos elctricos, se pueden demostrar muchas de las caractersticas fundamentales del msculo esqueltico. Aunque un amplio espectro de estmulos pueden emplearse, los que ms fcilmente se controlan son los elctricos. Si los electrodos se insertan directamente en la masa muscular y se aplican estmulos aislados de intensidad creciente, se llegar al estmulo umbral, que se caracteriza por provocar una contraccin dbil debido a que nicamente se estimulan las fibras musculares ms excitables. Si se contina incrementando la intensidad de los estmulos, las contracciones musculares (sacudidas simples) sern de mayor fuerza hasta llegar a un estmulo de intensidad tal que ya no provocar incremento en la fuerza de las contracciones (estmulo mximo). Mayores incrementos en la intensidad de los estmulos (estmulos supramximos), no incrementarn la fuerza de las contracciones.

Es sabido que no todas las fibras musculares tienen el mismo umbral de excitacin y que la contraccin mxima de un msculo durante una sacudida, ocurre solo cuando la dispersin de la corriente estimulante (estmulo mximo) alcanza el umbral de todas las fibras del msculo. Por lo tanto, un incremento de la intensidad de los estmulos ms all de un cierto punto (estmulos supramximos), no provocarn una mayor fuerza de contraccin, ya que todas las fibras se estn contrayendo. Hay que hacer notar que la contraccin no ocurre inmediatamente despus de la aplicacin del estmulo. Es decir, se requiere un cierto tiempo para que el acople excitacin-contraccin ocurra. A este pequeo intervalo de tiempo entre la aplicacin del estmulo y la aparicin de la sacudida se le llama periodo de latencia. El efecto de la carga sobre el msculo puede ser fcilmente demostrada en la preparacin muscular. Una propiedad fundamental de las fibras musculares en general es que, dentro de ciertos lmites, al incrementar la longitud de reposo de un msculo este se contrae con mayor fuerza. Este fenmeno es semejante a la Ley de Starling del corazn. As, estmulos aislados de intensidad mxima darn lugar a sacudidas ms intensas (dentro de ciertos lmites), cuando antes del estmulo se ha incrementado la tensin de reposo del

msculo. Naturalmente que una tensin de reposo que jale tanto a la fibra, provocar separacin de los miofilamentos en la sarcmera, y diminuir la capacidad de contraccin del msculo. Dependiendo de la carga contra la que tiene que contraerse, el msculo puede contraerse de dos maneras: a) si el msculo mueve una carga una cierta distancia, la contraccin se llama isotnica (del gr. isos=igual y tono=tensin) y b) si el msculo se fija por los extremos para impedir el acortamiento durante la contraccin, se le llama contraccin isomtrica (del gr. isos=igual y metro=medida). Durante los movimientos corporales, las contracciones musculares son generalmente combinaciones de ambos tipos y depende de si los huesos articulados son movidos o no. Si en lugar de estmulos nicos se aplican al msculo estmulos repetitivos, se producir una serie sucesiva de sacudidas. Si la frecuencia es lo suficientemente alta, el msculo no alcanzar a relajarse entre los estmulos y si estos son de mayor frecuencia, las contracciones se fundirn en una contraccin sostenida, llamada contraccin tetnica, la cual ejerce una fuerza mucho mayor que la sacudida simple. Se cree que durante la sacudida simple, el msculo no es capaz de liberar toda la energa almacenada en sus fibras aunque todas estn participando en la contraccin. Un fenmeno interesante puede, algunas veces, observarse durante la etapa inicial de un tren de sacudidas simples. Al aplicar un estmulo nico de intensidad mxima, el msculo se contrae. Con estmulos sucesivos se ir contrayendo ms intensamente por pequeos incrementos, apareciendo el registro grfico de la plumilla parecido a una escalera. Por esta razn al fenmeno se le ha llamado fenmeno de la escalera o treppe. Se cree que este incremento en la contractilidad puede deberse al ligero incremento en la temperatura de las fibras musculares durante las contracciones sucesivas. Otra teora postula que el Ca++ liberado no es completamente reabsorbido al retculo sarcoplsmico, quedando pues, mas Ca++ libre en el citosol incrementando as la fuerza de contraccin. Las fibras musculares no pueden permanecer contradas por tiempo indefinido al estar realizando un trabajo. Despus de un corto tiempo de estimulacin, el msculo pierde la capacidad para ejercer tensin. Se ha demostrado que esta prdida de la contractilidad se debe a la acumulacin de productos de desecho y a la deplecin de energa almacenada, es decir el msculo presenta fatiga muscular. Aunque un corto perodo de descanso dar lugar a que la circulacin remueva los productos de desecho, un tiempo mucho mayor se requiere para la sntesis de nuevos compuestos ricos en energa. En general, la fatiga muscular depende la frecuencia de estimulacin; se presenta pronto con estmulos frecuentes y ms lentamente con estmulos de menor frecuencia. OBJETIVOS Examinar las propiedades del msculo esqueltico cuando se estimula directamente. Para llevar a cabo lo anterior se debern realizar las siguientes mediciones: Con estmulos aislados: 1) Estmulo umbral para la contraccin

2) Estmulo mximo para la contraccin mxima (sacudida simple) a) Periodo de latencia b) Tiempo de contraccin c) Tiempo de relajacin d) Duracin de la sacudida simple e) Fuerza de la contraccin de la sacudida simple f) Estmulos supramximos 3) Efecto de la tensin de reposo sobre la fuerza de contraccin 4) Fatiga con estmulos aislados Con estmulos repetitivos a) Fenmeno de la escalera b) Suma de las contracciones c) Contraccin tetnica d) Fatiga tetnica MATERIAL Y EQUIPO 1) Fisiografo (un canal) 2) Migrafo tipo C 3) Tornillo de tensin 4) Juego de pesas esas 5) Electrodos de estmulo de tipo alfiler 6) Cable estimulador 7) Tabla para rana 8) Soporte universal 9) Regla 10) Estilete 11) Disectores de vidrio 12) Hilo camo doble cero 13) Canalizador de pulsos 14) Ringer rana y 15) Estuche de disecciones. PROCEDIMIENTO Calibre un canal del Fisigrafo utilizando un transductor migrafo tipo C, de tal manera que 2.5 cm = 100 g. Preparacin muscular (Fig. 2). Destruya el cerebro y la mdula espinal de una rana. Colquela sobre la tabla para rana y proceda a retirar la piel de la pata izquierda. Con los disectores de vidrio diseque el msculo gastrocnemio en toda su longitud. Amarre el tendn de aquiles (porcin distal) con un hilo doble cero de unos 15 cm de longitud, deje un pequeo espacio entre el hilo y el tendn para que el hilo no se resbale durante las maniobras experimentales. Con la solucin de Ringer rana mantenga hmedo el msculo a lo largo del experimento. Corte el tendn entre el nudo del hilo y su insercin en el hueso calcneo y eleve el msculo gastrocnemio. Antes de fijar la rana a la tabla, pase un hilo doble por cada uno de los orificios que la atraviesan. Tome a la rana y pase la pata por las asas dejadas por los hilos dobles hasta llegar a la porcin proximal de la tibia (rodilla). Jale los hilos fuertemente para que la rodilla y los huesos de la pierna queden firmemente apretados a la superficie de la tabla. Fije los hilos a los sujetadores que se encuentran a los lados de la misma. Tome el cabo suelto del hilo amarrado al tendn y haga un nudo dejando una pequea asa e introdzcala en la palanca del transductor. Inserte los electrodos de estmulo de alfiler en los extremos distal y proximal de la masa muscular. MANIOBRAS EXPERIMENTALES Estmulo umbral para la contraccin. Conecte los electrodos de alfiler al estimulador, va cables del estimulador. Ajuste la sensibilidad a aproximadamente 2.5 cm de amplitud del registro = 100 g. Aplique una ligera tensin al msculo con el tornillo de tensin. Ponga

el deslizamiento del papel a una velocidad de 2.5 mm/seg, comience a estimular con pulsos de 2 mseg. de duracin. Utilizando estmulos aislados, incremente lentamente la intensidad de los estmulos iniciando con 0 voltios hasta observar la primera contraccin (sacudida simple). Este es el estmulo umbral. Estmulo mximo para la contraccin mxima. Contine incrementando la intensidad de los estmulos hasta que las sacudidas alcancen la mxima amplitud. Al estmulo mnimo que alcanzo a provocar la mxima fuerza de contraccin se la llama estmulo mximo. Contine incrementando la intensidad de los estmulos y observe que estos ya no provocarn mayor intensidad en la amplitud de las sacudidas. A los estmulos de intensidad mayor que ya no incrementaron la amplitud de las contracciones, se les llama estmulos supramximos. Con los resultados de voltaje y amplitud de las sacudidas llene la Tabla 1. Con los datos de la Tabla 1, haga una grfica en donde la variable independiente (abscisas) es el voltaje aplicado con cada estmulo y la variable dependiente (ordenadas) la amplitud de las correspondientes sacudidas. TABLA 1. Efecto de la intensidad del estmulo sobre la magnitud de la contraccin muscular. Estmulo umbral, estmulo mximo, estmulos supramximos, sumacin espacial. INTENSIDAD DEL ESTMULO AMPLITUD DE LA RESPUESTA

Duracin de la sacudida simple. Con estmulos de 2 ms de duracin y el voltaje del estmulo mximo ponga a deslizar el papel a una velocidad de 10 cm/seg. Mientras el papel se est deslizando, aplique unos 3 estmulos aislados y pare el papel. Mida la duracin de la sacudida simple. Identifique en el mismo trazo el periodo de latencia, el tiempo de contraccin y el tiempo de relajacin. Fuerza de la contraccin. Con la calibracin de la amplitud del registro de 2.5 cm = 100 g, calcule en el mismo registro la fuerza de la contraccin de la sacudida simple. EFECTO DE LA CONTRACCIN TENSIN DE REPOSO SOBRE LA FUERZA DE

Ajuste la sensibilidad del registro si es necesario (mayor o menor sensibilidad debe utilizarse dependiendo de la fuerza del msculo). Con el tornillo de tensin disminuya la tensin del msculo hasta que el hilo que une el msculo con el transductor ejerza la mnima tensin. Escoja el estmulo mximo y aplicando estmulos aislados inicie la

estimulacin con una tensin de reposo muy ligera. Incremente la tensin progresivamente y en cada vuelta del tornillo de tensin estimule al msculo. Contine incrementando la tensin de reposo y aplicando los estmulos correspondientes hasta que la amplitud del las contracciones alcance un mximo y empiecen a disminuir. Mida la tensin de reposo y la amplitud de la respuesta al estmulo en cada vuelta del tornillo. Con los resultados de tensin de reposo y amplitud de la sacudida, llene la Tabla 2. Con los datos de la Tabla 2, haga una grfica en donde la variable independiente (abscisas) es la tensin de reposo y la dependiente (ordenadas) la amplitud de las sacudidas. Calibre el registro con una pesa de magnitud adecuada y exprese la tensin de reposo y la fuerza de las contracciones en gramos. Determine en la grfica la tensin de reposo que dio lugar a la mxima fuerza de contraccin y la tensin de reposo en la que las contracciones empiezan a ser ms dbiles.

TABLA 2. Efecto de la tensin de reposo sobre la fuerza de las contracciones. TENSIN DE REPOSO AMPLITUD DE LAS CONTRACCIONES

FATIGA DE LA CONTRACCIN CON ESTMULOS AISLADOS Ajuste la velocidad del papel a 0.10 cm/seg. Aplique al msculo una tensin de reposo adecuada, seleccione el estmulo mximo de 2 ms de duracin y aplique un estmulo cada 2 segundos hasta que se aprecie una disminucin clara de la fuerza de contraccin. Grafique la altura de la contraccin versus al tiempo como una medicin de fatiga(*). Con cuidado desmonte la preparacin muscular y vuelva a montarla en la otra pata. Antes de continuar con el siguiente objetivo, encuentre el estmulo mximo y la tensin de reposo adecuada. EFECTO DE ESTIMULOS REPETITIVOS Ajuste la sensibilidad para poder registrar sacudidas musculares con una amplitud adecuada. Ajuste la tensin de reposo al punto donde obtuvo la mxima contraccin en el

punto anterior. Seleccione el voltaje del estmulo mximo. Con la velocidad del papel a 0.1 cm/seg estimule al msculo con varias frecuencias iniciando con 2 estmulos/seg durante 3 seg. Detenga el papel, seleccione 5 estmulos/seg, ponga en marcha el papel y estimule durante 3 seg. Pare el papel y repita las maniobras con frecuencias de 7.5, 10, 20, 25 y 50 estmulos/seg. Observe como las sacudidas no regresan al nivel de reposo, aumentan de intensidad y se van fundiendo en una sola contraccin cuando aumenta la frecuencia de estimulacin. Determine la frecuencia con la que se alcanza la contraccin tetnica. Calibre el registro usando una pesa adecuada y determine la relacin en gramos entre una sacudida simple y la contraccin tetnica. Determine si el msculo presenta signos de fatiga (*). FATIGA DE LA CONTRACCIN DURANTE LA ESTIMULACIN TETNICA Ajuste el desplazamiento del papel a 0.1 cm/seg. Seleccione el estmulo mximo. Ponga la perilla de frecuencia del estimulador en 25 pulsos/seg y estimule el msculo nuevamente durante dos minutos. Repita el procedimiento una vez ms para observar la fatiga de las fibras musculares. (*)Aunque es difcil definir la fatiga, suponemos que esta existe cuando la tensin ha cado un 37% de su valor inicial. RESULTADOS: 1. Umbral de la contraccin____ voltios. 2. Voltaje del estmulo mximo____ voltios. 3. Duracin del periodo de latencia____seg. 4. Duracin de la sacudida simple_____seg. Duracin del perodo contraccin_____seg. Duracin del periodo de relajacin ____ seg. 5. Fuerza de contraccin mxima de la sacudida simple_____ g. 6. Tensin de reposo en la cual se obtuvo la fuerza de contraccin mxima____g 7. *Tiempo de fatiga con estmulos aislados_____ min. 8. Fuerza mxima de la concentracin tetnica______ g. 9. Relacin de la sacudida simple-ttanos ______ 10. *Tiempo de fatiga con el estmulo tetnico____ seg. CUESTIONARIO 1. 2. 3. Qu es el umbral de contraccin? Qu es un estmulo mximo? En relacin con la contraccin isotnica e isomtrica, diga que tipo de contraccin ocurre durante la caracterizacin de la sacudida simple y que tipo de contraccin cuando se increment la tensin de reposo. Utilizando la grfica intensidad del estmulo-fuerza de la contraccin, explique la sumacin espacial. Describa brevemente la relacin que hay entre el efecto de estmulos repetitivos con la suma de las contracciones. Mencione las causas de la fatiga muscular.

de

4. 5. 6.

7. 8.

Que elementos del msculo esqueltico se piensa que son los responsables de la tensin pasiva? Explique las causas del fenmeno de la escalera. Diga porque en esta prctica se utiliza el estimulador elctrico.

BIBLIOGRAFA 1) Andrew B.L. Muscle and Nerve. In: Experimental Physiology. Churchill Livingstone. Edinburgh. pp 19-57. 1972. 2) Ganong F.W. Skeletal Muscle. In: Review of Medical Physiology. Lange Medical Books/McGraw-Hill. New York. pp 62-74. 2001. 3) Guyton C.A. and Hall J.E. Contraction of Skeletal Muscle. In: Textbook of Medical Physiology. Saundres. Philadelphia. pp 87-94. 2000. 4) Hoff H.E. Geddes L.A. Properties of Skeletal Muscle. In: Experimental Physiology. Baylor University (Ed). Houston. USA. pp III-1-III-9. 1971. 5) Martin D.E. Neuromuscular Physiology. Electrical Stimulation of Nerve and Muscle Tissues. In: Laboratory Experiments in Human Physiology. Narco Bio System Inc. (Ed). Huston. pp 45-54. 1975. 6) Quintanar Stephano J.L. Propiedades del Msculo Esqueltico. En: Manual de Prcticas de Fisiologa General. Universidad Autnoma de Aguascalientes (Ed). Mxico. pp 91-96. 1989. 7) Schottelius B.A. Thomson J.D. Schottelius D.D. Stimulus-Response relationships in Skeletal Muscle. Nerve. In: Physiology Laboratory Manual. Mosby. Saint Louis. pp 31-40. 1978. 8) Schottelius B.A. Thomson J.D. Schottelius D.D. Mechanical Behaviour of Skeletal Muscle. Nerve. In: Physiology Laboratory Manual. Mosby. Saint Louis. pp 41-52. 1978. 9) Schottelius B.A. Thomson J.D. Schottelius D.D. Capacity of the Muscle to do Work. Nerve. In: Physiology Laboratory Manual. Mosby. Saint Louis. pp 53-57. 1978. 10) Sherwood L. Muscle Physiology. In: Human Physiology; From Cells to System. Brooks/Cole. USA. pp 239-258. 2001.

LA PREPARACIN NEUROMUSCULAR

INTRODUCCIN Las contracciones de un msculo pueden variar de intensidad. Un potencial de accin nico en una fibra muscular induce una contraccin dbil y de corta duracin llamada sacudida simple, y es incapaz de hacer un trabajo si esta ocurre en un msculo ntegro. En el msculo ntegro, las fibras musculares estn dispuestas de tal manera que al contraerse actan sinrgicamente produciendo contracciones de intensidad variable (mucho ms fuertes que la sacudida simple de una sola fibra). En otras palabras, la fuerza ejercida por el mismo msculo puede variar dependiendo del peso del objeto que se quiere mover. La gradacin de las contracciones musculares dependen de 1) el nmero de fibras musculares que se contraen y 2) la tensin desarrollada por cada unidad motora al activarse. El nmero de fibras que se contraen dentro de un msculo depende del nmero de unidades motoras activadas. Cada msculo est inervado por un cierto nmero de neuronas motoras (motoneuronas). Cuando una neurona motora entra a un msculo se ramifica en varias terminales nerviosas, y cada terminal nerviosa inerva a una fibra muscular individual. As, una neurona motora inerva a varias fibras musculares y cuando esta se activa, todas las fibras musculares que inerva se estimulan y se contraen simultneamente. Al conjunto de una motoneurona con las fibras musculares que inerva se llama unidad motora. Las fibras musculares de una unidad motora se distribuyen en la masa muscular, as, al contraerse simultneamente provocarn una contraccin dbil pero uniforme de todo el msculo. Cuando se requiere de una contraccin muscular dbil, solo unas pocas unidades motoras se activarn, mientras que requerimientos de mayor fuerza, requerirn de la participacin de un mayor nmero de unidades motoras. La manera ms conveniente para estudiar las propiedades de la unidad motora es la preparacin neuromuscular. La contraccin gradual del msculo esqueltico se puede lograr ya sea incrementando el nmero de motoneuronas activadas simultneamente (sumacin espacial) o incrementado la frecuencia de descarga de las motoneuronas individuales (sumacin temporal). La unin neuromuscular. La contraccin muscular esqueltica est bajo el control del sistema nervioso. El paso de la informacin de la terminal nerviosa al msculo ocurre en una estructura especializada llamada unin neuromuscular, sinapsis neuromuscular o placa motora terminal. (Fig. 1). El mecanismo por el cual la motoneurona activa a la fibra muscular a travs de la unin neuromuscular, es el siguiente (Fig. 1): 1. Al llegar el potencial de accin a la terminal nerviosa en la unin neuromuscular, el potencial de accin provoca un incremento en la conductancia al calcio, el cual ingresa a la terminal nerviosa.

2. En el interior, el calcio induce la migracin de las vesculas sinpticas ricas en acetilcolina (ACh) hacia la superficie de la membrana de la terminal que ve hacia la hendidura sinptica y se fusiona con ella. Esta fusin permite que la ACh sea liberada al espacio sinptico, fenmeno conocido como exocitosis. 3. Desde el espacio sinptico la ACh difunde hasta la placa motora terminal en la membrana muscular (membrana postsinptica) en donde se une a sus receptores especficos. 4. La interaccin ACh-receptor, abre canales de sodio y en menor nmero canales de potasio, incrementando la entrada de sodio y la salida de potasio, lo que despolariza localmente a la membrana de la placa motora. Si dicha despolarizacin alcanza el umbral de disparo de la fibra muscular, se desencadena un potencial de accin que viaja por el sarcoplasma hacia ambos extremos de la fibra y al interior de la misma por los tbulos T. 5. A nivel de la triada, el potencial de accin en los tubulos T provoca que el retculo sarcoplsmico libere al calcio almacenado, el cual difunde e interacta con los miofilamentos de actina de la sarcmera desencadenando el proceso de la contraccin muscular. Al mecanismo por el que el potencial de accin muscular desencadena la contraccin de la fibra, se le llama acople excitacin-contraccin. La transmisin del impulso nervioso a travs de la unin neuromuscular puede ser inhibido o facilitado por ciertas drogas. El curare y el falxedil son ejemplo de drogas

bloqueadoras, las cuales actan compitiendo por los receptores de la ACh en la membrana de la placa motora. La prostigmina por el contrario, facilita el paso de los impulsos a travs de la unin por medio de la inactivacin de la enzima acetilcolinesterasa, enzima que degrada a la ACh, permitiendo as, que esta acte ms tiempo sobre sus receptores. La unin neuromuscular, tambin es muy sensible a la fatiga y a su medio ambiente qumico. Estmulos repetidos de alta frecuencia inducen una disminucin de la respuesta contractil. A este fenmeno se le ha llamado Inhibicin de Wedensky, y se debe a que la velocidad de liberacin y degradacin de la ACh excede a la velocidad de su sntesis en las terminales nerviosas (fatiga nerviosa). OBJETIVOS Caracterizar las propiedades de la unin neuromuscular esqueltica de la rana, realizando las siguientes maniobras: 1. Estimular al nervio citico con estmulos aislados para encontrar los estmulos subumbral, umbral, mximo y supramximos capaces de provocar la contraccin mnima y mxima respectivamente del msculo gastrocnemio. 2. Estimular al msculo directamente con estmulos aislados para encontrar los estmulos subumbral, umbral, mximo y supramximo. 3. Caracterizar las contracciones musculares al estimular repetitivamente al nervio. 4. Comparar el tiempo de fatiga de la unin neuromuscular y el tiempo de fatiga del msculo. 5. Observar el efecto del bloqueo de la unin neuromuscular sobre la actividad muscular. MATERIAL Y REACTIVOS Biolgico: Rana Equipo: 1) Fisiografo (un canal) 2) Transductor migrafo tipo C 3) Estimulador elctrico 4) Canalizador de pulsos 5) Electrodos de estmulo de ganchillo y de alfiler 6) Juego de pesas 7) Estativo 8) Tornillo de tensin 9) Estuche de disecciones 10) Disectores de vidrio 11) Estilete 12) Hilo fuerte 13) Jeringa de 3 ml. Soluciones: 1) Ringer rana a temperatura ambiente 2) Tubocurarina (1 mg/ml) (Sigma). Calibre el canal del fisigrafo con un transductor migrafo tipo C. Utilizando una pesa adecuada, calibre la amplitud del registro a 2.5 cm = 50 g. Preparacin neuromuscular Destruya el cerebro y la mdula espinal de una rana y colquela sobre la mesa de disecciones. Corte circularmente la piel de la porcin proximal de uno de los muslos. Jlela hacia abajo para retirar toda la piel del muslo y de la pierna (sale como si fuera un caletn). Con los disectores de vidrio diseque el msculo gastrocnemio en toda su longitud. Amarre

el tendn de Aquiles (porcin distal) con un hilo doble de unos 15 cm de longitud, deje un pequeo espacio entre el hilo y el tendn para que el hilo no se resbale durante las maniobras experimentales. Con la solucin de Ringer rana mantenga hmeda la preparacin a lo largo del experimento. Corte el tendn entre el nudo del hilo y su insercin en el hueso calcneo y eleve el msculo gastrocnemio. Coloque a la rana en decbito ventral. Con cuidado y utilizando los disectores de vidrio diseque, a todo lo largo del muslo el nervio citico, localizado entre los msculos semimembranoso y glteo. Antes de fijar la rana a la tabla del estativo, pase un hilo doble por cada uno de los orificios que la atraviesan. Tome a la rana y pase la pata por las asas dejadas por los hilos dobles hasta llegar a la porcin proximal de la tibia (rodilla). Jale los hilos fuertemente para que la rodilla y los huesos de la pierna queden firmemente apretados a la superficie de la tabla. Fije los hilos a los sujetadores que se encuentran a los lados de la misma. Tome el cabo suelto del hilo amarrado al tendn y haga un nudo dejando una pequea asa e introdzcala en la palanca del transductor migrafo. Inserte los electrodos de estmulo de alfiler en los extremos distal y proximal de la masa muscular. Con cuidado monte el nervio citico sobre los electrodos de ganchillo, teniendo cuidado que el electrodo no toque ningn otro tejido de la rana . Establezca la velocidad del papel a 0.25 cm/seg y realice las siguientes maniobras: 1) Determinacin de los estmulos de intensidad subumbral, umbral, mxima y supramxima del nervio a travs de su efecto sobre la contraccin muscular (sumacin espacial). Con el tornillo de tensin ajuste la tensin del msculo y estimule el nervio con estmulos nicos de 2 mseg de duracin y con voltaje creciente, desde cero hasta observar las respuestas mnima y mxima del msculo. Anote la intensidad de los diferentes estmulos aplicados y la magnitud de las contracciones. Con los datos llene la Tabla 1 e identifique los voltajes de los estmulos; umbral, mximo y supramximos. 2) Determinacin de los estmulos de intensidad subumbral, umbral, mximo y supramximo estimulando directamente al msculo (sumacin espacial). Estimule directamente al msculo con estmulos nicos de 2 mseg de duracin y con voltaje creciente desde cero hasta observar las respuestas mnima y mxima del msculo. Anote la intensidad de los diferentes estmulos aplicados y la magnitud de las contracciones. Con los datos llene la Tabla 2 e identifique los estmulos umbral, mximo y supramximo. 3) Efecto de estmulos repetitivos (sumacin temporal del msculo). Con el estmulo mximo del nervio, estimule al nervio con frecuencias de 3, 5, 7.5, 10, 15, 20 y 25 pulsos/seg durante 3 seg en cada punto. Permita que la preparacin descanse 5 seg entre cada tren de estmulos. Note la suma de las contracciones y determine si se han presentado el ttanos y la fatiga. 4) Fatiga de la unin neuromuscular (efecto de estmulos repetitivos):

Asegrese de que el canalizador de pulsos este conectado al nervio a) Seleccione en el estimulador, estmulos de 2 mseg de duracin, cero de frecuencia y el voltaje del estmulo mximo al nervio. b) Iniciando con 0 de frecuencia, incremente gradualmente la frecuencia de los estmulos hasta alcanzar una contraccin tetnica sostenida. Mantenga el ttanos hasta que la fuerza de la contraccin del msculo haya cado a la mitad de la amplitud mxima. c) Rpidamente ajuste el voltaje del estmulo mximo al msculo y cambie la palanca del canalizador de pulsos para que los estmulos pasen directamente al msculo. Observe como se incrementa la amplitud de la contraccin tetnica. Esta mayor capacidad de respuesta del msculo a la estimulacin directa se debe a que la unin neuromuscular se ha fatigado. Para comprobarlo, cambie al voltaje del estmulo mximo al nervio y cambie el canalizador de pulsos para estimular al nervio y observe como la amplitud de la contraccin tetnica disminuye an ms. Pase de nueva cuenta a estimular el msculo directamente y observe el resultado. Con cuidado desmonte la preparacin neuromuscular y vuelva a montarla en la otra pata. Antes de continuar ajuste la tensin de reposo del msculo y encuentre el estmulo mximo del nervio y del msculo capaces de provocar una contraccin muscular mxima. Calibre el registro de tal manera que 2.5 cm de amplitud = 50 gr. Ajuste la velocidad del papel a 0.1 cm/seg. 5) Bloqueo de la unin mioneural: a) Con la jeringa, vierta directamente sobre la masa muscular la solucin tubocurarina y espere 2 o 3 minutos para asegurarse de que la droga se haya difundido al interior de la masa muscular. b) Estimule directamente al nervio con estmulos de 2 mseg. de duracin y frecuencia de 2/seg durante 3 seg cada 10 seg. Observe la respuesta contrctil conforme avanza el tiempo y contine estimulando hasta que ya no haya ms contracciones. c) Con el canalizador de pulsos pase a estimular directamente al msculo con el estmulo mximo del msculo y observe la amplitud de las contracciones. Como un control, reestimule al nervio con el mismo voltaje usado en el msculo. Observe el bloqueo completo de la unin neuromuscular. RESULTADOS: TABLA 1. Respuesta contrctil del msculo a la estimulacin nerviosa en la preparacin neuromuscular. Determinacin de los estmulos: umbral, mximo y supramximo.

VOLTAJE

AMPLITUD DE LA CONTRACCIN

Con los datos de la Tabla 1, haga una grfica con el voltaje en las abscisas y la amplitud de las contracciones en las ordenadas. Exprese la amplitud en gramos. Seale en la curva los estmulos subumbrales, umbral, mximo y supramximos. TABLA 2. Respuesta contrctil del msculo a la estimulacin muscular directa. Determinacin de los estmulos: umbral, mximo y supramximo. VOLTAJE AMPLITUD DE LA CONTRACCIN

Con los datos de la Tabla 2, haga una grfica con el voltaje en las abscisas y la amplitud de las contracciones en las ordenadas. Exprese la amplitud en gramos. Seale en la curva los estmulos subumbrales, umbral, mximo y supramximos. Complete las siguientes datos. Fuerza de contraccin (en gramos) de la sacudida simple al estimular el nervio_____g; al estimular el msculo____g Fuerza de la contraccin mxima durante el ttanos al estimular el nervio_____g; al estimular el msculo______g. Relacin de la fuerza de contraccin en ttanos/sacudida simple al estimular el nervio________. Tiempo de la fatiga de la unin neuromuscular ________s. Tiempo de la fatiga muscular ______s. CUESTIONARIO 1) Explique porque al incrementarse la intensidad del estmulo al nervio se incrementa la amplitud de las contracciones. 2) Explique porque al incrementarse la intensidad del estmulo al msculo se incrementa la amplitud de las contracciones.

3) A qu se debe que la intensidad del estmulo umbral sea diferente en el nervio y en el msculo? 4) Por qu al incrementarse la frecuencia de los estmulos al nervio se obtiene una mayor fuerza de contraccin en comparacin con la de la sacudida simple? 5) Cuales son las causas de la fatiga de la unin neuromuscular y cuales las de la fatiga muscular? 6) Explique el mecanismo de accin del curare en el bloqueo de la unin neuromuscular. 7) Investigue los efectos de la toxina botulnica, del veneno de la araa viuda negra y el gas mostaza sobre la unin neuromuscular. Investigue en que consiste la enfermedad autoinmune conocida como Mistenia gravis. BIBLIOGRAFA 1) Andrew B.L. Muscle and Nerve. In: Experimental Physiology. Churchill Livingstone. Edinburgh. pp 19-57. 1972. 2) Ganong F.W. Neuromuscular Transmission. In: Review of Medical Physiology. Lange Medical Books/McGraw-Hill. New York. pp 110-112. 2001. 3) Guyton C.A. and Hall J.E. Excitation of Skeletal Muscle; A. Neuromuscular Transmission and B. Excitation-Contraction Coupling. In: Textbook of Medical Physiology. Saundres. Philadelphia. pp 87-94. 2000. 4) Hoff H.E. Geddes L.A. The Nerve-Muscle Preparation. In: Experimental Physiology. Baylor University (Ed). Houston. USA. pp IV-1 IV-6. 1971. 5) Martin D.E. Neuromuscular Physiology. Electrical Stimulation of Nerve and Muscle Tissues. In: Laboratory Experiments in Human Physiology. Narco Bio System Inc. (Ed). Huston. pp 45-54. 1975. 6) Quintanar Stephano J.L. Caractersticas Fisiolgicas de la Unin Mioneural. En: Manual de Prcticas de Fisiologa General. Universidad Autnoma de Aguascalientes (Ed). Mxico. pp 101-105. 1989. 7) Sherwood L. Neuromuscular Junction. The Peripheral Nervous: Efferent Division. In: Human Physiology; From Cells to System. Brooks/Cole. USA. pp 231-236. 2001.

MOTILIDAD DEL MUSCULO LISO INTESTINAL AISLADO INTRODUCCIN En el organismo, el msculo liso se encuentra en una gran variedad de localizaciones, entre las que destacan: 1) el tubo digestivo 2) las paredes de los vasos sanguneos 3) las vas areas, especialmente bronquolos 4) el tracto genitourinario 5) los msculos ciliar e iris en el ojo 6) los msculos piloerectores y 7) conductos glandulares exocrinos. Los msculos esqueltico, cardiaco y liso tienen similitudes y diferencias fundamentales, las cuales sern mencionadas aqu y demostradas en el curso de la prctica. El msculo liso puede experimentar contracciones lentas y sostenidas espontneas (sin estimulacin nerviosa); el msculo intestinal que se emplea en esta prctica se contraer por horas si el medio qumico que lo baa semeja las condiciones del medio interno del organismo. Todos los msculos lisos tienen un tono intrnseco o una tensin de reposo al que se superponen las contracciones musculares. Esto contrasta con el msculo esqueltico, en el que la denervacin provoca prdida del tono. El msculo liso (al igual que el msculo cardiaco) esta bajo el control exclusivo del sistema nervioso autnomo a travs de las divisiones simptica y parasimptica que lo inervan. Al igual que en el msculo esqueltico y cardiaco, la contraccin muscular del msculo liso se basa en la interaccin de los filamentos de actina y miosina, aunque la bioqumica de la contraccin en el msculo liso es ligeramente diferente, dando lugar a algunas de las propiedades contrctiles propias del msculo liso. El nombre de msculo liso se debe a que no presenta la organizacin estriada de los filamentos de actina y de miosina en las sarcmeras tpicas del msculo esqueltico y cardiaco. Los msculos lisos se dividen en dos categoras: a) msculo liso de multiunidades y b) msculo liso unitario (tambin llamado visceral o sincicial). En esta prctica estudiaremos el msculo liso unitario, en el que la activacin espontnea (intrnseca, inherente) o la estimulacin elctrica de una pequea rea de masa muscular resulta en la contraccin de toda la masa. Los mejores ejemplos de este tipo de msculos son los localizados en el tubo digestivo, tero y vejiga y los dems conductos genitourinarios. Estos tejidos presentan zonas con propiedades de marcapaso (como las del corazn), que dan lugar a las contracciones musculares rtmicas. La actividad contrctil puede ser afectada por el sistema nervioso que se sobrepone. El msculo liso de multiunidades no se contrae espontneamente y depende de la inervacin motora para contraerse. Un ejemplo de esto es el msculo piloerector de la base de los pelos en la piel, el que al ser estimulado y contraerse induce la conocida piel de gallina. El msculo ciliar, el iris y el msculo de los grandes vasos sanguneos son tambin ejemplos de msculo liso de multiunidades. El msculo liso intestinal est ricamente inervado por plexos nerviosos que rodean las capas longitudinal y circular. Una parte de este tejido exhibe contracciones circulares y longitudinales, en adicin a las contracciones peristlticas. El msculo responde al estiramiento incrementando su longitud pero tendiendo siempre a mantener el contenido bajo presin constante o en un estado de contraccin isotnica (tono basal). El msculo liso tambin responde a cambios en la temperatura, cuando esta aumenta, disminuye el umbral

elctrico para la contraccin muscular e incrementa la frecuencia (ritmicidad) y amplitud de las contracciones. La estimulacin elctrica intensa a menudo da lugar a contracciones sostenidas. Los diferentes rganos viscerales reaccionan de una manera diferente a un mismo estmulo qumico. Por ejemplo, la epinefrina (adrenalina) deprime la ritmicidad del msculo liso intestinal, provocando relajacin, mientras que en otros lugares como en el msculo liso arteriolar, induce una contraccin intensa. Por otro lado la acetilcolina (ACh), en pequeas cantidades incrementa la amplitud de las contracciones intestinales y a mayores cantidades produce una contraccin sostenida. OBJETIVOS 1) Observar y registrar las contracciones rtmicas espontneas del msculo liso intestinal aislado de conejo y b) estudiar los cambios en el tono, frecuencia y amplitud de las contracciones rtmicas en respuesta a las siguientes condiciones: 2) Efecto de drogas que mimetizan y bloquean las acciones del sistema nervioso parasimptico y simptico. 3) Efectos de cambiar la temperatura del medio 4) Efectos de la hipoxia MATERIAL Y MTODOSUIPO 1) Fisigrafo (un canal), 2) migrafo tipo B, 3) Pesa de 5 gr, 4) estativo y tornillo de tensin 5) hilo y estuche de disecciones, 6) llaves de paso, 7) caja de Petri, 8) solucin de ACh (1 mg/ml), 9) solucin de adrenalina (1 mg/ml), 10) solucin de prostigmina (0.5 mg/ml) 11) solucin de atropina (1 mg/ml), 12) Sistema de perfusin para rgano aislado de mamfero (Fig. 1) conformado por: a) Bao Mara a 38 C con bomba de perfusin y mangueras de conexin b) Termmetro c) Refrigerante d) Solucin Ringer para mamfero a 38 C con recipiente de reserva e) Solucin de Ringer para mamfero a 4 C f) Solucin de Ringer para mamfero a 40 C g) Sistema de oxigenacin (aireacin) (bomba de aire para pecera) h) Cmara para msculo liso con tapn y tubo en Y con mangueras y pinzas i) Recipiente para solucin de desecho PROCEDIMIENTO Analice, identifique y estudie en la Figura 1 cada una de las partes que componen el sistema para mantener vivo el intestino aislado de conejo (in Vitro). Encienda y calibre un canal del Fisigrafo con un migrafo tipo B, de tal manera que 5 gr desplacen la plumilla 4 cm. Ajuste la velocidad del papel a 0.5 cm/seg. Cheque la plumilla de tiempo y seleccione una marca por segundo. Levante la palanca de las

plumillas, pare el desplazamiento del papel y proceda o obtener el intestino delgado de un conejo. Disponga adecuadamente del cadver del conejo. Obtenga un tramo de 20 cm de intestino delgado de un conejo y colquelo rpidamente en la caja de Petri llena de Ringer precalentado y aireado. Crtelo en tramos de unos 3 cm de longitud. Tome un tramo y con una aguja curva pase en cada extremo y de dentro hacia fuera de la pared intestinal un hilo delgado (10 cm de largo) teniendo cuidado de no ocluir la luz intestinal. Con uno de los hilos haga una asa corta (0.5-1.0 cm). Despus de seguir las instrucciones de la nota*, proceda a montar rpidamente el intestino en la cmara de rgano aislado segn se ilustra en la Fig. 1. Observe como el asa de hilo se engarza en el ganchillo del tapn del fondo de la cmara, mientras que el otro se engarza en el ganchillo del migrafo. Cheque continuamente que el bao tenga una temperatura de 38 C y que el sistema de aireacin trabaje adecuadamente. *Nota: Llamaremos llave (1) a la que une al recipiente de Ringer con la cmara de intestino y llave (2) a la que drena el paso de la cmara de intestino con el recipiente de desecho. Con la llave 2 cerrada, abra la llave 1 y llene la cmara para msculo hasta la marca de 50 ml. El Ringer fluir por gravedad. Asegrese que el sistema de aireacin est burbujeando en el Ringer de la cmara. Proceda a montar el fragmento de intestino segn se explica en el prrafo anterior. PRECAUCIN: El msculo liso es extremadamente sensible a la sobre distensin. Si la tensin de reposo del msculo es muy grande, pierde sus propiedades contrctiles y su ritmicidad. Asimismo, es muy sensible a cambios en la temperatura, desecacin e hipoxia de tal manera que cambios extremos de estas variables deterioran rpidamente la preparacin. Con una velocidad del papel de 0.1 cm/seg y la plumilla de tiempo a una marca por cada 30 segundos obtenga el registro de la actividad contrctil espontnea del msculo liso. Reajuste la sensibilidad del Fisigrafo si es necesario. 1) RITMICIDAD INHERENTE Continuando con las condiciones anteriores, con el tornillo de tensin incremente gradualmente la tensin sobre el msculo y obtenga un registro adecuado. A las contracciones y relajaciones regulares se les llama movimientos pendulares y son producidos por las fibras musculares mismas (miognicos). Estos movimientos son diferentes de los movimientos peristlticos, los cuales dependen de la inervacin de la pared intestinal (neurognicos). Aplique tensin suficiente hasta observar contracciones de algunos centmetros de amplitud. Centre el registro sobre el papel. Una vez estabilizado el registro, obtenga un registro control durante 4 minutos. Determine la amplitud y la frecuencia de las contracciones. Cheque la temperatura y la oxigenacin (puede ser necesario esperar algunos minutos para que las contracciones se estabilicen).

2) EFECTO DE LAS DROGAS SIMPATICAS Y PARASIMPATICAS: a) Efectos de la acetilcolina (Ach) Con la velocidad del papel a 0.1 cm/seg y la plumilla de tiempo en 1 marca cada 30 seg, obtenga un registro control de 2-3 minutos (registro basal). Cambie la velocidad del papel a 0.5 cm/seg y la plumilla de tiempo a 1/seg. Vierta en la cmara de intestino 0.5 mg de Ach. Al mismo tiempo que vierte el frmaco, otro compaero presionar el botn marcador de eventos. Registre el efecto durante 2 minutos. Pare el registro y lave el msculo cambiando la solucin de Ringer abriendo primero la llave 2 para que salga la solucin de desecho. Cirrela y abra la llave 1 hasta que se llene la cmara hasta la marca de 50 ml, espere dos minutos y repita el lavado. Deje unos minutos para que se restablezca la ritmicidad basal**. Cheque continuamente que el sistema de burbujeo trabaje adecuadamente. Antes de continuar al punto b) determine en el registro lo siguiente: 1) periodo de latencia, 2) el cambio de tono muscular, 3) amplitud de los registros y 4) frecuencia de las contracciones. **Nota: Se siguen las mismas indicaciones de lavado despus de registrar los efectos de cada frmaco. b) Efectos de la adrenalina Con la velocidad del papel a 0.1 cm/seg y la plumilla de tiempo en 1 cada 30 segundos, obtenga un registro control de 2-3 minutos. Incremente la velocidad del papel a 1 cm/seg y ponga la plumilla de tiempo en 1/segundo y vierta en la cmara de intestino 0.1 mg de la solucin de adrenalina. Registre los cambios en el tono basal, amplitud y frecuencia de las contracciones. No olvide sealar simultneamente con el botn marcador de eventos para determinar el perodo de latencia. Observe el efecto durante 6-8 minutos, pare el fisigrafo, proceda a lavar la preparacin dos veces segn se describi y cuantifique las variables sobre el registro. Espere a que la preparacin recupere la ritmicidad basal. c) Efectos de la prostigmina Obtenga un registro control de 2 minutos y vierta 0.05 mg de la solucin de prostigmina en la cmara de intestino y registre los cambios en el tono basal, amplitud y

frecuencia de las contracciones durante 3-4 minutos. Sin lavar el msculo agregue 0.1 mg de la solucin de Ach a la cmara de intestino. No olvide sealar simultneamente con el botn marcador de eventos para determinar los periodos de latencia. Determine si ocurre un mayor incremento en el tono basal, intensidad y frecuencia de las contracciones. Lave el msculo 3-4 veces y espere hasta que se recupere la ritmicidad basal. d) Efectos de la atropina Obtenga un registro control de 2 minutos y vierta en la cmara 0.05 mg de la solucin de atropina. Registre los cambios en el tono basal, amplitud y frecuencia de las contracciones durante unos 5-8 minutos. Sin lavar el msculo agregue 0.5 mg de la solucin de Ach a la cmara de intestino. No olvide sealar simultneamente con el botn marcador de eventos para determinar los periodos de latencia. Registre los cambios en el tono basal, amplitud y frecuencia de las contracciones durante unos 4-5 minutos. Lave 2-3 veces y espere a que se recupere la ritmicidad basal. Observe: a) el efecto bloqueador de la atropina sobre la actividad muscular y b) si el efecto de la atropina es ms duradero que el de los dems frmacos. 3) EFECTO DE LA TEMPERATURA: Obtenga un registro control de 2 minutos y anote la temperatura en la cmara para msculo liso. Apague la bomba de perfusin, vace la cmara del msculo y vierta Ringer a 4 C. Anote la temperatura y registre los cambio en el tono basal, amplitud y frecuencia de las contracciones durante unos minutos. Vace la cmara y llnela con Ringer a 40 C. Anote la temperatura en la cmara y registre los cambios en el tono basal, amplitud y frecuencia de las contracciones durante 1 minuto. Encienda la bomba de perfusin, lave la preparacin dos veces y espere a que la ritmicidad basal se restablezca. EFECTO DE LA HIPOXIA: Obtenga un registro control de 2 minutos y desconecte la bomba de aireacin. Observe el efecto de la hipoxia sobre el tono basal, amplitud y frecuencia de las contracciones. Cuando el efecto se haya hecho aparente, conecte nuevamente el sistema de oxigenacin y vea si se recupera la ritmicidad basal. Apague el fisigrafo y desmonte el sistema del canal de registro. Apague el bao Mara y la bomba de aireacin. Desmonte la preparacin y lave y limpie todo el material que haya utilizado. Con los registros obtenidos en cada objetivo, llene la siguiente tabla: TABLA 1. RESUMEN DE LOS DATOS PROTOCOLO TONO BASAL EXPERIMENTAL RITMICIDAD INHERENTE BASAL ACETILCOLINA

AMPLITUD

FRECUENCIA

BASAL ADRENALINA BASAL PROSTIGMINA BASAL ATROPINA BASAL ATROPINA+Ach BASAL (38oC) TEMPERATURA BASAL HIPOXIA CUESTIONARIO 1) Enumere los diversos lugares en donde se encuentra el msculo liso e identifique el tipo de msculo liso que corresponde a cada uno de ellos (msculo liso unitario, msculo liso de multi-unidades). 2) Explique en que consiste el fenmeno de plasticidad del msculo liso 3) Que son los movimientos pendulares intestinales y cual es su origen? 4) Cmo se producen las ondas peristlticas intestinales? 5) Describa el mecanismo de control de los movimientos intestinales por el sistema nervioso. 6) Describa el mecanismo de accin de la Ach sobre la motilidad del msculo liso intestinal. 7) Sobre que msculos lisos se cree que la Ach tiene efecto vasodilatador? 8) Describa el mecanismo de accin de la adrenalina sobre la motilidad del msculo liso intestinal. 9) Si en el sistema nervioso simptico postganglionar solo se libera noradrenalina en sus terminales nerviosas, como se explica el efecto de la adrenalina sobre el msculo liso intestinal? 10) Describa el mecanismo de accin de la prostigmina 11) Que es la atropina, cual es su mecanismo de accin y cuales son sus efectos a nivel intestinal y a nivel cardiaco? 12) Explique porque es ms persistente el efecto de la atropina. Explique el objetivo que tiene el suministro de oxgeno, mantenimiento de la temperatura, la solucin Ringer y el sistema de lavado del dispositivo experimental. BIBLIOGRAFA

1) Andrew B.L. Mammalian Intestinal Muscle in Vitro. In: Experimental Physiology. Alimentary Canal and Kidney. Churchill Livingstone. Edinburgh. pp 249-250. 1972. 2) Armstrong G.G. Caractersticas del msculo liso. En: Manual de Prcticas de Fisiologa. Editorial Interamericana. Mxico. pp 37-39. 1970. 3) Ganong F.W. Smooth Muscle. In: Review of Medical Physiology. Lange Medical Books/McGraw-Hill. New York. pp 78-80. 2001. 4) Guyton C.A. and Hall J.E. Contraction and Excitation of Smooth Muscle. In: Textbook of Medical Physiology. Saunders. Philadelphia. pp 87-94. 2000. 5) Guyton C.A. and Hall J.E. General Principles of Gastrointestinal Function-Motility, Nervous Control, and Blood Circulation In: Textbook of Medical Physiology. Saunders. Philadelphia. pp 718-723. 2000. 6) Hoff H.E. Geddes L.A. Properties of Smooth Muscle. In: Experimental Physiology. Baylor University (Ed). Houston. USA. pp V-1 to V-8. 1971. 7) Martin D.E. Neuromuscular Physiology. Motility of Isolated Intestinal Smooth Muscle. In: Laboratory Experiments in Human Physiology. Narco Bio System Inc. (Ed). Huston. pp 61-65. 1975. 8) Quintanar Stephano J.L. Propiedades del Msculo Liso. En: Manual de Prcticas de Fisiologa General. Universidad Autnoma de Aguascalientes (Ed). Mxico. pp 123-126. 1989. 9) Sherwood L. Muscle Physiology. Smooth and Cardiac Muscle In: Human Physiology; From Cells to System. Brooks/Cole. USA. pp 270-278. 2001.

PROPIEDADES DEL MUSCULO CARDIACO

CONOCIMIENTOS PREVIOS: Para comprender la presente prctica, es necesario que el alumno domine conceptos tericos como los siguientes: 1) 2) 3) 4) Diferencias entre sincicio (sincitio) estructural y sincitio funcional Unin comunicante del tipo Nexo Potencial de membrana en reposo y potencial de accin Papel de los iones Na+, K+ y Ca++ en el potencial de membrana en reposo y en el potencial de accin del msculo cardaco 5) Inervacin y efectos del sistema nervioso autnomo sobre el corazn 6) Ritmicidad inherente o automatismo cardiaco 7) Perodo refractario.

INTRODUCCIN: Por la disposicin del sus elementos contrctiles en el sarcoplasma, los msculos cardaco y esqueltico son de tipo estriado. En el msculo cardiaco al igual que en el msculo liso, las fibras musculares forman un sincicio funcional. El carcter sincicial est dado por la presencia de uniones intermembranales de tipo nexo (uniones comunicantes), localizadas entre las membranas de los discos intercalares de dos fibras adyacentes. Las uniones tipo nexo, son sitios de baja resistencia elctrica que permiten el paso de la corriente despolarizante de una fibra a otra permitiendo la conduccin del potencial de accin de una fibra a la siguiente. Debido a lo anterior, un potencial de accin que se origine en cualquier lugar del miocardio, viajar a las fibras adyacentes, teniendo como consecuencia la contraccin de carcter todo o nada de la masa muscular. Al igual que el msculo esqueltico, el msculo cardiaco tambin se caracteriza por la capacidad que tiene de incrementar la fuerza de contraccin de sus fibras (dentro de ciertos lmites), cuando se incrementa la longitud de reposo (distole). A este fenmeno se le conoce como Ley de Frank-Starling del corazn.. El msculo cardiaco posee varios tipos de fibras musculares, aqu mencionaremos las fibras de trabajo y las fibras del sistema de excitacin y conduccin. Las fibras de trabajo auriculares y ventriculares son las responsables de mover la sangre y hacerla circular por las cavidades cardiacas y la circulacin general, mientras que las del sistema de excitacin y conduccin del corazn son las que se encargan de generar los impulsos cardiacos (automatismo, ritmicidad inherente) y conducir los impulsos cardiacos a todo el corazn de una manera tal que el corazn se contrae de una manera sincronizada, convirtindolo en una bomba eficiente. Esta sincrona en la contraccin del corazn, permite distinguir dos fases de la actividad cardiaca fcilmente identificables; la sstole

(contraccin) y la distole (relajacin). La propiedad del automatismo y la actividad contrctil que la acompaa, se aprecia mejor cuando el corazn est fuera del cuerpo siempre y cuando el corazn se encuentre inmerso en un medio ambiente adecuado. Tanto las fibras de trabajo como del sistema de excitacin y conduccin del corazn estn bajo el control del sistema nervioso autnomo. Como se mencion, en el corazn existe un conjunto de fibras musculares modificadas. Este sistema, tiene la propiedad de autoexcitase ms frecuente que el resto de las fibras cardiacas. Esta especializacin les permite generar potenciales de accin con mayor frecuencia que el resto de tejido cardiaco. Debido a esta propiedad, a este tejido se le llama sistema de excitacin y conduccin del corazn, que se distribuye por todo el corazn de la siguiente manera: 1) Nodo-senoauricular (Nodo S-A), 2) fibras auriculares internodales, 3) nodo aurculoventricular (Nodo A-V), 4) haz de His y 5) fibras de Purkinje. De estas estructuras, el nodo S-A. es el que genera el mayor nmero de potenciales de accin por unidad de tiempo, de modo que la frecuencia con la cual se contrae el corazn, depende de la frecuencia de descarga de esta estructura, razn por la cual se le llama marcapaso cardaco. El tejido marcapaso se comporta de esta manera debido a que sus fibras presentan un potencial de membrana inestable, originada por las propiedades del sarcolema para la conductancia inica. Adems, la actividad de la fibras de trabajo y de las fibras del sistema de conduccin, es modulada por las caractersticas qumicas y fsicas del medio extracelular, entre las que destacan diversos iones con los siguientes efectos: 1) El incremento de la concentracin extracelular de potasio: a) Disminuye la frecuencia cardiaca. b) Disminuye la velocidad de conduccin del potencial de accin especialmente a nivel del Nodo A-V c) Provoca arritmias y fibrilacin cardacas, ya que favorece la aparicin de focos ectpicos d) Disminuye la fuerza de contraccin e) Provoca inexcitabilidad de las fibras y conduce al paro cardaco en distole 2) La disminucin en la concentracin extracelular de potasio: a) Hiperpolariza a las fibras y las torna inexcitables. 3) El incremento en la concentracin extracelular de calcio: a) Disminuye la frecuencia cardiaca. b) Incrementa la fuerza de contraccin de la fibras. c) Provoca relajacin incompleta. d) Conduce al paro cardaco en sstole (rigor de calcio). 4) La disminucin en la concentracin extracelular de calcio: a) Incrementar la excitabilidad de las clulas y su tendencia a descargar espontneamente.

b) Incrementa la frecuencia cardiaca. Cambios en las caractersticas fsicas del medio extracelular, producen los siguientes efectos: 1) El incremento en la temperatura del lquido extracelular, incrementa la intensidad del metabolismo celular y la cintica de los sistemas enzimticos y en consecuencia incremento en la frecuencia y fuerza de contraccin del corazn. La disminucin de la temperatura causa efectos opuestos Adems de los factores anteriores y como se coment anteriormente, la actividad cardiaca es modulada por el sistema nervioso autnomo de la siguiente manera: a) La inervacin parasimptica llega al corazn por medio de los nervios vagos y su estimulacin provoca disminucin de la frecuencia cardiaca y de la fuerza de contraccin, pudiendo llegar al paro cardiaco. Dicho efecto es mediado por la acetilcolina (ACh), la cual induce hiperpolarizacin de las fibras cardacas al incrementar la conductancia al in potasio. b) La inervacin simptica proviene de los ganglios cervicales y su estimulacin incrementa la frecuencia y la fuerza de contraccin del corazn, as como la velocidad de conduccin del potencial de accin. Los efectos simpticos son mediados por la noradrenalina (adrenalina), la cual incrementa la conductancia del sarcolema a los iones de sodio y de calcio. A diferencia del msculo esqueltico, las fibras cardiacas son incapaces de sufrir tetanizacin; esto se debe a que los cardiocitos poseen un perodo refractario prolongado, lo que constituye un factor de seguridad que protege al corazn contra la aparicin de focos ectpicos, fibrilacin y tetanizacin. Al perodo refractario se le puede definir como una fase de la actividad elctrica de las fibras cardiacas, durante la cual, cualquier estmulo elctrico (o potencial de accin) no importa cun intenso sea, no es capaz de producir una respuesta elctrica propagada adicional, es decir no se producir un nuevo potencial de accin (periodo refractario absoluto; desde la fase 0 a la fase inicial de la fase 3 del potencial de accin). El periodo refractario relativo es la etapa del potencial de accin durante la cual un estmulo de intensidad mayor puede provocar un nuevo potencial de accin. Este periodo se extiende desde el final del primer tercio, hasta casi el final del tercer tercio de la fase de repolarizacin (fase 3 del potencial de accin). OBJETIVOS: El alumno examinar las propiedades del msculo cardaco midiendo: 1) La duracin de la sstole, la distole y el ciclo cardiaco 2) El efecto de la carga diastlica (Ley de Frank-Starling) 3) El efecto de la estimulacin del nervio vago derecho sobre la actividad cardiaca

4) 5) 6) 7) 8) 9)

El bloqueo del sistema parasimptico por la atropina El perodo refractario del corazn El efecto de la temperatura sobre la frecuencia cardiaca El efecto de las drogas simpticas y parasimpticas sobre la actividad cardiaca Efecto de los iones sobre el corazn El automatismo en el corazn aislado

MATERIALES Y REACTIVOS: Biolgico: Tortuga Equipo: Fisiografo (un canal) Transductor migrafo tipo B o C Estimulador electrnico Cables: a) Principal, b) del No. 9 y c) de salida del estimulador Electrodos de estmulo de ganchillo y de alfiler Juego de pesas Estativo y tornillo de tensin Estuche de disecciones: bistur, tijeras, tijeras finas, pinzas de diseccin con dientes, pinzas de diseccin con dientes fina, disectores de vidrio y estilete metlico 9) Serrucho quirrgico 10) Hilos: camo doble cero e hilo delgado 11) Tabla de disecciones para tortuga Soluciones: 1 2 3 4 5 6 Solucin de adrenalina (1 mg/ml) Solucin de acetilcolina (1 mg/ml) Solucin de CaCl2 0.5 M. Solucin de KCl 0.5 M. Ringer tyrode glucosado a 5, 15 y 25C. Solucin de sulfato de atropina (1 mg/ml). 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 8)

Cristalera: 1) Tres vasos de precipitado de 100 ml 2) Caja Petri 3) Cinco jeringas de 5 ml con aguja MTODOS: Calibre un canal del Fisiografo con un acoplador 7173. Con el sistema de pesas calibre la amplitud del registro de tal manera que 10 g = 1 cm. Recuerde que dependiendo

de las caractersticas contrctiles del corazn, se puede cambiar la sensibilidad del registro. Si esto es necesario, no olvide volver a calibrar la amplitud del registro. Destruya el encfalo y la mdula espinal de una tortuga con el estilete. Una vez sacrificado el animal, serruche los istmos que unen el plastrn con el caparazn. Coloque la tortuga en decbito dorsal y con los hilos de camo doble cero fije las patas a los extremos de la tabla de disecciones. Utilizando tijeras, bistur y pinza de diseccin con dientes, con cuidado desprenda el plastrn a partir del cuello, teniendo cuidado de no lastimar al corazn. Una vez que ha descubierto el trax, observe el corazn latiendo por debajo del pericardio. Con cuidado corte el pericardio y exponga al corazn teniendo cuidado de respetar el frenulum (ligamento que une la punta del corazn con el pericardio). Con el corazn expuesto, observe e identifique la sstole (contraccin) y la distole (relajacin) y con su reloj cuente la frecuencia cardiaca. Anote el resultado en la hoja de respuestas. Pase un hilo delgado de unos 20 cm de longitud por abajo del corazn y amarre fuertemente el frenulum (deje una pequea masa de pericardio para evitar que el hilo se resbale cuando se aplique tensin al rgano). Corte el frenulum separndolo del pericardio y jale el hilo hacia arriba. Sujete el otro extremo del hilo al ganchillo del migrafo e inicie el registro de la actividad contrctil del corazn. Con una velocidad del papel a 0.25 cm/seg inicie el registro de la actividad contrctil del corazn. Presione el botn de Record del amplificador del canal y con el tornillo de tensin aplique una tensin suficiente al corazn de modo que obtenga registros de 35 cm de amplitud. Duracin del ciclo cardiaco, de la sstole, de la distole y medicin de la frecuencia cardiaca. Ponga la unidad del desplazamiento del papel a 10 cm/seg. y haga 4 registros del ciclo cardiaco. Pare el registro. Para evitar la desecacin del corazn y mantenerlo en buenas condiciones, humedzcalo continuamente (cada 2 min) vertiendo sobre l solucin de Ringer a temperatura ambiente. Evite tocar el hilo. Para medir la duracin de la sstole y de la distole, identifique sobre el registro el inicio de la contraccin cardiaca y llmelo punto A, que es el punto donde el trazo inicia su desplazamiento hacia arriba. Llame punto B al inicio de la relajacin, que es el punto ms alto del registro y donde inicia el descenso de la plumilla (el punto B coincide con la terminacin de la sstole y el inicio de la distole). Identifique con una C el punto donde termina la distole y que coincide con el inicio de la siguiente sstole. Proyecte los puntos sobre el eje del tiempo y proceda a hacer la medicin de: a) b) c) d) e) Duracin de la sstole_______ seg Duracin de la distole ______ seg Duracin del ciclo cardiaco _______seg Frecuencia cardiaca ________ latidos/ min Fuerza de contraccin______ mm, ______ g

Haga las operaciones correspondientes Pase los datos a la hoja de resultados. Efecto de la carga diastlica (Ley Frank-Starling): Disminuya la tensin sobre el corazn de tal manera que la amplitud de los registros sean ahora de aproximadamente de 5 mm. Baje la lnea basal lo ms que pueda; ponga la unidad del desplazamiento del papel a 0.2 cm/seg. Despus de tomar 3 o 4 registros empiece a incrementar la tensin sobre el corazn dando media vuelta al tornillo de tensin entre cada latido. Observe cmo aumenta la fuerza de contraccin conforme aumenta la tensin. Invierta el proceso cuando obtenga una contraccin de amplitud mxima, disminuyendo la tensin del tornillo poco a poco hasta alcanzar la lnea basal y una amplitud de las contracciones semejantes a las primeras. Con los datos obtenidos llene la Tabla 1 de la hoja de resultados. Efecto de la estimulacin al nervio vago derecho: Para exponer el nervio vago derecho, haga una incisin a lo largo de la lnea media del cuello. Esta maniobra expondr la trquea y por abajo de ella el esfago. En paralelo con estas estructuras, corre el nervio vago y la arteria cartida primitiva. Localice la arteria cartida derecha y el nervio vago sin tratar de separarlos, ya que esto puede daar el nervio. Diseque una porcin del paquete vasculo-nervioso de aproximadamente 2 cm y mntelo sobre los electrodos de ganchillo. Con el cable estimulador conecte los electrodos al estimulador, cuidando de que el electrodo catdico (rojo) quede hacia el corazn. Seleccione en el estimulador un estmulo de 2 mseg de duracin, y un voltaje de 10 voltios. Aplique estmulos repetitivos de frecuencia creciente iniciando con 2/seg, para continuar con 5, 15 20 y 25 estmulos/seg. Cuide de que cada tren de estmulos sea de 3 seg, dejando descansar al nervio 10 seg entre cada tren de estmulos. Ponga la velocidad del papel a 1.0 cm/ seg y determine el efecto de la estimulacin vagal cuantificando la frecuencia cardiaca con cada tren de estmulo. Determine con cual frecuencia se alcanz el paro cardiaco. Pase los datos a la hoja de resultados. Efecto de la atropina sobre la estimulacin parasimptica del corazn. Del registro anterior, seleccione el tren de estmulos que haya tenido un efecto importante sobre la frecuencia cardiaca y antes de estimular, vierta sobre el corazn unas gotas de sulfato de atropina y espere unos minutos para que la droga bloquee los receptores de ACh. Ponga la velocidad del papel a 0.5 cm/ seg, estimule nuevamente al nervio y observe el efecto sobre la frecuencia cardiaca. Anote los datos en la hoja de resultados Periodo refractario:

Inserte los electrodos de alfiler en el corazn; uno un poco por arriba del centro del corazn y el otro cerca del pex. Por el otro extremo conctelos al canalizador de pulsos de la manera apropiada (asegrese que el estimulador no est mandando estmulos). Cheque que la amplitud de los registros sea adecuada. Ponga la velocidad del papel a 5 cm/ seg. Seleccione en el estimulador estmulos a 10 voltios y 2 ms de duracin. Utilizando estmulos nicos y un desplazamiento del papel a 5 cm/seg, proceda a estimular el corazn de tal manera que un estmulo coincida con el inicio de la sstole, otros a la mitad y otros al final de la misma, y otros ms al inicio de la distole, a la mitad y al final. Observe las extrasstoles (latidos adicionales) y determine en que momento del ciclo cardiaco se presentaron. Determine el periodo refractario, el cual puede ubicarse en el registro en el momento que se logre la primera extrasstole al inicio de la distole. Pase los datos pertinentes a la hoja de respuestas. Efecto de la temperatura: El msculo cardaco es extramadamente sensible a la temperatura y en especial el nodo S-A. Las siguientes maniobras demostrarn lo antes mencionado. Haga los ajustes necesarios para obtener un registro de amplitud adecuada. Ponga la amplitud del desplazamiento del papel a 0.1 cm/seg. Mida la temperatura de la tortuga y antela sobre el registro. Obtenga un registro control y determine la frecuencia cardiaca. Haga registros de 4 min en cada temperatura. Vierta sobre el corazn solucin Ringer, a 5C. Anote la temperatura sobre el trazo y determine la frecuencia. Ahora vierta Ringer a 15C. Anote sobre el registro la temperatura y la frecuencia cardaca. Repita los mismos pasos con Ringer a 25C. Efectos de algunas drogas y iones sobre el corazn: Una vez que el corazn se ha recuperado y la temperatura del Ringer es la del medio ambiente, haga los ajustes necesarios para obtener un registro adecuado. Mantenga la velocidad del desplazamiento del papel a 0.05 cm/seg. Obtenga un registro control de dos minutos para cada maniobra. 1) Aplique 10 gotas de una solucin de ACh (1mg/ml) diluida 1:1000, observe el efecto y lave con suficiente Ringer 2) Aplique 10 gotas de una solucin de adrenalina (1mg/ml) diluida 1:100, observe el efecto y lave con suficiente Ringer 3) Aplique 10 gotas de CaCl2 0.5 M, observe el efecto y lave con suficiente Ringer 4) Aplique 10 gotas de KC1 0.5 M, observe el efecto y lave con suficiente Ringer. Describa los efectos de cada maniobra sobre las caractersticas contrctiles del corazn y pase los datos a la hoja de resultados. Automatismo del corazn in vitro: Una vez que el corazn se ha recuperado, retire el hilo del transductor y con tijeras finas diseque el corazn. Ya que el la tortuga el marcapaso cardiaco se encuentra en el seno

venoso, cuando extirpe el corazn respete los grandes vasos que llegan y salen del rgano. Coloque el corazn en una caja de Petri con Ringer a temperatura ambiente y observe los latidos cardiacos, luego con las tijeras corte un segmento auricular con el seno venoso incluido, un segmento auricular solo y un segmento ventricular. Observe las contracciones espontneas y cuantifique la frecuencia cardiaca de cada segmento. Estimule mecnicamente a los segmentos y observe si se pueden inducir extrasstoles. Pase sus datos a la hoja de resultados. RESULTADOS: Frecuencia cardiaca del corazn in situ_____latidos por min Duracin del ciclo cardiaco, de la sstole, de la distole y medicin de la frecuencia cardiaca: a) b) c) d) e) Duracin de la sstole_______ seg Duracin de la distole ______ seg Duracin del ciclo cardiaco _______seg Frecuencia cardiaca ________ latidos/ min Fuerza de contraccin______ mm, ______ g

Haga las operaciones correspondientes

Efecto de la carga diastlica (Ley Frank-Starling): TABLA 1. EEFECTO DE LA TENSIN DE REPOSO DOBRE LA FUERZA DE CONTRACCIN DEL CORAZN (LEY DE FRANK-STARLING) TENSIN DE REPOSO AMPLITUD DE LAS CONTRACCIONES Mm g mm g

Con los datos de la Tabla, haga dos grficas. En la primera grafique los gramos de tensin en el eje de las abscisas y en el de las ordenadas la fuerza de contraccin en gramos. En la segunda, grafique en las abscisas nmero de veces que cambi de tensin y en las ordenadas la tensin de reposo y la fuerza de contraccin en cada punto. Haga las operaciones correspondientes para convertir mm de amplitud a g de fuerza. Efecto de la estimulacin al nervio vago derecho: 1) 2) 3) 4) 5) Frecuencia de estimulacin: 5 pulsos/seg; Frecuencia cardiaca_______latidos/min Frecuencia de estimulacin: 15 pulsos/seg; Frecuencia cardiaca_______latidos/min Frecuencia de estimulacin: 20 pulsos/seg; Frecuencia cardiaca_______latidos/min Frecuencia de estimulacin: 25 pulsos/seg; Frecuencia cardiaca_______latidos/min Frecuencia de estimulacin que provoc paro cardiaco:_______pulsos/seg

Efecto de la atropina sobre la estimulacin parasimptica del corazn: Frecuencia cardiaca basal: _______latidos/min Efecto de la atropina sobre la frecuencia cardiaca estimulando al vago_______latidos/min Periodo refractario: Duracin del periodo refractario absoluto______seg Duracin del periodo refractario relativo_______seg Efecto de la temperatura: Temperatura del Ringer basal:_______oC; Frecuencia cardiaca______latidos/min Temperatura del Ringer: 5 oC; Frecuencia cardiaca______latidos/min Temperatura del Ringer:15 oC; Frecuencia cardiaca______latidos/min Temperatura del Ringer: 25 oC; Frecuencia cardiaca______latidos/min

Efectos de algunas drogas y iones sobre el corazn: 1) Frecuencia cardiaca basal_____latidos/min; ACh ______latidos/min 2) Frecuencia cardiaca basal_____latidos/min; Adrenalina ______latidos/min 3) Frecuencia cardiaca basal_____latidos/min; CaCl2 ______latidos/min

4) Frecuencia cardiaca basal_____latidos/min; KCl 0.5M_______latidos/min. Automatismo del corazn in vitro: 1) 2) 3) 4) Frecuencia cardiaca del corazn aislado______latidos/min Frecuencia del senovenoso______latidos/min Frecuencia auricular______latidos/ min Frecuencia ventricular_____latidos/min

CONTESTE LAS SIGUIENTES PREGUNTAS 1. Haga un esquema del corazn en donde incluya al sistema de excitacin y conduccin del corazn con sus respectivos nombres 2. Encuentre y escriba el significado de los siguientes trminos: cronotropismo, badmotropismo, inotropismo y dromotropismo 3. Que es el marcapaso cardiaco? 4. A que se debe el automatismo cardiaco? 5. Que rea del corazn inerva el nervio vago derecho? 6. Que rea del corazn inerva el sistema nervioso simptico izquierdo? 7. Cual es el sitio de menor velocidad del potencial de accin cardiaco? 8. Porque al incrementarse la tensin de reposo se incrementa la fuerza del corazn (Ley de Frank-Starling) 9. Cual es el mecanismo de accin de la ACh sobre el corazn? y cual su efecto? 10. Cual es el mecanismo de accin de la adrenalina sobre el corazn? y cual su efecto? 11. Cual es el mecanismo de accin de la atropina sobre el corazn? y cual su efecto? 12. Qu relacin temporal hay entre la sstole auricular y la sstole ventricular? 13. Que es un foco ectpico del corazn 14. Por qu el exceso de potasio produce paro cardiaco en distole? 15. Que es una extrasstole cardiaca?

Revisado: Marzo 18, 2003 Dr. Andrs Quintanar Stephano

CORRELACION ENTRE ELECTROCARDIOGRAMA, PRESION AORTICA, PRESION AURICULAR DERECHA Y RUIDOS CARDIACOS DURANTE EL CICLO CARDIACO INTRODUCCION El corazn, es una bomba cuya funcin consiste en mantener a la sangre en movimiento continuo por el sistema cardiovascular. En realidad, el corazn est constituido por dos bombas conectadas en serie, una derecha y otra izquierda. La bomba derecha formada por la aurcula y el ventrculo derecho, impulsa la sangre a travs de los pulmones y hacia el ventrculo izquierdo. La aurcula y el ventrculo izquierdo que forman la bomba izquierda impulsa la sangre a travs de la circulacin general y hacia el ventrculo derecho. Ambos ventrculos funcionan como bombas intermitentes que dejan de bombear para llenarse y dejan de llenarse para bombear. El sistema de excitacin y conduccin del corazn esta dispuesto de tal modo que ambas bombas se llenan y vacan al mismo tiempo. El periodo durante el cual los ventrculos se llenan se conoce como distole, y el periodo durante el cual los ventrculos bombean (vacan) se llama sstole. En conjunto, la sstole y la distole constituyen el ciclo cardiaco y es la unidad repetitiva de la funcin cardiaca. De la anatoma del corazn recordar que entre las aurculas y los ventrculos se encuentran las vlvulas tricspide y mitral, que evitan el reflujo de sangre de los ventrculos a las aurculas durante la sstole ventricular. Asimismo, que entre las arterias aorta y pulmonar y los ventrculos se encuentran las vlvulas artica y pulmonar, que evitan el reflujo de sangre de las arterias a los ventrculos durante la distole ventricular. El cierre de las vlvulas en cada ciclo cardiaco da lugar a los ruidos cardiacos. Electrocardiograma. El registro de la actividad elctrica del corazn que acompaa al latido cardaco se conoce como electrocardiograma (ECG). Antecediendo a la contraccin de las aurculas y los ventrculos se presenta una serie de ondas elctricas complejas, las cuales estn relacionadas con su excitacin y recuperacin. Las cuatro cavidades del corazn de mamfero se contraen de una manera coordinada, como consecuencia de la actividad elctrica del tejido de excitacin y conduccin del corazn, que inicia en el marcapaso localizado en el nodo seno-auricular (nodo S-A). As los eventos se inician aqu, y la onda de excitacin elctrica viaja a travs de las aurculas dando lugar a la contraccin auricular. Localizado en la parte postero-inferior derecha de la pared interauricular se encuentra el nodo aurculo-ventricular (nodo A-V). La onda de excitacin proveniente de las aurculas activa el nodo A-V, el cual enseguida propaga la onda de excitacin por las fibras especializadas del haz de His hacia los ventrculos. El haz de His se contina con una serie de fibras, llamadas fibras de Purkinje que se distribuyen y activan a toda la masa del msculo ventricular. El resultado de esta onda de excitacin del ventrculo da como resultado la sstole ventricular. Ya que el cuerpo est compuesto de lquidos conductores (conductor de volumen), para registrar el ECG no es necesario colocar los electrodos directamente sobre el corazn. As, los electrodos pueden colocarse sobre la superficie del cuerpo para detectar las ondas electrocardacas. Es importante designar la posicin de los electrodos sobre la superficie del cuerpo, porque la dispersin de la excitacin y la recuperacin sobre todo el corazn, involucra direccin. Dependiendo de la localizacin de los electrodos, los registros tendrn

caractersticas propias de la localizacin particular. En un registro empleando electrodos estndar para la derivada bipolar D II, se pueden identificar tres ondas que se reconocen claramente y que acompaan cada ciclo cardaco. La primera onda, pequea hacia arriba, se llama onda P y es el potencial que proviene de las aurculas y que precede a la contraccin auricular. Despus de la onda P, se presenta una onda en forma triangular, con pequeas ondas negativas en la base. Este complejo es conocido como onda o complejo QRS. La onda QRS es el potencial que se origina en los ventrculos y precede a la contraccin ventricular. La tercer onda que se puede reconocer, llamada onda T, tiene forma de cpula y puede ser hacia arriba o hacia abajo, ocurre justo antes de la distole ventricular y es la onda caracterstica de la repolarizacin ventricular. Una onda de recuperacin similar ocurre despus de la sstole auricular, pero es de poca amplitud y generalmente es opacada por la presencia de la onda QRS. Cuando se observa se le llama onda Pt u onda Ta. De mxima importancia en el ECG, son las relaciones de tiempo entre las diferentes ondas. Estas relaciones dependen de las condiciones del corazn y una terminologa especial ha sido aplicada a este estudio. INTERVALOS PR o PQ QRS QT ST RANGO DE DURACIN 0.12 - 0.20 seg 0.06 - 0.10 seg 0.39 - 0.43 seg 0.32 - .

lntervalo P-R: Se mide desde el principio de la onda P hasta el principio de la onda Q (si Q no existe se mide hasta el inicio de la onda R y si R no existe, se mide hasta el inicio de la onda S y representa el tiempo que transcurre desde el principio de la excitacin de las aurculas, hasta el principio de la excitacin ventricular. lntervalo QRS: Se mide desde el principio de Q hasta el final de S y representa el tiempo que tardan los ventrculos en despolarizarse. Intervalo Q-T: Se mide desde el principio de la onda Q hasta el final de la onda T y representa el tiempo total de la despolarizacin y repolarizacin ventricular. Presin arterial. La presin sangunea resulta de la accin de bomba del corazn contra una resistencia perifrica variable, as como de un reservorio elstico. La presin sangunea vara en relacin con el volumen sanguneo relativo, la elasticidad del sistema arterial, la resistencia perifrica, la frecuencia cardiaca y el volumen sistlico, siempre y cuando el volumen sanguneo relativo permanezca constante. La importancia del reservorio elstico radica en que cierta cantidad de la energa de la contraccin cardiaca se convierte en energa almacenada cuando parte de la sangre expulsada durante la sstole es retenida bajo presin en el reservorio arterial expandido. Durante la distole, la sangre es impulsada a travs de las arterias para mantener el flujo capilar durante todo el ciclo cardiaco. A causa de esto, la presin en el rbol arterial es mxima durante la sstole (120 mmHg), pero no caer a cero durante la distole (80 mmHg), debido al rebote elstico de los vasos y cierre de la vlvula artica. La magnitud de la cada en la presin, depender de la diferencia entre la oposicin al flujo por la resistencia perifrica y la frecuencia y volumen de sangre bombeada al sistema arterial. El final de la eyeccin queda sealada por una muesca

pasajera en la curva de presin producido por el cierre sbito de las vlvula artica. A esta muesca se le llama muesca dicrtica, y es seguida por la onda dicrtica. La diferencias entre la presin sistmica y la pulmonar radican en la menor magnitud del sistema pulmonar: sistlica 25 mmHg y diastlica 10 mmHg. Presin auricular derecha. La presin auricular se eleva durante la sstole auricular y contina elevndose durante el periodo de contraccin isovolumtrica ventricular, cuando las vlvulas A-V protruyen hacia la aurcula. Cuando las valvas de las vlvulas A-V se jalan hacia abajo por la contraccin ventricular, las presin cae rpidamente y luego se eleva cuando la sangre del retorno venoso llena las aurculas antes de que abran las vlvulas A-V en la fase temprana de la distole ventricular. El regreso de las vlvulas A-V a su posicin relajada tambin contribuye a esta elevacin de la presin al reducir la capacidad auricular. Los cambios de presin auricular se transmiten a las grandes venas en donde se pueden reconocer las tres ondas caractersticas en el registro de la curva de presin auricular. La onda a, que se debe a la sstole auricular. La onda c que se debe a la presin causada por el abultamiento de la vlvula tricspide hacia la aurcula durante la contraccin isovolumtrica del ventrculo derecho. La onda v se debe al flujo sanguneo continuo hacia la aurcula durante la distole auricular y termina cuando la vlvula tricspide se abre al inicio de la distole ventricular. Ruidos cardiacos. Normalmente en cada latido del corazn se pueden distinguir dos sonidos o ruidos cardiacos distintos. El primero es de tono bajo y de relativa larga duracin. El segundo es de un tono ms agudo y de menor duracin. Usualmente ambos se pueden distinguir claramente con un estetoscopio o un recolector de sonidos adecuado (micrfono de contacto), colocado en el quinto espacio intercostal izquierdo. Estos ruidos se escuchan de manera parecida a lo siguiente: pon y tac. El primer sonido (pon) se debe principalmente a las vibraciones que resultan del cierre de las vlvulas aurculoventriculares (A-V). Se cree que este ruido tambin se debe la contraccin muscular. El segundo ruido (tac) esta dado principalmente por las vibraciones que resultan del cierre sbito de las vlvulas artica y pulmonar. Los ruidos cardiacos estn directamente relacionados con la accin de bomba del corazn. Con una frecuencia cardiaca lenta, se puede mostrar que el segundo ruido es coincidente con la muesca dicrtica de la curva de presin artica. La onda c del registro de la presin auricular nos permite demostrar que el primer ruido cardiaco se asocia primeramente con el cierre de las vlvulas A-V. Tambin, el ECG nos permite relacionar ms fcilmente el momento del primer ruido cardiaco durante el ciclo cardiaco. Debe recordarse que los eventos elctricos del corazn preceden a los eventos mecnicos. As, la onda P precede a la sstole auricular dando lugar a la onda a de la curva de presin auricular, mientras que el complejo QRS, es inmediatamente seguido de la sstole ventricular y la onda T ocurre justo antes de la distole ventricular. Resumiendo; El complejo QRS coincide con la sstole ventricular y el cierre de las vlvulas A-V con la contraccin temprana ventricular. Por lo tanto, el primer ruido cardiaco se asocia con la onda R del ECG. Al final de la sstole las vlvulas artica y pulmonar se cierran dando lugar al segundo ruido cardiaco. Ya que la onda T precede a la distole ventricular el segundo ruido se asocia con la onda T. De esta manera, el registro de la muesca dicrtica de una arteria cercana al corazn, estar cronolgicamente relacionada con el segundo ruido cardiaco y la onda T.

OBJETIVOS General: Establecer las relaciones ms importantes entre el ECG, la presin arterial, la presin auricular derecha y los ruidos cardiacos durante el ciclo cardiaco. Particulares: 1. Registrar la actividad elctrica del corazn (electrocardiograma) reconocer las diferentes ondas electrocardiogrficas, medir los intervalos indicados y establecer las relaciones que hay entre las ondas del ECG con las otras variables durante el ciclo cardaco. 2. Registrar la presin arterial directamente de la aorta, medir la presin sistlica y diastlica, reconocer la muesca dicrtica y relacionar los cambios de la curva de presin con el resto de las variables durante el ciclo cardaco. 3. Registrar y medir directamente la presin auricular derecha, reconocer las ondas a, c y v y relacionarlos con las otras variables del ciclo cardaco. 4. Registrar los ruidos cardacos (fonocardiograma), reconocer el 1 y 2 ruido y establecer su relacin con el cierre de las valvulas A-V, la muesca dicrtica y las dems variables registradas. 5. Observar y palpar los latidos cardacos directamente del corazn (trax abierto). 6. Inducir y observar directamente el aleteo y fibrilacin cardiaca MATERIAL Y EQUIPO Biolgico: Perro Equipo: 1. Fisigrafo (4 canales) 2. 2 transductores de presin P 1000 A 3. 2 cables conectores # 9 4. 2 acopladores 7173 5. 2 acopladores DC-AC 6. Estimulador con electrodos de ganchillo 7. Ventilador pulmonar 8. Cable para ECG 9. Selector de derivadas 10. Micrfono para ruidos cardacos 11. Mesa de ciruga para perro 12. Estetoscopio 13. Pentobarbital sdico 14. Solucin salina isotnica heparinizada 15. 2 catteres 16. 3 Jeringas de 10 ml 17. Cnula traqueal 18. Hilo camo del cero 19. Gasa

20. Instrumental ciruga 21. Segueta 22. Tijera para costillas 23. Solucin de KCI 0.5 M. NOTA: Conforme vaya obteniendo el registro calibrado de cada canal, apague el botn de RECORD y no lo encienda hasta que tome el registro de todas las variables simultneamente. PROCEDIMIENTO 1. De su prctica del ECG prepare el canal 1 del fisigrafo y conecte los cables para obtener un registro electrocardiogrfico en DII. Utilice electrodos de aguja. Una vez logrado el registro apague el botn de RECORD. Antes de pasar al procedimiento quirrgico para el registro directo de la presin arterial y la presin auricular, calibre los canales 2 y 3 del Fisigrafo utilizando los transductores de presin P100 A. Los siguientes puntos explican el procedimiento para utilizar el transductor de presin LINEAR CORE P1000A unido a un acoplador TRANSDUCTOR COUPLER 7173, y un amplificador CHANNEL AMPLIFIER 7070. Calibre el canal 2 del Fisigrafo (ver prctica del Fisigrafo). Una vez calibrado el acoplador con el amplificador y el reproductor, gire la perilla de MV/CM del amplificador a 20 MV/CM, apague el botn de RECORD del amplificador y proceda a calibrar el canal con el traductor de presin P100A. NOTA: El transductor es muy sensible por lo que hay que asegurarse de que el transductor est sobre una superficie firme y as evitar las vibraciones que puedan modificar la seal. 1. Conecte las vlvulas A y B en el transductor (vlvulas de tres vas) (Figura 1). 2. Asegrese de que ambas vlvulas estn abiertas a la atmsfera. 3. Conecte la salida lateral de la vlvula A a una jeringa de 10 ml llena de solucin salina heparinizada sin burbujas de aire. Conecte un catter de unos 40 cm de longitud a la otra salida de la llave A. Gire la llave de control del flujo de la vlvula A de tal manera que se conecten la jeringa con el transductor. 4. Inyecte suavemente la solucin hacindola pasar por el transductor hasta que escurra por la llave B que esta abierta a la atmsfera. Inyectando suavemente, golpee ligeramente el transductor para asegurar que no queden burbujas de aire en el transductor. Cierre la vlvula B. 5. Gire la llave del control del flujo de la vlvula A para conectar la jeringa con el catter. Purgue el catter con la solucin heparinizada. 6. Gire la llave del control del flujo de la vlvula A para que se conecten directamente el catter con el transductor. De esta manera el transductor est abierto a la

atmsfera. Asegrese que la punta del catter este a la altura del transductor. De lo contrario no se podr calibrar el transductor adecuadamente. 7. Con el botn de RECORD del amplificador apagado, conecte el transductor al Fisigrafo con un cable conector del # 9. NOTA: El acoplador, el amplificador y el reproductor deben estar calibrados, asegrese de que el transductor est abierto a la atmsfera y que no est conectado con el sujeto de experimentacin (NO DEBE HABER PRESION SOBRE EL TRANSDUCTOR). 8. Usando la perilla de POSITION del amplificador, lleve la plumilla de registro a 2.5 cm por abajo de la lnea central. 9. Gire el control de AMPLITUDE del transductor, completamente en contra del sentido de las manecillas del reloj. 10. Prenda el botn de RECORD del amplificador. 11. Con el botn de BALANCE del acoplador regrese la plumilla a la lnea escogida en el paso 8. 12. Gire el control de AMPLITUDE del transductor completamente en favor de las manecillas del reloj. 13. Gire el control ZERO ADJUST del transductor para regresar la plumilla de registro a la lnea basal del paso 11. La perilla de ZERO ADJUST se encuentra situada en la parte posterior del transductor. NOTA: Asegrese de que no se est ejerciendo ninguna presin sobre el transductor. 14. Coloque la palanca de PULSATILE-MEAN en posicin PULSATILE. 15. Active la palanca de CALIBRATE 100 mmHg del transductor y mantenindola presionada gire la perilla de AMPLITUDE para regresar la plumilla de registro a 3 cm por arriba de la lnea basal. 16. Suelte la perilla de CALIBRATE y asegure que la plumilla de registro regrese a la lnea basal. Repita el procedimiento si es necesario. El registro est ahora calibrado de tal manera que 100 mmHg equivalen a 3 cm de desplazamiento de la plumilla. 17. En la vlvula A, gire la llave del control del flujo para que se conecten la jeringa y el catter y prguelo haciendo pasar solucin salina heparinizada. 18. Apague el botn de RECORD del amplificador. Cateterizacin de la artria cartida. 1. Pese al animal y anestsielo con pentobarbital sdico utilizando una dosis de 40 mg/kg de peso/va endovenosa. 2. Inserte una cnula traqueal y asegrela en su lugar llenando el manguito con agua. 3. Rasure la cara anterior del cuello y haga una incisin en la lnea media de aproximadamente 15 cm. Localice a ambos lados de la traquea las cartidas primitivas y disquelas. Localice el nervio vago derecho localizado en la vaina de la arteria cartida. Utilizando una pinza roma, separe al nervio de la arteria en una longitud de unos 4-5 cm aproximadamente, coloque una ligadura sin apretar alrededor de la arteria y otra alrededor del nervio vago derecho y djela como referencia.

4. Localice la arteria cartida primitiva izquierda y separe el nervio de la arteria en una longitud semejante a la anterior. Insercin del catter arterial. 1. Una vez disecada y expuesta la arteria cartida izquierda, coloque tres ligaduras sin anudar alrededor de la misma. Cuide de no lesionar la arteria. La ligadura ceflica (distal), se anuda fuertemente para ocluir la arteria completamente. Las ligaduras media y proximal, se anudan sin apretar y servirn para fijar el catter intra arterial una vez que se haya insertado. 2. La longitud del catter debe ser del tamao suficiente para que al desplazarlo por la arteria la punta quede a nivel del cayado de la aorta. 3. El ayudante aplica traccin a las ligaduras ceflicas y proximal para ocluir el flujo de sangre en el pequeo segmento de cartida que queda entre las ligaduras. Con unas tijeras pequeas, el cirujano hace una pequea incisin en la arteria, apenas suficiente para introducir en direccin del corazn el catter. 4. Una vez que la punta del catter ha quedado en el cayado de la aorta, amarre las ligaduras central y proximal. Lo apretado de los nudos no deben ocluir ni parcialmente el catter ya que si esto ocurre el registro de la presin no se podr realizar adecuadamente. Cuide que no haya escurrimiento de sangre. Si esto ocurre apriete un poco ms las ligaduras. 5. Antes de conectar el catter con el transductor, inyecte un poco de solucin salina heparinizada al animal para remover cualquier cogulo que se haya formado en el catter. Esta maniobra se repite cuantas veces sea necesario para desprender y evitar la formacin de cogulos. 6. Gire la llave de la vlvula A para conectar el catter con el transductor y encienda el born de RECORD del amplificador para iniciar el registro de la presin arterial. 7. Ajuste la perilla de FILTER del amplificador si la plumilla no est registrado con un trazo claro. NOTA: Si la plumilla de registro no responde adecuadamente, la cnula puede estar pegada a la pared arterial o puede estar tapada con un cogulo. Cheque que la posicin del catter sea la correcta, as como la orientacin de la llave de la vlvula A. NOTA: Cuando no este haciendo registro eleve las plumillas y la palanca del motor del papel. 8. Apague el botn de RECORD del amplificador. Una vez que ha calibrado el canal 3 del Fisigrafo, proceda a calibrar el transductor de presin P1000A siguiendo las indicaciones anteriores. Cateterizacin de la vena yugular externa para registrar la presin venosa central Para cateterizar la aurcula derecha se procede a localizar la vena yugular externa derecha. 1. Tomando como referencia el borde derecho de la herida del cuello, con una tijera fuerte separe los msculos adheridos a la piel del cuello. Haciendo esto llegar a la vena yugular externa adherida a la cara interna de la piel.

2. Disquela en una longitud de unos 4-5 cm y pase dos ligaduras por debajo. 3. Una vez anudada la ligadura ceflica, haga un orificio en la vena y pase el catter en direccin del corazn. 4. Anude el hilo para fijar el catter a la vena. 5. Asegrese de que la longitud del catter sea el adecuado para que la punta del mismo quede justo en la luz de la aurcula derecha. 6. Proceda a registrar la presin auricular encendiendo el botn de RECORD del amplificador. 7. Si es necesario reajuste la sensibilidad del amplificador para observar mejor el registro. Fonocardiograma Una vez calibrado el canal 4 del Fisigrafo proceda a colocar al sujeto el micrfono para los ruidos cardiacos de la siguiente manera: 1. Pase una banda de hule (perforada) alrededor del trax del animal 2. Identifique la proyeccin del corazn sobre el trax y coloque el micrfono sobre el rea de la pared que corresponde al pex del corazn. 3. Teniendo cuidado de no apretar excesivamete el micrfono (se puede romper o bien no se podrn captar los ruidos cariacos), proceda a fijarlo con la banda de hule. 4. Conecte el enchufe del micrfono a la entrada del preamplificador DC-AC 7170. Tambin se puede utilizar el preamplificador Hi-Gain Coupler 7171. Para cualquier preamplificador que se use, deber ponerse la ganancia en X10 y la constante de tiempo en 0.3. 5. Mueva la palanca de ON OFF/CAL del preamplificador a la posicin ON 6. Antes de encender el amplificador ponga la perilla de sensibilidad en 100 MV/CM y el FILTER en 100Hz. 7. Encienda el botn de RECORD del amplificador y proceda a registrar los ruidos cardiacos. Estimulacin del nervio vago derecho. 1. Con la ligadura de referencia del nervio vago jale al nervio y coloque sobre el los electrodos de estmulo de ganchillo cuidando que el electrodo negativo quede hacia el corazn. 2. Conecte los cables de los electrodos al estimulador respetando su polaridad. 3. Con la ayuda del ECG, seleccione en el estimulador pulsos de 0.2 ms de duracin y un voltaje y frecuencia tales que solo induzcan bradicardia. PROCEDIMIENTO Medicin de la presin arterial Ponga el papel a 0.25 cm/seg y encienda el botn de RECORD del canal 2 para registrar la presin arterial. Observe la subida y la cada de la presin sangunea. Con una velocidad de papel de 2.5 cm/seg tome otro registro. Identifique la muesca dicrtica y mida las presiones sistlica y diastlica.

Registro simultneo del ECG, presin arterial, presin auricular derecha y ruidos cardiacos durante el ciclo cardiaco 1. Ponga la plumilla de tiempo en 1/seg y la velocidad del papel en 0.5 cm/seg. 2. Encienda el botn de RECORD de los 4 canales para obtener el registro simultneo de las variables. 3. Una vez que las variables se estn registrando adecuadamente, incremente la velocidad del papel a 2.5 cm/seg y obtenga unos 20 registros. 4. Continuando con las mismas condiciones de registro incremente la velocidad del papel a 10 cm/seg y obtenga unos 20 registros. 5. Continuando con las mismas condiciones de la velocidad del papel, estimule al nervio vago para disminuir la frecuencia cardiaca. Obtenga otros 20 registros y pare el registro. RESULTADOS 1. Identifique en el registro electrocardiogrfico las ondas electrocardiogrficas P, Q, R, S y T, y la duracin de los intervalos PQ, QRS, QT y ST en el registro tomado a 2.5 cm/seg. 2. Identifique en el registro de presin arterial: a) la presin sistlica, b) la presin diastlica, c) la muesca dicrtica, d) la sstole y e) la distole. Correlacione con el registro electrocardiogrfico el momento en que ocurre: a) el complejo QRS y el inicio de la elevacin de la presin la presin diastlica, b) la onda T y el inicio de la cada de la presin y la muesca dicrtica. Una. vez calibrado el canal 2 del fisigrafo y dispuestos los cables para registrar el EKG, obtenga 10 registros en la derivacin II y proceda a identificar las ondas P, Q, R, S y T, mida los voltajes de cada una y los intervalos antes mencionados. Establezca las relaciones que hay entre las ondas electrocardiogrficas y las variables de los objetivos anteriores durante el cielo cardaco. OBJETIVO 3 Una vez calibrado el canal No. 4 del fisigrafo y el micrfono colocado adecuadamente en el animal, proceda a registrar los ruidos cardacos. Identifique el ler. y 2o. ruido ayudndose con los "fono" y los estetoscopios, y establezca la relacin que hay entre las dems variables registradas. OBJETIVO 4 Despus de haber analizado y medido cada una de las variables aisladamente y hecho la correlacin entre ellas, se procede a abrir el trax y exponer el corazn para que puedan ser apreciados los movimientos cardacos as como los movimientos de expansin y retraccin pulmonares.

Inyecte 10 ml de solucin de KCI 0.7 M por va endovenosa y observe el aleteo y despus la fibrilacin ventricular. RESULTADOS: PRESION AORTICA: Calibracin cm Presin sistlica Presin diastlica Presin media Presin diferencial mm/Hg. mm/Hg. mm/Hg. mm/Hg. mm/Hg.

Identifique la apertura de las vlvulas sigmoideas articas. Identifique el cierre de las vlvulas sigmoideas articas. PRESIN VENOSA CENTRAL: Presin sistlica: Presin distlica: Identifique en el registro las ondas a, c y v y relacione la onda a con la onda P del ECG, la onda c con la contraccin isovolumtrica y el primer ruido cardiaco y la onda v con el segundo ruido cardiacoicular y, la sstole auricular, al mismo tiempo que observa el registro de ambas curvas de presin. Establezca la relacin de los cambios de presin auricular en el EKG. EKG. Identifique las ondas Q, R, S, T, y P. Mida la frecuencia cardaca. Mida el voltaje de cada onda. Onda P Onda Q Onda R Onda S Onda T Establezca la relacin de la onda "a" de la presin auricular, con la onda P del EKG. El complejo QRS con la sstole artica. Mida los intervalos PQ QRS, y QT y diga qu significa cada uno de ellos.

FONOCARDIOGRAMA: En el registro de los ruidos cardacos identifique el lo. y 2o. ruidos, ayudndose con el estetoscopio. Ahora relacione el primer ruido, con la sstole artica y la muesca dicrtica con el 2o. ruido. Asimismo, identifique el primer ruido con la onda C auricular.

PRESIN SANGUNEA Y SU CONTROL SIMPTICO Y PARASIMPTICO INTRODUCCIN La presin sangunea (PS) es la fuerza que la sangre ejerce contra las paredes de los vasos sanguneos, y resulta de la accin de bomba del corazn contra una resistencia perifrica variable as como de un reservorio elstico. La PS vara en relacin con el volumen sanguneo relativo, la elasticidad del sistema arterial, la resistencia perifrica, la frecuencia cardiaca y el volumen sistlico, siempre y cuando el volumen sanguneo relativo permanezca constante. La importancia del reservorio elstico radica en que cierta cantidad de la energa de la contraccin cardiaca se convierte en energa almacenada cuando parte de la sangre expulsada durante la sstole es retenida bajo presin en el reservorio arterial expandido. Durante la distole, la sangre es impulsada a travs de las arterias para mantener el flujo capilar durante todo el ciclo cardiaco. A causa de esto, la presin en el rbol arterial es mxima durante la sstole, pero no caer a cero durante la distole debido al rebote elstico de los vasos y al cierre de la vlvula artica. La magnitud de la cada en la presin, depender de la diferencia entre la oposicin al flujo (resistencia perifrica), el volumen de sangre bombeado al sistema arterial cada latido y la frecuencia cardiaca. Si la presin arterial se est registrando, el final de la eyeccin sangunea al sistema arterial, queda sealada por una muesca pasajera en la curva de presin producido por el cierre sbito de la vlvula artica. A esta muesca se le llama muesca dicrtica. La PS esta bajo el control del sistema nervioso autnomo. La activacin de la divisin parasimptica, reduce la presin sangunea por disminucin de la frecuencia cardiaca. Por otro lado, la activacin de la divisin simptica aumenta la presin sangunea al incrementar: a) la fuerza de contraccin, b) la frecuencia cardiaca y c) la resistencia perifrica. Aunque existen otros factores humorales (hormonales) que participan en la regulacin de la PS, el sistema nervioso autnomo es el ms importante. El centro nervioso ms importante para el control de la PS se localiza en la protuberancia y el bulbo raqudeo y se le denomina centro vasomotor o cardiorregulador. Aqu se integran los reflejos cardiovasculares ms importantes como el reflejo del seno carotdeo en el que impulsos aferentes desde los presorreceptores (receptores de presin) del seno carotdeo y del arco artico, mandan en cada sstole impulsos por los nervios glosofarngeos y nervios vagos respectivamente, hasta el bulbo. Despus de ser integrados, los impulsos son trasmitidos desde el centro vasomotor por las ramas cardiacas del sistema parasimptico (nervios vagos) o simptico al corazn, al que inhibirn o excitarn respectivamente. Al estimular mecnicamente al seno carotdeo se mimetiza un incremento de la presin sangunea, la seal nerviosa viaja por los nervios correspondientes hasta el centro cardiorregulador el cual responde por un lado, activando al sistema nervioso parasimptico, que disminuye de la frecuencia cardiaca, y por el otro inhibiendo el tono simptico, que disminuye la resistencia perifrica. Cuando el nervio vago es estimulado directamente la frecuencia cardiaca disminuye y si la intensidad del estmulo es lo suficientemente grande puede producir paro cardaco. Cuando esto ocurre, la presin sangunea comenzar a caer. La rapidez con la que la presin sangunea cae refleja el grado de la resistencia perifrica. Por otro lado, si la frecuencia cardiaca disminuye, la fuerza de contraccin en cada latido ser mayor debido al mayor volumen diastlico final (Ley de Starling). Con una frecuencia cardiaca disminuida, la muesca dicrtica es ms claramente visible.

Ya que el sistema parasimptico es colinrgico, sus efectos pueden ser mimetizados por drogas que inhiben a la enzima acetilcolinesterasa, permitiendo que la acetilcolina (ACh) permanezca actuando por ms tiempo, prolongando as, sus efectos en el sitio de liberacin. Por lo tanto, la administracin de prostigmina (un inactivador de la enzima acetilcolinesterasa), remedar un incremento de la actividad vagal, lo que se traduce en una disminucin de la frecuencia cardiaca y cada de la presin arterial. La administracin de la ACh u otras drogas colinrgicas producirn efectos similares. Por otro lado, tambin existen drogas que pueden bloquear las acciones de la ACh, como la atropina, alcaloide derivado de la planta llamada bella dona, la cual tiene una gran afinidad por los receptores colinrgicos post ganglionares, localizados en los rganos efectores de la divisin parasimtica del sistema nervioso autnomo. De esta manera, se dice que la atropina es un bloqueador por competencia de la ACh. La actividad perifrica del sistema nervioso simptico es mediada por los neurotransmisores noradrenalina (norepinefrina) y adrenalina (epinefrina), de tal manera que drogas que alteren su sntesis, secrecin, recaptura, o bien, compitan con los receptores simpticos correspondientes, alterarn los efectos de este sistema sobre la presin arterial. Efectos muscarnicos y nicotnicos de la ACh. Histricamente se observ que la administracin de muscarina (extrada del hongo amanita muscaria) a un sujeto de experimentacin, mimetiza las acciones del sistema nervioso parasimptico a nivel de sus efectores perifricos (efectos colinrgicos). Por otro lado, tambin se sabe que la nicotina mimetiza los efectos de la ACh al actuar especficamente a nivel de los receptores colinrgicos de las neuronas post ganglionares simpticas y parasimpticas del sistema nervioso autnomo. En base a lo anterior, los efectos de muchas drogas se clasificaron como muscarnicos o nicotnicos. Actualmente estos trminos se utilizan poco, pero una demostracin de la accin muscarnica y nicotnica de la ACh es de inters fisiolgico debido a que pone en evidencia el papel de la ACh en el mecanismo de la transmisin sinptica de la neurona pre a la post ganglionar en ambas divisiones del sistema nervioso autnomo (la divisin simptica como parasimptica) y del nervio post ganglionar parasimptico al efector. Hay que recordar que el sistema nervioso parasimtico es totalmente colinrgico, es decir la ACh es el neurotransmisor tanto a nivel ganglionar como perifrico, mientras que el simptico es colinrgico en la sinpsis de la neurona pre a la post ganglionar, y noradrenrgico (adrenrgico) en las terminales post ganglionares (periferia). Si la ACh se administra a un animal normal, la PS sangunea cae. Sin embargo si el animal es previamente atropinizado, bloqueando as el efecto perifrico de la ACh, esta no tendr efecto a nivel de los efectores post ganglionares parasimpticos. As, poco efecto se observar en la presin arterial (PA) y en la frecuencia cardiaca, es decir, los efectos muscarnicos de la ACh se han bloqueado. Si se utilizan grandes dosis de ACh en un animal atropinizado, las sinpsis de las neuronas ganglionares de ambos sistemas seguirn siendo sensibles a la ACh. Sin embargo, ya que los receptores colinrgicos de los efectores de la divisin parasimptica han sido bloqueados con la atropina, el efecto de la ACh se observar solo en la divisin simptica, es decir un incremento de la PA y de la frecuencia cardiaca, provocada por la activacin de los ganglios simpticos, que a su vez inducen libracin de noradrenalina y adrenalina a nivel de las terminales nerviosas post ganglionares. Esta respuesta demuestra los efectos nicotnicos (ganglionares) de la acetilcolina.

OBJETIVOS Registrar en un perro la presin arterial (PA) directa (cateterizacin arterial) Determinar las presiones arterial sistlica, diastlica y media Reconocer en el registro la muesca dicrtica Inducir el reflejo del seno carotdeo Describir los efectos de la estimulacin vagal sobre la PS Estudiar el efecto de drogas parasimpticas (ACh y prostigmina) y simpticas (adrenalina) sobre la presin arterial 7) Reconocer el efecto bloqueador de la atropina sobre el nervio vago 8) Observar los efectos nicotnicos de la ACh MATERIAL Y EQUIPO Material Biolgico: Perro Equipo: 1) Fisigrafo (1 canal), 2) Transductor de presin P 1000-A con llaves de 3 vas, 3) Cable conector # 9, 4) Acoplador 7173, 5) Estimulador con electrodos de estmulo de ganchillo, 6) Mesa de ciruga para perro, 7) Pentobarbital sdico, 8) Solucin salina isotnica heparinizada, 9) Dos catteres (para arteria y vena), 10) Jeringas de 10 y 3 ml, 11) Cnula traqueal, 12) Hilo camo del cero, 13) Gasa, 14) Instrumental ciruga, 15) Solucin ACh (1 mg/ml), 16) Adrenalina (1 mg/ml), 17) Prostigmina (1 mg/ml), 18) Atropina (1mg/ml), 19) Solucin de KCI 0.5 M. PROCEDIMIENTO Antes de pasar al procedimiento quirrgico calibre un canal del Fisigrafo (ver prctica del Fisigrafo). Una vez calibrado el acoplador, con el amplificador y el reproductor, gire la perilla de MV/CM del amplificador a 20 MV/CM, apague el botn de RECORD del amplificador y proceda a calibrar el canal con el traductor de presin P1000-A. Calibracin del transductor P1000-A NOTA: El transductor es muy sensible por lo que hay que asegurarse de que el transductor est sobre una superficie firme y as evitar las vibraciones que puedan modificar la seal. 1. Conecte las vlvulas A y B en el transductor (llaves de tres vas) (Figura 1). 2. Asegrese de que ambas vlvulas estn abiertas a la atmsfera. 3. Conecte la salida lateral de la vlvula A a una jeringa de 10 ml llena de solucin salina heparinizada sin burbujas de aire. Conecte un catter de unos 40 cm de longitud, a la otra salida de la misma llave A. Gire la llave de control del flujo de la vlvula A de tal manera que se conecten la jeringa con el transductor. 4. Para purgar el transductor inyecte suavemente la solucin salina hacindola pasar por el mismo hasta que escurra por la llave B que esta abierta a la atmsfera. 1) 2) 3) 4) 5) 6)

Inyectando suavemente, golpee ligeramente el transductor para asegurar que no queden dentro burbujas de aire. Cierre la vlvula B. 5. Gire la llave del control del flujo de la vlvula A para conectar la jeringa con el catter. Purgue el catter con la solucin salina heparinizada. 6. Gire la llave del control del flujo de la vlvula A para que se conecten directamente el catter con el transductor. De esta manera el transductor est abierto a la atmsfera. Asegrese que el catter y la punta estn a la altura del transductor ya que de lo contrario no se podr calibrar el transductor adecuadamente. 7. Con el botn de RECORD del amplificador apagado, conecte el transductor al Fisigrafo con un cable conector del # 9. NOTA: El acoplador, el amplificador y el reproductor deben estar previamente calibrados. Asegrese de que el transductor est abierto a la atmsfera (NO DEBE HABER PRESION SOBRE EL TRANSDUCTOR). 8. En el transductor, mueva la palanca de PULSATILE-MEAN a la posicin PULSATILE. 9. Usando la perilla de POSITION del amplificador, lleve la plumilla de registro a 2.5 cm por abajo de la lnea central. 10. Gire el control de AMPLITUDE del transductor, completamente en contra del sentido de las manecillas del reloj. 11. Prenda el botn de RECORD del amplificador. 12. Con el botn de BALANCE del acoplador regrese la plumilla a la lnea escogida en el paso 9. 13. Gire el control de AMPLITUDE del transductor completamente en favor de las manecillas del reloj. 14. Gire el control ZERO ADJUST del transductor para regresar la plumilla de registro a la lnea basal del paso 9. La perilla de ZERO ADJUST se encuentra situada en la parte posterior del transductor. 15. Active la palanca de CALIBRATE 100 mmHg del transductor y mantenindola presionada gire la perilla de AMPLITUDE para regresar la plumilla de registro a 3 cm por arriba de la lnea basal. 16. Suelte la perilla de CALIBRATE y asegure que la plumilla de registro regrese a la lnea basal. Repita el procedimiento si es necesario. El registro est ahora calibrado de tal manera que 100 mmHg equivalen a 3 cm de desplazamiento de la plumilla. 17. En la vlvula A, gire la llave para que se conecten la jeringa con el catter arterial. 18. Apague el botn de RECORD del amplificador. Cateterizacin de la artria cartida. 1. Pese al animal y anestsielo con pentobarbital sdico (Anesesal) utilizando una dosis de 40 mg/kg de peso/va endovenosa. 2. Inserte una cnula traqueal y asegrela en su lugar llenando el manguito con agua. 3. Rasure la cara anterior del cuello y haga una incisin en la lnea media de aproximadamente 15 cm de longitud. Localice a ambos lados de la traquea las cartidas primitivas y disquelas. Localice el nervio vago derecho localizado en la vaina del paquete arteriovenoso (vago-cartida). Utilizando una pinza roma, separe

al nervio de la arteria en una longitud de unos 4-5 cm, coloque una ligadura sin apretar alrededor de la arteria y otra alrededor del nervio vago derecho y djelas como referencia. 4. Localice la arteria cartida primitiva izquierda y separe el nervio de la arteria en una longitud semejante a la anterior. Insercin del catter arterial 1. Una vez disecada y expuesta la arteria cartida izquierda, coloque tres ligaduras sin anudar alrededor de la misma. Cuide de no lesionar la arteria. La ligadura ceflica (distal), se anuda fuertemente para ocluir la arteria completamente. Las ligaduras media y proximal, se anudan sin apretar y servirn para fijar el catter arterial una vez que este se haya insertado en la cartida. 2. La longitud del catter debe ser del tamao suficiente para que al desplazarlo por la arteria la punta quede a nivel del cayado de la aorta. 3. El ayudante aplica traccin a las ligaduras ceflica y proximal para ocluir el flujo de sangre en el pequeo segmento de cartida que queda entre las ligaduras. Con unas tijeras pequeas, el cirujano hace una pequea incisin en la arteria, apenas suficiente para introducir en direccin del corazn el catter. 4. Una vez que la punta del catter ha quedado en el cayado de la aorta, amarre las ligaduras central y proximal. Lo apretado de los nudos no deben ocluir ni parcialmente el catter ya que si esto ocurre el registro de la presin no se podr realizar adecuadamente. Cuide que no haya escurrimiento de sangre. Si esto ocurre apriete un poco ms las ligaduras. 5. Antes de conectar el catter con el transductor, inyecte un poco de solucin salina heparinizada al animal para remover cualquier cogulo que se haya formado en el catter. Esta maniobra se repite cuantas veces sea necesario para desprender y evitar la formacin de cogulos en el sistema. 6. Gire la llave de la vlvula A para conectar el catter con el transductor y encienda el botn de RECORD del amplificador para iniciar el registro de la PA. 7. Ajuste la perilla de FILTER del amplificador si la plumilla no est registrando con un trazo claro. NOTA: Si la plumilla de registro no responde adecuadamente, la cnula puede estar pegada a la pared arterial, puede estar tapada con un cogulo o los nudos quedaron muy apretados. Cheque que la posicin del catter sea la correcta, as como la orientacin de la llave de la vlvula A. NOTA: Cuando no este haciendo registro eleve las plumillas y pare el movimiento del papel. Catetrizacin de la vena femoral 1. Rasure la cara interna de un muslo del animal. 2. Por palpacin identifique el curso de la arteria femoral y por encima de ella haga una incisin en la piel de unos 5-6 cm.

3. Con diseccin roma separe la arteria de la vena femoral en una longitud de unos 4-5 cm y pase dos ligaduras por debajo de la vena. 4. Una vez anudada la ligadura distal y haciendo traccin suave con la ligadura proximal para exponerla, haga un orificio en la vena y pase el catter en direccin del corazn unos 10-15 cm. 5. Anude el hilo para fijar el catter a la vena. 6. Utilizando un equipo de venoclisis, inicie la perfusin de una solucin de cloruro de sodio al 0.9% a razn de 30 gotas por minuto. La administracin de la drogas ser por esta va. 7. Cubra la herida con una gasa y cheque continuamente que el animal est respirando regularmente. Identifique el plano de anestesia probando los diferentes reflejos y observando las caractersticas del animal como se describen en la tabla de Guedel. Con el sistema registrando la PA, inicie el protocolo experimental 1) Medicin de la PS sangunea y la frecuencia cardiaca (FC) a) Ponga el papel a 0.25 cm/seg. Observe la subida y la cada de la presin. Con una velocidad de papel de 5 cm/seg, tome unos 10 registros y determine la frecuencia cardiaca. Tomando coma base la calibracin de 3 cm de desplazamiento de la plumilla=100 mmHg, determine las presiones sistlica, diastlica y del pulso. Si es necesario ajuste los controles de AMPLITUD y POSITION para obtener un mejor registro. Si hacen ajustes, la recalibracin es necesaria. b) Identifique en el registro la muesca dicrtica. Con una pinza hemosttica haga presin gradual sobre el catter que conduce el transductor. Note la disminucin en el tamao de la muesca dicrtica, luego una disminucin en la amplitud del pulso. Utilizando la frmula para la presin arterial media (PAM) determnela y pase sus resultados a la hoja de respuestas (PAM= presin diastlica +1/3 de la presin del pulso). c) Mueva en el transductor la palanca a la posicin MEAN y mida la presin arterial media. Compare y diga si hay diferencias en las mediciones calculada y registrada. Regrese la palanca a la posicin de PULSATILE. Pase sus resultados a la hoja de respuestas 2) Reflejo del seno carotdeo El reflejo del seno carotdeo generalmente se deprime por las sustancias anestsicas y en ocasiones es difcil observarlo en la anestesia profunda. a) Con la velocidad del papel 0.25 cm/seg tome un registro control. Un compaero indicar con el botn marcador de eventos el momento en que inicia la induccin del reflejo. b) Para inducir el reflejo, aplique presin a ambos senos carotdeos del perro presionando fuertemente con los dedos ndice y medio hacia dentro y hacia arriba y abajo en el punto del cuello donde se juntan la rama horizontal y vertical del hueso mandibular inferior. Simultneamente, con los dedos pulgares presione fuertemente hacia adentro los glbulos oculares para obtener accin vagal adicional (reflejo

culovagal). Si no se obtuvo el reflejo, repita el procedimiento despus de la administracin de prostigmina. c) Mida la frecuencia cardiaca y las presiones sistlica, diastlica y media antes y despus de la estimulacin de los senos. Identifique las caractersticas de la muesca dicrtica. Pase sus resultados a la hoja de respuestas. 3) Efectos de la estimulacin vagal a) Exponga el nervio vago derecho y mntelo sobre los electrodos de ganchillo. Asegrese de que el polo negativo (negro) quede del lado cercano al corazn. En el estimulador, elija los siguientes parmetros: Voltaje, 10 voltios. Duracin del estmulo, 2 msg. Frecuencia, 10 estmulos/seg. b) Con la velocidad del papel a 0.25 cm/seg, tome un registro control de 1 minuto y luego estimule el nervio vago por unos pocos segundos. Modifique la intensidad del estimulo para obtener una disminucin de la presin arterial y la frecuencia cardiaca.Determine el periodo de latencia entre la estimulacin vagal y los cambios en el registro. Repita la maniobra varias veces y determine los cambios en las presiones sistlica, diastlica y media. Observe la mayor claridad con la que se registra la muesca dicrtica. Determine si se produce escape ventricular. 4) Efectos de las drogas parasimpticas El sistema nervioso parasimptico es colinrgico y como se observ al estimular el nervio vago, uno de sus efectos es disminuir la frecuencia cardiaca y en consecuencia la PS (aunque tambin existen vasodilatadores colinrgicos). a) Efecto de la ACh. Ponga el desplazamiento del papel a 0.5 cm/seg y despus de obtener un registro control, administre 5 g de ACh por Kg de peso del animal/va endovenosa. Determine la frecuencia cardiaca y las presiones sistlica, diastlica y media. Comprelas con el registro control. Pase sus observaciones a la hoja de resultados. b) Efectos de la prostigmina La prostigmina es un frmaco parasimpaticomimtico que acta bloqueando la accin de la enzima acetilcolinesterasa. Del objetivo 3, seleccione un estimulo de intensidad y frecuencia que hayan producido bradicardia e hipotensin moderada. Repita el procedimiento varias veces para obtener un registro control adecuado. Inyecte 1 mg de prostigmina por cada 8 kg de peso y observe los efectos sobre la FC y la PS. Observe tambin los efectos de la prostigmina sobre el dimetro pupilar, salivacin, motilidad intestinal, flatulencia y defecacin. Repita las maniobras para observar el reflejo del seno carotdeo-oculovagal. Observe como en estas condiciones es ms fcil su induccin. Vierta sus observaciones en la hoja de resultados. c) Efectos sinrgicos de la prostigmina y la Ach. Inyecte 2 g de ACh/Kg de peso del animal/va endovenosa y observe como se potencia el efecto de ambas drogas sobre

la FC, PA, miosis, salivacin, motilidad intestinal, flatulencia y defecacin. Compare la magnitud de los efectos inducidos por la aplicacin de ambas drogas cuando se administraron aisladamente. Observe como se requiere de menor dosis de ACh para obtener un efecto mayor sobre las diversas variables. Repita la estimulacin vagal usando la intensidad de estimulo que previamente disminuy la frecuencia cardaca y determine si el efecto hipotensor es mas intenso. Vierta sus observaciones en la hoja de resultados. 5) Efectos de la adrenalina sobre la PA y la FC Recalibre su sistema de registro de tal manera que 2 cm de deslazamiento de la plumilla equivalgan a 100 mmHg. Incremente la velocidad del registro a 0.5 cm/seg Obtenga un registro control e inyecte 0.5 mg de adrenalina por va endovenosa. Observe y cuantifique los efectos sobre la FC, PA y PAM. Vierta sus observaciones en la hoja de resultados. Antes de continuar, permita que la presin arterial y la frecuencia cardiaca regresen a los valores basales. Recalibre el registro a 3cm = 100 mmHg 6) Efectos de la atropina a) Con la velocidad del papel a 0.5 cm/seg obtenga un registro control b) Con una intensidad de estimulo adecuada, estimule el nervio vago por algunos segundos para encontrar el efecto hipotensor y bradicadizante de la estimulacin vagal. c) Inyecte por va intravenosa 1 mg de atropina por cada 8 Kg de peso del animal y espere algunos minutos. d) Con los parmetros de estimulacin anteriores, estimule el nervio vago cada 15 segundos hasta que observe el efecto bloqueador de la atropina sobre la estimulacin vagal. 7) Efectos muscarnicos y nicotnicos de la Ach a) Con la velocidad del papel a 0.5 cm/seg, inyecte 500 g de acetilcolina por va endovenosa y registre los cambios sobre la PA y FC (note que esta dosis de acetilcolina es 100 veces mayor que la empleada para inducir bradicardia e hipotensin). Terminacin del experimento 1) Sacrifique al animal inyectando 30 ml de solucin de KCl 0.5M por va endovenosa. 2) Desprenda el papel de registro y apague el Fisigrafo. 3) Destinte las plumillas, desconecte los cables del equipo y regrselo a su lugar 4) Retire del animal la cnula traqueal y los catteres arterial y venoso

5) Disponga del animal adecuadamente 6) Recoja el material, lvelo y regrselo al personal responsable 7) Limpie la superficie de trabajo RESULTADOS 1. Frecuencia cardiaca:______________ latidos por minuto. 2. Frecuencia respiratoria:_______________respiraciones por minuto. 3. Presin sangunea: Sistlica_____ mm Hg; Diastlica________mmHg; Presin arterial media: a) del registro_______ mm Hg, b) calculada________mm Hg. 4. Efecto mximo del reflejo del seno carotdeo sobre la PA_________mmHg, FC________ latidos por minuto. Periodo de latencia ________seg. 5. Efecto de la estimulacin vagal sobre la FC, PA y PAM: a) FC________latidos/min. Presin sistlica________mmHg, Presin diastlica________mmHg. Presin media_________mmHg. b) Escape ventricular: Si_________ No________ c) Describa las diferencias en la muesca dicrtica entre el registro control y el efecto del vago. d) Determine el periodo de latencia (intervalo de tiempo entre la aplicacin del estmulo y la aparicin de la respuesta). 6. Efectos de la ACh sobre la FC, PA y PAM a) Frecuencia cardiaca: Control______latidos/min. Efecto mximo de la ACh_______latidos/min. b) Presin arterial sistlica: Control________mmHg; Efecto mximo de la ACh______mmHg. c) Presin arterial diastlica: Control________mmHg; Efecto mximo de la ACh______mmHg. d) PAM: Control________mmHg; Efecto mximo de la Ach________mmHg e) Periodo de latencia_____seg. 7. Efectos de la atropina sobre la FC, PA y PAM a) Frecuencia cardiaca: Control________latidos por minuto; Efecto de la atropina________latidos por minuto b) Presin arterial sistlica: Control________mmHg; Efecto de la atropina _______mmHg. c) Presin arterial diastlica: Control________mmHg; Efecto de la atropina_______mmHg. d) PAM: Control________mmHg; Efecto de la atropina________mmHg e) Periodo de latencia_____seg. 8. Efectos nicotnicos de la ACh sobre la FC, PA y PAM en el animal atropinizado: FC________latidos/min. PA: Sistlica_______mmHg, Diastlica_______mmHg. PAM_______mmHg Conteste las siguientes preguntas: 1) Explique a que se debe la muesca dicrtica. 2) Explique la relacin que hay entre la PA, gasto cardiaco, resistencia perifrica

3) Diga porque disminuye la presin arterial cuando disminuye la frecuencia cardiaca. 4) Haga un esquema de las vas nerviosas que median el reflejo del seno carotdeo. 5) Haga un esquema del sistema nervioso autnomo con sus divisiones simptica y parasimptica. Indique el tipo de neurotransmisor que se libera en cada uno de sus segmentos y donde se localizan los receptores muscarnicos y donde los nicotnicos. 6) Describa los efectos de ACh sobre la presin arterial y la frecuencia cardiaca y explique el mecanismo de acciones de la ACh sobre las clulas cardacas. 7) Describa brevemente el mecanismo de accin de la atropina 8) Describa: a) los efectos de la atropina sobre la presin arterial y la frecuencia cardiaca y b) diga que ocurri cuando se estimul el nervio vago del animal atropinizado. 9) Describa los efectos de la adrenalina sobre la presin arterial y la frecuencia cardiaca 10) Describa el mecanismo de accin de la adrenalina sobre las clulas cardacas. 11) Describa el mecanismo por el cual se produjo incremento de la frecuencia cardiaca y la presin arterial en el animal atropinizado cuando se administraron 500 g de ACh.

Dr. Andrs Quintanar Stephano

Mayo 2006

ALGUNOS FACTORES QUE DETERMINAN LA FORMACIN DE ORINA EN EL PERRO INTRODUCCIN Los riones son rganos reguladores y excretores. Gracias a su capacidad excretora de agua y solutos (orina), los riones son capaces de regular el volumen y composicin de los lquidos corporales dentro de limites muy estrechos, esto a pesar de una amplia variacin en la ingesta de agua y alimento. Como una consecuencia de su papel homeosttico, los tejidos y clulas del cuerpo son capaces de llevar a cabo sus funciones normales en un medio ambiente relativamente constante. Las funciones ms importantes de los riones incluyen las siguientes: 1) La regulacin del volumen y osmolalidad de los lquidos corporales, 2) regulacin del balance electroltico, 3) regulacin del equilibrio cido-base, 4) excrecin de productos del metabolismo y substancias extraas y 5) produccin de hormonas. Los riones regulan la composicin de los lquidos corporales por los siguientes procesos: a) filtracin, b) reabsorcin y c) secrecin y excrecin. Muchos factores afectan el volumen y la composicin de la orina. El flujo sanguneo arterial entra a los glomrulos bajo presin haciendo que el agua y ciertos solutos sean filtrados hacia el espacio de Bowman (filtrado glomerular) y al sistema tubular de la nefrona, en donde ocurren los procesos mencionados. As, el filtrado experimenta cambios conforme fluye por el sistema tubular. Cambios en la presin arterial y en la cantidad de lquido y concentracin de los solutos en la sangre modifican la cantidad y concentracin de solutos de la orina formada a travs del tiempo. Algunas de estos cambios ocurren en respuesta a la presencia de hormonas, tales como la aldosterona, encargada de reabsorber de Na+ y secretar K+ y la hormona antidiurtica (tambin llamada vasopresina) encargada de reabsorber el agua de los tbulos colectores. Se entiende por excrecin a la eliminacin de una sustancia del cuerpo, en este caso, en la orina. Una sustancia es excretada si pasa al sistema tubular formando parte del filtrado glomerular y no es reabsorbida, o bien, es excretada por secrecin activa del espacio peritubular a la luz tubular. Existen muchos factores que determinan el volumen y la composicin de la orina y que invariablemente actan sobre la intensidad de filtracin glomerular, o sobre la intensidad de reabsorcin tubular. Por lo tanto, cualquier factor que altere la intensidad de filtracin glomerular o de resorcin tubular, sern los mismos factores que desempean papel importante en el establecimiento del ritmo de eliminacin de volmenes lquidos. Entre los factores que determinan la tasa de filtracin glomerular est la presin arterial, que aumenta la presin de filtracin, con el consecuente aumento del filtrado glomerular y del volumen lquido eliminado. Por otro lado, un aumento en la presin coloidosmtica del plasma disminuir la presin de filtracin, lo que a su vez producir una disminucin del filtrado glomerular y una disminucin del volumen lquido eliminado.

Por otro lado, cambios en la capacidad del epitelio tubular para reabsorber sustancias desde el lquido tubular, tambin afectar el volumen de orina formado. As, en condiciones normales toda la glucosa es reabsorbida, por lo que no se detectar en la orina; sin embargo, cuando la carga tubular de glucosa aumenta ms all de cierto lmite (transporte mximo), esta aparecer en la orina (glucosuria), adems, al aumentar su concentracin en el sistema tabular ejercer presin osmtica, lo que retiene agua en el sistema tubular, teniendo como resultado final un aumento en la excrecin de agua (diuresis osmtica). La presencia de hormona antidiurtica (ADH o vasopresina, sintetizada en los ncleos suprapticos y paraventiculares del hipotlamo y secretada por la neurohipfisis), induce un incremento en la permeabilidad al agua del epitelio de los tbulos colectores, dando lugar a la produccin de una orina concentrada y de poco volumen. La ausencia de ADH tendr el efecto opuesto (diabetes inspida).

OBJETIVOS: 1. Determinar los efectos de cambios en la presin sangunea sobre el flujo urinario (formacin de orina) 2. Determinar los efectos de la adrenalina sobre la presin y el flujo urinario 3. Observar el efecto de un incremento del volumen sanguneo sobre la formacin de orina 4. Observar el efecto de incrementar la presin osmtica del plasma y del lquido tubular sobre la intensidad de formacin de orina 5. Inducir diuresis osmtica 6. Observar el efecto de la hormona antidiurtica sobre la intensidad de formacin de orina 7. Observar el efecto diurtico de la droga furosemide MATERIAL: Biolgico: Perra 1) Fisigrafo (2 canales), 2) Dos acopladores 7173, 3) Transductor de presin P1000-A, 4) Transductor cuentagotas, 5) Estimulador electrnico, 6) Cables del estimulador, 7) Canalizador de estmulos, 8) Electrodos de ganchillo, 9) Cable de lnea principal, 10) Dos cables conectores del # 9, 11) Cnula traqueal, 12) Tres jeringas de 10 ml con aguja, 13) Tres jeringas de 2.5 ml, 14) Tres jeringas de 1 ml, 15) Estuche de disecciones, 16) Hilos camo del doble cero, 17) Gasas, 18) Cuatro catteres (2 para ureteros, 1 para arteria y 1 para vena), 19) Tres vasos de precipitado; de 20, 50 y 100 ml, 20) Tubos de ensayo de 5 y 10 ml, 21) Tres goteros, 22) Equipo de venoclisis, 23) Estuche para la determinacin de la glucosuria 24) Tubo en Y Soluciones: 1) Pentobarbital sdico, 2) Mil ml de solucin de NaCl al 0.09%, 3) Adrenalina (1 mg/ml), 4) ADH (10 neurohipfisis de rata), 5) Solucin salina al 10%, 6) Solucin de

glucosa al 25%, 7) Furosemide (20 mg/2 ml), 8) Estuche para determinacin de cloruros (Nitrato de plata al 2.9%. Dicromato de potasio al 20%). PROCEDIMIENTO: Calibre 2 canales del Fisigrafo; en un canal monte el sistema para registrar la presin arterial directa utilizando el Trasnductor P-1000-A). En el otro canal monte el sistema para el Trasnductor cuentagotas. Antes de pasar al procedimiento quirrgico para el registro directo de la presin arterial, calibre un canal del Fisigrafo utilizando un transductor de presin P1000-A. Calibre un canal del Fisigrafo (ver prctica del Fisigrafo). Una vez calibrado gire la perilla de MV/CM del amplificador a 20 MV/CM, apague el botn de RECORD del amplificador y proceda a calibrar el canal con el traductor de presin P1000-A. Calibracin del transductor P1000-A NOTA: El transductor es muy sensible por lo que hay que asegurarse de que el transductor est sobre una superficie firme y as evitar las vibraciones que puedan modificar la seal. 1. Conecte las vlvulas A y B en el transductor (vlvulas de tres vas) (Figura 1). 2. Asegrese de que ambas vlvulas estn abiertas a la atmsfera. 3. Conecte la salida lateral de la vlvula A a una jeringa de 10 ml llena de solucin salina heparinizada sin burbujas de aire. Conecte un catter arterial, de unos 40 cm de longitud, a la otra salida de la misma llave A. Gire la llave de control del flujo de la vlvula A de tal manera que se conecten la jeringa con el transductor. 4. Inyecte suavemente la solucin salina hacindola pasar por el transductor hasta que escurra por la llave B que esta abierta a la atmsfera. Inyectando suavemente, golpee ligeramente el transductor para asegurar que no queden burbujas de aire en el transductor. Cierre la vlvula B. 5. Gire la llave del control del flujo de la vlvula A para conectar la jeringa con el catter. Purgue el catter con la solucin salina heparinizada. 6. Gire la llave del control del flujo de la vlvula A para que se conecten directamente el catter con el transductor. De esta manera el transductor est abierto a la atmsfera. Asegrese que el catter y la punta estn a la altura del transductor ya que de lo contrario no se podr calibrar el transductor adecuadamente. 7. Con el botn de RECORD del amplificador apagado, conecte el transductor al Fisigrafo con un cable conector del # 9. NOTA: El acoplador, el amplificador y el reproductor deben estar previamente calibrados. Asegrese de que el transductor est abierto a la atmsfera y que no est conectado con el sujeto de experimentacin (NO DEBE HABER PRESION SOBRE EL TRANSDUCTOR).

8. En el transductor mueva la palanca de PULSATILE-MEAN a la posicin PULSATILE. 9. Usando la perilla de POSITION del amplificador, lleve la plumilla de registro a 2.5 cm por abajo de la lnea central. 10. Gire el control de AMPLITUDE del transductor, completamente en contra del sentido de las manecillas del reloj. 11. Prenda el botn de RECORD del amplificador. 12. Con el botn de BALANCE del acoplador regrese la plumilla a la lnea escogida en el paso 9. 13. Gire el control de AMPLITUDE del transductor completamente en favor de las manecillas del reloj. 14. Gire el control ZERO ADJUST del transductor para regresar la plumilla de registro a la lnea basal del paso 9. La perilla de ZERO ADJUST se encuentra situada en la parte posterior del transductor. 15. Active la palanca de CALIBRATE 100 mmHg del transductor y mantenindola presionada gire la perilla de AMPLITUDE para regresar la plumilla de registro a 3 cm por arriba de la lnea basal. 16. Suelte la perilla de CALIBRATE y asegure que la plumilla de registro regrese a la lnea basal. Repita el procedimiento si es necesario. El registro est ahora calibrado de tal manera que 100 mmHg equivalen a 3 cm de desplazamiento de la plumilla. 17. En la vlvula A, gire la llave del control del flujo para que se conecten la jeringa con el catter arterial. 18. Apague el botn de RECORD del amplificador. Cateterizacin de la artria cartida. 1. Pese al animal y anestsielo con pentobarbital sdico utilizando una dosis de 40 mg/kg de peso/va endovenosa. 2. Inserte una cnula traqueal y asegrela en su lugar llenando el manguito con agua. 3. Rasure la cara anterior del cuello, del abdomen y de una ingle 4. Haga una incisin en la lnea media del cuello de aproximadamente 15 cm. Localice a ambos lados de la traquea las cartidas primitivas y disquelas. Localice el nervio vago derecho localizado en la vaina de la arteria cartida. Utilizando una pinza roma, separe al nervio de la arteria en una longitud de unos 4-5 cm aproximadamente, coloque una ligadura sin apretar alrededor de la arteria y otra alrededor del nervio vago derecho y djela como referencia. 5. Localice la arteria cartida primitiva izquierda y separe el nervio de la arteria en una longitud semejante a la anterior. Insercin del catter arterial 1. Una vez disecada y expuesta la arteria cartida izquierda, coloque tres ligaduras sin anudar alrededor de la misma. Cuide de no lesionar la arteria. La ligadura ceflica (distal), se anuda fuertemente para ocluir la arteria completamente. Las ligaduras media y proximal, se anudan sin apretar y servirn para fijar el catter intra arterial una vez que se haya insertado.

2. La longitud del catter debe ser del tamao suficiente para que al desplazarlo por la arteria la punta quede a nivel del cayado de la aorta. 3. El ayudante aplica traccin a las ligaduras ceflicas y proximal para ocluir el flujo de sangre en el pequeo segmento de cartida que queda entre las ligaduras. Con unas tijeras pequeas, el cirujano hace una pequea incisin en la arteria, apenas suficiente para introducir en direccin del corazn el catter. 4. Una vez que la punta del catter ha quedado en el cayado de la aorta, amarre las ligaduras central y proximal. Lo apretado de los nudos no deben ocluir ni parcialmente el catter ya que si esto ocurre el registro de la presin no se podr realizar adecuadamente. Cuide que no haya escurrimiento de sangre. Si esto ocurre apriete un poco ms las ligaduras. 5. Antes de conectar el catter con el transductor, inyecte un poco de solucin salina heparinizada al animal para remover cualquier cogulo que se haya formado en el catter. Esta maniobra se repite cuantas veces sea necesario para desprender y evitar la formacin de cogulos. 6. Gire la llave de la vlvula A para conectar el catter con el transductor y encienda el botn de RECORD del amplificador para iniciar el registro de la presin arterial. 7. Ajuste la perilla de FILTER del amplificador si la plumilla no est registrado con un trazo claro. NOTA: Si la plumilla de registro no responde adecuadamente, la cnula puede estar pegada a la pared arterial o puede estar tapada con un cogulo. Cheque que la posicin del catter sea la correcta, as como la orientacin de la llave de la vlvula A. NOTA: Cuando no este haciendo registro eleve las plumillas y la palanca del motor del papel. Catetrizacin de la vena femoral 1. Rasure la cara interna de un muslo del animal. 2. Por palpacin identifique el curso de la arteria femoral y por encima de ella haga una incisin en la piel de unos 5-6 cm. 3. Con diseccin roma separe la arteria de la vena femoral en una longitud de unos 4-5 cm y pase dos ligaduras por debajo. 4. Una vez anudada la ligadura distal y haciendo traccin suave con la ligadura proximal para exponerla, haga un orificio en la vena y pase el catter en direccin del corazn unos 10-15 cm. 5. Anude el hilo para fijar el catter a la vena. 6. Utilizando un equipo de venoclisis, inicie la perfusin de una solucin de cloruro de sodio al 0.9% a razn de 30 gotas por minuto. La administracin de la drogas ser por esta va intravenosa (IV). 7. Cubra la herida con una gasa y cheque continuamente que el animal est respirando regularmente. Identifique el plano de anestesia probando los diferentes reflejos y observando las caractersticas del animal como se describen en la tabla de Guedel.

Cateterizacin de los ureteros Abra la cavidad abdominal desde el apndice xifoides hasta la snfisis del pubis, rechace las visceras con una gasa e identifique la vejiga, riones y ureteros. Asle uno de los ureteros y pase dos ligaduras por debajo. Anude la ligadura ms distal del uretero y proceda ha hacer una pequea incisin en el uterero e inserte un catter en direccin del rin. Una vez que el catter ha sido introducido, sujtelo con la ligadura proximal. Repita la maniobra en el uretero opuesto. Disponga los catteres ureterales de tal manera que desemboquen en un tubo en Y (Fig. 1) y colecte la orina en un vaso de precipitado de 500 ml. Interponga la malla del transductor cuentagotas entre el tubo en Y y el vaso de precipitado y proceda a registrar en el Fisigrafo el flujo urinario midiendo el nmero de gotas de orina por minuto Si el flujo de orina es muy lento o no hay, inyecte lentamente solucin salina al 0.9% a travs de la vena, para estabilizar el flujo urinario. Con el registro simultneo de la presin arterial y el flujo urinario inicie el protocolo experimental. Una vez que ambos sistemas estn trabajando, mantenga la velocidad del papel a 0.05 cm/seg, durante todo el experimento MANIOBRAS EXPERIMENTALES: 1. Efecto de la presin sangunea (P.A.) sobre el flujo urinario (F.U.) NOTA. Dado que lo que en esta prctica lo que importa son los cambios en la presin arterial media, mueva la palanca del transductor para medir la presin media Cuente el nmero de gotas de orina durante 5 minutos y saque el promedio por minuto. Este es el flujo urinario por minuto control. Determine la presin sistlica, diastlica y media. a) Efecto del estmulo vagal sobre la P.S. y el F.U. Estimule el nervio vago con una frecuencia de pulsos de 25/seg y 2 mseg de duracin; ajuste el voltaje para obtener una cada de presin de aproximadamente 50 mmHg, mantenga el estmulo durante 2 minutos. Cuente el nmero de gotas por minuto. Pase los datos a la hoja de resultados. b) Efecto de la adrenalina sobre el flujo urinario Una vez que se ha estabilizado la presin arterial y el flujo urinario, tome un registro control durante 5 minutos e inyecte por va venosa 0.5 ml de adrenalina. Determine los cambios de presin arterial y el nmero de gotas de orina por minuto. Pase los datos a la hoja de resultados 2. Efecto del volumen sanguneo sobre el flujo urinario Tome un registro control de la presin arterial y del flujo urinario y proceda a prefundir a chorro 100 ml de solucin salina isotnica. Determine los cambios en la presin arterial y el flujo urinario y antelos en la hoja de resultados.

3. Efecto de cambiar la presin osmtica de la sangre sobre el flujo urinario Tome un registro control de la presin arterial, del flujo urinario y determine la concentracin urinaria de NaCl. Determinacin de los cloruros. Considerando que 20 gotas equivalen aproximadamente a 1 ml, con un gotero vierta 10 gotas de orina en un tubo de ensaye. Con otro gotero aada una gota de dicromato de potasio al 20%. Con otro gotero aada gota a gota solucin de nitrato de plata al 2.9% y agitando el tubo de ensayo cuente el nmero de gotas de nitrato de plata que se tienen que aadir hasta que el color de la solucin vire de color amarillo claro a un color pardo. Cada gota de nitrato de plata que tuvo que aadir equivale aproximadamente a 1 g de NaCl por litro de orina. La cantidad total de NaCl en una muestra de orina se calcula de la siguiente manera: NaCl (g) = volumen de la muestra de orina por el nmero de gotas de nitrato de plata que se aadieron/1000. Inyecte 100 ml de solucin NaCl al 10%, determine los cambios en la presin arterial, el flujo urinario y la concentracin urinaria de NaCl. 4. Diuresis osmtica Determine la presin sangunea y el flujo urinario basal y la presencia de glucosa en la orina control (utilice el equipo de Clinitest). Inyecte lentamente 25 ml de glucosa al 25% y determine los cambios en la presin arterial y en el flujo urinario. Cuando el flujo de orina sea ms intenso, repita la prueba de glucosa en orina. En la hoja de resultados describa los cambios de presin y del flujo urinario ocurridos a travs del tiempo. Determine la concentracin de glucosa en la orina. 5. Efecto de la hormona antidiurtica sobre la formacin de orina Determine la presin sangunea y el flujo urinario basal e inyecte el homogenizado de neurohipfisis de rata (homogenizar 4 neurohipfisis de rata en 1 ml de solucin salina isotnica). Determine los cambios en la presin arterial y flujo urinario. Pase los resultados a la hoja de respuestas. 6. Efectos del furosemide Una vez restablecido el flujo urinario basal, determine la presin arterial y el flujo urinario y proceda a inyectar por el catter venoso 20 mg de furosemide. Determine los cambios en la presin sangunea y el flujo urinario. Pase los resultados a la hoja de respuestas.

Sacrifique al animal con una sobredosis de pentobarbital sdico, y disponga de el adecuadamente. Recoja, lave y limpie el material utilizado y la superficie de trabajo.

RESULTADOS:

1. Efecto de la presin sangunea sobre el flujo urinario CONTROL P.A.________ F.U.________ Observaciones ESTMULO VAGAL P.A._______ F.U.______

2. Efecto de la adrenalina sobre el flujo urinario CONTROL P.A.________ F.U.________ Observaciones ADRENALINA P.A._______ F.U.______

3. Efecto del volumen sanguneo sobre el flujo urinario CONTROL P.A.________ F.U.________ Observaciones VOLUMEN SANGUINEO P.A._______ F.U.______

4. Efecto de cambiar la presin osmtica de la sangre sobre el flujo urinario CONTROL P.A.________ F.U.________ NaCl en orina________g PRESIN OSMTICA (NaCl) P.A._______ F.U.______ NaCl en orina_________g

Observaciones

5. Diuresis osmtica GLUCOSURIA CONTROL ________________mg Observaciones DIURESIS OSMTICA (GLUCOSA 25%) ______________mg

6. Efecto de la hormona antidiurtica sobre la formacin de orina CONTROL P.A.________ F.U.________ Observaciones ADH P.A._______ F.U.______

7. Efectos del furosemide CONTROL P.A.________ F.U.________ FUROSEMIDE P.A._______ F.U.______

Observaciones

8. Conteste lo siguiente: Haga el esquema de una nefrona Seale en la nefrona las diferentes presiones que determinen la presin de filtracin Qu factores determinan la intensidad de filtracin glomerular Cmo se determina experimentalmente la intensidad de filtracin glomerular Explique el significado de aclaramiento renal Describa la cadena de eventos que ocurren despus de inyectar intravenosamente un gran volumen de lquido 7) Explique las caractersticas de la diuresis despus de la inyeccin de NaCl al 10% 8) Explique la diuresis osmtica producida por la glucosa 9) Por qu ocurre glucosuria en la diabetes mellitus no tratada 1) 2) 3) 4) 5) 6)

10) Explique la regulacin del equilibrio hdrico por el sistema de la hormona antidiurtica. 11) Que es el transporte tubular mximo 12) Describa la regulacin de las concentraciones plasmticas de sodio y de potasio por el sistema renina-angiotensina-aldosterona

Revisado: Mayo 8, 2003

Dr. Andrs Quintanar Stephano

MODELO MECNICO DEL APARATO RESPIRATORIO; LA VENTILACIN PULMONAR

INTRODUCCIN Ventilacin pulmonar significa intercambio de aire entre la atmsfera y los alveolos pulmonares. Este intercambio de aire se lleva a cabo gracias a los gradientes de presin que se crean entre los alveolos y la atmsfera durante la inspiracin y espiracin pulmonar. Normalmente los pulmones tienen una tendencia a colapsarse (retraerse), esta tendencia est dada por las propiedades elsticas del pulmn y por la tensin superficial de los lquidos que recubren a los alveolos. En condiciones normales, en el espacio intrapleural existe una presin negativa (con respecto a la atmosfrica) que distiende y evita el colapso pulmonar; a esta presin se le denomina presin intrapleural. En los alveolos tambin existe una presin llamada presin intraalveolar o intrapulmonar que precisamente antes de la inspiracin y antes de la espiracin es igual a la atmosfrica. Durante la inspiracin, la actividad de los msculos inspiratorios distiende la cavidad torcica; las presiones intrapleural e intrapulmonar disminuyen paralelamente, de tal manera que la presin intrapulmonar se hace negativa con respecto a la atmosfrica, estableciendo un gradiente de presin que permite que el aire entre a los pulmones Al dejar de actuar los msculos inspiratorios los pulmones tienden a colapsarse, creando un aumento en la presin intrapulmonar, lo que invierte el gradiente de presiones, provocando que el aire se desplace ahora de los alveolos hacia la atmsfera. El modelo mecnico del pulmn (Fig.1) est constituido por un recipiente rgido transparente (frasco de vidrio sin fondo) que representa al trax. El extremo ancho del frasco se asla del medio con una membrana elstica que representa al msculo diafragma. En la boca del frasco se inserta un tapn de hule con dos orificios por el que se atraviesan dos tubos; en el extremo intratorcico de uno de ellos se ata un globo que representa a los pulmones, mientras que el resto del tubo incluyendo el extremo que queda por fuera, representa a las vas respiratorias (nariz, trquea, bronquios, bronquiolos, etc.). El otro tubo (intratorcico) que queda entre el globo y la pared del recipiente (cavidad pleural) nos permitir extraer el aire intrapleural y medir los cambios de presin durante la respiracin. En el extremo exterior de cada tubo se conectan sendos tubos en Y con sus respectivas mangueras. En el tubo que conecta al globo, una de las mangueras se utiliza para modificar la resistencia de las vas areas, mientras que la otra se conecta a un transductor de presin. En el tubo que conecta con la "cavidad pleural", una de las mangueras nos servir para crear presin negativa en dicha cavidad y la otra, conectada a un transductor de presin, para medir los cambios de presin intrapleural (Fig. 1)

OBJETIVOS 1) Conocer las estructuras del sistema respiratorio y su funcionamiento durante la ventilacin pulmonar 2) Medir los cambios de presin intrapleural e intrapulmonar durante un ciclo respiratorio normal 3) Comprender cmo afecta a la ventilacin pulmonar un aumento en la resistencia de las vas respiratorias 4) Medir la presin mxima que puede alcanzar un sujeto normal en inspiracin y espiracin forzada. MATERIAL 1) Fisigrafo 2) dos transductores de presin P-1000-A 3) mangueras de plstico 4) llaves de 3 vas 5) frasco de vidrio de 3.5 litros sin fondo 6) membrana de hule 7) globo 8) tubos, 9) tubos en Y 10) ligas 11) tapn de hule con dos orificios, 12) estativos. MANIOBRAS EXPERIMENTALES Calibre dos canales del fisigrafo con sendos transductores de presin (P-1000-A), de tal manera que 1 cm = 10 mm de Hg. Conecte uno de los transductores con una de las mangueras del tubo en Y que corresponde a la va area. El otro transductor se conecta con el tubo en Y del espacio intrapleural. Identifique sobre el papel a que presin corresponde cada uno de los registros. Abra la pinza del tubo que va al espacio intrapleural y aspire el aire, esto har que el globo se infle. nflelo hasta que llene la cuarta parte de la cavidad torcica. Cierre la pinza para separar el espacio intrapleural de la atmsfera. Lea y anote la presin intrapleural en reposo. Observe el tamao del globo y la posicin que ha adoptado el diafragma.

Lentamente proceda a jalar (inspiracin) y a empujar (espiracin) el diafragma hacia fuera y hacia adentro del trax. Observe los cambios de volumen del globo durante la inspiracin y la espiracin. Lea y anote los cambios en las presiones intrapulmonar e intrapleural. Mueva el diafragma en ambos sentidos, un poco ms rpido que antes. Anote los cambios de presin intrapulmonar e intrapleural a esta nueva velocidad. Explique las diferencias que se observan en las presiones intrapulmonares e intrapleural cuando se respira con una frecuencia frecuencia. EFECTO DE AUMENTAR LA RESISTENCIA EN LAS VAS AREAS Mueva lentamente el diafragma en ambos sentidos y cierre gradualmente las pinzas de tornillo sobre el tubo que une el pulmn con la atmsfera. Con ello se intenta simular el aumento de la resistencia al paso del aire como ocurre en las enfermedades de las vas respiratorias, como ocurre durante la obstruccin parcial de la nariz en el resfriado. Lea y anote los cambios que produce el aumento de resistencia de las vas areas sobre las presiones intrapulmonar e intrapleural durante el ciclo respiratorio. PRESIONES INTRAPULMONARES E INTRAPLEURALES DURANTE EL CICLO RESPIRATORIO Inspiracin. Abra completamente la pinza de la va respiratoria y deje que el modelo adopte su posicin respiratoria normal de reposo. Cierre completamente la va respiratoria y saque el diafragma lo ms posible sin romper el modelo (inspiracin forzada mxima). Manteniendo el diafragma en esta posicin se leen y anotan las presiones intrapulmonar e intrapleural. Dejando el diafragma en esta posicin de inspiracin mxima, abra un poco la pinza para dejar entrar un poco de aire al globo y cirrela inmediatamente. Repita la maniobra 5 veces de tal manera que en la quinta etapa la presin intrapulmonar se vuelva igual a la atmosfrica. Leas y anote las presiones intrapulmonar e intrapleural despus de cada admisin de aire. Espiracin. Cuando las presiones intrapulmonar y la atmosfrica se han equilibrado, cierre otra vez la va respiratoria y empuje el diafragma para provocar una espiracin forzada mxima. Se observan y anotan las presiones intrapulmonar e intrapleural que ahora corresponden al principio de una espiracin contra una va area cerrada. De nuevo y tambin por etapas, abra y cierre la pinza rpidamente para permitir la espiracin. Procure tambin que sean 5 las etapas hasta que se alcance la presin de reposo, es decir, que la presin intrapulmonar sea igual a la atmosfrica. Observe y anote las presiones, tanto intrapulmonar como intrapleural en cada una de las etapas. En la hoja de resultados grafique los cambios de presin intrapulmonar e intrapleural de tal manera que el eje de las ordenadas corresponda a las presiones intrapulmonar (lnea contnua) e intrapleural (lnea punteada). En el eje de las abscisas se ponen las 5 etapas en que se dividi la inspiracin y la espiracin. Note el paralelismo de los cambios de las presiones intrapulmonar y la intrapleural en cada una de etapas en que se dividi el ciclo respiratorio.

MEDICIN DE LA PRESIN INSPIRACIN FORZADA

DURANTE UNA

ESPIRACIN Y

UNA

Desconecte del modelo pulmonar la manguera de uno de los transductores y colquela en la boca de uno de los estudiantes. Indquele que haga una espiracin mxima teniendo cuidado de no hacer presin con las mejillas, es decir, se debe mantener la glotis abierta. Determine en el registro la presin espiratoria mxima alcanzada. Se le indica ahora que realice una inspiracin forzada mxima. Mida y anote las presin mxima alcanzada durante la espiracin y la inspiracin forzada. Fueron iguales las presiones durante la inspiracin y espiracin mximas? Compare los resultados con los datos del libro de texto. RESULTADOS MECNICA DE LA REPIRACIN ESTADO DEL MODELO PRESIN PRESIN DEL PULMN INTRAPULMONAR INTRAPLEURAL Reposo (pulmn distendido) Inspiracin lenta Espiracin lenta Inspiracin rpida Espiracin rpida EFECTO DEL AUMENTO EN LA RESISTENCIA DE VAS RESPIRATORIAS PRESIN PRESIN INTRAPULMONAR INTRAPLEURAL Reposo (mayor resistencia) Inspiracin Espiracin PRESIN INTRAPULMONAR E INTRAPLEURAL DURANTE EL CICLO RESPIRATORIO PRESIN PRESIN INTRAPULMONAR INTRAPLEURAL Inspiracin mxima (vas respiratorias cerradas) Etapa 1 Etapa 2 Etapa 3 Etapa 4 Etapa 5 (vas respiratorias abiertas Espiracin mxima (vas respiratorias cerradas) Etapa 1 Etapa 2

Etapa 3 Etapa 4 Etapa 5 (vas respiratorias abiertas)

Presiones intrapulmonar e intrapleural en las diferentes etapas del ciclo respiratorio Comparacin de las presiones intrapulmonar e intrapleural del modelo con las del humano (compare con los datos del libro de texto) EXPERIMENTAL Esfuerzo inspiratorio mximo: Presin intrapulmonar Esfuerzo expiratorio mximo: Presin intrapulmonar ___________________mm Hg _________________mm Hg _____________________mm Hg _______________mm Hg TEXTO

En el estudiante las presines espiratoria e inspiratoria mximas fueron: Espiracin mxima _______mmHg Inspiracin mxima _______mmHg CUESTIONARIO 1) Cuando se saca el aire del espacio intrapleural, el pulmn ______________ y el diafragma _______________ Explique la causa de este fenmeno.

2) Durante la inspiracin, la presin intrapulmonar es __________ la presin atmosfrica; pero el final de la inspiracin, cuando ya no fluye aire, la presin intrapulmonar es ___________________ la presin atmosfrica. 3) Durante la espiracin, la presin intrapulmonar es __________________ la atmosfrica; pero al final de la espiracin, cuando ya no fluye aire, la presin intrapulmonar es _______________ la presin atmosfrica. 4) La presin intrapleural siempre es ____________ respecto a la intrapulmonar. 5) La diferencia absoluta de presiones intrapulmonar e intrapleural permanece constante o vara durante el ciclo respiratorio. 6) Si el espacio intrapleural no fuera independiente de la atmsfera, qu le pasara a la cantidad de aire que entra y sale de los pulmones? BIBLIOGRAFA 1) Armstrong G.G. Modelo Mecnico del Pulmn. En: Manual de Prcticas de Fisiologa. Editorial Interamericana. Mxico. pp 159-164. 1970. 2) Ganong W.F. Pulmonary Function. In: Review of Medical Physiology. Lange Medical Books/McGraw-Hill. New York. pp 617-634. 2001. 3) Guyton C.A. and Hall J.E. Pulmonary Ventilation. In: Textbook of Medical Physiology. Saunders. Philadelphia. pp 432-443. 2000.