INTRODUCCION:

Las protenas son macromolculas formadas por cadenas de -aminocidos, unidos entre s por enlaces peptdicos (amido) formados por condensacin del grupo carboxilo de uno con el amino del otro. La secuencia (orden) en que se encuentran unidos los aminocidos es caracterstica de cada protena. La capacidad tampn de las protenas es debida a la estructura qumica de los aminocidos; que son molculas que poseen grupos carboxilo (cidos) y amino (bsicos) en su estructura molecular. Dependiendo del pH del medio en que se encuentren, los aminocidos pueden tener carga negativa, positiva o compensada (igual nmero de cargas de ambos signos). Por tanto la carga de una protena va a depender del tipo de aminocidos que la forman y del pH del medio en que se encuentre. El punto isoelctrico (pI) es el pH para el cual una protena presenta carga neta compensada (igual nmero de cargas positivas que negativas) y en el mismo, la solubilidad de la protena es mnima. A pH>pI la carga que presenta la protena es negativa y a pH < pI la carga ser positiva.(medida pH)

Marco teorico:
La casena es una protena conjugada de la leche del tipo fosfoprotena que se separa de la leche por acidificacin y forma una masa blanca. La casena en la leche se encuentra en forma de sal clcica (caseinato clcico) y representa del 77% - 82% de las protenas y el 2,7% en composicin de la leche lquida. Debido a la composicin en aminocidos de la protena, los radicales libres pueden existir en tres formas dependiendo del pH del medio: catinicos, neutros y aninicos. Cualquier protena tendra una carga neta positiva si se encuentra en un medio lo suficientemente cido debido a que los grupos COOH de los aminocidos asprtico y glutmico estaran en su forma neutra pero los grupos amino de Arginina y lisina estaran protonados (-NH3 ). De igual forma si la protena se encuentra en un medio con un pH muy alto estara cargada negativamente ya que en este caso los grupos carboxilo estaran desprotonados (-COO ) y los grupos amino estaran en su forma neutra (-NH2). De lo anterior se deduce que las protenas tienen un pH caracterstico al cual su carga neta es cero. A este pH se le denomina punto isoelctrico (pI). En el punto isoelctrico (pI), se encuentran en el equilibrio las cargas positivas y negativas por lo que la protena presenta su mxima posibilidad para ser precipitada al disminuir su solubilidad y facilitar su agregacin. Esta medida de la agregacin puede visualizarse por espectrofotometra de absorcin a 640 nm.(2 Practicas EB)
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Un espectrofotmetro mide cuanta luz absorbe una solucin, y se puede usar para medir la concentracin de los solutos. El fenmeno es de naturaleza exponencial y depende de la concentracin del material absorbente de la luz, del espesor de la capa de solucin interpuesta en el trayecto del haz luminoso y de la longitud de onda de la luz empleada en el experimento. Generalmente la longitud de onda de la luz y el espesor de la capa que atraviesa, se mantienen constantes y la intensidad de luz transmitida (I), se compara con la que transmite el solvente puro (I0), midindola en funcin de la fuerza electromotriz desarrollada que es proporcional a la intensidad de luz que llega a una celda fotoelctrica.

De acuerdo con la ley de Lambert-Beer, la relacin entre la concentracin de una solucin coloreada y la luz transmitida por la solucin se expresa: I = I0 10-Ecl Transmitancia: T = I/I0 I/I0 = T = 10-Ecl en donde: I = intensidad de la luz trasmitida por la solucin coloreada I0= intensidad de la luz transmitida por el solvente puro (blancos de reactivos) c = concentracin de la sustancia colorada en la solucin problema l = espesor (longitud) de la capa de solucin que atraviesa el haz de luz E = coeficiente de extincin o de absorbencia La Absorbencia : A, es linealmente proporcional a la concentracin: T = 10-Ecl -log T = Ecl = A Las partes esenciales de un espectrofotmetro son: Fuente de luz: emite luz blanca (mezcla de todas las longitudes de onda). Monocromador: aisla la luz de una longitud de onda. Tubo para muestra: Se selecciona la longitud de onda de la luz que la muestra absorba. Fototubo de medida: convierte la energa de la luz que llega a l, en corriente elctrica. Detector: registra la fuerza de la corriente elctrica producida por el fototubo de medida y por lo tanto la cantidad de luz transmitida por la muestra. Un espectrofotmetro se puede usar para construir un espectro de absorcin de una solucin. Un espectro de absorcin es una grfica de absorbencia a varias longitudes de onda. Los compuestos tienen diferentes espectros de absorcin y se pueden usar para identificar sustancias. De esta manera se puede efectuar un anlisis cualitativo en regiones ultavioleta/visible para identificar ciertas clase de compuestos ya sea en estado puro o en mezclas biolgicas, como protenas, cidos nucleicos, citocromos y clorofila. Se puede aprovechar ciertos cromforos, por ejemplo, aminocidos aromticos de las protenas y las bases heterocclicas en los cidos nucleicos que absorben a longitud de onda especficas. Debido a que muchossolutos absorben muy poca luz, la medido fotomtrica de su concentracin puede ser difcil, por lo tanto se hace reaccionar el soluto de inters con otra molcula para formar un compuesto coloreado y se usa para estimar la concentracin del soluto incoloro.(3)

Anlisis de resultados:
Despus del anlisis de los resultados, se estableci que el punto isoelctrico de la casena se encontraba en el tubo NO. 6, es decir, a un pH de 4.4. Determinado esto, se establece que la carga total de la molcula proteica, depende pues, del pH de la solucin y del nmero relativo de cada aminocido en la molcula. As, cuando el pH de la solucin es tal que la carga neta de la molcula proteica es cero, es decir, cuando el nmero total de cargas negativas iguala al nmero total de cargas positivas presentes en

la molcula, se llama a ste valor de pH, punto isoelctrico o pH isoelctrico de la protena, en este caso, la casena.