Tema 9 Linfocitos T

LINFOCITOS T. Receptores, correceptores y maduracin de linfocitos T. RESPUESTA INMUNITARIA CELULAR Prof.
Nereida Valero
1
y Prof. Mara Giuffrida
2
. 1. Instituto de Investigaciones Clnicas. Facultad de Medicina. LUZ. Ctedra de Inmunologa.
Escuela de Medicina. Dpto. Ciencias Fisiolgicas. Facultad de Medicina. LUZ. 2009.
1
UNIVERSIDAD DEL ZULIA
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE MEDICINA
DEPARTAMETO DE CIENCIAS FISIOLGICAS
CTEDRA DE INMUNOLOGA

RECEPTORES, MOLCULAS ACCESORIAS, CORRECEPTORES Y
MADURACIN DE LINFOCITOS T

OBJETIVOS ESPECIFICOS:
1. El presente material tiene como objetivo proporcionar en forma resumida las
caractersticas estructurales ms resaltantes de los receptores de los linfocitos
T.
2. Conocer y caracterizar las molculas accesorias que actan como
correceptores y coestimuladores en los linfocitos T maduros.
3. Estudiar los estadios de maduracin de los linfocitos T, y determinar la fase en
la cual adquieren su competencia inmunolgica.

CONTENIDO

GENERALIDADES ........................................................................................................... 2
1. RECEPTOR DE CLULAS T ....................................................................................... 2
a. ESTRUCTURA DEL COMPLEJ O TCR................................................................... 3
b. MOLCULAS ACCESORIAS Y COESTIMULADORES IMPLICADOS EN LA
ACTIVACIN DE LAS CLULAS T RESTRINGIDAS POR EL MHC..................... 4
2. MADURACIN DE LOS LINFOCITOS ...................................................................... 8
- Estadios de maduracin de las clulas T.................................................................. 9
3. PROCESO DE SELECCIN DE LOS LINFOCITOS ................................................... 11
a. Seleccin de clulas T............................................................................................. 11
4. INMUNIDAD MEDIADA POR CLULAS...................................................................... 13
4.1. INMUNIDAD MEDIADA POR CLULAS FAGOCTICAS .................................... 14
Fagocitosis y mecanismos matadores.................................................................. 15
a. Mecanismos dependientes de oxgeno........................................................... 15
b. Mecanismos independientes de oxgeno ........................................................ 16
c. Activacin de macrfagos................................................................................ 17
5. PAPEL DE LAS CLULAS T COADYUVANTES O COLABORADORAS (Th)............ 18
6. CITOTOXICIDAD MEDIADA POR CLULAS.............................................................. 20
a. Citotoxicidad directa especfica............................................................................... 21
b. Citotoxicidad directa inespecfica mediada por NK ................................................. 24
c. Citotocicidad celular dependiente de anticuerpos (CCDA)...................................... 25
7. RESPUESTA DE HIPERSENSIBILIDAD DE TIPO RETARDADO.............................. 25
BIBLIOGRAFA .................................................................................................... 29

GENERALIDADES

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Los linfocitos son las nicas clulas del cuerpo que expresan receptores para el
Ag de gran diversidad capaces de reconocer una enorme variedad de sustancias
extraas. Esta diversidad se genera durante el desarrollo de los linfocitos B y T
maduros a partir de precursores que no expresan receptores para el Ag y que no son
capaces de reconocer y de responder a los Ags.

1. RECEPTOR DE CLULAS T.

Los linfocitos T responden a fragmentos peptdicos de Ag proteicos mostrados
por las clulas presentadoras de Ag (CPA), la iniciacin de estas respuestas requiere
de reconocimiento especfico del antgeno por las clulas T a la CPA y la
transduccin de seales de activacin a la clula T. Cada uno de estos
acontecimientos est mediado por diferentes conjuntos de molculas presentes en
las clulas T (Figura 1).

Figura 1. Receptores y molculas accesorias de las clulas T.

Los linfocitos T tienen una especificidad doble: reconocen residuos polimorfos
de molculas del complejo principal de histocompatibilidad (MHC, del ingls major
histocompatibility complex) propio, lo cual es responsable de su restriccin por el
MHC, y reconocen los residuos de antgenos peptdicos mostrados por estas
molculas MHC, los cuales son responsables de su especificidad (Figura 2).

Figura 2. Reconocimiento del fragmento peptdico del MHC
de las CPA por el receptor de linfocitos T.
Receptor T (TCR): Receptor de membrana de los linfocitos T que reconoce en
forma especfica pptidos asociados a receptores de membrana (molculas del
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MHC) de otras clulas propias. Esta interaccin especfica interviene en la activacin
del linfocito T y/o la clula presentadora, o convierte a la clula que presenta el
pptido en blanco de las acciones efectoras del linfocito T. Hay dos tipos de TCR,
alfa/beta o gama/delta.
El receptor TCR (del ingls T cell receptor), es un receptor de distribucin
clonal, lo que significa que clones de clulas T con diferentes especificidades
expresan TCR diferentes. Las seales bioqumicas desencadenadas en las clulas
T por el reconocimiento del Ag no son transducidas por el propio TCR, sino por
protenas invariables denominadas CD3 y que se unen por enlaces no covalentes
al receptor del Ag para formar el complejo TCR.

a. ESTRUCTURA DEL COMPLEJO TCR

El receptor antignico de las clulas T colaboradoras CD4
+
y de los linfocitos T
citolticos CD8
+
restringidos por el MHC, es un heterodmero que est formado por
dos cadenas polipeptdicas transmembrana, denominadas y , unidas
covalentemente entre s mediante puentes disulfuro. Cada cadena y consta de
un dominio variable (V) N-terminal, un dominio constante (C) similar al de las Ig, una
regin transmembrana hidrfoba y una regin citoplsmica corta (figura 3).

Figura 3. Componentes del complejo TCR

Las regiones V de las cadenas y del TCR contienen tramos cortos de
secuencias en los que se concentra la variabilidad entre los diferentes TCR y que
forman las regiones determinantes de la complementariedad (CDR, del ingls
complementarity-determining regions) o hipervariables. Tres CDR de la cadena se
encuentran en yuxtaposicin a tres regiones similares de la cadena formando parte
del TCR que reconoce especficamente los complejos pptido-molculas del MHC.
El dominio V de la cadena contiene una cuarta regin hipervariable que no parece

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participar en el reconocimiento del antgeno, pero que es el sitio de unin para
productos microbianos denominados superantgenos.
Las regiones C de las cadenas y se continan en regiones bisagra cortas,
que contienen residuos de cistena que contribuyen a un puente disulfuro que une las
dos cadenas. La bisagra se contina en las porciones transmembrana hidrfobas,
de las cuales una caracterstica inslita es la presencia de residuos aminocidos
cargados positivamente, entre ellos un residuo de lisina (en la cadena ) y uno de
lisina y arginina (en la cadena ). Estos residuos interaccionan con residuos
cargados negativamente de las porciones transmembrana de los otros polipptidos
(CD3 y ) que forman el complejo TCR. Las cadenas y poseen colas
citoplsmicas carboxi terminales que son demasiado pequeas para transducir
seales.
Las molculas de TCR y las Ig son estructuralmente similares, pero el TCR no
es secretado, una vez unido al pptido-molcula MHC, pone en marcha seales que
activan las funciones efectoras de la clula T.
Las protenas CD3 y se asocian no covalentemente al heterodmero del
TCR, y cuando el TCR reconoce el antgeno, las protenas asociadas transducen las
seales que dan lugar a la activacin de las clulas T. El CD3 est constituido por
tres protenas designadas como , y . La cadena es un homodmero unido por
un puente disulfuro. Las protenas CD3 y son idnticas en todas las clulas T con
independencia de su especificidad, lo que sugiere que intervienen en la sealizacin
y no en el reconocimiento del antgeno.

b. MOLCULAS ACCESORIAS Y COESTIMULADORES IMPLICADOS EN LA
ACTIVACION DE LAS CLULAS T RESRINGIDAS POR EL MHC

Las clula T tambin expresan otros receptores de membrana que no
reconocen el antgeno, pero que participan en las respuestas a los antgenos, estos
receptores reciben en conjunto el nombre de molculas accesorias (Figura 1). El
papel de estas molculas accesorias es proporcionar seales a la clula T que
actan en concierto con seales procedentes del complejo TCR para activar
plenamente las clulas. Otras molculas accesorias actan como molculas de
adhesin para estabilizar la unin de las clulas T a las CPA, permitiendo as el
acoplamiento del TCR al antgeno durante el tiempo suficiente para la transduccin
de las seales necesarias. Las molculas de adhesin tambin regulan la migracin
de las clulas T a los lugares donde localizan y responden a antgenos. Las
molculas accesorias de las clulas T tambin son marcadores tiles de la superficie
celular que facilitan la identificacin de las clulas T en tejidos normales y en lesiones
patolgicas tales como tumores de clulas T y enfermedades inflamatorias.
Entre estas molculas accesorias se puede mencionar a las protenas CD4,
CD8, CD2, CD45, CD28, CTLA-4, CD40L, Fas ligando, integrinas, selectinas, etc.
Las protenas CD4 y CD8 son glucoprotenas transmembrana miembros de la
superfamilia de las Ig que poseen funciones similares pero estructuras diferentes.
Ambas protenas se unen a regiones no polimrficas de las molculas del MHC y
transducen seales transmitidas a travs del complejo TCR, e inician la activacin de
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las clulas T. Las clulas T maduras expresan CD4 o CD8 pero no ambas. Estas
dos protenas interaccionan con molculas del MHC en el momento en el que los
receptores del antgeno de las clulas T reconocen especficamente complejos
pptido-MHC presentes en las CPA. Entre una de las funciones del CD4 y el CD8
est el de reforzar la unin de las clulas T a las CPA. Debido a que ambas
protenas actan en el reconocimiento de molculas de MHC y en la activacin de
clulas T, a menudo reciben el nombre de correceptores (Figura 4).

Figura 4. Correceptores, molculas accesorias y coestimuladores de los
linfocitos T.

La unin selectiva de CD4 a las molculas de clase II del MHC y de CD8 a las
molculas de clase I del MHC garantiza que las clulas T CD4
+
reconozcan y
respondan a los antgenos peptdicos asociados a molculas de clase II y que las
clulas T CD8
+
respondan a pptidos asociados a molculas de clase I.
CD4 y CD8 tienen entonces dos funciones esenciales, 1.) Participan en los
acontecimientos tempranos de transduccin de seales que tienen lugar tras el
reconocimiento por las clulas T de los complejos pptido-molcula MHC
presentados por las CPA; y, 2.) Favorecen la adhesin de clulas T restringidas por
el MHC a las CPA o clulas diana que expresan complejos pptido-molcula MHC.
Adems de sus papeles fisiolgicos, el CD4 es un receptor para el virus de
inmunodeficiencia humana.
La CD2 es una glicoprotena presente en ms del 90% de las clulas T
maduras, en el 50 al 70% de los timocitos y en las clulas NK. El principal ligando de
las CD2 en el ser humano es una molcula denominada antgeno asociado a la
funcin del leucocito 3 (LFA-3, del ingls leucocyte function-associated antigen-3 o
CD58), miembro de la familia de las Ig. LFA-3 se expresa en una amplia variedad de
clulas hematopoyticas y no hematopoyticas, bien como protena integral de
membrana o bien como molcula de superficie anclada a fosfatidilinositol. El CD2
tiene funcin de adhesin intercelular y de transduccin de seales.
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El CD45 es una glucoprotena de la superficie celular. Varias formas de CD45
se expresan en leucocitos inmaduros y maduros, tales como clulas T y B, timocitos,
fagocitos mononucleares y leucocitos polimorfonucleares. Las isoformas de
protenas CD45 que son expresadas por un grupo restringido de tipos celulares se
designan como CD45R. La mayora de las clulas T vrgenes humanas expresan
una forma de CD45R llamada CD45RA, mientras que las clulas T de memoria
expresan una isoforma diferente denominada CD45R0. Ratones con inhibicin
gnica selectiva del gen CD45 muestran un bloqueo en la maduracin de las clulas
T y defectos en la activacin de las clulas B y de los mastocitos, cuyos mecanismos
no estn definidos.
Una propiedad general de los linfocitos T y B vrgenes es la necesidad de dos
seales extracelulares distintas para iniciar la proliferacin y diferenciacin de las
clulas T, una la proporciona la unin del antgeno al receptor del antgeno, y es
responsable de garantizar la especificidad de la respuesta inmunitaria subsiguiente.
En el caso de las clulas T, la unin del complejos pptidomolculas MHC al TCR
proporcionan la primera seal. La segunda seal requerida es proporcionada por
molculas presentes en las CPA, como son los coestimuladores, denominados as
debido a que actan conjuntamente con el antgeno para estimular a las clulas T.
En ausencia de coestimulacin, las clulas T que se encuentran con antgenos no
responden, y mueren por apoptosis o entran en un estadio de falta de respuesta que
recibe el nombre de anergia.
Los coestimuladores mejor definidos para los linfocitos T son un par de
protenas relacionadas, B7-1 (CD80) y B7-2 (CD86), que se expresan en la CPA
profesionales. Estos coestimuladores B7 presentes en las CPA son reconocidos por
receptores especficos de las clulas T. El primero de estos receptores para B7 que
fue descubierto fue la molcula CD28. El CD28 es una protena de membrana que
transduce seales que actan junto con las seales transmitidas por el complejo
TCR para activar a clulas T vrgenes. El CD28 se expresa en ms del 90% de las
clulas T CD4
+
y en el 50% de las clulas T CD8
+
. La unin de molculas B7
presentes en las CPA a CD28 proporciona seales a las clulas T que inducen la
expresin de protenas antiapoptticas, estimulan la produccin de factores de
crecimiento y otras citoquinas, e inducen proliferacin y diferenciacin de las clulas
T.
Las clulas T activadas expresan otra molcula de superficie, la CTLA-4, que es
homloga a la CD28 y se une a las molculas B7-1 y B7-2 pero que, a diferencia de
la CD28, transmite seales que inhiben la activacin de la clula T, la CTLA-4 puede
desempear un papel en la terminacin de las respuestas de clulas T en la
autotolerancia. La CTLA-4 se expresa en clulas T CD4
+
y CD8
+
activadas y su
funcin es inhibir la activacin de las clulas T al contrarrestar las seales
proporcionadas por CD28.
El CD2 tambin puede proporcionar seales coestimuladoras, esta es una
protena de la superficie de la clula T que, como se dijo anteriormente, reconoce a
su ligando LFA-3 (CD58) en las CPA y que, y al igual que el CD28, potencia las
respuestas de las clulas T a los antgenos, el CD2 puede compensar la ausencia de
CD28.
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Los linfocitos T expresan otras muchas molculas que estn implicadas en sus
funciones efectoras y en su regulacin. Las clulas T CD4
+
activadas expresan una
protena de superficie denominada ligando de CD40 (CD40L), que se une a la
molcula CD40 de los linfocitos B, macrfagos, clulas dendrticas y clulas
epiteliales. La interaccin del CD40L presente en las clulas T con la molcula
CD40 de las CPA potencia la activacin de la clula T (figura 5). El CD40L es un
mediador importante de muchas de las funciones efectoras de las clulas T
colaboradoras, como la estimulacin de las clulas B para producir Ac y la activacin
de macrfagos para destruir microorganismos fagocitados. El mecanismo probable
de este efecto es que la activacin del CD40 en la CPA activa a la CPA para que
aumente su expresin de molculas B7 y para que secrete citoquinas como la IL-2
que promueven la diferenciacin de las clulas T. Por consiguiente, la va del CD40
amplifica indirectamente las respuestas de clulas T y probablemente no acte como
va coestimuladora por s misma.

Las clulas T reconocen al Ag
(con o sin coestimuladores
B7)
Las clulas T activadas
expresan CD40L, que se une
al CD40 de las CPA
Las clulas T expresan ms
B7 y secretan citoquinas
activadoras de clulas T

Figura 5. Papel de la CD40 en la activacin el linfocito T.

Las clulas T activadas tambin expresan un ligando para el receptor Fas
(CD95) inductor de la apoptosis. La unin del ligando de Fas de las clulas T al
receptor Fas causa apoptosis y es importante para la eliminacin de las clulas T
estimuladas reiteradamente por antgenos. El ligando Fas tambin proporciona uno
de los mecanismos por los que los CTL destruyen sus clulas diana.
Existen algunas molculas accesorias de las clulas T que actan como
molculas de adhesin intercelular y desempean funciones importantes en las
interacciones de las clulas T con las CPA y en la migracin de las clulas T a focos
de infeccin e inflamacin. Entre ellas tenemos a miembros de la familia de las
integrinas, como la integrina 1, tambin conocida como VLA (del ingls very late
activacion, activacin muy tarda), y la integrina 2, habitualmente denominada LFA-
1 (conocida como CD11aCD18). La LFA-1 es expresada por ms del 90% de los
timocitos y clulas T maduras, clulas B, granulocitos y monocitos. Un ligando
especfico para LFA-1 es la molcula de adhesin intercelular 1 (ICAM-1, del ingls
intercellular adhesin molecule-1, o CD54), protena de membrana que se expresa
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en diversas clulas hematopoyticas y no hematopoyticas, tales como clulas B y
T, fibroblastos, queratinocitos y clulas endoteliales. Otros dos ligados para LFA-1
son el ICAM-2, que se expresa en clulas endoteliales e ICAM-3 que se expresa en
linfocitos. La VLA-4 se una a una protena llamada molcula de adhesin a la clula
vascular 1 (VCAM-1 del ingls vascular intercellular adhesin molecule-1) que se
expresa en clulas endoteliales activadas por citoquinas.
La funcin ms importante de las integrinas de las clulas T son: la mediacin
en la adhesin a las CPA, a las clulas endoteliales y a las protenas de la matriz
extracelular.
Las selectinas son protenas de unin a hidratos de carbono presente en los
leucocitos, clulas endoteliales y plaquetas, cuya funcin principal es regular la
migracin de los leucocitos a diversos tejidos. La selectina leucocitaria denominada
selectina L, se expresa considerablemente en linfocitos T vrgenes, mientras que
est reducida su expresin en clulas T activadas. Por tanto, la selectina L media la
migracin de clulas T vrgenes hacia los ganglios linfticos, donde se concentran los
antgenos y se inician las respuestas inmunitarias.

2. MADURACIN DE LOS LINFOCITOS

El proceso por el que los progenitores de los linfocitos derivados de la mdula
sea se transforman en linfocitos maduros que pueblan los tejidos linfoides
perifricos recibe el nombre de maduracin de los linfocitos. Durante la
maduracin, un programa estrechamente regulado de expresin gnica secuencial
provoca cambios en los fenotipos de las clulas en desarrollo, asociadas a la
generacin de un repertorio de gran diversidad, la adquisicin de competencia
funcional y de acontecimientos de seleccin que garantizan que la mayora de los
linfocitos que acceden a los tejidos linfoides perifricos sean de utilidad, es decir,
respondan a Ag extraos, pero no a muchos autoantgenos. La expresin de los
genes que codifican al receptor para el antgeno constituye la caracterstica
fundamental de todos estos acontecimientos madurativos, y existen muchas
similitudes bsicas en los procesos por los cuales las clulas B adquieren la
capacidad de expresar los genes de las Ig y las clulas T adquieren la capacidad de
expresar los genes de receptor de clulas T (TCR).
Los precursores de los linfocitos se originan en la mdula sea a partir de las
mismas clulas madre pluripotenciales que dan origen a otras clulas sanguneas.
Las fases iniciales de la maduracin de los linfocitos B y T se caracteriza por una
elevada actividad mittica que tiene como consecuencia un aumento marcado del
nmero de clulas. La principal citoquina que estimula la proliferacin de los
progenitores de las clulas B y T en ratones es la interleuquina-7 (IL-7). El conjunto
de receptores para el Ag, y por tanto, el conjunto de especificidades que se expresan
en los linfocitos B y T forma el repertorio de linfocitos. La expresin de genes de
receptor para el antgeno es el acontecimiento clave de la maduracin de los
linfocitos necesario para la generacin de un repertorio diverso y para los procesos
que garantizan la supervivencia selectiva de los linfocitos dotados de especificidades
tiles.
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Una vez que los linfocitos inmaduros expresan el receptor para el antgeno, las
clulas tiles se conservan, y se eliminan muchas clulas potencialmente nocivas
(capaces de reaccionar con autoantgenos) mediante procesos de seleccin
inducidos por la activacin del receptor para el antgeno.
Durante las ltimas fases del proceso de maduracin, los linfocitos adquieren la
capacidad de generar mecanismos efectores que permiten eliminar antgenos. El
resultado neto es que los linfocitos maduros son capaces de integrar eficazmente
diversas seales procedentes de antgenos, citoquinas y ligandos en la superficie de
otras clulas de tal forma que se produce una actividad efectora dirigida y regulada.

Estadios de maduracin de las clulas T.

Los linfocitos T se originan a partir de clulas madre precursoras
hematopoyticas que se generan en el hgado fetal y en la mdula sea adulta. Los
precursores de los linfocitos T abandonan la mdula sea y circulan hasta el timo, el
timo es el principal sitio de maduracin de las clulas T. Este rgano proporciona
estmulos para la proliferacin y maduracin de los timocitos.
Existen dos tipos de molculas producidas por clulas tmicas no linfoides que
intervienen en la maduracin de las clulas T, las primeras son las molculas de
MHC (expresada por macrfagos, clulas epiteliales, clulas dendrticas) estas
molculas son esenciales para la seleccin del repertorio de clulas T maduras; el
segundo tipo de molculas son las citoquinas, secretadas por las clulas del estroma
del timo (clulas epiteliales), la citoquina mejor definida es la IL-7.
La maduracin de las clulas T tiene lugar en estadios secuenciales que se
definen ms adecuadamente por la expresin del TCR y de los correceptores CD4 y
CD8. Los timocitos corticales ms inmaduros, recin llegados de la mdula sea, no
expresan TCR, CD3, cadena , ni CD4 o CD8, y reciben el nombre de timocitos
doblemente negativos. El estadio se conoce tambin como estadio de clulas
pro-T. El siguiente estadio de maduracin de las clulas T se denomina estadio de
clulas pre-T. El estadio pre-T de esta estirpe se caracteriza por la expresin de la
cadena del TCR, que se encuentra en bajos niveles en la superficie celular
asociada a una protena invariable denominada pre T y con CD3 y protenas
formando el complejo receptor de la clula pre-T, se cree que la funcin de este
complejo en el desarrollo de las clulas T es similar al del receptor de la clula B, y
es esencial para la proliferacin y maduracin adicional de las clulas doblemente
negativas. En el siguiente estadio de maduracin, los timocitos expresan tanto CD4
como CD8 y reciben el nombre de timocitos doblemente positivos. La expresin del
CD4 y del CD8 es esencial para los acontecimientos de seleccin. La expresin del
gen del TCR ocurre en el estadio doblemente positivo, y esto lleva a la formacin
del TCR completos, que se expresa en la superficie celular en asociacin con
CD3 y . Gracias a la expresin de complejos TCR completos, las clulas
doblemente positivas adquieren capacidad de respuesta al antgeno y son objeto de
seleccin positiva y negativa. Las clulas que superan con xito estos procesos de
seleccin maduran a clulas TCD4
+
o TCD8
+
maduras, que reciben el nombre de
timocitos de una sola positividad.
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Las clulas TCD4
+
son las precursoras de las clulas T colaboradoras, cuyas
principales funciones efectoras estn mediadas por la produccin de citoquinas en
respuesta a la estimulacin antignica. Las clulas TCD8
+
son las precursoras de
los linfocitos T citolticos, y la principal funcin efectora consiste en lisar clulas diana
infectadas. Los timocitos maduros de una sola positividad entran en la mdula tmica
y a continuacin abandonan el timo para poblar los tejidos linfoides perifricos (Ver
figura 6 y 7 a continuacin).

Figura 6. Estadios de maduracin de las clulas T. Desde la clula madre de la
mdula sea hasta el linfocito T maduro.

Estadio de
maduracin
Clula madre Pro-T Pre-T Doblemente
positivo
Clula
inmadura con
una sola
positividad
Clula T madura
no estimulada
Marcadores
de superficie
CD44
+
CD25
CD44
+
CD25
+
CD44

CD25
+
TCR
CD4
+
CD8
+
TCR/CD3
CD4
+
CD8
o
CD4
-
CD8
+
TCR/CD3
CD4
+
CD8
o
CD4
-
CD8
+
TCR/CD3
Sitio de
maduracin
Mdula sea Timo Periferia
Respuesta al
antgeno
Ninguna Ninguna Ninguna Seleccin
positiva y
negativa
Seleccin
negativa
Activacin
(proliferacin y
diferenciacin)

Figura 7. Estadios de maduracin de los linfocitos T.

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3. PROCESOS DE SELECCIN DE LOS LINFOCITOS

a. Seleccin de clulas T

La seleccin de las clulas T en desarrollo es estimulada por el reconocimiento
del antgeno (complejo pptido-molcula de MHC) en el timo y es responsable de la
conservacin de las clulas tiles de la eliminacin de las clulas potencialmente
nocivas (Figura 8).

Clulaepitelial
tmica
Muerte
celular
Clula epitelial
tmica
Rescate de la muerte
celular programada:
conversin a timocito de
una sola positividad
Clula epitelial
Muerte celular
apoptsica

Figura 8. Proceso de seleccin en el timo. A. Falta de seleccin positiva,
B. Seleccin positiva, C. Seleccin negativa.
El repertorio de linfocitos T inmaduros poseen receptores que reconocen
cualquier antgeno peptdico (propio o extrao) presentado por cualquier molcula de
MHC (tambin propia o extraa).
En cualquier individuo, las clulas T que reconocen autoantgenos son
potencialmente peligrosas, ya que puede desencadenar un proceso de
autoinmunidad; as, las nicas clulas T tiles son aquellas que reconocen pptidos
extraos presentados por molculas de MHC. De esta forma, los procesos de
seleccin actan sobre el repertorio de clulas T inmaduras de forma de garantizar
que slo las clulas tiles completen la maduracin.
Cuando los linfocitos T doblemente positivos expresan por primera vez
receptores TCR, estos reconocen pptidos propios presentados por molculas de
MHC propias. La seleccin positiva es un proceso mediante el cual los linfocitos
cuyos TCR se unen dbilmente a los complejos pptido-molculas MHC propias, son
estimulados para que sobrevivan, permitiendo la muerte de los timocitos cuyos
receptores no reconocen molculas de MHC propias. Debido a que la seleccin
positiva instruye a una poblacin de linfocitos T para que reconozca a antgenos
peptdicos asociados al MHC propio, el proceso tambin ha recibido el nombre de
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educacin tmica, no obstante, se trata ms de un proceso de seleccin celular que
de una educacin celular.
La seleccin negativa, es el proceso por el cual los timocitos cuyos receptores
TCR se unen con gran avidez a antgenos peptdicos propios asociados a molculas
del MHC propio son destruidos o eliminados. En este proceso se elimina las clulas
T que presentan una gran autorreactividad frente a autoantgenos ubicuos, que son
los autoantgenos que ms probablemente existen en el timo.
En resumen, durante todo este proceso los timocitos han ido interactuando con
clulas estromales provistas de MHC en sus membranas (clulas nodriza clulas
corticales epiteliales clulas dendrticas), producindose dos fases de seleccin de
timocitos: As, seleccin positiva: slo sobreviven aquellos timocitos que hayan
generado receptores TCR capaces de reconocer molculas MHC propias; los dems
mueren por apoptosis. En la seleccin negativa: se eliminan por muerte celular
programada los timocitos que habiendo superado la seleccin positiva hayan
resultado autorreactivos, es decir, los timocitos que reconozcan molculas del propio
individuo (autoantgenos) presentadas por el MHC propio, o que tengan una afinidad
demasiado alta hacia el MHC propio solo. De esta forma, slo salen como linfocitos
T maduros aquellas clulas autotolerantes (no inmunidad a lo propio) y capaces de
reconocer antgenos (molculas extraas al propio individuo) en el contexto del
haplotipo propio del MHC.

NOTA: A continuacin se presentar un material terico sobre inmunidad
mediada por clulas que fue tomado del CURSO DE INMUNOLOGA GENERAL
de Iaez Pareja del Dpto. de Microbiologa de la Universidad de Granada.
Espaa. El mismo fue editado para su presentacin en esta compilacin.
4. INMUNIDAD MEDIADA POR CLULAS

Actualmente se tiende a considerar como "inmunidad mediada por clulas"
cualquier respuesta contra microorganismos o tumores en la que los anticuerpos
juegan un papel subordinado o secundario. Pero a estas alturas ya sabemos que en
Inmunologa es difcil "poner puertas al campo" porque:
1. En la respuesta inmune humoral especfica hay que activar clulas al principio
de dicha respuesta.
2. En muchas respuestas celulares los anticuerpos juegan papeles esenciales
como "puentes" entre clulas (lo veremos con la citotoxicidad celular dependiente de
anticuerpos, CCDA).
3. Adems, cualquier respuesta celular va acompaada en paralelo de
produccin de anticuerpos, que a su vez pueden modificar las respuestas celulares
de varias maneras: p. ej., la formacin de complejos Ag-Ac provoca la activacin del
complemento, en la que se liberan pptidos que funcionan como factores
quimiotcticos que inducen la acumulacin de mayor nmero de clulas inmunes y el
aumento de la respuesta inflamatoria.
Por otro lado, no hay que suponer que todas las respuestas celulares
dependen de linfocitos T: de hecho las primeras lneas defensivas contra
microorganismos son inespecficas, y descansan en la identificacin de componentes
Nereida Valero
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microbianos comunes por parte de clulas del sistema de inmunidad natural
(macrfagos, granulocitos neutrfilos, etc.).
Una de las posibles clasificaciones de la inmunidad mediada por clulas sera la
siguiente:
1. Reacciones dependientes de fagocitos del sistema natural:
- Fagocitosis
- Produccin de citoquinas
2. El papel central de las clulas T
H
en la determinacin del tipo de mecanismo
efector puesto en marcha.
3. La citototoxicidad directa que conduce a la lisis de la clula diana enferma es
realizada por varios tipos celulares:
- Dentro del sistema especfico: linfocitos T citotxicos (matadores), que se
denominan linfocitos T citolticos (CTL) en su fase efectora.
- Dentro del sistema natural: clulas agresoras naturales (NK) y macrfagos.
- Citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (CCDA).
- Clulas T CD4
+
que median reacciones de hipersensibilidad de tipo
retardado, que en su estado efector se denominan T
DTH
.

4.1. INMUNIDAD MEDIADA POR CLULAS FAGOCTICAS (Diapositivas 10, 11 y
12)
El alumno encontrar provechoso repasar las caractersticas de las clulas
mieloides fagocticas. Aqu profundizaremos en estas clulas, sobre todo en lo que
atae a los mecanismos de destruccin intracelular del patgeno una vez que lo han
engullido.
La actuacin de estas clulas la podemos dividir a efectos pedaggicos, en varias
fases:
1. Quimiotaxis
2. Unin del microorganismo al fagocito
3. Desencadenamiento de la captacin del microorganismo
4. Fagocitosis y mecanismos matadores.

Quimiotaxis
La atraccin de los fagocitos del sistema de inmunidad natural hacia el foco de
infeccin se puede deber a varios factores:
- Por sustancias de origen directamente microbiano. Tal es el caso de cortos
pptidos derivados de los extremos amino-terminales de protenas bacterianas (p.
ej., el formil-Met-Leu-Phe es quimiotctico para los leucocitos, que llevan receptores
capaces de reconocerlo).
- Ciertos componentes microbianos (como la endotoxina de bacterias Gram-
negativas) activan la ruta alternativa del complemento, que libera los pptidos C3a y
C5a, que son muy quimiotcticos sobre fagocitos.
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Unin del microorganismo al fagocito
Esta fase es importante, ya que de su xito depende la ocurrencia de la
internalizacin ulterior y el desencadenamiento de los mecanismos matadores. La
unin inespecfica entre bacteria y fagocito se realiza por interaccin entre molculas
de superficie del microorganismo y receptores del leucocito:

Molcula bacteriana Receptor del fagocito
Lectinas Oligosacridos de
superficie
Oligosacridos de
superficie
Lectinas
b -glucanos CR3 y LFA-1
Lpido A (endotoxina) CR3 y LFA-1

Podemos hacer una tabla parecida, pero en la columna de la bacteria ahora
vamos a considerar molculas del hospedador que recubren al microorganismo
(opsonizacin), y que a su vez sirven para que sean reconocidas por receptores de
leucocitos:

comp. opsonizantes del
hospedador unidos a la
bacteria
Receptor del fagocito
C3b CR1 (*)
inmunoglobulinas FcR (*)
MBP C1qR

Los receptores CR1 y FcR estn entrelazados entre s por medio del
citoesqueleto, lo que explica en parte su accin sinrgica.
Los receptores inespecficos de tipo lectina disminuyen en el macrfago
activado (en presencia de IFN-g), mientras que aumentan los CR1 y FcR. Ello
permite a las clulas Th indicar a los macrfagos que entran al tejido que fabriquen
ms molculas capaces de citoadherencia.

Desencadenamiento de la captacin
La captacin del microorganismo se ve facilitada si est recubierto por el
componente C3b del complemento y/o por anticuerpos: esta opsonizacin permite
potenciar poderosamente el mecanismo amebiano del fagocito.
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Fagocitosis y mecanismos matadores
En captulos anteriores no hemos referido a la fagocitosis, por lo que no
volveremos a insistir aqu en ella, sino que nos centraremos en lo que ocurre cuando
el microorganismo, englobado en el fagosoma, recibe la descarga de los grnulos
(lisosomas) del fagocito. El contenido preformado de estos grnulos, junto con
sustancias producidas de novo, constituyen una batera de mecanismos
encaminados a la muerte del patgeno. Estos mecanismos se pueden clasificar en
dos grandes tipos: dependientes e independientes de oxgeno.

a. Mecanismos dependientes de oxgeno
Los podemos estudiar a su vez bajo dos categoras: los que se basan en
intermediarios reactivos de oxgeno, y los intermediarios reactivos de nitrgeno.

1. Intermediarios reactivos de oxgeno (ROI). La unin de partculas a los
receptores de la membrana del fagosoma del macrfago provoca el denominado
estallido respiratorio (por activacin de la ruta de la hexosa monofosfato), que
produce mucho NADH.
a. Antes de que el lisosoma se fusione con el fagosoma, en ste tiene lugar
una reduccin de oxgeno molecular (O
2
) catalizada por la NADH-oxidasa de la
membrana del fagosoma; el anin superxido resultante (
O
-
2
) es txico por s mismo,
pero a su vez da lugar a otros radicales txicos de vida corta, como el perxido de
hidrgeno (H
2
O
2
), el radical hidroxilo (OH) y el oxgeno singlete (O
1
2
). El macrfago
se protege de los ROI que puedan salir del fagosoma por medio de una cadena de
reacciones redox en que participa glutation.
b. Una vez que el lisosoma se fusiona con el fagosoma, aqul libera la
mieloperoxidasa, que acta sobre los perxidos en presencia de haluros (I
-
y Cl
-
),
para producir compuestos halogenados (hipohaluros) muy txicos y de vida larga:
cido hipocloroso (ClOH), e hipoiodoso (IOH).

2. Intermediarios reactivos de nitrgeno (NRI)
a. La enzima NOS (xido ntrico-sintetasa) combina el oxgeno molecular con el
nitrgeno guanidino de la L-arginina, para generar xido ntrico (NO), que es txico
para bacterias y clulas tumorales.
Los macrfagos de ratn (pero no los humanos) necesitan para activar esta ruta a
un nivel ptimo dos seales: interfern gamma (IFN-g ) para activar la enzima NOS,
y factor de necrosis tumoral (TNF) (ver el apartado 13.2.5).

b. Mecanismos independientes de oxgeno

Estos mecanismos dependen de protenas antimicrobianas preformadas y
acumuladas en los grnulos:
1. Protenas catinicas, con actividades de tipo antibitico:
a. defensinas (en macrfagos de conejo y en PMN neutrfilos humanos).
Son pptidos catinicos , de unos 30 aminocidos, ricos en cys y arg.
Forman canales permeables a los iones en las bicapas lipdicas de los
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microrganismos. Actan antes de que tenga lugar la acidificacin del
fagolisosoma.
b. Catepsina G
c. Azurozidina

2. Lisozima, que acta rompiendo el peptidoglucano de bacterias (sobre todo de
Gram-negativas).

3. Lactoferrina (producida por neutrfilos): secuestra hierro, indispensable para
las bacterias.

c. Activacin de los macrfagos

Los macrfagos en reposo pueden matar, desde luego, pero sus capacidades
microbicidas pueden mejorar por medio de su activacin. Esta activacin puede
provocarse por:

1. productos microbianos que causan
a. activacin directa de monocitos y macrfagos
b. activacin indirecta: los macrfagos sin activar y las clulas NK liberan
citoquinas que a su vez activan a los macrfagos.
2. Ulterior activacin por citoquinas producidas por linfocitos T
H
, sobre todo por
IFN-g . Provocan atraccin quimiotctica de fagocitos y/o activacin de los
mecanismos dependientes e independientes de oxgeno.

En aos recientes se est viendo que la activacin del macrfago es algo ms
complejo de lo que se crea. La idea clave que ha surgido es que el macrfago
despliega unas u otras de sus funciones efectoras dependiendo de la combinacin
particular de estmulos qumicos que reciba, a saber, citoquinas y molculas
inflamatorias.
La activacin de los macrfagos de ratn se puede lograr mediante el IFN-g
secretado por el T
H
, o por la endotoxina (lpido A) de las bacterias gram-negativas.
Pero a su vez, los macrfagos activados secretan TNF-a , que al actuar sobre
macrfagos ya activados provocan una mayor potenciacin de sus capacidades al
activarse la ruta dependiente del xido ntrico.
En humanos, el macrfago, en presencia de IFN-gamma, activa la 1-alfa
hidroxilasa, que convierte el 15-hidroxicolecalciferol circulante en 1,25-
dihidroxicolecalciferol (calcitriol o vitamina D
3
). A su vez, este calcitriol activa ms al
macrfago al tiempo que inhibe los linfocitos Th1. Esta respuesta en humanos puede
ser parte de la razn de que cuando falla la eliminacin del parsito haya un cambio
desde T
H
1 a T
H
2, con lo que se hace crnica la respuesta celular. La produccin de
calcitriol en el caso de tuberculosis o sarcoidiosis puede llegar a circulacin
perifrica, originando una afeccin de hipercalcemia.
Llegados a este punto, quiz sea bueno llamar la atencin sobre las diferentes
fases de la respuesta inmune en las que participan los macrfagos:

Nereida Valero
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1. En la defensa inicial frente al patgeno: el macrfago sin activar tiene su
capacidad fagoctica basal. Al mismo tiempo secreta citoquinas que ayudan a
otras clulas (p. ej., recordar la IL-1 que participa en la activacin de linfocitos
B).
2. En la presentacin del antgeno: acta como clula presentadora para
linfocitos T
H
, que a su vez se activan secretando citoquinas.
3. En la fase efectora el macrfago se activa por citoquinas (como el IFN-g
secretado por linfocitos T
H
), lo cual va a potenciar sus actividades
antimicrobianas, antitumorales y de secrecin de citoquinas.

Las citoquinas secretadas por macrfagos en respuesta a componentes
microbianos cumplen importantes papeles: la IL-12 y el TNF-a , en sinergia con otros
mediadores, mejoran la actividad antimicrobiana inespecfica:
- El TNF-a mejora la capacidad microbicida de PMN neutrfilos y de los propios
macrfagos;
- TNF-a junto con la IL-12 provocan que las clulas NK liberen IFN-g, el cual
aumenta la actividad de los macrfagos;
- El TNF-a induce cambios en las superficies de clulas endoteliales y de
fagocitos, que pueden interaccionar de modo que los fagocitos se extravasan para
acceder al lugar de la inflamacin, donde se localiza el foco de infeccin.

5. PAPEL DE LAS CLULAS T COADYUVANTES (T
H
) (Diapositivas 13 y 14)

Las clulas T
H
desempean papeles esenciales en la inmunidad celular:
1. Determinan la especificidad de la respuesta inmune (qu antgenos y qu
epitopos son reconocidos);
2. Intervienen en la seleccin de los mecanismos efectores destinados a eliminar
al patgeno;
3. Ayudan a la proliferacin de las clulas efectoras adecuadas;
4. Mejoran las funciones de fagocitos y otras clulas efectoras.

El primero de estos papeles citados ya ha sido abordado en otro captulo: la
interaccin del conjunto de receptores TCR-CD3-CD4 con los epitopos en el MHC-II
de clulas presentadoras condiciona la especificidad de la respuesta.
Pero el sistema inmune ha de efectuar una segunda decisin esencial: qu
mecanismos efectores se ponen en marcha, que sean los adecuados para la
naturaleza de cada infeccin en particular. Dentro de la inmunidad mediada por
clulas, existen varios mecanismos:

1. Citotoxicidad directa especfica, por medio de linfocitos T citotxicos CD8
+

(CTL);
2. Degranulacin de eosinfilos y mastocitos una vez que han contactado con la
clula a eliminar a travs de anticuerpos, que sirven de "puentes" moleculares
(ADCC);
3. Activacin de macrfagos y reaccin de hipersensibilidad de tipo retardado.
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Entonces, cmo se determina el tipo de accin para cada tipo de situacin? La
respuesta estriba en buena parte en el patrn local de citoquinas producidas al inicio
de la respuesta inmune, desencadenado ante cada tipo de patgeno, as como en la
concentracin local de metabolitos esteroideos y de vitamina D
3
en el tejido linfoide:
estos factores determinan que predomine uno de dos subtipos de clulas T
H
, lo que
finalmente condicionar el desencadenamiento de uno u otro de los mecanismos
efectores.
As pues, los linfocitos T
H
presentan dos subpoblaciones, denominadas T
H
1 y
T
H
2. Dichas subpoblaciones se desarrollan a travs de una ruta que se bifurca:

T
H
vrgenes
estimulacin
inicial
estimulacin
crnica
memoria
largo plazo
T P
H
T 0
H
T 1
H
T
H
2
T M
H

Cada uno de estos tipos de linfocitos T
H
secreta un patrn caracterstico de
citoquinas:

T
H
P T
H
0 T
H
1 T
H
2 T
H
M
... IFN-g IFN-g ... ...
IL-2 IL-2 IL-2 ... IL-2
... IL-4 IL-4 ...
... IL-5 ... IL-5 .
.. IL-6 .
. IL-10 . IL-10
. .. IL-3 IL-3
... ... TNF-a TNF-a
... ... GM-
CSF
GM-
CSF

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(En la tabla se han resaltado en cursiva sobre color amarillo las citoquinas
caractersticas de T
H
1 y T
H
2, que no son comunes a ambas subpoblaciones).
Veamos pues, en qu se diferencian funcionalmente los lincitos de ambas
subpoblaciones:

- Las clulas T
H
1 tienden a activar los macrfagos, y responden bien a
- Las clulas T
H
2 tienden a incrementar la produccin de mastocitos y eosinfilos,
y mejoran la produccin de ciertos isotipos de inmunoglobulinas, incluyendo la IgE.
Las clulas T
H
2 responden bien a antgenos presentados por linfocitos B.

Una vez establecidos, cada uno de estos patrones de respuesta es capaz de
inhibir o suprimir al otro, debido a la accin de ciertas citoquinas de cada tipo de
clula T
H
:
Esta diferenciacin de T
H
1 y T
H
2 se descubri en el ratn, pero existen cada
vez ms pruebas de que igualmente existe en la especie humana. A los T
H
1 se les
suele llamar linfocitos T "inflamatorios", y a los T
H
2, "coadyuvantes".
Un ejemplo clnico de este papel particular de los dos tipos de clulas T
H
lo
tenemos en las dos clases extremas de lepra:

- En la lepra tuberculoide se inducen sobre todo linfocitos T
H
1, por lo que hay una
buena activacin de macrfagos, lo cual redunda en que se detectan pocas bacterias
intracelulares.
- En cambio, en la lepra lepromatosa se induce la subpoblacin T
H
2, que colabora
eficazmente en la respuesta especfica humoral; pero los anticuerpos evidentemente
no pueden acceder al interior celular, por lo que existen abundantes bacilos en el
interior de los macrfagos; stos, al no poder ser activados eficazmente, no pueden
eliminar al parsito. Hay gran destruccin de tejidos.

6. CITOTOXICIDAD MEDIADA POR CLULAS (Diapositiva 15)

En este apartado vamos a tratar aquellos mecanismos efectores que dependen de la
accin de clulas del sistema inmune capaces de matar/lisar clulas enfermas
(clulas diana), a las que se unen de modo directo o indirecto:

1. Citotoxicidad directa especfica: es la llevada a cabo por los linfocitos
citotxicos (T
C
), que estn restringidos por el haplotipo propio MHC-I, y que
poseen CD8
+
como molculas correceptoras. (aunque algunas son CD4
+
y
estn restringididas por MHC-II)
2. Citotoxicidad directa inespecfica: las clulas agresoras naturales (NK)
reconocen determinantes inespecficos de clulas tumorales o infectadas con
ciertos virus.
3. Citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos: es un mecanismo indirecto
por el que clulas matadoras como NK, eosinfilos, etc., interaccionan con el
antgeno por medio de puentes de anticuerpos previamente unidos a
receptores para Fc de la clula.
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a. Citotoxicidad directa especfica (mediatizada por linfocitos CTL)
(Diapositivas 16 y 17)

El papel ms importante de este mecanismo es el de eliminar clulas propias
infectadas por virus. Como veremos, los linfocitos T
C
en reposo, al activarse
apropiadamente, terminan diferencindose a los llamados linfocitos T citolticos
(CTL), que son los efectores de la inmunidad celular especfica.
El 90% de estos linfocitos son CD8
+
, y estn restringidos por el MHC-I propio.
Son capaces de reconocer a la mayora de clulas nucleadas. Pero existe un 10% de
linfocitos T
C
que fenotpicamente son CD4
+
y estn restringidos por MHC-II.
La actuacin de estas clulas la podemos considerar en dos fases:
1. Activacin y diferenciacin de los precursores T
C
hasta CTL
2. Fase efectora: destruccin de la clula diana, a su vez diferenciable en:
- Adhesin y formacin del conjugado entre el CTL y la clula diana
- Golpe letal
- Disociacin del CTL
- Destruccin de la clula diana.

Activacin y diferenciacin de los linfocitos T citotxicos
Los linfocitos Tc vrgenes parece que se activan solamente en los rganos
linfoides secundarios, nicos entornos en los que reciben las seales necesarias.
Requieren en realidad 3 seales:

1. La seal especfica suministrada por la interaccin entre su complejo TCR-
CD3-CD8 con el MHC-I de una clula presentadora profesional infectada (p.
ej., una clula dendrtica interdigitante)
2. La seal coestimulatoria suministrada por la misma clula (unin entre B7 y
CD28).
3. La interleucina IL-2.

Parece ser que el Tc expresa tras la interaccin inicial una pequea cantidad de
IL-2, pero en el caso de estos Tc vrgenes no suele ser suficiente para activarlos. La
aportacin clave de IL-2 procede de clulas Th1 cercanas. De hecho, se piensa que
tanto el Th como el Tc vrgenes se activan simultneamente al unirse a la misma
clula presentadora (no olvidemos que las APCs exhiben MHC-I y MHC-II).
En cambio, las clulas Tc de memoria tienen menos requerimientos para su
activacin. De hecho, como ya sabemos, al tener molculas de adhesin celular
diferentes a los correspondientes Tc vrgenes, pueden encontrarse el antgeno
(epitopo peptdico en contexto MHC-I) en tejidos extralinfoides.

1. No requieren obligatoriamente la seal coestimulatoria.
2. No requieren obligatoriamente la ayuda de Th, ya que al unirse de modo
especfico a una clula propia infectada que le suministre el pptido adecuado,
provoca que el Tc produzca no slo receptores de IL-2, sino niveles
adecuados de IL-2 capaces de auto-activarlas.
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De esta manera, se provoca la proliferacin y diferenciacin del linfocito en
reposo (virgen o de memoria) hasta que se convierte en linfocito T citoltico (CTL).
Este CTL se caracteriza por poseer algo ms de citoplasma que el T
C
, y sobre todo
por poseer grnulos densos a los electrones, rodeados de unidad de membrana
(llamados a veces granulosomas) y un aparato de Golgi.

Fase efectora: Ataque y destruccin de la clula diana

1) Formacin del conjugado
Tras el reconocimiento especfico, se produce una interaccin de gran avidez
entre molculas de LFA-1 del CTL y molculas de ICAM-1 de la clula diana. Esta
unin dura unos 5-10 minutos, durante los cuales las seales de la unin intercelular
se transducen al interior del CTL por medio de cascadas de proten-quinasas y
proten-fosfatasas, que conducen a la activacin de una serie de funciones del CTL.
Se dice entonces que el linfocito queda programado para la lisis.

2) Golpe letal
El citoesqueleto del CTL se reorganiza, de modo que tanto el aparato de Golgi
como los granulosomas se sitan en el polo celular que queda en contacto con la
clula diana. Entonces, los grnulos se fusionan con la membrana citoplsmica,
producindose la exocitosis de su contenido al estrecho espacio intercelular ("beso
de la muerte").

3) Disociacin del CTL
Antes de que se produzca la lisis de la clula diana, el CTL se separa,
probablemente ayudado por el hecho de que la LFA-1 vuelve al estado de baja
afinidad.

4) Destruccin de la clula diana
Parece ser que la destruccin de la clula diana puede ocurrir por varios
mecanismos, predominando uno u otro en funcin de la naturaleza de la superficie
de la clula diana, y del grado de activacin que haya alcanzado el linfocito CTL.

- Monmeros de perforina contenida en los granulosomas llegan a la membrana
de la clula diana, y en presencia de Ca
++
se polimerizan para formar cilindros
huecos de poliperforina (con unas 20 unidades), que atraviesan la bicapa lipdica.
De este modo se forma un canal (con un dimetro de 5-20 nm) que es permeable a
iones, y que puede provocar la lisis osmtica de la clula diana (aunque su papel
principal es servir como canal para dejar pasar a otros componentes de los
grnulos).
- Pero no siempre el efecto de la poliperforina es la lisis. En otros casos parece
que el papel de los canales es el de permitir la entrada de otras sustancias del
granulosoma que inducen la apoptosis de la clula diana. De hecho se ha visto que
pueden entrar fragmentinas (granzimas) que inducen la fragmentacin de los
cromosomas en mltiplos de nuclesoma.
Nereida Valero
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Veamos algunas ideas actuales sobre el mecanismo de apoptosis
desencadenado por los linfocitos Tc.
Antes que nada, hay que aclarar el papel de la granzima B. Como ya
sabemos, se trata de una fragmentina, que induce fragmentacin del ADN en
mltiplos de nucleosomas. Ahora bien, este efecto es indirecto: las fragmentinas no
son DNAasas, sino proteasas. La Granzima B tiene una actividad parecida a la
llamada enzima convertidora de interleucina 1- (ICE).
La ICE es una proteasa endgena con un papel central en la ruta endgena
de la apoptosis. Dicha ruta se puede activar por una serie de estmulos externos
(carencia de factores de crecimiento, ciertos virus, dao al ADN), que transforman la
ICE inactiva a forma activa. Una vez activada, la ICE rompe proteolticamente un
sustrato an desconocido, que induce las ADNasas, que fragmentarn el ADN.
Pues bien, se piensa que la granzima B secretada por el CTL (y que entra a la
clula diana a travs de los canales de perforina) activa a la ICE o bien la sustituye
para desencadenar el mecanismo de esta ruta apoptsica endgena.
Pero este no es el nico mecanismo inductor de apoptosis por parte de los
CTLs (de hecho, algunos clones de CTLs carecen de perforina y de granzimas, y sin
embargo inducen muerte celular de la clula diana). Podemos encontrar otro
mecanismo dependiente de la interaccin entre el llamado ligando Fas del CTL y el
receptor Fas de la clula diana.

- El receptor Fas (tambin llamado APO-1) es una protena de membrana que
pertenece a la llamada familia TNF de receptores de citoquinas.
- Por su lado, el ligando de Fas del CTL es una protena de membrana que exhibe
homologas de secuencia con TNF, y se une al Fas.

La unin entre el ligando de Fas con el Fas de la clula infectada o enferma
induce en sta una seal que dispara la ruta endgena de apoptosis, con la
consiguiente activacin de la ICE y subsiguiente fragmentacin del ADN.
Las vesculas del CTL pueden contener TNF-a y TNF-b (=linfotoxina), que junto con
el IFN-g producido por T
C
o por otras clulas, desencadena efectos citotxicos que
tardan ms tiempo (>3-4 horas) que los anteriores. Se desconoce el mecanismo,
pero parece que igualmente inducen apoptosis.
Cmo se protege el CTL de sus propios mecanismos matadores? Por lo
pronto, el condroitn sulfato (proteoglucano) del CTL se puede unir a la perforina,
inactivndola. Pero puede que haya otros mecanismos: por ejemplo, la hiptesis de
Peters dice que la perforina sale del granulosoma dentro de pequeas vesculas
igualmente membranosas; la membrana de estas sub-vesculas contendran
complejos TCR-CD3-CD8, que encaminaran a las pequeas vesculas hacia la
clula diana, pero no al CTL.

b. Citotoxicidad directa inespecfica mediada por clulas NK (Diapositiva 19)

Recordemos que las clulas NK son un tipo de linfocitos granulares grandes
(de hecho NK es casi sinnimo de LGL), que suponen un 5% de las clulas linfoides
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en sangre, y que carecen de los marcadores de linfocitos T y B. Se consideran como
linfocitos "inespecficos", pertenecientes al sistema de inmunidad natural.
El mecanismo citotxico de las clulas NK es parecido al de los linfocitos citolticos
(CTL), pero a diferencia de ellos, carecen de especificidad y de memoria, y no estn
restringidos por el MHC clsico.
Poseen un papel importante en los primeros das de una infeccin virsica, al
eliminar clulas en las que el virus se est multiplicando. Constituyen pues un
mecanismo efector celular temprano, antes de que lleguen los linfocitos T
C
, y
especialmente preparado frente a ciertos virus que usan la estrategia de inducir un
descenso del nivel de MHC-I
Recientemente se ha propuesto un modelo de dos receptores para explicar
cmo reconocen estas clulas inespecficas a las clulas infectadas por virus o
tumorales. Se piensa que las NK reciben seales de dos receptores de modo que
distinguen entre clulas sanas y enfermas.
Segn este modelo, el receptor NKR-P1 se une a oligosacridos de
glucoprotenas de superficie de la clula enferma, procedentes de glucosilaciones
anmalas. En principio, esta seal le indica a la NK que debe prepararse para matar
a la clula con la que ha contactado, pero para ello debe de ocurrir
simultneamente una ausencia de seal procedente de otro receptor, el Ly-49.
El receptor Ly-49 de la clula NK se une a ciertos alelos de molculas MHC-I.
Cuando una clula NK se encuentra ante una clula normal, aunque reciba la seal
de NKR-P1, no la mata, ya que la interaccin entre Ly-49 y las MHC-I enva una
seal a la NK para que detenga su mecanismo matador. En cambio, muchas clulas
enfermas (por virus o tumorales) presentan un bajo nivel de MHC-I, por lo que el
mecanismo dependiente de NKR-P1 no se ve frenado.
La actividad matadora de NK se activa por IFN-a e IFN-b (liberado por muchas
clulas enfermas al inicio de la infeccin), y por IL-12 (producido por macrfagos). A
su vez, la IL-12 y el TNF-a (tambin del macrfago) provocan que la NK secrete
grandes cantidades de IFN-g , con lo que se mantienen a raya ciertos patgenos
intracelulares hasta que se activen las clulas T. Como se ve, un nuevo rasgo que
parece indicarnos de nuevo el carcter de lnea defensiva temprana que intepretan
estas clulas. De hecho, rara vez las clulas NK eliminan efectivamente el virus, pero
lo mantienen a raya hasta que llegan las clulas T
C
.

c. Citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (CCDA) (Diapositiva 20)

Existen varios tipos de clulas potencialmente citotxicas que poseen receptores
para Fc de anticuerpos, y que pueden por lo tanto participar en la destruccin de
clulas diana (enfermas) o de helmintos recubiertos en ambos casos por anticuerpos.
Los acontecimientos suelen tener lugar en las siguientes fases:
1. formacin de inmunocomplejos (es decir, la clula enferma o el helminto se
recubre de anticuerpos);
2. una clula agresora adecuada (p. ej., la NK) interacciona con la clula
enferma o el parsito a travs de los anticuerpos, que se engarzan con el
receptor para Fc de la clula agresora;
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3. finalmente, dicha clula agresora libera por exocitosis el contenido de sus
grnulos, y/o secreta productos txicos, que tienden a matar a la clula
enferma o parsito.

De este modo, clulas que son propiamente del sistema inmune natural, y
por lo tanto son inespecficas, pueden llegar a destruir especficamente mediante
el puente de anticuerpos. De hecho, actan como clulas efectoras finales del
sistema humoral especfico (es decir, pueden llegar a ser los "brazos armados" o
"verdugos" en una respuesta que se inici con la secrecin de anticuerpos).
- Las clulas NK, monocitos y PMN neutrfilos poseen el receptor Fcg RIII
(=CD16), de baja afinidad, que reconoce las subclases IgG1 e IgG3.
- Los eosinfilos posen Fce R-I y Fce R-II, estando especializados en destruir
helmintos (p. ej., las esquistosmulas, que son las larvas de Schistosoma).

7. RESPUESTA DE HIPERSENSIBILIDAD DE TIPO RETARDADO (Diapositivas
21, 22 y 23)

La hipersensibilidad de tipo retardado (DTH) es una reaccin inflamatoria
localizada que se induce por citoquinas secretadas por ciertas subpoblaciones de
linfocitos T
H
(concretamente, de T
H
1) activados previamente por contacto con ciertos
tipos de antgenos, y que se caracteriza por el reclutamiento al foco infeccioso de
grandes cantidades de clulas inflamatorias, sobre todo de macrfagos.
Se llama retardada porque, al contrario que la inmediata, tarda 2 o 3 das en
manifestarse.
La palabra hipersensibilidad alude en principio a efectos negativos sobre el
propio hospedador, pero en muchos casos el efecto consiste en pequeos daos
tisulares, siendo en general la respuesta beneficiosa, puesto que va encaminada a
destruir a ciertos patgenos intracelulares.

1. Fases de la hipersensibilidad de tipo retardado
En la respuesta hipersensible de tipo retardado podemos distinguir una fase
inicial de sensibilizacin en la que se produce el contacto inicial con el estmulo
antignico, y que no presenta sntomas, y una fase efectora, dependiente de un
contacto secundario con el antgeno, en la que se manifiestan tales sntomas y que
es la tendente a eliminar al patgeno.

a. Sensibilizacin
La fase de sensibilizacin dura de una a dos semanas, tiempo durante el cual
los linfocitos T
H
se activan y expanden clonalmente tras el reconocimiento del
antgeno presentado por clulas presentadoras (APCs). Dichas clulas
presentadoras pueden ser:
- Clulas de Langerhans de la piel, que transportan el antgeno desde la epidermis
hasta los ganglios linfticos regionales, donde lo muestran a los linfocitos T
H
;
- Macrfagos;
- En humanos y otras especies: clulas del endotelio vascular.
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Al final de esta fase se tiene pues una poblacin expandida de linfocitos T
CD4
+
de memoria, que recirculan constantemente.

b. Fase efectora
Esta fase ocurre en tejido extralinfoide, y es la reaccin de hipersensibilidad en
sentido estricto, detectndose sus sntomas a las 24 horas del contacto secundario
con el antgeno que provoc la sensibilizacin inicial, pero alcanza su apogeo a las
48-72 horas. En esta fase sale fibringeno al tejido, y se convierte en fibrina, que
junto con la acumulacin de linfocitos T y de macrfagos hace que el tejido se hinche
y se vuelva duro (esto es la base de los sntomas de induracin y edema) La
podemos subdividir en tres etapas: desencadenamiento, inflamacin y resolucin.

- En el desencadenamiento el linfocito T activado (que ahora denominaremos
como T
DTH
), ante el contacto secundario con el antgeno presentado por una APC,
secreta ciertas citoquinas, cuyas acciones dan paso a la reaccin de inflamacin.
- La inflamacin se produce cuando las citoquinas secretadas reclutan y activan a
macrfagos y otras clulas inflamatorias hacia el sitio de infeccin, ponindose en
marcha una compleja serie de interacciones entre clulas inespecficas del sistema
inmunitario y citoquinas, con amplificacin de la respuesta. Todo ello va encaminado
a destruir al agente patgeno intracelular.
- La resolucin se produce porque los macrfagos activados aumentan su
capacidad de eliminacin del patgeno. Estos macrfagos son la principal clula
efectora de la hipersensibilidad retardada, pudiendo representar el 90% de la
poblacin celular infiltrada.

Como se ve, esta respuesta tiene un claro valor adaptativo en la eliminacin
de ciertos parsitos intracelulares, pero cuando el estmulo es demasiado
persistente, la DTH se vuelve destructiva para el hospedador. Este aspecto
inmunopatolgico se manifiesta en la llamada reaccin granulomatosa: los
macrfagos, con los parsitos sin eliminar en su interior, se adhieren unos a otros,
adquiriendo morfologas epitelioides; posteriormente estas clulas epitelioides se
pueden fusionar entre s, generando clulas gigantes multinucleadas, que pueden
llegar a desplazar al tejido normal, con lo que se forman ndulos o tubrculos, que
pueden conducir a necrosis del tejido.

Interaccin entre citoquinas y clulas en la DTH
En este epgrafe vamos a ampliar el aspecto molecular y celular de la
respuesta de hipersensibilidad retardada, resaltando cmo las distintas citoquinas
actan sobre distintos tipos celulares, responsables de diversos aspectos de esta
respuesta.
- La IL-2 del linfocito T
DTH
funciona de modo autocrino, permitiendo la expansin
clonal, con lo que aumenta el nmero de estas clulas, que siguen produciendo ms
citoquinas. Conforme avanza la respuesta, la IL-2 tambin ejerce un efecto paracrino,
estimulando a otros clones de linfocitos T
DTH
.
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- La IL-3 y el GM-CSF inducen hematopoyesis del linaje granulocito-monoctico en
la mdula sea. Obviamente ello acarrea que mayores cantidades de PMN y
macrfagos puedan pasar al foco de infeccin.
- El IFN-g el TNF-b de las clulas T, as como el TNF-a y la IL-1 de los macrfagos
actan sobre las clulas endotelilales vasculares cercanas al foco de infeccin, con
los siguientes efectos:
1. Aumento de la expresin de molculas de adhesin (ICAM, ELAM, VCAM);
cambios de forma, tendentes a que las clulas endoteliales se separen entre s,
dejando paso para la extravasacin de leucocitos;
2. Las clulas endoteliales estimuladas secretan IL-8 y otros factores
quimiotcticos que atraen a monocitos circulantes (quimiocinas).

Las consecuencias son que los PMN neutrfilos (primeros leucocitos en llegar)
y los monocitos circulantes se adhieren a las clulas endoteliales de las vnulas
postcapilares, pasan por diapdesis y entran al tejido infectado. La entrada de los
monocitos lleva consigo su diferenciacin a macrfagos.

- Los macrfagos son atrados y activados en el foco de infeccin debido a la
accin de IFN-g y del factor quimiotctico y activador de los monocitos (MCAF). Otro
factor secretado por T
DTH
, llamado MIF (inhibidor de la migracin de macrfagos)
evita que el macrfago "pase de largo" el foco infectivo, afinando su quimiotaxis.
- Por lo tanto, los macrfagos van llegando en grandes cantidades al foco
infeccioso, y se van activando (sobre todo por el interfern inmune), experimentando
importantes cambios:
1. Aumentan su tamao
2. Aumentan sus niveles de enzimas lticos en sus grnulos
3. Aumentan su capacidad fagoctica (por opsonizacin con IgG2a -en el
ratn)
4. Incrementan su efectividad matadora de microorganismos intracelulares.

- Funcionan mejor como clulas presentadoras de antgeno, debido a que es
mayor el nmero de molculas MHC de clase II en su membrana, porque secretan
mayor cantidad de IL-1 y porque expresan ms molculas de adhesin como la B7
(coestimulatoria), ICAM-1 y LFA-3.
El que los macrfagos acten mejor ahora como APC supone que activan a
ms linfocitos T
DTH
, con lo cual se cierra el ciclo, pero amplificado.
Este tipo de respuesta que se retroalimenta positivamente puede llegar a
convertirse en un "arma de doble filo", ya que puede degenerar en una respuesta
negativa para el hospedador, una vez que se traspasa un umbral. Sin embargo, su
valor positivo se ponde de manifiesto en experimentos con ratones transgnicos
noqueados (K.O.) que tienen inactivado el gen del IFN-g : son incapaces de matar a
Mycobacterium bovis, una bacteria contra la que los ratones normales se defienden
perfectamente.

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Efectos de la hipersensibilidad retardada

El efecto positivo de la DTH es que tiende a eliminar ciertos patgenos
intracelulares y antgenos de contacto:
- Bacterias intracelulares como Mycobacterium tuberculosis, M. leprae,
Listeria monocitogenes, Brucella abortus.
- Hongos intracelulares como Candida, Pneumocystis carinii, Histoplasma,
Cryptococcus.
- Protozoos como Leishmania.
- Larvas de helmintos, como las de Schistosoma.
- Virus.

La DTH desempea un papel importante en la defensa contra estos agentes,
ya que el macrfago activado destruye mejor al patgeno, y el contenido de sus
grnulos, vertido a exterior, destruye clulas propias infectadas (en este ltimo papel
es importante la accin del TNF-b ). Obviamente, se produce cierto dao tisular, pero
ste suele estar autolimitado y puede ser reparado ulteriormente.
El papel positivo de la DTH se puede comprobar "por contraste" considerando
aquellas enfermedades en las que precisamente este mecanismo est alterado: por
ejemplo, en el SIDA, en el que existen bajos niveles de linfocitos T CD4
+
: ello acarrea
que se pierda la facultad de montar una respuesta de hipersensibilidad retardada, por
lo que los individuos afectados estn sometidos a frecuentes y amenazadoras
infecciones por Candida, Pneumocystis, Cryptococcus, o por bacterias patgenas e
incluso oportunistas que no suelen causar tanta mortalidad en la poblacin sana. De
hecho, una de las maneras de seguir el curso del SIDA es evaluar peridicamente en
laboratorio la capacidad de respuesta DTH con clulas de los pacientes.
Sin embargo, en ciertos casos la propia respuesta defensiva degenera en
patolgica: tal ocurre en la tuberculosis, en la que se pueden llegar a formar ndulos
(tubrculos) en muchos tejidos (tpicamente en los pulmones), que pueden terminar
necrosndose (cavernas caseosas en pulmn).
En una situacin de infeccin crnica por parsito intracelular (como en la
tuberculosis) las citoquinas producidas en la DTH estimulan la proliferacin de
fibroblastos y la produccin de colgeno, potencindose los efectos por la accin de
PDGF (factor de crecimiento derivado de plaquetas) y de TGF-b del macrfago
activado. Posteriormente emigran y proliferan clulas endoteliales (angiognesis, es
decir, formacin de nuevos vasos sanguneos). Se produce pues la sustitucin del
tejido normal por tejido fibroso (cicatrizacin) y formacin de granuloma.

NOTA: En las dispositivas 24 y 25 se presenta un cuadro resumen y ejemplos
de las diferentes respuestas inmunitarias.

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BIBLIOGRAFA

1. Goldsby, R.A.; Kindt, T.J .; Osborne, B. A.; Kuby, J . 2004. Inmunologa.
Segunda Edicin, Editorial McGraw-Hill. 663 p.p (libro texto gua).
2. Abbas, A.K.; Lichtman, A.H.; Pober, J .S. 2002. Inmunologa Celular y
Molecular. 4
ta
Edicin. McGraw-Hill Interamericana. Espaa. 577 p.p.
3. Iaez Pareja. Inmunidad Celular. En curso de Inunologa General. Disponible
en: http://www.ugr.es/~eianez/inmuno/cap_13.htm. Accesado: 20/03/09.
4. Parslow, T.G.; Stites, D.P.; Terr, A. I.; Imboden, J . B. 2002. Inmunologa
bsica y Clnica. 10
a
Edicin. Editorial Manual Moderno. 917 p.p.

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