ANLISIS BIOQUMICO PARA EL RECONOCIMIENTO DE CEPAS BACTERIANAS Sergio Luis Ortega Pardo1; Osvaldo Escorcia2

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1. Universidad del Magdalena, Facultad de Ciencias Bsicas, Programa Biologa, Santa Marta Magdalena, Colombia; E-Mail: Mrs9318@Hotmail.Com 2. Universidad del Magdalena, Facultad de Ciencias Bsicas, Programa Biologa, Santa Marta, Magdalena, Colombia; E-Mail: Oswaldoes_@Hotmail.Com Resumen: En el presente laboratorio se realizaron pruebas bioqumicas a una cepa de bacterias en las cuales se pudo determinar la presencia o ausencia de algunas enzimas en las cepas, enzimas como la catalasa, oxidasa, azucares como la fructosa sacarosa, lactosa, glucosa, entre otras con el fin de poder establecer la taxonoma, morfologa y fisiologa de las mismas. Pudiendo en base a estos resultados reconocer gneros bacterianos con ayuda de la gua brindada por el docente Palabras Claves: catalasa, oxidasa, citrato, idol, voges proskauer, bioqumica

Introduccin: Los microorganismos no tienes la capasidad de generar o crear material organicoapartir de elemento o sustancias inorganica, por esto se nutren del medio en el que se encuentren en el interior de los microarganismos ocurren una serie de reacciones de sintesis y desconcicion de sustancias, recibe el nombre de metabolismo, dependiendo del metabolismo que presente la cepa se realizaran pruebas obteniendo la identificacion. la realizacion de estas pruebas bioquimicas la cual nos permite responder a la inquietud de poder identificar con exito la cepa bacteriana.

Materiales: Caja petri con cultivo bacteriano puro

Asa bacteriolgicas rectas y redondas Palillos estriles Perxido de hidrogeno Tira de oxidasa Tubos inclinados de agar TSI Reactivo naftol Reactivo de KOH 40% Encendedor Tubo con caldo rojo de fenol mas xilosa, manosa, galactosa, con campana Durham Tubos inclinados de agar citrato de Simmons Tubo de agar SIM Tubo con caldo urea Tubo con caldo RM-VP Reactivo de Kovacs Machero Cinta de enmascarar

Procedimiento: Prueba de Catalasa: Para esta prueba se agrega una gota de H2O2, luego en la misma con ayuda de un palillo depositar una minscula cantidad de cultivo bacteriano. Si hay formacin de burbujas (aunque sea muy pocas) la reaccin ser positiva. Prueba de de Oxidasa: se toma con ayuda de un palillo una cantidad pequea de cultivo bacteriano y se frota en una tira de papel de oxidasa. Si en el papel aparece una coloracin rosa o violeta oscuro es una reaccin positiva. Prueba de Fermentacin de azucares: Esta busca determinar si hay fermentacin u oxidacin de los azucares como la lactosa, sacarosa, glucosa y si existe la presencia de sulfuros. Para esto se utiliza agar T.S.I el cual se inocula con la bacteria utilizando el asa recta. El agar T.S.I es oblicuo y es de coloracin naranja en su totalidad. Se siembra picando con el asa hasta el fondo y al momento de retirar en estras. Sembrar con ayuda de asa recta una muestra de colonia bacteriana en tubos de caldo fenol. Estos se incuban a 37C durante 24 horas.

Prueba del Citrato: en esta prueba se inoculo el agar de Simmons Citrato inclinado con la bacteria el cual se incuba a 37C por 24 horas Prueba de Indol: esta prueba permite estudiar el metabolismo proteico, especialmente de la degradacin del Triptfano por parte de los microorganismos. La capacidad de formar idol y productos indolicos a partir del Triptfano (Granados R., y Villaverde C., 2002). Con base en esta se puede determinar la formacin de sulfuros, la produccin de idol y la movilidad de la bacteria. Para ello se inocula un tubo de ensayo con agar SIM, luego se incuba a 37C por 24 horas. Para poder determinar los resultados se le agregan 10 gotas del reactivo Kovacs, si se forma un anillo de color rojo cereza en la parte superior del medio. La reaccin es positiva. Prueba del rojo de Metilo (RM): mediante esta prueba se observa el cambio de color del medio con indicador rojo de metilo debido a la acidificacin de este. Los microorganismos rojo de metilo positivo acidifican el medio por la apercin de cidos estables (Granados R., y Villaverde C., 2002). Para realizarla prueba se inocula el tubo que contiene caldo RMVP con la bacteria en estudio, este se incuba a 37C por 24 horas. Se detecta la produccin de cidos mixtos agregando el contenido del tubo de rojo de metilo. Si el contenido del tubo se pone de color rojo la reaccin es positiva (Luna J, 2012). Prueba de Amoniaco a partir de Urea: detecta la presencia de la enzima ureasa en los microorganismos atraves de una prueba en la que se observa la alcalinizacin del medio (Granados R., y Villaverde C., 2002). Se siembra en el tubo con caldo urea la bacteria que se esta ensayando, luego incubar a 37C por 24 horas (Luna J, 2012). Prueba de voges Proskauer (PV): permite determinar si el microorganismo realiza fermentacin formica de tipo butilenglicol (Brock y Madigan, 1993). Inocular en el tubo que contiene caldo VP la bacteria en estudio. Incubar a 37C por 24 horas (Luna J, 2012.

Resultados: Los resultados obtenidos fueron los siguientes: TSI morfologia gram cata oxid lac Cepa b bacilos g+ + sac gluc + + SIM H2O CO2 cit ind + + mov H2S urea RM VP fruct galc xil + + + + + +

VP: se el agrgaron 15 gotas de alfanafton por 10 minutos se agita suavemete hasta que se formr una solucion lechosa. Luego se le agregan 10 gotas de KOH y se agita quedo de color. Queda de color naranja lo que indoica que la reaccion es negatuva. RM: se el agregaron 6 gotas de rojo de metilo y se agita hasta que sea homogeneo. Este queda de color naranja lo que indica que la reaccion es negativa. SIM: se le agrregaron 4 gotas de reactivo kovacs para idosl la reaccion forma un anillo de color naranja en la superficie reaccion negativa. TSI:hay liberacion de gases CO2 portanto todos los azucares fueron fermentados , no hubo formacion de sulfuros. Todo de color amarillo. CTI: el cutivo paso de un color verde a un color azul portanto la reaccion es positiva. UREA: el medio se torno rosa esto indica que la reaccion es positiva.

Con las pruebas realizadas se ha llegado a la conclucion que lo mas probable es que pertenesca al genero Klebsiella

Discucion de resultados: Las diferentes pruebas realizadas a la cepa b. Mostraron un resultado positivo a la mayoria de la pruebas (prueba de catalasa deternimo la formacion de burbujas aunque fue poca, prueba de fermentacion de azucares deternino la fermentacion o oxidacion de los azucares (lactosa, sacaroza, glucosa), CO2,la prueba de citrato si se presento formacion bacteriana de la cepa b, mov, prueba de amoniaco apartir de urea se pudo determinar la presencia de la enzima ureasa, Prueba de voges Proskauer (vp) esta mostro que el microorganismo presenta fermentacion formica, fructosa, galactosa, xil). Siendo esto muy determinante para la determinacion de la cepa bacteriana b, pero tambien algunas pruebas mostraron varios resultados negativos como las pruebas de (prueba de gram deternimo que presenta una capa de

peptidoglucano muy delgada, la prueba de oxidasa el papel no tomo coloracion rosa o violeta oscuro, H2O, la prueba de indol resulto que no presenta la degradacion del triptofano, prueba de H2S, prueba de rojo metilo no presento coloracion roja sino por lo ciontrario presento una coloracion naranja dando asi la prueba negariva). Observando todos lo resultados de las pruebas obtenidas tanto los resultados positivos como los resultados negativos, la identificacion de la cepa fue que pertenecia al genero

Klebsiella, llegar a esta conclucion no fue sencillo ya que otros generos presentaron caracteristicas
similares y esto tendia a confundirnos en varias ocasiones, pero al final se logro con exito su identificacion.

bibliografia: tomado de: http://es.scribd.com/doc/50402732/PRUEBAS-BIOQUIMICAS-DE-IDENTIFICACION-

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