Material Formativo Interlabos

INTERLABORATORIOS 2006 GRUPO BIOINDICACIN SEVILLA
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NDICE
Captulo 1: Manual de trabajo
1. INTRODUCCIN: TCNICA ANALTICA
2. PROCEDIMIENTO OPERATIVO DE TRATAMIENTO Y CONSERVACIN DE LAS MUESTRAS
3. PROCEDIMIENTO OPERATIVO PARA LA TINCIN DE BACTERIAS FILAMENTOSAS SOBRE
FROTIS FIJOS
4. PROCEDIMIENTO OPERATIVO PARA LA TINCIN DE PROTOZOOS
5. PROCEDIMIENTO OPERATIVO PARA CADA HOJA DE TRABAJO
5.1.- Evaluacin de la calidad de un fango biolgico: Niveles macroscpicos y microscpicos.
5. 2.- Evaluacin del desarrollo de bacterias filamentosas en un fango activo.
5.3.- Evaluacin de la microfauna presente en fangos activos. Valoracin cuantitativa. ndice bitico de
Madoni e ndice de Biodiversidad de Shannon-Weaver.
5.4.- Evaluacin total del fango activo: Conclusiones.
6. FICHAS DE RECOGIDA Y ANLISIS DE DATOS MICROBIOLGICOS
Captulo 2: Claves identificativas
1. INTRODUCCIN
2. BACTERIAS
3. PROTOZOOS
Captulo 3: ndices biticos
1. INTRODUCCIN
2. EL CASO CONCRETO DE LAS AGUAS RESIDUALES
3. NDICE MADONI
4. NDICE DE SHANNON
Captulo 4: Concepto "bioindicacin" y algunas notas bioindicadoras
1. INTRODUCCIN: QU ES LA BIOINDICACIN?
2. EL ECOSISTEMA BALSAS
3. GRUPOS BIOINDICADORES EN BALSAS
3.1. Taxonoma
3.2. Bacterias
3.3. Protozoos y Micrometazoos
3.4. Medios de observacin, cultivo y tratamiento de las muestras
3.5. Aplicaciones de la bioindicacin en la mejora del proceso depurador
3.6. Problemas ocasionados por bacterias filamentosas en el fango activo y parmetros
asociados

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3.7. Protozoos asociados a distintas circunstancias en la cuba de aireacin
Anexo: Recopilacin de imgenes fotogrficas: protozoos en el fango activo

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CAPTULO 1: MANUAL DE TRABAJO.
1. INTRODUCCIN: TCNICA ANALTICA

Generalidades
El estudio de la microfauna en fangos activos complementa el anlisis fsico-qumico
del sistema y nos aporta una visin ms profunda de las condiciones de funcionamiento. El
conocimiento de la abundancia, diversidad y estructura de la comunidad de microorganismos
es fundamental para evaluar el grado de depuracin y la calidad del efluente, permitindonos
preveer la aparicin de problemas en el funcionamiento o, en caso de alteraciones ya
establecidas, atajarlas desde su origen, contribuyendo a la toma de decisiones junto a los
parmetros operacionales de la EDAR.
El informe biolgico establecido consta de 4 "hojas de trabajo" o "fichas de recogida y
anlisis de datos microbiolgicos", en las que por una parte se establece una evaluacin de la
calidad del fango como ndice de fango (IF) (
1
"Evaluacin macroscpica y microscpica del
fango activado") y, por otra, se realiza una valoracin de la biota, tanto en el mbito de
bacterias filamentosas (
2
"Evaluacin de las bacterias filamentosas") como de protozoos
(
3
"Evaluacin de la microfauna"). De la integracin de estas tres hojas de trabajo se obtiene la
ltima, en la que se extraen conclusiones sobre la calidad previsible del agua de salida, as
como la estabilidad biolgica del sistema (
4
"Evaluacin final del fango activado").
Se sobreentiende que se poseen unos conocimientos mnimos sobre el manejo del
microscopio y de muestras de fango activado. De la misma forma, se requiere de un
adiestramiento suficiente como para reconocer los diferentes grupos funcionales de protozoos.

Campo de aplicacin
Este sistema est diseado para poder obtener, de una forma lo ms metdica posible,
una informacin complementaria a los anlisis fsico-qumicos, que permita mejorar la toma
de decisiones respecto a los parmetros operacionales de una EDAR convencional y conocer
las causas de las alteraciones del proceso que se puedan producir. La abundancia, diversidad y
estructura de la comunidad de microorganismos son fundamentales para evaluar el grado de
depuracin y la calidad del efluente, permitindonos prever la aparicin de problemas en el
funcionamiento o, en caso de alteraciones ya establecidas, atajarlas desde su origen,
mejorando la toma de decisiones respecto a los parmetros operacionales de la EDAR.

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Fundamento
El anlisis se realiza sobre muestras in vivo del fango activado de una EDAR a la que
se le pueden realizar tres tipos de anlisis: sobre muestra viva, sobre muestra viva con
colorante o sobre muestra fijada y teida.

Interferencias
La muestra debe ser lo ms reciente posible y se debe realizar su anlisis cuanto antes.
En todos los casos es recomendable realizar el anlisis ante de 5 horas desde la toma de
muestras, sobre todo para el caso de los fangos jvenes (muy inestables). Es admisible un
tiempo de espera de 24 horas y en muestras de oxidacin toal de incluso 48 horas.

2. PROCEDIMIENTO OPERATIVO DE TRATAMIENTO Y CONSERVACIN DE
LAS MUESTRAS

Preparacin del microscopio.
1.- Realizar ajuste Khler.
2.- Ajuste de anillos para contraste de fases.
3.- Limpieza de objetivos y portaobjetos con solucin ter/etanol 3:1.
4.- Utilizar filtro azul para observar tinciones o resaltar contornos en organismos vivos.
5.- Utilizar filtro verde para contraste de fases y resaltar tinciones Gram y Neisser difciles de
determinar.

Toma de muestras.
1.- Utilizar botes de plstico limpios de 2.000 mL.
2.- Toma de muestras a profundidad determinada y fija.
3.- Punto de muestreo fijo y en zona de mxima homogeneidad del fango.
4.- El llenado del bote de muestreo debe dejar siempre de su contenido vaco.
6.- Conservar segn protocolo.

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Transporte.
El transporte se realizar en nevera, con el bote situado lo ms estable posible, rodeado
de material envolvente para evitar la disgregacin del flculo por movimientos bruscos. No es
recomendable la refrigeracin excesiva, aunque s mantener una temperatura en torno a los
13C. En la medida de lo posible, realizar el transporte mediante envo urgente.

Conservacin de muestras.
Inmediatamente a la recepcin de las muestras se tomarn tres alcuotas con distintos
tratamientos:
Alcuota 1: Destinada a la caracterizacin del flculo. Mantenida a temperatura
ambiente y sin airear.
Alcuota 2: Destinada a la caracterizacin de la microfauna (protozoos). Mantenida a
temperatura ambiente, con oxigenacin mediante piedra porosa (compresor de aire). La
oxigenacin debe colocarse en superficie una vez que ha decantado la muestra, de forma que
exista oxgeno para el metabolismo microbiano, pero sin que se modifique el fango por la
agitacin.
Alcuota 3: Destinada a la caracterizacin de bacterias filamentosas. Mantenida en
frigorfico, sin agitacin. Previamente se realizarn 5-6 frotis bacterianos para su tincin
posterior.

Tratamiento de las muestras.
1.- Muestras in vivo.
* Para observacin de la muestra sin alterar, aadir directamente una gota (25 L) sobre
un portaobjetos y colocar encima un cubreobjetos.
* Para inmovilizar organismos y observar estructuras visibles sin necesidad de tincin,
colocar la gota sobre el portaobjetos, poner un cubreobjetos y prensar suavemente.
2.- Muestras fijadas.
* Indicada para el estudio cuantitativo de organismos.
* Permite la observacin de las estructuras de los organismos tal y como estaban en el
momento de tomar la muestra y aadir el reactivo de fijacin (Lquido de Bowin).
3.- Muestras teidas.
* Para resaltar estructuras especficas que no se observan fcilmente en la muestra in vivo.

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Procedimiento operativo.
1.- Agitar con suavidad la muestra para homogeneizarla, si se pretenden observar las
caractersticas del flculo o realizar un anlisis cuantitativo.
2.- Dejar decantar y tomar la muestra de la porcin sedimentada cuando se quiera estudiar la
diversidad de organismos.
3.- Tomar entre 25 L con una micropipeta con punta de boca ancha, depositarlos en un
portaobjetos (previamente desengrasado) y colocar encima un cubreobjetos, generalmente de
18*18. Para recuentos, cambiar la punta de la micropipeta entre rplicas, pues se trata de una
fuente de error muy habitual.
4.- Proceder al anlisis microscpico de la preparacin utilizando los distintos objetivos. El de
100x u objetivo de inmersin emplea aceite y se utiliza para observar estructuras en detalle.
5.- Observar, al menos, de 2 a 3 preparaciones de la muestra.
6.- Se recomienda como complemento el anlisis de los MLSS, V
30
e IVF.

3. PROCEDIMIENTO OPERATIVO PARA LA TINCIN DE BACTERIAS
FILAMENTOSAS SOBRE FROTIS FIJOS

En el estudio de fangos activos se utilizan dos tipos de preparaciones, dependiendo del
objeto de estudio:
Preparaciones en fresco, en las que los microorganismos se encuentran vivos y
pueden observarse directamente, empleando el contraste aportado por el propio material
biolgico o empleando el contraste de fases si es que el material biolgico es de densidad
homognea. Tambin pueden utilizarse diversos colorantes que pongan de manifiesto alguna
estructura de inters como la tincin verde de metil actico en protozoos, por ejemplo.
Preparaciones fijadas (frotis fijos), sobre las cuales se aaden colorantes que
producen una serie de reacciones qumicas, cuyas respuestas nos permitirn confirmar la
identificacin de microorganismos filamentosos.
Las tinciones de bacterias filamentosas se realizan sobre un frotis fijo. Para ello se
toma un portaobjetos, previamente desengrasado con etanol 95 %, y en posicin inclinada se
hacen escurrir unas gotas de muestra bien homogeneizada sobre l. Dicho portaobjetos se
dejar secar al aire en posicin horizontal, sin utilizar ninguna fuente de calor.

Interferencias

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Frotis no extendidos. Cristalizaciones y caducidad en los reactivos.

Tincin de Gram
Generalidades
La pared celular que protege a la clula y le da forma y rigidez, tiene una composicin
compleja, estando constituida por peptidoglicano, cidos teicoicos y/o teicurnicos,
polisacridos, lipopolisacridos, lpidos, protenas y lipoprotenas. Estos compuestos se
asocian entre s de forma diversa dando lugar a dos tipos fundamentales de paredes, lo que se
traduce en dos tipos de bacterias, Gram-positivas y Gram-negativas, que responden de forma
diferente a la tincin de Gram.

Fundamento
La reaccin de Gram est relacionada con las principales diferencias en la
composicin qumica y en la ultraestructura de las paredes celulares. Una muestra de clulas
fijadas se tie sucesivamente con el colorante cristal violeta y con una solucin diluida de
yodo. La preparacin se trata luego con un disolvente orgnico (alcohol o acetona). Las
bacterias Gram-positivas resisten la decoloracin y permanecen teidas de un color azul
oscuro, las bacterias Gram-negativas son rpida y completamente decoloradas.

Instrumental
- Pipeta Pasteur
- Portaobjetos (75 x 25mm)
- Microscopio ptico con objetivo de 100x

Reactivos
- Solucin I: Cristal violeta + Oxalato amnico
- Cristal violeta: 2 g + 20 mL etanol 95 %
- Oxalato amnico: 0,8 g + 80 mL agua destilada
- Solucin II: Lugol-Yodo (mantener en oscuridad y frasco topacio)
- Yodo: 1g + 2 g yoduro potsico + agua destilada 300 mL
- Solucin III: Safranina
- Safranina al 2,5 % en etanol 95 %

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Procedimiento
1.- Teir un minuto con solucin I
2.- Aclarar con agua destilada durante algunos segundos
3.- Aplicar solucin II un minuto
4.- Escurrir el exceso de colorante y aclarar con agua destilada
5.- Decolorar con etanol 95 % gota a gota durante 30 segundos
6.- Lavar con agua destilada
7.- Teir con solucin III durante un minuto
8.- Lavar con agua destilada
9.- Secar por absorcin con papel secante o filtro
10.- Observar al microscopio con objetivo de inmersin (100X)

Expresin de resultados
Color azul-violeta: Gram +
Color rojo-rosa: Gram

Respuesta a la Tincin de Gram.
(A) Organismo Tipo 021N, Gram negativo; 100x, campo claro.
(B) Nocardia spp. Gram positiva; 100x, campo claro
B
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A

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Tincin de Neisser
Generalidades
Las bacterias almacenan en su interior ciertos compuestos: grnulos de reserva. Entre
ellos se encuentran los polifosfatos. La tincin de Neisser pone de manifiesto la presencia de
estas sustancias de reserva, consistentes en grnulos de polifosfato (volutina) las cuales no son
visibles sin una tincin que los haga reaccionar qumicamente.

Fundamento
El ingrediente activo de la tincin de Neisser es el azul de metileno, que por su
carcter catinico se une a los sitios aninicos de las cadenas polimricas de polifosfato,
colorendolos de azul violeta. Esta coloracin se corresponde con una reaccin Neisser
positiva, la cual tie de manera uniforme algunos filamentos como el Tipo 0092 o slo
algunos puntos de otros filamentos como Nocardia sp.

Instrumental
- Pipeta Pasteur

Reactivos
-Solucin I: 2 A + B (Mezclar 2 partes de la solucin A y una parte de B (v/v))
-A: 0,1 g de Azul de metileno +5 mL etanol 95 % + 5 mL cido actico glacial
+100 mL agua destilada
-B: 3,3 mL de Cristal violeta al 10 % en etanol al 95 % + 6,7 mL etanol 95 %
+100 mL agua destilada
-Solucin II: 33,3 mL de Marrn Bismarck (Crisoidina) al 1 % en solucin acuosa +
66,7 mL de agua destilada

Procedimiento
1.- Teir el frotis con solucin I durante 30 segundos
2.- Lavar con agua destilada durante unos segundos
3.- Teir durante 1 minuto con solucin II

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4.- Aclarar con agua destilada
5.- Secar por absorcin con papel secante o filtro
6.- Observar al microscopio con objetivo de inmersin (100X)

- Color azul-violeta: Neisser +
- Color marrn claro amarillento: Neisser -
- Color marrn oscuro en el interior del filamento en forma de grnulos: Grnulos N+

Respuesta a la Tincin de Neisser.
(A) Organismo Tipo 0092. Neisser positivo; 40x, campo claro.
(B) Nocardia spp. Neisser negativo, grnulos Neisser positivo; 100x, campo claro.

Tincin de poli-|-hidroxibutirato
Generalidades
El cido Poli-|-hidroxibutirato, constituye un material de reserva exclusivo de los
grupos procariticos.
El contenido celular de este material de reserva es, por lo general, relativamente bajo
en clulas que estn creciendo activamente. El almacenamiento se produce cuando las clulas
tienen una limitacin de nitrgeno, pero disponen an de fuentes de carbono y energa. En tal
situacin no hay sntesis de cidos nucleicos ni protenas y la mayor parte del carbono
asimilado se convierte en material de reserva, que puede almacenarse hasta constituir el 50%
del peso seco celular. Si a estas clulas se les priva entonces de una fuente externa de carbono
y se les suministra una fuente apropiada de nitrgeno, los materiales de reserva pueden ser
usados para sintetizar cidos nucleicos y protenas.

B
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A

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Fundamento
Los depsitos de PHB se tien especficamente con negro Sudn. Son fcilmente
visibles al microscopio ptico, como grnulos refringentes de tamao variable repartidos por
el citoplasma.

Instrumental
- Pipeta Pateur

Reactivos
- Solucin I: Negro Sudn B (IV), al 0,33% (p/v) en etanol al 60%
- Solucin II: Safranina al 0,5% (p/v) en solucin acuosa

Procedimiento
- Preparar frotis sobre portaobjetos y secarlos completamente al aire hasta su
fijacin.
- Teir con solucin I durante 10 minutos. Si se evapora aadir ms colorante
(evitar su cristalizacin).
- Verter el exceso de colorante, lavar 1 segundo con agua destilada y secar con
papel secante o de filtro.
- Teir con solucin II durante 15 segundos. Aclarar con agua destilada y secar
con papel secante o de filtro.
- Examinar a 1000x con aceite de inmersin y en campo claro (sin contrasta de
fases).

- Grnulos de PHB: Grnulos intracelulares negro azulados
- Ausencia de grnulos de PHB: Citoplasma rosa, claro o sin teir.

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Respuesta a la Tincin de PHB.
(A) Flexibacter sp., Grnulos de PHB en el medio; 100x, contraste de fases.
(B) Filamento no identificado, Tincin PHB positiva; 100x, campo claro.

Nota: En la siguiente tabla se presentan las referencias para los kits de tincin de Gram y Neisser
CASA MICROKIT:
918974616
KIT GRAM CDIGO SDA004
CASA PANREAC
KIT GRAM-
HUCKER
CDIGO 254884.19
CASA MERCK
KIT NEISSER
- 1 a
- 1 b
- 2

CD. 1.09238.0100
CD. 1.09239.0100
CD. 1.09240.0100

4. PROCEDIMIENTO OPERATIVO PARA LA TINCIN DE PROTOZOOS
Tincin de Noland
Tincin de flagelos

Reactivos
Solucin I: 20 mg de cristal violeta + 80 mg de fenol + 20 ml de formaldehdo al 40 %
+ 4 ml glicerol

Procedimiento
1.- Mezclar una gota de solucin I con una gota de muestra en el portaobjetos
2.- Colocar un porta y observar a 100X bajo aceite de inmersin y campo claro

Resultados
Los flagelos aparecen teidos de color azul

B
A

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Tincin verde de metilo
Tincin diferencial de los ncleos de los protozoos

Reactivos
- Solucin I: dilucin de verde de metileno al 1% en actico al 1%

Procedimiento
1.- Mezclar una gota de solucin con una gota de muestra en el portaobjeto.
2.- Observar a 100X bajo aceite de inmersin y en campo claro.

Resultados
Aparecen las estructuras nucleares internas coloreadas de verde

Tincin de impregnacin de nitrato de plata
Dada la dificultad de otros mtodos de impregnacin argntica como Fernndez-
Galiano, puede aplicarse el procedimiento que se expone a continuacin, con una metodologa
ms sencilla y que, si bien no tie los mismos elementos, pone de manifiesto el cinetosoma y
el argiroma de los ciliados, facilitando su identificacin.
En algunos casos puede ser necesario el cultivo previo del organismo, para tener una
poblacin mnima sobre la que hacer la tincin. En esos casos se pueden pescar los
organismos bactervoros con una micropipeta e introducirlos en una infusin de lechuga o en
un medio de trigo: 50g de trigo hervidos en 1L de agua destilada, fitrados posteriormente y a
los que se aade 1 grano de trigo. Estos medios favorecen el crecimiento bacteriano, con lo
que los organismos capturados y puestos en su interior pueden alimentarse y aumentar su
poblacin.

Reactivos
Nitrato de plata al 2%

Procedimiento
- Realizar un frotis del fango activo sobre un portaobjeto. Una vez secado, comprobar
que los protozoos no han estallado
- Cubrir el portaobjetos con la solucin del nitrato de plata unos 6-8 minutos
- Lavar abundantemente con agua destilada

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- Colocar en un bao de agua destilada, de forma que el portaobjetos quede totalmente
cubierto
- Situar bajo una fuente de luz intensa (preferiblemente natural) durante varios minutos
y esperar a que el portaobjetos se vaya oscureciendo. Debemos realizar entonces controles del
microscopio para comprobar que la impregnacin se va realizando correctamente.
Aproximadamente en 5 minutos, queda terminada.
- Observar a 100x bajo aceite de inmersin y en campo claro

Resultados
Aparecen las estructuras del argiroma y el cinetosoma coloreados

VORTICELLA PARAMECIUM ARCELLA

DIFLUGGIA VALVA DE OSTRCODO

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5. PROCEDIMIENTO OPERATIVO PARA CADA HOJA DE TRABAJO
Como se expuso anteriormente, el anlisis biolgico completo de un fango activo
consta de varios apartados:
1. Valoracin macroscpica y microscpica de un fango activo: ndice de Fango (IF).
2. Identificacin y cuantificacin bacteriana (organismos filamentosos).
3. Identificacin y cuantificacin protozoaria.
4. Valoracin general del estado del fango: conclusiones.

1 HOJA DE TRABAJO
5.1.- Evaluacin de la calidad de un fango biolgico: Niveles macroscpicos y
microscpicos.
En esta hoja se han definido una serie de parmetros considerados de inters para
establecer las caractersticas ms generales de un fango. La valoracin de dichos parmetros
permite obtener un estudio simplificado de la muestra en funcin de las caractersticas macro-
y microscpicas de sta, lo que genera un valor denominado ndice de fango (IF).
El IF est directamente relacionado con los porcentajes de reduccin de SS, DQO y
DBO de la EDAR (Jimnez et al., 2001), proporcionando la posibilidad de obtener un
histrico de valores de calidad biolgica de forma rpida, comparable y de protocolo sencillo,
a partir de la puntuacin de una serie de caractersticas macroscpicas del fango (observables
a travs de la V
30
) y microscpicas (observables a travs de un objetivo de 10x). El valor
final, comprendido entre 0 y 100, define la calidad del fango.
La valoracin de las caractersticas macroscpicas del fango activo se realiza a travs
del ensayo de la V30, que determina la cantidad de fango activado que decanta en una probeta
o cono Imhof, tran una espera de 30 minutos, siendo a veces interesante valorar la V60 y
V120.
A nivel macroscpico (sobre la V
30
) se definen:
- Turbidez del clarificado
Alta: visibilidad muy baja a travs de la probeta
Media
Baja: visibilidad clara a travs de la probeta
- Flculos en suspensin en el clarificado
Alta: abundancia de microflculos

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Media: presencia de microflculos
Baja: prcticamente ausencia de microflculos
- Sedimentabilidad del fango
Alta: la mayor parte del fango decanta en los 10 primeros minutos del ensayo y
el fango est muy compactado
Media: la mayor parte del fango decanta entre 10-20 minutos y se observa un
ligero esponjamiento
Baja: la mayor parte del fango decanta despus de 20 minutos y se observa un
claro esponjamiento
- Olor: caracterstica macroscpica del fango activado que se define como correcto
o incorrecto, indicando este ltimo situaciones como septicidad, presencia de
vertidos, etc.
El mximo valor obtenido por las caractersticas macroscpicas es de 30 sobre 100.
Si se produce un levantamiento total o mayoritario de la manta de fangos, se indica
como valor macroscpico cero.
A nivel orientativo y con relacin a la turbidez, de compleja evaluacin, se muestran
algunas fotografas que permiten ajustar los tres rangos de este parmetro. La turbidez se
desglosa en esta valoracin de los microflculos en suspensin del clarificado, valorndose
ambos de forma independiente. Por lo tanto, la medicin directa sobre el clarificado con un
turbidmetro nos proporcionar un valor errneo.
Como referencia, se toma un objeto y se coloca en parte trasera de la probeta. Si la
forma del objeto se observa claramente, la muestra se define como poco turbia (turbidez
baja). En este caso incluso se pueden apreciar los dibujos existentes sobre el objeto. Si los
contornos se aprecian, pero no es posible observar el dibujo de la superficie, se define
turbidez media. Por ltimo, si no es imposible observar ningn dibujo y los contornos del
objeto quedan difuminados e incluso no se ven, se habla de turbidez alta.
El conjunto de caractersticas microscpicas recogidas durante la observacin
microscpica se refieren al examen del estado morfolgico y estructural del flculo de fango
activo (forma, tamao, estructura, textura, cobertura, etc.) y al examen del componente
bitico del "ecosistema fango activo", representado por las poblaciones de bacterias
filamentosas y de protozoos (principalmente ciliados).
La evaluacin de estas caractersticas proporciona informacin sobre las propiedades
de decantacin y compactacin del fango activo durante la fase de clarificacin del licor

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mezcla, as como el nivel y estado de colonizacin de la microfauna, aludiendo
indirectamente al grado de actividad biolgica del proceso depurador.
Proceder tal y como se expone en el apartado 2 (subapartado "procedimiento
operativo"), procedimiento destinado a la observacin de la muestra sin alteracin de la
estructura flocular ni la disposicin del entramado filamentoso.

A nivel microscpico se definen:
- Forma del flculo: caracterstica que define la morfologa externa del flculo
como regular si aparece de forma redondeada e irregular si difiere de esta
configuracin
- Tamao del flculo:
Pequeo: tamao menor de 150 m
Medio: tamao entre 150 y 500 m (incluidos ambos valores)
Grande: tamao mayor de 500 m
TURBIDEZ
MEDIA
ALTA
BAJA

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- Estructura del flculo:
Compacto: no existen prcticamente huecos en la estructura interna del flculo
Medio: se detectan algunos huecos
Abierta: existen bastantes huecos dentro del flculo que rompen la unidad
interna

TAMAOS
FLOCULARES
>500
micras
150-500
micras
< 150
micras
TAMAO MEDIO
TAMAO GRANDE
TAMAO PEQUEO
ESTRUCTURAS FLOCULARES
FLOCULO
COMPACTO;
TEXTURA FUERTE
FLOCULO ABIERTO;
TEXTURA DEBIL
ESTRUCTURAS FLOCULARES

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- Textura del flculo: caracterstica que alude al grado de cohesin entre las
partculas que forman el flculo, establecindose las categoras "fuerte" y "dbil"
en funcin a la sustancia o presencia de disgregacin de los flculos,
respectivamente, tras puncin sobre el cubreobjetos
- Cobertura: caracterstica que valora si la unin de todos los flculos presentes en
el ocular de 10X cubre menos del 10% de su superficie, del 10-50% o ms del
50%
- Filamentos en el flculo:
Menos de 5 filamentos/flculo
Entre 5-20 filamentos/flculo (incluidos ambos valores)
Ms de 20 filamentos/flculo
- Filamentos en disolucin: caracterstica que cuantifica la existencia de filamentos
libres entre los espacios interfloculares del licor mezcla. Si no son observables ser
"baja" (categora bacteriana <2), mientras que si se observan normalmente ser
"alta" (categora bacteriana >2).
Nota: la categora bacteriana 2 se define como "abundancia de algn filamento; se ven filamentos
en los espacios intefloculares, pero no en todos ellos"
- Diversidad de protozoos:
Menos de 4 especies
De 4-7 especies (incluidos ambos valores)
Ms de 7 especies

Otras observaciones: presencia/ausencia de crecimiento disperso, presencia/ausencia
de fibras orgnicas, presencia/ausencia de partculas orgnicas, presencia/ausencia de
bacterias helicoidales, presencia/ausencia de Zoogloea sp., etc.

Todas estas observaciones se han de realizar con un objetivo de 10x, con cubreobjetos
de 18*18 y, al menos, sobre 2 preparaciones distintas de la muestra, que ser homogenizada
previamente con suavidad. Con ayuda de una pipeta Pasteur, se toma un pequeo volumen de
la suspensin biolgica, se deposita sobre un portaobjetos y se coloca encima un
cubreobjetos. El mximo valor obtenido por las caractersticas microscpicas es de 70.
La informacin que se deduce de las observaciones microscpicas, junto con la
obtenida durante el ensayo de decantacin en probeta o V
30
, permite otorgar un valor final de

20
puntuacin que evaluar la calidad del fango, al encontrarse dicha puntuacin divida en
distintas categoras (Tabla 1).
Tambin es conveniente realizar el ensayo de los SSLM, SSVLM, V30 e IVF.

Tabla 1: Categoras de ndice de Fango.
NDICE DE FANGOS
0-20 psimo
21-40 malo
41-60 regular
61-80 bueno
81-100 ptimo

A nivel orientativo y con relacin al tamao, estructura y textura, se muestran algunas
fotografas que permiten ajustar los rangos de estos parmetros.
Desarrollo investigador del IF
Para la elaboracin de este ndice, paso previo lo constituy la seleccin de aquellos
parmetros que definieran y valoraran las caractersticas generales del fango. A continuacin,
se estableci un periodo de contraste de resultados de algo ms de un ao que permiti
someter a estudio el ndice elaborado. Esta etapa del estudio, adems, posibilit la unificacin
de criterios para los componentes del grupo, requisito indispensable para la obtencin de
resultados comparables.
Los parmetros seleccionados para constituir el IF, denominados caractersticas
macro- y microscpicas, se encuentran recogidos en la Tabla 2 junto con las distintas
variantes con las que dichas caractersticas estn definidas. Las identificaciones bacterianas
han de efectuarse con base al manual Microorganismos filamentosos en el fango activo
(EMASESA, 1997) y apoyadas en distintos artculos que tratan el tema (Eikelboom, 1975;
Surez, 1993; Ayuntamiento de Madrid, 1996; Moro, 1998).
Tras el perodo de contraste y una vez establecidos los criterios generales de
valoracin, se pas a un periodo de recopilacin de datos fsico-qumicos en distintas
depuradoras, en las que el IF se implant de forma sistemtica. El objetivo de esta fase del
trabajo lo constitua el estudio del IF en funcin de las caractersticas del influente y las
calidades del efluente. El rea de estudio se localiz en cuatro EDAR de la ciudad de Sevilla,
que trabajan a media y alta carga y estn dotadas de fangos activos en el tratamiento
biolgico. En cada una de ellas, adems de la aplicacin del IF en el anlisis de las

21
caractersticas del fango, se recopilaron los datos referentes a SS, DQO, DBO
5
, N y P tanto
del agua de entrada a la depuradora, como a la salida. Los anlisis de estos ltimos se
realizaron segn los Mtodos Normalizados (APHA, AWWA, WPCF, 1992).
Del periodo de estudio en planta se obtuvieron 109 datos, los cuales aparecen
reflejados en la Tabla 3, y a los que se realiz un anlisis estadstico de correlaciones. En tal
estudio se buscaba una posible relacin entre el valor del IF y los parmetros que definen la
calidad del efluente (SS, DQO, DBO
5
, N y P).
Tabla 2: Valoracin del IF.
CARACTERSTICAS MACROSCPICAS
Turbidez Alta
Media
Baja
0
4,5
9
Flculos en suspensin Alta
Media
Baja
0
4,5
9
Sedimentabilidad Alta
Media
Baja
9
4,5
0
Olor Correcto
Incorrecto
3
0
CARACTERSTICAS MICROSCPICAS
Forma Regular
Irregular
4
0
Tamao Grande
Medio
Pequeo
4
7
0
Estructura Compacta
Media
Abierta
18
9
0
Textura Fuerte
Dbil
4
0
Cobertura < 10%
10-50%
>50%
0
7
3,5
Filamentos en flculos >20
5-20
<5
0
7
14
Filamentos en disolucin Alta> categora bacteriana 2
Baja< categora bacteriana 2
0
3
Diversidad de Protozoos <7 especies
4-7 especies
<4 especies
13
7
0
NDICE DE FANGO TOTAL

22
Tabla 3: Relacin de datos obtenidos en el estudio de cada uno de los participantes.
TOTAL DATOS
Participante 1 10
Participante 2 38
Participante 3 13
Participante 4 19
Participante 5 29

El anlisis de los datos demostr la imposibilidad de obtener una relacin directa entre
el IF y los SS, DQO, DBO
5
, N y P del agua de salida. En cambio, cuando los datos fueron
agrupados segn la categora de ndice, se pudo encontrar, tal y como se muestra en la Figura
1, una relacin directa entre los porcentajes de reduccin de SS y DQO respecto al IF, si bien
esta relacin se hace ms palpable para el caso de los slidos en suspensin, que para la DQO.
Es necesario aclarar que no han aparecido valores de IF psimo, con lo que no se ha podido
corroborar esta relacin de proporcionalidad entre el IF y el porcentaje de reduccin de SS y
DQO en todo el rango de valores del IF.
Tal y como se observa en la Figura 1, la relacin establecida entre la DBO
5
y el IF
parece no estar tan clara, al no detectarse diferencia significativa entre los porcentajes de
reduccin una vez que los ndices sobrepasan el intervalo de puntuacin de 0-20 (calidad
psima). No se ha podido encontrar explicacin a esta falta de proporcionalidad entre la
calidad del fango estimada mediante el IF y el porcentaje de reduccin de DBO
5
. Sin
embargo, la extrema variabilidad y escasa reproducibilidad de esta determinacin (APHA,
AWWA, WPCF, 1992), junto con la inferioridad de datos aportados respecto a los SS y DQO,
hacen que este resultado deba de tomarse con precaucin. Reflexiones similares pueden
realizarse con respecto a los datos de reduccin de Nitrgeno y Fsforo, en los que los
resultados obtenidos estn adscritos a tres categoras de fango (malo, regular y bueno) y en los
que los mtodos analticos variaron de un laboratorio a otro tanto para el Nitrgeno (Nessler y
Destilacin sobre brico) como para el Fsforo (Molibdovanadato y Ascrbico). Por lo tanto,
si bien la tendencia es a una mejora gradual de los porcentajes de reduccin de ambos
nutrientes frente al aumento de puntuacin del ndice, las diferencias ms claras se encuentran
entre la categora malo y el resto (Figura 2). Estos resultados, por tanto, habran de ser
tomados con reservas, ya que parece conveniente ampliar el banco de datos antes de
determinar la tendencia ms clara posible.

23

Figura 1: Relacin entre el rango de IF y el porcentaje de reduccin de SS (n=109).

Figura 2: Relacin entre el rango de IF y el porcentaje de reduccin de nitrgeno y fsforo
(n=67).

Durante el estudio se observ que cada planta presentaba un valor medio de IF
caracterstico de ella y distinto al de las dems, segn el cual, un distanciamiento de dicho
valor se traduca en anomalas en el funcionamiento normal de la planta, entendidas stas
como empeoramientos en los rendimientos de depuracin. Como parte de este
comportamiento particular de cada una de las plantas, se encuentran las distintas respuestas de
las caractersticas macro- y microscpicas ante aumentos o disminuciones en los valores de
los contaminantes en el agua de llegada; comportamientos que en algunas ocasiones han
resultado contrapuestos.
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
%

R
e
d
u
c
c
i
n

N

y

P
20-40 40-60 60-80
Rango de IF
P
N
70
75
80
85
90
95
100
%

R
e
d
u
c
c
i
n

S
S
,

D
Q
O

y

D
B
O
20-40 40-60 60-80 80-100
Rango de IF
SS
DQO
DBO

24
En la Figura 3 se ilustran distintos estados de floculacin observados durante el
estudio y los valores de IF asociados.

Figura 3. Distintos estados de formacin flocular. (A) Flculo de fango activo ideal (IF
ptimo); 100x, contraste de fases. (B) Flculo de fango activo bien formado en sistema con elevada
edad de fangos (IF bueno); 100x, campo claro. (C) Estructura flocular abierta por la proliferacin
del filamento Sphaerotilus natans (IF malo); 400x, campo claro, tincin Gram. (D) Disgregacin
flocular ocasionada por episodio de bulking filamentoso (IF malo); 100x, contraste de fases. (E)
Crecimiento disperso local (IF regular); 400x, campo claro, tincin Gram.

El parmetro IF ha resultado ser un buen sistema de control rpido con el que obtener
un ndice de formacin flocular, orientativo del estado del cultivo biolgico, que nos
aproxima a los rendimientos de depuracin en las EDAR de fangos activos. En general,
podemos definir el IF como un parmetro indicador del estado de floculacin en el reactor
biolgico, que nos aporta informacin para modificar las condiciones del cultivo y de esta
E
B B
C
A
D

25
forma mejorar la eficacia de la reduccin de la DQO y los SS en las EDAR, tomndose con
reserva las relaciones que mantiene con la DBO, Nitrgeno y Fsforo. Una observacin
general del fango activado que puede durar unos veinte minutos, nos proporciona idea del
estado de ste y de la respuesta esperable de la EDAR convencional.
Es necesario aumentar el nmero de datos y proseguir con el estudio antes de poder
definir claramente al IF respecto a los porcentajes de reduccin de DBO, N y P, como un
recurso para optimizar la reduccin de la emisin de nutrientes y materia orgnica al cauce
receptor.
El IF es un complemento analtico aplicable a plantas depuradoras de fangos activos
de grandes ncleos de poblacin, en las que a travs de la observacin del estado de
floculacin se podr valorar la calidad del proceso de depuracin, entendida sta como
rendimientos depuradores. En plantas pequeas se presenta como un sistema idneo, dnde
con reducidos costes un mismo especialista puede controlar las condiciones de explotacin de
varias EDAR. Si a esto ltimo aadimos que muchas de estas plantas pequeas se encuentran
localizadas en zonas sensibles (Oron et al., 2002), la aplicacin del IF como parmetro
complementario sera muy deseable.
La valoracin del estado de floculacin de la materia orgnica permite tomar medidas
encaminadas a la mejora de este proceso para as obtener buenos clarificados y reducir de esta
forma la emisin de contaminantes. En determinadas situaciones, alteraciones en la lnea de
fango producen reboses a cabecera spticos que generan una microfauna especializada para el
metabolismo del azufre. Esta microfauna est normalmente asociada a alteraciones en la
decantabilidad de los fangos y por lo tanto a la fuga de slidos al cauce receptor, lo que lleva
aparejado el escape de organismos (Bodo spp., Cercobodo spp., Sphaerotilus spp., Thiotrix
spp....) que llegan al medio acucola desarrollndose y alterando el ecosistema.
Por otra parte, es sabido que una gran proporcin de la estructura del flculo de fango
activo est compuesta por polmeros extracelulares (EPS, extracellular exopolymers), los
cuales son considerados como los principales responsables de la adhesin de las clulas
microbianas a la estructura flocular y de la cohesin del conjunto. Las propiedades
adsorbentes de los EPS han sido bien documentadas por distintos autores en trminos de
bioadsorcin de contaminantes y txicos (iones metlicos, por ejemplo). Sin embargo, el
papel de los EPS en la eliminacin biolgica de nutrientes como el nitrgeno o el fsforo no
ha sido abordado hasta muy recientemente debido a la falta de herramientas adecuadas.

26
Cloete y Oosthuizen (2001) haciendo uso del anlisis mediante EDS (Energy
Dispersive Spectrometry) y microanlisis con rayos X, han estimado que la proporcin de
fsforo en los cmulos bacterianos de una muestra de fango activo procedente de una planta
en la que existe eliminacin biolgica de fsforo, es de un 57-59% del total. Estos mismos
autores hallaron que los EPS aislados de muestras biolgicas de igual procedencia, retuvieron,
por s solos, entre el 27-30% del total del fsforo estimado. Estos resultados sugieren que la
eliminacin de fsforo en el fango activo podra ser debida no slo a los organismos
acumuladores de fosfato, sino tambin al EPS como reservorio de este elemento. Con esta
explicacin, lo que quiere significarse es que la deteccin precoz mediante el IF de
alteraciones en el estado de floculacin, evitar en buena proporcin no slo la liberacin de
slidos con el efluente, sino tambin de nutrientes a los cauces receptores.
En definitiva, el IF se establece como un sistema prctico del control de la formacin
flocular en la EDAR y como un til complemento en la determinacin de las condiciones de
explotacin, repercutiendo positivamente sobre el medio ambiente.

Bibliografa
APHA, AWWA, WPCF. (1992). Mtodos normalizados para el anlisis de aguas potables y
residuales. Ed. Daz de Santos, Madrid.
Arniz, C., Jimnez, C. y Estvez, F. (1999). Determinacin rpida de microorganismos filamentosos
en fangos activos. Tecnologa del Agua 193, 102-107.
Cloete, T. E. y Oosthuizen, D. J. (2001). The role of extracellular exopolymers in the renoval of
phosphorus from activated sludge. Wat. Res. 35, 15, 3595-3598.
Departamento de Aguas y Saneamiento del Ayuntamiento de Madrid (1997). Manual de laboratorio
para el anlisis de aguas residuales y lodos de depuracin. Publicacin del Exmo. Ayuntamiento de
Madrid.
EMASESA, Departamento de Aguas residuales (1997). Microorganismos filamentosos en el fango
activo.
Eikelboom, D. H. (1975). Filamentous organisms observed in activated sludge. Wat. Res. 9, 365-388.
Jimnez, C., Fernndez, N., de la Horra, J. M., Rodrguez, E., Isac, L., Salas, D. y Gmez, E. (2001).
Sistema rpido de estimacin de los rendimientos en depuracin de una E.D.A.R. en funcin de las
caractersticas macroscpicas y microscpicas del fango activado. Tecnologa del Agua 216, 40-44.
Laboratorio Central del Departamento de Saneamiento del Ayuntamiento de Madrid (1996).
Observacin microscpica del fango activo: caracterizacin del flculo e identificacin de
microorganismos filamentosos. Jornadas Prcticas del 20-24 de mayo de 1.996.

27
Madoni, P. (1994). A sludge biotic index (SBI) for the evaluation of the biological performance of
activated sludge plants based on the microfauna analysis. Wat. Res. 28, 1, 67-75.
Margalef, R. (1981). Ecologa. Ed. Omega, Barcelona.
Moro, P. (1998). Aparicin de organismos filamentosos en fangos activos. Ingeniera Qumica, Junio,
97-106.
Oron, G., Bicj, A. y Gillerman, L. (2002). Trends and opportunities for small-scale wastewater
treatment and reclamation plants in the Eastern Mediterranean Basin. Libro de ponencias principales
del Congreso Internacional de Tecnologas de Pequea Escala para la Depuracin y Gestin de
aguas residuales en el mbito Mediterrneo, 113-130. Sevilla, 20-22 de marzo, 2002.
Surez, J., Llorente, V. y Mogolln, T. (1993). Microorganismos filamentosos en las E.D.A.R.s.
Ingeniera Qumica, Enero, 146-151.

2 HOJA DE TRABAJO
5.2.- Evaluacin del desarrollo de bacterias filamentosas en un fango activo.
Los organismos filamentosos ocupan, a baja concentracin, un papel fundamental en
la formacin del entramado del flculo. Un crecimiento excesivo de estos microorganismos
provoca alteraciones en la relacin supeficie/volumen del flculo que se traduce en problemas
de sedimentabilidad del fango con el consiguiente empeoramiento de la calidad del efluente.
La respuesta de los organismos filamentosos a las Tinciones Gram, Neisser, PHB, etc.,
realizadas sobre frotis fijos de fango activo, permiten junto con las caractersticas
morfolgicas y estructurales deducidas de la observacin in vivo, su identificacin.
Procedimiento operativo:
1. Colocar una gota de aceite de inmersin sobre el frotis, perfectamente seco, que ha
sido teido segn el protocolo convenido (apartado 3).
2. Seleccionar el objetivo de inmersin o 100X y proceder a la observacin.
3. Una vez concluido el anlisis microscpico, retirar el objetivo con cuidado y
limpiarlo con un pao suave impregnado en una solucin ter:etanol (3:1) o etanol 96 %.
La identificacin bacteriana se realizar fundamentalmente sobre el filamento
dominante y el secundario segn la clasificacin que se detalla Captulo 2, en la que quedan
recogidas las bacterias en funcin de su caracterstica ms significativa:
- bacterias mviles
- bacterias creadoras de turbidez

28
- bacterias con tricoma superior a 1 m
- bacterias con tricoma inferior a 1 m
- bacterias de aspecto ramificado
- bacterias que presentan azufre normalmente
La proliferacin total de los filamentos se valorar segn la Tabla 4, en funcin de la
abundancia relativa, principalmente, de los filamentos dominante y secundario, aunque
dejando constancia de la presencia de otras filamentosas que, por su abundancia, se
consideren de inters.

Tabla 4: Cuantificacin de microorganismos filamentosos (EMASESA, 1997).

Otro punto de gran inters es el efecto de dichos microorganismos sobre la estructura
flocular: formacin de puentes interfloculares, disgregacin flocular o filamentos libres en los
espacios interfloculares.
Se entiende por filamento dominante/secundario aquel que predomina sobre los dems
con independencia de la categora numrica en la que se encuentren.
Paralelamente, se pueden realizar dos aproximaciones ms exactas de la cantidad de
filamentos: una valoracin semicuantitativa en la que se contabiliza el nmero de
filamentos observados que interceptan la circunferencia del objetivo de 40x, para la cual la
muestra debe estar teida con cualquier tincin in vivo; o una valoracin cuantitativa de los
m/mL de filamentos segn el recuento de los cortes en el ocular por el mtodo de Humbert
VALORACIN DE FILAMENTOS EN FUNCIN DE LA ABUNDANCIA RELATIVA
VALOR
NUMRICO
ABUNDANCIA SIGNIFICADO
0 Ninguno
1 Pocos Hay filamentos pero se observan slo en algunos flculos
2 Alguno Se ven filamentos en los flculos, pero no en todos ellos
3 Comunes Se observan filamentos en todos los flculos pero en
pequea cantidad (1-5 filamentos por flculo)
4 Muy comunes Se observan filamentos en todos los flculos, pero con una
densidad media (5-20 por flculo)
5 Abundantes Hay filamentos en todos los flculos y con densidad alta
(>20/flculo)
6 Excesivos Filamentos presentes en todos los flculos; hay ms
filamentos que flculos

29
Salvado. La metodologa de este ltimo procedimiento, que viene expuesta con ms detalle en
Salvado (2008). La media del nmero de cortes por el factor valora los m/mL de filamentos.
Esta tcnica no es adecuada para Nocardia sp.
Estos sistemas pueden servir de referencia si se practican de forma metdica en la
EDAR, al detectar la proliferacin de bacterias filamentosas y las oscilaciones en la
abundancia de stas.
Debido a que determinadas bacterias originan problemas de turbidez (Bacillus sp.,
Tipo 186, etc.) se realizar una determinacin cualitativa independiente para este tipo de
organismos, situados en los espacios interfloculares, segn la tabla siguiente (Tabla 5):

Tabla 5: Abundancia relativa para filamentos libres
Valor numrico Abundancia
0 Pocos
1 Medios
2 Muchos

3 HOJA DE TRABAJO
5.3.- Evaluacin de la microfauna presente en fangos activos. Valoracin cuantitativa.
ndice bitico de Madoni e ndice de Biodiversidad de Shannon-Weaver.
En esta hoja de trabajo se pretende valorar la diversidad de la microfauna mediante la
aplicacin del ndice de Madoni (Madoni, 1994) e ndice de Biodiversidad de Shannon
(Margalef, 1981), as como la identificacin y cuantificacin de los organismos presentes
(protozoos y metazoos).
La metodologa a seguir es la establecida por Madoni para el clculo del ndice
Bitico (Madoni, 1994), complementado con el reparto porcentual de los organismos y el
ndice de Biodiversidad de Shannon-Weaver (H).
El mtodo Madoni es aplicable al control del tratamiento biolgico en todo tipo de
plantas depuradoras de fangos activos, y est especialmente desarrollado para estimar la
calidad biolgica del fango en el reactor biolgico. Se trata de un procedimiento que permite
cuantificar el estado en que se encuentra el fango activo y estimar su nivel de actividad
biolgica, lo que reflejar su eficiencia en el proceso de depuracin biolgica. El SBI es un
ndice numrico (0-10), resultante del estudio de la estructuracin que presenta la microfauna
existente del fango activo y obtenido mediante una tabla de doble entrada horizontal y vertical
(captulo 3), elaborada a partir de los coeficientes de correlacin hallados entre distintas

30
poblaciones de protozoos y algunos de los ms importantes parmetros operacionales de
planta.
El ndice de Shannon mide la diversidad presente en un ecosistema en unidades de
informacin (bit) y es un indicador de la complejidad del sistema, de las relaciones trficas
establecidas en l y aporta informacin sobre la resistencia del sistema a los cambios
ambientales.

Los ndices biolgicos se encuentran expuestos con mayor detalle en el captulo 3.

4 HOJA DE TRABAJO
5.4.- Evaluacin total del fango activo: Conclusiones.
En esta ltima hoja de trabajo se recogen las conclusiones parciales de cada una de las
hojas anteriores, de forma que puede obtenerse una visin clara de la calidad del fango y de la
calidad previsible del agua de salida, as como de los parmetros de los cuales son
bioindicadores los organismos presentes.
DIVERSIDAD BITICA EN FANGOS ACTIVADOS
FORMADORAS DE FLCULO NO FORM DE FLCULO FILAMENTOSAS
BACTERIAS
GRANDES FLAG PEQ FLAG
FLAGELADOS
CON TECA SIN TECA
AMEBAS
NADADOR REPTANTE SSIL
CILIADOS
PROTOZOOS
ROTFERO NEMTODO
GASTROTRICO ANLIDO
METAZOO
ORGANISMOS
DEPURADORES

31
En este apartado se recogen todas las anomalas de aplicacin de los ndices antes
citadas, as como las consideraciones que el operador crea que es necesario tener en cuenta.

32
6. FICHAS DE RECOGIDA Y ANLISIS DE DATOS MICROBIOLGICOS:

1.- Evaluacin macroscpica y microscpica del fango activado.
2.- Evaluacin de las bacterias filamentosas.
3.- Evaluacin de la microfauna.
4.- Evaluacin final del fango activado.

33

34

35

36

37

38
CAPTULO 2: CLAVES IDENTIFICATIVAS

1. INTRODUCCIN
En este captulo se presentan unas claves que sirven para identificar a los organismos
con mayor transcendencia para el proceso de depuracin biolgica de las aguas residuales. A
continuacin, se adjunta la bibliografa bsica empleada para el desarrollo de dichas claves:

Bacterias filamentosas: Jenkins et al., 1993.

Protozoos Flagelados. Streble y Krauter, 1987
Amebas y Heliozoos. Streble y Krauter, 1987
Ciliados. Madoni, 1988

Metazoos Curds y Hawkes, 1975

39

BACTERIAS FILAMENTOSAS

40
2. BACTERIAS FILAMENTOSAS
La clave de filamentos se ha diferenciado en funcin de la caracterstica fsica ms
notable. Por ello, su clasificacin se presenta en seis tablas:

- Bacterias mviles: Por deslizamiento o flexin.
- Bacterias de aspecto ramificado: Ramificacin verdadera o falsa.
- Bacterias con un tricoma mayor de 1 m.
- Bacterias con un tricoma menor de 1 m.
- Bacterias que acumulan grnulos de azufre normalmente.
- Bacterias que generan turbidez y se presentan libres en el espacio interflocular.

Dentro de cada tabla se especifican las caractersticas necesarias para su identificacin
completa. Estas caractersticas se pueden diferenciar en funcin de varios aspectos.

Caractersticas morfolgicas:

Tabla 1: Caractersticas morfolgicas identificativas para bacterias filamentosas (Ayuntamiento de
Madrid, 1997).
Forma del filamento Recto/ligeramente
curvo/torcido/irregular/enrollado/micelial
Color del filamento Transparente/opaco/oscuro
Localizacin del filamento Flocular/extendindose desde el flculo/extraflocular
Crecimiento epifitico Deteccin de la aparicin y el grado de abundancia
Septos celulares Deteccin
Constricciones celulares Deteccin
Dimensiones Longitud/dimetro
Forma celular Cuadrada/rectangular/oval/en tonel/discoidal/bacilar/coco
Dimensiones celulares Longitud y dimetro

41
Reaccin a Tinciones:
Tabla 2: Caractersticas aplicables a tinciones para identificacin de bacterias filamentosas
(Ayuntamiento de Madrid, 1997).

Tabla 3: Clave identificativa para bacterias mviles (EMASESA, 1997).
CARACTERSTICA
PREDOMINANTE
MVIL
BACTERIA FILAMENTOSA FLEXIBACTER SP. BEGGIATOA SP. CIANOPHICEAS
TINCIN GRAM -
TINCIN NEISSER TRICOMA - - -
TINCIN NEISSER GRNULOS - + -
TESTS GRNULOS DE AZUFRE NO NO NO
OTRAS INCLUSIONES
CELULARES
PHB PIGMENTOS
DIMETRO TRICOMA ( m) 1 1-3 2-5
LONGITUD TRICOMA (m) 20-100 100-500 100-1000
MORFOLOGA TRICOMA RECTOS/LIG CURVADOS RECTOS/LIG CURVADOS RECTOS
LOCALIZACIN TRICOMA LIBRE LIBRE LIBRE
SEPTOS CELULARES VISIBLES NO SI SI
CONSTRICCIONES SEPTOS
CELULARES
NO NO SI
VAINA NO NO NO
CRECIMIENTO EPIFTICO NO NO NO
ANCHO CELULAR ( m) 1 1-3 2-5
LARGO CELULAR ( m) 4-8 5-15
MORFOLOGA CELULAR RECTANGULAR CUADRADAS/RECT./
EN TONEL
OTROS MOV POR
DESLIZAMIENTO
S IN SITU

Tincin de Gram Positiva/negativa/variable
Tincin de Neisser Positiva/negativa
Grnulos Neisser Positiva/negativa
Grnulos PHB Positiva/negativa
Tincin vaina Ausencia/presencia

42
Tabla 4A: Clave identificativa para bacterias creadoras de turbidez (EMASESA, 1997).
CARACTERSTICA
PREDOMINANTE
CREADORAS DE TURBIDEZ
BACTERIA FILAMENTOSA Tipo 1863 Tipo 0211 Tipo 1852
TINCIN GRAM - - -
TINCIN NEISSER GRNULOS - -
OTRAS INCLUSIONES CELULARES
DIMETRO TRICOMA ( m) 0,8-1,5 0,3-0,5 0,6-0,8
LONGITUD TRICOMA (m) <150 <100 20-80
MORFOLOGA TRICOMA CADENA IRREGULAR
CLULAS
TORCIDOS O
ENRROLLADOS
RECTOS O TORCIDOS
LOCALIZACIN TRICOMA LIBRE LIBRE EXTENDINDOSE DESDE
FLC.
SEPTOS CELULARES VISIBLES SI SI SI
CELULARES
SI SI NO
VAINA NO NO NO
ANCHO CELULAR ( m) 0,8 0,3-0,5 0,6-0,8
LARGO CELULAR ( m) 1,5 0,5-0,7 1-2
MORFOLOGA CELULAR ESFRICAS, COCOIDALES EXTREMOS
REDONDEADOS
RECTANGULARES
OTROS CLULAS
TRANSPARENTES

Tabla 4B: Clave identificativa para bacterias creadoras de turbidez (EMASESA, 1997).
CARACTERSTICA
PREDOMINANTE
CREADORAS DE TURBIDEZ
BACTERIA FILAMENTOSA Tipo 0411 STREPTOCOCCUS SP. BACILLUS SP.
TINCIN GRAM - +
TINCIN NEISSER GRNULOS - - -
DIMETRO TRICOMA ( m) 0,8 0,7-0,8 0,8-1
LONGITUD TRICOMA (m) 50-150 <100 20-50
MORFOLOGA TRICOMA RECTOS, TORCIDOS, LIG
CURVOS
CADENA IRREGULAR CADENAS CELULARES
LOCALIZACIN TRICOMA BORDE FLOCULAR LIBRE LIBRE
SEPTOS CELULARES VISIBLES SI SI
CELULARES
SI NO
VAINA NO NO NO
ANCHO CELULAR ( m) 0,8 0,7 0,8-1
LARGO CELULAR ( m) 2-4 0,8 2-4
MORFOLOGA CELULAR EXTREMOS
REDONDEADOS
ESFRICAS EXTREMOS
REDONDEADOS
OTROS

43

44
Tabla 5A: Clave identificativa para bacterias con dimetro de tricoma superior a 1 m (EMASESA,
1997).
CARACTERSTICA
PREDOMINANTE
DIMETRO DEL TRICOMA SUPERIOR A 1 m
BACTERIA FILAMENTOSA Tipo 021N Tipo 0041 Tipo 0961
TINCIN GRAM - -
TINCIN NEISSER GRNULOS -
TESTS GRNULOS DE AZUFRE SI NO NO
OTRAS INCLUSIONES CELULARES PHB
DIMETRO TRICOMA ( m) 1-2 1,2-1,6 0,8-1,4
MORFOLOGA TRICOMA RECTOS, LIG CURVADOS ,
ENRROLLADOS
RECTOS, LIG CURVADOS RECTOS
LOCALIZACIN TRICOMA EXTENDINDOSE DESDE
EL FLCULO
INTERIOR O LIBRES EXTENDINDOSE DESDE
EL FLCULO
CELULARES
SI NO NO
VAINA NO SI NO
CRECIMIENTO EPIFTICO NO -,++ NO
ANCHO CELULAR ( m) 1-2 1,2-1,6 0,8-1,4
LARGO CELULAR ( m) 0,4-3 1,5-2,5 1,5-4
MORFOLOGA CELULAR OVALES, DISCOIDALES,
CUADRADAS, RECTAN., EN
TONEL
CUADRADAS/RECTANGU
LARES
RECTANGULARES
OTROS A VECES CUBIERTA N+ CLULAS
TRANSPARENTES
Tabla 5B: Clave identificativa para bacterias con dimetro del tricoma superior a 1 m (EMASESA,
1997).
CARACTERSTICA
PREDOMINANTE
DIMETRO DEL TRICOMA SUPERIOR A 1 m
BACTERIA FILAMENTOSA NOSTOCOIDA L II NOSTOCOIDA L III
TINCIN GRAM
TINCIN NEISSER TRICOMA
TESTS GRNULOS DE AZUFRE NO NO
OTRAS INCLUSIONES CELULARES PHB PHB
DIMETRO TRICOMA ( m) 1-1,4 1,6-2
LONGITUD TRICOMA (m) 100-200
MORFOLOGA TRICOMA TORCIDOS O ENRROLLADOS TORCIDDOS O ENRROLLADOS
LOCALIZACIN TRICOMA INTERIOR INTERIOR O EXTENDINDOSE
SEPTOS CELULARES VISIBLES SI SI
CELULARES
SI SI
VAINA NO NO
CRECIMIENTO EPIFTICO NO NO
ANCHO CELULAR ( m) 1,2-1,4 1,6-2
LARGO CELULAR ( m) 1 1,5-2
MORFOLOGA CELULAR DISCOIDALES, OVALES ESFRICAS, OVALES,
DISCOIDALES
OTROS RAMIFIC A VECES VERDADERA

45
Tabla 6A: Clave identificativa para bacterias con dimetro de tricoma inferior a 1 m
(EMASESA,1997).
CARACTERSTICA
PREDOMINANTE
DIMETRO DEL TRICOMA INFERIOR A 1 m
BACTERIA FILAMENTOSA NOSTOCOIDA L I HALISCOMENOBACTER H. MICROTHRIX P.
TINCIN GRAM + - +
TINCIN NEISSER TRICOMA + - -
TINCIN NEISSER GRNULOS - - +
DIMETRO TRICOMA ( m) 0,6-0,8 0,3-0,5 0,6-0,8
MORFOLOGA TRICOMA TORCIDOS, CURVADOS O
ENRROLLADOS
RECTOS O TORCIDOS ENRROLLADOS
LOCALIZACIN TRICOMA INTERIOR O
EXTENDINDOSE
BORDE FLOCULAR Y
LIBRES
EN FLCULO Y LIBRES
SEPTOS CELULARES VISIBLES DIFCIL VER NO NO
CELULARES
NO NO
VAINA NO SI NO
CRECIMIENTO EPIFTICO NO -,+ NO
ANCHO CELULAR ( m) 0,6 0,3 0,6
LARGO CELULAR ( m) 0,8 0,5 0,8
MORFOLOGA CELULAR OVALES
OTROS AGUJAS IRRADIADAS ABULTAMIENTO EN
CONTORNO FILAMENTO
Tabla 6B: Clave identificativa para bacterias con dimetro de tricoma inferior a 1 m (EMASESA,
1997).
CARACTERSTICA
PREDOMINANTE
BACTERIA FILAMENTOSA Tipo 0675 Tipo 0092 Tipo 1701
TINCIN GRAM - -
TINCIN NEISSER TRICOMA - + -
DIMETRO TRICOMA ( m) 0,5-1 0,8-1 0,7-1
LONGITUD TRICOMA (m) 50-150 <100 10-200
MORFOLOGA TRICOMA RECTOS O LIGERAMENTE
CURVADOS
RECTOS, TORCIDOS O
LIG CURVOS
CURVADOS O
TORCIDOS
LOCALIZACIN TRICOMA INTERIOR INTERIOR O LIBRES TODOS SITIOS
SEPTOS CELULARES VISIBLES SI NO SI
CELULARES
NO NO SI
VAINA SI NO SI
CRECIMIENTO EPIFTICO -,++ NO -,++
ANCHO CELULAR ( m) 0,5-1 0,8 0,7-1
LARGO CELULAR ( m) 0,5-1 1 1-3,5
MORFOLOGA CELULAR CUADRADAS RECTANGULARES EXTREMOS
REDONDEADOS
OTROS CLAVE TINCIN NEISSER A VECES
RAMIFICACIN FALSA

46
Tabla 6C: Clave identificativa para bacterias con dimetro de tricoma inferior a 1 m (EMASESA,
1997).
CARACTERSTICA
PREDOMINANTE
OTRAS CARACTERSTICAS Tipo 1702 Tipo 1851 Tipo 0581
TINCIN GRAM - + (LIGERO)
TINCIN NEISSER GRNULOS - - -
DIMETRO TRICOMA ( ) 0,6-0,8 0,5-0,8 0,4-0,7
LONGITUD TRICOMA () 20-150 200-400 100-300
MORFOLOGA TRICOMA RECTOS O TORCIDOS RECTOS O ALGO
CURVADOS
RECTOS, LIGERAMENTE
CURVOS O ENROLLADOS
FLC
EXTENDINDOSE
DESDE FLC
LIBRES
SEPTOS CELULARES VISIBLES NO SI/NO NO
CELULARES
NO NO NO
VAINA SI SI NO
CRECIMIENTO EPIFTICO NO -,+ NO
ANCHO CELULAR ( ) 0,6 0,5-0,8 0,4
LARGO CELULAR ( ) 0,8 1,7-3,5 0,7
MORFOLOGA CELULAR RECTANGULARES
OTROS A VECES EN MANOJOS

Tabla 6D: Clave identificativa para bacterias con dimetro de tricoma inferior a 1 m (EMASESA,
1997).
CARACTERSTICA PREDOMINANTE DIMETRO DEL TRICOMA INFERIOR A 1
m
OTRAS CARACTERSTICAS Tipo 0803
TINCIN GRAM -
TINCIN NEISSER TRICOMA -
TINCIN NEISSER GRNULOS +
TESTS GRNULOS DE AZUFRE NO
DIMETRO TRICOMA ( ) 0,8
LONGITUD TRICOMA () 50-300
MORFOLOGA TRICOMA RECTOS, TORCIDOS O LIGERAMENTE
CURVADOS
LOCALIZACIN TRICOMA LIBRES
SEPTOS CELULARES VISIBLES SI
CELULARES
DIFCIL VER
VAINA NO
CRECIMIENTO EPIFTICO NO
ANCHO CELULAR ( ) 0,8
LARGO CELULAR ( ) 1,5-2
MORFOLOGA CELULAR CUADRADAS O RECTANGULARES
OTROS

47
Tabla 7: Clave identificativa para bacterias de aspecto ramificado (EMASESA, 1997).
CARACTERSTICA
PREDOMINANTE
ASPECTO RAMIFICADO
BACTERIA FILAMENTOSA NOCARDIA SP. SPHAEROTILUS N. HONGOS
TINCIN GRAM + - -
TINCIN NEISSER GRNULOS + - -
OTRAS INCLUSIONES CELULARES PHB PHB GRNULOS
DIMETRO TRICOMA ( m) 1 1-1,8 3-8
MORFOLOGA TRICOMA MICELIAL RECTOS, LIG CURVADOS
LOCALIZACIN TRICOMA EN FLCULO Y LIBRE EXTENDINDOSE DESDE
FLC
TODOS SITIOS
SEPTOS CELULARES VISIBLES NO SI SI
CELULARES
NO SI SI
VAINA NO SI NO
ANCHO CELULAR ( m) 1 1-1,8 3-8
LARGO CELULAR ( m) 1,5-3 5-15
MORFOLOGA CELULAR EXTREMOS
REDONDEADOS

OTROS RAMIF VERDADERA RAMIF FALSA, TIPO
ARBOL
LIG + GRAM

Tabla 8: Clave identificativa para bacterias que normalmente acumulan grnulos de azufre
(EMASESA, 1997).
CARACTERSTICA
PREDOMINANTE
PRESENTAN AZUFRE NORMALMENTE
BACTERIA FILAMENTOSA THIOTHRIX I THIOTHRIX II Tipo 0914
TINCIN GRAM -
TINCIN NEISSER GRNULOS -
TESTS GRNULOS DE AZUFRE SI SI NO
OTRAS INCLUSIONES CELULARES PHB PHB PHB
DIMETRO TRICOMA ( m) 1,4-2,5 0,8-1,4 0,7-1
MORFOLOGA TRICOMA RECTOS, LIG CURVADOS RECTOS, LIG CURVADOS RECTOS, LIG
CURVADOS
FLC
EXTENDINDOSE DESDE
FLC
LIBRE
CELULARES
NO NO NO
VAINA SI SI NO
ANCHO CELULAR ( m) 1,4-2,5 0,8-1,4 0,7-1
LARGO CELULAR ( m) 3-5 1-2 0,7-1
MORFOLOGA CELULAR RECTANGULARES RECTANGULARES CUADRADAS
OTROS ROSETAS Y GONIDIOS ROSETAS Y GONIDIOS GRNULOS S
CUADRADOS

48

BIBLIOGRAFA

Departamento de Agua y Saneamiento del Ayuntamiento de Madrid (1997). Manual de
laboratorio para el anlisis de aguas residuales y lodos de depuracin. Publicacin del
Exmo. Ayuntamiento de Madrid.

EMASESA (1997). Microorganismos filamentosos en el fango activo. Publicacin de la
Empresa Municipal de Abastecimiento y Saneamiento de Aguas de Sevilla, S.A.

49

PROTOZOOS

50
3. PROTOZOOS

CLAVE DE CLASIFICACIN PARA FLAGELADOS (PHYLUM
SARCOMASTI GOPHORA, SUBPHYLUM MASTI GOPHORA).
CLASE
PHITOMASTIGOPHORA
*Orden Euglenida
*Orden Peranematales
CLASE
ZOOMASTIGOPHORA
Familia Euglenidae
Familia Astasiidae
Gnero Euglena
Gnero Phacus
Gnero Trachelomonas
Gnero Astasia
Gnero Urceolus
*Orden Rhizomastigida
Familia Multiciliidae
Familia Mastigamoebidae
*Orden Polimastigida
*Orden Protomonadina
Grupo Coanoflagelados
Grupo Anfimonadinos

*Orden Trichomonadina
*Orden Hypermastigida
*Orden Opalinida

51
SUBPHYLUM MASTI GOPHORA
Los flagelados presentan normalmente uno o dos flagelos que se implantan cerca del
extremo anterior de la clula. Su alimentacin puede ser auttrofa (si bien en fangos activos
no la desarrollan debido a la turbidez que les impide realizar fotosntesis) y fagtrofas.
Su forma, movimientos y nmero de flagelos son caractersticas importantes en su
sistemtica.
Presentan grandes variedades respecto a su tamao, desde 5-30 m en los zooflagelados
(Clase Zoomastigophora), hasta 40-100 m entre las euglenas (Clase Phitomastigophora).

CLASE PHI TOMASTIGOPHORA

ORDEN EUGLENALES

Organismos unicelulares que nadan con flagelos. Forma alargada o en espiral y muy
plsticos. Color verdoso como consecuencia de los cloroplastos (Figura 1).

Son hetertrofos (utilizan alimentos presintticos que absorben de forma disuelta a
travs de la superficie celular), algunas especies pueden realizar fagocitosis, pero la mayora
se alimentan de bacterias, algas y algunos pequeos protozoos.

Figura 1. Esquema de un protozoo de la Clase Phitomastigophora.
Nota: Esquema tomado del libro editado por EGEVASA "Microbiologa de la depuracin mediante fangos activados".

52
Normalmente slo tienen un flagelo, aunque a veces pueden aparecer dos o tres. Su
material de reserva es el paramilo, que toma formas definidas en cada especie. Esta
caracterstica ayuda en su identificacin.

53
Familia Euglenidae

Cuerpo plstico en forma de huso. Flagelo largo y curvado hacia atrs. Se distinguen
tres gneros: Euglena, Phacus y Trachelomonas.

GNERO EUGLENA
Presenta estras longitudinales o espirales. Una pequea vacuola contrctil. Los
pirenoides pueden estar rodeados de una cubierta de almidn. Es caracterstico la forma del
quiste, ya que aparecen como puntos verdes en el fondo de la muestra.

EUGLENA PISCIFORME
Longitud de 25 m. Clulas fusiformes, redondeadas por delante y con corta pluma
terminal detrs. Membrana finamente estriada. Flagelo de igual longitud que el cuerpo. Dos
cloroplastos en forma de cintas laterales (Figura 2).

EUGLENA VIRIDIS
Cuerpo fusiforme de 40-65 m de largo. Cloroplastos en forma de cinta y orientados
hacia un pirenoide central (Figura 3).

EUGLENA TRIPTERIS
Clula de seccin triangular. Cuerpo retorcido, con el extremo posterior alargado en
forma de pequea cola. Cloroplasto longitudinal que cubre casi todo el cuerpo. Estriacin de
la membrana en forma de espiral. Tamao 70-120 m. Flagelo de tamao similar al cuerpo
(Figura 4).

GNERO PHACUS
Forma aplanada, esfrica, con una cubierta exterior fina y forma corporal constante.
Estriacin longitudinal.
Posee un flagelo y cromatforos discoides de color verde (Figura 5).

GNERO TRACHELOMONAS
Presentan lriga, normalmente con espinas. Color amarillo-castao, consecuencia de las
deposiciones de hidrxido frrico con un compuesto mangnico sobre la lriga. Aparece un
solo flagelo, largo, engrosado en su anclaje con una estructura en forma de collar. Dos
cromatforos en forma de disco curvo (Figura 6).

54
Familia Astasiidae

Morfologa similar a la familia euglenoide, pero sin cromatforos.
Cuerpo muy plstico, pero sin huso alargado. Presenta dos gneros fundamentalmente:

* Gnero Astasia:
Cuerpo alargado, de forma diversa, generalmente la membrana presenta una fina
estriacin espiralada (Figura 7).

* Gnero Urceolus:
Cuerpo incoloro en forma de frasco estriado. Cuello similar a un embudo y
aparentemente simula una botella. Pueden presentar una espina terminal y
estriacin espiralada (Figura 8).
Su movimiento es caracterstico al reptar sobre la boca del embudo y levantan la
parte superior del cuerpo sobre el sustrato. Hetertrofos.

ORDEN PERANEMATALES

Cuerpo alargado, deformable con un movimiento de desplazamiento por compresin-
alargamiento. Son muy activos, con un largo flagelo siempre dirigido hacia delante y cuyo
extremo presenta mayor mvilidad y ductilidad. Citoplasma incoloro y alimentacin
hetertrofa (Figura 9).

CLASE ZOOMASTI GOPHORA

Organismos flagelados que no presentan cloroplastos. De pequeo tamao y de vida
libre. Se alimentan de bacterias y sustancias orgnicas en descomposicin. Presentan uno o
dos flagelos que utilizan para desplazarse en movimientos pulstiles (Figura 10). Forma
corporal de redondeada a alargada con algunos organismos en estructuras coloniales. La
mayora presenta un solo ncleo con estructura vesicular. El enquistamiento es un fenmeno
muy comn. Presenta 6 rdenes, de los cuales cuatro son parsitos o simbiontes (Orden
Polymastigida, Orden Trichomonadina, Orden Hypermastigida y Orden Opalinida).

55
Figura 10. Esquema de un protozoo de la Clase Zoomastigophora.

ORDEN RHI ZOMASTIGI DA

Formas intermedias entre amebas y flagelados. Los flagelos varan en nmero de uno a
varios y pseudpodos en nmero variable.

Familia Multiciliidae

Cuerpo esfrico con pequeos pseudpodos. Entre 40-50 flagelos largos y distribuidos
uniformemente con acompaamiento de varios pseudpodos (Figura 11). Holozoico.

Familia Mastigamoebidae

Cuerpo ameboide con 1-4 flagelos y lobpodos en nmero variable; slo posee un
ncleo (Figura 12). Son organismos de vida libre. Holozoicos y saprozoicos.

ORDEN POLYMASTIGI DA

Organismos parsitos de mamferos y aves, pero que pueden aparecer en el agua
residual al encontrarse en el intestino de stos. Clulas aplanadas de forma variable.

TETRAMITUS PIRYFORMIS
Clulas incoloras, de forma variable que se alimentan de bacterias. Presenta un largo
flagelo posterior y dos flagelos anteriores cortos junto a otro ms largo (Figura 13).
Movimientos rotatorios. Tamao de 11-20 m.

56
HEXAMITA FISSA
Clulas ovaladas, con una terminacin en forma de espina ancha en la zona posterior.
Se alimentan de bacterias, pero tambin son saprfitos. Los dos flagelos posteriores quedan
libres hacia la zona terminal y en la zona anterior presentan dos grupos de tres flagelos ms
cortos a ambos lados (Figura 14). Movimientos natatorios de rotacin. Tamao de 20-26 m.

TREPOMONAS ROTANS
Clulas ovaladas, con una mitad posterior aplanada y seccin en "s". Extremo posterior
invaginado. Bordes ligeramente curvos tambin hacia el interior corporal. Dos grupos de
flagelos situados en la zona intermedia. Dos largos, uno anterior y otro posterior y dos
pequeos perpendiculares al cuerpo (Figura 15). Tamao de 7-25 m.

ORDEN PROTOMONADI NA

Muchas especies son parsitas, siendo clulas formadas por uno o dos flagelos. Se
distinguen tres grupos principales:

* Grupo Coanoflagelados
Organismos solitarios y coloniales. Forman un pequeo embudo en la parte donde
se ancla el flagelo (Figura 16). Muchos presentan un muclago a su alrededor que
atrapa las partculas, favorecido por el movimiento rotatorio que crea un remolino
que acerca las partculas alimenticias.
* Grupo Anfimonadinos
Organismos coloniales con envoltura gelatinosa. Presentan de uno a dos flagelos
de similar longitud, utilizando uno para anclarse a la colonia y el otro hacia el
exterior para la motilidad y la alimentacin (Figura 17).
* Grupo Bodonideos
Organismos unicelulares, pequeos con dos flagelos insertos en el mismo lugar,
uno dirigido anteriormente y otro posteriormente, generalmente mayor o igual a la
longitud del cuerpo (Figura 18). Movimientos rotatorios en zig-zag (BODO
PUTRINUS) o saltando (BODO SALTANS).

57

2
3
4
5
6
7
8
9
11
12
13 14
15
16 17 18
FLAGELADOS

58
BIBLIOGRAFA

CURDS, C. R. y HAWKES H. A. (1975). Ecological Aspects of Used-water Treatment.
Ed. ACADEMIC PRESS INC. (Londres).

EGEVASA (1998). Microbiologa de la depuracin mediante fangos activos. Publicacin
de La Empresa General Valenciana del Agua, S.A. (EGEVASA), de la Exma. Diputacin
de Valencia.

STREBLE, H. y KRAUTER, D.(1987). Atlas de los microorganismos de agua dulce. La
vida en una gota de agua. Ed.Omega, S.A. (Barcelona).

59
CLAVE DE CLASIFICACIN PARA AMEBAS Y HELIOZOOS (CLASE
RHI ZOPODA Y ACTI NOPODA)
CLASE
RHIZOPODA
Orden Amoebida
Orden Testaceas
Familia Vahlkampfiidae
Familia Chaosidae

Familia Mayorellidae

Familia Thecamoebidae

Familia Hyalodiscidae

Gnero Naegleria
Gnero Vahlkampfia
CLASE
ACTINOPODA Orden Heliozoa

60
CLASE RHI ZOPODA (AMEBAS)

Organismos unicelulares con capacidad para emitir prolongaciones de su citoplasma
llamados pseudpodos, que les permiten rodear las partculas alimenticias para su absorcin
en vacuolas de digestin y para su locomocin.

Las amebas se pueden diferenciar en funcin del tipo de pseudpodos:
- En forma de dedo: Lobpodo
- En forma de filamento fino: Filopodio
- En forma muy ramificada: Rizopodio

Presentan cuatro rdenes:
- Proteomyxida: parsitos, sin inters en fangos activados
- Foraminifera: marinos, sin inters en fangos activados
- Amoebida
- Testacea

ORDEN AMOEBI DA

Amebas desnudas; no presentan envoltura consistente y presentan un cuerpo muy
verstil. Se distingue la envoltura exterior del interior citoplasmtico o ectoplasma, que es
ms translcido.

Al emitir un pseudpodo se puede diferenciar el endoplasma, del ectoplasma o cubierta
exterior, ya que se distingue una elongacin de ste. Dentro del interior citoplasmtico se
pueden distinguir numerosas vacuolas digestivas, formadas por invaginaciones previas del
cuerpo celular (Figura 19). Pueden diferenciarse por su funcionalidad en dos tipos:

- pinocitosis: absorcin de lquidos
- fagocitosis: absorcin de partculas o animales de mayor tamao

61
Figura 19. Esquema de un protozoo del Orden Amoebida.
Nota: Esquema tomado del libro editado por EGEVASA "Microbiologa de la depuracin mediante fangos activados

A estas vacuolas digestivas se les aade los enzimas digestivos que permiten la
digestin de los alimentos.
Presentan reproduccin asexual por fisin binaria y ocasionalmente mltiple. Es muy
comn la fase de enquistamienteo en periodos de situaciones adversas.

Dentro de este orden encontramos cinco familias:
- Vahlkampfiidae
- Chaosidae
- Mayorellidae
- Thecamoebidae
- Hyalodiscidae

Familia Vahlkampfiidae

Formas reptantes. Se distinguen dos gneros: Naegleria y Vahlkamfia.

GNERO NAEGLERIA
Tamao en torno a 30 m. Presenta pseudpodos eruptivos como hinchamientos de la
zona anterior hialina. Bacterifago. Quistes uninucleados con fase flagelada (dos flagelos).

NAEGLERIA AQUATILIS
Lobpodos grandes con movimientos en forma de cinta continua. Tamao de hasta 25
m (figura 20).

62
GNERO VAHLKAMPFIA
Tamao en torno a 60 m. Pseudpodos hemisfricos con abultamiento anterior de la
zona hialina y en ocasiones presenta uroide posterior. Quistes sin forma flagelada.
Bacterifago.

VAHLKAMPFIA LIMAX
Tamao en torno a las 100 m de largo por 50 m de ancho. La zona anterior es ms
ancha que la posterior, con desplazamientos suaves. Presenta un borde corporal ondulado y en
la zona anterior una serie de pequeos filamentos. En ocasiones puede presentar cristales en el
endoplasma (Figura 21).

Familia Chaosidae

Grandes amebas con citoplasmas muy densos y ncleos granulares. Pseudpodos con
placas hialinas. Polipoidales. Tamao entre 500-200 m. Se alimentan de algas y protozoos.

CHAOS DIFFLUENS
Tamao comprendido entre 300-600 m. Muy verstil en sus movimientos, con
desplazamientos del endoplasma hacia el pseudpodo (Figura 22). Se alimenta de paramecios.

PELOMYXA PALUSTRIS
Tamao comprendido entre 1-2 mm. Es una de las amebas de mayor tamao en aguas
dulces. No presenta erupciones citoplasmticas, sino que su forma es ms o menos ovoide o
circular. Presenta un interior refringente por numerosas vacuolas y grnulos (Figura 23).

Familia Mayorellidae

Pseudpodos terminados en punta.

DINAMOEBA MIRABILIS
Tamao en torno a 60-160 m. Ovalada o esfrica con pseudpodos irradiados en
punta, cubiertos de pequeos pelos citoplasmticos. Movimiento por reptacin o flotacin.
Generalmente presenta una cubierta mucilaginosa que la envuelve (Figura 24).

63
Familia Thecamoebidae

Estado intermedio entre las amebas desnudas y testceas, ya que presentan una capa
exterior gruesa con pliegues longitudinales. No presentan generalmente pseudpodos.
Ectoplasma con apariencia verrugosa. Se alimentan de algas filamentosas.

THECAMOEBA VERRUCOSA
Tamao en torno a 350 m. Sus movimientos son lentos por desplazamiento del
ectoplasma sin llegar a producir pseudpodos (Figura 25). Color amarillo.

ORDEN TESTACEAS

Presentan una envoltura rgida o teca formada por estructuras de quitina, que en algunas
especies pueden ir reforzadas por conchas o piedras superpuestas. Generalmente los
pseudpodos se emiten desde una zona determinada donde no existe la teca.

Figura 26. Esquema de un protozoo del Orden Testaceas.
Nota: Esquema tomado del libro editado por EGEVASA "Microbiologa de la depuracin mediante fangos activados"

Los gneros pueden agruparse en funcin del tipo de pseudpodo y de la teca:

64

Formas con lobpodos:

- Teca reducida a una membrana flexible: Cochliopodium y Gocevia.
- Teca parcialmente slida: Microchlamys y Pseudochlamys.
- Teca quitinosa sin cuerpos extraos: Pyxidicula y Arcella.
- Teca aplanada con partculas extraas: Centropyxis y Bullinularia.
- Teca formada por materiales extraos: Difflugia.
- Teca quitinosa, generalmente con plaquitas calcreas o de cido saliclico:
Lesquereusia, Quadrulella, Paraquadrula, Nebela, Heleoptera, Awerintzewia y
Hyalosphenia.

Formas con lobopodios ramificados: Phryganella, Cryptodifflugia y Wailesella.

Formas con filopodios:

- Teca totalmente reducida: Gymnophrys y Penardia.
- Teca transparente con placas silceas redondeadas: Euglypha, Assulina y Trinema.
- Teca curvada con placas pequeas: Cyphoderia.
- Teca con grandes placas hexagonales: Paulinella
- Teca con elementos silceos irregulares: Gromia y Nadinella.
- Teca con dos orificios: Amphitrema.

Formas con rizpodos: Lieberkuehnia, Allelogromia y Diplophrys.

ARCELLA GIBBOSA
Simetra irregular; de toscos dibujos hexagonales. Tamao comprendido entre 70-125
m de dimetro (Figura 27).

ARCELLA VULGARIS
Forma de casco. Se alimenta de diatomeas y algas verdes. Tamao comprendido entre
100-145 m de dimetro (Figura 28).

ARCELLA HEMISPHAERICA
Teca redondeada. Su dimetro es de aproximadamente 50 m (Figura 29).

65
CLASE ACTI NOPODA

ORDEN HELI OZOO

Formas similares a un sol, con un cuerpo esfrico y pseudpodos muy largos irradiados
en todas direcciones. Se alimentan de flagelados, ciliados, rotferos, algas...

Pueden unirse en ocasiones formando colonias de alimentacin que luego se disgregan
tras cumplir su cometido. A veces pueden presentar cubierta mucilaginosa. En condiciones
desfavorables pueden formar quistes. Normalmente se reproducen por biparticin, pero en
casos de deficiencia alimenticia, se inicia un proceso de reproduccin sexual que recibe el
nombre de autogamia.

ACTINOPHRYS SOL
Es el heliozoo por excelencia. Forma esfrica de 40-50 m. Se alimenta de flagelados,
ciliados, algas conjugadas unicelulares y levaduras. Individuos jvenes a menudo agrupados
en comunidades alimentarias (Figura 30).

ACTINOSPHAERIUM EICHORNI
Numerosos pseudpodos que se contraen al ms mnimo contacto. Tamao
comprendido entre 200-300 m (Figura 31).

ACANTHOCYSTIS MIMETICA
El esqueleto est formado por escamas silceas tangenciales y acculas silceas
radiales. Estas ltimas se aprecian al secarse la muestra en el cubreobjetos (Figura 32).

66
24 25
28 27 29
30
31
32
23
20 21 22
Figura 20: Naegleria aquatilis; Figura 21: Vahlkampfia limax; Figura 22:Chaos difflens;
Figura 23: Pelomyxa palustris; Figura 24: Dinamoeba mirabilis; Figura 25: Thecamoeba
verrucosa; Figura 27: Arcella gibosa; Figura 28: Arcella vulgaris; Figura 29: Arcella
hemisphaerica; Figura 30: Actinophrys sol; Figura 31: Actinosphaerium eichorni; Figura 32:
Acanthocystis mimetica. Nota: Dibujos tomados del "Atlas de los microorganismos de agua dulce"
AMEBAS Y HELIOZOOS

67
BIBLIOGRAFA

Ed. ACADEMIC PRESS INC. (Londres).

de Valencia.

STREBLE, H. y KRAUTER, D.(1987). Atlas de los microorganismos de agua dulce. La

68
CLAVE DE CLASIFICACIN PARA CILIADOS.
Ciliado libre,
desprovisto de
cirros.
*Cilios orales poco o
nada distintos al
resto.Citostoma apical
o subapical.
Clase Kinetofragminophora
(Holotricos).
*Cilios orales
distintos al resto.
Citostoma ventral.
Clase Oligohymenophora.
Subclase Hymenostomatia.
(Holotricos).
*Cilios orales
desarrollados en la
zona alrededor de la
membranela.
Citostoma opuesto a
la cavidad bucal.
Clase Polymenophora.
Orden Heterotrichida.
(Heterotricos).
*Forma adulta
privada de cilio y
dotada de largos
tentculos.
Clase KinetoFragminophora
Subclase Suctoria.
(Suctores).
Ciliado
pedunculado fijo al
sustrato por un
pednculo.
*Forma privada de
tentculo. Cilios
sobresalientes en polo
anterior.
Carecen de cilios en
el resto del cuerpo.
Clase Oligohymenophora.
Subclase Peritrichia.
(Peritricos).
Ciliados dotados de
cirros, por medio
del cual se desplaza
sobre los flculos
del fango.
Clase Polymenophora.
Orden Hypotrichida.
(Hypotricos).

69
CLASE KI NETOFRAGMI NOPHORA

Los miembros pertenecientes a esta clase se caracterizan por poseer unos cilios orales,
slo levemente diferentes de los somticos (Figura 33).

Figura 33. Esquema de un protozoo de la Clase Kinetofragminophora.

El citostoma es frecuentemente apical o subapical, a veces semiventral y se abre
directamente en la superficie exterior o al fondo de un atrio o vestbulo. Las ciliaturas oral y
somtica nunca son compuestas.

- Subclase Gymnostomatia.
El citostoma se abre directamente al exterior en posicin apical o subapical.

- Subclase Vestibuliferia.
Citostoma abierto en una cavidad vestibular en posicin apical o subapical.

- Subclase Hypostomatia.
Citostoma no apical, situado sobre la superficie ventral del cuerpo.

- Subclase Suctoria.

70
SUBCLASE GYMNOSTOMATI A

Clave para el reconocimiento de la familia.

- Superficie del cuerpo cubierto de una densa placa. Citostoma apical. Familia
Colepidae.

- Superficie del cuerpo sin placas.
*Citostoma redondo en el pice (zona ms afilada) del cuerpo. Familia
Enchelydae.

*Citostoma en una grieta.
- Citostoma apical, extendido hacia un lado del cuerpo, situado sobre una
cresta sin cilios. Familia Spathidium.
- Citostoma situado a lo largo de un lado del cuerpo. Familia Amphileptidae.

Familia Colepidae

Los miembros de esta familia tienen el citostoma en el polo anterior del cuerpo y estn
dotados de pequeas y numerosas placas situadas sobre la superficie del cuerpo. Un solo
gnero est presente en los fangos activos, el Gnero Coleps Nitzsch.

Cuerpo en forma de barril. Citostoma amplio, de seccin circular, situado en el pice
del cuerpo y rodeado de largos y delgados cilios. El polo inferior, ms grueso, presenta
espinas; con uno o ms cilios caudales. En el fango activo aparece una sola especie.

COLEPS HIRTUS. (c. libre)
Longitud 40-60 m. Caparazn dividido en 4 anillos transversales, con las placas
principales atravesadas por orificios arrionados, asemejndose a un tonel. De 15 a 20 filas
longitudinales de estras, sto hace que parezca un barril cuadriculado. La boca se sita en el
polo anterior y est rodeada de una placa especial. En el polo posterior tiene 3 espinas. Los
cilios tienen una longitud uniforme en todo el cuerpo y en la extremidad posterior tiene un
largo cilio caudal. El macroncleo es esfrico. La vacuola contrctil se sita prxima al polo
posterior (Figura 34).
Esta especie es poco frecuente en el fango activo. Su rgimen alimenticio es variado y
comprende algas, flagelados y, ocasionalmente, ciliados. Predador de protozoos. Nada
velozmente y cambiando frecuentemente de direccin. Presenta una baja tolerancia al in
amonio y al amonaco y no se encuentra, por tanto, en ambientes con altas concentraciones de

71
este elemento. Este ciliado nadador puede estar presente en una cantidad discreta en plantas
que reciben aguas ricas en sustancia orgnica con bajo contenido en nitrgeno, como por
ejemplo un agua rica en celulosa. Su presencia en el fango activo es compatible con una
buena eficacia de depuracin.

Familia Enchelydae

Algunos gneros de esta familia aparecen en tratamientos biolgicos de depuracin. El
Gnero Trachelophyllum es bastante comn en el fango activo.

GNERO TRACHELOPHYLLUM.
Incluye pequeos ciliados alargados y flexibles.
En el polo anterior, que es ahusado, se abre el citostoma que contina en una larga y
estrecha citofaringe de seccin circular. Son visibles dos macroncleos esfricos, cada uno de
los cuales tiene al lado un microncleo. La vacuola contrctil se sita en posicin terminal.
Tan slo una especie se presenta en el fango activo.

TRACHELOPHYLLUM PUSILLUM. (c. libre)
Las caractersticas morfolgicas de este animal se corresponden con las del gnero al
que pertenece. Longitud de 30-50 m y cuerpo ahusado. Abunda en el fango activo. Se nutre
de pequeos flagelados, bacterias y, segn algunos autores, de otros ciliados. Cuando aparece
junto a Aspidisca sp. en proporciones iguales, nos indica una buena calidad del agua tratada.
Actualmente se denomina Acineria uncinata (Figura 35).

Familia Spathidiidae

Los miembros de esta familia estn presentes en plantas depuradoras con un solo
gnero, Spathidium.

GNERO SPATHIDIUM.
Ciliado con forma de frasco o de saco, comprimido ms o menos lateralmente. La
regin anterior ms o menos afilada forma un cuello truncado (incompleto, cortado). El
citostoma ocupa toda la parte anterior. Ciliatura uniforme; vacuola contrctil terminal. Slo
algunas especies de este gnero aparecen en el fango activo.

SPATHIDIUM OPIMUM. (c. libre)

72
Dimensiones de 100-300 m. Aplastado lateralmente y alargado. Polo anterior
truncado; la apertura oral presenta un labio provisto de "tricociste" (Figura 36). Es predador
de otros ciliados y se desplaza velozmente. Es poco frecuente en el fango activo; raramente
aparecen otras especies de este gnero.
Familia Amphileptidae

Los ciliados pertenecientes a esta familia son de forma alargada, afilados
anteriormente y ms anchos posteriormente. Estn comprimidos lateralmente, de modo que
muestran normalmente al observador el lado izquierdo del cuerpo. La apertura del citostoma
se encuentra en la superficie ventral (para el observador parece situada en el margen
izquierdo).

GNERO HEMIOPHRYS.
Incluye ciliados en forma de frasco. La ciliatura del cuerpo se limita al lado derecho.
La parte ventral es convexa y presenta un largo citostoma en una hendidura. Dos
macroncleos esfricos, vacuolas contrctiles en gran nmero, que varan segn la especie;
cuando aparece una sola vacuola, no se sita nunca en posicin completamente terminal.
Alguna especie habita en el fango activo.

HEMIOPHRYS FUSIDENS. (c. predador)
Longitud de 80-200 m y forma esbelta. La regin anterior presenta numerosos
"tricocistes"; posee una sola vacuola contrctil situada en la proximidad del polo inferior del
cuerpo (Figura 37).

Su presencia en el fango activo es espordica, ambiente en el que desarrolla el papel de
predador de otros ciliados (Vorticella sp.). Abunda asociado a Vorticella convallaria.

HEMIOPHRYS BIVACUOLATA. (c. predador)
Esta especie es observada en el fango activo. Se distingue de la especie anterior por la
presencia de 2 vacuolas contrctiles (Figura 38). Ambas especies aparecen, en ocasiones, en
fangos activos con largos tiempos de retencin.

En general, debido a la actividad predadora sobre otros ciliados, los animales
pertenecientes a este gnero no realizan una actividad relacionada con la depuracin
biolgica. No deben, por tanto, ser incluidos dentro del grupo de los ciliados nadadores.

GNERO LITONOTUS

73
Los ciliados de este gnero tienen caractersticas similares a los del Gnero
Hemiophrys. Se distinguen por la parte anterior, generalmente ms afilada y por la presencia
de una vacuola contrctil en posicin terminal. En el fango activo aparece una sola especie.

LITONOTUS FASCIOLA. (c. libre-predador)
Longitud de aproximadamente 100 m. Cuerpo alargado y comprimido lateralmente.
Parte posterior y anterior afiladas. Parte mediana ms gruesa. El cuerpo est cubierto en su
totalidad por cilios, destacando por su tamao los de la regin dorsal, que se disponen en
forma de peine. Citostoma largo, que ocupa casi un tercio del cuerpo. Dos macroncleos
esfricos en la parte media del cuerpo (Figura 39).

Es frecuente en el fango activo, especialmente en situaciones de alta carga, donde se
nutren preferentemente de otros ciliados. Su presencia en el licor mixto suele ser espordica.
Precisan de una buena oxigenacin del fango activo.

SUBCLASE VESTI BULI FERA

ORDEN COLPODI DA

Los ciliados pertenecientes a este grupo tienen la ciliatura del vestbulo y los
microcilios altamente organizados en una cirromembranela, derivada de partes de la
membrana somtica.

La ciliatura somtica es tpica por la presencia de 2 "ciglia" en cada cinetosoma (cilios
ramificados).
En depuradoras se encuentra un solo gnero.

GNERO COLPODA.
Ciliado con forma reniforme, comprimido, con borde derecho semicircular y el
izquierdo bastante convexo.
Cavidad oral situada en la parte ventral, en posicin media. El citostoma se encuentra
en la parte derecha del plano meridiano y se abre en la cavidad del peristoma, que est
abundantemente ciliado. Ciliatura dispuesta de forma no simtrica. Macroncleo esfrico y
vacuola contrctil terminal.

COLPODA CUCULLUS. (c. libre)

74
Longitud 50-120 m y normalmente 80 m. La parte anterior sobrepasa al peristoma.
Cuerpo cubierto de 8-10 surcos y ciliatura uniforme dispuesta en 29-34 filas. Peristoma con
un profundo embudo que se inicia sobre el borde derecho. Vacuola contrctil terminal (Figura
40).
En determinadas condiciones, como la abundancia de alimento, el cuerpo puede asumir
una coloracin muy oscura por la abundante incorporacin de dicho alimento. Este ciliado
nadador se nutre de bacterias. Su presencia en el fango activo es muy rara.

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SUBCLASES GYMNOSTOMATI A Y VESTI BULI FERA
34
35
36
37 38
39 40
Figura 34: Coleps hirtus; Figura 35: Trachelophyllum pusillum; Figura 36: Spathidium opimum; Figura 37:
Hemiophrys fusidens; Figura 38: Hemiophrys bivacuolata; Figura 39: Litonotus fasciola; Figura 40:
Colpoda cucullus.
Nota: Dibujos tomados del "Atlas de los microorganismos de agua dulce"

76
SUBCLASE HYPOSTOMATI A

- Orden Cyrtophorida: Cuerpo aplanado dorso-ventralmente.
- Orden Nassulida: Cuerpo aplanado lateralmente.

ORDEN CYRTOPHORI DA

Dos familias aparecen en depuradoras de aguas residuales.

- Familia Dysteriidae: presenta un estilo mvil en el polo posterior.
- Familia Chilodonellidae: no presenta estilo.

Familia Dysteriidae

En el fango activo se observa un solo gnero.

GNERO TROCHILIA
Ciliado de forma ovalada, con superficie dorsal convexa y superficie ventral plana o
cncava. Ciliatura presente slo en la parte ventral. Citostoma colocado en un surco cercano
en el lado derecho. Parte terminal provista de una espina mvil. Macroncleo esfrico central,
dos vacuolas contrctiles.

TROCHILIA MINUTA (c. mvil de fondo)
Longitud de 30-40 m y forma ovoidal (Figura 41). Frecuentemente observado en el
fango activo, apareciendo en abundante nmero. Se alimenta de bacterias. La abundancia de
esta especie est asociada al desarrollo de bacterias filamentosas, de las cuales se alimenta.
Con el movimiento del cibo arrastra flculos de fango, por ello, su comportamiento
debe ser considerado, desde el punto de vista funcional, como ciliado mvil de fondo.

Familia Chilodonellidae

En depuradoras aparece un solo gnero.

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GNERO CHILODONELLA.
A este gnero pertenecen ciliados de forma oval, aplanados dorsoventralmente. La
superficie dorsal es convexa, mientras que la ventral es plana. La parte dorsal anterior, que es
aplanada, es atravesada por una fila de cilios largos. El citostoma es redondo, citofaringe
sobresaliente con forma de cono. Macroncleo redondo. Una o ms vacuolas contrctiles,
segn la especie. En depuradoras aparecen dos especies.

CHILODONELLA UNCINATA. (c. mvil de fondo)
Longitud de 50-90 m. Aplanado dorsoventralmente. Superficie ventral plana con 11
filas de cilios. Superficie dorsal anteriormente aplanada y atravesada por 1 fila transversal de
cilios; posteriormente es convexa y privada de cilios. Apertura del citostoma redonda y
citofaringe en forma de cuerno. Macroncleo ovalado. 2 vacuolas contrctiles (Figura 42).
Comn en el fango activo, se nutre de bacterias y, en caso de necesidad, de diatomeas y
algas. Este flexible ciliado se mueve sobre la superficie del fango y, por tanto, debe ser
considerado como forma mvil de fondo. Se asocia a la presencia de bacterias filamentosas,
de las cuales suele alimentarse en este tipo de ambiente.

CHILODONELLA CUCULLULUS. (c. mvil de fondo)
Dimensiones variables, de 75 a 300 m de longitud, normalmente 150 m. Forma del
cuerpo como la de la especie anterior. Con 19-20 filas de cilios ventrales y 1 fila de cilios
transversales sobre la superficie dorsal. Citostoma redondo y citofaringe en forma de cesto.
Macroncleo ovoidal. Consta de 6-8 vacuolas contrctiles (Figura 43).
Poco frecuente en el fango activo. Se nutre de diatomeas, algas y bacterias.
Caractersticas etolgicas y ecolgicas similares a la especie anterior.

ORDEN NASSULI DA

- Gnero Leptopharynx: Apertura oral en la parte anterior del cuerpo.
- Gnero Microthorax: Apertura oral cercana al final de la parte posterior del cuerpo.

GNERO LEPTOPHARYNX
Ciliado aplanado lateralmente y recorrido longitudinalmente por surcos. Ciliatura
dispersa, predominando en el lado derecho. Citostoma colocado en el lado izquierdo del
cuerpo, en la zona superior. Citofaringe tubular. Macroncleo esfrico en posicin central;
consta de dos vacuolas contrctiles. En el fango activo aparece una sola especie.

LEPTOPHARYNX EUGLENIVORA (c. libre)

78
Longitud de 25-40 m. Las restantes caractersticas morfolgicas son las de su gnero.
Poco frecuente en el fango activo. Este ciliado nadador se nutre de bacterias y de flagelados
(Euglenceas).
ste aparece cuando en la balsa de aireacin existe una cantidad discreta de grandes
flagelados (Euglena sp., Peranema sp.). En este caso, su presencia indica una carga de entrada
poco concentrada. Otras especies del gnero pueden observarse en el fango activo, sobre todo
en plantas ricas en materia vegetal en descomposicin (Figura 44).

GNERO MICROTHORAX
Ciliados pequeos y aplanados, provistos de una delicada armadura a forma de quilla
ms o menos ahusada anteriormente y redondeada posteriormente. Citostoma ventral en la
parte inferior del cuerpo, carece de citofaringe. Macroncleo esfrico. Dos vacuolas
contrctiles. Una sola especie en el fango activo.

MICROTHORAX SULCATUS (c. libre)
Longitud de 30-40 m. Las dems caractersticas morfolgicas son las del gnero al
cual pertenece. Bastante raro en el fango activo (Figura 45). Fagocita bacterias y flagelados.
Este ciliado nadador se observa sobre todo en fangos ricos en partculas vegetales en
descomposicin.

SUBCLASE SUCTORIA

ORDEN SUCTORI DA

Los miembros pertenecientes a este grupo no poseen cilios u otros rganos mviles
para su desplazamiento en la fase adulta. Durante la fase joven poseen cilios y nadan
libremente.

Los miembros de este orden se caracterizan por la presencia de numerosos tentculos,
por medio de los cuales capturan otros animales de los que se alimentan (principalmente
ciliados). Los tentculos pueden estar dispersos por la superficie del cuerpo, o bien, agrupados
en haces.
El estudio taxonmico del grupo requiere el conocimiento del proceso reproductivo,
de todas formas est limitada su presencia en el fango activo a pocas especies y es posible una
identificacin con base a la morfologa del estado adulto.

79
La presencia de este animal en el fango activo indica, en trminos generales, un largo
tiempo de retencin del fango. La actividad predadora sobre otros ciliados limita su
importancia en el proceso biolgico de depuracin y, por esta razn, los suctores, aunque
ssiles, no deben ser incluidos en ninguno de los tres grupos funcionales.

- Tentculos distribuidos sobre todo el cuerpo. Cuerpo de forma esfrica.
Gnero Podophrya.
- Tentculos dispuestos en poco espacio. Cuerpo no esfrico,
predominantemente piriforme.
* Cuerpo envuelto en una lriga: Gnero Acineta.
* Cuerpo no envuelto en una lriga: Gnero Tokophrya.

GNERO PODOPHRYA.

PODOPHRYA FIXA. (c. predador)
Suctor de forma esfrica. Dimetro de 10-50 m. Numerosos tentculos distribuidos
por toda la superficie del cuerpo. Pednculo poco ms largo que el cuerpo y estriado
transversalmente. Macroncleo esfrico en posicin ms o menos centrada y una vacuola
contrctil en la parte anterior (Figura 46).
Frecuente en el fango activo. Asociado a una baja calidad del efluente. Frecuentemente
se encuentra con alta edad del fango.

PODOPHRYA MAUPASI. (c. predador)
Dimetro de 40-50 m. Parecido a Podophrya fixa, se diferencia de l por un nmero
inferior de tentculos y por la presencia de una sutil capa gelatinosa que envuelve el cuerpo
(Figura 47). Frecuente en el fango activo.

GNERO ACINETA.

ACINETA CUSPIDATA. (c. predador)
Dimensiones 30-50 m. Lriga en forma de copa, apoyada sobre un corto pednculo.
Dos haces de tentculos se disponen en la parte superior. Ncleo redondo, situado en la zona
inferior (Figura 48).

Poco frecuente en el fango activo. A veces, pegado al fango, aparece otra especie:
Acineta foetida. Su rgimen alimenticio est condicionado por la presencia de ciliados
holotricos e hipotricos que succiona con los tentculos. Aparecen en los fangos activados de
aireaciones prolongadas, con alta edad del fango y con buenas calidades del agua tratada.

80

PERIACINETA S.P. (c. predador)
Cuerpo celular envuelto por un caparazn aplanado. De forma muy variable, es ms
estrecho en la base, donde se apoya en un corto pednculo. Por la hendidura anterior del
caparazn salen dos grupos de tentculos terminados en una especie de botn. stos son
retrctiles, extendindolos y contrayndolos continuamente. Segn la forma presentan entre 1
y 8 vacuolas contrctiles. Tamao 65-450 m, sin embargo los que suelen aparecer en
depuradoras, tienen un tamao que oscila entre 80 y 150 m.

Frecuente en fangos activos. Suelen aparecer en condiciones de elevada edad del fango
y baja carga. Su presencia es compatible con buenos niveles de depuracin.

GNERO TOKOPHRYA.

TOKOPHRYA QUADRIPARTITA. (c. predador)
Longitud 50-70 m. Forma de pirmide cuadrangular ms o menos redondeada.
Cuatro haces de tentculos en los ngulos de la superficie anterior. Pednculo rgido de
longitud 2-4 veces la del cuerpo. Macroncleo ovalado, situado en el centro del cuerpo.
Vacuola contrctil situada en la regin anterior (Figura 49).
Frecuente en el fango activo. Predador de ciliados nadadores y reptantes. Es indicador
de situaciones como alta edad del fango, baja carga y buenos rendimientos de depuracin.

TOKOPHRYA INFUSIONUM. (c. predador)
Tiene forma de pirmide invertida, semejante a un corazn, con un corto pednculo
con estriacin transversal y longitudinal. Los tentculos salen de la regin frontal y se hallan
agrupados en dos haces. El macroncleo oval est situado en el centro del cuerpo y la vacuola
contrctil est unida a la superficie celular por canales permanentes. Tamao 60 m.
Es indicador de situaciones con alta edad del fango, baja carga y buenos rendimientos
de depuracin.

TOKOPHRYA LEMNARUM. (c. predador)
Suctor de cuerpo esfrico provisto de un largo pednculo. Presenta los tentculos
limitados a la mitad anterior del cuerpo, agrupados en dos haces. Cada tentculo est
atravesado por un fino canal. El macroncleo est situado en la posicin central y es esfrico,
situndose una vacuola contrctil en la parte anterior. Tamao de aproximadamente 70 m.
En los procesos de depuracin, aparece en las mismas circunstancias que T.
quadripartita y T. infusionum.

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SUBCLASES HYPOSTOMATI A Y SUCTORI A
Figura 41: Trochilia minuta; Figura 42: Trochilia uncinata; Figura 43: Chilodonella
cucullulus; Figura 44: Leptopharynx euglenivora; Figura 45: Microthorax sulcatus; Figura 46:
Podophrya fixa: Figura 47: Podophrya maupasi; Figura 48: Acineta cuspidata; Figura 49:
Tokophrya quadripartita. Nota: Dibujos tomados del "Atlas de los microorganismos de agua dulce".

82
CLASE OLI GOHYMENOPHORA

SUBCLASE HYMENOSTOMATI A

Los miembros de esta subclase se caracterizan por poseer una cavidad bucal bien
definida, incluyendo una membranela. El rea bucal se sita en la superficie ventral del
cuerpo, generalmente cerca del rea anterior.

Figura 50. Esquema de un ciliado de la Clase Hymenostomatia.

- Cavidad bucal bien definida y profunda en la superficie ventral:
* Presencia de tricocisti: Suborden Peniculina.
* Ausencia de tricocisti: Suborden Tetrahymenina.

- Cavidad bucal poco profunda:
* Membrana paraoral prominente: Suborden Pleuronematina.
* Membrana paraoral reducida: Suborden Philasterina.

SUBORDEN PENICULINA

En depuradoras aparece un solo gnero.

GNERO PARAMECIUM

Los ciliados pertenecientes a este gnero tienen forma ovalada o de puro, con ciliatura
repartida uniformemente por todo el cuerpo, destacando un penacho de cilios ms largo en el
polo posterior del cuerpo, cavidad oral (vestbulo) profunda y ligeramente oblicua, que se

83
abre en el peristoma. En el peristoma se sita una membranela rodeada de dos grupos de
caractersticos cilios.
Macroncleo elipsoidal y uno o ms microncleos. 1 o 2 vacuolas contrctiles. Tienen
en el cuerpo numerosos "tricocistes" que, en caso de necesidad, pueden ser expulsados.
Algunas especies aparecen en depuradoras.

PARAMECIUM CAUDATUM. (c. libre)
Longitud de 180-300 m. Forma de torpedo, la extremidad posterior ligeramente
ahusada, que porta un penacho de largos cilios. Cuerpo de seccin circular. Macroncleo
grueso y central, 1 microncleo y 2 vacuolas contrctiles provistas de canales radiales (Figura
51).
Se alimenta de bacterias. Este ciliado nadador es raro en el fango activo. Su presencia
indica que se trata de un fango joven sometido a cargas muy fuertes.

PARAMECIUM BURSARIA. (c. libre)
Tambin es raro en el fango activo y se observa en situaciones anlogas. Se diferencia
del anterior porque el cuerpo tiene una forma ms achatada y redondeada y el tamao es
menor (90-150 m).
Es comn en acumulaciones de agua con poca cantidad de fango activo y prcticamente
sin oxigenacin. Es fcil encontrarlos en reactores fuera de uso. Viven en simbiosis con algas
verdes unicelulares.

SUBORDEN TETRAHYMENINA

Los ciliados pertenecientes a este grupo son de dimensiones pequeo-media. La
ciliatura oral es generalmente reducida.

- Con un largo cilio caudal: Gnero Sathrophilus.

- Sin un largo cilio caudal:
*Con una sola fila de cilios que parte debajo de la apertura oral. Gnero Colpidium.
*Con dos filas de cilios que parten debajo de la apertura oral. Gnero Tetrahymena.
*Con siete filas de cilios que parten debajo de la apertura oral. Gnero Glaucoma.

GNERO SATHROPHILUS
Los miembros de este gnero tienen el cuerpo ovalado y comprimido. La cavidad oral
se sita en el primer tercio anterior del cuerpo, cercano al margen derecho. Macroncleo en
zona central.

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SATHROPHILUS PUTRINUS. (c. libre)
Dimensiones de 30-50 m y forma ovoidal y aplanada (Figura 52). Se nutre de
bacterias dispersas.
En el fango activo aparece de forma discreta durante la primera fase de colonizacin
del reactor. Su presencia en un fango bien formado indica que existe una carga muy fuerte o
un tiempo de retencin muy breve. A veces, aparece en el fango activo la especie
SATHROPHILUS OVIFORMIS.

GNERO COLPIDIUM
Cuerpo ovoidal, con ciliatura uniforme dispuesta por un nmero variable de filas.
Citostoma pequeo triangular, situado cerca del polo anterior sobre el lado derecho. Bajo la
apertura oral parte una sola fila de cilios.

COLPIDIUM COLPODA. (c. libre)
Longitud de 100-150 m. Ovoidal o reniforme. Ciliatura dispuesta sobre 55-60 filas de
cilios. Sutura pre-oral curvada sobre la derecha. Macroncleo esfrico y vacuola contrctil en
la zona inferior (Figura 53).
Se alimenta de bacterias y flagelados. Ciliado nadador poco frecuente en el fango
activo. Especie ligada a la primera fase de localizacin llegando con el influente a la EDAR.
Su presencia se produce cuando la carga es excesiva.

COLPIDIUM CAMPYLUM. (c. libre)
Especie similar a la anterior, diferencindose de sta en que la sutura pre-oral no es
curvada (Figura 54).
Ambas especies se observan habitualmente en el fango en exceso, asociadas a
Glaucoma scintilans, Tetrahymena pyriformis o Paramecium trichium.

GNERO TETRAHYMENA.
Pequeo ciliado periforme, con ciliatura uniformemente dispuesta sobre 20 filas.
Citostoma pequeo, ligeramente ahusado, dotado de una cresta sobre el margen derecho. Dos
filas de cilios parten de la cavidad oral.

TETRAHYMENA PYRIFORMIS. (c. libre)

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Longitud de 30-50 m y cuerpo ovoidal, ahusado anteriormente. Cavidad oral
profunda. Macroncleo central y vacuola contrctil terminal (Figura 55).
Se alimenta de bacterias dispersas. Poco frecuente en el fango activo. La presencia de
esta especie nadadora se relega a la fase inicial del proceso de depuracin, cuando el cultivo
es joven y est en vas de formacin. Normalmente, su presencia indica un bajo tiempo de
retencin del licor mixto o una sobrecarga con escasa oxigenacin.

GNERO GLAUCOMA.
Ciliado de forma ovoidal o elipsoidal con ciliatura uniforme dispuesta a lo largo de 30-
40 filas. Cavidad oral dispuesta ms o menos transversalmente. Cercano al polo anterior y al
borde derecho porta una cresta. De la cavidad oral parten siete filas de cilios.

GLAUCOMA SCINTILLANS. (c. libre)
Longitud de 40-80 m y cuerpo elipsoidal, ligeramente aplanado ventralmente.
Apertura oral dotada de una membrana ondulante. Macroncleo esfrico situado en posicin
central y vacuola contrctil en el ltimo tercio inferior del cuerpo (Figura 56).
Se nutre de bacterias dispersas y presenta una elevada tolerancia al dficit de oxgeno.
Es raro en el fango activo.

SUBORDEN PLEURONEMATINA

GNERO CYCLIDIUM
Pequeo ciliado de forma ovoidal, provisto de un largo cilio caudal. Peristoma situado
sobre el lado derecho del cuerpo y provisto de una membrana que forma una larga cavidad en
torno al citostoma. Ciliatura dispersa a lo largo del cuerpo, macroncleo esfrico, vacuola
contrctil ms o menos terminal.

CYCLIDIUM GLAUCOMA. (c. libre)
Longitud de 15-30 m. Cuerpo ovoidal con extremidad ligeramente truncada. Polo
superior libre de cilios y polo inferior dotado de un largo cilio caudal. Posee diez filas de
cilios a lo largo del cuerpo y una larga membrana ondulante. Macroncleo esfrico situado
sobre la mitad anterior y vacuola contrctil terminal (Figura 57). Se mueve mediante rpidos
saltos, alternados con periodos en los que permanece completamente quieto. Se nutre de
bacterias.
Es poco frecuente en el fango activo. Aparece durante las primeras fases de
colonizacin, siendo indicador cuando aparece en un cultivo establecido, de una carga fuerte o
un tiempo corto de residencia.

86

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SUBORDEN PHILASTERINA

- Cuerpo alargado, ovoidal y poco aplanado. Con un solo largo cilio caudal.
* Endoplasma granuloso, muy oscuro. Vacuola contrctil hacia la mitad del
cuerpo. Gnero Dexiotricha.
* Endoplasma no granuloso. Vacuola contrctil en el polo posterior. Gnero
Uronema.

- Cuerpo aplanado, discoidal. Ms cilios caudales. Gnero Cinetochilum.

GNERO CINETOCHILUM
Pequeos ciliados de forma discoidal y aplanados. Ciliatura dispuesta sobre la
superficie ventral. Cavidad oral en la mitad inferior del cuerpo y largo cilio terminal.

CINETOCHILUM MARGARITACEUM. (c. libre)
Longitud de 15-45 m y cuerpo de forma ovoidal, aplanado. Ciliatura slo sobre la
superficie ventral. Posee 3-4 largos cilios caudales. Cavidad oral situada en la regin inferior
derecha del cuerpo. Macroncleo esfrico ms o menos central y vacuola contrctil
subterminal (Figura 58). Se alimenta de bacterias. Ciliado nadador frecuente en el fango
activo.
Presenta una baja tolerancia al amonaco libre y en general a los compuestos
nitrogenados. Compatible con una buena depuracin.

GNERO DEXIOTRICHA.

DEXIOTRICHA COLPIDIUPSIS. (c. libre)
Ciliado de forma ovalada ligeramente truncada por la extremidad superior. El cuerpo
est uniformemente cubierto de cilios y presenta un largo cilio caudal. Cavidad oral subapical
y una fila de cilios corre transversalmente a la extremidad derecha del peristoma. Longitud
50-65 m, forma ovoidal y ciliatura dispuesta sobre 30-34 filas de cilios. Peristoma formado
por un complejo sistema de membranelas. Macroncleo esfrico, central; vacuola contrctil
en el ltimo cuarto inferior del cuerpo.
Se mueve rpidamente en el licor mezcla. Se alimenta de bacterias y flagelados. Es raro
en el fango activo. Aparece en la puesta en marcha del proceso y cuando se producen
sobrecargas del mismo.

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DEXIOTRICHA CENTRALIS. (c. libre)
Especie con aspecto arrionado, cuerpo comprimido lateralmente. Presenta una fila de
cilios oblicua desde la mitad del cuerpo hasta el borde derecho de la foseta bucal. Los otros
cilios se distribuyen de manera dispersa por todo el cuerpo, que presenta un tamao de 30-45
m. La boca se encuentra en la zona ventral. Se alimenta de bacterias.
Habitual en situaciones de alta carga msica.

GNERO URONEMA.
Ciliado de forma ovoidal ms o menos alargado, ligeramente aplanado y carece de
cilios en el polo anterior. Cavidad oral en el lado ventral de la parte superior del cuerpo y
provisto de una pequea membrana. Macroncleo esfrico. Vacuola contrctil terminal, un
largo cilio caudal.

URONEMA NIGRICANS. (c. libre)
Longitud de 21-29 m, cuerpo ovoidal, alargado y ligeramente comprimido en la parte
anterior. Posee 11-12 filas de cilios que recorren el cuerpo. Cavidad oral alargada, situada
debajo del polo anterior en posicin ventral. Membrana ondulante a lo largo del margen
derecho de la cavidad oral. Vacuola contrctil terminal. Macroncleo esfrico en posicin
central (Figura 59). Nada a grandes saltos.
Se alimenta de bacterias. Ecologa similar a Sathrophilus sp.

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SUBCLASE HYMENOSTOMATI A
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Figura 51: Paramecium caudatum; Figura 52: Sathrophilus putrinus: Figura 53: Colpidium
colpoda; Figura 54: Colpidium campylum; Figura 55: Tetrahymena pyriformis; Figura 56:
Glaucoma scintillans; Figura 57: Cyclidium glaucoma; Figura 58: Cinetochilum margaritaceum;
Figura 59: Uronema nigricans. Nota: Dibujos tomados del "Atlas de los microorganismos de agua dulce".

90
SUBCLASE PERITRICHIA

A este grupo pertenecen los ciliados que constituyen normalmente la componente ms
significativa de la microfauna del fango activo. La subclase se subdivide en un solo orden
(Peritrichida) el cual, a su vez, se subdivide en dos subrdenes (Sessilina y Mobilina).

Figura 60. Esquema de un ciliado de la Subclase Peritrichia.

Los ciliados pertenecientes al Suborden Mobilina, escasean normalmente en el cultivo
de depuradoras.

SUBORDEN SESSILINA

Son ciliados ssiles con forma de copa, que se agarran al sustrato por medio de un
delgado pednculo.

Carecen de ciliatura somtica y estn dotados de cilios slo en torno al polo apical, en
el cual se abre el citostoma. Pueden ser solitarios o coloniales. El pednculo puede ser rgido
o contrctil. La contractibilidad del pednculo es debido a la presencia de mionema en el
interior del mismo. El macroncleo tiene forma de cinta. La vacuola contrctil se sita en
posicin subapical.

Los individuos ssiles pueden producir formas libres nadadoras (Telotroco) que
carecen de pednculo y estn provistos posteriormente de un anillo de cilios. Los telotrocos

91
son producidos en mayor nmero cuando la carga es muy baja y el tiempo de retencin del
fango muy alto.
- Forma libre: Estudio del Telotroco.
- Forma ssil:
* Presencia de una lriga dentro de la cual se sitan 1 o 2 individuos. Familia
Vaginicolidae.

* Lriga ausente:
- Pednculo contrctil. Familia Vorticellidae.
- Pednculo no contrctil:
- Presencia de un oprculo epistomal en el pice superior. Cuerpo casi
nunca contrctil. Familia Opercularidae.
- Oprculo no presente. Cuerpo contrctil. Familia Epistylididae.

Familia Vorticellidae

- Individuos coloniales, varios individuos se unen con sus pednculos a un pednculo
principal.
*Mionema de los pednculos unidos entre s, de forma que toda la colonia se
mueve junta. Gnero Zoothamnium.
*Mionema de los distintos pednculos no conectados entre s, de forma que cada
individuo se contrae autnomamente. Gnero Carchesium.

- Individuos solitarios que se agarran al sustrato por el pednculo. Gnero Vorticella.

GNERO ZOOTHAMNIUM.

ZOOTHAMNIUM PYGMAEUS. (c. fijo)
Peritrico colonial, en el que la contraccin de todos los organismos de la colonia es
simultnea. Estos animales se nutren de bacterias. Son frecuentes en el fango activo (Figura
61).

ZOOTHAMNIUM MUCEDO. (c. fijo)
Es la otra especie que aparece en el fango activo. Estos prozoos se asocian a una buena
depuracin y a un efluente de alta calidad (Figura 62).

92
GNERO CARCHESIUM.

CARCHESIUM POLYPINUM. (c. fijo)
Longitud de 80-140 m. La colonia puede alcanzar un tamao superior al milmetro.
Forma de campana con peristoma amplio. Macroncleo con forma de "C". Pelcula externa no
estriada. Los mionemas de cada individuo no estn unidos entre s y se contraen en espiral
(Figura 63). Se nutre de bacterias. Es poco frecuente en el fango activo.
Estos ciliados se caracterizan por consumir una gran cantidad de oxgeno, por lo que
su presencia est ligada a una buena oxigenacin. Aparecen casi exclusivamente en las cubas
de aireacin con media carga, as como en CBR; rara vez en sistemas de fuerte carga y
aireacin prolongada.

GNERO VORTICELLA.

VORTICELLA CAMPANULA. (c. fijo)
Es la especie ms grande de las que integra el gnero Vorticella. Longitud de 50-160
m, anchura 35-100 m. Longitud del pednculo 250-350 m. Forma de campana con regin
peristomal muy ancha. Cuerpo ligeramente estriado transversalmente. Citoplasma con
numerosos grnulos de reserva que son refractantes y oscuros. Macroncleo en forma de "C".
El pednculo es muy grueso y se contrae en espiral (Figura 64). Es muy similar a V.
convallaria, de la que fcilmente se distingue por su enorme tamao, el grosor del pednculo
y la presencia de grnulos de reserva.
Se nutre de bacterias. Es raro en el fango activo. Aparece en forma solitaria sin construir
colonias. Suelen indicar un empeoramiento en la calidad del flculo, mostrndose ste ms
disgregado y producindose una ligera prdida del mismo en los decantadores.

VORTICELLA CONVALLARIA. (c. fijo)
Longitud de 30-120 m, aunque la ms habitual suele ser de 80 m y anchura 35-70
m. Longitud del pednculo de 100-500 m. Se distingue de Vorticella campanula por poseer
un cuerpo ms esbelto, el citoplasma ligeramente amarillo y por no presentar grnulos
refractantes. Peristoma ligeramente arqueado. Estras transversales fcilmente observables.
Vacuola alimenticia de contorno ovalado (Figura 65). Se alimenta de bacterias.
Es frecuente en el fango activo, se suele encontrar asociado a ASPIDISCA CICADA. Si se
presenta dominando al resto de organismos y en nmero alto, es indicativo de un fenmeno
transitorio debido a una fuerte extraccin de fango de la balsa. En la situacin que ms abunda
es con media carga. Puede constituir la fauna dominante de un fango activo, sobre todo
cuando el fango no est muy bien floculado y aparece muy disperso; por ello puede haber una
constante y ligera prdida de flculos en los decantadores.

93

VORTICELLA MICROSTOMA. (c. fijo)
Este organismo tiene forma de peonza. Longitud de 35-83 m, anchura 22-50 m y
longitud del pednculo de hasta 400 m. Peristoma estrecho (12-25 m), cuerpo ligeramente
estriado y macroncleo dispuesto longitudinalmente. Presenta una vacuola contrctil cercana
a la abertura oral y numerosas vacuolas digestivas de forma esfrica (Figura 66).
Se nutre de bacterias y flagelados. Es frecuente en el fango activo. Indicador de bajo
rendimiento de depuracin debido, casi siempre, a falta de oxgeno. Es frecuente en la fase de
arranque o re-arranque de la planta. Al alimentarse tambin de algas unicelulares, suele ser
frecuente en lagunas aireadas.

VORTICELLA STRIATA. (c. fijo)
Longitud de 20-50 m, anchura 15-40 m y longitud del pednculo 20-300 m. De
forma similar a Vorticella microstoma, pero se diferencia de sta por las estras del cuerpo,
mucho ms marcadas, y por la posicin del macroncleo transversal, rodeando la citofaringe
(Figura 67).
Se nutre de bacterias. Es poco frecuente en el fango activo. Su presencia se asocia a una
buena oxigenacin del fango.

Familia Vaginicolidae

Presencia de membrana lriga que engloba a 1 o 2 individuos con o sin pednculo,
presenta un cuerpo alargado en forma de trompa. La extremidad apical, donde se sita la
apertura oral, sale de la lriga cuando el animal est completamente extendido. Un solo
Gnero aparece en el fango activo, GNERO VAGINICOLA.

VAGINICOLA CRYSTALLINA. (c. fijo)
Longitud de 100-200 m, lriga incolora de forma cilndrica y redondeada en la base.
Generalmente, la lriga hospeda dos individuos alargados que se nutren de bacterias y
flagelados (Figura 68).
No es tpica de depuradoras. La presencia poco frecuente de este ciliado se asocia, casi
siempre, a efluentes poco concentrados o diluidos. Aparecen en sistemas de aireacin
prolongada con muy baja carga y tiempos de retencin muy altos.

94
Familia Operculidae

OPERCULARIA COARCTATA. (c. fijo)
Longitud de 45-50 m. Longitud del pednculo de 50-100 m. Forma alargada,
macroncleo curvado y situado en el centro del cuerpo. Pednculo de la colonia no estriado
longitudinalmente, no segmentado, que se ramifica de forma dicotmica al formar la colonia.
Colonia muy numerosa, generalmente de 4-6 individuos (Figura 69). Se alimenta de bacterias.
Es normal en el fango activo.
La presencia de una cantidad importante de este ciliado, indica una inapropiada
depuracin biolgica acompaada de valores de oxgeno disuelto muy bajos. Esta situacin es
caracterstica de condiciones transitorias como el aumento repentino de carga orgnica. Un
fango colonizado casi exclusivamente por esta especie es indicativo de un vertido txico
(sales metlicas) procedente de alguna industria.

OPERCULARIA MINIMA. (c. fijo)
En esta especie, el pednculo, que es lo empleado para distinguirlo de las dems
especies, es corto segmentado y estriado longitudinalmente.

OPERCULARIA MICRODISCUM. (c. fijo)
Longitud de 76-90 m, aunque la colonia puede alcanzar 500 m. Disco peristomal
pequeo, cerca de 1/5 del dimetro del cuerpo. Pelcula externa ligeramente estriada.
Pednculo estriado longitudinalmente. Macroncleo con forma de anillo que envuelve a la
citofaringe (Figura 70). Se alimenta de bacterias.
Frecuente en el fango activo. Especie muy resistente al dficit de oxgeno, que se
desarrolla, sobre todo, en fangos muy concentrados, poco aireados o con recirculacin lenta.

Familia Epistylididae

EPISTYLIS PLICATILIS. (c. fijo)
Es la especie del GNERO EPISTYLIS ms frecuente en el fango activo. Longitud de 100
m. Longitud de la colonia de hasta 3 mm. Forma alargada, disco peristomal ligeramente
arqueado. La parte basal de un individuo contrado, se presenta con un caracterstico pliegue.
Macroncleo en posicin oblicua de forma tal que rodea a la citofaringe. Pednculo no
estriado ni segmentado (Figura 71). Se alimenta de bacterias. Comn en el fango activo, su
presencia es un hecho normal en un fango maduro.
La longitud de los pednculos vara con base a la concentracin de los fangos en la
cuba, siendo largos en concentraciones bajas y cortos cuando estn muy concentrados. Este

95
microorganismo se encuentra generalmente en condiciones de media carga y en depuradoras
con aireacin prolongada. Presentan cierta resistencia a vertidos puntuales con fuerte
contaminacin, por lo que suelen ser indicativos de contaminacin industrial. Su
proliferacin, en un momento dado, puede ser indicativa de alguna alteracin en el proceso,
variacin brusca de carga, vertidos puntuales...

En el fango activo es frecuente la presencia de EPISTYLIS URCEOLATA, de
dimensiones variables entre 120-190 m y con el pednculo estriado longitudinalmente
(Figura 72).
Otras especies observadas en el fango activo son: EPISTYLIS POLENICI (A) y
EPISTYLIS THIENEMANNI (B).

96

SUBCLASE PERI TRI CHI A
Figura 61: Zoothamnium pygmaeus; Figura 62: Zoothamnium mucedo; Figura 63: Carchesium
polypinum; Figura 64: Vorticella campanula; Figura 65: Vorticella convallaria; Figura 66:
Vorticella microstoma; Figura 67: Vorticella striata; Figura 68: Vaginicola crystallina; Figura
69: Opercularia coarctata; Figura 70: Opercularia microdiscum; Figura 71: Epistylis plicatilis;
Figura 72: Epistylis urceolata. Nota: Dibujos tomados del "Atlas de los microorganismos de agua dulce"
61
62 63
64
65
66 67
68
69
70 71 72

97
CLASE POLYMENOPHORA

SUBCLASE SPIROTRICHI A

Los ciliados pertenecientes a esta subclase se caracterizan por un gran desarrollo de la
ciliatura oral con una zona alrededor de la membranela. Se observan dos rdenes en el fango
activo.

Figura 73. Esquema de un ciliado de la Subclase Spirotrichia.

- Ausencia de cirros, ciliatura comn uniforme por toda la superficie del cuerpo. Orden
Heterotrichida.

- Presencia de cirros. Orden Hypotrichida.

ORDEN HETEROTRICHI DA

- Cuerpo muy alargado, cilndrico y ligeramente comprimido. Gnero Spirostomum.

- Cuerpo contrctil, como una trompa. Gnero Stentor.

GNERO SPIROSTOMUM.
Ciliado alargado, de forma cilndrica, muy aplanado y de color amarillo oscuro.
Peristoma rodeado por una corta membranela. Vacuola contrctil terminal amplia. Dimensin
variable de 150 m a 2 mm, segn la especie.

SPIROSTOMUM TERES. (c. libre)

98
Longitud de 150-400 m. Peristoma transcurre por un tercio de la longitud del cuerpo.
Macroncleo ovalado y vacuola contrctil terminal (Figura 74). Se alimenta de bacterias,
flagelados y algas. Cuando nada, avanza lentamente porque retrocede rodando a lo largo del
propio eje longitudinal del cuerpo. Poco frecuente en el fango activo.
Especie de baja tolerancia al amonaco. Su presencia en el fango activo siempre es
indicadora de un influente poco concentrado.

GNERO STENTOR.
A este grupo pertenecen ciliados muy contrctiles, que poseen una forma subesfrica
(contraccin) o de trompa (extensin). La membranela que rodea el peristoma forma un
crculo casi cerrado. La vacuola contrctil se sita junto al citostoma.
Tiene la capacidad de fijarse al suelo con la extremidad inferior del cuerpo, al cual
excreta una masa gelatinosa. El endoplasma asume coloracin diversa dependiendo de la
especie. Sin capacidad de natacin, su movimiento se reduce a contraerse y dilatarse y a hacer
girar sus cilios peribucales.

STENTOR ROESELI. (c. fijo)
Longitud 0,5-1 mm. Aspecto de trompa. Muy contrctil. Endoplasma de color gris.
Superficie del cuerpo esparcida por grupos de largos cilios. Macroncleo nastriforme. Regin
posterior cubierta por una espesa envoltura gelatinosa (Figura 75). Es raro en el fango activo.
Su presencia se asocia a plantas que funcionan correctamente, pero que estn
alimentadas por agua con una carga muy dbil. Por su capacidad de fijarse al suelo deben ser
incluidos entre los ciliados ssiles.

STENTOR S.P. (c. fijo)
Tamao de 1-2 mm. Es poco abundante en los fangos activos de depuradoras. Se
suelen encontrar en lagunas de maduracin, fijado sobre plantas acuticas o sustratos
relativamente estables y en CBR.

ORDEN HYPOTRI CHIDA

A este grupo pertenecen ciliados que tienen la ciliatura somtica sobre la zona ventral
del cuerpo formada por cirros. Estos cirros, colocados en la superficie ventral, se distribuyen
de la siguiente forma: frontal ventral, transversal, marginal y caudal.
La zona alrededor de la membranela es muy prominente en la regin oral. El cuerpo
est aplanado dorso-ventralmente y frecuentemente presenta una pelcula rgida. Tres familias
se observan en el fango activo.

99
- Cirros marginales ausentes del lado derecho. Generalmente ausentes o reducidos a 1-3
cirros en el lado izquierdo.

* Zona alrededor de la membranela reducida a dos pequeos y distintos grupos.
Familia Aspidiscidae.
* Zona alrededor de la membranela bien desarrollada y prominente. Familia
Euplotidae.

- Cirro marginal siempre presente, al menos con una fila de 20 o ms en cada lado.
Familia Oxytrichidae.

Familia Oxytrichidae

- Cuerpo flexible: Gnero Tachysoma.

- Cuerpo rgido: Gnero Stylonychia.

GNERO TACHYSOMA

TACHYSOMA PELLIONELLA. (c. mvil de fondo)
Longitud de 65-85 m. Forma elipsoidal alargada. Consta de 8 cirros frontales, 5
ventrales, 5 transversales muy largos y 2 filas de cirros marginales en cada lado. Vacuola
contrctil en la regin mediana del lado izquierdo y dos macroncleos (Figura 76).
Se alimenta de bacterias, flagelados y algas. Raro en el fango activo. La presencia de
esta especie mvil de fondo indica, en general, un influente poco concentrado.

GNERO STYLONYCHIA.

STYLONYCHIA PUTRINA (A). (c. mvil de fondo)
Longitud de 125-145 m. Cuerpo rgido, aplanado y alargado de forma ovalada. Los
lados derecho e izquierdo son ms o menos similares. Posee 8 cirros frontales, 5 ventrales, 5
transversales y 3 caudales bastante visibles. Dos macroncleos (Figura 77).
Este ciliado mvil de fondo se alimenta de bacterias y flagelados. Es raro en el fango
activo. A veces, es posible observar en el fango la presencia de STYLONYCHIA MYTILUS, especie
similar a sta.

100
Familia Euplotidae

Un solo Gnero Euplotes se observa en el fango activo.

GNERO EUPLOTES

EUPLOTES AFFINIS. (c. mvil de fondo)
La longitud es de 40-70 m, forma elipsoidal y aplanado dorso-ventralmente. En la
parte anterior se observa un collar de cirros que se dirigen hacia el citostoma. Superficie
ventral con 9 cirros fronto-ventrales, de los cuales 2 estn en el margen derecho. 5 cirros
transversales y 4 caudales situados hacia el lado izquierdo (Figura 78).
Macroncleo en forma de cinta dispuesto en forma de "3". Estrechamente ligado al
flculo del fango, donde se alimenta de bacterias y flagelados. Frecuente en el fango activo,
sobre todo durante la fase transitoria de colonizacin. Con frecuencia aparece junto a
Aspidisca cicada, indicando una buena eficacia de depuracin. Especie mvil de fondo.
Puede ser confundido con EUPLOTES CRENOSUS, tambin frecuente en el fango activo.

EUPLOTES PATELLA. (c. mvil de fondo)
Longitud de 80-145 m. Forma discoidal ligeramente alargada, plano convexo,
peristoma amplio de forma triangular. Superficie ventral con 9 cirros fronto-ventral, 5 cirros
transversales y 4 caudales. Macroncleo en forma de "C" (Figura 79).
Se alimenta de bacterias, algas, ciliados y flagelados. Raro en el fango activo. Especie
mvil de fondo asociada a plantas con carga muy baja.

Familia Aspidiscidae

Dos especies pertenecientes al Gnero Aspidisca viven comnmente en plantas
depuradoras.

GNERO ASPIDISCA

ASPIDISCA CICADA. (c. mvil de fondo)
Dimensiones de 25-40 m, forma redondeada, provisto de una pelcula rgida. La
superficie dorsal es convexa y provista de 6 finas estrias similares a costillas; la superficie
ventral es plana y porta 7 cirros fronto-ventrales y 5 transversales. La cavidad oral se abre en
la parte posterior del margen izquierdo. Macroncleo en forma de cinta doblada en "C".
Vacuola contrctil cercana al margen derecho (Figura 80).

101

Esta especie, como todos los Hypotricos que se describen, vive sobre el flculo del
fango sobre el cual se dispone en espera de alimento (bacterias dispersas); por lo que se
considera que forma parte del grupo funcional de ciliados mviles de fondo. Muy comn y
abundante en el fango activo. Abunda en asociacin con Vorticella convallaria. La presencia
masiva de esta especie indica condiciones de estabilidad, asociado a una buena eficacia de
depuracin biolgica.

ASPIDISCA LYNCEUS. (c. mvil de fondo)
Longitud de 30-50 m. Caractersticas morfolgicas y comportamiento muy similar a
Aspidisca cicada. Se distingue de sta por poseer la superficie dorsal lisa y sin surcos. Se
alimenta de bacterias. Poco frecuente en el fango activo (Figura 81).

102

CLASE POLYMENOPHORA
74 75
76 77
78
79
80
81
Figura 74: Spirostomum teres; Figura 75: Stentor roeseli; Figura 76: Tachysoma pellionella;
Figura 77: Stylonychia putrina; Figura 78: Euplotes affinis; Figura 79: Euplotes patella;
Figura 80: Aspidisca cicada; Figura 81: Aspidisca lynceus.
Nota: Dibujos tomados del "Atlas de los microorganismos de agua dulce".

103
BIBLIOGRAFA

Ed. ACADEMIC PRESS INC (Londres).

de Valencia.

STREBLE, H. y KRAUTER, D. (1987). Atlas de los microorganismos de agua dulce. La

MADONI, P. (1988). I protozoi ciliati nel controllo di efficienza dei fanghi attivi. Atti del
corso di formazione. USL n. 9 - Azienda Gas Acqua Consorziale di Reggio Emilia.

104
CAPTULO 3: ndices biticos

1. INTRODUCCIN
Un problema muy frecuente en los estudios o trabajos que versan sobre la calidad de
las aguas consiste en reducir los datos de campo disponibles y presentarlos de forma clara y
concisa de manera que sean fcilmente manejables e interpretables. En general, se estudian
simultneamente numerosos parmetros, multitud de veces a lo largo de todo el ao,
resultando entonces casi imposible el sacar conclusiones o interpretar los resultados
manualmente, dada la gran cantidad de ellos obtenida.
En este caso resulta casi obligado recurrir a la ayuda de algunos ndices o expresiones
matemticas que relacionen unos datos con otros y simplifiquen su significado, traduciendo la
informacin contenida en la lista de especies presentes (con la frecuencia de cada una de ellas
si los datos son cuantitativos), en unos valores o nmeros que indiquen el orden o grupo que
ocupan las muestras estudiadas dentro de la escala establecida, con un criterio determinado
segn la finalidad del estudio. Estos valores o nmeros son fcilmente expuestos en grficos o
tablas y pueden ser manejados por personas no expertas en el campo de la biologa que tengan
relacin con la ordenacin y control de las aguas o necesiten conocer o evaluar la calidad
ecolgica de las mismas para su planificacin (Garca de Jaln y Gonzlez del Tnago, 1986).
Los ndices biticos estn basados en la ordenacin y ponderacin de las especies
presentes en las aguas segn su tolerancia a la contaminacin orgnica.
Los ndices ecolgicos son ndices que consideran los cambios producidos en la
composicin o estructura de las comunidades de los distintos grupos de organismos, como
efecto de las alteraciones provocadas en el medio acutico en que viven. Dentro de los ndices
ecolgicos, se pueden distinguir:
ndices autoecolgicos, aquellos que consideran la determinacin y ponderacin de las
especies indicadoras de cada nivel de contaminacin, que tienen una respuesta similar frente a
una determinada calidad del medio acutico. Entre ellos cabe destacar el sistema de los
saprobios, utilizado fundamentalmente en los pases de Europa Central y Oriental y los
ndices biticos, empleados originariamente en el mundo anglosajn.
ndices sinecolgicos, aquellos que consideran los cambios en las estructuras de las
comunidades debidos a los diferentes impactos producidos en el medio en que viven.
Dentro del conjunto de ndices que consideran los cambios de la estructura y
funcionamiento de las comunidades debidos a variaciones en las condiciones del medio

105
acutico (ndices sinecolgicos), se encuentran los ndices de diversidad. stos reflejan las
variaciones en la estructura de las comunidades segn el nmero de especies que comprenden
la abundancia relativa de cada una de ellas. Entre los ndices sinecolgicos tambin se
encuentran los ndices trficos, que atienden a las proporciones de los distintos niveles
trficos existentes en las aguas, variables segn las condiciones de las aguas en que viven
(Garca de Jaln y Gonzlez del Tnago, 1986).

ndices de biodiversidad.
Es un hecho comnmente observado que las comunidades naturales de organismos, no
alteradas, contienen un nmero reducido de especies muy abundantes, un nmero tambin
pequeo de especies muy escasas o raras y una mayora de especies restantes que estn
representadas por poblaciones ms o menos reducidas y equivalentes, siguiendo una
distribucin normal de abundancias. Uno de los efectos ms evidentes de la contaminacin
orgnica en las aguas es la modificacin de la estructura de las comunidades naturales,
haciendo que ciertas especies desaparezcan por no poder tolerar las nuevas condiciones del
medio y otras, por el contrario, proliferen notablemente al tener menor competencia
interespecfica y, a su vez, estar favorecidas por los aportes orgnicos aparecidos en las aguas.
Este efecto se traduce en una disminucin de la diversidad de las comunidades, al reducirse el
nmero de especies presentes en las mismas y al mismo tiempo cambiar las abundancias
relativas de las existentes, apareciendo algunas de ellas como dominantes en la comunidad
(Garca de Jaln y Gonzlez del Tnago, 1986).
Existen numerosas circunstancias naturales donde la diversidad de las comunidades de
organismos es muy pequea, debido a ciertas situaciones extremas del medio que slo
permiten la vida a un nmero reducido de especies.
La eleccin de uno o varios de los ndices biolgicos para su aplicacin en un trabajo o
estudio concreto depender, en primer lugar, de los objetivos del mismo. Posteriormente, hay
que tener en cuenta otra serie de factores, como son el nivel de conocimientos taxonmicos de
que se dispone. Cuando se conocen de forma suficiente los taxones presentes, se pueden
aplicar otros ndices ms detallados, como los de diversidad.
Entre los ndices de diversidad ms utilizados se encuentra el ndice de Shannon-
Weaver (1949), el ndice de comparacin secuencial de Cairns et al. (1968) o el ndice de
Margalef.
En segundo lugar, hay que tener presente el carcter de los datos disponibles. Si stos
son cualitativos slo es posible aplicar algunos ndices, como algunos de los basados en el
sistema de los saprobios, existiendo otros concretos para analizar los datos cuantitativos,

106
como son los nombrados ndices de diversidad, etc (Garca de Jaln y Gonzlez del Tnago,
1986).
En conclusin, para los estudios o casos en los que se trata de conocer el estado o
calidad biolgica de las aguas en un momento concreto, los ndices ms aconsejables podran
ser los biticos y los de diversidad. Los primeros reflejan la composicin faunstica de la zona
(valores altos de los mismos indicarn la presencia de taxones intolerantes a la contaminacin
orgnica de las aguas) y los segundos dan una idea de la estructura de las comunidades
(diversidades altas indican un buen estado biolgico de las aguas; diversidades pequeas
pueden deberse a otros factores distintos a la calidad de las mismas).
La informacin suministrada por ambos tipos de ndices debe considerarse
conjuntamente y as revelar con fidelidad el estado bilogico de las aguas al conocer qu
especies estn presentes (tolerantes o intolerantes a la contaminacin) y cmo se estructuran
dentro de la comunidad (si existen algunas que son dominantes frente al resto o, si por el
contrario, todas ellas estn representadas en cantidades anlogas, en relacin con la
estabilidad de la misma) (Garca de Jaln y Gonzlez del Tnago, 1986).

2. EL CASO CONCRETO DE LAS AGUAS RESIDUALES
En el control de la contaminacin de las aguas, adems de emplear los anlisis fsico-
qumicos como sistema de vigilancia, se utilizan los microorganismos presentes en el medio
de estudio, pues dichos microorganismos (protozoos ciliados principalmente) se encuentran
representados en funcin de las condiciones de contaminacin imperantes.
Con relacin a esto ltimo, un parmetro operacional muy relacionado con la
presencia de los protozoos en el reactor biolgico es la carga msica (CM); segn sto,
autores como Curds y Cockburm (1970) sealan la necesidad de este estudio y consideran que
puede ser determinada la relacin entre MLSS (slidos en suspensin del licor mixto) y la
CM en funcin de los porcentajes de los grupos protozoarios presentes (Figura 1). Cuando el
fango presenta buena actividad biolgica codominan los ciliados fijos con los reptantes,
complementndose en sus diferentes hbitos alimenticios. En situaciones de variaciones de
carga o extracciones fuertes de fangos son los reptantes la poblacin ms afectada, por su
situacin en la interfase del flculo.
Si en una muestra de agua se determinan las especies presentes en lla y a su vez stas
tienen capacidad bioindicadora, se puede valorar la contaminacin presente en el sistema. Sin
embargo, del conjunto de especies, existen algunas que son muy selectivas, mientras que otras
no lo son tanto.

107
La agrupacin de estas especies en funcin del medio donde naturalmente se
encuentren, permite definir una categora de contaminacin en el medio donde se desarollan.
Esto constituye la escala de los saprobios, de aplicacin en aguas dulces de ecosistemas
naturales. En cambio, dada la "contaminacin forzada" que existe en las depuradoras, su
utilizacin no tiene cabida en stas. En las depuradoras, sin embargo, existen otros
indicadores de diversidad que permiten conocer la estructura del ecosistema presente. Estos
indicadores son: el ndice de Shannon y el ndice de Madoni.

Figura 1: Reparto de los porcentajes de grupos de microorganismos en funcin de las caractersticas
operacionales del reactor.

El ndice de Shannon mide la biodiversidad presente en un ecosistema en unidades de
informacin (bit). Es un indicador de la complejidad del sistema, de las relaciones trficas
establecidas en l y aporta informacin sobre la resistencia del sistema a los cambios
ambientales. Su clculo se realiza en funcin del sumatorio parcial de los distintos individuos
de cada especie encontrada con relacin al nmero total de especies. Se aplica de forma
general en ecologa.
El ndice de Madoni valora la estructura de la poblacin de protozoos ciliados, grandes
flagelados y amebas con testa, presentes en el fango activado. Se cuantifica en un rango entre
BAJA ALTA NO FORMACIN FLOCULAR
MLSS CM BUENA
SEDIMENTACIN
FLAGELADOS
NADADORES
AMEBAS
SSILES
ROTFEROS
REPTANTES
NEMTODOS
ROTURA FLOCULAR
ALTA BAJA

108
1-10 (categoras numricas), que se corresponden con distintas "clases" (clases 1 a 4) que
definen el funcionamiento del ecosistema-fango activado.
Las relaciones existentes entre ambos ndices no son claras, ya que mientras que el
ndice de Shannon valora la informacin circulante por el ecosistema, el ndice de Madoni
define grupos predominantes y a partir de ah estima la calidad de la biomasa en el sistema. Se
aplica especficamente a sistemas de fangos activos en EDAR convencionales.
Ambos ndices trabajan prcticamente con los mismos factores: biodiversidad y
nmero de individuos, pero la informacion conseguida diverge.
El ndice de Madoni presenta deficiencias de interpretacin en algunas situaciones:
Por ejemplo, la sectorizacin del grupo de protozoos hacia los ciliados ssiles del
gnero Epistylis, segn el Mtodo Madoni, se concluye en una calidad de fango muy buena
(clase 1: fango estable y bien colonizado), de categora numrica siempre superior a 6. Sin
embargo, a nivel ecolgico, el sistema no funcionara adecuadamente, puesto que presenta un
ndice de Shannon bajo.
El estudio comparativo de ambos ndices aporta informacin complementaria de la
forma de trabajo del sistema y de su capacidad de asimilacin de cargas orgnicas. sto
repercute en una mejora y en un entendimiento ms claro de la manera de mantener unos
rendimientos de depuracin ptimos.

3. NDICE MADONI

Fundamento:
El ndice Madoni o SBI (Sludge Biotic Index) es un ndice numrico (1-10), resultado
del estudio de la estructuracin de la microfauna en el fango activo y obtenido mediante una
tabla de doble entrada horizontal y vertical (Tabla I), elaborada a partir de los coeficientes de
correlacin hallados en distintas poblaciones de protozoos y algunos de los ms importantes
parmetros operacionales.
Finalmente, una vez determinado el valor nmerico del SBI, es necesario buscar la
correspondencia con la calidad de fango que determina este mtodo (Tabla II).
La observacin se har a 10x/40x aumentos sobre volmenes de 25 L y para tres
rplicas.
La metodologa a seguir es la establecida por Madoni para el clculo del ndice
Bitico (Madoni, 1994).

109

Definiciones:
SBI: ndice bitico del fango (Sludge Biotic Index).
Grupo funcional dominante: Porcentaje de los distintos grupos de organismos
presentes. En el ndice de Madoni se contemplan: pequeos flagelados, ciliados bacterifagos,
Vorticella microstoma, Opercularia sp., Ciliados ssiles (distintos de Opercularia sp. y V
microstoma) y sumatorio de ciliados ssiles (distintos de Opercularia sp. y V microstoma),
amebas testceas y reptantes.
Densidad total de la microfauna: Nmero de individuos/L
Diversidad: Nmero de unidades taxonmicas diferentes.
Nmero de pequeos flagelados: Resultado del recuento de estos microorganismos en
una diagonal completa de la cmara de Fuchs-Rosenthal.
Clase de calidad del fango: Aquella determinada a partir del valor del SBI y que
permite estimar la calidad biolgica del fango activo. Existen cuatro clases: 1-4.

Tabla I. Tabla de doble entrada para la determinacin del valor del SBI.

Grupo
dominante
Densidad
(ind./L)
>10 8-10 5-7 <5
F <10 10<F<100 F <10 10<F<100 F <10 10<F<100 F <10 10<F<100
1
> 10
6
10 8 9 7 8 6 7 5
< 10
6
9 7 8 6 7 5 6 4
2
> 10
6
9 7 8 6 7 5 6 4
< 10
6
8 6 7 5 6 4 5 3
3
> 10
6
7 5 6 4 5 3 4 2
< 10
6
6 4 5 3 4 2 3 1
4
> 10
6
6 4 5 3 4 2 3 1
< 10
6
5 3 4 2 3 1 2 0
5
> 10
6
5 3 4 2 3 1 2 0
< 10
6
4 2 3 1 2 0 1 0
6
> 10
6
4 3 2 1
< 10
6
3 2 1 0
Notacin:
1. Ciliados reptantes + ssiles* y/o amebas testceas.
2. Ciliados ssiles* > 80%.
3. Opercularia spp.

110
4. Vorticella microstoma.
5. Ciliados nadadores bacterifagos.
6. Pequeos flagelados nadadores (> 100) **
*Opercularia spp. y Vorticella microstoma no abundantes
**Diagonal completa en la cmara de Fuchs-Rosenthal
F<10 Menos de 10 pequeos flagelados en la diagonal de la cmara de recuento
10<F<100 Entre 10 y 100 pequeos flagelados en la diagonal de la cmara
>10, 8-10, 5-7, < 5 Nmero de unidades taxonmicas

Tabla II. Clases de calidad del fango en funcin del SBI

CLASES DE CALIDAD DEL FANGO EN FUNCIN DEL SBI
CLASE 1 SBI de 8-10
Fango estable, bien colonizado y excelente actividad
biolgica. Muy buen funcionamiento.
CLASE 2 SBI de 6-7
Fango estable y bien colonizado, actividad biolgica
en descenso. Buen funcionamiento.
CLASE 3
SBI de 4-5

Depuracin biolgica insuficiente en la balsa de
aireacin. Funcionamiento mediocre.
CLASE 4 SBI de 1-3
Depuracin biolgica escasa. Bajo rendimiento.

111

Descripcin del ndice Madoni (Madoni, 1994)

Desarrollo:
- Visu preliminar: 50 L o 1 gota de pipeta Pasteur de la muestra, para valoracin
cualitativa de las especies presentes
- Recuento de pequeos flagelados: 25 L (2 rplicas) a 200x con la cmara de Fuchs-
Rosenthal en la diagonal completa (16 cuadrados)
- Recuento de organismos: 25 L (2 rplicas) a 100x
- Atender durante el anlisis a los microorganismos incluidos y no incluidos en este
mtodo

Microorganismos a considerar Microorganismos no considerados
Pequeos flagelados Amebas desnudas
Grandes flagelados Microorganismos de arrastre (algas,
crustceos, insectos, etc.)
Ciliados Actinpodos (heliozoos)
Amebas testceas
Rotferos y Nematodos (Metazoos)

Datos a tener en cuenta:

Es recomendable utilizar cubreobjetos de 18x18 mm para evitar la desecacin de la muestra.
Organismos a considerar en el recuento: grandes flagelados, ciliados, tecamebas y metazoos.
Organismos no considerados: Amebas desnudas, algas, crustceos...
En los ciliados coloniales se contabiliza cada organismo (cada cuerpo celular).
Los organismos detectados en el visu, pero no en el recuento, tienen una abundancia de uno,
siempre que se observen al menos dos individuos.
No es necesario llegar a nivel de especie en grandes flagelados, rotferos y nematodos.
Rotferos y nematodos contribuyen cada uno a una sola unidad sistemtica; sin embargo, si
somos capaces de distinguir gneros es importante reflejarlos para el clculo de Shannon (H).
Para el SBI, la determinacin de amebas testceas se realiza slo a nivel de gnero. Sin
embargo, si es posible llegar a diferenciar especies hay que sealarlo para determinar H.
En cuanto a los grupos "clave" slo los ciliados bactervoros se engloban dentro de los 3
grupos funcionales: nadadores de vida libre, reptantes o mviles de fondo y ssiles o
pedunculados.
Los ciliados carnvoros tan slo contribuyen a la densidad y diversidad total de la
microfauna. As pues, ciliados nadadores predadores tales como Litonotus spp., Amphileptus
spp., Coleps hirtus, Acineria incurvata y Spathidium spp., deben ser excludos del grupo de
los ciliados nadadores de vida libre. De la misma forma, los ciliados predadores ssiles o

112
pedunculados, como los suctores Podophrya sp., Tokophrya sp. y Acineta sp. deben ser
igualmente excludos del grupo de los ciliados ssiles o pedunculados, considerndose tan
slo a la hora de computar densidad y diversidad total de la microfauna.
No se tienen en cuenta las larvas trocforas, pero se resea en observaciones su abundancia.
Es necesario realizar los recuentos de organismos contando tambin los contenidos en el
rebose que se pueda producir en el cubreobjetos.
Vorticella microstoma y Vorticella infusionum estn incluidas en el mismo grupo para el
SBI, no as para el H.
Colonias muy numerosas de peritricos falsean los resultados finales de los recuentos. Por
ello, el procedimiento a seguir cuando aparecen es: realizar dos recuentos normales de
organismos y si aparece una colonia grande se obvia en el resultado final. Una vez terminado,
se realizan de nuevo dos recuentos contabilizando slo el organismo colonial. Una vez
terminado se sustituyen los valores del colonial en los dos recuentos iniciales y se calculan las
densidades finales.
La lista de especies observadas se realiza con al menos dos organismos vistos de cada
especie.
El SBI es adecuado para tratamientos convencionales de fangos activos, contacto-
estabilizacin y aireacin prolongada. La medida de diversidad H es adecuada para cualquier
ecosistema.
Las amebas testceas deben contabilizarse slo cuando estn vivas. Por ello, se prestar
especial atencin a su transparencia y si es necesario aplicaremos Rosa de Bengala. Como
idea general: se tomarn las amebas testceas oscuras como inertes. Sin embargo, esto plantea
un problema para aquellas testceas que utilizan material extracelular (piedras, diatomeas...)
para generar us testas aglutinadas, pues casi siempre son oscuras. En el caso de un fango
activo con abundancia de testceas se proceder a realizar la prueba de actividad con el Rosa
de Bengala (C
2
OH
2
O
5
T
4
Cl
2
Na
2
). Este reactivo se absorbe por la superficie protoplasmtica,
colorendose de rosa. Se aade un poco de reactivo a 50 mL de fango activo y se deja reposar
unos 15 minutos, tras lo que se realiza el recuento.

113

AMEBAS TESTCEAS INACTIVAS

AMEBAS TESTCEAS ACTIVAS

Situaciones anmalas en el SBI:

La presencia masiva de grandes flagelados por un lado o de nematodos y rotferos por
otro, plantea dificultades a la hora de aplicar el SBI. En estos casos se pueden plantear dos
situaciones:
1. Slo existen estos organismos anteriormente citados, en cuyo caso no se puede
aplicar el SBI. Se indicaran las densidades de tales organismos.

114
2. Existen otros organismos que s estn recogidos en el SBI. En este caso se aplicara
el SBI a estos grupos de organismos, puntualizando que existen determinadas densidades de
organismos no recogidos en dicha clasificacin.
Otra situacin dificultosa es la aparicin de Vorticella microstoma ms V. infusionum
o de Opercularia no dominante, pero s abundantes. En este caso se aplica el SBI
normalmente y se puntualiza que aparecen estos grupos de organismos a tales densidades.

Expresin de resultados:
Grupo dominante
Densidad de la microfauna en nmero de individuos/mL
Nmero de especies detectadas
Recuento de pequeos flagelados
ndice bitico de fango (SBI)
"Clase" Madoni

115
TABLA-RESUMEN PARA EL CLCULO DE MADONI (Madoni, 1994)

Desarrollo
Visu preliminar: 50 L o 1 gota de pipeta Pasteur de la muestra, para valoracin cualitativa de las
especies presentes
Recuento de pequeos flagelados: 25 L (2 rplicas) a 200x con la cmara de Fuchs-Rosenthal en la
diagonal completa (16 cuadrados)
Recuento de organismos: 25 L (2 rplicas) a 100x
Datos a tener en cuenta
Es recomendable utilizar cubres de 18 x 18 mm para evitar la desecacin de la muestra
Organismos a considerar en el recuento: grandes flagelados, amebas testceas y metazoos
Organismos no considerados: Amebas desnudas, algas, crustceos...
En los ciliados coloniales se contabiliza cada zooide
Los organismos detectados en el visu, pero no en el recuento, tienen una abundancia de uno
No es necesario identificar a nivel de especie a flagelados, rotferos y nematodos
No afectan al porcentaje de grupos funcionales los ciliados carnvoros y suctores
Resultados
Grupo dominante
Densidad de la microfauna en nmero de individuos/mL
Nmero de especies detectadas
Recuento de pequeos flagelados
ndice bitico de fango: SBI
Clase de Madoni correspondiente al valor de SBI

116
4. NDICE DE SHANNON

Generalidades:
Al valorar un ecosistema necesitamos, en muchas ocasiones, conocer la relacin de
organismos presentes y su representacin numrica. Una manera de realizar este clculo es el
ndice de Biodiversidad de Shannon (Margalef, 1992), que estima el grado de entropa o
informacin circulante en el sistema.
Dado que este ndice se basa en el nmero de especies, debemos asegurarnos en las
identificaciones y ser cuidadosos con nuestras muestras (manipulacin, recuentos, etc.). De
esta forma, este ndice nos permite conocer las interrelaciones del sistema y comparar
muestras de sistemas biolgicos distintos.

Fundamento:
Cuando manejamos medidas de diversidad, debemos tener en cuenta que estamos
intentando describir las relaciones de individuos de distintas categoras de una comunidad.
Por ello debemos considerar en que grado de profundizacin comparamos, es decir, a nivel de
gnero, familia, especie...
En nuestro muestreo, el nivel de profundidad empleado es la cantidad de organismos
contados de cada especie observada.
Como regla general debemos tener en cuenta:
- Las categoras taxonmicas deben ser conocidas en profundidad y utilizar la misma
clasificacin taxnomica en muestras que se vayan a comparar.
- Cada categora es cualitativamente diferente. Se define la identificacin a nivel de
gnero, familia o especie.
- Se determina el nmero de individuos de cada categora observada.
- El estudio permite tener una comunidad de organismos bien definida.
Por lo tanto, el primer paso es determinar las distintas agrupaciones de organismos
definidas en las categoras previamente establecidas, para posteriormente realizar recuentos
exhaustivos de estas categoras. Una comunidad se encuentra mejor representada si a igualdad
de organismos totales, aparecen ms especies que en otra. Cualquier sectorizacin hacia una
especie en concreto indica desarreglos en el sistema.

Instrumental:

117
-Microscopio ptico con objetivos 10x, 20x, 40x y 100x, alguno de los cuales provisto de
contraste de fases. Micrmetro. Cabezal triocular con videocmara.
-Aceite de inmersin y solucin para limpieza de objetivos (ter-etanol 3:1)
-Portaobjetos y cubreobjetos
-Vasos de precipitado
-Varillas agitadoras de vidrio
-Micropipetas automticas (20-200 L)
-Pipetas Pasteur de boca ancha

Procedimiento:
Se utilizan los resultados de los dos recuentos realizados para la valoracin del ndice
de Madoni, teniendo en cuenta que el nmero total de organismos y el de cada especie han de
encontrarse en las mismas unidades de densidad (organismos/L, organismos/mL...).

Expresin de resultados:

ndice de Biodiversidad de Shannon (H).
H = - (Pi (log
2
Pi))
dnde,
Pi = n organismos SPA/ n total organismos
SP
A
= especie A

Bibliografa
Garca de Jaln, D. y Gonzlez del Tnago, M. (1986). Mtodos biolgicos para el
estudio de la calidad de las aguas. Aplicacin a la cuenca del Duero. Monografas.
Icona (M.A.P.A). Madrid.
Madoni, P. (1994). A sludge biotic index (SBI) for the evaluation of the biological
performance of activated sludge plants based on the microfauna analysis. Wat.
Res. 28, 1, 67-75.
http://www.mdsg.umd.edu/Education/biofilm/diverse.htm#3

118
CAPTULO 4: CONCEPTO "BIOINDICACIN" Y
ALGUNAS NOTAS BIOINDICADORAS

1. INTRODUCCIN: QU ES LA BIOINDICACIN?
En un primer contacto con la palabra bioindicacin sin tener ms conocimientos que
los etimolgicos, podemos deducir que se trata de algo relacionado con la vida y su posible
aplicacin a determinar o indicar alguna circunstancia.
En realidad, esta primera aproximacin es bastante correcta, aunque no podemos
quedarnos ah, ya que interesa que el organismo elegido como bioindicador concurra en un
margen estrecho de condiciones y sea fcil de identificar, lo que implicara una deduccin
lgica de asociacin de un organismo (vegetal o animal) a una condicin ambiental
determinada.
Especies que concurran en un nicho superpuesto no podran ser bioindicadoras. Sin
embargo, si la superposicin es baja o nula, la aparicin de una especie permitir determinar
un recurso sin necesidad de realizar su anlisis. La abundancia relativa en un hbitat puede
ser a menudo usada como gua para indicar su importancia en la estructura ecolgica y el
uso que hace de sus recursos.
Si tomamos la clasificacin de los seres vivos, dada la diversidad, podramos
desalentarnos a la hora de utilizar la bioindicacin como herramienta de trabajo. Sin
embargo, nuestro campo esta circunscrito a unas condiciones determinadas y as como los
lquenes son bioindicadores de la calidad atmosfrica, los protozooos y secundariamente el
tipo de bacteria predominante son bioindicadores de la calidad del agua depurada y del
estado biolgico de las cubas de aireacin en tratamientos convencionales (o del estado de
lagunas, bioidiscos, etc. en los no convencionales).
Por lo tanto, para un buen control de las EDARs resulta de gran ayuda el estudio
microscpico de los fangos activos, ya que suponen una visin inmediata y rpida de las
condiciones, con lo que la accin a tomar tambin ser rpida.
En un fango activo nos encontramos prcticamente cualquier representante del reino
bacteriano, pero slo algunas especies o grupos son determinantes a la hora de establecer
condiciones.
El reino vegetal est muy limitado en los tratamientos convencionales, dada la
turbidez del medio que no permite que se desarrolle la fotosntesis, pero s se encuentran
bien representados las clorofitas, euglenofitas, cianofitas y rodofitas en las lagunas de
oxidacin y biodiscos.

119
Aunque la mayora de protozoos presenta un amplio abanico de condiciones
medioambientales, en lodos activados existen muchos estudios que utilizan sobre todo a los
protozoos ciliados como bioindicadores:
Madoni y Ghetti (1981)
Pratt y Cairns (1985)
Salvad et al. (1995)
Entre otras, las condiciones ambientales en las balsas son las que determinan el tipo
de taxocenosis de protozoos que puede prosperar.
Por ltimo, dentro de los metazoos, son los nematodos, rotferos, anlidos y
artrpodos los ms representativos.
Dada la complejidad en la taxonoma e identificacin de los numerosos organismos
citados anteriormente, nos vamos a centrar en los tratamientos convencionales.

2. EL ECOSISTEMA BALSAS
Segn Madoni y Ghetti (1981), es posible considerar las plantas depuradoras de
aguas residuales con tratamiento biolgico, como un modelo experimental til de un
ecosistema artificial en condiciones extremas.
Dentro de la estructura de un ecosistema podemos diferenciar:
El conjunto de factores ambientales de una determinada zona (biotopo), que lo
compondran el oxgeno que aportamos, la recirculacin y las caractersticas del agua
residual de entrada.
La comunidad de seres vivos que habitan en ella (biocenosis), compuesta por los
descomponedores (bacterias, hongos y flagelados) y los consumidores (ciliados, flagelados,
rizpodos y pequeos metazoos), que establecen relaciones de competencia por el alimento
y la depredacin.
Las cadenas trficas que se crean en el seno de este ecosistema deben estar lo ms
interrelacionadas posibles, ya que de esta forma se consigue estabilidad y se aprovechan
mejor los flujos de energa.
En general, las poblaciones bacterianas y protozoarias seguirn una curva normal de
crecimiento que se ver desplazada por la influencia con otras poblaciones.
El conjunto de curvas de crecimiento de los distintos organismos interacciona de
forma evolutiva. Partiendo de la base del agua residual, se generan interacciones trficas que
llevarn el clmax a la sucesin, si la explotacin es correcta. Este clmax no ser siempre el
mismo, ya que estar influenciado por todas las condiciones anteriormente citadas.

120
En el ecosistema de fangos activos, en el que la produccin de biomasa juega un
papel fundamental en el proceso de flujos de energa y ciclado de nutrientes, los protozoos,
que constituyen aproximadamente el 5% del peso seco del licor mezcla (Curds, 1973), son
muy importantes en la reutilizacin de nutrientes, por tratarse de organismos de vida muy
corta (metabolismo muy alto), que adems aceleran la toma de nutrientes por las bacterias y
su reciclado posterior. Se trata de relaciones de gran movilidad con las que se consigue la
estabilizacin de la materia orgnica por oxidacin biolgica.

3. GRUPOS BIOINDICADORES EN BALSAS
Prcticamente, todos los autores coinciden en que los protozoos son el grupo rey de
la bioindicacin y en que contribuyen al consumo de materia orgnica y bacterias libres,
consiguindose reducciones considerables de la DBO
5
y de las concentraciones bacterianas
de E. coli en un 50 %. La vida media de E. coli fue estimada en 16 horas en ausencia de
protozoos y en 1,8 horas en presencia (Curds, 1973).
Tambin es posible considerar ciertas bacterias filamentosas como indicadoras de
situaciones muy concretas en las balsas.
Sin embargo, asumir estas propuestas conlleva riesgos considerables, ya que la
identificacin es bastante complicada; aunque no cabe duda de que estos estudios aportan
informacin muy interesante.
Se identifican ms de 200 especies de protozoos en instalaciones de aguas residuales
(Curd, 1975), de las cuales 33 son flagelados, 25 rizpodos, 6 actinpodos y 160 ciliados.
De todas ellas slo la mitad se encuentran con cierta frecuencia (Curds y Cokburn, 1970;
Madoni y Ghetti, 1981) y a una densidad de aproximadamente 10.000 clulas / mL (Madoni
et al., 1993).
Resumiendo, podemos decir que el papel de los protozoos en los procesos de
depuracin es:
- Son consumidores directos de materia orgnica
- Son los principales consumidores de poblaciones bacterianas
- Estn directamente envueltos en la cadena alimenticia como paso entre niveles
trficos, transformando la materia orgnica muy fina en partculas de mayor tamao,
disponible para otros miembros de la comunidad.

121
3.1. Taxonoma
Reino bacteriano:
Mycobacterias: Gneros Actynomyces, Nocardia
Algobacterias: Gneros Sphaerotilus, Leptothrix, Beggiatoa, Thiothrix
Reino vegetal:
Euglenofitas: Gnero Euglena
Crisofitas: Clase Diatomeas
Reino animal:
Subreino Protozoos
Rizpodos: Amebas y Heliozoos
Flagelados
Infusorios: Clase Ciliados
SubreinoMetazoos
Nematelmintos: Nematodos
Rotferos
Anlidos y Oligoquetos

3.2. Bacterias
El estudio taxonmico de las bacterias presentes en fangos activados no suele
asociarse a estudios de bioindicacin sino ms bien a alteraciones en las cubas (bulking), sin
embargo puede sernos de gran ayuda su estudio y su taxocenosis en las balsas.
Cambios en las condiciones de funcionamiento de un reactor biolgico
(caractersticas del influente, parmetros operacionales, etc.) pueden provocar el crecimiento
masivo de bacterias filamentosas. Estas proliferaciones pueden atajarse por medios
mecnicos (por ejemplo lavadoras de espumas), qumicos (cloracin) o en la situacin ms
adecuada, evaluando el origen del problema y atajndolo desde su base.
El conocimiento de las condiciones en las que proliferan estas bacterias (que no es
ms que la bioindicacin) ayuda a tomar medidas que influyan en sus microambientes,
modificando as las condiciones del medio y preparando el camino para que se desarollen
otros organismos.
Estas bacterias, normalmente, son capaces de competir ms eficientemente ante una
limitacin de nutrientes que las formadoras de flculo, al ser ms adaptativas en condiciones
extremas, situacin esta ltima que reduce el nmero de interacciones trficas que pudieran
establecerse.
El estudio del flculo (entramado, compactacin...) genera informacin sobre la
concentracin de bacterias filamentosas, permitiendo diagnosticar y prever el estado y
rendimiento del proceso. Adems, estos organismos son parte esencial de la depuracin, al
crear un entramado base donde se asientan las bacterias formadoras de flculo. Un descenso

122
excesivo de la concentracin de filamentos provoca el debilitamiento y rotura del flculo,
que con la aireacin se rompe y escapa en el efluente en forma de microflculos.
El tamao de las bacterias presentes en el fango vara desde 1 a 9 m en las bacterias
libres y de 30 m o ms en las bacterias filamentosas.
Su divisin taxonmica es funcin de la naturaleza de la capa que limita sus clulas,
pudindose diferenciar entre:
Micoplasma: la membrana es la capa externa, no sintetiza pared
Gram positiva: presenta una capa celular
Gram negativa: presenta al menos dos capas distintas
Su organizacin estructural y funcional es muy diversa, sirviendo como muestra los
medios de locomocin: por flagelos (Pseudomonas), deslizamiento (Myxococcus) o fibrillas
axiales (Espiroquetas).
La bacteria ms significativa, o por lo menos la ms estudiada y citada, es Zoogloea
sp., que pertenece a la familia Pseudomonadaceae. Sus clulas son en forma de bastn.
Gram positivas, con un tamao de 0,5-1 m. Su nutricin es quimiorganotrofa y presentan
un crecimiento diferencial en funcin de los nutrientes presentes en el medio. La bibliografa
la considera una de las grandes formadoras de flculos, aunque en la actualidad este punto
est muy discutido.
Con relacin al resto de bacterias, nos interesa centrarnos en aquellas que van a
determinar parmetros claros frente al medio en que se encuentran. Se citan algunas de las
ms comunes:
Sphaerotilus sp.
Bacteria Gram negativa, con falsa ramificacin. Presenta vaina sin divisiones. Se
unen al sustrato por un rgano adhesivo basal. Solo existen dos especies: S. natans y S.
discophorus. La primera de ellas es la que suele aparecer en lodos y se trata de una nadadora
libre, con depsitos de sulfuros intracelulares. Si se enriquece su medio con quelatos de
hierro los convierte en hidrxido frrico, impregnndose toda su superficie.
Del mismo grupo es caracterstica Leptothrix, cuyo crecimiento ptimo se da a
concentraciones de oxgeno de 2,5 mg/L, lo cual la asocia con aguas relativamente limpias.
Nocardia sp.
Bacteria Gram negativa con clulas muy cortas perteneciente a los actinomicetos
(grupo intermedio entre bacterias y hongos). Difiere de las micobacterias por su tendencia a
crecer formando micelios.
Thiothrix sp.

123
Organismo filamentoso deslizante. Junto con Beggiatoa son las oxidadoras del
sulfhdrico, azufre elemental u xidos parcialmente reducidos con formacin de depsitos
intracelulares de azufre. Es caracterstico de Thiothrix su disposicin en roseta junto con su
inmovilidad, mientras que Beggiatoa presenta formas alargadas y es extremadamente mvil.
Dentro de las bacterias que no acumulan azufre podemos resaltar las que presentan
paredes claramente visibles:
Nostocoida limicola: Neisser positiva
Tipo 1863: Neisser negativa; clulas esfricas u ovoides.
Tipo 0961 y 021N: Neisser negativa.
La reproduccin en la mayora de estas bacterias puede alterarse en funcin de las
caractersticas del medio, de forma que fragmentan sus filamentos, constituyendo formas
bacilares de pequeo tamao, susceptibles de germinar cuando las condiciones sean
propicias. Este tipo de estrategia evolutiva tambin ocurre entre los protozoos, que se
enquistan en el entramado flocular esperando las condiciones ptimas para su crecimiento,
ocurriendo en muchos casos fenmenos de explosiones demogrficas.
Junto con la identificacin de las bacterias presentes es conveniente estudiar el tipo
de flculo que se forma, entramado, superficie que ocupa, etc.
Estudios al respecto se han seguido por diversos autores: Surez (1997) y Garrido et
al. (1988), que en general tratan de relacionar el tamao del flculo con la edad o carga del
fango o trabajos que aportan informacin sobre las condiciones de la EDAR como Al-
Shahwani et al. (1991), Esteban (1989) y Salvad (2000).

3.3. Protozoos y Micrometazoos
Abarcan varios grupos de protistas eucariotas, normalmente mviles y no
fotosintticos, que probablemente se hayan diversificado en varios momentos de su pasado
evolutivo de uno o varios grupos de algas unicelulares.
El origen de los protozoos parece estar en eucariotas unicelulares fotosintticos, que
pierden la capacidad de hacer fotosntesis. Esta teora esta rubricada por el caso de ciertas
algas, como son las euglenas, que suelen aparecer en lodos activos donde no actan
fotosintticamente, sino hetertrofamente.
Las diferentes tendencias evolutivas estn centradas en los dinoflagelados, cuya
estructura celular est relacionada con los organismos celulares fotosintticos (dos flagelos
con distinta posicin).
Gymnodinium: dinoflagelado fotosinttico relativamente poco especializado, tanto
fotosinttico como hetertrofo.

124
Ceratium: dinoflagelado fotosinttico ms especializado
Tetradinium y Dinoclonium: Organismos inmviles, estrictamente fotosintticos.
Polykrikos, Nostcula y Dinamoebidium: Dinoflagelados fagotrofos de vida libre.
Chytriodinium y Hematodinium: Dinoflagelados parsitos.
De los distintos grupos de protozoos vamos a obviar los esporozoos por carecer de
importancia en lodos, repasando el resto de sus caractersticas generales de identificacin.
Para ello, a continuacin, se muestra una sntesis de la informacin mostrada en el captulo 2
referente a las claves de identificacin de protozoos.

FLAGELADOS
Generalmente presentan uno o dos flagelos en el extremo anterior de la clula. Su
alimentacin es normalmente hetertrofa, aunque ya se han mencionado las Euglenas, que a
pesar de ser fotosintticas actan como flagelados. La asimilacin del alimento la pueden
hacer de forma osmtrofa, fagtrofa o mixta.
En los lodos aparecen en grandes cantidades, aportados muchos de ellos por el agua
residual que llega.
En funcin de su tamao los podemos diferenciar en pequeos flagelados
(Zoomastigophora) con 5-20 m de largo: No presentan cloroplastos, alargados, ovoides o
piriformes y mviles, adheridos o no al flculo y grandes flagelados (Phytomastigohora) con
30-70 m de tamao: Pueden tener plastos con pigmentos verdes o azul verdoso o bien
incoloros con dos flagelos en la parte anterior.
Los flagelados ms comunes en fangos son:
* Bodo sp.: Nadador libre; 10-14 m de longitud; cuerpo plstico y a veces puede
emitir pequeos pseudpodos; vacuola contrctil anterior y a veces otra posterior.
* Treponema sp.: 4 flagelos, dos largos y dos cortos a cada lado; su cuerpo tiene dos
abultamientos posteriores, vacuola contrctil y movimiento de rotacin.
* Tetramitus sp.: 3 flagelos posteriores y uno anterior; muy comn en zonas
anaerbicas; tamao alrededor de 20 m; ncleo anterior y vacuola posterior.
* Trigomonas sp.: 3 flagelos a cada lado, anaerobio; tamao en torno a 33 m;
clulas rectangulares; presenta muchas vacuolas en su interior y dos ncleos.
* Hexamitus sp.: 2 pares de 3 flagelos anteriores y dos posteriores; tamao en torno a
30 m; dos ncleos localizados entre los dos flagelos posteriores; movimientos rotatorios.
* Pleuromonas sp.: presenta un flagelo que utiliza para fijarse al sustrato; muy
pequeo (6-10 m); reniforme; ncleo anterior y vacuola contrctil posterior; muy sensible a
bajas concentraciones de oxgeno. Movimiento rotacional muy rpido.

125
* Spiromonas sp.: 2 flagelos, tamao en torno a las 10 m; pequea vacuola
contrctil en la base del flagelo.

AMEBAS Y HELIOZOOS
Agrupa a aquellos organismos que emiten pseudpodos (proyecciones temporales del
citoplasma) y son fagtrofos. Se dividen en:
Amebas desnudas: Formas plsticas, esfricas o piriformes con un tamao de 7-50
m de largo.
Amebas con teca: Presentan un caparazn membranoso, quitinoso o con
incrustaciones. Normalmente la forma corporal es esfrica o piriforme y de mayor tamao
que las anteriores (20-150 m).
Actinpodos: Tambin llamados heliozooos. Son esfricos, con numerosas
prolongaciones radiales, largas y finas llamadas axpodos. Su nombre proviene de su
aspecto de sol. Su tamao est comprendido entre 15-200 m.
Los organismos ms comunes en lodos son:

Amebas desnudas:
* Naegleria sp.: Ameba de pequeo tamao, generalmente menor de 30 m, que
forma pseudpodos caractersticos eruptivos que surgen como hinchamiento de la parte
hialna. Se alimenta de bacterias y puede formar quistes. En ocasiones presenta una fase
flagelada temporal.
*Vahlkamphia sp.: Ameba de tamao medio (60 m) con locomocin por
pseudpodos hemisfricos que forman abultamientos en la zona anterior hialina. Pueden
formar quistes pero no presentan fase flagelada. Se alimentan de bacterias.
* Hartmanella sp.: Pequea ameba monopodial que mide de 10-35 m. El
pseudpodo anterior forma un casquete hialino visible no eruptivo. Puede presentar quistes y
se alimenta de bacterias.

Amebas testceas:
* Arcella sp.: ameba testcea, cubierta con una teca o testa de color marrn, lisa,
rgida. De naturaleza proteca en forma de casco vista de perfil. Los pseudpodos de tipo
lobpodo (en forma de dedo) salen de un oprculo redondeado central que se abre en la
parte ventral de la testa. El citoplasma, visible a travs de la testa que es transparente, no
rellena por completo el espacio. Mide entre 45-200 m.

126
Heliozoos:
* Actinophrys sp.: Cuerpo esfrico con numerosos axpodos. Ncleo central y
muchas vacuolas claramente observables. Tamao en torno a las 100 m. La mayora
planctnicos y de aguas relativamente limpias.

CILIADOS
Se trata de organismos acuticos de alimentacin fagotrofa. Sus caracteres celulares
los distinguen claramente del resto de protistas. Se caracterizan por:
1. - En algn momento de su ciclo biolgico la clula es mvil por estructuras
parecidas a pelos o cilios con igual estructura que los flagelos.
2. - Cada cilio surge de una estructura basal llamada cinetosoma que se encuentra
conectado por hileras de fibrillas llamadas cinetodesmos que son las que forman las
estructuras locomotoras.
3. - Presentan divisin celular transversal.
4. - Cada individuo tiene dos ncleos (macro y microncleo de tamao distinto).
La divisin dentro del grupo se va a realizar fundamentalmente en funcin del tipo
de locomocin que presentan:
Ciliado holotrico: nadador libre
Ciliado peritrico: ssil
Ciliado hipotrico: reptante

CILIADOS HOLOTRICOS
Agrupa a los ciliados libres. Pueden ser bacterifagos y presentan forma oval,alargada
o arrionada, con cilios normalmente en hileras y movimientos rpidos (30-100 m de
tamao) y los ciliados libres de mayor tamao (40-200 m) en forma de saco o cuello
alargado con cilios ms largos y visibles.
Los organismos ms comunes en el fango activado son las distintas especies de
Hemiophrys sp. y Litonotus sp.. Mientras que los ciliados libres bacterifagos ms comunes
son: Colpidium sp., Colpoda sp., Chilodonella sp. y Paramecium sp..

CILIADOS HIPOTRICOS
Tambin llamados reptantes por la labor de rascado que hacen sobre el flculo,
alimentndose de las bacterias que hay en su superficie. Su identificacin se hace en funcin

127
del numero de cilios especializados que presenten. Normalmente presentan una zona ventral
aplanada y la dorsal convexa, con surcos anteroposteriores.
La alimentacin se realiza mediante membranelas aborales, con las que se desplazan
sobre la superficie del flculo. Presentan gran movilidad y su tamao es muy variable.

CILIADOS PERITRICOS Y SUCTORES
Los peritricos se caracterizan por su forma de campana invertida con cilios slo en la
parte anterior, que se corresponde con la region oral.
Todos presentan un pednculo con el que se adhieren al flculo, pudiendo ser simple
(peritricos solitarios) o ramificado (peritricos coloniales). Su tamao es muy variable (70-150
m).
El estudio taxonmico se basa fundamentalmente en dos caracteres: el tamao del
peristoma o campana y el tipo de mionema que presenta el pednculo.
En los ciliados solitarios el pednculo es siempre contrctil, siendo caracterstica la
contraccin en espiral de Vorticella sp.
Es caracterstico de estos organismos su fase de vida libre o reproductora, que forma
una larva trocfora por escisin de un peristoma, que nada libremente hasta encontrar un lugar
donde las condiciones sean las adecuadas para su anclaje y crecimiento.
Los ciliados suctores estn previstos de tentculos con una masa terminal. Pueden
presentarse agrupados o esparcidos y, a diferencia de los anteriores, no presentan cilios. Su
cuerpo es piriforme, piramidal o esfrico, con un tamao de 30-70 m y generalmente estn
unidos al flculo con un pednculo no contrctil, aunque pueden tener a veces vida libre.
Los organismos ms comunes entre los solitarios son:
* Vorticella microstoma: la anchura de la boca es menor que la del cuerpo celular
* Vorticella convallarina: la anchura de la boca es igual o ms grande que el cuerpo
celular
Dentro de los organismos coloniales:
* Epistylis sp.: colonial, no contrctil, de boca grande
*Zoothamniun sp.: colonial, contrctil con myonema discontinuo (contraccin en
espiral)
Los ciliados suctores estn previstos de tentculos con una masa terminal. Pueden
presentarse agrupados o esparcidos y a diferencia con los anteriores no presentan cilios.

128
Su cuerpo es piriforme, piramidal o esfrico, con un tamao de 30-70 m y
generalmente estn unidos al flculo con un pednculo no contrctil, aunque pueden tener a
veces vida libre.
Los organismos ms comunes son Tokophrya sp. y Acineta sp.

METAZOOS
Los metazoos ms representativos en fangos activos son los Rotferos y Nematodos y
excepcionalmente los anlidos cuando las edades de fango son muy altas y por lo tanto el
fango esta muy envejecido.
Los Rotferos son organismos multicelulares con simetra bilateral, que presentan
una o dos coronas de cilios en el extremo anterior. Tronco alargado que se adelgaza,
principalmente en la porcin terminal o pie, dnde presentan normalmente una cutcula
anillada. Al final de esta estructura presenta cuatro prolongaciones terminales que actan
como rgano de fijacin. Su tamao esta generalmente comprendido entre 200-400 m de
largo.
Los nematodos son organismos vermiformes de pequeo dimetro y cilndricos que
presentan ambos extremos afilados. Su movimiento es similar a las lombrices, por serpenteo,
y su tamao muy variable. Normalmente no se identifican a nivel de especie, sino que se
cuantifica el grupo completo. En los fangos activos no realizan una labor determinante en el
proceso, salvo disgregacin flocular cuando su nmero es alto.
En el caso de la reutilizacin de las aguas residuales para riego, s es necesario
realizar una valoracin y cuantificacin de este grupo, tanto a nivel de adultos como de
huevos: La legislacin espaola (BOE 102 de 29 de abril de 2.002), marca unos criterios
mnimos para la reutilizacin del efluente de una estacin depuradora de aguas residuales en
funcin del nmero de huevos presentes de cinco familias de nematodos (Strongyloides,
Trichostrongylis, Toxocae, Enterobius y Capillaria). La limitacin general es de 1 huevo/L
salvo en el caso de riegos domiciliarios, donde se reduce su concentracin a 1 huevo/10 L
debido al carcter infectivo como parsitos patgenos que presentan.
La OMS marca tambin unas directrices epidemiolgicas para el control
microbiolgico de las aguas residuales tratadas que pueden ser reutilizadas, resultando que
para este mismo grupo, el inters se centrara en los nematodos intestinales de los gneros
Ascaris, Trichuris y Anquilostoma (OMS, 1989). Teniendo en cuenta que las directrices de
la OMS representan el mnimo nivel por encima del cual existen riesgos para la salud y que
adems se reclaman estudios epidemiolgicos para defender estas directrices de calidad

129
(Bontoux, 1997), es necesario profundizar en el estudio de los nematodos que pueden
aparecer normalmente en el agua residual.
El riego con agua residual es un factor de riesgo que aumenta la posibilidad de
transmisin de enfermedades relacionadas con las excretas. Estas aguas presentan quistes de
numerosos organismos: huevos y larvas de Helmintos, huevos, larvas y adultos de
nematodos de vida libre, etc. que representan graves riesgos para la salud y presentan la
particularidad aadida de ser organismos muy resistentes a los desinfectantes comunes
(Buitrn, 1998).
A la hora de cuantificar riesgos para la salud, el estudio de los distintos grupos de
Nematodos presentes en un agua residual tratada supone una cuestin de gran importancia y
fuente de gran informacin por su carcter patgeno, tanto para las personas como para las
plantas en el caso de los fitoparsitos.

3.4. Medios de observacin, cultivo y tratamiento de las muestras
La herramienta fundamental para el estudio de los microorganismos presentes en los
lodos la constituye el microscopio ptico, preferiblemente con contraste de fases (permite
observar estructuras menores de los organismos como cilios y flagelos). Los objetivos ms
usados son los de 10x, 40x y 100x, dejando este ltimo para observaciones especficas
(estructuras en particular). Un equipo microfotogrfico y un micrmetro completaran el
equipo de observacin.
La toma de muestras debe ser lo ms representativa posible y ha de observarse
inmediatamente, ya que el estudio de los organismos en movimiento resulta de gran ayuda
para su identificacin.
Una vez realizada esta primera observacin, la muestra puede colorearse o fijarse a
fin de prepararla para estudios posteriores.
El anlisis que realicemos podr ser simplificado, estudiando la estructura de la
microfauna funcionalmente y determinando cuales son los grupos ms abundantes, o podr
ser ms detallado, determinando las especies de ciliados que aparecen y los grupos
funcionales que los engloban. Ambos anlisis, en mayor o menor detalle, permiten obtener
una idea real de la situacin del sistema.
La observacin de la muestra in vivo debe proveernos de informacin sobre el tipo y
densidad del flculo y de los tipos de organismos representados (protozoos ciliados y
bacterias filamentosas). Ambos pueden ser estimados de forma relativa con un estudio
previo de las densidades de aparicin.
Una vez hecha la primera toma de contacto puede ser necesario (normalmente lo es
cuando el observador no es experimentado) capturar aquellos organismos que no se han

130
podido identificar y cultivarlos aparte, proporcionndoles el alimento que necesiten en el
medio de cultivo (bacterias a los ciliados bacterifagos u otros ciliados a los carnvoros).
Para el cmputo de organismos se hace necesario fijar la muestra con lquido de
Bowin, producto que crea un choque isotnico que mata al organismo, pero evita
deformaciones que impediran su identificacin. Esta fijacin permitir ms tarde realizar un
recuento exhaustivo, bien por grupos funcionales (flagelados, amebas, nadadores...) o por
especies, que nos permita obtener una cifra total del nmero de organismos presentes,
gracias a una cmara de recuento. Normalmente, la densidad total ser de 1.000.000
individuos/L si la estructura de la microfauna es correcta.
Independientemente de estos procedimientos se pueden realizar tinciones especficas
para resaltar organismos o estructuras protozoarias (captulo 1). Los ms usados son:
- Azul de metileno: Tie los organismos filamentosos y protozoos al acumularse en el
interior de las vacuolas y en la superficie.
- Solucin de Ferrona: Colorea de rojo la materia orgnica y los organismos muertos
(medio reductor) y de color verdoso los vivos (medio oxidante).
- Verde de Metilo: Colorante que se introduce en el interior de los ncleos
resaltndolos.
- Lquido de Noland: Tie estructuras flagelares.
- Tincin de Fernndez-Galiano: Pone de manifiesto los patrones de ciliacin.

3.5. Aplicaciones de la bioindicacin en la mejora del proceso depurador
El estudio de la microfauna en los fangos activos es bastante difcil. Sin embargo, el
tiempo dedicado repercutir en rendimientos mejores si al estudio de los parmetros fsico-
qumicos se le aporta el estudio biolgico, mostrando en muchos casos puntos de vista
distintos que aclararan el porqu de los fenmenos observados.
Este rendimiento se acenta si tratamos con plantas pequeas donde la analtica se
realiza de forma espordica y a nivel de control. En este caso, el operador con una rpida
observacin es capaz de apreciar los cambios que se han producido en las cubas y generar
una respuesta inmediata si fuera necesario.
Para ello, la persona experta en bioindicacin debe conocer la estructura taxonmica
y trfica de su planta a fin de poder hacer un anlisis de la dinmica de poblaciones
presentes y observar qu cambios se producen como respuesta al medio.
Si nos aproximamos por primera vez al anlisis de un fango, el estudio del nivel
trfico en que se encuentra ste nos aportar idea de la estabilidad de la comunidad
biolgica presente y de la madurez del fango, en funcin de la presencia o ausencia de los
distintos grupos de bacterias, protozoos y metazoos.

131
El estudio puede seguir una serie de pasos que se detallarn a continuacin, pero el
orden que se siga o la importancia de cada uno, va a depender del observador.
Como ya se ha comentado, el agua residual entrante viene cargada con bacterias
libres y algunos protozoos. Con el desarrollo del fango, aparecen las bacterias formadoras de
flculo, ciliados nadadores, reptantes y ssiles y se establece una masa orgnica que
permanece ms o menos constante si las condiciones no se alteran. Por lo tanto, al observar
una muestra al microscopio descubriremos que grupos son los predominantes.
Si estudiamos el entramado y estado del flculo podemos apreciar en que fase de
formacin nos encontramos, siendo los flculos de mayor tamao (3 mm) y los ms
ramificados aquellos que dominan en edades de fango de 15 das, mientras que en edades
inferiores (5 das) normalmente aparecen medidas de 50-500 m. Si la puesta en marcha ha
sido reciente el tamao del flculo es pequeo (1-2 m) (Garrido et al., 1988). Pudindose
diferenciar en:
- Fase de crecimiento: 88 m
- Fase estacionaria: 300-380 m
- Fase ptima: 1500 m
- Fase envejecimiento: ms de 1500 m
Otro parmetro muy relacionado con el tamao del flculo es la carga msica. Al
disminuir sta aumenta el tamao del flculo, obtenindose los mejores resultados
(rendimientos en torno al 90 %) con flculos cercanos a 1500 m de tamao.
Este valor es orientativo y siempre va en funcin de las caractersticas de la planta,
siendo el operador el que determine el tamao ptimo.
La estructura del flculo est muy ligada a la proliferacin de bacterias filamentosas,
mientras que determinadas condiciones pueden hacerlas ms adaptativas al medio, como por
ejemplo: los desequilibrios nutricionales (N/DBO: 0,035-0,050 y P/DBO: 0,007-0,01) o bien
defectos de oxgeno, ya que estas bacterias pueden captarlo mas rpidamente al tener ms
superficie.
Como ya se ha dicho, las bacterias filamentosas ocupan, a baja concentracin, un
papel fundamental en la formacin de un entramado adecuado para el flculo. Un
crecimiento excesivo provoca alteraciones en la relacin superficie /volumen que, o bien
hace ascender el manto de fangos, o bien provocan la disgregacin flocular y liberacin de
microflculos que enturbian el efluente.
Existe mucha bibliografa al respecto y cada bacteria se asocia a una serie de
condiciones de explotacin.
Respecto a los ciliados presentes en el fango, su estudio puede abordarse desde muy
distintos enfoques (alimentacin, reproduccin, interacciones trficas, contaminantes...), que

132
van a permitir valorar el fango en funcin de su actividad y biomasa. As por ejemplo, la
forma de alimentacin de los protozoos puede ayudarnos a estimar el tamao medio de
partculas presentes en el medio.
En general, parece que la mayor cantidad de especies se encuentra entre cargas
msicas de 0,2-0,3, presentndose con cargas mayores aumentos en el nmero de ciliados
nadadores y ssiles. Podemos establecer una relacin entre los grupos predominantes y la
carga msica o los MLSS, lo que indicara como debemos actar sobre el sistema para
mover las comunidades y optimizar el rendimiento. Sin embargo, dentro de cada grupo
existen especies que sienten predileccin por condiciones ecolgicas muy determinadas.
Por anlisis de correlaciones puede llegarse a conclusiones que relacionen
parmetros como el oxgeno y slidos en el agua de salida o materia orgnica y tiempo de
residencia con los distintos organismos encontrados en las cubas.
Concluyendo, los estudios de bioindicacin son una herramienta til en la puesta en
marcha y seguimiento de las plantas depuradoras, ya que establecen los parmetros
ecolgicos por los que se rigen las comunidades presentes y estos datos nunca sern
aportados por los parmetros fsico-qumicos.
Es muy importante el estudio a fondo del tema por parte de personas especialistas, ya
que estos anlisis sirven como base para que la bioindicacin pase por ser una ciencia de
unos pocos expertos, a ser un sistema de control de calidad en todas las estaciones
depuradoras.

3.6. Problemas ocasionados por bacterias filamentosas en el fango activo y parmetros
asociados

Bacillus sp. No causan problemas de sedimentacin de fango.
Pueden estar asociados a crecimiento disperso, provocando turbidez en
el efluente. Puede controlarse con la adicin de polmeros que fuercen
la decantacin de toda la biomasa.
Beggiatoa sp. Se asocia con condiciones de alta carga orgnica y septicidad.Abundan
en sistemas de tratamiento de cultivos fijos.
Flexibacter sp. No causan problemas de sedimentacin en el fango. Pueden estar
asociados a crecimiento disperso, provocando turbidez en el efluente.
Haliscomenobacter sp. Su abundancia se relaciona con bajos niveles de oxgeno
disuelto, baja carga msica y deficiencia de nutrientes.

133
Hongos Abundan relativamente a medidas de pH inferiores a 6,5.
Microthrix parvicella Pueden formar puentes interfloculares y causar disgregacin flocular.
Su abundancia se asocia a decantacin lenta con ndices volumtricos
mayores de 200, bajas cargas msicas, bajas concentraciones de
oxgeno disuelto e incluso bajas temperaturas. Crecen a pH>7, siendo
su ptimo a pH 8.
Nocardia sp. Su abundancia suele provocar disgregacin flocular. Presentan una
cubierta crea, pudindose formar una suspensin en medio lquido que
causa la aparicin de gruesas capas de espumas grasas de color marrn
en el sobrenadante del clarificado. Atrapan burbujas de aire. Su
abundancia se suele asociar con bajas cargas msicas, alta edad del
fango y altas temperaturas.
Nostocoida limicola Se asocian con bajos valores de carga msica. Su crecimiento y
proliferacin se puede ver incrementado en condiciones de bajas
concentraciones de oxgeno disuelto. El esponjamiento o bulking
filamentoso causado por estos microorganismos se da con frecuencia en
plantas de residuos industriales.
Sphaerotilus natans Normalmente forman enlaces o puentes interfloculares que impiden la
correcta agregacin flocular. Su abundancia produce ndices
volumtricos del fango bastante elevados (>300 mL/g), si bien se
obtienen clarificados de muy buena calidad, exentos de turbiedad y
partculas en suspensin.
Su proliferacin se relaciona con bajas concentraciones de oxgeno
disuelto, y al ser capaces de acumular grnulos de grasa en gran
cantidad, soportan bien alternancias de carga.
Streptococcus sp. Se presentan libres. No tienen incidencia sobre el flculo, pero s sobre
la turbidez del efluente.
Thiothrix sp. Su abundancia da lugar a la formacin de enlaces o puentes
interfloculares. Suelen proliferar en condiciones spticas, con influentes
ricos en sulfuros y cidos orgnicos, as como en condiciones de
deficiencia de nitrgeno. Su capacidad de obtener energa para su
crecimiento a partir de la oxidacin de compuestos orgnicos reducidos
de azufre, le proporciona una ventaja competitiva con respecto a las
bacterias estrictamente hetertrofas como son las formadoras de
flculo.
Tipo 0041 Su abundancia puede provocar disgregacin flocular, si se sitan en el
interior del flculo (aguas residuales de origen urbano); o formar
enlaces o puentes interfloculares, si se proyectan desde el flculo hacia

134
el exterior (ante la presencia frecuente de influentes de origen
industrial, no presentan crecimiento epiftico).
Su bulking solo se da en tratamientos de aguas residuales urbanas que
operan con edades de fango altas (10-40 das) con bajas cargas msicas.
En tratamientos de aguas de origen industrial, favorece su crecimiento
la deficiencia de nutrientes (N y P).
Tipo 0092 Su abundancia suele provocar disgregacin flocular. Se asocia a
situaciones de baja carga msica y altas edades de fango.
Tipo 0211 No suelen producir problemas de decantacin del fango, pero causan
crecimiento disperso, lo que enturbia el efluente, especialmente en
tratamientos de aguas residuales de origen industrial.
Tipo 021 N Su proliferacin provoca serios problemas de bulking filamentoso; Son
los responsables de elevados ndices volumtricos (>500), aunque
producen clarificados bastante limpios. Debido a su estructura robusta,
gran longitud y a la capacidad de crecer en periodos cortos de tiempo
(pocos das), se relacionan con:
- Aguas residuales spticas o con importantes cantidades de sulfuros
y/o cidos orgnicos.
- Tratamiento de residuos industriales deficientes en nitrgeno (solos o
con aguas residuales urbanas).
- Carga msica baja cuando el agua residual contiene cantidades
apreciables de azcares o cidos orgnicos fcilmente utilizables.
Tipo 0411 No suelen producir problemas de decantacin en el fango, pero causan
crecimiento disperso, enturbiando el efluente (sobre todo en aguas
residuales industriales).
Tipo 0675 Su abundancia puede provocar disgregacin flocular (si se presenta en
el interior del flculo; aguas residuales urbanas) o formacin de puentes
interfloculares (si se proyectan desde la superficie del flculo; aguas
residuales industriales).
Provocan bulking en tratamiento de aguas residuales urbanas que
operan con edades de fango altas (10-40 das) con bajas cargas msicas.
En tratamientos de aguas residuales industriales puede favorecer su
crecimiento, la deficiencia de nutrientes (N y P).
Tipo 0803 Si se proyectan desde la superficie del flculo pueden provocar
disgregacin flocular (forman enlaces o puentes interfloculares). Su
abundancia se suele asociar a condiciones bajas de carga msica.

135
Tipo 0961 Su proliferacin interfiere en la compactacin y decantacin del fango
debido a la formacin de puentes interfloculares. Suelen aparecer en
sistemas que operan en condiciones de baja carga msica.
Tipo 1701 Pueden formar enlaces o puentes interfloculares que provocan la
disgregacin flocular, originando una estructura abierta o difusa en el
flculo, como consecuencia de que las bacterias formadoras de flculos
se adhieren al filamento y crecen alrededor de ellos.
En general, su proliferacin se asocia con bajos niveles de oxgeno
disuelto.
Tipo 1851 Su proliferacin puede provocar enlaces o puentes interfloculares. Su
masivo crecimiento se asocia con situaciones de operacin de baja
carga msica.
Tipo 1852 Causan fenmenos de crecimiento disperso, pudiendo contribuir a
enturbiar el efluente, especialmente en sistemas de tratamiento de aguas
residuales de origen industrial.
Tipo 1863 Su proliferacin masiva enturbia el clarificado, ya que no acompaa a
los flculos en la decantacin.
Se observan normalmente en situaciones de bajas concentraciones de
oxgeno disuelto y aparecen en grandes densidades en el licor mezcla
cuando se practican cloraciones peridicas con el fin de disminuir el
ndice volumtrico de fangos (IVF).

3.7. Protozoos asociados a distintas circunstancias en la cuba de aireacin
En relacin con la evolucin en el tiempo de las poblaciones de flagelados, ciliados
reptante y fijos, se observa una relacin positiva entre el proceso de estabilizacin del fango y
el desarrollo de los ciliados fijos y reptantes. Esta relacin es inversa en el caso de los
flagelados. En general:
Colonizacin: Multitud de flagelados, ciliados nadadores libres, consumidores de
bacterias dispersas y materia orgnica; Peranema trichophorum, Bodo sp., telotrocos,
Tetrahymena sp.
Fango joven: Disminucin de flagelados y ciliados nadadores libres, aparicin de fase
de dispersin de ciliados peritricos fijos en flculos; Vorticella microstoma, Uronema
sp., telotrocos, Peranema trichophorum.
Fango maduro: Ciliados peritricos y ciliados hipotricos reptantes, insertos en los
flculos regulando las bacterias dispersas y floculantes; Ameboides desnudos,

136
Aspidisca cicada, Zoothamnium simplex, Vorticella elongata, Zoogloea ramigera,
Vorticella sepulcreti, Arcella hemispharica, Acineta cuspidata.
Fangos viejos: Presencia masiva de organismos pluricelulares del tipo metano;
Rotferos y Nematodos.

Otras circunstancias:
1.- Fangos inestables (purgas intermitentes): menor presencia de protozoos caractersticos
de fangos estables, abundancia de flagelados y ciliados nadadores libres.
2.- Fangos gelatinosos: Alta proporcin de material extracelular (glycolax). Se hace
apreciable utilizando el test correspondiente.
3.- A medida que el fango biolgico comienza a desarrollarse, aparecen, junto con los
fenmenos de floculacin, los ciliados nadadores del tipo Tetrahymena sp. y Uronema sp.,
caractersticos de fenmenos transitorios en el proceso de estabilizacin del fango activo.
4.- El ciliado reptante Aspidisca cicada es caracterstico de cubas de aireacin con buen
rendimiento depurador en procesos de baja y media carga, como es el caso de la aireacin
prolongada.
5.- Entre los ciliados fijos, Vorticella microstoma es caracterstica de situaciones
transitorias en los procesos de fangos activos, as como de situaciones de baja concentracin
de oxgeno y acmulo de sustancias txicas en el medio. Es habitual durante las primeras
fases de colonizacin de los lodos. En el reactor biolgico aparece al principio de la
colonizacin del fango biolgico, siendo despus sustituida por Vorticella sepulcreti y V.
elongata, una vez que el fango se encuentra ms estabilizado.
6.- Las amebas aparecen asociadas a fenmenos de anaerobiosis y son indicativas de
rendimientos pobres con procesos de alta carga.
7.- Litonotus sp. es caracterstico a concentraciones de oxgeno de ms de 1 ppm.
8.- Paramecium sp. es caracterstico de fangos mal oxigenados.
9.- Colpoda sp. es caracterstico de fangos con poca concentracin de oxgeno y elevada
en amonio.
10.- Opercularia sp. aparece asociada a aguas industriales.
11.- Amphileptus sp. se asocia a altas concentraciones de oxgeno.
12.- Los heliozoos aparecen en aguas relativamente limpias.
13.- Los nematodos son caractersticos de altas tiempos de retencin.
14.- Los rotferos indican la estabilidad del sistema biolgico cuando aparecen a bajas
concentraciones. En general son indicativos de fangos bien floculados y oxigenados.

137
15.- Los ciliados reptantes dominan conjuntamente con los ciliados fijos, cuando se
utilizan cargas msicas comprendidas entre 0,2 y 0,4. Cuando la carga msica va aumentando
progresivamente (hasta 0,6), los ciliados reptantes desaparecen. Este grupo mantiene una
relacin con el IVF, de forma que si el valor de este ndice es inferior a 200, los ciliados
reptantes se desarrollan adecuadamente y si es superior a 400 es ms difcil su desarrollo.
16.- Con respecto a los ciliados fijos, cuando el fango tiene buena actividad biolgica,
dominan conjuntamente con los reptantes debido a sus diferentes hbitos alimenticios. Si se
producen situaciones de variaciones en la entrada de carga o de extracciones fuertes de lodos,
los reptantes disminuyen pudiendo aumentar el nmero de ciliados fijos.
En cuanto a la relacin con la carga msica, este grupo suele dominar entre cargas de 0,3-
0,6 , codominando con los flagelados cuando la carga es superior a 0,6.
Se ha podido observar que cuando la relacin entre los ciliados reptantes y los ciliados
fijos es superior a 0.5, se obtiene una mejora considerable en la calidad del efluente.
Existen, sin embargo, dos tipos de ciliados fijos que no pueden ser tratados de la misma
forma: Vorticella microstoma y Opercularia. Ambos se desarrollan masivamente cuando hay
defecto de oxgeno en las cubas o cuando existen entradas de vertidos industriales.
17.- Los ciliados nadadores libres, se dan al principio de la colonizacin de los fangos,
siendo sustituidos posteriormente por los ciliados fijos y reptantes. Si aparecen en poblaciones
bien desarrolladas cuando el fango se encuentra estabilizado, nos indican falta de oxgeno, as
como la existencia de una carga elevada, codominando con los flagelados cuando la carga
msica se sita entre 0,6 y 0,9.
18.- Con relacin al comportamiento de los flagelados, se suelen desarrollar cuando las
bacterias formadoras de flculos son escasas, lo que implica un fango joven o en periodo
transitorio por sobrecarga de entrada, insuficiente aireacin o entradas de materias
fermentativas en el reactor.
19.- Las amebas testceas (Arcella sp., Difflugia sp. y Euglypha sp.) aparecen en lodos
con baja carga y con procesos de nitrificacin y buena oxigenacin. Su nmero aumenta con
la temperatura y con IVF bajos.

Otras generalidades respecto a los grupos dominantes
*Densidad: Densidades de la microfauna elevadas (>10
6
) son adecuadas y normalmente estn
asociadas a ciliados reptantes y ssiles. Escasa presencia de flagelados.
*Pequeos flagelados (<10 m; Tipo Bodo):
- Puesta en marcha; primeras fases (fango activo en formacin)
- Fango bien formado en el que se da un mal funcionamiento debido a:

138
Poco oxgeno
Carga elevada
Aporte de sustancias fermentadas
*Flagelados grandes (>50 m; Tipo Euglena): No suelen ser dominantes y estn asociados a
afluentes con poca carga orgnica.
*Pequeos ciliados nadadores bacteriofagos (>50 m): Su presencia coincide con la de los
flagelados e indican:
- Fango en vas de formacin
- Poco oxgeno
- Tiempo de retencin del agua y el fango bajo
*Grandes ciliados nadadores bacterifagos (>50 m): Fango joven, cargas elevadas.
*Ciliado reptantes: Si su presencia esta asociada con ssiles indican fango bien formado.
*Ciliados ssiles: Dominan en fenmenos transitorios como extraccin reciente de fango a
carga discontinua.
*Suctores (depredadores de ciliados): Tiempo de permanencia del fango alto.
*Amebas con teca: Baja carga, tiempo de retencin largo y buena nitrificacin.
*Pequeas amebas: Si su presencia esta asociada a flagelados indican mala depuracin, la
carga en general es alta y poco biodegradable.
*Pequeos metazoos: Excesivo tiempo de permanencia en la balsa cuando proliferan o carga
dbil del afluente si dominan rotferos.

Bibliografa
Al-Shahwani, S. M. y Horan, N. J. (1991). The use of protozoa to indicate changes in the
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producido por microorganismos filamentosos. Curso Microorganismos Filamentosos en el
fango activo. EMASESA, Departamento de Aguas Residuales (1997).

140
ANEXO: RECOPILACIN DE IMGENES
FOTOGRFICAS. PROTOZOOS EN EL FANGO
ACTIVO.

Imgenes fotogrficas de protozoos observados frecuentemente en el fango activo.

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