CAPTULO 2: PROCESOS DE FERMENTACIN

DEFINICIN
A nivel industrial, la palabra fermentacin no se aplica estrictamente a un proceso anaerbico, si no que esta generalizada a procesos tanto en presencia de oxgeno como en ausencia de este y en la que los principales productos de esta conversin son metabolitos primarios, secundarios, la modificacin de compuestos qumicos por microorganismos en crecimiento y la produccin de biomasa.

DEFINICIN
En sentido del metabolismo microbiano, la fermentacin ocurre en ausencia de un aceptor externo de electrones, es decir que el sustrato orgnico acta como donador interno de electrones y un producto de este sustrato acta como aceptor interno. De esta forma, la fermentacin ocurre sin aceptor externo de electrones, es un proceso anaerbico; el compuesto orgnico fermentable se oxida parcialmente y el microorganismo solo obtiene una pequea cantidad de energa, la restante queda en productos intermedios de oxidacin y una parte se manifiesta en forma de calor.

DEFINICIN
Los procesos fermentativos son aquellos que se desarrollan basados en el crecimiento y en la actividad biolgica de un microorganismo dado o conjunto de ellos y que tiene como objetivo la obtencin de un producto especfico a partir de dicha actividad que inclusive puede abarcar a la totalidad de la biomasa sintetizada.

ESQUEMA DE FERMENTACIN
MICROORGANISMO

ENZIMAS SUSTRATO PRODUCTOS SUBPRODUCTOS

ESQUEMA DE FERMENTACIN
S. cerevisiae

Invertasa Azucares Alcohol-Biomasa Vinazas

ESQUEMA DE FERMENTACIN
A. bisporus

Carbohidrasas Polmeros Biomasa Enmiendas orgnicas

ESQUEMA DE FERMENTACIN
L. bulgaricus

B-galactosidasa lactosa Acido lctico

CONSULTA: Cual es la importancia de las bifidobacterias?

ESQUEMA DE FERMENTACIN
B. subtilis

Carbohidrasas Almidn Amilasas, glucoamilasas Biomasa CONSULTA: Esquema de produccin de acido actico, metano, acido glutmico.

MICROORGANISMOS DE USO INDUSTRIAL

CARACTERSTICAS ORGNULOS Ncleo Mitocondria Retculo endoplasmtico Ribosomas Cloroplasto Lisosomas GENOMA Numero de molculas de DNA DNA en orgnulos COMPONENTES EXTERIORES Membrana celular Pared celular + + + + 1 Mas de 1 + + + + + + + + PROCARIOTAS EUCARIOTAS

HONGOS

A. bisporus

T. viridae

T. viridae

S. cerevisiae

R. niveus

A. niger

BACTERIAS

CLASIFICACIN DE ACUERDO A LA FUENTE DE CARBONO ENERGA

FUENTE DE CARBONO AUTTROFO HETERTROFO CO2 COMPUESTOS ORGNICOS FUENTE DE ENERGA ENERGA LUMNICA COMPUESTOS ORGNICOS

FOTOTTROFO QUIMIOTROFO

CLASIFICACIN DE ACUERDO AL CONSUMO DE OXGENO

AEROBIOS AEROBIOS ESTRICTOS MICROAERFILOS Dependen de O2 para su crecimiento (A. aceti) Slo se pueden desarrollar en presencia de bajas tensiones de O2 (menor del 12%) y altas tensiones de CO2. (E.coli). Algunas enzimas lbiles al oxgeno. Pueden desarrollarse en presencia o ausencia de O2. (S. cerevisiae) Se desarrollan en ausencia total de O2, utilizan una atmsfera anaerbica de CO2, H2 y N2 (Methanobacterium formicicum) Toleran el O2 pero no pueden usarlo. (Streptococcus pyogenes)

FACULTATIVOS ANAEROBIOS ANAEROBIOS ESTRICTOS

ANAEROBIOS AEROTOLERANTES

CLASIFICACIN DE ACUERDO A LA TEMPERATURA

Velocidad de crecimiento Reacciones enzimticas a mxima velocidad posible. ptima

Mnima Mxima

Gelificacin de la membrana, transporte lento, no hay crecimiento.

Temperatura

Desnaturalizacin proteica, colapso de la membrana, lisis celular.

CLASIFICACIN DE ACUERDO A LA TEMPERATURA

TEMPERATURAS PSICRFILAS 0 20OC. ptimo de 15OC Chlamydomonas nivales, alga de nieve ADAPTACIONES MOLECULARES Las enzimas poseen mayor cantidad de hlices alfa. Le otorgan mayor elasticidad, que la hoja beta plegada. Poseen cidos grasos en mayor proporcin insaturados Escherichia coli, se han definido a precisin las temperaturas cardinales. Las enzimas presentan aminocidos adicionales que las mesfilas, los cuales hacen que se plieguen de tal modo que sea termoestable. Empaquetamiento altamente hidrfobo, lo que hace resistir desnaturalizacin en medio acuoso. Presentan altos contenidos de cidos grasos saturados.

MESFILO TERMFILO

8 - 48OC. ptimo de 39OC Escherichia coli. 45 - 80OC. ptimo de 60OC Thermus aquaticus

HIPERTERMFILO

90- 113OC. ptimo de 106OC Pyrolobus fumarii

CLASIFICACIN DE ACUERDO AL pH
ACIDFILOS NEUTRFILOS ALCALFILOS Se desarrollan a pH entre 1.0 y 5.0 Se desarrollan a pH entre 5.5 y 8.5 Thiobacillus, Thermoplasma E. coli

Se desarrollan pH entre Bacillus 9.0 y 10.0

CLASIFICACIN DE ACUERDO A LA Aw
HALOFILOS (Halobacterium, Halococcus) Aw 0.75 DISCRETOS MODERADOS EXTREMOS OSMFILOS (Penicillium) Aw 0.80 XERFILOS (Xeromyces bisporus) Aw 0.70 Se desarrollan a una Aw entre 1 - 6% de NaCL 6 -15% de NaCL 15 -30% de NaCL

Altas concentraciones de azcar.

Capaces de crecer en ambientes muy secos.

ELEMENTOS PRINCIPALES REQUERIDOS POR LAS CLULAS MICROBIANAS

MACRONUTRIENTES ELEM. C O H N P K Fe Ca, Mg FUENTE Compuestos orgnicos, CO2 O2, H2O, Compuestos orgnicos H2, Compuestos orgnicos NH+4, NO3, N2, Compuestos orgnicos HPO24 K+ Fe2+ Ca2+, Mg2+ Nucletidos Principal catin orgnico Citocromos, cofactor Cofactores MICRONUTRIENTES Zn, Mn, Na, Cl, Mo, Se, Co, Cu, Cr, Ni Cofactores FUNCIN METABLICA Componentes principales del material celular

SELECCION, MANTENIMIENTO Y MEJORAMIENTO DE MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

SELECCIN Debido a que el xito o fracaso de un proceso fermentativo comienza con el microorganismo utilizado, en la eleccin del mismo se deberan tener en cuenta ciertos criterios generales que se indican a continuacin: 1. La cepa a utilizar debe ser genticamente estable. 2. Su velocidad de crecimiento debera ser alta. 3. La cepa debe estar libre de contaminantes, incluidos fagos. 4. Sus requerimientos nutricionales deberan ser satisfechos a partir de medios de cultivo de costo reducido. 5. Debe ser de fcil conservacin por largos perodos de tiempo, sin prdida de sus caractersticas particulares. 6. Debera llevar a cabo el proceso fermentativo completo en un tiempo corto. 7. Si el objetivo del proceso es un producto, ste debera ser de alto rendimiento y de fcil extraccin del medio de cultivo.

SELECCION, MANTENIMIENTO Y MEJORAMIENTO DE MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

PRINCIPALES COLECCIONES DE MICROORGANISMOS American Type Culture Collection, (ATCC), USA, la cual mantiene bacterias, levaduras, algas, actinomycetes, mohos, protozoos, virus y lneas celulares. Colletion Nationale de Cultures de Microorganismes, del Institut Pasteur, Francia. Northern Regional Research Laboratory, (NRRL), de Peoria, USA National Collection of Type Cultures, Londres,Inglaterra.

SELECCION, MANTENIMIENTO Y MEJORAMIENTO DE MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

MUESTREO Y SELECCIN
Si el organismo a utilizar es aislado de fuentes naturales como agua, suelo, plantas y desechos, la eleccin del material de partida puede hacerse teniendo en cuenta que el organismo exprese en ese ambiente las propiedades que son de inters. Una vez efectuado el muestreo y seleccin (screening) para el aislamiento de una cepa de inters, la misma deber ser caracterizada.

SELECCION, MANTENIMIENTO Y MEJORAMIENTO DE MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

CONSERVACIN
Subcultivos Una vez desarrollados los cultivos se mantienen a 4 C durante lapsos que oscilan entre 15 das y 2 meses. Mantenimiento bajo capa de aceite Consiste en cubrir completamente el cultivo despus de su desarrollo en medio slido, con una capa de aceite mineral o vaselina estril. No se observa variabilidad hasta los tres aos Congelacin Nitrgeno lquido (-196 C). La tcnica involucra el crecimiento del cultivo hasta la fase estacionaria, ya que en general en esta etapa las clulas son ms resistentes a los daos por congelacin y descongelacin Se utilizan sustancias crioprotectoras que aumentaran el porcentaje de clulas sobrevivientes. Cultivos en tierra Liofilizacin

SELECCION, MANTENIMIENTO Y MEJORAMIENTO DE MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

MEJORAMIENTO DE MICROORGANISMOS INDUSTRIALES La obtencin de cepas modificadas genticamente se puede realizar por: Seleccin natural de variantes Mutacin inducida Recombinacin gentica.

SELECCION, MANTENIMIENTO Y MEJORAMIENTO DE MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

MEJORAMIENTO

ESQUEMA GENERAL DE UN PROCESO DE FERMENTACIN

METABOLISMO
Las centenares de reacciones que ocurren en este proceso se denomina metabolismo y se caracterizan por estar ntimamente entrelazadas de manera que el proceso se produce de la manera mas eficiente posible en funcin de las condiciones dadas.

ANABOLISMO ADP

ATP CATABOLISMO

METABOLISMO
REACCIONES DE OXIDO REDUCCIN La conservacin de la energa implica reacciones REDOX. El resultado de la energa liberada es el ATP. Qumicamente una oxidacin se define como una prdida de un electrn o varios electrones de una sustancia. A su vez, una reduccin se define como la ganancia de un electrn o electrones por parte de una sustancia. TRANSPORTADORES REDOX DE ELECTRONES La transferencia de electrones esta mediada por transportadores. NADH Nicotinamida adenn dinucletido FADH Flavina adenn dinucletido COMPUESTOS DE ALTA ENERGA En los organismos vivos la energa se almacena en enlaces fosfato de alta energa. ATP Adenosn trifosfato

PRODUCCIN DE ENERGA EN LOS SITEMAS BIOLGICOS

La degradacin de los compuestos orgnicos que contienen formas reducidas de carbono, es la fuente de energa en todos los animales, y en la mayora de los microorganismos. Sin embargo, existen microorganismos capaces de derivar energa de compuestos inorgnicos. Las principales rutas metablicas e las cuales los organismos obtienen su energa son: Respiracin aerbica. Respiracin anaerbica. Fermentacin. Fotosntesis.

RESPIRACIN AERBICA Respiracin aerbica de sustratos orgnicos GLUCLISIS

RESPIRACIN AERBICA Respiracin aerbica de sustratos orgnicos CICLO DE KREBS

RESPIRACIN AERBICA Respiracin aerbica de sustratos orgnicos

FOSFORILACION OXIDATIVA La membrana esta energticamente activada por la fuerza motriz de protones cedidos por los cofactores reducidos NADH y FADH, facilitando la formacin del ATP a partir de ADP.

RESPIRACIN AERBICA Respiracin aerbica de sustratos orgnicos BALANCE TOTAL

GLUCOLISIS 2 ATP 2 NADH CICLO DE KREBS 8 NADH 2 FADH 2 ATP TOTAL 38 ATP Por que se encuentra que el balance global corresponde de 36 a 38 ATP ? Como se pueden obtener los precursores de las pentosas?

RESPIRACIN AERBICA Respiracin aerbica de sustratos orgnicos SNTESIS DE AMINOCIDOS VA CICLO DE KREBS-ANFIBLICOS

RESPIRACIN AERBICA Respiracin aerbica de sustratos orgnicos RESUMEN

RESPIRACIN AERBICA Respiracin aerbica de sustratos orgnicos

RUTAS ANAPLERTICAS El ciclo de Krebs es anfiblico, es decir que produce energa a travs del catabolismo y genera precursores a travs del anabolismo. Compuestos como cetoglutarato, oxalacetato, succinato se usan como precursores, pero la acumulacin de alguno de ellos detendr el ciclo de krebs. La acumulacin de cada uno de estos productos corresponder, a la accin de microorganismos particulares, y de un control el cual permitir regular y aumentar el producto deseado. En la produccin de acido ctrico por A. niger, Como puede continuar el ciclo y obtener oxalacetato?

Piruvato carboxilasa

Piruvato + CO2 + ATP Ruta de restauracin!

oxalacetato + ADP + Pi

RESPIRACIN AERBICA Respiracin aerbica de sustratos orgnicos RUTAS ANAPLERTICAS CICLO DEL GLIOXALATO?

RESPIRACIN AERBICA Respiracin aerbica de sustratos inorgnicos Algunas bacterias del suelo y de ambientes acuticos pueden obtener energa a partir de la oxidacin de compuestos orgnicos. Son de gran importancia en el suelo. Nitrobacter NO2 + 1/2O2 Carboxidomonas CO + 1/2O2 NO3 CO2

FERMENTACIN

PRODUCTOS OBTENIDOS POR MICROORGANISMOS

RESPIRACION ANAEROBIA
Algunos microorganismos son capaces de obtener energa en ausencia de oxgeno, teniendo alternativas de aceptores de electrones como nitrato.

C6H12O6 + 12NO3 4H2 + CO2

Nitrato reductasa

6 CO2 + 6H2O + 12NO2 + ATP

Hidrogenasa

CH4 + 2H2O + ATP

Si las clulas eucariotas generan energa en la membrana de la mitocondria, en las bacterias cual es su estrategia de obtencin de energa ?

FOTOSNTESIS

6 CO2 + 6H2O C6H12O6 + 6O2