Efectos nocivos del zinc en el crecimiento y desarrollo de semillas de lechuga Arcos Kohlmann Ivan,, Alvarez Moreno Bruno Asesores:

Q.F.B. Gabriela Escalante Reynoso, Q.F.B. Axell Pineda Molina Fecha de entrega: 18/ octubre/ 2013 Facultad de Estudios Superiores Cuautitln, Seccin de bioqumica y Farmacologa Humana. Laboratorio de Toxicologa Grupo: 1701 Equipo 7 Cuautitln Edo. Mx. Mxico
Resumen: El zinc, cuya forma de asimilacin es como ion Zn2+, es esencial para promover ciertas reacciones metablicas y activar algunos sistemas enzimticos. Componente esencial de diversas metaloenzimas: anhidrasa carbnica y deshidrogenasa alcohlica. Adems, este elemento cumple funciones en la sntesis de clorofila y en la formacin de hidratos de carbono. Interviene en la formacin de sustancias de crecimiento, como el cido indolactico. El bioensayo de toxicidad con semillas de lechuga (lactuca sativa) es una prueba de toxicidad aguda (120 horas de exposicin) en el que se pueden evaluar los efectos fitotxicos de compuestos puros o de mezclas complejas en el proceso de germinacin de las semillas y en el desarrollo de las plntulas. Se prepararon 6 sistemas, 5 de ellos con concentraciones diferentes de Zn2, . En cajas Petri se coloc papel filtro impregnado con la solucin correspondiente, se colocaron 20 semillas de lechuga en cada sistema asegurndose que quedaran lo suficientemente separadas para permitir su crecimiento. Una vez listos los sistemas se incubaron a temperatura ambiente y en total oscuridad durante 120 horas. Las semillas que lograron germinar en los dems sistemas presentaron diversos efectos subletales como son la muerte del pice radicular, muerte inmediata de radcula esto se debe a la toxicidad por Zn que acta inhibiendo la fijacin de CO2 y altera la permeabilidad de la membrana celular. El zinc inhibe la biosntesis de clorofila y principalmente la del cido deshidrogenasa y la reductasa por lo tanto provoca un descenso en la fotosntesis esto provoca que en el sistema con concentracin de 2.0% de nuestro toxico no exista germinacin de nuestras semillas. ABSTRACT Zinc, whose assimilation is Zn2 ion, is essential to promote certain metabolic reactions and activate some enzyme systems. Essential component of several metalloenzymes: carbonic anhydrase, and alcohol dehydrogenase. In addition, this element functions in the synthesis of chlorophyll and the formation of carbohydrates. It participates in the formation of growth, such as the indoleacetic acid substances. The bioassay of toxicity with seeds of lettuce (lactuca sativa) is a test of acute toxicity (120 hours of exposure) in which you can evaluate phytotoxic effects of pure compounds or complex mixtures in the process of seed germination and seedling development. Prepared 6 systems, 5 of them with different concentrations of Zn2,. Paper filter impregnated with the corresponding solution was placed on boxes Petri, 20 lettuce seeds were placed in each system making sure they remain separate enough to allow its growth. Ready once the systems were incubated at room temperature and in total darkness for 120 hours. The seeds that were able to germinate in other systems presented various sublethal effects such as the death of the root apex, immediate death of radicle this is due to the toxicity by Zn that acts by inhibiting CO2 fixation and alter the permeability of the cell membrane. Zinc inhibits the biosynthesis of chlorophyll and mainly acid dehydrogenase, reductase and therefore causes a decrease in photosynthesis this causes in the system with a concentration of 2.0% of our toxic there our seed germination.

1. Introduccin

El zinc est presente de forma natural en las rocas, el suelo, el agua y el aire, y es esencial para la salud y el bienestar tanto del ser humano como de animales y cultivos. El rendimiento y la calidad de los cultivos normalmente se ven reducidos cuando hay un suministro de zinc inadecuado. Por otro lado, la deficiencia de zinc en la dieta es un grave problema que afecta a millones de personas en todo el mundo (IZA, 2000). El zinc, cuya forma de asimilacin es como ion Zn2+, es esencial para promover ciertas reacciones metablicas y

activar algunos sistemas enzimticos. Componente esencial de diversas metaloenzimas: anhidrasa carbnica y deshidrogenasa alcohlica. Adems, este elemento cumple funciones en la sntesis de clorofila y en la formacin de hidratos de carbono. Interviene en la formacin de sustancias de crecimiento, como el cido indolactico. Favorece la utilizacin del fsforo y del nitrgeno por las especies vegetales, adems de participar en sntesis de hormonas sexuales masculinas (Moreno, 2007).

Las pruebas de toxicidad aguda y crnica estn diseadas para determinar los efectos a plazos corto y largo de la exposicin a sustancias qumicas sobre diversos puntos terminales, entre ellos supervivencia, reproduccin y respuestas fisiolgicas y bioqumicas. El bioensayo de toxicidad con semillas de lechuga (lactuca sativa) es una prueba de toxicidad aguda (120 horas de exposicin) en el que se pueden evaluar los efectos fitotxicos de compuestos puros o de mezclas complejas en el proceso de germinacin de las semillas y en el desarrollo de las plntulas durante los primeros das de crecimiento. Como puntos finales para la evaluacin de los efectos fitotxicos, se determina la inhibicin en la germinacin y la inhibicin en la elongacin de la radcula y del hipocotilo. Es importante descartar que durante el periodo de germinacin y los primeros das de desarrollo de la plnticula ocurren numerosos procesos fisiolgicos en los que la presencia de una sustancia toxica puede interferir alterando la supervivencia y el desarrollo normal de la planta, siendo por lo tanto una etapa de gran sensibilidad frente a factores externos adversos. Por otra parte, muchas de las reacciones y procesos involucrados son generales para la gran mayora de las semillas, por lo que la respuesta de esta especie y los datos obtenidos a partir de la aplicacin de esta prueba son en gran medida representativos de los efectos en semillas o plntulas en general (Patricia, 2008). A diferencia de la prueba tradicional de germinacin de semillas, la evaluacin del efecto en la elongacin de la radcula y el hipocotilo de las plntulas permite ponderar el efecto txico de compuestos solubles presentes en niveles de concentracin tan bajos que no son suficientes para inhibir la germinacin, pero que sin embargo pueden retardar o inhibir completamente los procesos de la elongacin de la radcula o del hipocotilo, dependiendo ello del modo y sitio de accin del compuesto. Este ensayo puede ser aplicado para la evaluacin de la toxicidad de compuestos puros solubles, de aguas superficiales, aguas subterrneas, aguas para consumo humano, aguas residuales domesticas e industriales, adems de lixiviados de suelos, sedimentos, lodos u otras matrices solidas. Este bioensayo de toxicidad ha sido recomendado y aplicado por diferentes organismos de proteccin ambiental para la evaluacin eco toxicolgica de muestras ambientales y compuestos puros, adems de la evaluacin del efecto fitotxico de plaguicidas sobre especies blanco, necesarios para el registro de compuestos (Patricia, 2008). En la incorporacin de esta prueba en una batera de bioensayos es importante considerar el compromiso entre la sensibilidad de la especie L. sativa, el reducido tiempo de exposicin de la prueba con semillas, los bajos costos asociados y que no requiere equipamiento sofisticado, en particular en la aplicacin a muestras ambientales o en el monitoreo de procesos de detoxificacion, saneamiento, control de efluentes o rehus de bioslidos (Patricia, 2008).

1.1 Metodologa Se prepararon 6 sistemas, 5 de ellos con concentraciones diferentes de Zn2+ (0.03, 0.05, 0.1, 1 y 2%), y un control positivo. En cajas Petri se coloc papel filtro impregnado con 4 mL de la solucin correspondiente, se colocaron 20 semillas de lechuga en cada sistema asegurndose que quedaran lo suficientemente separadas para permitir su crecimiento. Una vez listos los sistemas se incubaron a temperatura ambiente y en total oscuridad durante 120 horas. Pasado ste tiempo se observaron las caractersticas de las semillas de cada medio, se midi la longitud de sus radculas y del hipocotilo; tambin se obtuvo el porcentaje del efecto de inhibicin de crecimiento para cada sistema. Para obtener la concentracin letal o de inhibicin 50 (CL50) se realiz un anlisis estadstico Probit.
2. Resultados Los resultados completos se muestran en el anexo 1, a continuacin se muestran los ms representativos. Tabla 1: Resultados experimentales del bioensayo de semillas de Lactuca sativa en presencia de Acetato de Zinc. R=Radcula,

H=Hipocotilo.
[Zn ] %
+2

% Inhibicin de germinacion 14.28

R cm

H Cm

UP Observaciones

Blanco 1.9 1.40 0.75 0.22 0.07 0 1.78 1.54 0.96 0.28 0 0 0.03 17.85 0.05 24.28 0.1 30.71 1 2 70.71 100

---------

Crecimiento abundante de semillas

Las semillas germinaron pero tuvieron muerte inmediatade radicula

4.08 4.33 4.5 5.52 8.09

Muerte del pice radicular Necrosis inmediata de radicula Necrosis inmediata de radicula No hubo crecimiento

Tabla 2: Datos experimentales para realizar el anlisis estadstico Probit para los efectos subletales (%de inhibicin de crecimiento de radicula e hipocotilo)
[Zn ] (%) 0.03 0.05 0.1 1 2
2+

Log [ ]

% inhibici n de R 27 60 88 96 100

% inhibicin de H 13 46 84 100 100

UP de R 4.39 5.25 6.18 6.76 8.09

UP de H 3.87 4.9 5.99 8.09 8.09

-1.52 -1.3 -1 0 0.3

Calculos: Para obtener la CL50 se sustituyen 5 unidades probit en y (y=5). Efecto letal: (y - 6.5876)/1.8219= x

y = 1.8219x + 6.5876 x=0.13%

Efecto medio de inhibicin de radicula (y -7.3034)/1.6597=x

y = 1.6597x + 7.3034 x=0.040% Grafico 1.- Porcentaje de inhibicin de crecimiento de Radicula presentando Unidades probit vs logaritmo de la concentracin, la ecuacin obtenida es y = 1.6597x + 7.3034 con un R=0.8974

Efecto medio de inhibicin de hipocotilo: (y - 7.795)/2.2808=x

y = 2.2808x + 7.795 x=0.059%

3.

Discusin

Grafico 2.- Porcentaje de inhibicin de crecimiento de Hipocotilo presentando Unidades probit vs logaritmo de la concentracin la ecuacin obtenida es y = 2.2808x + 7.795 con una R=0.9528

Este metodo se fundamenta en el hecho de exponer a un grupo de semillas en una serie de diluciones del txico dentro de un ambiente provocado que intenta recrear las condiciones naturales de Lactuca sativa; durante un tiempo especfico (120 horas) para analizar y comparar el porcentaje de efecto de inhibicin y cambios germinativos en entidades biolgicas. En el desarrollo de las pruebas de sensibilidad, se emple como agente txico el Zinc, para determinar su efecto se hicieron mediciones de la radcula y el hipoctilo, con el cual se definieron los niveles de afectacin en el crecimiento de la plntula, asi mismo se observo la afectacin en la germinacin de las semillas. Se sabe que el zinc es un componente esencial de varios sistemas enzimticos que regulan la sntesis proteica, produccin de energa, mantenimiento de la integridad de la membrana de la raz y adems interviene en el crecimiento y fisiologa de la planta; el zinc inhibe la biosntesis de clorofila y principalmente la del cido deshidrogenasa y la reductasa por lo tanto provoca un descenso en la fotosntesis (Casierra, 2005). lo antes mencionado provoca que en el sistema con concentracion de 2.0% de nuestro toxico no exista germinacin de nuestras semillas. Las semillas que lograron germinar en los dems sistemas presentaron diversos efectos subletales como son la muerte del pice radicular, muerte inmediata de radcula esto se debe a la toxicidad por Zn que acta inhibiendo la fijacin de CO2 y altera la permeabilidad de la membrana celular. Al realizar el anlisis estadstico Probit se obtuvo una CL50 de 0.13% de Zn2+, sta concentracin. Cabe mencionar que el coeficiente R=0.7978, no es un valor aceptable estadsticamente, para tener resultados ms confiables se debe corregir la linealidad de la grfica. Nosotros no

Grafico 2.- Porcentaje de inhibicin de Germinacion presentando Unidades probit vs logaritmo de la concentracin la ecuacin obtenida es y = 1.8219x + 6.5876 con una R=0.7978

realizamos sta correccin debido a que son solo 6 datos los que graficamos, la misma cantidad de puntos mnimos necesarios para graficar una serie de datos. Tambin se observo la inhibicin en el crecimiento de la radicula e hipocotilo obteniendo un efecto medio de inhibicin de crecimiento de radicula =0.040% y y un efecto
medio de inhibicin de crecimiento de hipocotilo =0.059%. Las concentraciones a las que ya observamos un dao en la morfologa de nuestra plntula es aproximadamente la mitad de nuestra concentracion letal. 4.

Conclusiones

Se obtuvo una concentracin letal 50 de Zinc de 0.13% (mg/mL) en el ensayo con semillas de lechuga mediante el mtodo estadstico Probit. El efecto daino del Zinc sobre las semillas de lechuga es proporcional a la concentracin presente en el sistema; asi como se presenta una ayuda en el crecimiento de las semillas a concentraciones muy bajas.
5.

Referencias.
Patricia Ramrez R., Ania Mendoza C.,La experiencia de Mxico, Secretaria de medio ambiente y recursos

naturales Instituto Nacional de Ecologa, primera edicin , enero 2008, Mxico , 55,56,57 pp.
IZA, Asociacin Internacional de Zinc. 2010. [en lnea] <<http://www.zinc.org/>>. R. 2007. Elementos nutritivos. Asimilacin, funciones toxicidad e indispensabilidad en los suelos. [en lnea], 56-60pp MORENO, <<www.librosenred.com>>. CASIERRA, F. 2005. La toxicidad por exceso de Mn

y Zn disminuyen la produccin de materia seca, los pigmentos foliares y la calidad del fruto en fresa
(Fragaria sp. cv. Camarosa). Agronoma Colombian