UNIVERSIDAD DE LOS ANDES FACULTAD DE INGENIERIA ESCUELA DE INGENIERIA QUIMICA DEPARTAMENTO DE QUIMICA INDUSTRIAL Y APLICADA

MANUAL DE LABORATORIO DE ANALISIS INSTRUMENTAL

Prof. Silvia Margarita Calderon Prof. Aura Marina Gonzlez Abril, 2008

Dedcate a la instruccin desde tu juventud...trabjala as como hacen el labrador y el sembrador y espera pacientemente sus buenos frutos; te cansars un poco al trabajarla, pero pronto comers sus frutos Sircides 6,18-19.

ii

REGLAS GENERALES PARA EL LABORATORIO

1. Es condicin indispensable para entrar en una prctica, vestir bata larga con mangas largas. 2. Se exige puntualidad en la hora fijada para el comienzo de la prctica ya que deber realizar un examen previo (quiz antes de la prctica). 3. Los estudiantes cumplirn estrictamente con las normas de seguridad en el laboratorio (NO FUMAR) 4. Procure leer cuidadosamente el contenido de la prctica y la bibliografa que corresponde antes de entrar en el Laboratorio. Est siempre seguro de lo que va a hacer. 5. Todo alumno debe traer la gua de prctica, bolgrafo, marcador indeleble y un cuaderno de laboratorio. 6. Acostmbrese a seguir las instrucciones de la Gua de Prcticas. No pregunte a sus compaeros. Ante cualquier duda consulte al Profesor o al personal tcnico. 7. En el transcurso de la prctica no se permitir la salida del laboratorio sino por motivos especiales, y previa autorizacin del profesor. 8. No deje sobre la mesa del laboratorio las prendas personales y los libros. Ello resta espacio para trabajar y les hace propensos al contacto con los reactivos. Slo deben estar sobre la mesa los materiales que se estn usando. 9. Los reactivos sacados del frasco y que no se hayan usado, no deben verterse de nuevo en aquellos, puesto que todo el contenido puede contaminarse. Por consiguiente, las cantidades de reactivos que se saquen deben ser las necesarias para no malgastarlas. 10. Lave el material y los aparatos de su equipo tan pronto termine de usarlos. En la mayora de los casos, el material puede limpiarse con mayor facilidad, inmediatamente despus de su uso. 11. No use nunca una sustancia sin estar seguro de que es la indicada en la prctica, pues ello podra ocasionar un accidente. 12. Las materias slidas inservibles, como fsforos, papel de filtro, etc., y los reactivos insolubles en agua, deben depositarse en un recipiente adecuado, y, en ningn caso, en el canal de desague. 13. No tire las toallas y fsforos usados al piso ni al canal de desague, use el recipiente usado como basurero. 14. Cuando opere con sustancias inflamables es necesario siempre, antes de abrir el frasco, de que no haya llamas prximas. Los mecheros que no se estn usando deben apagarse. 15 En caso de heridas, quemaduras, etc., informe inmediatamente a su profesor.

iii

SEGURIDAD EN EL LABORATORIO SIEMPRE

Pese los reactivos en vidrios de reloj o vasos de precipitados limpios Use esptula de porcelana o plsti co resistente, para sacar sales de frascos de reactivos. Prepare las soluciones en vasos de precipitados, resistentes a variaciones de temperatura. Agregue soluciones concentradas de cidos o bases que se deseen diluir, a vasos de precipitado de volumen apropiado y con agua. Caliente los tubos de ensayo diri giendo su boca a un lugar neutro. Tome los materiales calientes usando pinzas apropiadas. Trabaje bajo campana, si hay desprendimiento de vapores. Maneje la pipeta con las manos secas y controlando el flujo con el ndice. Encienda el fsforo antes de abrir el gas del mechero. Caliente los solventes orgnicos con cocinilla elctrica o plancha. Agite las soluciones con varilla o agitador de vidrio o plstico.

Por su seguridad y la de todos NUNCA

- Ponga los reactivos en contacto directo con el platillo de la. balanza. - Use esptula de acero para reacti vos inorgnicos, pues su eventual corrosin contamina el reactivo. - Las prepare en otro material volumtrico - Haga la operacin opuesta

- Observe desde arriba el calentamiento de una solucin - Toque objetos sin protegerse las manos, si se sospecha que estn calientes. - Aspire directamente vapores para identificacin olfativa. - Controle el flujo de la pipeta con el pulgar - Encienda un mechero Bunsen, sin cerrar previamente la entra da de aire. - Acerque llamas de fsforo o mecheros de gas a solventes orgnicos. -Revuelva las soluciones con la mano.

iv

Indice
MANUAL DE LABORATORIO DE ANALISIS INSTRUMENTAL...................................................... I REGLAS GENERALES PARA EL LABORATORIO ............................................................................ III SEGURIDAD EN EL LABORATORIO .................................................................................................. IV PRACTICA N 1 REDACCION DE INFORMES CIENTIFICOS ............................................................1 PRACTICA N 2 TRATAMIENTO ESTADISTICO DE DATOS ............................................................6 PRACTICA N 3 TITULACINES POTENCIOMTRICAS DE NEUTRALIZACION .......................20 PRACTICA N 4 TITULACIONES CONDUCTIMTRICAS DE NEUTRALIZACION Y PRECIPITACION ....................................................................................................................................28 PRACTICA N 5 DETERMINACION DE CROMO EN SOLUCIONES ACUOSAS POR ESPECTROMETRIA DE ABSORCIN DE LUZ VISIBLE...................................................................39 PRACTICA N 6 DETERMINACION COLORIMETRICA DE HIERRO EN SOLUCIONES ACUOSAS POR ESPECTROMETRIA DE ABSORCIN DE LUZ VISIBLE.......................................49 PRACTICA N 7 DETERMINACION DEL PUNTO ISOSBESTICO Y LA CONSTANTE DE DISOCIACION DE UN INDICADOR CIDO-BASE............................................................................58 PRCTICA N 8 IDENTIFICACIN DE SUSTANCIAS POR ESPECTROMETRA EN EL INFRARROJO (IR) ................................................................................................................................65 PRCTICA N 9 DETERMINACIN DE HIERRO Y NQUEL EN SOLUCIONES ACUOSAS POR ESPECTROMETRA DE ABSORCIN ATMICA ............................................................................73 PRCTICA N 10 DETERMINACIN DE SODIO Y POTASIO EN SOLUCIONES ACUOSAS POR FOTOMETRA DE LLAMA..................................................................................................................79 PRCTICA N 11 SEPARACIN DE LOS PIGMENTOS NATURALES POR CROMATOGRAFA EN COLUMNA ......................................................................................................................................87 PRCTICA N 12 CARACTERIZACIN DE LOS PRODUCTOS DE COMBUSTIN DE UNA MUESTRA DE CRUDO POR CROMATOGRAFA EN FASE GAS (GC)..........................................94 PRCTICA N 13 DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE CAFENA DE UNA MUESTRA PROBLEMA POR CROMATOGRAFA LIQUIDA DE ALTA PRECISIN (HPLC) .....97

PRACTICA N 1 REDACCION DE INFORMES CIENTIFICOS Introduccin El estudiante del Laboratorio de anlisis Instrumental se encuentra al final del programa acadmico de la carrera, por lo que en muchos casos, se enfrenta por ultima vez a la tarea de cursar una asignatura de Laboratorio. Es vital que en este punto de su formacin, adquiera la metodologa de investigacin que le permitir en sus actividades futuras, resolver problemas con un enfoque sistemtico. De aqu que, a travs de esta asignacin, se pretenda promover el desarrollo de su habilidad de expresin escrita y grfica con el objetivo de que en su vida profesional, demuestre capacidad para organizar, estructurar, organizar y presentar correctamente los resultados de sus esfuerzos en la investigacin de un problema. Esta asignacin se repetir para el resto de los trabajos experimentales del curso de Laboratorio. Objetivo General Lograr que el estudiante conozca y aplique las normas ms comunes para la redaccin de informes cientficos. Indicaciones para la elaboracin de un informe A continuacin se muestra una sntesis de las normas ms comunes para la redaccin de un informe cientfico. Se recomienda al estudiante acudir a otras referencias bibliograficas para completar la informacin aqu mostrada. Un artculo cientfico debe contener las siguientes partes: Titulo Debe ser informativo, claro y completo. De ser posible, original, atractivo y breve (alrededor de 11 12 palabras). El ttulo describe el propsito fundamental de la investigacin y el mtodo por el cul se pretende lograrlo. Ejemplo: Determinacin de las Constantes de Disociacin del Acido Actico y Acido Fosfrico por Anlisis Potenciomtricos

Resumen Debe explicar en qu consiste el problema, cmo fue tratado, y cul es la solucin propuesta para los datos obtenidos. Su extensin no debe exceder las 200 palabras. La finalidad del resumen es presentar una visin global del contenido del informe. No incluye figuras, grficas, tablas; entre otros, slo texto. Ejemplo: Las Tcnicas Potenciomtricas permiten el monitoreo continuo del pH durante las titulaciones acido-base mediante el uso del electrodo de vidrio, cuya membrana es sensible a los iones de hidrgeno. En este trabajo experimental se muestra la aplicabilidad de la Potenciometra en la construccin de las curvas de variacin de pH durante la titulacin de muestras de concentracin desconocida de acido clorhdrico, acido actico y acido fosforito. A travs de las relaciones de concentracin entre los iones en solucin en las cercanas del punto de equivalencia, se logr estimar un valor de (1.78 0.01)*10-5 y (7.47 0.03)*10-3

para las constantes de disociacin del acido actico y el acido fosfrico, respectivamente. Las discrepancias porcentuales entre los valores experimentalmente determinados y los tericos oscilan alrededor del 10 %. Mediante un anlisis de propagacin de errores aleatorios se demostr que tales discrepancias pueden explicarse usando la apreciacin de los instrumentos de medicin usados. Ntese que el nmero total de palabras es de 151 Introduccin Debe mostrar la visin particular del autor acerca de la investigacin que realiz. Da muestras de su personalidad, debido a que demuestra cual es su forma de enlazar las ideas. Debe responder a las preguntas bsicas de qu?, para qu?, por qu? Se considera que est estructurada en cuatro partes fundamentales, enlazadas entre s y presentadas de forma continua (no se acostumbra a hacer secciones separadas con subttulos): o Antecedentes o bases tericas y/o prcticas del tema: Deben ser citadas las investigaciones similares precedentes a la investigacin, en el caso de que aporten datos valiosos. o Justificacin o Objetivos: son los planes de accin de la investigacin formulados en lenguaje tcnico. Se encabezan con el tiempo infinitivo del verbo que los describe. o Importancia de la investigacin La extensin mxima exigida para este curso de laboratorio es de 500 Palabras. Recuerde que no se trata de hacer una compilacin de toda la informacin sobre el tpico que aparece en las fuentes disponibles. Citas Bibliograficas Es importante que durante la preparacin de la introduccin, se utilicen correctamente las citas bibliograficas. Debe recordarse que una cita bibliogrfica es un texto, creado por otro autor, que introducimos, de manera directa o indirecta en el reporte, para fundamentar, enriquecer, validar o contrastar nuestras afirmaciones sobre el tema. 1) Citas textuales.- Cuando se transcribe textualmente a otro autor, el fragmento debe figurar entre comillas para que quede claro donde empieza y donde termina lo que dice el autor y lo que dice el redactor, o sea, nosotros. No deben tener una extensin mayor de 3 lneas 2) Citas no textuales.- A veces, el fragmento que queremos citar textualmente es demasiado extenso, lo que podra dificultar la continuidad del hilo conductor del discurso. En estos casos, se puede citar al autor no textualmente sino haciendo nosotros mismos una breve parfrasis de lo dicho. Aunque el uso adecuado de las citas textuales, le confiere gran elegancia al texto, se le recomienda al estudiante que durante sus primeros trabajos, evite su uso, y emplee en cambio las citas no textuales. De esta manera, se obligara a desarrollar un texto novedoso en base a su creatividad, y la capacidad para interconectar los conceptos de este curso, con aquellos aprendidos a otros niveles de su carrera.

Mtodos y Materiales Se describen los pasos seguidos en la realizacin de la investigacin, considerando la justificacin que cada uno de ellos tiene dentro del procedimiento. La exposicin de estos datos es continua, por lo que no se deben separar los prrafos con vietas o nmeros. Se prefiere no hacer referencia a procedimientos, valores de concentracin o cantidades de sustancias, cuando los mtodos son muy comunes y conocidos. Se debe fusionar con lo anterior, una resea acerca de la configuracin, principios de funcionamiento y criterios para la seleccin de los equipos utilizados en el estudio.

Ejemplo: Para la medicin de los valores de transmitancia T se us un espectrofotmetro Spectronic 20 analgico (Milton Roy Company) con una precisin de 1 %T. Este equipo dispone de un compartimiento de muestras para cubetas de plstico o cuarzo segn sea la naturaleza de la misma. Se realizo el ajuste de corriente oscura o de 0 % T en ausencia de muestra en el compartimiento, y el ajuste de100% T para el blanco correspondiente de este anlisis. Este procedimiento se repiti luego de cada cambio en la longitud de onda. Para el estudio de la variacin de la absorbancia con la concentracin de analito se prepararon soluciones 0,01; 0,02; 0,03; 0,04 y 0,05 M de cromo III. Se midi la variacin del %T en el intervalo de 400-700 nm para alcuotas de las soluciones anteriores. Los valores obtenidos fueron usados para construir la curva de calibracin del mtodo experimental. NO HACER ESTO. Determine el espectro de absorcin de la sal de cromo (III), con una concentracin de 0.02M en la forma siguiente: Ajuste la longitud de onda a 375 nm. Ajuste el instrumento para que lea 0% T cuando no hay cubetas y 100% T cuando la cubeta llena de agua est en el compartimiento de muestras. Llene la otra cubeta con la solucin de Cr(III). Lea el %T de la solucin. Vuelva a reajustar el 0% y 100% y vuelva a leer el %T de la muestra. Antes de cambiar a otra longitud de onda, gire el botn del control de la luz hacia la izquierda. Ajuste la longitud de onda a 400 nm. Reajuste el 0% T y 100% T con el blanco (agua destilada). Coloque nuevamente la solucin de Cr(III) en el compartimiento de muestras y lea el %T. Repita hasta que est satisfecho con su medicin. Contine este procedimiento a 405, 415, 425, 440, 455, 470, 490, 500, 520, 530, 540, 550, 570, 575, 580, 600 625 nm vace y lave las cubetas con agua.

Resultados y Discusin de Resultados Se analiza la informacin ofrecida por los resultados del trabajo, haciendo uso y referencia de tablas, grficas, fotografas, o algn otro elemento empleado para su presentacin. Se dan respuestas o explicaciones a las tendencias o comportamientos observados; y a su sensibilidad frente a las variables consideradas, haciendo nfasis en los principios cientficos regentes. Suele indicarse la discrepancia entre los valores obtenidos o reales, y los tericos o esperados.

Se fundamenta la eliminacin de algunos puntos de la data experimental, cuando se considera que distan excesivamente de la realidad. Toda ecuacin debe aparecer numerada. Todas las tablas y figuras deben estar titulados y numerados; y acompaados de la fuente que suministr los datos que presentan. Los ttulos de tablas y figuras deben ser descriptivos, y siempre dar referencia al trabajo experimental. Los ttulos de las tablas se colocan arriba de estas, mientras que los ttulos de las figuras se colocan debajo de las mismas. Los grficos o diagramas se catalogan como Figuras.

Ejemplo de ecuacin: A A1 log = pH pK A2 A Ecuacin 1 Ejemplo de Tabla:

Tabla 1. Variacin de la absorbancia de la solucin de Ferrona por la adicin de electrolitos
L(ms)

25

20 y = 0,147x + 22,000 R2 = 1,000 15

10 y = 4,365x + 1,028 R2 = 1,000 5

Sal adicionada Fluoruro de sodio Tartrato de sodio y potasio Oxalato de Sodio Ninguna

Absorbancia de la muestra 0,44 0,45 0,45 0,41

0 0 2 4 6 V tit(mL) 8 10 12 14

Ejemplo de Figura:

Figura 1. Curva de la titulacin Potenciomtricas de la solucin de acido actico con solucin de hidrxido de amonio 0.1 M

Conclusiones Se verifica el cumplimiento de los objetivos. Se sintetiza en oraciones cortas cada logro del trabajo experimental, registrando valores caractersticos de ste, con los respectivos parmetros que le validan (intervalos de confianza, discrepancias porcentuales, resultados de un anlisis del factor t, etc.) Se acostumbra a escribir por separado cada conclusin, usando alguna numeracin o vieta, siguiendo el orden escogido para los objetivos, al principio del informe.

Referencias Bibliograficas Deben citarse tantas referencias como documentos se hayan consultado para la realizacin de la investigacin, ya sea que hubieran sido empleados para realizar citas textuales o no textuales. Se colocan en orden alfabtico estricto, en base a los apellidos de autores o de ttulos en caso de que no aparezca el autor. Se presentan uno de los formatos ms comunes para la inclusin de libros, artculos cientficos y paginas web. Articulo Cientfico: Angelino, S., Suess, D.T. and Prather, K.A.(2001). Formation of aerosol particles from reactions of secondary and tertiary alkylamines: Characterization by aerosol time-of-flight mass spectrometry. Environmental Science & Technology 35 (15), 3130-3138.

Libro: Seinfeld, J.H. and Pandis, S.N. (1998). Atmospheric Chemistry and Physics: From Air Pollution to Climate Change. John Wiley & Sons, Inc., USA., 1326 pp. Fuente electrnica Hudson, J. L. & Rapee, M. R. (2001). Parentchild interactions and anxiety disorders: An observational study. Behaviour Research and Theraphy, 39, 1411-1427. Extraido el 23 Enero, 2002, de http://www.sibuc.puc.cl/sibuc/index.html Jencks, C. & Phillips, M. (1999). Aptitude or achievement: Why do test scores predict educational attainments and earnings? En S. E. Mayer & P. E. Peterson (Eds.) Earning and learning: How schools matter (cap. 2). Extraido el 31 Enero, 2002 del sitio Web de Columbia University: http://www.columbia.edu/cu/lweb/indiv/ets/offsite.html#finding y luego http://brookings.nap.edu/books/0815755295/html/15.html#pagetop

Apndices y Anexos Comprenden los datos experimentales sin procesar y los detalles de su forma de procesamiento, la obtencin de curvas de calibracin o ajuste de datos; as como encuestas, mapas, desarrollos de frmulas, entre otros.

Asignacin de este Trabajo Experimental Siguiendo la estructura y recomendaciones dadas con anterioridad, y en base al material de lectura dado al inicio de esta prctica, redacte con sus propias palabras (sin hacer uso de las citas textuales o no textuales) 1. El Resumen 2. La Seccin de Mtodos y Materiales 3. Las conclusiones

DEBE ENTREGARLOS ANTES DE CULMINAR LA SESION DE LABORATORIO

Referencias 1. Caldern, S.M. (2008). Redaccin de Informes cientficos. Extraido el 07 de Septiembre del 2008 de http://webdelprofesor.ula.ve/ingenieria/silvimar/RedacciInformes.pdf

2. Cazau, P. (2005). La cita bibliografica. Biblioteca de Psicologa. Universidad Complutense de Madrid. Extraido el 07 de Septiembre de 2008 desde
http://www.ucm.es/BUCM/psi/12130.php

PRACTICA N 2 TRATAMIENTO ESTADISTICO DE DATOS Introduccin Para garantizar la validez de las conclusiones emitidas al final de un estudio de laboratorio, es necesario cuidar de la reproducibilidad y confiabilidad de los resultados provenientes de las observaciones experimentales. Es bien sabido que an, bajo las mismas condiciones de trabajo, las observaciones que se desprenden de un procedimiento experimental, pueden resultar distintas entre s, debido a la variabilidad asociada a las acciones humanas, y a los instrumentos de medicin. Para un experimentador, es de vital importancia poder discernir cuando esta diferencia entre las medidas, concuerda con lo esperado; o cuando es una seal de problemas dentro del protocolo de recoleccin, preparacin y anlisis de sus muestras en el laboratorio. Estas diferencias cuantifican en trmino de los llamados errores personales, instrumentales metdicos o aleatorios. Para alcanzar este objetivo, el experimentador debe evaluar la reproducibilidad; propiedad que implica el encontrar los mismos valores para las propiedades de una muestra cuando es estudiada a travs de un determinado mtodo experimental. El experimentador puede entonces comprobar que para una misma muestra, aunque las observaciones de sus propiedades pueden resultar distintas en una serie de repeticiones, el valor promedio resultante debe tender siempre a un valor fijo, la llamada media de las observaciones. De aqu que aunque la reproducibilidad es una variable cualitativa, sea posible medirla a travs de la desviacin con respecto a esta media de las replicas del anlisis de la muestra en igualdad de condiciones, llamada comnmente desviacin estndar. Esta desviacin es por tanto, una medida no solo de la reproducibilidad sino tambin de la precisin del mtodo de anlisis. Un mtodo preciso es por tanto uno que permite obtener datos reproducibles. Sin embargo, la reproducibilidad de los resultados no es condicin suficiente para garantizar la validez de los mismos, es necesario en muchos casos, efectuar un anlisis comparativo de la media experimental observada con respecto al llamado valor verdadero, terico o esperado de la variable en estudio, de manera tal de poder garantizar su confiabilidad. La confiabilidad y la exactitud estn por tanto relacionadas entre si. Un mtodo confiable es por tanto uno que permite al experimentador, obtener valores exactos para las variables en estudio. Debido a que se estima que el conjunto de replicas de las observaciones experimentales durante un procedimiento de laboratorio, tiene un comportamiento semejante al de los elementos de una distribucin normal o gaussiana; se pueden realizar anlisis comparativos destinados a medir la diferencia entre ambos conjuntos. Una diferencia notable, es decir superior a la esperada debido a la aleatoriedad de los procedimientos, se dice que es significativa, y debe ser reportada como un indicador de la reproducibilidad y confiabilidad de los resultados. El estudiante de Laboratorio de anlisis Instrumental, o experimentador en este caso, debe ser capaz de aplicar las tcnicas estadsticas comunes para demostrar la reproducibilidad y confiabilidad de sus resultados, haciendo uso de los conocimientos aprendidos en el curso Estadstica, aprobado en el quinto semestre de la carrera de Ingeniera Qumica.

Objetivo General Instruir al estudiante en el uso y aplicabilidad de las tcnicas estadsticas ms importantes para el tratamiento y anlisis de datos provenientes de experiencias de laboratorio

Conocimiento previo requerido y visto en el curso Estadstica del quinto semestre de la carrera de Ingeniera Qumica. CAPITULO 9. ESTIMACION Estimacin puntual. Propiedades de los estimadores. Estimacin por intervalos para la media, proporcin, diferencia de medias y diferencia de proporciones, usando la distribucin normal. CAPITULO 10. CONTRASTE DE HIPOTESIS Fundamentos de la contratacin de hiptesis. Formulacin de hiptesis. Hiptesis simple y compuesta. Tipos de errores en la contratacin. Etapas para la contratacin de hiptesis. Contraste de hiptesis para la media, proporcin, diferencia de medias y diferencias de proporciones. Relacin entre los intervalos de confianza y la contratacin de hiptesis. CAPITULO 11. DISEO DE EXPERIMENTOS Diseo de experimentos estadsticos. Pruebas de significancia y anlisis de varianza. Casos elementales Manejo y anlisis de datos Determinacin de los estimadores de la distribucin Normal Es importante fijar al principio del anlisis, cual es la variable que ser usada para medir el cumplimiento de los objetivos del trabajo experimental; e identificar posteriormente si la medicin de esta variable se realizara varias veces o en replicas. Por ejemplo, en una titulacin potenciomtrica acido-base la variable a medir puede ser la concentracin de una muestra acida problema; y las repeticiones sern los resultados obtenidos para diversas alcuotas de la misma muestra. Estas concentraciones experimentalmente determinadas o replicas, son susceptibles al anlisis estadstico, debido a que provienen de una misma muestra y deben por tanto mostrar un comportamiento semejante al de una distribucin normal; por supuesto, siempre y cuando no provengan de un procedimiento experimental errado. Se dice que un conjunto de observaciones (elementos, individuos, etc.) siguen una distribucin normal o gaussiana, si la frecuencia de su aparicin en una serie de infinitas observaciones, sigue una ley de distribucin igual a la mostrada en la ecuacin 1, con una representacin grafica como la mostrada en la Figura 1.

y := n( x , , ) =

2 1 (x ) 2 2 2

Ecuacin 2

Figura 2. Forma Tpica de la distribucin Normal o Gaussiana

La variable x es la variable a medir. La variable y, representada en el eje de las abscisas, indica el numero de veces que se repetira una observacin determinada de la variable x, si se hicieran infinitas medidas. En el ejemplo de la titulacin potenciomtrica acido-base, x es la concentracin de la muestra problema, y y es el numero de veces que podra obtenerse experimentalmente esta concentracin, si se analizaran infinitas alcuotas de la muestra problema. Como se observa en la Figura 1, la distribucin normal es simtrica alrededor del pico o mximo de frecuencias, este valor representa la llamada media de la distribucin (x), y es por tanto la medida con mayor probabilidad de repeticin en la serie infinita de observaciones. Es el primer parmetro caracterstico de la distribucin normal. Ntese que en la Figura 1, ambas distribuciones poseen la misma media, pero difieren en el grado de amplitud o separacin de la curva alrededor de la media. Este es el segundo parmetro caracterstico, de la distribucin normal y es denominado varianza (x). Es un indicativo de la desviacin de las observaciones con respecto a la media. La distribucin normal o gaussiana puede observarse cuando se estudia el tamao de las partculas en aerosoles monodispersos de prueba, en ciertos tipos de polen y esporas, o en la produccin de esferas de ltex sintticas. Como durante un trabajo experimental es imposible realizar infinitas mediciones, debe acudirse a tcnicas para estimar los parmetros caractersticos de la distribucin normal que es equivalente al conjunto conformado por las replicas realizadas en el laboratorio. Si la distribucin conformada por las replicas siguiera el comportamiento de una distribucin normal, su media podra estimarse en base al promedio aritmtico de las observaciones, y su varianza seria equivalente a la desviacin estndar con respecto al promedio. Esto es cierto si y solo si se cumple el teorema del Limite Central que reza: An cuando la poblacin original no este distribuida normalmente, la distribucin muestral tiende a la distribucin normal cuando n aumenta (n>30) por tanto:

x = x =

Ecuacin 3

n
n

Donde

(x
i =1

Ecuacin 4

Cuando el numero de observaciones o replicas, n<30, los parmetros pueden estimarse a travs del promedio aritmtico ( x ) de las observaciones, y de la desviacin estndar (s) de las observaciones con respecto a este promedio. Sin embargo debe cuantificarse su validez o confiabilidad posteriormente. En el caso de que n <30:
n < 30

x=

xi
i =1

n <30

s=

(x
i =1

x)

n 1

Ecuacin 5

x x

s x

Evaluacin de la precisin y exactitud de los resultados Para medir la precisin de una serie de observaciones, y por ende su reproducibilidad, es necesario calcular la dispersin alrededor de la media en trminos de la desviacin estndar o de la desviacin estndar relativa a travs de la ecuacin 5.
n < 30

s=

(x
i =1

x)

n 1

RSD ( % ) =

s 100 x

Ecuacin 6

Si una medida es precisa, la desviacin alrededor de la media debe ser pequea. Debe ser fcil distinguir ahora cual de las dos distribuciones de la Figura 1 proviene de un mtodo de mayor precisin. Para medir la exactitud, y por ende su confiabilidad, es necesario calcular el error absoluto (E) o el error relativo (ER) del valor observado con respecto al valor verdadero a travs de la ecuacin 6. Tambin podra usarse la discrepancia porcentual (% Discrepancia).

E = Observado Verdadero E ER = 100 = DiscrepanciaPorcentual Verdadero

Ecuacin 7

Validez de los estimadores o Lmites de Confianza Cuando se estima que el conjunto de observaciones de la variable en estudio sigue adecuadamente el comportamiento de una distribucin normal, puede garantizarse debido a la naturaleza de la funcin matemtica descriptora, que un porcentaje fijo de las observaciones en una serie infinita, se encontraran entre un lmite inferior y un lmite superior. El intervalo definido por estos lmites, es llamado intervalo de confianza. Para explicar con mayor detalle esta afirmacin, se muestra en la figura 4, que para una serie infinita de mediciones, el 68 % de todas los posibles valores se hallaran en el intervalo definido por pueden decirse para el 95 %, y el 99,7 %

. Anlogas afirmaciones

Figura 3 Intervalos de confianza a partir de los parmetros caractersticos de la distribucin.

Cuando no se cuenta directamente con los parmetros caractersticos de la distribucin, como es el caso de la mayora de los resultados analticos, el intervalo de confianza asociado con la medicin de una variable debe determinarse a partir de los llamados estimadores de la distribucin. Si el nmero de observaciones es superior a 30, puede garantizarse que el 95% o 99% de todos los posibles valores de la variable medida se encuentran entre los intervalos definidos por la ecuacin 7.

x z < < x + z n n x 1.96 < < x + 1.96 n n x 2.58 < < x + 2.58 n n

( 95% ) ( 99% )

Ecuacin 8

Cuando el nmero de observaciones es inferior, n < 30, el intervalo de confianza debe determinarse haciendo uso de la distribucin estadstica t, o t-Student por su denominacin en ingles; haciendo uso de la siguiente analoga: Si una distribucin caracterizada por los siguientes estimadores
s=
t=

(x x )
i =1 i

x debera distribuirse de acuerdo a la siguiente funcin densidad: s n

n 1

x=

x
i =1

se comportara como una distribucin normal, el parmetro t igual a

Ecuacin 9

Donde representa los grados de libertad asociados a la medicin, y es igual a n-1 Los valores de t para distintos grados de libertad y distintos grados de confianza se encuentran tabulados, y pueden hallarse en cualquier libro de estadstica.

10

Figura 4. Determinacin del intervalo de confianza para conjuntos pequeos de observaciones

Errores .Tipos de Errores. Propagacin. Tal como se dijo antes, las observaciones experimentales estn sujetas a variacin, aun cuando se realicen en las mismas condiciones y/o usando el mismo procedimiento. A las causas de esta variacin se le denominan Errores. Si las causas se pueden identificar claramente, se denominan errores determinados; de lo contrario se denominan errores indeterminados. Obviamente, los errores determinados pueden corregirse, mientras que los errores indeterminados pueden reducirse a un mnimo, pero nunca eliminarse. De una manera ms precisa, los errores se clasifican en: 1. Errores Gruesos o Accidentales: implican la generacin de una observacin completamente desviada del valor esperado para la muestra, y por tanto requieren de la eliminacin de la observacin del conjunto, y la nueva realizacin del anlisis a partir de una nueva alcuota de la muestra o una muestra nueva. Son causados por errores personales en la preparacin de soluciones, contaminacin de las muestras, lectura de propiedades, etc.; o errores instrumentales como los que ocurren por fallas de equipos. Por ejemplo, en una titulacin potenciomtrica acido-base, la incorrecta medida del volumen de solucin titulante o de solucin a titular, o la falla en el convertidor analgico de seal en el pH-metro, representaran errores gruesos. 2. Errores Sistemticos: se caracterizan por introducir desviaciones en una misma direccin para las observaciones de una serie con respecto al valor esperado para la muestra. Son generalmente causados por calibracin errnea de los instrumentos, o errores en diluciones a partir de soluciones concentradas. Estos errores afectan la exactitud, y por

11

tanto pueden cuantificarse usando el valor verdadero o esperado. Debido a esto, pueden reconocerse y reducirse parcial o completamente. Por ejemplo, si durante la calibracin de un pH-metro con una solucin buffer de pH=4, se fija incorrectamente el pH en 3,8; se espera que todas las medidas del pH estn por debajo del valor real de las muestras. 3. Errores Aleatorios: se caracterizan por introducir desviaciones sin ninguna direccin preferencial para las observaciones de una serie con respecto al valor esperado para la muestra. Provienen de la imposibilidad humana de efectuar dos acciones exactamente iguales, de la precisin de los equipos e instrumentos de laboratorio. Ellos afectan la precisin, y por tanto pueden cuantificarse a travs de la desviacin estndar. No pueden eliminarse, solo reducirse mediante una practica cuidadosa de los procedimientos.

Valor promedio o valor verdadero

25,55 25,5 25,45 25,4
V(mL

Valor Experimental

Error accidental o grueso

25,55 25,5 25,45

V(mL

25,35 25,3 25,25 25,2 25,15 25,1 0 2 4

REPLICA

25,4 25,35 25,3 25,25 25,2

10

4
REPLICA

10

Figura 5. Ejemplo de errores en resultados analticos. a) Errores accidentales o gruesos, y errores aleatorios b) Errores sistemticos

12

Cuando para generar los resultados de un trabajo experimental es necesario procesar las observaciones, los errores aleatorios asociados a la medicin de cada una de las variables de inters, se amplifican e inciden en la confiabilidad y reproducibilidad del dato final. Por ejemplo, en una titulacin potenciomtrica acido-base, la precisin con la que se determina la concentracin de la muestra problema, depende directamente de la precisin asociada a los instrumentos volumtricos para la medicin no solo del volumen de la alcuota de la muestra problema, sino tambin del volumen de la solucin titulante; y de la precisin de los instrumentos usados para su preparacin y normalizacin. En este caso decimos que el error asociado a la variable determinada numricamente, es consecuencia del error asociado a las variables experimentales que se miden para determinarla. La tcnica de evaluacin de la propagacin de los errores aleatorios es por tanto, til cuando los resultados a reportar no provienen de la medicin directa de propiedades de la muestra; sino que resultan de la combinacin de variables medidas experimentalmente. La figura 3 muestra algunas de las reglas mas usadas para la cuantificacin del intervalo de confianza de una propiedad determinada a partir de variables medidas experimentalmente.

Figura 6 Funciones matemticas para estimar la propagacin de errores aleatorios.

As como es posible determinar la propagacin de los errores aleatorios, es posible cuantificar el efecto que un error sistemtico puede tener sobre un resultado determinado. La figura 4 resume las reglas matemticas ms importantes para lograr este objetivo. Este procedimiento es de vital importancia para ahorrar recursos y tiempo en el momento de querer eliminar la fraccin del error total, que es consecuencia de un error sistemtico, cometido involuntariamente durante el trabajo experimental.

13

Figura 7. Funciones matemtica para estimar la propagacin de errores sistemticos.

Figura 8. Procedimiento para comparar una media experimental con un valor verdadero

14

Figura 9. Procedimiento para comparar las medias experimentales de dos muestras con igual varianza

Figura 10. Procedimiento para comparar medias experimentales de muestras con distinta varianza

15

Figura 11. Procedimiento para comparar datos emparejados provenientes de muestras con igual varianza

Figura 12 Procedimiento para comparar varianzas muestrales

16

Figura 13. Procedimiento para detector valor anmalos

Analisis de Varianza de un solo Factor

Para facilitar la explicacin consideremos la siguiente situacin. En su prxima prctica de laboratorio, se le proveer de una muestra problema de Acido Fosfrico en Agua. Su misin ser determinar la concentracin desconocida usando la tcnica de Potenciometra. Ahora, si todos los estudiantes de su seccin reciben la misma muestra; los resultados individuales para la concentracin de la muestra problema no deberan variar ms all de lo esperado para una serie de datos distribuidos normalmente; puesto que la identidad del analista no debera ejercer una influencia significativa sobre el resultado hallado. Si cada estudiante analizara por triplicado la muestra recibida, el promedio de sus valores no debera ser significativamente distinto del promedio de sus compaeros. La pregunta a la cual debemos dar respuesta es: Es el valor promedio reportado por el Analista 1 significativamente distinto a los valores promedios reportados por los Analistas 2, 3, 4? En lugar de hacer comparaciones uno a uno de los valores, usamos el Anlisis de Varianza de un solo Factor o Anova-1 El objetivo del Anlisis de Varianza de un solo Factor, es precisamente, comprobar si la identidad del analista (factor o variable independiente) influye de manera significativa sobre la concentracin de Acido Fosfrico en la muestra (Variable dependiente?). Cada analista, representa entonces un nivel del factor; si tienen a analistas, entonces se tendrn a tratamientos o niveles del factor, a medias experimentales y la hiptesis ser:

17

H O := 1 = 2 = ... = a H1 := i j para al menos un par (i, j )

Ecuacin 10

Si consideramos que la media global yii (proveniente de la consideracin de todos los resultados de todos los estudiantes para la misma muestra problema) puede aproximarse al promedio de los promedios por tratamiento, entonces cada media

i yi i

para cada analista deber diferir de la media global

en un mnimo factor

i . Por supuesto, estando las medias i , j ,...a distribuidas normalmente alrededor de , la suma de los i debe ser igual a cero. Este es el llamado modelo de efectos fijos.
i = + i =
i = 1, 2..a i = 0
i =1 a

i =1

Ecuacin 11

cual parte de i proviene de la variacin entre las rplicas del mismo analista, y cual parte de la variacin proviene de las diferencias entre los analistas. De esta forma la variabilidad total (SST) se divide en la variabilidad de las observaciones dentro de los tratamientos respecto al promedio del tratamiento (SSE) y la variabilidad entre los promedios de los tratamientos con respecto al promedio global (SStratamientos). La relacin entre estas variables se muestra en la Ecuacin 11. En nuestro caso SSE representa la varianza interna existente entre las rplicas de cada analista; y SStratamientos , la varianza entre los promedios de los analistas y el promedio global.

La denominacin de Anlisis de Varianza se basa en el hecho de que se debe determinar

SST = SStratamientos + SSE SST = yij yii

i =1 j =1 a n

= n yii yii + yij yii

i =1 i =1 j =1

2
Ecuacin 12

Una vez divididas las dos fuentes causantes de la varianza, procedemos a ponderarla por el respectivo nmero de grados de libertad. Si a es el numero de tratamientos o niveles del factor, y n es el nmero de rplicas por tratamiento; se tiene un total de N datos. Para SStratamientos, el promedio de variacion por tratamiento seria SStratamientos/(a-1), y para SSE el promedio de variacin por replica seria SSE/(a*(n-1)) o SSE/(N-a)

18

La pregunta es: Es la varianza promedio entre los tratamientos significativamente distinta a la varianza promedio entre las replicas de un tratamiento? Para comparar varianzas usamos un F-test, y el valor calculado es: SStratamientos ( a 1) Fo = Ecuacin 13 SS E ( N a) Si no existen diferencias significativas entre las varianzas entonces, y la hiptesis Ho se cumple entonces este Fo debe ser menor que el F crtico reportado en tablas para a-1 y Na grados de libertad. De ser as entonces podra concluirse que el factor (identidad del analista) no tiene una influencia significativa sobre la variable (concentracin de Acido Fosfrico en la muestra problema).

Asignacin de este Trabajo Experimental 1. En base al material de lectura dado en la prctica anterior, realice todos los anlisis estadsticos correspondientes y/o aplicables a los datos reportados. DEBE ENTREGAR SUS RESULTADOS ANTES DE CULMINAR LA SESION DE LABORATORIO 2. Resuelva la serie de ejercicios se entregara al final del trabajo experimental haciendo uso del paquete para anlisis de datos provisto por EXCEL. Actvelo en la opcin Herramientas Complementos. Entregue los ejercicios resueltos la prxima semana antes de la realizacin de la prctica.

Referencias 1. Skoog, D. y D. West (1975) Introduccin a la Qumica Analtica. Editorial Reverte, S.A. Madrid, Espaa. p.p. 38-63 2. Kellner, R., J.M. Mermet, M. Otto, H.M. Widmer (Editores) (1998) Analytical Chemistry. Wiley-VCH, Verlag- Alemania. p.p. 1-40 3. Montgomery, D. C. (2002) Diseo y Anlisis de Experimentos. 2da ed. Editorial Limusa S.A. de C.V. Mexico D.F., Mexico. p.p. 60-125

19

PRACTICA N 3 TITULACINES POTENCIOMTRICAS DE NEUTRALIZACION Introduccin Durante este trabajo experimental el estudiante deber utilizar una celda electroqumica para determinar la variacin de la acidez, en unidades de pH, durante la titulacin de una solucin acida acuosa con una solucin bsica diluida. El dispositivo contentivo de la celda, es un pH-metro, y detecta la variacin de acidez por medio de la variacin del potencial elctrico entre un par de electrodos, uno de referencia, generalmente un electrodo de calomel saturado; y un electrodo de vidrio, sensible a los iones hidrogeno, ambos combinados en un solo dispositivo que se sumerge en el sistema cuya acidez se quiere determinar. Este tipo de anlisis se denomina titulacin potenciomtrica de neutralizacin, debido a que el curso de la titulacin se sigue a travs de la diferencia de potencial elctrico entre el sistema solucin a titular/solucin titulante con respecto al potencial del electrodo de referencia. Las titulaciones Potenciomtricas de neutralizacin se prefieren cuando la solucin a analizar tiene una fuerte coloracin, o se requiere ubicar con mayor precisin la posicin del punto de equivalencia. A lo largo del trabajo experimental, el estudiante conocer como usar y calibrar un instrumento para medir el pH, y se familiarizara con el funcionamiento del electrodo de vidrio como ejemplo de un electrodo primario selectivo a una especie inica. Tambin conocer como construir una curva de titulacin a partir de la medicin del pH en funcin del volumen de solucin titulante aadido, y como usar los datos generados para determinar el punto de equivalencia a travs de la derivacin numrica. Objetivos Generales Determinar la concentracin de soluciones problema de electrolitos fuertes y dbiles por medio de titulaciones potenciomtricas Aplicar la potenciometra en la titulacin de neutralizacin para determinar las constantes de disociacin del acido fosfrico Conocer la aplicabilidad de la titulacin potenciomtrica para determinar la acidez total en muestras de vino Reactivos y Material de Laboratorio Instrumento para la medicin del pH equipado con un electrodo de vidrio combinado Motor para agitacin y barra magntica. Vasos de precipitado de 250 ml Bureta de 50 ml Pipeta de 25 ml Cilindros graduados de 100 o 50 ml. SOLUCIONES Solucin de Hidrxido de Sodio (NaOH) 0.1M. Solucin de Acido Fosforico (H3PO4) 0.1M Solucin tampn pH 4 7 para calibracin del pH-metro Solucin problema de acido fosforico. Vino Rosado o Vino Blanco

20

Metodologa Experimental Calibracin del equipo para medir pH Encienda el aparato y djelo encendido por 15 minutos. Use las soluciones tampn (pH 4 y pH 7) para calibrar el instrumento. Enjuague los electrodos con agua destilada. No limpie el exceso de agua con papel u otro material. Cuide siempre de que el electrodo no toque las paredes o el fondo del vaso de precipitado, y que permanezca sumergido en la solucin a estudiar. Operacin del equipo para medir pH Estas instrucciones son vlidas para todos los pH-metros del laboratorio Durante este trabajo experimental siempre realizara las mediciones de pH con agitacin de la solucin por parte de una barra magntica, por lo que deber ser muy cuidadoso. Coloque la barra magntica de agitacin en la solucin a analizar haciendo uso del imn (no toque la barra con las manos), de tal forma que no toque el electrodo al rotar. Sumerja el electrodo de vidrio en la solucin. Cuide siempre de que el electrodo no toque las paredes o el fondo del vaso de precipitado, y que permanezca sumergido en la solucin a estudiar. Inicie la agitacin de la solucin a baja velocidad, cuidando de que la barra magntica no roce al electrodo. Titulacin de una solucin de Acido Fosforico de concentracin conocida Tome una alcuota de 25 ml de la solucin de cido fosfrico 0.1M y diluya con agua destilada hasta 100 ml en un vaso de 250 ml. Agite la muestra, mida y registre el pH de la solucin se indic en la seccin de operacin del pH-metro, antes de aadir solucin de hidrxido de sodio. Inicie la titulacin aadiendo 1 mL de la solucin de NaOH 0.1 M. Espere hasta la estabilizacin y lea el valor del pH. Contine con adiciones sucesivas de 1 mL de la solucin titulante, cuidando siempre de esperar hasta la estabilizacin antes de tomar las lecturas luego de cada adicin. En la proximidad de los puntos de equivalencia se deben hacer adiciones de no ms de una o dos gotas. Se debe continuar la titulacin hasta alcanzar un pH de 11. Si es necesario con el objeto de comprobar sus resultados repita la titulacin. Registre sus valores en la tabla correspondiente Determinacin de la acidez total de una muestra de vino por titulacin potenciomtrica En un vaso de precipitado de 250 ml, previamente enjuagado con agua desionizada, coloque 100 mL de agua desionizada. Agite el agua, mida y registre el pH del agua desionizada tal como se indic en la seccin de operacin del pH-metro. Detenga la agitacin. Tome una alcuota de 10 ml del vino y adala a los 100 mL de agua desionizada. Agite de nuevo la muestra y anote el pH de la solucin diluida de vino. Note el color antes de aadir solucin de hidrxido de sodio. Inicie la titulacin aadiendo 1 mL de la solucin de NaOH 0.1 M. Espere hasta la estabilizacin y lea el valor del pH. Contine con adiciones sucesivas de 1 mL de la solucin titulante, cuidando siempre de esperar hasta la estabilizacin antes de tomar las lecturas luego de cada adicin. En la proximidad del punto de equivalencia (pH ~ 8) se deben hacer adiciones de no ms de una o dos gotas. Note el cambio de color de la solucin de vino. Se debe continuar la titulacin hasta alcanzar un pH de 12. Si es necesario con el objeto de comprobar sus resultados repita la titulacin. Registre sus valores en la tabla correspondiente.

21

Determinacin de la acidez total de una muestra de vino usando las sugerencias hechas por la norma venezolana estandarizada (COVENIN 3286:1997) En un vaso de precipitado de 250 ml, previamente enjuagado con agua desionizada, coloque 100 mL de agua desionizada. Agite el agua, mida y registre el pH del agua desionizada tal como se indic en la seccin de operacin del pH-metro. Neutralice con un par de gotas de hidrxido de sodio 0.1M hasta un pH de 8.1 con constante agitacin. Detenga la agitacin. Tome una alcuota de 10 ml del vino y adala a los 100 mL de agua desionizada. Agite de nuevo la muestra y anote el pH de la solucin diluida de vino. Note el color antes de aadir solucin de hidrxido de sodio. Inicie la titulacin aadiendo 1 mL de la solucin de NaOH 0.1 M. Espere hasta la estabilizacin y lea el valor del pH. Contine con adiciones sucesivas de 1 mL de la solucin titulante, cuidando siempre de esperar hasta la estabilizacin antes de tomar las lecturas luego de cada adicin. En la proximidad del punto de equivalencia (pH ~ 8) se deben hacer adiciones de no ms de una o dos gotas. Anote el volumen de solucin de NaOH gastado para alcanzar un pH de 8,0 1. Note el cambio de color de la solucin de vino. Se debe continuar la titulacin hasta alcanzar un pH de 12. Si es necesario con el objeto de comprobar sus resultados repita la titulacin. Registre sus valores en la tabla correspondiente. Consulte la norma para conocer ms acerca del mtodo en http://www.sencamer.gob.ve/sencamer/action/normas-find Manejo y anlisis de datos Primera Experiencia: Titulacin de una solucin de Acido Fosforico de concentracin conocida Construya la curva de titulacin a partir de los valores de pH y de volumen de solucin titulante usada. Aplique derivacin numrica para obtener los puntos de equivalencia. A partir de las suposiciones correspondientes, calcule las constantes de disociacin del acido poliprotico K1, K2 y K3. Compare a travs de tcnicas estadsticas, los valores hallados experimentalmente con los valores tericos reportados en la literatura. Segunda Experiencia: Determinacin de la acidez total de una muestra de vino por titulacin potenciomtrica Construya la curva de titulacin a partir de los valores de pH y de volumen de solucin titulante usada. Aplique derivacin numrica para obtener el punto de equivalencia. Suponga que toda la acidez de la muestra es el resultado de la presencia de acido tartarico, y determine la normalidad del vino expresada en equivalentes por litro, y la acidez total de la muestra expresada como gramos de acido tartarico por litro de muestra. Compare con los valores esperados para vinos de la misma naturaleza. Tercera Experiencia: Determinacin de la acidez total de una muestra de vino usando las sugerencias hechas por la norma venezolana estandarizada (COVENIN 3286:1997) Use el volumen de solucin de NaOH 0.1 M para neutralizar a 8,0 1 para determinar la acidez total de la muestra expresada como gramos de acido tartarico por litro de muestra, segn la ecuacin sugerida por la norma COVENIN:
AcidezTotal = VNaOH N b Peq Vmuestra 1000

Donde: VNaOH es el volumen de solucin de NaOH gastado para alcanzar un pH de 8,0 1, Nb es la normalidad de la solucin de hidrxido de sodio, Peq es el peso equivalente del acido tartarico, y Vmuestra es el volumen de la muestra de vino. El Acido tartarico esta presente en el zumo de la uva, y es considerado como un acido dbil con constantes de

22

disociacin de 9.20 x 10-4 y 4.31 x 10-5 con unos valores de pKa correspondientes de 3.03 y 4.36
HCOO CH CH COOH OH OH

Figura 14. Molcula de acido tartrico

Construya la curva de titulacin a partir de los valores de pH y de volumen de solucin titulante usada. Aplique derivacin numrica para obtener el punto de equivalencia. Suponga que toda la acidez de la muestra es el resultado de la presencia de acido tartarico, y determine la normalidad del vino expresada en equivalentes por litro, y la acidez total de la muestra expresada como gramos de acido tartrico por litro de muestra. Compare con los valores esperados para vinos de la misma naturaleza, y con los resultados de la seccin anterior. Derivacin numrica para determinar los puntos de equivalencia en titulacines Potenciomtricas Recuerde que la variacin del pH durante una titulacin de neutralizacin sigue un comportamiento sigmoidal, debido a la variacin de la diferencia de potencial elctrico entre la membrana del electrodo de vidrio y el electrodo de referencia del pHmetro. De aqu que en el punto de equivalencia, la curva de titulacin presente un punto de inflexin debido al cambio rotundo en la acidez del sistema solucin a titular / solucin titulante. Use las aproximaciones de diferencias finitas para estimar la primera y segunda derivada de la funcin entre el pH y el volumen de solucin titulante. Represente en una figura la variacin de la primera y segunda derivada del pH con respecto al volumen, usando el volumen promedio. A travs de los criterios para la ubicacin de un punto de inflexin, determine el punto de equivalencia de las titulacines.
d ( pH ) dV d
2 2 i

( pH )i +1 ( pH )i
V

V = Vi +1 Vi

Vi =

Vi +1 + Vi 2
Ecuacin 14

( pH )

dV

d 2 ( pH ) dV
2 i

( pH )i +1 2 ( pH )i + ( pH )i 1 2 ( V ) d ( pH ) d ( pH )
dV
i +1

Solo si V Ctte

dV

Indicaciones para la elaboracin del informe Contenido terico que debe estar presente en la introduccin y ser usado para la discusin de resultados Principios bsicos de una titulacin de neutralizacin. Uso de la Potenciometra para estudiar las titulaciones de neutralizacin. Relaciones de equilibrio qumico que definen la forma de la curva de titulacin potenciomtrica. Comportamiento particular del acido fosforico, como modelo de un acido poliprotico. Equilibrio qumico de los sistemas buffer formados en las cercanas de los puntos de equivalencia. Validez de las suposiciones hechas para determinar las constantes de disociacin del acido fosforico a partir de la variacin del pH en funcin del volumen de solucin titulante. Utilidad de la Potenciometra en el anlisis de la acidez total de los vinos.

23

Informacin a incluir en la seccin de materiales y mtodos Descripcin del funcionamiento de un electrodo de vidrio: simple y combinado. Descripcin del funcionamiento y partes de un medidor de pH Descripcin del procedimiento experimental usado. Descripcin del mtodo numrico usado para la determinacin del punto de equivalencia a partir de curvas de titulacin potenciomtrica Preguntas a las que debe dar respuesta en su discusin de resultados 1. Qu forma tiene la curva de titulacin de la solucin de acido fosforico con solucin de hidrxido de sodio? Coincide con lo esperado? 2. Qu suposicin le permiti calcular con mayor exactitud las constantes de disociacin del acido fosforico y por que? 3. Cmo se comparan los resultados hallados para las constantes de disociacin del acido fosforico con los valores reportados por la literatura? 4. Cual es la acidez total del vino analizado? Es el valor experimentalmente hallado acorde con lo esperado para bebidas de esta naturaleza? 5. Son diferentes entre si los resultados de la segunda y tercera experiencia? Aplique un anlisis estadstico a los datos reportados por todos los grupos de su curso de laboratorio. 6. Qu forma tienen las curvas de titulacin de la muestra de vino de con solucin de hidrxido de sodio? Coinciden con lo esperado para una solucin contentiva de acido tartarico? Referencias 1. Comisin Venezolana de Normas Industriales (1997). Vino y sus derivados. Determinacin de acidez total y acidez voltil. Norma Venezolana COVENIN 3286:1997. Extrado el 15 de Octubre del 2008 del sitio Web del Servicio Autnomo Nacional de Normalizacin, Calidad, Metrologia y Reglamentos Tcnicos (SENCAMER): http://www.sencamer.gob.ve/sencamer/action/normas-find 2. Kellner, R., J.M. Mermet, M. Otto, H.M. Widmer (Editores) (1998) Analytical Chemistry. Wiley-VCH, Verlag- Alemania. p.p. 1-40, 287-297 3. Zienkiewicz, O.C.y K. Morgan. (1983). Finite Elements and Approximation John Wiley and Sons, Inc. New York, EUA. p.p. 1-10

24

Tablas para la adquisicin de datos

Tabla 1. Titulacin potenciomtrica de una solucin de Acido Fosforico de concentracin

conocida con solucin de NaOH Fecha: ____________ Analista(s): ________________________________________________________ Equipo usado: __________________ Modelo: __________________ Apreciacin: _________ Concentracin de la solucin titulante: ______ N Concentracin esperada para la solucin a titular: _____ N Volumen aadido de la solucin a titular: _____ mL Volumen final despus de dilucin: _____ mL Volumen solucin titulante (mL) 0 de pH Volumen solucin titulante (mL) de pH Volumen solucin titulante (mL) de pH

25

Tabla 2. Titulacin potenciomtrica de una muestra de vino

Fecha: ____________ Tipo de vino usado: ________________ Fabricante: ______________ Analista(s): ________________________________________________________ Equipo usado: __________________ Modelo: __________________ Apreciacin: _________ Concentracin de la solucin titulante: ______ N Concentracin esperada para la solucin a titular: _____ N Volumen aadido de la solucin a titular: _____ mL Volumen final despus de dilucin: _____ mL pH del agua desionizada: ______ Volumen solucin titulante (mL) 0 de pH Volumen solucin titulante (mL) de pH Volumen solucin titulante (mL) de pH

26

Tabla 3. Titulacin potenciomtrica de una muestra de vino usando las sugerencias hechas por la norma venezolana estandarizada (COVENIN 3286:1997)
Fecha: ____________ Tipo de vino usado: ________________ Fabricante: ______________ Analista(s): ________________________________________________________ Equipo usado: __________________ Modelo: __________________ Apreciacin: _________ Concentracin de la solucin titulante: ______ N Concentracin esperada para la solucin a titular: _____ N Volumen aadido de la solucin a titular: _____ mL Volumen final despus de dilucin: _____ mL pH inicial del agua desionizada : __________ pH de la muestra de vino despus de la dilucin: __________ Volumen solucin titulante (mL) 0 de pH Volumen solucin titulante (mL) de pH Volumen de pH solucin titulante (mL)

27

PRACTICA N 4 TITULACIONES CONDUCTIMTRICAS DE NEUTRALIZACION Y PRECIPITACION Introduccin En el trabajo experimental anterior el estudiante conoci la aplicabilidad y utilidad de las medidas potenciomtricas para determinar la acidez de soluciones electrolticas coloreadas y construir curvas de titulacin de neutralizacin. En correlacin con lo aprendido ya, en esta prctica el estudiante conocer y emplear las medidas conductimtricas para los mismos fines; enfocndose en el anlisis de electrolitos fuertes y dbiles de uso comn durante procedimientos analticos. Se pretende as, que al finalizar el trabajo experimental, el estudiante pueda contrastar las medidas potenciomtricas y conductimtricas, y aprovechar las ventajas y desventajas de cada tcnica para seleccionar aquella que resulta ptima para sus fines en una situacin determinada. Se busca a su vez que el estudiante se familiarice con el principio de funcionamiento y partes de un conductmetro, pudiendo as realizar todas las mediciones con pleno conocimiento de las variables fisicoqumicas intervinientes. Las medidas conductimtricas permiten seguir el curso de las reacciones de neutralizacin y precipitacin, debido a que detectan los cambios experimentados por el sistema en su capacidad para conducir electricidad durante el intercambio de iones. Las curvas de titulacin se convierten entonces en la representacin de la variacin de la conductividad de la solucin en funcin del volumen de solucin titulante aadida. Debido a la variacin lineal de la conductividad, los puntos finales de la titulacin se detectan fcilmente y casi de forma directa, por ser puntos de inflexin en las curvas. Esta es una ventaja de las titulaciones conductimtricas frente a las titulaciones potenciomtricas, donde se necesita recurrir a mtodos numricos para determinar con mayor exactitud el punto final. Las medidas conductimtricas se realizan con la ayuda de un conductmetro, dispositivo principalmente dotado con una celda electroqumica que se sumerge en la solucin a analizar, y que permite luego determinar la resistencia opuesta por sta al paso de la corriente elctrica. El estudiante debe conocer el funcionamiento del conductmetro antes de llegar a la prctica. Objetivos Generales Determinar la concentracin de soluciones problema de electrolitos fuertes y dbiles por medio de titulaciones conductimtricas Verificar la variacin de la conductividad de la solucin debido al intercambio de los iones presentes durante una titulacin de neutralizacin y una titulacin de precipitacin. Aplicar la conductimetra para determinar la concentracin de cloruros en una muestra de agua de mar por titulacin con nitrato de plata

Equipos, Reactivos y Material de Laboratorio Instrumento para la medicin de la conductividad o conductmetro equipado con una celda de conductividad Motor para agitacin y barra magntica. Vasos de precipitado de 250 ml Bureta de 50 ml Pipeta de 25 ml Cilindros graduados de 25 y 50 ml.

28

SOLUCIONES Solucin de Hidrxido de Sodio (NaOH) Solucin de Acido Actico (CH3COOH) Solucin de Hidrxido de Amonio (NH4OH) Solucin de Cloruro de Sodio (NaCl) Solucin de Nitrato de Plata (AgNO3) Metodologa Experimental Operacin del conductmetro

~ 0.1 N ~ 0.1 N ~ 0.5 N ~ 0.5 N ~ 0.1 N

Esta explicacin esta diseada para el conductmetro Metrohm Herisau E527 (Metrohm Herisau, Inc.) Por favor si tiene otro equipo adptese al mismo, utilizando el manual o atendiendo las instrucciones del profesor o personal tcnico.

La figura 1 muestra la pantalla principal del conductmetro a usar en el laboratorio,

Figura 15. Apariencia del Conductmetro E527 (Metrohm Herisau, Inc.)

1: Botn de encendido 2: Seleccin de la escala de medicin de la conductividad 3: Ajuste para la determinacin de la conductividad

Verificacin del funcionamiento del conductmetro y la celda de conductividad Encienda el aparato y djelo encendido por algunos minutos. Use las soluciones estndar de conductividad conocida (2.17 S cm-1; 10008 S cm-1) para verificar el funcionamiento del conductmetro. Transvase 15 mL de cada solucin estndar en un vaso de precipitado de 25 mL. Lave cuidadosamente la celda de conductividad con abundante agua desionizada, y sumrjala en el vaso de precipitado con la solucin estndar. Cuide siempre de que la celda no toque las paredes o el fondo del vaso de precipitado, y que permanezca sumergida en la solucin a estudiar. Observe si existen burbujas de aire en la superficie de los electrodos, en caso de existir elimnelas agitando cuidadosamente la celda. Mida la conductancia de la solucin estndar, y determine su conductancia especfica para la constante de celda indicada en el interior de la celda. Tome nota del tiempo de respuesta

29

del conductmetro, es decir del tiempo que tarda en adquirir un valor estable de conductancia. Si la conductancia especifica medida est alrededor del 0.5 % del valor esperado puede considerarse que el conductmetro funciona correctamente. Repita el procedimiento para la otra solucin estndar. Recuerde que la ecuacin 1 describe la relacin entre la conductancia especfica y la constante de celda. = G kcelda Ecuacin 15 Donde representa la conductividad especfica en S cm-1; G es la conductancia en S y kcelda es la constante de la celda en cm-1. Use una solucin acuosa 0.1 M de Cloruro de Potasio (KCl), de conductividad especfica conocida e igual a 12.88 mS cm-1 a 25 oC y 11.67 mS cm-1 a 20 oC. Transvase 15 mL de la solucin de KCl a un vaso de precipitado de 25 mL. Lave cuidadosamente la celda de conductividad con abundante agua desionizada, y sumrjala en el vaso de precipitado con la solucin estndar. Cuide siempre de que la celda no toque las paredes o el fondo del vaso de precipitado, y que permanezca sumergida en la solucin a estudiar. Observe si existen burbujas de aire en la superficie de los electrodos, en caso de existir elimnelas agitando cuidadosamente la celda. Mida la conductancia de la solucin, y determine la constante de celda a partir de la conductividad especfica conocida. Comprela con la constante de celda reportada por el fabricante. No debe existir una discrepancia superior al 5% si la celda funciona correctamente. Lave cuidadosamente la celda de conductividad con abundante agua desionizada, y a manera de prctica, mida la conductancia del agua destilada y del agua del chorro. Compare ambos valores. Recuerde que la conductividad elctrica del agua potable es siempre 1 S cm 1 Primera Experiencia: Titulacin Conductimtrica de Neutralizacin de un acido fuerte con una base fuerte. Utilice un cilindro graduado para medir 25 mL de la solucin de HCl. Trasvase este volumen a un vaso de precipitado de 250 mL, y diluya hasta 150 mL con agua destilada. Use un cilindro graduado de 50 mL o 100 mL para medir el agua destilada. Lave cuidadosamente la celda de conductividad con abundante agua desionizada, y sumrjala en el vaso de precipitado con la solucin cida. Cuide siempre de que la celda no toque las paredes o el fondo del vaso de precipitado, y que permanezca sumergida en la solucin a estudiar. Observe si existen burbujas de aire en la superficie de los electrodos, en caso de existir elimnelas agitando cuidadosamente la celda. Introduzca la barra de agitacin con el imn, previamente lavados con agua destilada, y encienda el motor del agitador, regulando su velocidad de forma tal que el agitador no toque la celda de conductividad. Mida la conductancia del sistema inicial. Enrase una bureta de 50 mL con solucin de NaOH, cuidando de que no queden burbujas de aire en su extremo inferior. Inicie la titulacin aadiendo 2 mL de la solucin de NaOH. Espere hasta la estabilizacin y lea el valor de conductancia. Contine con adiciones sucesivas de 3 mL de la solucin titulante, cuidando siempre de esperar hasta la estabilizacin antes de tomar las lecturas luego de cada adicin. Observe el cambio en la conductancia de la solucin en la proximidad de los puntos de equivalencia. Se debe continuar la titulacin hasta tener ms de cinco mediciones de conductancia por encima del punto de equivalencia. Si es necesario

30

con el objeto de comprobar sus resultados repita la titulacin. Registre sus valores en la tabla correspondiente Segunda Experiencia: Titulacin Conductimtrica de Neutralizacin de un acido dbil con una base fuerte. Utilice un cilindro graduado para medir 25 mL de la solucin de CH3COOH. Trasvase este volumen a un vaso de precipitado de 250 mL, y diluya hasta 150 mL con agua destilada. Use un cilindro graduado de 50 mL o 100 mL para medir el agua destilada. Lave cuidadosamente la celda de conductividad con abundante agua desionizada, y sumrjala en el vaso de precipitado con la solucin cida. Cuide siempre de que la celda no toque las paredes o el fondo del vaso de precipitado, y que permanezca sumergida en la solucin a estudiar. Observe si existen burbujas de aire en la superficie de los electrodos, en caso de existir elimnelas agitando cuidadosamente la celda. Introduzca la barra de agitacin con el imn, previamente lavados con agua destilada, y encienda el motor del agitador, regulando su velocidad de forma tal que el agitador no toque la celda de conductividad. Mida la conductancia del sistema inicial. Enrase una bureta de 50 mL con solucin de NaOH, cuidando de que no queden burbujas de aire en su extremo inferior. Inicie la titulacin aadiendo ~0.1 mL de la solucin de NaOH. Espere hasta la estabilizacin y lea el valor de conductancia. Contine con adiciones sucesivas de ~ 0.1 mL de la solucin de NaOH, hasta que observe un aumento de la conductancia con cada adicin de solucin titulante. Cuide siempre de esperar hasta la estabilizacin antes de tomar las lecturas luego de cada adicin. Contine ahora con adiciones sucesivas de 3 mL de solucin de NaOH. Observe el cambio en la conductancia de la solucin en la proximidad de los puntos de equivalencia. Se debe continuar la titulacin hasta tener ms de cinco mediciones de conductancia por encima del punto de equivalencia. Si es necesario con el objeto de comprobar sus resultados repita la titulacin. Registre sus valores en la tabla correspondiente Tercera Experiencia: Titulacin Conductimtrica de Neutralizacin de un acido dbil con una base dbil. Utilice un cilindro graduado para medir 25 mL de la solucin de CH3COOH. Trasvase este volumen a un vaso de precipitado de 250 mL, y diluya hasta 150 mL con agua destilada. Use un cilindro graduado de 50 mL o 100 mL para medir el agua destilada. Lave cuidadosamente la celda de conductividad con abundante agua desionizada, y sumrjala en el vaso de precipitado con la solucin cida. Cuide siempre de que la celda no toque las paredes o el fondo del vaso de precipitado, y que permanezca sumergida en la solucin a estudiar. Observe si existen burbujas de aire en la superficie de los electrodos, en caso de existir elimnelas agitando cuidadosamente la celda. Introduzca la barra de agitacin con el imn, previamente lavados con agua destilada, y encienda el motor del agitador, regulando su velocidad de forma tal que el agitador no toque la celda de conductividad. Mida la conductancia del sistema inicial. Enrase una bureta de 50 mL con solucin de NH4OH, cuidando de que no queden burbujas de aire en su extremo inferior. Inicie la titulacin aadiendo ~0.1 mL de la solucin de NH4OH. Espere hasta la estabilizacin y lea el valor de conductancia. Contine con adiciones sucesivas de 3 mL de la solucin de de NH4OH, cuidando siempre de esperar hasta la estabilizacin antes de tomar las lecturas luego de cada adicin. Observe el cambio en la conductancia de la solucin en la proximidad de los puntos de equivalencia. Se debe continuar la titulacin

31

hasta tener ms de cinco mediciones de conductancia por encima del punto de equivalencia. Si es necesario con el objeto de comprobar sus resultados repita la titulacin. Registre sus valores en la tabla correspondiente Cuarta Experiencia: Determinacin del contenido de cloruros de una muestra problema por Titulacin Conductimtrica de Precipitacin con solucin de Nitrato de Plata Utilice un cilindro graduado para medir 25 mL de la solucin de NaCl. Trasvase este volumen a un vaso de precipitado de 250 mL, y diluya hasta 150 mL con agua destilada. Use un cilindro graduado de 50 mL o 100 mL para medir el agua destilada. Lave cuidadosamente la celda de conductividad con abundante agua desionizada, y sumrjala en el vaso de precipitado con la solucin cida. Cuide siempre de que la celda no toque las paredes o el fondo del vaso de precipitado, y que permanezca sumergida en la solucin a estudiar. Observe si existen burbujas de aire en la superficie de los electrodos, en caso de existir elimnelas agitando cuidadosamente la celda. Introduzca la barra de agitacin con el imn, previamente lavados con agua destilada, y encienda el motor del agitador, regulando su velocidad de forma tal que el agitador no toque la celda de conductividad. Mida la conductancia del sistema inicial. Enrase una bureta de 50 mL con 15 mL de solucin de AgNO3, cuidando de que no queden burbujas de aire en su extremo inferior. Inicie la titulacin aadiendo 2 mL de la solucin de AgNO3. Espere hasta la estabilizacin y lea el valor de conductancia. Observe y tome nota de todos los cambios en la apariencia de la solucin. Contine con adiciones sucesivas de 2 mL de la solucin de de AgNO3, cuidando siempre de esperar hasta la estabilizacin antes de tomar las lecturas luego de cada adicin. Observe el cambio en la conductancia de la solucin en la proximidad de los puntos de equivalencia, y observe tambin el crecimiento de las partculas del precipitado de AgCl. Se debe continuar la titulacin hasta tener ms de cuatro mediciones de conductancia por encima del punto de equivalencia. Apenas finalice, extraiga la celda de conductividad y sumrjala por algunos minutos en una solucin de NH4OH concentrada para evitar la deposicin del precipitado sobre los electrodos. Lave cuidadosamente la celda de conductividad con abundante agua desionizada, y sumrjala en su contenedor inicial. Si es necesario con el objeto de comprobar sus resultados repita la titulacin. Registre sus valores en la tabla correspondiente Manejo y anlisis de datos Primera, Segunda, Tercera y Cuarta Experiencias: Titulaciones Conductimtricas de Neutralizacin y Precipitacin Para contabilizar los cambios de conductancia provocados por la dilucin durante la titulacin corrija el valor de conductancia medido (Gmedida) usando la ecuacin 2. Construya la curva de titulacin a partir de los valores de conductancia corregidos (Gcorr) y del volumen de solucin titulante usada (V). Mediante una regresin lineal, determine las rectas que describen la variacin de G antes y despus del punto de equivalencia. Determine el punto de equivalencia por interseccin de las rectas. Compare a travs de tcnicas estadsticas, el valor hallado experimentalmente con el valor verdadero o esperado para la solucin de HCl. V +V Gcorr = Gmedida o Ecuacin 16 Vo

32

Donde Vo es el volumen del sistema inicial (150 mL) y V es el volumen agregado de solucin titulante. Calcule el error en la determinacin del punto de equivalencia usando las reglas de propagacin de errores aleatorios, y los errores asociados a los parmetros de las rectas intersectadas. Recuerde que durante una regresin lineal de la forma y = mx + b , donde m es la pendiente y b el corte con el eje de las ordenadas, pueden esperarse los siguientes errores: y = mx + b

xi2
i =1 n

yi xi
i =1

yi xi
i =1

x
i =1

b=

xi
i =1

yi
i =1

m=
n

y
i =1 i

n D

D=

x x
i =1 n 2 i i =1

x
i =1 2

( Sy )

( y
i =1

mxi b )

Ecuacin 17

n
2

( n 2)
2 n

( Sm )

( Sy )

( Sb )

( Sy ) xi2
i =1

Sm es el error asociado a la pendiente, Sb es el error asociado al corte y Sy es el error absoluto promedio asociado a la determinacin de los valores y a partir de la recta hallada.

Indicaciones para la elaboracin del informe Contenido terico que debe estar presente en la introduccin y ser usado para la discusin de resultados

Principios bsicos de una titulacin conductimtrica. Funcionalidad entre la conductancia de una solucin y la conductividad inica equivalente de los portadores de carga en ella. Diferencia entre el mecanismo de transferencia de carga de los iones hidrogeno y los iones hidroxilo en comparacin con el resto de iones. Relaciones de sustitucin inica que definen la forma de la curva de titulacin conductimtrica. Utilidad de la Conductimetra en el anlisis de soluciones de electrolitos fuertes y dbiles.
Informacin a incluir en la seccin de materiales y mtodos

Descripcin del funcionamiento de una celda de conductividad Descripcin del funcionamiento y partes de un conductmetro Descripcin del procedimiento experimental usado. Descripcin del mtodo numrico usado para la determinacin del punto de equivalencia a partir de la regresin lineal de ciertas porciones de las curvas de titulacin conductimtrica.

33

Preguntas a las que debe dar respuesta en su discusin de resultados

1. Qu forma tiene la curva de titulacion de la solucin de HCl con solucin de hidrxido de sodio? Coincide con lo esperado? Como se comparan las pendientes de las rectas que describen la variacin de la conductancia antes y despus del punto de equivalencia? Coinciden con lo esperado? 2. Qu forma tiene la curva de titulacin de la solucin de CH3COOH con solucin de hidrxido de sodio? Coincide con lo esperado? Como se comparan las pendientes de las rectas que describen la variacin de la conductancia antes y despus del punto de equivalencia? Coinciden con lo esperado? 3. Qu forma tiene la curva de titulacin de la solucin de CH3COOH con solucin de hidrxido de amonio? Coincide con lo esperado? Como se comparan las pendientes de las rectas que describen la variacin de la conductancia antes y despus del punto de equivalencia? Coinciden con lo esperado? 4. Son diferentes entre si los resultados de la segunda y tercera experiencia? Aplique un anlisis estadstico comparativo entre los datos reportados por todos los grupos de su curso de laboratorio para ambas experiencias. Que mtodo permite determinar con mayor precisin la concentracin de la solucin de acido actico y por que? 5. Qu forma tiene la curva de titulacin de la solucin de NaCl con solucin de nitrato de plata? Coincide con lo esperado? Como se comparan las pendientes de las rectas que describen la variacin de la conductancia antes y despus del punto de equivalencia? Coinciden con lo esperado? De acuerdo a la constante del Producto de Solubilidad (Kps) del Cloruro de Plata, a que volumen de AgNO3 debera esperarse que se precipite el AgCl en la solucin de NaCl estudiada? Como se compara el error aleatorio esperado para este mtodo con el correspondiente a un mtodo gravimtrico, que en igualdad de condiciones, intentara determinar la concentracin de iones cloruros en una muestra por precipitacin como AgCl? Kps AgCl a 25 oC = 1,8 * 10-10
Referencias

1. Bruttel, P. A. (2004) Conductometry Conductivity Measurement: Metrohm Monograph. Metrohm Ltd. Herisau, Suiza. p.p. 48 2. Kellner, R., J.M. Mermet, M. Otto, H.M. Widmer (Editores) (1998) Analytical Chemistry. Wiley-VCH, Verlag- Alemania. p.p. 1-40, 287-297

34

Tablas para la adquisicin de datos

Tabla 1. Titulacin conductimtrica de una solucin de Acido Clorhdrico de concentracin

conocida con solucin de NaOH Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Equipo usado: Fabricante: _________________________ Modelo: ________________________ Concentracin de la solucin titulante: _____ N Concentracin esperada para la solucin a titular: ______ N Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL Volumen solucin titulante (mL) 0 de G (Indique Escala en S) Volumen solucin titulante (mL) de G (Indique Escala en S) Volumen solucin titulante (mL) de G (Indique Escala en S)

35

Tabla 2. Titulacin conductimtrica de una solucin de Acido Actico de concentracin

conocida con solucin de NaOH Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Equipo usado: Fabricante: _________________________ Modelo: ________________________ Concentracin de la solucin titulante: _____ N Concentracin esperada para la solucin a titular: ______ N Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL Volumen solucin titulante (mL) 0 de G (Indique Escala en S) Volumen solucin titulante (mL) de G (Indique Escala en S) Volumen solucin titulante (mL) de G (Indique Escala en S)

36

Tabla 3. Titulacin conductimtrica de una solucin de Acido Clorhdrico de concentracin conocida con solucin de NH4OH Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Equipo usado: Fabricante: _________________________ Modelo: ________________________ Concentracin de la solucin titulante: _____ N Concentracin esperada para la solucin a titular: ______ N Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL
Volumen solucin titulante (mL) 0 de G (Indique Escala en S) Volumen solucin titulante (mL) de G (Indique Escala en S) Volumen solucin titulante (mL) de G (Indique Escala en S)

37

Tabla 4. Titulacin conductimtrica de una solucin de NaCl de concentracin conocida con

solucin de AgNO3 Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Equipo usado: Fabricante: _________________________ Modelo: ________________________ Concentracin de la solucin titulante: _____ N Concentracin esperada para la solucin a titular: ______ N Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL Volumen solucin titulante (mL) 0 de G (Indique Escala en S) Volumen solucin titulante (mL) de G (Indique Escala en S) Volumen solucin titulante (mL) de G (Indique Escala en S)

38

PRACTICA N 5 DETERMINACION DE CROMO EN SOLUCIONES ACUOSAS POR ESPECTROMETRIA DE ABSORCIN DE LUZ VISIBLE Introduccin

La absorcin de radiacin por una especie M es el resultado de la interaccin de los fotones incidentes con los electrones de los orbitales moleculares ( , y n) o atmicos (s,p,d,f). Este proceso puede interpretarse como un proceso de dos etapas: en la primera ocurre la excitacin electrnica y en la segunda, la relajacin, que generalmente se presenta como la conversin de energa de excitacin en calor segn:

M + h M * M + calor

Ecuacin 18

La energa tambin puede liberarse a travs de procesos radiativos o de conversin interna de la molcula M. Este proceso se lleva a cabo de forma continua durante la exposicin de M a la luz, y es lo que le otorga a sus soluciones el color que observamos. La mayora de los iones de los metales de transicin, aquellos con una subcapa d incompleta, pueden absorber radiacin visible en casi todos sus estados de oxidacin. Tal es el caso de los iones de cromo, cobalto, cobre, nquel y hierro; con soluciones coloreadas que absorben radiacin visible; y cuya concentracin puede ser determinada a partir su absorbancia haciendo uso de la Ley de Beer. En este trabajo experimental se pretende que el estudiante construya, comprenda y use los grficos de absorbancia en funcin de la concentracin, conocidos como grficos de la ley de Beer, para determinar la concentracin de una solucin problema de nitrato de cromo. Debido a que la absorcin de radiacin por parte de los iones metlicos se da en todo un rango de longitudes de onda, el estudiante debe aprender a identificar aquella longitud de onda que optimiza el procedimiento analtico, debido a que se minimizan las desviaciones de la Ley de Beer. A travs del procedimiento experimental a realizar, el estudiante conocer los distintos pasos necesarios para adaptar una tcnica espectromtrica para el anlisis de una sustancia de inters. Al final de la prctica deber ser capaz de fijar las condiciones (longitud de onda, rango de concentracin, curva de calibracin, etc.) para analizar cualquier solucin coloreada segn esta tcnica.
Objetivos Generales

Determinar la longitud de onda ptima para el anlisis por espectrometra del cromo a partir del espectro de absorcin Determinar la concentracin de cromo en una solucin problema por el mtodo espectromtrico de absorcin de luz visible Comprobar la aplicabilidad de la Ley de Lambert-Beer par describir la variacin de la absorbancia con la concentracin de iones metlicos en solucin. Elaborar y comprender el uso de una curva de calibracin para la determinacin de la concentracin de un analito. Conocer la aplicabilidad de la espectrometra de luz visible en el anlisis de soluciones coloreadas de iones metlicos

39

Equipos, Reactivos y Material de Laboratorio EQUIPOS Espectrofotmetro (Spectronic 20) Analgico. Milton Roy Company. Espectrofotmetro (Spectronic 20D+) Digital. Milton Roy Company. Espectrofotmetro (Genesys 5) Digital. Milton Roy Company. Balanza electrnica de precisin 0.01 g MATERIAL: Cubetas de vidrio Pipetas de 1, 2, 5, 10, 20 y 25 mL Matraces aforados de 25 mL Erlenmeyer de 25 mL SOLUCIONES Solucin Patrn de Nitrato de Cromo (III) (Cr(NO3) 3) Solucin problema de Nitrato de Cromo (III) (Cr(NO3) 3) Metodologa Experimental Operacin y calibracin del Espectrofotmetro
Esta explicacin esta diseada para el espectrofotmetro Spectronic 20D+ y Spectronic 20 (Milton Roy Company) Por favor si tiene otro equipo adptese al mismo, utilizando el manual o atendiendo las instrucciones del profesor o personal tcnico.

~ 0.05 M

Encienda el aparato girando el Botn de encendido/Control del Cero (No. 5 para Spec20D+ o No.10 para Spec20) en la direccin de las agujas del reloj. Mueva la palanca de seleccin del rango de la radiacin (No. 6 para Spec20D+) a la posicin que se corresponde con longitudes de onda entre 340nm- 599nm. El Spectronic 20 solo permite medir entre 340nm- 599nm. Permite que la lmpara caliente por al menos 15 minutos hasta estabilizacin. Seleccione la longitud de onda a la que desea trabajar con el Selector de Longitud de Onda (No. 3 para Spec20D+ o No.8 para Spec20). Realice el ajuste al 0 % T o ajuste de corriente oscura. Asegrese de que el compartimiento de la muestra (No. 1 para Spec20D+ o No.1 para Spec20) se encuentra vaco y que la compuerta esta correctamente cerrada. Gire adecuadamente el Botn de encendido/Control del Cero (No. 5 para Spec20D+ o No.10 para Spec20) hasta lograr ajustar a 0% T la medida reportada por la pantalla de registro de lectura. Realice el ajuste al 100%T con el blanco. Recuerde que un blanco es una solucin que contiene todo lo que la muestra contiene, a excepcin del analito. Introduzca la cubeta llena con el blanco en el compartimiento de la muestra (No. 1 para Spec20D+ o No.1 para Spec20) cuidando de alinear la marca gua de la celda con la marca gua del compartimiento. Presione la celda cuidadosamente para ajustarla en posicin y cierre la compuerta. Para evitar errores en la medida considere todas las normas para el manejo de las cubetas indicadas en la siguiente seccin. Gire adecuadamente el Botn de encendido/Control del Cero (No. 5 para Spec20D+ o No.10 para Spec20) hasta lograr ajustar a 100% T la medida reportada por la pantalla de registro de lectura. DEBE REPETIR ESTE PROCEDIMIENTO CADA VEZ QUE CAMBIE LA LONGITUD DE ONDA DE TRABAJO.

40

Figura 16. Partes del espectrofotmetro Spectronic 20

1: Compartimiento para la muestra 3: Control de la longitud de onda 5: Botn de encendido / Control del cero

2: Indicador de encendido de la lmpara 4: Control de Transmitancia/Absorbancia (100 %T/0 A)

Figura 17. Partes del espectrofotmetro Spectronic 20D+

1: Compartimiento para la muestra 2: Pantalla Digital de reporte de la medida 3: Indicadores del modo T o A 4: Botn de seleccin del modo T o A 5: Botn de decremento del factor concentracin 6: Botn de incremento del factor concentracin 7: Imprimir 8: Control de Longitud de Onda 9: Control de Transmitancia(T)/Absorbancia (A) (100%T/0 A) 10: Botn de encendido / Control del cero 11: Palanca de seleccin del filtro de la radiacin de la lmpara

41

Manejo de las cubetas Las cubetas donde se almacena la solucin estn construidas de un material transparente a la radiacin seleccionada. Ud. debe conocer cuales son estos materiales. Debe recordar que la precisin y exactitud de todo mtodo espectrometrico depende en alto grado del manejo adecuado de las cubetas. Se usan dos cubetas simultneamente, una para la solucin "blanco" y la otra para la "Muestra". Para su uso correcto se recomienda: a) Manipular cuidadosamente las cubetas por el extremo superior. b) No tocar con los dedos, papel o cualquier otro material, la parte inferior de la cubeta que entrar en contacto con la radiacin. Si la cubeta est hmeda, squela cuidadosamente con papel absorbente limpio y seco. c) Usar las mismas cubetas para almacenar el blanco y la(s) solucin(es) a analizar durante todo el trabajo experimental d) Una vez que trasvase la(s) solucin(es) a las cubetas, asegrese que no existen burbujas en las paredes. Elimine las burbujas agitando la solucin o golpeando suavemente las paredes de la cubeta. e) Asegrese de que la(s) solucin(es) llenan al menos el 50 % del volumen de la cubeta. Procure llenar las cubetas siempre hasta el mismo nivel con la solucin a analizar. f) Antes de realizar una medicin, lave con agua destilada y luego enjuague varias veces la cubeta con la solucin a analizar. g) No hacer movimiento o giros bruscos de la cubeta cuando la introduzca en el compartimiento de la muestra para evitar rayarla. Primera Experiencia: Determinacin del espectro de absorcin de luz visible de una solucin de nitrato de Cromo (III)

Realice las diluciones necesarias para preparar una solucin 0.02M de Cr (III) a partir de la solucin patrn. Tome nota de la apreciacin de todos los instrumentos volumtricos que emplee. Siguiendo el procedimiento explicado para la operacin y calibracin del espectrofotmetro, mida el % T o la absorbancia de la solucin de Cromo (III) a las siguientes longitudes de onda: 375, 400, 425, 450, 475, 500, 512, 525, 550, 575, 600, 612 y 625 nm. Construya el espectro graficando la absorbancia medida en funcin de la longitud de onda. Determine los puntos mnimos y mximos del espectro.
Segunda Experiencia: Construccin de la curva de calibracin para la determinacin de la concentracin de cromo (III) en la solucin problema

Realice las diluciones necesarias para preparar 50 mL de soluciones al 0.01, 0.02, 0.03, 0.04 y 0.05M de nitrato de cromo (III) a partir de la solucin patrn. De ser posible, realice las diluciones determinando en una balanza, el peso aadido de la solucin ms concentrada y el peso final de la solucin preparada. De esta manera, reducir al mximo los errores por dilucin. Tome nota de la apreciacin de la balanza y/o de los instrumentos volumtricos usados. Tomando como referencia el espectro de absorcin de la solucin 0.02M, seleccione 6 longitudes de onda para estudiar la variacin de la absorbancia en funcin de la concentracin. Debe incluir dos longitudes en las cuales aparezca un mnimo, dos longitudes en las cuales aparezca un mximo, una longitud de onda donde la curva sube fuertemente, una longitud donde la curva desciende. Siguiendo el procedimiento explicado para la operacin y calibracin del espectrofotmetro, mida el % T o la absorbancia de cada solucin de Cromo (III) a las longitudes de onda seleccionadas.

42

Tercera Experiencia: Determinacin de la concentracin de cromo (III) en la solucin problema

Siguiendo el procedimiento explicado para la operacin y calibracin del espectrofotmetro, mida el % T o la absorbancia de la solucin problema de Cromo (III) a las seis longitudes de onda seleccionadas. Registre su resultado. Apague el equipo en el Botn de encendido/Control del Cero (No. 5 para Spec20D+ o No.10 para Spec20+). Lave todas las cubetas cuidadosamente, y ordene y limpie su rea de trabajo.
Manejo y anlisis de datos Primera Experiencia: Determinacin del espectro de absorcin de luz visible de una solucin de nitrato de Cromo (III)

Construya el espectro de absorcin de luz visible de la solucin de nitrato de cromo (III) 0.02M representando grficamente la absorbancia medida en funcin de la longitud de onda. Preste particular atencin a los puntos mximos y mnimos. Tome nota de la coloracin de la solucin de cromo.
Segunda Experiencia: Construccin de la curva de calibracin para la determinacin de la concentracin de cromo (III) en la solucin problema

El objetivo de esta parte del trabajo experimental es determinar la banda o intervalo de longitud de onda ms adecuado para el cumplimiento de la Ley de Lambert-Beer a partir del estudio preliminar realizado sobre el espectro de absorcin de luz visible de la solucin de nitrato de cromo (III) 0.02M Para alcanzar este objetivo, construya una curva de calibracin para cada una de las seis longitudes de onda seleccionadas del espectro de absorcin de la solucin de nitrato de cromo (III). La curva se construye representando grficamente la absorbancia medida en funcin de la concentracin de la solucin estudiada a cada longitud de onda. Tendr por tanto, seis curvas de calibracin, una para cada longitud de onda. Para verificar el cumplimiento de la Ley de Lambert-Beer debe garantizarse que la absorbancia de las soluciones vara linealmente con la variacin de la concentracin de la especie absorbente. Para ello debe realizar una regresin lineal de la absorbancia (y) en funcin de la concentracin (x). La bondad del ajuste, parcialmente medida por el coeficiente de correlacin r2, indicar el cumplimiento de la Ley de Lambert-Beer. Use la herramienta ANALISIS DE DATOS del programa EXCEL y la opcin REGRESION LINEAL para realizar el ajuste lineal a cada longitud de onda. Reporte en su informe todos los resultados emitidos por el programa. Utilice todos los indicadores estadsticos reportados para evaluar la bondad del ajuste lineal a cada longitud de onda. Debe realizar una figura donde se muestren simultneamente, las seis curvas de calibracin obtenidas. Seleccione la longitud de onda ptima en la que se obtenga simultneamente, el mejor ajuste al comportamiento lineal definido por la Ley de Lambert-Beer, y adems la maximizacin de la respuesta del instrumento para pequeas variaciones de concentracin de la solucin.

43

Tercera Experiencia: Determinacin de la concentracin de cromo (III) en la solucin problema

Use la curva de calibracin correspondiente a la longitud de onda ptima para determinar la concentracin de la solucin problema a partir de su absorbancia. Determine el error aleatorio correspondiente a esta concentracin a partir de la precisin del espectrofotmetro y los errores aleatorios asociados con los parmetros de la regresin lineal. Aplique las reglas de propagacin de errores aleatorios explicadas en clase. Recuerde que durante una regresin lineal de la forma y = mx + b , donde m es la pendiente y b el corte con el eje de las ordenadas, pueden esperarse los siguientes errores: y = mx + b

x y x
i =1 n 2 i i =1 i

y x x
i =1 i i i =1

b=

x
i =1 n

y
i =1

m=
n

y
i =1 i

n D

D=

x x
i =1 n 2 i i =1

x
i =1 2

( Sy ) =
2

( y
i =1

mxi b )

Ecuacin 19

n
2

( n 2)
2 n

( Sm )

( Sy )

( Sb )

( Sy ) xi2
i =1

Indicaciones para la elaboracin del informe Contenido terico que debe estar presente en la introduccin y ser usado para la discusin de resultados Explicacin del fenmeno de absorcin de radiacin electromagntica por parte de las soluciones de los iones de los metales de transicin. Razones que explican la apariencia coloreada de las soluciones de cobalto, cromo, cobre, y nquel. Definiciones de absorbancia y transmitancia. Explicacin y aplicabilidad de la ley de Lambert-Beer al estudio de soluciones coloreadas. Factores que ocasionan desviaciones de la Ley de Lambert-Beer. Informacin a incluir en la seccin de materiales y mtodos

Descripcin del funcionamiento y partes de un espectrofotmetro de luz UV-Visible Descripcin del procedimiento experimental usado. Descripcin del mtodo numrico usado para evaluar el cumplimiento de la Ley de Lambert-Beer

44

Preguntas a las que debe dar respuesta en su discusin de resultados 1. Cul es la configuracin electrnica del Cr empleando la notacin spdf si tiene un nmero atmico igual a 24? 2. Si la excitacin es consecuencia de la absorcin de radiacin por parte de los electrones de los orbitales moleculares ( , y n) o atmicos (s,p,d,f..) qu tipo de transicin es responsable por la absorbancia de las soluciones de nitrato de cromo (III)?. 3. Qu forma tiene el espectro de absorcin de luz visible de la solucin de nitrato de cromo (III)? Qu relacin guardan las posibles transiciones con la forma del espectro de absorcin de luz visible de la solucin de nitrato de Cromo (III)? Existe alguna relacin entre la energa asociada a estas transiciones con la energa de las longitudes de onda donde se observan mximos en el espectro de absorcin de la solucin de nitrato de Cromo (III)? 4. Cumple las soluciones de nitrato de Cromo con la Ley de Lambert-Beer? Cual es la longitud de onda optima para la construccin de la curva de calibracin? 5. Cul es la concentracin de cromo en la muestra problema? Cul es el intervalo de confianza de la concentracin determinada experimentalmente? Cmo se compara esta concentracin con el valor verdadero o esperado?

Referencias

1. Rousseac F. y A. Rousseac (2000) Anlisis Qumico: Mtodos y Tcnicas Instrumentales Modernas. McGraw-Hill Interamericana de Espaa, S.A.U. Madrid, Espaa. Capitulo IX 2. Kellner, R., J.M. Mermet, M. Otto, H.M. Widmer (Editores) (1998) Analytical Chemistry. Wiley-VCH, Verlag- Alemania.

45

Tablas para la adquisicin de datos

Tabla 1. Determinacin del espectro de absorcin de luz visible de una solucin de nitrato de Cromo (III) Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Equipo usado: __________________________________________________________________ Fabricante:________________________ Modelo: _____________ Apreciacin: __________ Concentracin de la solucin analizada: _____ M Blanco utilizado: ________________________________________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL
Longitud de % T o A onda (nm) Longitud de % T o A onda (nm) Longitud de % T o A onda (nm)

46

Tabla 2. Construccin de la curva de calibracin para la determinacin de la concentracin de

cromo (III) en la solucin problema

Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Equipo usado: __________________________________________________________________ Fabricante:________________________ Modelo: _____________ Apreciacin: __________ Concentracin de la solucin patrn: _________ M Blanco utilizado: ________________________________________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL

Preparacin de las soluciones Concentracin de la Concentracin de Volumen o Masa de Volumen o Masa Solucin a preparar la solucin Solucin Concentrada Final de la (M) concentrada aadida (mL o g) solucin aadida (M) preparada (mL o g) 0.05 0.04 0.03 0.02 0.01
Concentracin: _______ M Longitud de % T o A onda (nm) Concentracin: _______ M Longitud de % T o A onda (nm) Concentracin: _______ M Longitud de % T o A onda (nm)

Concentracin: _______ M Longitud de % T o A onda (nm)

Concentracin: _______ M Longitud de % T o A onda (nm)

Concentracin: _______ M Longitud de % T o A onda (nm)

47

Tabla 3. Determinacin de la concentracin de cromo (III) en la solucin problema

Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Equipo usado: __________________________________________________________________ Fabricante:________________________ Modelo: _____________ Apreciacin: __________ Numero de la solucin problema analizada: _________ Blanco utilizado: ________________________________________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL
Longitud de % T o A onda (nm) Longitud de % T o A onda (nm) Longitud de % T o A onda (nm)

48

PRACTICA N 6 DETERMINACION COLORIMETRICA DE HIERRO EN SOLUCIONES ACUOSAS POR ESPECTROMETRIA DE ABSORCIN DE LUZ VISIBLE Introduccin

Las sales de cromo y cobalto son sustancias que poseen color propio y no se requiere la adicin de otros reactivos. Sin embargo, muchas sustancias no poseen color propio y en este caso es preciso convertirlas por reaccin con un reactivo adecuado en un compuesto coloreado que permita el anlisis directo. Esta reaccin puede ser ilustrada por la ecuacin siguiente: Muestra + Reactivo Cromognico = Producto Coloreado En el caso del hierro, sus soluciones poseen poco o ningn color, y su determinacin colorimtrica se basa en la reaccin con orto-fenantrolina segn la ecuacin siguiente: DEBE BUSCAR LA REACCIN CORRESPONDIENTE El complejo formado llamado ferrona, es un complejo de transferencia de carga, donde el in metlico y el ligando se comportan como dador y aceptor de electrones, correspondientemente. El estudiante debe tener completamente claro al inicio de la prctica, como se efecta la absorcin de radiacin por transferencia de carga. Durante el anlisis se aade hidroxilamina con el propsito de reducir el hierro (III) a (II), el cual forma con la ortofenantrolina un complejo ms adecuado. DEBE BUSCAR LA REACCIN CORRESPONDIENTE En este experimento se considerarn algunas propiedades que son deseables tanto en el reactivo cromognico como el producto coloreado. Sea que la muestra posea color propio o forme un complejo coloreado por adicin de un reactivo, la solucin que se va a medir debe poseer las siguientes propiedades: 1) Estabilidad que permita una medicin adecuada. La inestabilidad en el color puede ser resultado de la oxidacin por el aire, descomposicin fotoqumica, efectos de acidez, temperatura o de solvente. 2) Color intenso, o sea una elevada absorbancia molar. 3) Independencia de pequeas variaciones en el pH y temperatura. 4) Solubilidad del producto coloreado. 5) Que el complejo coloreado obedezca la ley de Beer. El reactivo cromognico debe poseer la mayora de las propiedades siguientes: 1) Estabilidad en solucin, o sea que una vez preparado no se descomponga en unas pocas horas. 2) Que desarrolle rpidamente el color 3) Que reaccione estequiomtricamente con la sustancia que se quiere medir. 4) Transparencia en la zona espectral donde se va a hacer la medicin. 5) Estar libre de interferencias que podran conducir a una reaccin incompleta del complejo coloreado. 6) Solubilidad adecuada. A travs del procedimiento experimental a realizar, el estudiante deber ser capaz, una vez conocida la reaccin que producir el complejo coloreado, de fijar las condiciones (acidez, longitud de onda, rango de concentracin, curva de calibracin, etc.) para analizar segn esta

49

tcnica cualquier complejo de transferencia de carga como el ferro/ferrocianuro, yoduro de yoduro molecular, fenlico, etc.
Objetivos Generales

Determinar la concentracin de hierro en una solucin problema por titulacin colorimtrica de su complejo coloreado con solucin de orto-fenantrolina. Determinar el efecto del tiempo, pH y composicin de la matriz de la solucin en sobre la precisin del anlisis colorimtrico para la determinacin de hierro en soluciones acuosas. Conocer la aplicabilidad de los ensayos espectromtricos en el anlisis de sustancias no coloreadas luego de su reaccin con grupos cromforos.

Equipos, Reactivos y Material de Laboratorio EQUIPOS Espectrofotmetro (Spectronic 20). Analgico. Milton Roy Company. Espectrofotmetro (Spectronic 20D+). Digital. Milton Roy Company. Espectrofotmetro (Genesys 5). Digital. Milton Roy Company. Balanza electrnica de precisin 0.01 g MATERIAL: Cubetas de vidrio Pipetas de 1, 5 y 10 mL Cilindros graduados de 25 y 50 mL Matraces aforados de 100 mL Varillas de vidrio Gotero SOLUCIONES Solucin Patrn de Cloruro Frrico (FeCl3), 10-3 M en cido clorhdrico 0.5 M Acetato de sodio, 2M 1-10-fenantrolina al 0.3%p/v Hidrxido de sodio 4M Amonaco concentrado Cloruro de hidroxilamina al 10% REACTIVOS Fluoruro de sodio, oxalato de sodio, tartrato de sodio y potasio Metodologa Experimental Operacin y calibracin del Espectrofotmetro

SIGA LO ESTABLECIDO EN LA PRACTICA ANTERIOR

Manejo de las cubetas Las cubetas donde se almacena la solucin estn construidas de un material transparente a la radiacin seleccionada. Ud. debe conocer cuales son estos materiales. Debe recordar que la precisin y exactitud de todo mtodo espectrometrico depende en alto grado del manejo adecuado

50

de las cubetas. Se usan dos cubetas simultneamente, una para la solucin "blanco" y la otra para la "Muestra". Para su uso correcto se recomienda: a) Manipular cuidadosamente las cubetas por el extremo superior. b) No tocar con los dedos, papel o cualquier otro material, la parte inferior de la cubeta que entrar en contacto con la radiacin. Si la cubeta est hmeda, squela cuidadosamente con papel absorbente limpio y seco. c) Usar las mismas cubetas para almacenar el blanco y la(s) solucin(es) a analizar durante todo el trabajo experimental d) Una vez que trasvase la(s) solucin(es) a las cubetas, asegrese que no existen burbujas en las paredes. Elimine las burbujas agitando la solucin o golpeando suavemente las paredes de la cubeta. e) Asegrese de que la(s) solucin(es) llenan al menos el 50 % del volumen de la cubeta. Procure llenar las cubetas siempre hasta el mismo nivel con la solucin a analizar. f) Antes de realizar una medicin, lave con agua destilada y luego enjuague varias veces la cubeta con la solucin a analizar. g) No hacer movimiento o giros bruscos de la cubeta cuando la introduzca en el compartimiento de la muestra para evitar rayarla. h) introduzca en el compartimiento de la muestra para evitar rayarla.
Primera Experiencia: Estabilidad de color del complejo de hierro coloreado o ferrona en funcin del tiempo.

Aada 1 mL de solucin de NH2OH.HCl al 10% en agua a 4 mL de solucin patrn en Fe (III) 10-3M en un frasco volumtrico de 100 mL. Agite el matraz por unos pocos segundos, djelo en reposo durante unos dos minutos, aada entonces 2 mL de solucin de ortofenantrolina al 0.3%. Mida el pH de la solucin con un trozo de papel indicador universal. El pH debe ser de 5 unidades, en caso de no serlo, aada acetato de sodio 2M hasta que el papel indique pH 5, observar que el color se intensifica a un color naranja. Diluya hasta 100 mL con agua destilada y mezcle bien. Tome nota del tiempo en el que finaliza este procedimiento, y mida inmediatamente la absorbancia de la solucin a 512 nm, usando el procedimiento definido en la seccin anterior. Se puede usar agua destilada como "blanco". Repita la medicin a 512 nm cada veinte minutos hasta finalizar la prctica. Registre el tiempo para el cual ocurre la estabilizacin del color o de la absorbancia. Determine el tiempo mnimo necesario para que la reaccin de formacin de la ferrona culmine y se estabilice el color del complejo formado. Para las siguientes experiencias debe esperar, al menos este intervalo de tiempo, antes de medir la absorbancia de las soluciones para asegurar la estabilidad del color del complejo coloreado. Guarde la solucin. La solucin de hierro preparada en esta parte del experimento tambin ser utilizada en la cuarta y quinta experiencia.
Segunda Experiencia: Determinacin de la concentracin de hierro en una solucin por titulacin colorimtrica con orto-fenantrolina

Prepare siete soluciones iguales a la de la primera experiencia, pero aada 0.1/ 0.2/ 0.4/ 0.6/ 1.0/ 3.0/ 4.0 mL de solucin de ortofenantrolina al 0.3%p/v mL. Mida el pH de la solucin con un trozo de papel indicador universal. El pH debe ser de 5 unidades, en caso de no serlo, aada acetato de sodio 2M hasta que el papel indique pH 5, observar que el color se intensifica a un color naranja. Diluya hasta 100 mL con agua destilada y mezcle bien.

51

Mida la absorbancia de todas estas soluciones tambin a 512 nm, usando agua destilada como "blanco". Cuide esperar el tiempo necesario para que el color se haya estabilizado en todas las soluciones.
Tercera Experiencia: Estabilidad de color del complejo de hierro coloreado o ferrona en funcin del pH Mida la absorbancia a 512 nm de las 5 soluciones siguientes: pH = 2 Coloque 4.0 ml de solucin patrn de hierro y 1.0 mL de solucin de hidroxilamina en un baln aforado de 100 mL. Agite y deje en reposo dos minutos. Aada 2 mL de ortofenantrolina, diluya hasta 100 mL con agua destilada y mida la absorbancia enseguida. pH= 4 Repita como antes, pero antes de enrasar con agua destilada, aada acetato de sodio 2M gota a gota hasta que el pH sea de 4 unidades. Diluya hasta 100 ml con agua destilada, mezcle bien y mida la absorbancia. pH= 9 Repita como antes, pero antes de enrasar con agua destilada, aada amonaco concentrado gota a gota hasta que el pH sea de 9 unidades Diluya hasta 100 ml con agua destilada, mezcle bien y mida la absorbancia. pH = 12 Repita como antes, pero antes de enrasar con agua destilada, aada Hidrxido de Sodio 4M, gota a gota hasta que el pH sea de 12 unidades. Diluya hasta 100 ml con agua destilada, mezcle bien y mida la absorbancia. pH= 5 Utilice la primera medicin de absorbancia obtenida en la primera experiencia.

Cuarta Experiencia: Estabilidad de color del complejo de hierro coloreado o ferrona en funcin de las sales Use la solucin preparada en la primera experiencia. Lave la cubeta con agua, cure y aada solucin de la primera experiencia. Pese y aada una pequea cantidad de fluoruro de sodio a la solucin en la cubeta, agite cuidadosamente con una varilla de vidrio limpia. Mida nuevamente la absorbancia de la solucin a 512 nm. Si no observa ningn efecto, pese y aada otra pequea cantidad de fluoruro de sodio. Tome nota de todas las cantidades aadidas. Lave la cubeta con agua, cure y aada solucin de la primera experiencia. Repita la experiencia como antes pero usando oxalato de sodio. Lave la cubeta con agua, cure y aada solucin de la primera experiencia. Repita la experiencia como antes pero usando tartrato de sodio y potasio. Quinta Experiencia: Espectro de Absorcin del complejo de hierro coloreado o ferrona Siguiendo el procedimiento explicado para la operacin y calibracin del espectrofotmetro, mida el % T o la absorbancia de la solucin de ferrona preparada en la primera experiencia a las siguientes longitudes de onda: 375, 400, 425, 450, 475, 500, 512, 525, 550, 575, 600 y 625 nm. Construya el espectro graficando la absorbancia medida en funcin de la longitud de onda.

Manejo y anlisis de datos Primera Experiencia: Estabilidad de color del complejo de hierro coloreado o ferrona en funcin del tiempo.

Dibuje un grfico de la absorbancia a 512 nm de la solucin de ferrona en funcin del tiempo (en minutos) con los resultados obtenidos.

52

Segunda Experiencia: Determinacin de la concentracin de hierro en una solucin por titulacin colorimtrica con orto-fenantrolina El objetivo de esta parte del trabajo experimental es determinar la concentracin de hierro en una solucin acuosa por titulacin colorimtrica con solucin acuosa de orto-fenantrolina. Se espera que las soluciones de ferrona formadas cumplan con la Ley de Lambert-Beer, por lo que en un grafico de absorbancia vs. Volumen de Fenantrolina, deberan observarse dos lneas rectas que se cortan. Esta grafica se denomina curva de titulacin colorimtrica. El punto de interseccin de las rectas o punto de equivalencia, representa la cantidad exacta de ortofenantrolina para formar complejo con el hierro presente en la solucin. Recuerde que existe una relacin estequiomtrica fija entre el hierro y la fenantrolina que define la formacin de la ferrona. Use la herramienta ANALISIS DE DATOS del programa EXCEL y la opcin REGRESION LINEAL para realizar el ajuste lineal de cada una de las ramas de la curva de titulacin colorimtrica. Reporte en su informe todos los resultados emitidos por el programa. Utilice todos los indicadores estadsticos reportados para determinar la concentracin de hierro en la solucin analizada y su error aleatorio correspondiente. Compare con el valor verdadero de 10-3 M. Tercera Experiencia: Estabilidad de color del complejo de hierro coloreado o ferrona en funcin del pH Dibuje un grfico de absorbancia en funcin de pH. Tome nota de los resultados de A vs. pH de sus compaeros de laboratorio. Unifique todos los resultados y realice un anlisis de varianza para determinar si el pH tiene una influencia significativa sobre la absorbancia de la solucin de ferrona. Recuerde los conocimientos explicados en clase respecto al anlisis de varianza de un solo factor. Cuarta Experiencia: Estabilidad de color del complejo de hierro coloreado o ferrona en funcin de la composicin de la matriz de la solucin. Efecto de la presencia de sales. Calcule el valor absoluto del cambio de la absorbancia para la solucin de ferrona restando la absorbancia de la solucin sin sal aadida y la absorbancia de la solucin con cada una de las sales.

Ai = ASali Asin sal

= 512 nm

Ecuacin 20

Realice un grafico del cambio de la absorbancia de las soluciones de ferrona en funcin de la cantidad de sal aadida. De acuerdo a la disociacin y solubilidad esperada para cada una de las sales, determine el efecto esperado de estas sobre la estabilidad de la ferrona presente en las soluciones. Use sus conocimientos de Qumica Analtica para explicar los cambios observados con respecto a los esperados en el equilibrio qumico debido a la adicin de las sales. Unifique todos los resultados de los otros grupos de trabajo y realice un anlisis de varianza para determinar si la presencia de la sal tiene una influencia significativa sobre la absorbancia de la solucin de ferrona. Recuerde los conocimientos explicados en clase respecto al anlisis de varianza de un solo factor.
Quinta Experiencia: Espectro de Absorcin del complejo de hierro coloreado o ferrona Construya el espectro de absorcin de luz visible de la solucin de ferrona representando grficamente la absorbancia medida en funcin de la longitud de onda. Note el comportamiento del espectro de la solucin alrededor de 512 nm. Determine el punto de mxima absorbancia para la ferrona? Coincide con el sugerido de 512nm?

53

Indicaciones para la elaboracin del informe Contenido terico que debe estar presente en la introduccin y ser usado para la discusin de resultados Principios que rigen la absorcin de radiacin por parte de los llamados grupos cromforos. Fundamentos de las titulaciones colorimtricas. Forma esperada para las curvas de titulacin colorimtrica. Tipos de ensayos usados para la determinacin de la concentracin de hierro en soluciones acuosas. Importancia y aplicabilidad de la tcnica colorimtrica para la determinacin de la concentracin de hierro. Informacin a incluir en la seccin de materiales y mtodos

Descripcin del procedimiento experimental usado. Descripcin del mtodo numrico usado para la determinacin del punto de equivalencia a partir de curvas de titulacin colorimtrica
Preguntas a las que debe dar respuesta en su discusin de resultados

1. Cul es la reaccin de formacin del complejo coloreado de hierro/fenantrolina o ferrona? 2. Qu nivel de acidez favorece la formacin de la ferrona? 3. Qu estado de oxidacin debe tener el hierro en solucin para asegurar la formacin de la ferrona? Qu papel juega la hidroxilamina durante el ensayo colorimtrico? Cul es la reaccin que lo explica? 4. Qu forma tiene el espectro de absorcin de luz visible de la solucin de ferrona? Qu relacin guardan las posibles transiciones energticas del grupo cromforo con la forma del espectro de absorcin de luz visible de la solucin de ferrona? 5. Cules son las condiciones ptimas de tiempo y pH para asegurar la mxima estabilidad de la ferrona? Es la absorbancia a 512 nm de la ferrona independiente del pH de la solucin? De serlo, en que rango de pH se manifiesta esta independencia? Qu efecto particular espera obtener con la adicin de acetato de sodio? Explique que equilibrio qumico y como es afectado ste por la presencia de acetato de sodio. 6. Qu forma tiene la curva de titulacin colorimtrica de la solucin de hierro con solucin de orto-fenantrolina? Coincide con lo esperado? Como se comparan las pendientes de las rectas que describen la variacin de la absorbancia antes y despus del punto de equivalencia? Coinciden con lo esperado para este ensayo colorimtrico? 7. Cul es la concentracin de hierro en la solucin analizada? Cul es el intervalo de confianza de la concentracin determinada experimentalmente? Cmo se compara esta concentracin con el valor verdadero o esperado de 10-3 M? 8. Cul es el efecto de la adicin de las sales sobre la absorbancia de las soluciones de ferrona? En caso de observarse variaciones de la absorbancia de la solucin, Coinciden las variaciones observadas con las esperadas para los cambios en el equilibrio qumico provocados por la adicin de las sales? Cules son los equilibrios qumicos en solucin que se suceden en esta cuarta experiencia?
Referencias 1. Skoog, D. A., D. M. West, F. J. Holler, S. R. Crouch. (2001) Qumica Analtica. Sptima Edicin. McGraw-Hill Interamericana Editores S.A. de C.V. Mxico. p.p. 459-460, 614-630

2. Skoog, D. A., F. J. Holler, T. A. Nieman (2001) Principios de Anlisis Instrumental. Quinta Edicin. McGraw-Hill Interamericana Interamericana de Espaa S.A. U. Madrid, Espaa. p.p. 372-374

54

Tablas para la adquisicin de datos

Tabla 1. Datos para estudiar la estabilidad de color del complejo de hierro coloreado o ferrona en funcin del tiempo Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Equipo usado: __________________________________________________________________ Fabricante:___________________ Modelo: _______________ Apreciacin: _____________ Concentracin de la solucin de hierro usada: _____ M Volumen (mL): _________ Concentracin de la solucin de fenantrolina usada: _____ Volumen (mL): _________ Blanco utilizado: ________________________________________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL
Absorbancia de la solucin a 512 nm Tiempo (min)
%ToA

55

Tabla 2. Construccin de la curva de titulacin colorimtrica para la determinacin de la concentracin de hierro en la solucin Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Equipo usado: __________________________________________________________________ Fabricante:___________________ Modelo: _______________ Apreciacin: _____________ Concentracin de la solucin de hierro usada: _____ M Concentracin de la solucin de fenantrolina usada: _____ Blanco utilizado: ________________________________________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL
Absorbancia de las soluciones a 512 nm %ToA Volumen de la Volumen de la % T o A a Solucin de hierro Solucin de orto- Observacin a Tiempo Observacin 1 = ____ min Tiempo 2 = ____ (mL) fenantrolina (mL)
min

4 4 4 4 4 4 4

0.1 0.2 0.4 0.6 1.0 3.0 4.0

Tabla 3. Datos para estudiar la estabilidad de color del complejo de hierro coloreado o
ferrona en funcin del pH

Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Equipo usado: __________________________________________________________________ Fabricante:___________________ Modelo: _______________ Apreciacin: _____________ Concentracin de la solucin de hierro usada: _____ M Volumen (mL): _________ Concentracin de la solucin de fenantrolina usada: _____ Volumen (mL): _________ Blanco utilizado: ________________________________________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL

Absorbancia de la solucin a 512 nm a tiempo (min) __________ %ToA pH

56

Tabla 4. Datos para estudiar la estabilidad de color del complejo de hierro coloreado o ferrona en funcin de la composicin de la matriz de la solucin. Efecto de la presencia de sales.
Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Equipo usado: __________________________________________________________________ Fabricante:___________________ Modelo: _______________ Apreciacin: _____________ Concentracin de la solucin de hierro usada: _____ M Volumen (mL): _________ Concentracin de la solucin de fenantrolina usada: _____ Volumen (mL): _________ Blanco utilizado: ________________________________________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL

Absorbancia de la solucin a 512 nm a tiempo (min) __________

Fluoruro de Sodio Masa %ToA aadida (g) Oxalato de sodio Masa %ToA aadida (g) Tartrato de Sodio y Potasio Masa %ToA aadida (g)

Tabla 5. Determinacin del espectro de absorcin de luz visible de una solucin de ferrona
Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Equipo usado: __________________________________________________________________ Fabricante:___________________ Modelo: _______________ Apreciacin: _____________ Concentracin de la solucin de hierro usada: _____ M Concentracin de la solucin de fenantrolina usada: _____ Blanco utilizado: ________________________________________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL
Longitud de % T o A onda (nm) Longitud de % T o A onda (nm) Longitud de % T o A onda (nm)

57

PRACTICA N 7 DETERMINACION DEL PUNTO ISOSBESTICO Y LA CONSTANTE DE DISOCIACION DE UN INDICADOR CIDO-BASE Introduccin

A partir de la absorbancia (A) a una determinada longitud de onda de una disolucin se puede calcular la concentracin (c) de soluto mediante la ley de Lambert-Beer: A = b c, donde b es la longitud recorrida por la radiacin electromagntica en el seno de la disolucin y una constante caracterstica del soluto, denominada coeficiente de extincin molar. Esta relacin es vlida cuando existe una sola especie absorbente a la longitud de onda estudiada, sin embargo cuando esto no ocurre, la relacin se modifica a:

A = b i ci = b i ci
i =1 i =1

Ecuacin 21

Donde i es el coeficiente de extincin molar de la especie i y ci es la concentracin de la especie i. Una de las situaciones ms representativas de este tipo de sistemas con mltiples especies absorbentes, se tiene cuando se aade un indicador cido-base a una solucin determinada. Se sabe que un indicador cido-base es una sustancia orgnica que puede cambiar de color de acuerdo al nivel de acidez de la solucin de la cual forme parte, y ceder o aceptar protones debido su naturaleza anftera, segn una reaccin de disociacin como la que se indica: Ka +

HIn H + In

Ecuacin 22

Su cambio de color se basa en el desplazamiento del equilibrio qumico mostrado en la Ecuacin 2, y en la diferencia de comportamiento del grupo cromforo presente en la molcula HIn o el in In-. En el caso de un indicador cido-base, siempre que ocurra su disociacin se generaran dos especies absorbentes, sus llamadas forma cida (HIn) y forma bsica (In-), as que la absorbancia de la solucin del indicador ser el resultado de la contribucin de cada una de las especies de acuerdo a su concentracin en el equilibrio. A travs de la aplicacin de las transformaciones logartmicas que definen las escalas de pH y pK a la ecuacin de la constante de equilibrio de la reaccin, puede obtenerse la llamada ecuacin de Henderson-Hasselbach:

In eq pH = pK a + log [ HIn ]eq

Ecuacin 23

En condiciones de extrema acidez o basicidad, la absorbancia medida es el producto de la contribucin de una sola de las especies coloreadas, por lo que es posible determinar la constante de disociacin del indicador a partir de la absorbancia de una solucin neutra a partir de la siguiente relacin:

A Aacida pK a = pH log neutra Abasica Aneutra

Ecuacin 24

58

Donde Aacida, Abasica y Aneutra representan la absorbancia medida para las soluciones cida, bsica y neutra del indicador. Antes de realizar el trabajo experimental que se presenta, ud. debe ser capaz de aplicar la Ley de Lambert Beer y las relaciones del equilibrio qumico para deducir la ecuacin 4. Como los grupos cromforos de los indicadores acido-base son variados, antes de iniciar el trabajo experimental debe conocer la reaccin de disociacin de los indicadores a usar, as como su pKa. Se presenta a manera de ejemplo la informacin correspondiente al rojo de metilo [1] .
Indicador Reaccin de Disociacin pKa a 25 oC Cambio de color

Rojo de Metilo Azul de Bromotimol Rojo de Fenol Verde de Bromocresol DEBE BUSCAR LA REACCIN CORRESPONDIENTE DEBE BUSCAR LA REACCIN CORRESPONDIENTE DEBE BUSCAR LA REACCIN CORRESPONDIENTE

5.1 -

RojoAmarillo -

Objetivos Generales

Estudiar el espectro de absorcin de luz visible un indicador cido-base como ejemplo de un sistema con mltiples especies absorbentes Determinar el punto Isosbstico del indicador cido-base Conocer la aplicabilidad de la espectrometra para la determinacin de las constantes de disociacin de electrolitos dbiles

Equipos, Reactivos y Material de Laboratorio EQUIPOS Espectrofotmetro (Spectronic 20). Analgico. Milton Roy Company. Espectrofotmetro (Spectronic 20D+). Digital. Milton Roy Company. Espectrofotmetro (Genesys 5). Digital. Milton Roy Company. Balanza electrnica de precisin 0.01 g MATERIAL: Cubetas de vidrio Pipetas de 1 mL Matraces aforados de 25 mL Varillas de vidrio Gotero SOLUCIONES Solucin de cido clorhdrico 0.1 M Solucin de hidrxido de sodio 0.1 M Solucin Buffer de pH=7

59

REACTIVOS Verde de bromocresol azul de bromotimol rojo de fenol. Metodologa Experimental Operacin y calibracin del Espectrofotmetro

SIGA LO ESTABLECIDO EN LA PRACTICA No. 4

Manejo de las cubetas

SIGA LO ESTABLECIDO EN LA PRACTICA No. 4. RECUERDE QUE DEBE MANEJAR CUIDADOSAMENTE LAS CUBETAS
Primera Experiencia: Determinacin del Espectro de Absorcin del indicador en su forma cida, bsica y neutra

FORMA CIDA: Prepare 25 mL de una solucin cida a partir de HCl 0.1 M y adale 0.5 mL (~ 6 gotas) del indicador cido-base: verde de bromocresol azul de bromotimol rojo de fenol. Verifique si el color de la solucin coincide con lo esperado para la forma cida del indicador seleccionado. Mida el pH de la solucin haciendo uso del pH-metro de acuerdo al procedimiento establecido en la prctica no. 3 FORMA BASICA: Prepare 25 mL de una solucin bsica a partir de NaOH 0.1 M y adale 0.5 mL (~ 6 gotas) del indicador cido-base: verde de bromocresol azul de bromotimol rojo de fenol. Verifique si el color de la solucin coincide con lo esperado para la forma bsica del indicador seleccionado. Mida el pH de la solucin haciendo uso del pH-metro de acuerdo al procedimiento establecido en la prctica no. 3 FORMA NEUTRA: Prepare 25 mL de una solucin bsica a partir de solucin estndar de pH=7 y adale 0.5 mL (~ 6 gotas) del indicador cido-base: verde de bromocresol azul de bromotimol rojo de fenol. Verifique si el color de la solucin coincide con lo esperado para la forma neutra del indicador seleccionado. Verifique el pH de la solucin haciendo uso del pHmetro de acuerdo al procedimiento establecido en la prctica no. 3 Siguiendo el procedimiento explicado para la operacin y calibracin del espectrofotmetro, mida el % T o la absorbancia de cada una de las soluciones a las siguientes longitudes de onda: 375, 400, 425, 450, 475, 500, 525, 550, 575, 600, 625, y 650 y 695 nm. Puede usar agua destilada como Blanco.
Manejo y anlisis de datos Primera Experiencia: Determinacin del Espectro de Absorcin del indicador en su forma cida, bsica y neutra

Construya el espectro de absorcin de luz visible de cada una de las soluciones y represntelos en la misma figura. Determine el punto Isosbstico o punto iso-absortivo. Use la ecuacin no. 4 para determinar el pKa del indicador seleccionado a cada una de las longitudes de onda usando la absorbancia de las soluciones entre 375-695 nm. Determine la discrepancia porcentual de sus resultados respecto al valor real, y estime el intervalo de longitud de onda que se corresponde con el mnimo de discrepancia. Seleccione las cinco o seis longitudes

60

de onda a las que se observa la menor discrepancia y calcule el valor promedio para la constante de disociacin del indicador. Debido a la relacin logartmica entre el pKa y la constante de disociacin del indicador, use las siguientes relaciones para hallar el valor promedio de pKa:

( K a )i = 10( pK )
Ka =

a i

(K )
i =1

a i

pK a = log K a

( )

Ecuacin 25

a i es el valor experimental hallado para la solucin a una determinada longitud de Donde onda. Realice un anlisis estadstico t para conocer si el valor promedio determinado experimentalmente difiere significativamente del valor verdadero.

( pK )

Elabore una grafica de Absorbancia de solucin en funcin de pH a distintas longitudes de onda. Estudie como la variacin del pH de la solucin afecta la absorbancia de la mezcla. Halle la longitud de onda para la absorbancia mxima de la solucin en medio cido y bsico. Estudie la variacin de la relacin Absorbancia vs. pH alrededor del punto Isosbstico.
Indicaciones para la elaboracin del informe Contenido terico que debe estar presente en la introduccin y ser usado para la discusin de resultados Aplicacin de la Ley de Lambert-Beer para la determinacin de la absorbancia de soluciones con ms de una especie absorbente. Equilibrio de ionizacin de un indicador cido-base. Definicin de Punto Isosbstico. Utilidad de la determinacin del punto Isosbstico para el estudio de soluciones con ms de una especie absorbente. Consideraciones matemticas usadas para la determinacin del pKa del indicador a partir de la absorbancia de sus soluciones a distintos pH. Aplicaciones practicas de la tcnica de anlisis en otros campos de la ciencia. Informacin a incluir en la seccin de materiales y mtodos

Descripcin del procedimiento experimental y equipo usado en la prctica. Deduccin de la frmula usada para la determinacin del pKa del indicador cido-base
Preguntas a las que debe dar respuesta en su discusin de resultados

1. Cul es la formula molecular del indicador acido-base seleccionado para el estudio? Cul es su reaccin de disociacin? Cules son los valores tericos para su pKa y Ka? Cul es el grupo cromforo que domina su cambio de color? 2. Qu forma tiene el espectro de absorcin de luz visible de la solucin cida del indicador? A que longitud de onda se observa el mximo de absorbancia? Qu relacin esta longitud de onda con las posibles transiciones energticas del grupo cromforo?

61

3. Qu forma tiene el espectro de absorcin de luz visible de la solucin bsica del indicador? A que longitud de onda se observa el mximo de absorbancia? Qu relacin esta longitud de onda con las posibles transiciones energticas del grupo cromforo? 4. Qu forma tiene el espectro de absorcin de luz visible de la solucin neutra del indicador? A que longitud(es) de onda se observa(n) el (los) mximo(s) de absorbancia? Qu relacin observa entre el espectro de la solucin neutra y el espectro de las soluciones acida y bsica? 5. A que longitud de onda se encuentra el punto Isosbstico del indicador cido-base? De querer determinar la concentracin del indicador en una solucin usando espectrometra, a que longitud de onda lo hara? Qu puede decir sobre los coeficientes de extincin molar de las formas cida y bsica del indicador a la longitud de onda del punto isosbstico? 6. Cul es el pKa del indicador cido-base hallado experimentalmente? En qu rango de longitud de onda se observa la menor discrepancia porcentual entre el pKa experimental y el terico? Cmo puede explicar este comportamiento? 7. Qu dependencia existe entre el pH y la absorbancia de las distintas formas del indicador? Cules son las mejores condiciones para hallar la absorptividad molar de las especies coloreadas del equilibrio de ionizacin del indicador? Consultar las siguientes referencias http://www.ugr.es/~qmfisica/espanol/QFciencias/Docencia/Ficheros/Practicas/PII-1.pdf http://www.uv.es/~salgado/medicina/.files/espectrofotometria.pdf http://redalyc.uaemex.mx/redalyc/pdf/579/57937103.pdf (aplicacin)
Referencias

1. Biblioteca Digital de la Universidad de Chile (2007). Aplicaciones de la Espectrofotometra. Extrado el 29 de noviembre de 2008 desde http://mazinger.sisib.uchile.cl/repositorio/ap/ciencias_quimicas_y_farmaceuticas/apquiman-instr-7/c20a.html 2. Skoog, D. A., F. J. Holler, T. A. Nieman (2001) Principios de Anlisis Instrumental. Quinta Edicin. McGraw-Hill Interamericana Interamericana de Espaa S.A. U. Madrid, Espaa.

62

Tablas para la adquisicin de datos

Tabla 1. Datos para elaborar el espectro de absorcin de la forma cida del indicador
Fecha: ___________ Analista(s): ________________________________________________ Equipo usado para medir Absorbancia: ______________________________________________ Fabricante:_______________________________ Modelo: __________________________ Indicador seleccionado: __________________________________________________________ Concentracin de la solucin de cida usada: _____ M Volumen (mL): ____________ pH de la solucin: ___________________________ Equipo usado para medir el pH: _______________________________________________ Fabricante:_______________________________ Modelo: ___________________________ Blanco utilizado: ________________________________________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL
Longitud de % T o A onda (nm) Longitud de % T o A onda (nm) Longitud de % T o A onda (nm)

Tabla 2. Datos para elaborar el espectro de absorcin de la forma bsica del indicador
Fecha: ___________ Analista(s): ________________________________________________ Equipo usado para medir Absorbancia: ______________________________________________ Fabricante:_______________________________ Modelo: __________________________ Indicador seleccionado: __________________________________________________________ Concentracin de la solucin de bsica usada: _____ M Volumen (mL): ____________ pH de la solucin: ___________________________ Equipo usado para medir el pH: _______________________________________________ Fabricante:_______________________________ Modelo: ___________________________ Blanco utilizado: ________________________________________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL
Longitud de % T o A onda (nm) Longitud de % T o A onda (nm) Longitud de % T o A onda (nm)

63

Tabla 3. Datos para elaborar el espectro de absorcin de la forma neutra del indicador
Fecha: ___________ Analista(s): ________________________________________________ Equipo usado para medir Absorbancia: ______________________________________________ Fabricante:_______________________________ Modelo: __________________________ Indicador seleccionado: __________________________________________________________ Concentracin de la solucin estndar usada: _____ M Volumen (mL): ____________ pH de la solucin: ___________________________ Equipo usado para medir el pH: _______________________________________________ Fabricante:_______________________________ Modelo: ___________________________ Blanco utilizado: ________________________________________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL
Longitud de % T o A onda (nm) Longitud de % T o A onda (nm) Longitud de % T o A onda (nm)

64

PRCTICA N 8 IDENTIFICACIN DE SUSTANCIAS POR ESPECTROMETRA EN EL INFRARROJO (IR)

DEBE TRAER GUANTES PARA LA PRACTICA
Introduccin

La Espectrometra en el Infrarrojo es una tcnica de gran utilidad para el anlisis cuantitativo y cualitativo de sustancias desconocidas, la dilucidacin de su estructura molecular, y la localizacin e identificacin de impurezas, a partir del espectro (% T vs. Nmero de onda) que las muestras (gaseosas, liquidas o slidas) generan cuando son irradiadas con energa cuya longitud de onda vara entre 0,7 m y 14 m; radiacin cuya longitud de onda se encuentra por encima del rojo. En estudios de IR se prefiere usar la variable llamada nmero de onda, que se define como el recproco de la longitud de onda. La regin ms usada en la Qumica Analtica es la llamada Regin Fundamental o Regin Media entre los 670 - 4.000 cm-1 (14,9 y 2,5 m); y es la que se utilizar en la prctica. La radiacin en esta regin del espectro provoca el alargamiento vibracional y flexin de los enlaces en las molculas, lo que se observa como una variacin de la absorbancia a un determinado numero de onda. Para que se de la absorcin es necesario que la radiacin incidente tenga una frecuencia igual a la frecuencia de la vibracin que va a producir. La mayora de los materiales orgnicos e inorgnicos muestran absorcin en el IR, y sus espectros en estado de pureza son tan caractersticos como sus propiedades fsicas (punto de ebullicin, punto de fusin, etc.); de aqu que por comparacin de espectros pueda intuirse la identidad de una muestra desconocida. La multiplicidad de seales caractersticas que pueden presentarse en un espectro dado, hace que la interpretacin de los espectros IR amerite del dominio de los espectros de las sustancias clave de las distintas familias de compuestos (alcoholes, cidos, etc.) En este trabajo experimental se busca que el estudiante ponga en prctica sus conocimientos sobre estos espectros, y los use para identificar sustancias de importancia industrial y sus posibles contaminantes. El conocimiento de esta importante tcnica analtica ayudara a enriquecer su formacin como ingeniero qumico, en especial si decide laborar en el campo del anlisis de control de calidad de productos industriales.
Objetivos Generales

Determinar el espectro IR de una serie de muestras problema en estado liquido y slido Ubicar las seales caractersticas de los grupos orgnicos e inorgnicos ms comunes en los espectros IR para la identificacin de las muestras problema Conocer las tcnicas de preparacin de muestras para su anlisis por espectrometra en el IR Conocer la aplicabilidad de la espectrometra en el infrarrojo en el anlisis de identificacin de sustancias orgnicas e inorgnicas

Equipos, Reactivos y Material de Laboratorio EQUIPOS Espectrofotmetro infrarrojo Perkin Elmer Modelo 1310 MATERIAL: Pelcula de Poliestireno para calibracin

65

Equipo para pulimento de ventanas de NaCl Ventanas de NaCl Mortero de gata. Guantes de Latex
REACTIVOS Aceite mineral Nujol Parafina Etanol saturado en NaCl Metodologa Experimental Operacin y calibracin del Espectrofotmetro

Figura 18 Espectrofotmetro de Infrarrojo Perkin Elmer Modelo 1310

1: Monocromador/Fotmetro y Compartimiento de Sistema Electrnico 2: Portador del marcador de registro 3: Pantalla de registro longitud de onda 4: Compartimiento de la lmpara 5: Porta celdas 6: Panel de control

66

Figura 19 Panel de control del Espectrofotmetro de Infrarrojo Perkin Elmer Modelo 1310

Una vez preparada la muestra y su respectivo blanco, se deben posicionar las celdas correctamente en el contenedor de celdas del equipo. Luego debe seguir los pasos que se indican: 1) Presionar el botn Chart, luego usando el panel Parameter Adjust, ajuste el papel usando los botones hasta situar el inicio de la carta en el origen de coordenadas. El botn mueve hacia delante el papel, el botn mueve hacia atrs el papel. 2) Presionar el botn de tiempo de corrida del espectro o Scan Time. Seleccionar la opcin 12 min. Existe una opcin adicional de 3 min en el caso de requerir de un escaneo rpido del espectro de una sustancia. 3) Presionar el botn de expansin del espectro en el papel o Chart Expansion. Use 1 para imprimir el espectro en el papel completo o 0.5 para usar la mitad del papel. 4) Presionar el botn Scan para empezar a correr el espectro, el nmero de onda empieza en 4000 cm-1 automticamente. Calibracin del Espectrofotmetro: Los espectrofotmetros IR comerciales son capaces de buena reproducibilidad en la longitud de onda, sin embargo, es conveniente comprobar la exactitud de la calibracin. Esta se realiza utilizando sustancias patrn cuyo espectro ha sido estudiado a fondo como el poliestireno, el indeno y algunos gases como amonaco, cido clorhdrico y agua. El poliestireno es la sustancia corrientemente utilizada en el laboratorio. Siguiendo las indicaciones para la operacin del espectrofotmetro (Scan Time 12, Chart Expansion 1), determine el espectro de la pelcula de poliestireno entre 4000 cm-1 y 600 cm-1. usando aire como blanco para la medicin. Recuerde que no debe tocar la pelcula. Compare el espectro experimental con el esperado (Figura 1) Verifique que la profundidad de los picos observados (% Trasmitancia o %T) en el espectro experimental coincide con el valor esperado y reportado por el fabricante, y que adems el nmero de onda cumple con la precisin esperada para el instrumento en cuestin. Para el

67

Espectrofotmetro Perkin Elmer Modelo 1310 se asegura una precisin de 2 % T para aquellas bandas cuya transmitancia este entre 80 % y 10 % T.

Figura 20 Espectro en el infrarrojo del poliestireno (1) Tabla no. 1 Bandas de absorcin esperadas para la pelcula de poliestireno de calibracin

Banda 1 2 3 4 5 6 7 8

Frecuencia (cm-1) 3027 2851 1944 1601 1181 1028 907 699

Tolerancia (cm-1) 6 6 3 3 3 3 3 3

Fuente: Manual de operacin del Espectrofotmetro Perkin Elmer Modelo 1310

Si el espectro no cumple con los requerimientos de numero de onda y transmitancia para las bandas caractersticas, deben identificarse posibles problemas con el posicionamiento del marcador o del sistema de filtrado de la radiacin. Estos ajustes deben ser hechos por el profesor o el tcnico de laboratorio.
Manejo de las cubetas Las cubetas son de cloruro de sodio (NaCl), costosas, frgiles y propensas al empaamiento por adsorcin y condensacin de vapor de agua por lo que debe manipularlas CUIDADOSAMENTE usando guantes. Antes de usarlas, debe pulirlas y limpiarlas correctamente para eliminar cualquier posible residuo de muestra o vapor de agua, que pudiera emitir seales que enmascaren aquellas del analito a identificar. Pulimento y Limpieza de Ventanas de Sal Cuando la ventana ha sido usada se le debe lavar con un solvente adecuado para eliminar las ltimas trazas de sustancia. Solamente si se observan rayaduras o irregularidades en la

68

ventana es preciso pulirla con polvo abrasivo, de lo contrario puede usar la grasa disponible en el laboratorio. Se coloca un poco de la sustancia seleccionada anteriormente, y asumiendo la posicin indicada en la figura 4, se pule la ventana primero de un lado luego de otro con movimiento rotatorio suave.

Figura 21 Posicin y tcnica adecuada para el pulimento de las celdas de sal (1)

Cuando se tiene una superficie lisa se limpia bien la superficie del vidrio, aadiendo algunas gotas de alcohol saturado con NaCl sobre el segundo pao del panel para pulitura. Al realizar esta operacin dos o tres veces en cada lado se logra una ventana perfectamente transparente. En caso de no estar la ventana rayada es suficiente esta ltima etapa para ponerle en condiciones adecuadas de trabajo. Este procedimiento debe repetirse cada vez que analice una sustancia nueva con la finalidad de asegurarse que no quedan residuos contaminantes.
Primera Experiencia: Verificacin de la transparencia de las ventanas de NaCl en el infrarrojo

Una vez que se tienen celdas limpias, es vital que se proceda a comprobar la transparencia del blanco en la regin IR. Considerando las indicaciones para la operacin del equipo, debe realizar un espectro usando solo la celda de NaCl. Compare el espectro obtenido con el esperado para una celda de NaCl con un grosor de 4 mm (Figura 5). En caso de no encontrar correspondencia con lo esperado, debe comprobar que no existen residuos del material de pulitura o rayaduras en la celda. Repita el procedimiento pero ahora aada algunas gotas de solvente (aceite de nujol o parafina) entre las celdas, y determine el espectro del solvente. Compare el espectro obtenido con el esperado para la sustancia seleccionada.

Figura 22 Espectro IR de una ventana de NaCl de 4 mm de espesor (2)

69

Segunda Experiencia: Determinacin del Espectro IR de una sustancia problema en estado liquido o en solucin Se puede utilizar una celda para lquidos o medir el espectro entre dos ventanas de ClNa o de BrK cuando el lquido tiene suficiente viscosidad. En este ltimo caso se coloca una gota sobre una ventana y luego se superpone la otra ventana en un extremo y se le va deslizando sobre la ventana inferior en tal forma que no queden burbujas. Se montan las dos ventanas en un soporte y se mide el espectro. En caso de que el espectro no tenga la suficiente intensidad, se coloca entre ambas ventanas un espaciador (0.1 a 0.025 mm). Cada grupo deber medir e interpretar el espectro de una muestra lquida. Tercera Experiencia: Determinacin del Espectro IR de una sustancia problema en estado slido bajo la forma de suspensin. Cuando una sustancia slida tiene poca solubilidad en CCl4 se toman unos 5 mg y se dispersa la sustancia en aceite de parafina (1 2 gotas) sobre un mortero de gata moliendo hasta tener una pasta uniforme. Se toma luego la suspensin con una esptula y se le coloca sobre una ventana de sal procedindose como en el caso anterior. Debe cuidar de no anadir demasiado analito al mortero. Cada grupo deber medir e interpretar un espectro. Manejo y anlisis de datos Primera: Verificacin de la transparencia de las ventanas de NaCl en el infrarrojo Para el espectro IR de la ventana de NaCl (vaca), discuta sobre el rango de numero de onda donde se observa la transparencia a la radiacin IR, y la relacin que estos valores guardan con respecto a la naturaleza de la molcula de NaCl. Discuta sobre las razones que explican la transparencia al IR del NaCl. Si observ seales irregulares en el espectro del NaCl, identifique que problemas pudieron presentarse (restos de pulitura, rayaduras, etc), y use basamentos tericos para fundamentar sus afirmaciones. Para el espectro IR de la ventana de NaCl con el solvente, discuta sobre el rango de numero de onda donde se observa su transparencia a la radiacin IR. Discuta sobre las razones que explican este comportamiento. Si observa bandas de absorcin, discuta sobre las posibles interferencias con el espectro del analito, use basamentos tericos para fundamentar sus afirmaciones.

Segunda y Tercera Experiencia: Determinacin del Espectro IR de una sustancia problema En base a la informacin presentada en la literatura, y la que ud. posee acerca de las seales emitidas por los distintos grupos funcionales de las molculas, indique la posible identidad de la sustancia. Indique en el espectro claramente la posicin de las seales que us para identificar al compuesto. Verifique la precisin de su respuesta, comparando el espectro hallado experimentalmente con el espectro esperado para la sustancia pura. Haga uso de las bases de datos electrnicas disponibles en la web (por ejemplo http://webbook.nist.gov/chemistry/), o de sus libros de Qumica Orgnica y Anlisis Instrumental. Incluya la imagen de los espectros terico y experimental en su informe. Indicaciones para la elaboracin del informe Contenido terico que debe estar presente en la introduccin y ser usado para la discusin de resultados Caractersticas de la radiacin en la regin del infrarrojo. Zonas de la regin infrarroja. Relacin entre las vibraciones moleculares y las frecuencias de absorcin de grupos funcionales caractersticos. Descripcin de la regin del I.R. Fundamental. Zona de los grupos funcionales

70

(tensin, deformacin) y regin Dactilar. Aplicaciones practicas ms importantes de la tcnica de anlisis en otros campos de la ciencia.
Informacin a incluir en la seccin de materiales y mtodos

Componentes Bsicos del espectrofotmetro IR. Describa especficamente el modelo 1310 usado en su trabajo experimental, prestando particular atencin al funcionamiento del detector. Bsese en la informacin suministrada por la compaa manufacturadora Perkin Elmer. Puede fotocopiar el manual de operacin del equipo en el Laboratorio. NO describa la forma de preparacin de la muestra, solo haga hincapi en las sustancias usadas para ello y las condiciones operacionales del instrumento. Por ejemplo ntese en el siguiente ejemplo los parmetros caractersticos de importancia para la consideracin del espectro.

Figura 23 Espectro IR del Fenol

Se prepar una solucin al 10 % (p/v) de Fenol en Tetracloruro de Carbono (CCl4) para el rango de numero de onda entre 3800 y 1300 cm-1, y una solucin al 10 % p/v en Disulfuro de Carbono (CS2) para el rango de numero de onda entre 1300 y 650 cm-1. Se uso como blanco el solvente base de la solucin, en una celda de bromuro de potasio (KBr). Para obtener el espectro se trabajo con un espectrofotmetro en Infrarrojo Modelo 521 (Perkin Elmer, Inc.) con filtros a 3150, 2500, 2000, 1150, 700 y 410 cm-1. La resolucin del espectro es de 4 cm-1.

Preguntas a las que debe dar respuesta en su discusin de resultados

1. En base a la informacin sobre la frecuencia de absorcin de ciertos grupos funcionales, y los espectros IR suministrados indique la familia (inorgnica u orgnica) a la cual pertenecen, la identidad de la sustancia (e.g. n-butanol) y el estado fsico de existencia a condiciones normales (gas, liquido, slido). 2. Indique en cada espectro claramente la posicin de la(s) seal(es) que us para identificar al compuesto. Explique el significado asociado a la seal. 3. De acuerdo al estado de existencia (gas, liquido, slido) de cada muestra, indique claramente que tipo de impurezas pudieron haber contaminado la muestra durante su preparacin. 4. De ser una sustancia higroscpica, que alteraciones en el espectro IR podra esperar? 5. Que tipo de impurezas y alteraciones en el espectro IR esperara observar durante el procesamiento inadecuado de muestras slidas? (posible contaminacin con sudor, polvo atmosfrico, etc.)

71

Consultar las siguientes referencias http://webbook.nist.gov/chemistry/ http://www.ciens.ucv.ve:8080/generador/sites/LIApregrado/archivos/Guias%20p ara%20el%20%20manejo%20de%20%20equipos.pdf www.umsl.edu/~orglab/pdffiles/irspec2.pdf

Referencias

1. Perkin Elmer Corporation. Owner Manual: Instructions. Models 1310, 1320 and 1330 Infrared Spectrometers (1984). Publicacin de Perkin Elmer Corporation, USA. Captulos 1 y 5. 2. Chia, L. y S. Ricketts. Basic Techniques and Experiments in Infrared and FR-IR Spectroscopy. Publicacin de Perkin Elmer Corporation, USA. p.p. 20-29 3. Skoog, D. A., F. J. Holler, T. A. Nieman (2001) Principios de Anlisis Instrumental. Quinta Edicin. McGraw-Hill Interamericana de Espaa S.A. U. Madrid, Espaa.

72

PRCTICA N 9 DETERMINACIN DE HIERRO Y NQUEL EN SOLUCIONES ACUOSAS POR ESPECTROMETRA DE ABSORCIN ATMICA
Introduccin Esta es una tcnica muy til para la determinacin de muchos elementos en el rango de concentracin de ppm o mg/L. El mtodo se basa en la absorcin de la luz de longitud de onda caracterstica por tomos en el estado fundamental. Los tomos se obtienen aspirando una solucin del elemento en cuestin y pasndola por una llama (celda atmica), donde la solucin se evapora rpidamente y las partculas residuales se descomponen en sus correspondientes tomos. Las partculas se pueden descomponer trmicamente o por reduccin qumica debido a las especies reductoras en la llama, (reaccin con las especies de Carbono). Habr interferencia en la medida analtica cuando las sustancias presentes en la solucin formen compuestos que no estn completamente disociados en la llama, cuando se excitan tomos que no estn en el estado fundamental o cuando hay ionizacin. El siguiente experimento est diseado para ilustrar alguno de estos fenmenos. La seal de absorcin atmica para casi todos los elementos vara con la composicin de la llama, su estequiometra y la altura del mechero a la cual se hacen las medidas. Para los elementos Ca, Cr, Fe y Mg; las soluciones se prepararn en medio clorhdrico con anticipacin. Las condiciones de operacin se buscarn en el manual, tales como: tipo de lmpara, longitud de onda a usar y su correspondiente valor para el control de la misma, la corriente de la lmpara, el ancho de banda y la concentracin de la solucin que se va a usar. Objetivos Generales Determinar la concentracin de hierro en una muestra problema por el mtodo espectromtrico de absorcin atmica Determinar la concentracin de nquel en una muestra problema por el mtodo espectromtrico de absorcin atmica Elaborar y comprender el uso de una curva de calibracin para la determinacin de la concentracin de un analito. Conocer la aplicabilidad de la espectrometra de absorcin atmica para el anlisis elemental de metales en muestras Equipos, Reactivos y Material de Laboratorio EQUIPOS Espectrofotmetro de Absorcin Atmica BUCK Scientific Modelo 200A Balanza Electrnica MATERIAL: Matraces de 50 mL Vasos de Precipitado 25 mL Pipetas de 1, 2 y 5 mL SOLUCIONES Solucin Patrn del analito de 1000 ppm Solucin Problema

73

Metodologa Experimental Operacin y calibracin del Espectrofotmetro

Esta explicacin esta diseada para el Espectrofotmetro de Absorcin Atmica BUCK Scientific Modelo 200A. Por favor si tiene otro equipo adptese al mismo, utilizando el manual o atendiendo las instrucciones del profesor o personal tcnico.

Figura 24 Diagrama del Espectrofotmetro de Absorcin Atmica BUCK Scientific Modelo 200

1: Interruptor de Combustible 2: Indicador de Flujo volumtrico de oxidante 3: Indicador de Flujo volumtrico de combustible 4: Vlvula para el selector del oxidante 5: Vlvula de control de flujo del oxidante auxiliar 6: Vlvula de control de flujo del combustible 7: Quemador 8: Panel de registro de valores 9: Indicador del ajuste de cero Absorbancia/Emisin 10: Botn para seleccionar el modo Emisin

11: Botn de ajuste la altura de pico 12: Medidor de nivel de energa 13: Pantalla de lectura de la longitud de onda 14: Botn de ajuste de cero Absorbancia/Emisin 15: Selector de funcin 16: Expansin de Escala (Scale Expansion) 17: Perilla de control para correccin de curva 18: Perilla de control para la lmpara 1 19: Perilla de control para la lmpara 2 24: Botn de Encendido 25: Perilla para la seleccin de longitud de onda 28: Selector para apertura de rendija

1. Se enciende el equipo con el Botn de Encendido (24), y calentar por 15 minutos 2. Verifique que todos los botones de mando (16,17,18,19) estn en su tope (cero), es decir completamente desplazados hacia la izquierda, es decir en sentido contrario de las agujas del reloj. 3. Verifique que los botones 20, 21, 22 y 23 estn en posicin OFF, es decir completamente desplazados hacia fuera. 4. Dependiendo del elemento a analizar, busque la lmpara y conecte en el conector adecuado (este equipo tiene tres conectores). El tcnico de laboratorio le indicara como efectuar este paso. 5. De acuerdo al conector escogido, posicione el botn de seleccin de funciones (15) en la posicin seleccionada para la lmpara. 6. Seleccione la perilla de control de lmpara adecuada a su caso (18 o 19 de acuerdo a su conexin) y grela cuidadosamente hasta alcanzar el 80 % de la corriente permitida por la lmpara verificando el valor en la pantalla 8. Vera como va aumentando su luminosidad la lmpara. Deje calentar por 10 o 12 minutos. 7. Deje que el tcnico realice la alineacin del quemador.

74

8. Gire la perilla del control de longitud de onda hasta alcanzar el valor adecuado al elemento a analizar. 9. Fije la apertura de rendija al valor sugerido por el fabricante para el elemento a estudiar, use el botn 28. 10. Despus de calentar la lmpara, lleve el selector de funcin 15 a la opcin PMTvolts, el cual nos indica el voltaje recibido por el fotomultiplicador. Ajuste el voltaje con la perilla 14. Este valor debe ser de -350 voltios, a ser registrados en la pantalla digital 8. 11. Optimice la longitud de onda. En la pantalla del medidor de energa 12, notara que la aguja esta fuera del 100 %. Debe girar lentamente la perilla del control de longitud de onda 25, hasta que el nivel caiga a cero. Luego debe retroceder la perilla hasta alcanzar 80 % segn la pantalla del medidor de energa 12. Observara que la pantalla 8 muestra que el valor del voltaje del fotomultiplicador desciende de -350 voltios. Ajstelo de nuevo con la perilla 14. 12. Asegrese que la manguera de drenaje tenga el lazo de seguridad (trampa) lleno de agua. Esta manguera permite desalojar el exceso de analito introducido al equipo en el lazo de inyeccin. 13. Deje que el tcnico active el flujo de combustible (acetileno). Compruebe segn el control de flujo de combustible 3 que se tiene un valor entre 5 y 8 unidades en la escala. 14. Coloque el botn de seleccin de funcin 15 en Absorbancia/Zero 15. Active la vlvula de seleccin del oxidante 4, Aire ON, notara que el flujo de aire llega a 6 unidades en el control de flujo de oxidante 2. Si no llega a este numero, use la Vlvula de control de flujo del oxidante auxiliar 5 para ajustarlo. 16. Use un encendedor o fsforos para encender la llama con la mano izquierda y con la mano derecha active el Interruptor de Combustible 1. Notara que el flujo de combustible llega a 6 unidades en el control de flujo de combustible 3. Si no llega a este numero, use la Vlvula de control de flujo del combustible 6 para ajustarlo. 17. Inmediatamente despus del encendido, debe colocarse la manguera del asperjador dentro del envase que contiene su blanco. Recuerde que debe siempre debe existir flujo de liquido al quemador para evitar daos el equipo. 18. Una vez establecido el flujo de blanco al quemador, debe usar el Indicador del ajuste de cero Absorbancia/Emisin 9 para colocar la Absorbancia en cero. Notara como cambian los valores en la pantalla 8. 19. Comience a medir sus muestras, ordenndolas de menor a mayor concentracin. Se recomienda hacer tres medidas, intercalando el blanco entre cada una de ellas, verificando que se mantenga en cero la absorbancia para este. Sumerja solo el extremo de la manguera en la muestra. CUIDE DE NO SUMERGIR COMPLETAMENTE LA MANGUERA DEL ASPERJADOR PARA EVITAR CONTAMINAR TODO SU EXTERIOR CON LA MUESTRA Y LUEGO CONTAMINAR EL BLANCO. 20. Al terminar de medir, detenga el flujo de combustible con el interruptor 1. Luego posicione en OFF el botn 4. 21. Use el selector de funciones 15 y colquelo en LAMP 1. Gire la Perilla de control para la lmpara 1 (18) hasta alcanzar una corriente de cero, para enfriar lentamente la lampara y evitar daos. 22. Desconecte la lampara y gurdela cuidadosamente. 23. Apague el equipo usando el interruptor de encendido 24 24. Espere a que el tecnico desconecte el flujo de combustible en la bombona. Luego encienda el interruptor de combustible 1 para vaciar la tubera. 25. Deje enfriar y asegrese de que toda la zona de trabajo quede limpia y ordenada.

75

Primera Experiencia: Construccin de la curva de calibracin Realice las diluciones necesarias para preparar 25 mL de soluciones al 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, y 10 ppm a partir de la solucin patrn del analito. De ser posible, realice las diluciones determinando en una balanza, el peso aadido de la solucin ms concentrada y el peso final de la solucin preparada. De esta manera, reducir al mximo los errores por dilucin. Tome nota de la apreciacin de la balanza y/o de los instrumentos volumtricos usados. Siguiendo el procedimiento explicado para la operacin y calibracin del espectrofotmetro, mida la absorbancia de cada solucin. BUSQUE LOS VALORES DE LONGITUD DE ONDA, APERTURA DE RENDIJA y ALTURA DEL MECHERO para el elemento y selos para hacer la medicin. Segunda Experiencia: Determinacin de la concentracin de una muestra problema Siguiendo el procedimiento explicado para la operacin y calibracin del espectrofotmetro, mida la absorbancia de la solucin problema. Manejo y anlisis de datos Primera Experiencia: Construccin de la curva de calibracin Construya una curva de calibracin representando grficamente la absorbancia medida en funcin de la concentracin de la solucin estudiada a cada longitud de onda. Para verificar el cumplimiento de la Ley de Lambert-Beer debe garantizarse que la absorbancia de las soluciones vara linealmente con la variacin de la concentracin de la especie absorbente. Para ello debe realizar una regresin lineal de la absorbancia (y) en funcin de la concentracin (x). La bondad del ajuste, parcialmente medida por el coeficiente de correlacin r2, indicar el cumplimiento de la Ley de Lambert-Beer. Use la herramienta ANALISIS DE DATOS del programa EXCEL y la opcin REGRESION LINEAL para realizar el ajuste lineal a cada longitud de onda. Reporte en su informe todos los resultados emitidos por el programa. Utilice todos los indicadores estadsticos reportados para evaluar la bondad del ajuste lineal a cada longitud de onda. Usando los valores de la regresin determine el lmite deteccin del mtodo. Compare su resultado con el valor registrado por el fabricante para el analito seleccionado. Segunda Experiencia: Determinacin de la concentracin de una muestra problema Use la curva de calibracin correspondiente a la longitud de onda ptima para determinar la concentracin de la solucin problema a partir de su absorbancia. Determine el error aleatorio correspondiente a esta concentracin a partir de la precisin del espectrofotmetro y los errores aleatorios asociados con los parmetros de la regresin lineal. Aplique las reglas de propagacin de errores aleatorios explicadas en clase. Indicaciones para la elaboracin del informe Contenido terico que debe estar presente en la introduccin y ser usado para la discusin de resultados Fundamentos de la espectroscopia de absorcin atmica (EAA). Diferencias entre las lmparas de ctodo hueco individuales y multi-elementos. Aplicaciones practicas de la tcnica de anlisis en Ingeniera Ambiental. Concepto de limite de deteccin, blanco y solucin estndar. Mtodos para la elaboracin de una curva de calibracin.

76

Informacin a incluir en la seccin de materiales y mtodos Componentes de un equipo de espectroscopia de absorcin atmica. Funcin de cada componente. Tipo de llama. Funcionamiento y componentes de la lmpara de ctodo hueco. Parmetros de operacin. Descripcin detallada de la lmpara de ctodo hueco a utilizar durante la determinacin de la concentracin de Hierro y Nquel. Bsese en la informacin suministrada por el fabricante, Buck Scientific. Puede fotocopiar el manual de operacin del equipo en el Laboratorio. Preguntas a las que debe dar respuesta en su discusin de resultados

1. Explique en funcin de las caractersticas de los tomos, por qu la espectroscopia de absorcin atmica (EAA) est especialmente indicada para determinar elementos alcalinos, alcalinotrreos y metales pesados. 2. Indique mediante que ensayos colorimtricos podra determinar la concentracin de hierro y nquel en muestras acuosas. 3. Compare los niveles de deteccin esperados para los anlisis colorimtricos y la EAA en la determinacin de hierro y nquel en muestras acuosas. 4. En caso de esperarse interferencias para el anlisis de muestras acuosas de hierro y nquel, que tipo de interferencias serian y como las corregira. 5. Determine el lmite de deteccin para los mtodos analticos realizados en la prctica. 6. Halle las curvas de calibracin para la determinacin de la concentracin de hierro y nquel en muestras acuosas. Examine la validez estadstica de las regresiones lineales reportadas. Use para ello la herramienta anlisis de datos disponible en EXCEL, y seleccione la opcin regresin lineal. En funcin de sus resultados discuta sobre la aplicabilidad de la Ley de Beer en este caso. 7. En base a sus resultados, realice un anlisis estadstico de comparacin del valor promedio de concentracin hallado y la concentracin esperada para las muestras problema.

Referencias

1. Buck Scientific Inc. Instruction Manual: Atomic Absorption Spectrometer Flame System Model 200 A (1992). Buck Scientific Inc., USA. p.p.14-29 2. Skoog, D. A., F. J. Holler, T. A. Nieman (2001) Principios de Anlisis Instrumental. Quinta Edicin. McGraw-Hill Interamericana de Espaa S.A. U. Madrid, Espaa.

77

Tabla 1. Construccin de la curva de calibracin para la determinacin de la concentracin de

de hierro por espectrometra de Absorcin Atmica

Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Equipo usado: __________________________________________________________________ Fabricante:________________________ Modelo: _____________ Apreciacin: __________ Concentracin de la solucin patrn: _________ M Blanco utilizado: ________________________________________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL Tipo de Balanza: _____________________________ Apreciacin: ____________ g

Preparacin de las soluciones Concentracin de la Concentracin de Volumen o Masa de Volumen o Masa Solucin a preparar la solucin Solucin Concentrada Final de la (ppm) concentrada aadida (mL o g) solucin aadida (M) preparada (mL o g)

RECUERDE HACER LAS MEDIDAS COMENZANDO POR LA SOLUCIN MENOS CONCENTRADA

Concentracin Solucin (ppm) de Absorbancia Medida 1 Absorbancia Medida 2 Absorbancia Medida 3

Muestra Problema

78

PRCTICA N 10 DETERMINACIN DE SODIO Y POTASIO EN SOLUCIONES ACUOSAS POR FOTOMETRA DE LLAMA

LLEVE AL LABORATORIO TODOS LOS CALCULOS LISTOS PARA LA PREPARACION DE SUS SOLUCIONES LLEVE AL LABORATORIO UNA MUESTRA DE AGUA DE RIO, AGUA DE LLUVIA o CUALQUIER OTRA MUESTRA QUE QUIERA ANALIZAR. Introduccin La fotometra de llama es un mtodo sumamente til por su simplicidad para los anlisis rutinarios. Los metales alcalinos que poseen bajas energas de excitacin son determinados fcilmente por este mtodo. Sin embargo, existen muchas desventajas, una de las cuales es la variacin de la temperatura de la llama segn el flujo de los gases. La velocidad con la cual fluye la muestra en la llama es tambin un elemento de error. Existen adems muchas fuentes de interferencia tales como el fondo de la llama, la autoabsorcin, emisin de otros iones en la misma zona espectral, lo que es particularmente grave cuando se trabaja con aparatos provistos de filtros, y efectos positivos o negativos sobre la emisin por la presencia de otros cationes o aniones. El mtodo ms fcil para evaluar una muestra es simplemente preparar una curva patrn. Se hacen soluciones de diferentes concentraciones de un in se mide la emisin de cada una de estas soluciones. Se hace luego un grfico colocando las concentraciones en el eje de las abscisas y las lecturas en el aparato sobre el de las ordenadas. Cuando se presentan interferencias debido a la naturaleza de la matriz de la muestra (viscosidad, sustancias distintas al analito que emiten energa, etc), las soluciones para la construccin de la curva de calibracin deben prepararse tratando de simular al mximo la matriz de la muestra original. Debern aadirse entonces tantas sustancias como sea necesario para alcanzar este objetivo. Si se prev que la muestra a analizar tenga una concentracin muy cercana al lmite de deteccin del mtodo analtico, se puede utilizar el mtodo de la adicin patrn. En este mtodo se utiliza la misma muestra como matriz. Para estudiar la factibilidad del mtodo se pueden ensayar dos muestras: a la primera se la aade un volumen de agua destilada y a la segunda el mismo volumen pero de solucin patrn que contenga una cantidad conocida del elemento que se est analizando. La cantidad de analito presente en la muestra original se determina por un sencillo balance de masas considerando la relacin existente entre la emisin y la concentracin. Objetivos Generales Determinar la concentracin de sodio en una muestra de agua de ro usando la fotometra de llama Determinar la concentracin de potasio en una muestra de agua de lluvia usando la fotometra de llama Elaborar y comprender el uso de una curva de calibracin para la determinacin de la concentracin de un analito. Usar el mtodo de adicin de estndar para comprobar la determinacin real de la concentracin de la muestra Conocer la aplicabilidad de la fotometra de llama en el anlisis elemental de metales alcalinos y metales alcalinotrreos

79

Equipos, Reactivos y Material de Laboratorio EQUIPOS Espectrofotmetro de Absorcin Atmica BUCK Scientific Modelo 200A Balanza Electrnica MATERIAL: Matraces de 50 mL Vasos de Precipitado 25 mL Pipetas de 1, 2, 5 y 10 mL SOLUCIONES Solucin madre de sodio (0.1 mg de Na/ml o 0.254 g NaCl/litro) Solucin madre de potasio (0.1 mg de K/ml o 0.190 g de KCl/litro) Solucin Problema Metodologa Experimental Operacin y calibracin del Espectrofotmetro
Esta explicacin esta diseada para el Espectrofotmetro de Absorcin Atmica BUCK Scientific Modelo 200A. Por favor si tiene otro equipo adptese al mismo, utilizando el manual o atendiendo las instrucciones del profesor o personal tcnico.

Figura 25 Diagrama del Espectrofotmetro de Absorcin Atmica BUCK Scientific Modelo 200

1: Interruptor de Combustible 2: Indicador de Flujo volumtrico de oxidante 3: Indicador de Flujo volumtrico de combustible 4: Vlvula para el selector del oxidante 5: Vlvula de control de flujo del oxidante auxiliar 6: Vlvula de control de flujo del combustible 7: Quemador 8: Panel de registro de valores 9: Indicador del ajuste de cero Absorbancia/Emisin 10: Botn para seleccionar el modo Emisin

11: Botn de ajuste la altura de pico 12: Medidor de nivel de energa 13: Pantalla de lectura de la longitud de onda 14: Botn de ajuste de cero Absorbancia/Emisin 15: Selector de funcin 16: Expansin de Escala (Scale Expansion) 17: Perilla de control para correccin de curva 18: Perilla de control para la lmpara 1 19: Perilla de control para la lmpara 2 24: Botn de Encendido 25: Perilla para la seleccin de longitud de onda 28: Selector para apertura de rendija

80

El equipo se opera de acuerdo a las indicaciones dadas en la prctica anterior, omitiendo los pasos relativos a la conexin y ajuste de la lmpara de ctodo hueco. Recuerde que debe usar el indicador para la medicin de la emisin y no de la absorbancia. Seleccione la longitud de onda a la que medir la emisin del analito estudiado.

Primera Experiencia: Construccin de la curva de calibracin Realice las diluciones necesarias para preparar 50 mL de soluciones al 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, y 10 ppm a partir de la solucin patrn del analito (sodio o potasio). De ser posible, realice las diluciones determinando en una balanza, el peso aadido de la solucin ms concentrada y el peso final de la solucin preparada. De esta manera, reducir al mximo los errores por dilucin. Tome nota de la apreciacin de la balanza y/o de los instrumentos volumtricos usados. Siguiendo el procedimiento explicado para la operacin y calibracin del espectrofotmetro, mida la emisin de cada solucin. Segunda Experiencia: Determinacin de la concentracin de una muestra problema Siguiendo el procedimiento explicado para la operacin y calibracin del espectrofotmetro, mida la emisin de la(s) solucin(es) problema. Tercera Experiencia: Estudio de la importancia de la limpieza del material de laboratorio Tome un vaso de precipitado de 50 mL, lvelo con jabn y abundante agua potable de la lnea de suministro del laboratorio. Llnelo con 20 mL de agua potable. Siguiendo el procedimiento explicado para la operacin y calibracin del espectrofotmetro, mida la emisin del agua. Una vez medida la emisin, vace el mismo vaso, lvelo con agua potable y enjuguelo tres veces con agua destilada. Tome 20 mL de agua destilada. Siguiendo el procedimiento explicado para la operacin y calibracin del espectrofotmetro, mida la emisin del agua destilada. Una vez medida la emisin, sumerja sus dedos en el agua destilada y mida de nuevo la emisin del agua contaminada. Registre el valor. Cuarta Experiencia: Determinacin de la concentracin de una muestra problema por medio del mtodo de adicin de patrn Repita este procedimiento para la muestra problema de sodio y la muestra problema de potasio. En un baln de 50 ml, coloque 40 ml de solucin problema y 10 ml de agua destilada Siguiendo el procedimiento explicado para la operacin y calibracin del espectrofotmetro, mida la emisin de la solucin. En un baln de 50 ml, coloque 40 ml de solucin problema y 10 ml de solucin que contiene una cantidad conocida de sodio. Siguiendo el procedimiento explicado para la operacin y calibracin del espectrofotmetro, mida la emisin de la solucin. Quinta Experiencia: Determinacin del efecto de la viscosidad de la muestra sobre la precisin y exactitud de la tcnica de fotometra de llama. En un baln de 50 mL, haga las diluciones y mezclas necesarias para preparar una serie de soluciones con 15 mg/L de sodio/potasio, pero cuya matriz contiene: 10 % (v/v) de etanol/agua destilada 50% (v/v) de etanol/agua destilada 50% (v/v) de glicerina/agua destilada 100 % (v/v) de agua destilada.

81

Manejo y anlisis de datos Primera Experiencia: Construccin de la curva de calibracin Construya una curva de calibracin representando grficamente la emisin medida en funcin de la concentracin de la solucin estudiada a cada longitud de onda. Use la herramienta ANALISIS DE DATOS del programa EXCEL y la opcin REGRESION LINEAL para realizar el ajuste lineal a cada longitud de onda. Reporte en su informe todos los resultados emitidos por el programa. Utilice todos los indicadores estadsticos reportados para evaluar la bondad del ajuste lineal a cada longitud de onda. Usando los valores de la regresin determine el lmite deteccin del mtodo. Compare su resultado con el valor registrado por el fabricante para el analito seleccionado. Segunda Experiencia: Determinacin de la concentracin de una muestra problema Use la curva de calibracin correspondiente a la longitud de onda ptima para determinar la concentracin de la solucin problema a partir de su absorbancia. Determine el error aleatorio correspondiente a esta concentracin a partir de la precisin del espectrofotmetro y los errores aleatorios asociados con los parmetros de la regresin lineal. Aplique las reglas de propagacin de errores aleatorios explicadas en clase. Tercera Experiencia: Estudio de la importancia de la limpieza del material de laboratorio Use la curva de calibracin correspondiente a la longitud de onda ptima para determinar la concentracin de cada una de las muestras de agua analizadas (agua potable, agua destilada, agua contaminada por el operador) Calcule el error sistemtico que se presentara en el valor de la concentracin de la(s) muestra(s) problema(s) en caso de usar material de vidrio incorrectamente lavado. Calcule la discrepancia de esta concentracin con respecto al valor verdadero esperado para la muestra problema. Cuarta Experiencia: Determinacin de la concentracin de una muestra problema por medio del mtodo de adicin de patrn Use la curva de calibracin correspondiente a la longitud de onda ptima para determinar la concentracin de cada una de las muestras analizadas (diluida con agua o concentrada con solucin patrn adicional). Para ambos casos, aplique las relaciones correspondientes para determinar la concentracin de la muestra problema y su error aleatorio asociado. Compare los errores aleatorios y la discrepancia porcentual respecto al valor verdadero, obtenidos en las dos experiencias, y discuta sobre la aplicabilidad del mtodo de adicin de patrn. Quinta Experiencia: Determinacin del efecto de la viscosidad de la muestra sobre la precisin y exactitud de la tcnica de fotometra de llama. Use la curva de calibracin correspondiente a la longitud de onda ptima para determinar la concentracin de cada una de las muestras analizadas: 10 % (v/v) de etanol/agua destilada 50% (v/v) de etanol/agua destilada 50% (v/v) de glicerina/agua destilada 100 % (v/v) de agua destilada. Determine la discrepancia porcentual de las concentraciones halladas respecto al valor verdadero de 15 ppm de sodio. Discuta sobre las posibles causas de estas discrepancias. Registre los valores de sus compaeros de laboratorio para esta experiencia. Realice un anlisis de varianza de un solo factor para determinar si la naturaleza de la matriz de la muestra tiene una influencia significativa sobre la exactitud del mtodo analtico.

82

Indicaciones para la elaboracin del informe Contenido terico que debe estar presente en la introduccin y ser usado para la discusin de resultados Fundamentos de la Fotometra de Llama. Diferencias entre espectroscopia de absorcin atmica y espectroscopia de emisin de llama. Explique en funcin de las caractersticas de los tomos, por qu la fotometra de llama est especialmente indicada para determinar elementos como el sodio y el potasio. Que otros elementos pueden determinarse usando esta tcnica? Indique que otras tcnicas analticas estn disponibles para determinar sodio y potasio en muestras en muestras acuosas. Compare los niveles de deteccin de la tcnica de fotometra de llama con los esperados para otros tipos de anlisis para sodio y potasio. Aplicaciones practicas de la tcnica de anlisis en Ingeniera Ambiental y Anlisis de Alimentos. Informacin a incluir en la seccin de materiales y mtodos Componentes de un equipo de Fotometra de Llama. Funcin de cada componente. Tipo de llama. Parmetros de operacin. Fundamentos de la tcnica de adicin de patrn. Preguntas a las que debe dar respuesta en su discusin de resultados

1. Determine el lmite de deteccin para los mtodos analticos realizados en la prctica. 2. Halle las curvas de calibracin para la determinacin de la concentracin de sodio y potasio en muestras acuosas. Examine la validez estadstica de las regresiones lineales reportadas. Use para ello la herramienta anlisis de datos disponible en EXCEL, y seleccione la opcin regresin lineal. En funcin de sus resultados discuta sobre la aplicabilidad de la Ley de Beer en este caso. 3. En base a sus resultados, realice un anlisis estadstico de comparacin del valor promedio de concentracin hallado y la concentracin esperada para las muestras problema. 4. En caso de esperarse interferencias para el anlisis de muestras acuosas de sodio y potasio, que tipo de interferencias serian estas y como las corregira. Use los resultados de su tercera y quinta experiencia para dar fundamento a sus propuestas. 5. Explique sobre la aplicabilidad del mtodo de adicin de patrn. Indique que tipo de problemas suele corregir y como le ayudo en la determinacin de la concentracin de su(s) muestra(s) problema(s) 6. Explique claramente cmo la viscosidad del medio puede afectar la determinacin de la concentracin de las soluciones por fotometra de llama. Seale de forma precisa si la medicin se desvi positiva o negativamente del valor real, y cmo es que esto ocurre en trminos del funcionamiento del equipo.

Referencias

1. Buck Scientific Inc. Instruction Manual: Atomic Absorption Spectrometer Flame System Model 200 A (1992). Buck Scientific Inc., USA. p.p.14-29 2. Skoog, D. A., F. J. Holler, T. A. Nieman (2001) Principios de Anlisis Instrumental. Quinta Edicin. McGraw-Hill Interamericana de Espaa S.A. U. Madrid, Espaa.

83

Tabla 1. Construccin de la curva de calibracin para la determinacin de la concentracin de

de un analito por fotometra de llama

Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Equipo usado: __________________________________________________________________ Fabricante:________________________ Modelo: _____________ Apreciacin: __________ Concentracin de la solucin patrn: _________ M SODIO _________ POTASIO __________ Blanco utilizado: ________________________________________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL Tipo de Balanza: _____________________________ Apreciacin: ____________ g

Preparacin de las soluciones Concentracin de la Concentracin de Volumen o Masa de Volumen o Masa Solucin a preparar la solucin Solucin Concentrada Final de la (ppm) concentrada aadida (mL o g) solucin aadida (ppm) preparada (mL o g)

RECUERDE HACER LAS MEDIDAS COMENZANDO POR LA SOLUCIN MENOS CONCENTRADA

Concentracin de Emisin Solucin (ppm) Medida 1 Emisin Medida 2 Emisin Medida 3 Blanco

Muestra Problema

84

Tabla 2. Tercera Experiencia: Estudio de la importancia de la limpieza del material de

laboratorio

Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Equipo usado: __________________________________________________________________ Fabricante:________________________ Modelo: _____________ Apreciacin: __________ SODIO _________ POTASIO __________ Blanco utilizado: ________________________________________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: Solucin Emisin Emisin Emisin Blanco Analizada Medida 1 Medida 2 Medida 3 Agua potable Agua destilada Agua destilada contaminada

Tabla 3. Determinacin de la concentracin de una muestra problema por medio del mtodo de adicin de patrn Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Equipo usado: __________________________________________________________________ Fabricante:________________________ Modelo: _____________ Apreciacin: __________ Concentracin de la solucin patrn: _________ M SODIO _________ POTASIO __________ Blanco utilizado: ________________________________________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL Tipo de Balanza: _____________________________ Apreciacin: ____________ g
Preparacin de las soluciones
Muestra
Masa o Volumen de la solucion Problema (g o mL) Masa o volumen de agua destilada anadida(g) Concentracin de la solucin concentrada aadida (ppm) Volumen o Masa de Solucin Concentrada aadida (mL o g) Volumen o Masa Final de la solucin preparada (mL o g)

Problema + Agua destilada Problema + Solucin Patrn

Muestra Problema + Agua destilada Problema + Solucin Patrn

Emisin Medida 1

Emisin Medida 2

Emisin Medida 3

Blanco

85

Tabla 4. Determinacin del efecto de la viscosidad de la muestra sobre la precisin y exactitud

de la tcnica de fotometra de llama. Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Equipo usado: __________________________________________________________________ Fabricante:________________________ Modelo: _____________ Apreciacin: __________ Concentracin de la solucin patrn: _________ M SODIO _________ POTASIO __________ Blanco utilizado: ________________________________________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL Tipo de Balanza: _____________________________ Apreciacin: ____________ g

Preparacin de las soluciones

Identificacin de la solucin Concentraci n de la Solucin a preparar (ppm) 15 15 15 15 Concentracin de la solucin concentrada aadida (ppm) Volumen o Masa de Solucin Concentrada aadida (mL o g) Volumen de Etanol a aadir (mL) Volumen de Glicerina a aadir (mL) Volumen o Masa Final de la solucin preparada (mL o g)

100 % (v/v) agua destilada 10 % (v/v) etanol en agua 50 % (v/v) etanol en agua 50 % (v/v) glicerina en agua

Muestra
100 % (v/v) agua destilada 10 % (v/v) etanol en agua 50 % (v/v) etanol en agua 50 % (v/v) glicerina en agua

Emisin Medida 1

Emisin Medida 2

Emisin Medida 3

Blanco

86

PRCTICA N 11 SEPARACIN DE LOS PIGMENTOS NATURALES POR CROMATOGRAFA EN COLUMNA

LLEVE AL LABORATORIO UNA MUESTRA DE ZANAHORIA RALLADA Y DESHIDRATADA O DE HOJAS DE ESPINACA LAVADAS Y SECAS Introduccin

La cromatografa es una tcnica analtica que permite la separacin de los componentes de una mezcla de acuerdo a la diferencia en su distribucin entre dos fases inmiscibles: la fase estacionaria (generalmente slida) y la fase mvil (lquida o gaseosa). La distribucin de los componentes entre las fases se realiza de acuerdo al grado de afinidad qumica entre las molculas. La afinidad qumica puede explicarse a travs de la premisa de que lo semejante disuelve lo semejante. Se dice que dos molculas son afines si son capaces de establecer fuerzas intermoleculares (electrostticas, dipolo-dipolo inducido, dipolo inducido-dipolo inducido, qumicas, etc.). La similitud se extiende en algunos casos a molculas de tamao y forma semejante. Como en la cromatografa es condicin esencial que la fase estacionaria sea totalmente inmiscible con la fase mvil, los analitos interactan con dos molculas totalmente distintas entre si. Se habla de cromatografa en fase normal, si la fase estacionaria es polar y la fase mvil es apolar. En esta experiencia de laboratorio, la fase estacionaria se confinar a una columna de vidrio, y la fase mvil se har fluir por gravedad a travs de su seno. La separacin efectiva de los analitos en la muestra depender de la adecuada seleccin de la serie de solventes a usar como fase mvil. Recuerde que la columna opera bajo los mismos principios que un lecho empacado o torre empacada, as que no dude en usar sus conocimientos de Operaciones Unitarias. Si se selecciona un solvente con el que no exista una diferencia marcada entre las afinidades de los analitos con las fases, la introduccin de la fase mvil en la columna implicar el arrastre no selectivo de todos los componentes de la muestra. El extracto contendr los mismos componentes de la muestra original, y la separacin habr sido nula. Si se selecciona el solvente adecuado, aquellas molculas que presenten mayor afinidad qumica con la fase mvil sern rpidamente desplazadas a travs de la fase estacionaria, y resultarn separadas en un primer extracto. Mientras que las molculas con mayor afinidad qumica con la fase estacionaria quedarn retenidas en la columna, a la espera de que el analista haga fluir a travs de la columna, una nueva fase mvil con la que puedan desarrollar fuerzas intermoleculares ms intensas, que las que desarrollaron inicialmente con la fase estacionaria. Se genera as un segundo extracto. En este trabajo experimental, se requiere que el estudiante haga uso de sus conocimientos fsico-qumicos para estudiar la relacin de distribucin de los pigmentos naturales presentes en los extractos de zanahoria y tomate, cuando se someten a una separacin cromatogrfica en columna en fase normal. Debe aprender optimizar las condiciones del ensayo: fase estacionaria, serie de fases mviles, y condiciones de flujo; empaquetamiento de columna, etc. En este caso, una separacin efectiva har que se produzcan bandas de distintos colores en la columna, por lo tanto la deteccin de la salida del analito de la columna es visual. El desplazamiento de cada banda podr seguirse visualmente, e incluso medirse en funcin de la distancia recorrida a travs de la columna.

87

Objetivos Generales Separar por cromatografa en columna los principales carotenos y licopenos presentes en un extracto de tomate y zanahoria Seleccionar la fase estacionaria que optimiza la separacin de los pigmentos en la columna cromatogrfica Seleccionar la serie de solventes que optimiza la separacin de los pigmentos en la columna cromatogrfica Estudiar las diferencias moleculares y en propiedades fisicoqumicas del sistema fase estacionaria/analito/fase mvil que se aprovechan para la separacin cromatogrfica de los pigmentos de la zanahoria de los del tomate Determinar las condiciones de operacin del ensayo cromatogrfico en columna Conocer la aplicabilidad de la cromatografa en la preparacin y anlisis de productos de la industria de los alimentos Equipos, Reactivos y Material de Laboratorio EQUIPOS Balanza Electrnica MATERIALES Buretas de 50 mL Vasos de Precipitado 250 mL Pipeta de 5 y 10 mL Mortero Embudo de Gosh Kitasato de 500 mL SOLUCIONES Y REACTIVOS ter de petrleo Heptano Tolueno Diclorometano Eter dietlico Metanol Etanol Cloroformo Agua Acetona Sulfuro de Sodio Solucin Problema Metodologa Experimental Primera Experiencia: Preparacin del extracto coloreado OMITA ESTA PARTE PARA EFECTOS DE SU INFORME

Espinaca: Separe cuidadosamente las hojas de los tallos de una porcin de espinaca de aproximadamente 500 gramos de peso. Lvelas con abundante agua, y squelas cuidadosamente. Trigalas al laboratorio. Colquelas en un mortero, tritrelas hasta obtener abundante extracto coloreado, en presencia de una solucin 50:50 de acetona y ter de petrleo. Separe el lquido y

88

fltrelo al vaco, hacindolo pasar por un embudo de Gosh contentivo de sulfuro de sodio para deshidratacin. Zanahoria: Tome dos o tres zanahorias, lvelas y quteles la piel. Rllelas en hojuelas grandes, y colquelas en el horno microondas a baja potencia por algunos minutos hasta lograr su deshidratacin. Evite quemarlas. Trigalas al laboratorio. Colquelas en un mortero, tritrelas hasta obtener abundante extracto coloreado, en presencia de una solucin 50:50 de acetona y ter de petrleo. Separe el lquido y fltrelo al vaco, hacindolo pasar por un embudo de Gosh contentivo de sulfuro de sodio para deshidratacin.

Segunda Experiencia: Preparacin y acondicionamiento de la columna cromatogrfica

Tome una porcin de la fase estacionaria de su seleccin (almina o gel de slice), psela cuidadosamente y registre su peso. Tome una bureta, y coloque en el fondo un poco de algodn comprimido para que sirva de soporte para el lecho a empacar. Coloque poco a poco la fase estacionaria, comprimiendo cuidadosamente con ayuda de una varita de vidrio. De ligeros golpes a la columna usando una manguera de goma para facilitar la deposicin del slido. Cuide de que no hayan espacios vacos o conglomerados, que pudieran crear caminos preferenciales dentro de la columna. Recuerde que los problemas de operacin de estas columnas, son similares a los que se tienen en los lechos empacados que estudio en Operaciones Unitarias. Al finalizar coloque de nuevo un poco de algodn comprimido. Tome nota de las dimensiones de la columna seca (longitud y dimetro). Determine el volumen de lecho seco. Para el acondicionamiento de la columna, tome un volumen de aproximadamente 100 mL del solvente de su preferencia, y hgalo pasar por la columna. Una vez humedecida toda la columna, mida el flujo de solvente que sale en su extremo inferior, contabilizando el nmero de gotas por unidad de tiempo. Aydese con un cronometro y recuerde que 1 mL equivale aproximadamente a 20 gotas. Registre el valor de estado estacionario para este flujo. Tome nota de las dimensiones de la columna hmeda (longitud y dimetro). Determine el volumen de lecho hmedo.

Tercera Experiencia: Separacin de los pigmentos del extracto

Una vez equilibrada la columna con el solvente de su eleccin, coloque con ayuda de una pipeta, una porcin del extracto coloreado previamente preparado. Aada luego los solventes, de acuerdo al orden seleccionado por ud. para alcanzar la separacin ptima de los pigmentos. Registre la cantidad de solvente aadido en cada oportunidad, y el flujo volumtrico de solvente a travs del lecho. Una vez que logre la separacin de alguna banda de color, y que dicha banda halla viajado hasta el fondo de la columna, cierre la vlvula de la bureta, y busque un vaso de precipitado limpio y seco, para recolectar la fraccin de inters. Tome nota de la masa, color y tipo de solvente de la fraccin separada. Identifquela para su posterior anlisis por espectrofotometra. Realice el mismo procedimiento tantas veces como sea necesario, de acuerdo al numero de bandas de color que se observen en columna cromatogrfica.

89

Cuarta Experiencia: Anlisis del espectro de absorcin de luz visible de las fracciones separadas REALICE ESTA PARTE SOLO SI LOGRO SEPARAR LOS PIGMENTOS ADECUADAMENTE Recuerde las recomendaciones dadas en la prctica no. 5 para la Operacin y calibracin del Espectrofotmetro Spectronic 20D+ y Spectronic 20 (Milton Roy Company) Por favor si tiene otro equipo adptese al mismo, utilizando el manual o atendiendo las instrucciones del profesor o personal tcnico. Usando las cubetas de CUARZO, mida la absorbancia entre 350 nm y 625 nm para cada una de las fracciones separadas. Recuerde que debe usar el blanco correspondiente.

Manejo y anlisis de datos Determinacin de las condiciones de operacin de la columna cromatogrfica Con las dimensiones de la columna seca y hmeda, determine el volumen de lecho y estime la porosidad del lecho. Determine el flujo volumtrico promedio de fase mvil con la razn de nmero de gotas por unidad de tiempo para cada uno de los solventes. Compare el flujo volumtrico de solvente con el valor ptimo recomendado para experiencias de separacin en columna cromatogrfica. Discuta sobre la calidad de la separacin y las condiciones de operacin de la columna cromatogrfica. Construccin del espectro de absorcin de las fracciones separadas Construya el espectro de absorcin de luz visible de cada fraccin separada representando grficamente la absorbancia medida en funcin de la longitud de onda. Compare con el espectro esperado para cada uno de los analitos de inters. Indicaciones para la elaboracin del informe Contenido terico que debe estar presente en la introduccin y ser usado para la discusin de resultados Fundamentos de la cromatografa de adsorcin. Concepto de coeficiente de reparto. Tipos de fuerzas intermoleculares que dominan el proceso de adsorcin en la cromatografa. Parmetros fsico-qumicos que las determinan (polaridad, polarizabilidad, tamao molecular, etc). Caractersticas de la cromatografa en fase reversa y en fase normal. Concepto de Poder Eluyente. Parmetros a considerar para la seleccin de la serie de eluyentes en la experiencia de laboratorio a realizar (polaridad, polarizabilidad, etc.) Aplicabilidad de la cromatografa preparativa en la industria de alimentos, y en otros procesos analticos. Informacin a incluir en la seccin de materiales y mtodos Formas recomendadas para empacar columnas cromatogrficas. Tipos de fases estacionarias usadas, y forma de preparacin de las columnas realizadas en la experiencia de Laboratorio. Estructura Molecular y propiedades fsico-qumicas de la almina y el gel de slice (tamao de poro, polaridad, capacidad de carga, etc.) Dimensiones y forma de la columna. Tipos de solventes usados, flujo volumtrico de solvente y relacin con el volumen del lecho. Preguntas a las que debe dar respuesta en su discusin de resultados

1.

Por que la cromatografa preparativa o en columna se puede usar para la separacin de los carotenos ms comunes presentes en los extractos de jugo de zanahoria y tomate?.

90

2. 3.

4.

5. 6. 7. 8.

Cules son las estructuras moleculares de los pigmentos ms importantes presentes en el extracto de zanahoria y tomate? Explique de forma clara y precisa que tipo de diferencias moleculares y en propiedades fisicoqumicas se aprovechan para la separacin de los carotenos de la zanahoria de los de carotenos del tomate. Elabore su respuesta en funcin de la afinidad qumica con la fase estacionaria y mvil. Para el ensayo cromatogrfico realizado, explique detalladamente que serie de disolventes uso en la separacin y por qu. Ordnelos de acuerdo a su poder eluyente: pentano, eter di-etlico, heptano, metanol, diclorometano, acetona, 2-propanol, acetonitrilo, hexano, tolueno. Usando las propiedades fsico-qumicas, explique de forma clara y precisa cul fase estacionaria permiti una mayor separacin visual de los pigmentos analizados y por qu. Cul es la porosidad de las columnas? Investigue sobre la manera correcta de calcular este parmetro. Para ambos casos est la relacin entre volumen de lecho y el flujo de solvente dentro de los rangos ptimos recomendados para la cromatografa en columna? De haber logrado una separacin efectiva, Cmo se comparan los espectros de luz visible de cada una de las fracciones separadas con los espectros esperados para el caroteno, -caroteno, licopeno, etc. en estado de pureza?. Recurra a las bases de datos de propiedades fisicoqumicas de compuestos disponibles en Internet.

Referencias

1. Skoog, D. A., F. J. Holler, T. A. Nieman (2001) Principios de Anlisis Instrumental. Quinta Edicin. McGraw-Hill Interamericana de Espaa S.A. U. Madrid, Espaa. 2. Rubinson K.A. y J.F. Rubinson. (2001)Anlisis Instrumental. Pearson Educacin S.A. Madrid, Espaa. Captulos 13-14 3. Rousseac, F. y A, Rousseac (2003) Anlisis Qumico: Mtodos y Tcnicas Instrumentales Modernas. McGraw-Hill/Interamericana de Espaa, S.A. U. Madrid, Espaa. Captulo 1

91

Tabla 1. Preparacin del extracto vegetal coloreado

Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Material usado (espinaca, zanahoria, tomate, mezclas) : _________________________________ Solvente utilizado: ______________________________________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL Tipo de Balanza: _____________________________ Apreciacin: ____________ g

Tabla 2. Preparacin y acondicionamiento de la columna

Fase Estacionaria Estado Seca Hmeda Masa (g) Longitud (cm) Dimetro (cm)

Tabla 3. Separacin de los pigmentos naturales por cromatografa en columna

Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Fase estacionaria usada: _________________________________________________________ Fabricante:____________________ Pureza: _____________ Tamao de partcula: __________ Serie de solventes

Flujo volumtrico de solvente Solvente usado Volumen aadido Nmero de gotas (mL)

Intervalo tiempo (min)

de

92

Tabla 4. Anlisis del espectro de absorcin de luz visible de las fracciones separadas
Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Equipo usado: __________________________________________________________________ Fabricante:________________________ Modelo: _____________ Apreciacin: __________ Blanco utilizado: ________________________________________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL Tipo de Balanza: _____________________________ Apreciacin: ____________ g
Identificacin de la fraccin 1 2 3 4 Solvente base de la fraccin Masa (g)

Fraccin : ___________ Longitud de % T o A onda (nm)

Fraccin : ___________ Longitud de % T o A onda (nm)

Fraccin : ___________ Longitud de % T o A onda (nm)

Fraccin : ___________ Longitud de % T o A onda (nm)

Fraccin : ___________ Longitud de % T o A onda (nm)

Fraccin : ___________ Longitud de % T o A onda (nm)

93

PRCTICA N 12 CARACTERIZACIN DE LOS PRODUCTOS DE COMBUSTIN DE UNA MUESTRA DE CRUDO POR CROMATOGRAFA EN FASE GAS (GC)
LA PRACTICA SE REALIZA EN EL LABORATORIO DE PETROLEO EN LA VIEJA FACULTAD DE INGENIERA, AVDA. TULIO FEBRES CORDERO (EL CROMATOGRAFO SE ENCUENTRA AVERIADO DESDE HACE DOS AOS, SE REQUIERE DE SU REPARACION PARA LA OPTIMIZACION DE ESTA PRACTICA) Introduccin

Objetivos Generales Separar por cromatografa en fase gaseosa los principales productos de combustin de una muestra de crudo Seleccionar la condiciones de flujo de la fase mvil y temperatura que optimizan la separacin de los analitos en la columna cromatogrfica Conocer la aplicabilidad de la cromatografa en fase gas (GC) en la caracterizacin de productos de la industria petrolera y petroqumica Equipos, Reactivos y Material de Laboratorio EQUIPOS MATERIALES SOLUCIONES Y REACTIVOS

Metodologa Experimental Primera Experiencia: Preparacin y acondicionamiento de la columna cromatogrfica y el detector Segunda Experiencia: Preparacin de los estndares de calibracin y muestras Tercera Experiencia: Anlisis Cromatogrfico de una muestra de gases de combustin

Manejo y anlisis de datos Determinacin de los parmetros caractersticos de la separacin cromatogrfica En base al cromatograma obtenido para el primer estndar determine el tiempo de retencin y el tiempo de retencin ajustado para cada uno de los compuestos. Estime el ancho de pico suponiendo que puede aproximarlo a una banda gaussiana. Estime el rea debajo de cada pico y comprela con los resultados del equipo. Considere como verdaderos los valores de rea reportados por el cromatgrafo.

94

Determine los valores de para cada pareja de compuestos adyacentes. Determine el nmero de platos tericos y la altura de plato de la columna. Determine la resolucin de pareja para cada pareja de compuestos adyacentes. Elabore una Tabla con todos los resultados
Construccin de la curva de calibracin Usando los resultados para el rea en cada solucin estndar, y la herramienta ANALISIS DE DATOS del programa EXCEL > opcin REGRESION LINEAL, realice un ajuste de la relacin concentracin vs. rea para cada analito. Reporte en su informe todos los resultados emitidos por el programa. Utilice todos los indicadores estadsticos reportados para evaluar la bondad del ajuste lineal para cada curva de calibracin. Determinacin de la concentracin de la muestra problema Use la curva de calibracin correspondiente para determinar la concentracin de analito en la solucin problema. Determine el error aleatorio correspondiente a esta concentracin a partir de la precisin del espectrofotmetro y los errores aleatorios asociados con los parmetros de la regresin lineal. Aplique las reglas de propagacin de errores aleatorios explicadas en clase. Indicaciones para la elaboracin del informe Contenido terico que debe estar presente en la introduccin y ser usado para la discusin de resultados Principios fundamentales de la cromatografa en fase gaseosa (adsorcin, desorcin), Caractersticas bsicas de la cromatografa GC (fase mvil, fase estacionaria). Variables que pueden modificarse para optimizar el proceso de separacin cromatogrfica en fase gas. Tipos de sustancias que pueden analizarse a travs de GC. Describa al menos una aplicacin del anlisis GC en la industria petrolera, la industria alimenticia y la industria farmacutica. Informacin a incluir en la seccin de materiales y mtodos Condiciones de operacin del cromatgrafo durante el anlisis. Haga especial nfasis en el tipo de detector usado. Estructura Molecular y propiedades fsico-qumicas de la fase mvil y la estacionaria usada (tamao de poro, polaridad, capacidad de carga, etc.) Consulte el sitio web de las empresas manufacturadoras. Indique (de ser empleado) el tipo de gradiente de temperatura usado para los anlisis cromatogrficos. Indique el tipo de calibracin empleado para la determinacin de la concentracin de los analitos en la muestra. De ser posible indique los limites de deteccin para el mtodo. Preguntas a las que debe dar respuesta en su discusin de resultados

1. En base a los cromatogramas explique el orden de elucin y analice la relacin entre los tiempos de retencin y la complejidad (tamao y polaridad) de las molculas. No olvide considerar la afinidad fase mvil/soluto/fase estacionaria 2. Explique por que puede usarse la conductividad termica para la deteccion de los analitos. Incluya en su informe expresiones para la variacin de la conductividad trmica de las especies con la temperatura. 3. Explique como se usaron las concentraciones experimentales para realizar el anlisis cualitativo de las muestras. Preste particular atencin al mtodo de integracin usado, y a su precisin en comparacin con los valores de rea registrados por el software del cromatgrafo. 4. Cul es la concentracin de los analitos en la muestra problema analizada? Cul es el intervalo de confianza de la concentracin determinada experimentalmente? Cmo se compara esta concentracin con el valor verdadero o esperado?

95

Referencias

3. Skoog, D. A., F. J. Holler, T. A. Nieman (2001) Principios de Anlisis Instrumental. 5ta Edicin. McGraw-Hill Interamericana de Espaa S.A. U. Madrid, Espaa. 4. Rubinson K.A. y J.F. Rubinson. (2001)Anlisis Instrumental. Pearson Educacin S.A. Madrid, Espaa. Captulos 13-14 5. Rousseac, F. y A, Rousseac (2003) Anlisis Qumico: Mtodos y Tcnicas Instrumentales Modernas. McGraw-Hill Interamericana de Espaa, S.A. U. Madrid, Espaa. Captulos 1 y2

96

PRCTICA N 13 DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN DE CAFENA DE UNA MUESTRA PROBLEMA POR CROMATOGRAFA LIQUIDA DE ALTA PRECISIN (HPLC)
LLEVE AL LABORATORIO UNA LATA DE ALGUNA BEBIDA CONTENTIVA DE CAFEINA A TEMPERATURA AMBIENTE Introduccin

La cromatografa lquida de alta precisin o alta eficacia, HPLC por sus siglas en ingls (High Performance Liquid Chromatography), es en esencia una separacin cromatogrfica en columna de elevada eficiencia, que requiere de altas presiones para asegurar el flujo de la fase mvil a travs del lecho de la fase estacionaria. Como en toda columna empacada, el aumento de eficiencia en la separacin se logra usando una fase estacionaria compuesta por partculas muy finas (3-10 m), cuidadosamente dispuestas para maximizar el tiempo y rea de contacto entre el analito y las fases, minimizando as la altura del plato. La reduccin del tamao de partcula asegura flujos uniformes, menor propensin a la aparicin de los llamados caminos preferenciales; adems de que garantiza grosores de pelcula pequeos que facilitan la difusin del analito entre las fases. El efecto negativo de la reduccin del tamao de partcula es el aumento de la presin necesaria para hacer fluir la fase mvil a travs de la columna. En este caso la simple fuerza de gravedad no es suficiente, y se llega a requerir entre 70-400 atm para lograr caudales de 0,5 a 5,0 mL/min. Esta situacin hace necesario el uso de sistemas de bombeo sofisticados, como el que observar en el equipo de Laboratorio, HPLC 1200 de Agilent Technologies. Debe consultar el manual del equipo para conocer mejor su funcionamiento. En esta prctica el estudiante disear, con ayuda del profesor y el tcnico del Laboratorio, un mtodo de separacin cromatogrfica para una mezcla de compuestos orgnicos, usando la absorcin de luz visible como mtodo de deteccin. Se debern escoger las condiciones apropiadas para el correcto funcionamiento de la columna, y para la maximizacin de la resolucin de los picos en el cromatograma.

Objetivos Generales Separar una serie de compuestos aromticos (tolueno, fenol y cafena) presentes en una muestra problema por cromatografa lquida de alta precisin Seleccionar la condiciones de flujo y composicin de la fase mvil que optimizan la separacin de los analitos en la columna cromatogrfica Estudiar las diferencias moleculares y en propiedades fisicoqumicas que se aprovechan para la separacin cromatogrfica del tolueno, fenol y cafena Determinar la concentracin de cafena en una muestra de una bebida energtica o refrescante. Conocer la aplicabilidad de la cromatografa liquida (HPLC) en el control de calidad de los productos en la industria y en la caracterizacin de efluentes industriales y determinacin del impacto ambiental.

97

Equipos, Reactivos y Material de Laboratorio EQUIPOS Cromatgrafo de lquidos Agilent Technologies Serie 1200 (Bomba cuaternaria, desgasificador en lnea, detector de longitud de onda variable e inyector manual) Balanza analtica. Equipo de filtracin al vaco. Detector espectrofotomtrico UV/Visible de onda variable MATERIALES Columna cromatogrfica Elipse XDB-C18 de 150 x 4.6 mm dp: 5 m. Filtros de Membranas de 0,45 m de 47 mm de dimetro, de esteres de celulosa y de tefln. Filtros para jeringa de 0,45 m Balones aforados de 50 y 25 ml Pipetas volumtricas de 2 ml SOLUCIONES Y REACTIVOS Metanol (Grado de pureza HPLC) Agua (Grado de pureza HPLC) Cafena Tolueno Fenol Metodologa Experimental Primera Experiencia: Preparacin de la fase mvil OMITA ESTA PARTE PARA EFECTOS DE SU INFORME La fase mvil constar de una mezcla Metanol:Agua (70:30), es decir, 70 % v/v de metanol, 30 % v/v de agua, a prepararse a partir de los reactivos con grade pureza HPLC. Puede prepararse de dos formas: la directa y la indirecta. La directa consiste en mezclar 700 mL de metanol y 300 mL de agua en un matraz de 1 L, desgasificar por ultrasonido o por burbujeo de nitrgeno durante 10 minutos y trasvasar al recipiente correspondiente en el sistema de bombeo del cromatgrafo. La segunda forma, indirecta, se usa cuando se cuenta con una bomba cuaternaria o binaria en el cromatgrafo. En este caso se colocan los solventes filtrados por membrana de 0,45 m, en envases separados y se usa un programa para que la bomba haga la mezcla de solventes, de acuerdo a las indicaciones del software para el manejo del cromatgrafo. Segunda Experiencia: Preparacin y acondicionamiento de la columna cromatogrfica y el detector Esta parte del procedimiento ser realizada exclusivamente por el tcnico de laboratorio, quien se asegurar de que el flujo y la composicin de la fase mvil sean los adecuados para la realizacin del anlisis cromatogrfico. En este caso, el flujo de fase mvil ser de 0,8 ml/min y la composicion 70:30 Metanol:Agua. La Columna ser una Elipse XDB-C18 de 150 x 4.6 mm dp: 5 m. Para iniciar este paso debe encender la computadora, encender los mdulos del cromatgrafo, comenzando por el desgasificador, luego la bomba y por ultimo el detector. Abrir el software CHEMSTATION que controla los mdulos del cromatgrafo. Purgar la bomba, girando la vlvula de purga hacia la izquierda y colocar un flujo de 5 mL/min durante 5 minutos (se purgan todos los canales), al finalizar bajar el flujo a cero y cerrar la vlvula de purga, girndola hacia la derecha. Poner a funcionar la bomba con el flujo del mtodo (0,8 mL/min). El flujo se

98

incrementa en porciones de 0,2 mL/min hasta llegar a 0,8 ml/min. La circulacin de la fase mvil a travs de la columna se hace por un periodo de al menos 30 minutos para el correcto acondicionamiento de la fase estacionaria. Para iniciar el acondicionamiento del detector, debe encender la lmpara del detector y colocarle la longitud de onda a la cual se van a tomar los cromatogramas (254 nm). Esperar hasta que estabilice la lmpara de 15 a 20 minutos antes de iniciar cualquier anlisis.
Tercera Experiencia: Preparacin de los estndares de calibracin y muestras Para la preparacin de estndares debe pesar aproximadamente 0,6500 g de Tolueno, 0,156 g de Fenol y 0,0625 g de Cafena, y disolver con Etanol en un baln aforado de 50 ml y diluir a volumen. Tendr solo tres estndares para la elaboracin de la curva de calibracin. Para el primer estndar, tomar un volumen de 2 ml de la solucin anterior en un baln aforado de 25 ml y diluir a volumen con fase mvil. Para el segundo estndar debe tomar un volumen de 1 ml de la solucin inicial, trasvasar a un baln aforado de 25 ml y diluir a volumen con fase mvil. Tendr solo tres estndares para la elaboracin de la curva de calibracin. Para el tercer estndar debe tomar un volumen de 0,5 ml de la solucin inicial, trasvasar a un baln aforado de 25 ml y diluir a volumen con fase mvil. Para la preparacin de las muestras, esta debe estar a temperatura ambiente, correctamente desgasificada. Puede hacer esto vertiendo una porcin de la bebida en un recipiente plstico y agitando, o trasvasando de un vaso de precipitado a otro hasta observar ausencia de burbujas en el liquido. Debe diluir 2 ml de la muestra desgasificada a 25 ml en un baln aforado y diluir con fase mvil. Filtrar los estndares y las muestras por filtros de 0,45 m colocndolos en una jeringa plstica desechable. Cuarta Experiencia: Anlisis Cromatogrfico de una muestra contentiva de fenol, tolueno y cafena. Una vez equilibrada la columna con la fase mvil, proceda a crear de la secuencia de anlisis en el software de manejo del cromatgrafo, ChemStation Plus. Una secuencia es una serie de instrucciones que automatizan el anlisis de una muestra. Es decir, un programa que le indica al cromatgrafo todos los parmetros caractersticos del anlisis: volumen de inyeccin, fase mvil (composicin, flujo, gradientes de flujo o composicin), sistema de deteccin (tipo de detector, longitud de onda, etc), mtodo de cuantificacin, y formato del reporte de resultados. La figura 1 muestra la apariencia de la pantalla inicial cuando se selecciona en el men VIEW la opcin Method and Run Control; note que existen iconos para cada parmetro del anlisis; por ejemplo la inyectadora quien reporta el volumen de inyeccin de muestra.

99

Figura 26 Pantalla inicial del ChemStation Plus

En el icono o en el men SEQUENCE seleccione el comando LOAD SEQUENCE , abra la secuencia de trabajo previamente preparada por el tcnico.

Figura 27 Pantalla para cargar la secuencia de analisis

Verifique que el anlisis cromatogrfico se realice con las siguientes condiciones: Volumen de inyeccin: 20 l Fase mvil: Metanol:Agua (70:30) Flujo de fase mvil: 0,8 ml/min Rgimen de flujo Isocrtico Longitud de onda del detector: 254 nm

100

Ahora proceda a inyectar cada una de las muestras (estndares y muestra problema). Debe curar la inyectadora varias veces. Llenar la inyectadora con la muestra y verificar que no queden burbujas de aire, colocar el inyector en la posicin de carga (LOAD) girando la palanca hacia arriba, introducir la aguja de la inyectadora en el inyector e inyectar el estndar presionando el embolo de la inyectadora, luego gire la palanca del inyector hacia abajo a la posicin inyeccin (INJECT) y posteriormente retire la inyectadora. En la ventana del software se visualizar el inicio de la corrida con una lnea roja, espere que se observen los picos correspondientes a los estndares y pare la corrida. Revise e Imprima el cromatograma. Chequee que los tiempos de retencin y las condiciones de integracin sean los correctos para cada analito. La pantalla del ChemStation debe verse como la mostrada en la Figura 3.

Figura 28 Pantalla con Resultados finales para el cromatograma

Manejo y anlisis de datos Determinacin de los parmetros caractersticos de la separacin cromatogrfica En base al cromatograma obtenido para el primer estndar determine el tiempo de retencin y el tiempo de retencin ajustado para cada uno de los compuestos. Estime el ancho de pico suponiendo que puede aproximarlo a una banda gaussiana. Estime el rea debajo de cada pico y comprela con los resultados del equipo. Considere como verdaderos los valores de rea reportados por el cromatgrafo. Determine los valores de para cada pareja de compuestos adyacentes. Determine el nmero de platos tericos y la altura de plato de la columna. Determine la resolucin de pareja para cada pareja de compuestos adyacentes. Elabore una Tabla con todos los resultados

101

Construccin de la curva de calibracin Usando los resultados para el rea en cada solucin estndar, y la herramienta ANALISIS DE DATOS del programa EXCEL > opcin REGRESION LINEAL, realice un ajuste de la relacin concentracin vs. rea para cada analito (tolueno, fenol, cafena). Reporte en su informe todos los resultados emitidos por el programa. Utilice todos los indicadores estadsticos reportados para evaluar la bondad del ajuste lineal para cada curva de calibracin.

Determinacin de la concentracin de la muestra problema Use la curva de calibracin correspondiente para determinar la concentracin de analito en la solucin problema. Determine el error aleatorio correspondiente a esta concentracin a partir de la precisin del espectrofotmetro y los errores aleatorios asociados con los parmetros de la regresin lineal. Aplique las reglas de propagacin de errores aleatorios explicadas en clase. Indicaciones para la elaboracin del informe Contenido terico que debe estar presente en la introduccin y ser usado para la discusin de resultados Principios fundamentales de la cromatografa en fase liquida. Caractersticas bsicas de la cromatografa HPLC (fase mvil, fase estacionaria). Variables que pueden modificarse para optimizar este proceso de separacin cromatogrfica (caudal, eluente, etc). Aplicaciones de los ensayos HPLC en el control de calidad de los productos en la industria petrolera y alimenticia. Informacin a incluir en la seccin de materiales y mtodos Condiciones de operacin del cromatgrafo durante el anlisis. Haga especial nfasis en el tipo de detector usado. Guese por lo presentado en el artculo cientfico de referencia para esta prctica. Estructura Molecular y propiedades fsico-qumicas de la fase mvil y la estacionaria usada (tamao de poro, polaridad, capacidad de carga, etc.) Consulte el sitio web de las empresas manufacturadoras. Indique el tipo de calibracin empleado para la determinacin de la concentracin de los analitos en la muestra. De ser posible indique los limites de deteccin para el mtodo. Preguntas a las que debe dar respuesta en su discusin de resultados

5. En base a los cromatogramas explique el orden de elucin y analice la relacin entre los tiempos de retencin y la complejidad (tamao y polaridad) de las molculas. No olvide considerar la afinidad fase mvil/soluto/fase estacionaria 6. Explique por que puede usarse espectrofotometra UV/Visible para la determinacin de la concentracin del fenol, tolueno y cafena en soluciones acuosas. Incluya en su informe el espectro de absorcin de luz UV/Visible de cada analito. 7. Explique como se usaron las concentraciones experimentales para realizar el anlisis cualitativo de las muestras. Preste particular atencin al mtodo de integracin usado, y a su precisin en comparacin con los valores de rea registrados por el software del cromatgrafo. 8. Cul es la concentracin de los analitos en la muestra problema analizada? Cul es el intervalo de confianza de la concentracin determinada experimentalmente? Cmo se compara esta concentracin con el valor verdadero o esperado? 9. Resalte sus impresiones acerca de la aplicabilidad de la tcnica de cromatografa en fase liquida.

102

Referencias

1. Skoog, D. A., F. J. Holler, T. A. Nieman (2001) Principios de Anlisis Instrumental. 5ta Edicin. McGraw-Hill Interamericana de Espaa S.A. U. Madrid, Espaa. 2. Rubinson K.A. y J.F. Rubinson. (2001)Anlisis Instrumental. Pearson Educacin S.A. Madrid, Espaa. Captulos 13-14 3. Rousseac, F. y A, Rousseac (2003) Anlisis Qumico: Mtodos y Tcnicas Instrumentales Modernas. McGraw-Hill Interamericana de Espaa, S.A. U. Madrid, Espaa. Captulos 1 y3

103

Tabla 1. Preparacin de las soluciones estndar

Fecha: ___________ Analista(s): _________________________________________________ Solvente utilizado (fabricante, pureza, etc) : _________________________________ Solvente utilizado (fabricante, pureza, etc) : _________________________________ Apreciacin de los instrumentos volumtricos usados: 1. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 2. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL 3. Instrumento: _______________________________ Apreciacin: ____________ mL Tipo de Balanza: _____________________________ Apreciacin: ____________ g

Preparacin de las soluciones Solucin Concentracin de Concentracin Estndar la Solucin a de la solucin preparar (ppm) concentrada aadida (M)

Volumen o Masa de Solucin Concentrada aadida (mL o g)

Volumen o Masa Final de la solucin preparada (mL o g)

1 2 3

104