Manual Veterinrio de Colheita e Envio de Amostras

2010
Sade Pblica Veterinria
Centro Pan-Americano de Febre Aftosa

Sistema gastrintestinal
Dada a importncia da alimentao nos animais de produo e a alta incidncia de problemas com ela relacionados, faz-se necessria uma avaliao do manejo e das instalaes, assim como uma inspeo dos alimentos, armazns e reas de pastoreio. As caractersticas da alimentao e seu manejo podem ser a origem de muitos problemas, principalmente digestivos e metablicos. Para pesquisar a causa do distrbio, alm do exame clnico geral, testes complementares de amostras de alimento, do suco ruminal, do sangue e/ou das fezes so de grande valor no reconhecimento e na diferenciao de doenas dos rgos digestivos.

Principais doenas do sistema gastrintestinal e espcies acometidas

ESPCIES ACOMETIDAS

DOENAS TGE Gastrenterite Transmissvel Enterites bacterianas (Colibacilose, salmonelose, campilobacteriose) Disenteria suna (Brachyspira hyodysenteriae) Enterotoxemia (Clostridium perfringens) Isosporose (Isospora suis) Verminoses ou Helmintoses Rotavirose em animais jovens Diarria Viral Bovina Febre Catarral Maligna Intoxicaes X X X X X X

X X X X X X

X X X X X X

X X X X

X X X X

X X X X

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Material para colheita de amostras para diagnstico de doenas do sistema gastrintestinal

Saco plstico estril

Luvas de palpao

Tubos a vcuo para colheita de sangue, com gel separador, sem e com anticoagulante (EDTA e heparina) Adaptadores para colheita de sangue a vcuo

Tubo tipo KMA (tampa com rosca)

Tubo com tampa com rosca

Coletor universal estril

Luvas de ltex

Agulha para colheita de sangue a vcuo

Sonda gstrica

Microtubos tipo Eppendorf

Sistema para colheita de sangue a vcuo

Seringa e agulhas esterilizadas 76 77

Amostras para diagnstico de doenas do sistema gastrintestinal

1. Material
Contedo ruminal

3. Quantidade
Cerca de 10 mL

4. Meio
Nenhum

2. Como colher
Por sonda gstrica ou ruminocentese Introduzir a sonda gstrica via oral e retirar o lquido ruminal, criando vcuo por um sistema manual ou bomba eltrica. No caso de ruminocentese, a puno feita no abdmen esquerdo do animal, no ponto mdio entre a ltima costela e articulao femorotibiopatelar. Fazer tricotomia e antissepsia numa rea de 5cm x 5cm. Fazer aplicao subcutnea de 2 a 3 mL de lidocana 2%. Introduzir a cnula ventrocranial e aspirar o contedo com seringa de 20 mL. Se ocorrer obstruo da agulha, injetar ar com outra seringa. Obter de 3 a 10 mL de lquido ruminal. Antes de retirar a agulha, introduzir 5 mL de soluo siolgica estril, para evitar aderncia. Finalmente, retirar seringa e agulha, de forma suave e conjunta.

5. Recipiente
Frasco estril

6. Temperatura

da amostra para transporte

Refrigerada (+2C a +8C) ou Congelada (-20C)

NOTA

Resfriar ou congelar o mais rpido possvel aps a colheita fazendo chegar ao lab oratrio, nessas condies.

7. Tempo crtico

para chegada ao laboratrio

At 48 horas

8. Exames
Toxicolgicos
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1. Material
Fezes

3. Quantidade
20 g de fezes por animal. No caso de rebanhos, colher 10 a 15 amostras de cada faixa etria. Utilizar um frasco por animal.

2. Como colher
Diretamente do reto (utilizando luva) ou da poro central do bolo fecal (utilizando esptula), imediatamente aps defecao

4. Meio
Nenhum

5. Recipiente
Coletor universal estril

NOTA

6. Temperatura da amostra para transporte

Refrigerada (+2C a +8C)

Em caso de material de necrps ia, enviar um fragmento de ala intestinal com o contedo fecal, amarran do as extremidades com barbante. Alm disso, enviar fragmentos de fgado e rim, uma parte refrigera da para exames toxicolgicos e outra parte em formol a 10% para exa mes histopatolgicos. A identicao de substncia txica nestes rgos pode auxiliar no diagnstico da causa morte.
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7. Tempo crtico para chegada ao laboratrio

At 48 horas

8. Exames
Pesquisa direta do agente
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1. Material
Alimentos para nutrio animal

4. Quantidade
a) 1 kg para b) 2 kg para alimentos volumosos, raes, gros e como silagem, feno e para alimentos concentrados, que tem tendncia separao como entre outros raes e concentrados contendo uria, alimentos. farelo de algodo, entre outros produtos.

2. O que colher
Rao comercial, gros, forragens frescas e conservadas (silagem e feno), restos de cultura, palhadas e suplementos

NOTA

3. Como colher
Retirar amostras parciais de cada alimento a ser analisado, colhidas em diferentes pontos do local de interesse: campo, armazm, sacarias, cocho, silos etc. Dessa amostra mdia, aps homogeneizao, retirar uma nica amostra, que deve ser representativa da mdia do material a ser analisado.
NOTA

Efetuar as colheitas em ente vrios pontos, principalm para produtos que no apresentam uma a ou que homogeneidade perfeit arao. sep cia tenham tendn

5. Recipiente
Sacos plsticos resistentes para produtos slidos Frascos de polietileno para produtos lquidos (melao, gordura)

um nico Nunca retirar a amostra de entativa res rep ser no s poi ponto, quanto es clus e no permitir con o. dut pro do qualidade

6. Temperatura da amostra para transporte

a) Ambiente (material seco) b) Refrigerada (+2C a +8C) para material verde ou mido

7. Tempo crtico para chegada ao laboratrio

At 48 horas

8. Exames
Anlise qumica e pesquisa de agente (toxinas e bactrias, entre outros agentes)
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1. Material
Sangue

a) Obteno de soro
Colher o sangue em tubo sem anticoagulante; manter o tubo inclinado em temperatura ambiente at o sangue coagular e retrair o cogulo, exsudando o soro (30 a 60 min). Transferir o soro para outro tubo (tampa com rosca ou tipo Eppendorf). Se for utilizado tubo com gel separador, ser necessrio centrifugar o sangue no mnimo 30 minutos aps a colheita e no mximo 2 horas e enviar o soro no prprio tubo.

b e c) Sangue total
O sangue dever ser colhido e enviado em tubo com anticoagulante (EDTA ou heparina). Homogeneizar suavemente, invertendo o tubo (cerca de 6 vezes)

2. Onde colher
a) Veia jugular; b) Veia coccgea; c) Veia mamria; e d) em sunos, veia
cava cranial

3. Como colher
Utilizar sistema a vcuo ou seringa e agulha

EDTA

Heparina

4. Recipiente e quantidade
a) Tubo de ensaio sem anticoagulante: capacidade 10 mL b) Tubo de ensaio com EDTA K2: capacidade 5 mL c) Tubo de ensaio com heparina: capacidade de 5 a 10 mL

a) Pesquisa

de anticorpos

b) Pesquisa direta
do agente

5. Exames c) Toxicolgicos
e bioqumicos

6. Temperatura da amostra para transporte

a, b e c) Refrigerada (+2C a +8C)

7. Tempo crtico para chegada ao laboratrio

At 48 horas
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Sistema reprodutor e urinrio

Os problemas reprodutivos esto associados a repetio de cio, infertilidade, descarte prematuro de reprodutores, abortamento, mumicao fetal, nascimento de bezerros com malformao e fracos, entre outros fatores. A etiologia das doenas da reproduo multifatorial, podendo a causa ser infecciosa ou no infecciosa, e requer diagnstico diferencial para identicao do agente. Para tanto, devem ser examinadas prioritariamente amostras de tecidos fetais refrigerados e xadas em formol, secrees cervicovaginal e prepucial. A pesquisa de anticorpos no soro sanguneo pode auxiliar no diagnstico.

Principais doenas do sistema reprodutor e urinrio e espcies acometidas

ESPCIES ACOMETIDAS DOENAS Brucelose Leptospirose Campilobacteriose Genital Micoplasmose Neosporose Toxoplasmose Tricomonase Genital Bovina Rinotraquete infecciosa bovina/ Vulvo vaginite postular infecciosa Diarria viral bovina Parvovirose Doena de Aujeszky Peste suna clssica Sndrome Reprodutiva e Respiratria dos Sunos (SRRS) Circovirose Clamidiose Arterite viral equina Aborto equino por herpesvirus X X X X X
(raro)

X X X X X X X X X -

X X X X X X -

X X X X X -

X X X X X X X 87

X X X X -

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Material para colheita de amostras para diagnstico de doenas do sistema reprodutor e urinrio

Coletor universal estril Saco plstico Tbua para corte de rgos

Suabe estril

Suabe estril Pipeta de inseminao articial Pedra para aar facas Facas Agulha para colheita de sangue a vcuo Tubo com tampa com rosca Tesoura para destrinchar ossos

Suabe acoplado em pipeta de inseminao articial

Microtubos tipo Eppendorf

Sistema para colheita de sangue a vcuo

Papel toalha Meios para transporte de secrees (BHI, A3XB, Eagle e Lactopep) 88 Tubos a vcuo para colheita de sangue, com gel separador, sem e com anticoagulante

Tubo tipo KMA (tampa com rosca) Gaze

Palhetas de smen 89

Amostras para diagnstico de doenas do sistema reprodutor e urinrio

1. Material
Fetos de at 2Kg

3. Recipiente
Saco plstico (no mnimo, 3 sacos para cada feto)

2. O que colher
Feto inteiro

Feto bovino

4. Temperatura da amostra para transporte

Refrigerada (+2C a +8C)

Feto ovino Feto caprino

5. Tempo crtico
para chegada ao laboratrio
At 48 horas
NOTA

No congelar.

O laboratrio ir necropsiar e colher as amostras para os diversos exames. Colher soro sanguneo da fmea que abortou.
Fetos sunos

6. Exames
Pesquisa direta e indireta do agente e exame histopatolgico
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1. Material
Feto e natimorto com mais de 2 Kg

a1) Fragmentos de cada rgo b) Fragmento de cada a2) 3 mL de cada uido

com cerca de 20 g

5. Quantidade

rgo com cerca de 3x3x1 cm

2. O que colher
Fgado, pulmo, bao, sistema nervoso central, corao, rim, timo e uidos corporais (lquido toracoabdominal ou pericrdico e contedo gstrico)
Colhendo contedo gstrico

6. Meio
a) Nenhum b) rgos xados com formol tamponado 10% (volume de formol, pelo menos 10 vezes maior que o volume de tecido a ser xado).

7. Recipiente
a1) rgos: saco plstico ou coletor universal. a2) Fluido: tubo de ensaio esterilizado ou coletor universal
de acordo com o tamanho do fragmento

b) Frasco; capacidade

3. Como colher
Necropsiar e colher os fragmentos de rgos com pina e tesoura esterilizadas. Escolher parte do rgo com leso, se no houver leso, colher aleatoriamente. Colher os uidos corporais com seringa e agulha esterilizadas

a) Refrigerada
(+2C a +8C)

8. Temperatura da amostra para transporte

b) Ambiente ou Refrigerada (+2C a +8C). Nunca congelar

4. Exames
a1) Pesquisa direta do agente a2) Anticorpos
Fluido tracoabdominal

b) Histopatolgico

a) At 48 horas

9. Tempo crtico para chegada ao laboratrio

b) Remeter no mesmo tempo que a amostra

refrigerada. Os fragmentos em soluo de formol 10%, mesmo no completamente xados, podem ser enviados ao laboratrio
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1. Material
Placenta a) 20 g

4. Quantidade
b) Fragmento de 3x3x1 cm

2. Como colher
Escolher sempre reas de transio do tecido com e sem leso. Nos ruminantes, colher algumas carnculas

5. Meio
a) Nenhum b) Formol tamponado 10% (Volume de formol, pelo menos 10 vezes maior que o volume de tecido a ser xado)

a) Saco plstico ou coletor universal

b) Frasco; capacidade

6. Recipiente

de acordo com o tamanho da pea

3. Exames

a) Pesquisa direta do agente b) Exame histopatolgico

a) Refrigerada
(+2C a +8C)

7. Temperatura da amostra para transporte

b) Ambiente ou Refrigerada (+2C a +8C). Nunca congelar

a) At 48 horas

8. Tempo crtico para chegada ao laboratrio

refrigerada. Os fragmentos em soluo de formol 10%, mesmo no completamente xados, podem ser enviados ao laboratrio
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b) Remeter no mesmo tempo que a amostra

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1. Material
Smen

3. Quantidade
Smen in natura: 0,5 mL Smen industrializado: 10 palhetas de 0,5 mL

2. Como colher
Excitar o touro com fmea ou manequim, ou usar eletroejaculador. Colher o smen, utilizando vagina articial
FOTO: CRVLAGOA

4. Recipiente
Palheta ou tubo de ensaio esterilizado

5. Temperatura da amostra
OA FOTO: CRVLAG

para transporte

Refrigerada (+2C a +8C)

O volume de sm en a ser enviado ao labor atrio depende das anlises que sero realizadas; na dvida, consult ar o laboratrio. Identicar individu almente as amostras.

NOTA

6. Tempo crtico
para chegada ao laboratrio
At 48 horas

7. Exames
Pesquisa direta do agente
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NOTA

1. Material
Muco prepucial

2. Onde colher
Cavidade prepucial

nter o touro Antes da colheita, ma nimo 07 dias. m no l em repouso sexua do muco com Evitar contaminao urina. her primeiro Quando for o caso, col is proceder po o suabe prepucial e de ao lavado. Solicitar ao laboratrio s. os meios apropriado

5. Meio
a) Submergir c) Submergir o b) Submergir o o suabe suabe em 2 mL suabe em 10 mL em 2 mL de de Lactopep de: Tioglicolato Eagle 2 vezes de sdio ou BHI (0,5 g de Lactopep concentrado, para 10 mL (Campylobacter spp), com antibitico A3xB Mycoplasma de soluo salina 0,85%) spp) e Cary Blair (outras bactrias)
a c

3. Como colher
Tcnica do suabe: Fazer a tricotomia do stio prepucial e lavar externamente o prepcio, utilizando apenas gua, e enxugar com papel toalha. Colher muco, introduzindo no fundo de saco da cavidade prepucial um suabe estril acoplado a uma pipeta de inseminao articial. Friccionar o suabe nas mucosas prepucial e peniana. Retirar o suabe e submergi-lo no meio para transporte apropriado. Utilizar um suabe para cada amostra.

6. Recipiente
Tubo de ensaio

7. Temperatura da amostra para transporte

a e b) Refrigerada (+2C a +8C) c) Ambiente

a) Pesquisa
de vrus
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4. Exames

b) Pesquisa de

bactrias

c) Pesquisa de Tritrichomonas foetus

8. Tempo crtico para chegada ao laboratrio

a e b) At 48 horas c) At 6 dias
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1. Material
Muco prepucial

NOTA

2. Onde colher
Cavidade prepucial

ro r o tou mante , s. a ia it d e 0 da colh al de 07 a 1 s te n A exu o ouso s o muc em rep ao d in m ta on Evitar c a. in r u s, no com olheita ias 3 c e 7 dias, r s s e c d So ne m intervalo sexual. uso o, co o im p e n r m o ndo-se mante

4. Quantidade
40 mL de soluo salina 0,85%

5. Meio

Lactopep (proporo: 2 g/40 mL de soluo salina)

3. Como colher
Tcnica do lavado prepucial: Fazer a tricotomia do stio prepucial e lavar externamente o prepcio utilizando apenas gua. Enxugar com papel toalha. Proceder lavagem da cavidade prepucial, utilizando uma pipeta de inseminao articial acoplada a um tubo exvel ligado a uma seringa com 40 mL de soluo salina estril 0,85%. Introduzir a pipeta at o fundo de saco da cavidade prepucial e injetar o volume total da soluo salina. Retirar a pipeta e obliterar o stio prepucial com uma das mos e, com a outra, massagear vigorosamente o prepcio por um minuto. Liberar o stio prepucial e recolher o lquido no frasco contendo meio Lactopep (em p). Homogeneizar e completar o volume com soluo salina, at obter 40 mL.
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6. Recipiente
Tubo cnico

7. Temperatura da amostra para transporte

Ambiente

8. Tempo crtico para chegada ao laboratrio

At 06 dias

9. Exame
Pesquisa de Tritrichomonas foetus
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1. Material
Muco cervicovaginal

O perodo ideal pa ra colheita de muco vaginal nos dias subsequentes ao estro (evitar colhe ita logo aps a cpu la). O uso de espcu lo fundamenta l para obteno de amostra de muc o cervicovaginal de boa qualidade.

NOTA

2. Onde colher
Cavidade vaginal

3. Como colher
Lavar a regio vulvar apenas com gua e secar com papel toalha. Adaptar o suabe a uma pipeta de inseminao articial e com auxlio de um espculo, introduzir o suabe na vulva at a crvix. Friccionar a mucosa, retirar o suabe e submergir em tubo de ensaio contendo meio de transporte. Utilizar um suabe para cada amostra.

a) Pesquisa
de vrus

4. Exames

6. Recipiente
Tubo de ensaio esterilizado contendo meio apropriado

b) Pesquisa de

bactrias

c) Pesquisa de Tritrichomonas foetus

5. Meio
a) Submergir b) Submergir o c) Submergir o o suabe suabe em 10 mL suabe em 2 mL de: de Lactopep Tioglicolato de em 2 mL de Eagle 2 vezes sdio ou BHI (0,5 g de Lactopep para 10 mL concentrado, (Campylobacter spp), com antibitico A3xB (Mycoplasma de soluo salina 0,85%) spp) e Cary Blair (outras bactrias)

7. Temperatura da amostra para transporte

a e b) Refrigerada
(+2C a +8C)

c) Ambiente

8. Tempo crtico para chegada ao laboratrio

a e b) At 48 horas c) At 6 dias
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1. Material
Urina

5. Meio e quantidade
a) Meio de Fletcher.
Colocar 1 mL de urina em 9 mL de soluo salina tamponada, pH 7,2 e inocular 2 mL dessa diluio em tubo contendo meio de Fletcher.

2. Onde colher
A amostra de urina pode ser obtida da mico espontnea, de mico induzida, por puno vesical ou mediante cateterismo uretral em fmeas.

b) BHI. Colocar 1 mL da urina em 3 mL em tubo contendo meio de transporte (BHI).

c) Nenhum.

Enviar o restante de urina, cerca de 20 mL.

3. Como colher
Antes da colheita, higienizar a regio da vulva ou prepcio com gua e sabo, enxaguar e secar com papel toalha. Colher o jato intermedirio da urina com coletor universal estril. H vrios procedimentos para induzir a mico: - A obstruo dos olhos e boca em pequenos ruminantes, durante uns segundos, tanto em fmeas como em machos, estimula a eliminao de urina. - Induo da mico em touros por massagem suave e rtmica no stio prepucial e, em vacas, massagem na vulva. Alertamos que esses mtodos s funcionam quando a bexiga est cheia. - Uso de furosemida (diurtico) por via intravenosa favorece a mico dentro de 10 a 15 minutos, porem no deve ser utilizado em animais suspeitos de urolitase

a e b) Tubo de ensaio

contendo meio apropriado

c) Coletor universal estril

6. Recipiente

Os meios especcos so fornecidos pelo laboratrio.

NOTA

7. Temperatura da amostra para transporte

Refrigerada (+2C a +8C)

a) Pesquisa para b) Pesquisa para c) Tcnicas de Leptospira spp. Brucella spp. biologia molecular
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4. Exames

8. Tempo crtico para chegada ao laboratrio

At 48 horas
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1. Material
Sangue

a) Obteno de soro
Colher o sangue em tubo sem anticoagulante; manter o tubo inclinado em temperatura ambiente at o sangue coagular e retrair o cogulo, exsudando o soro (30 a 60 min). Transferir o soro para outro tubo (tampa com rosca ou tipo Eppendorf). Se for utilizado tubo com gel separador, ser necessrio centrifugar o sangue no mnimo 30 minutos aps a colheita e no mximo 2 horas e enviar o soro no prprio tubo.

b) Sangue total
O sangue dever ser colhido e enviado em tubo com anticoagulante (EDTA k2). Homogeneizar suavemente, invertendo o tubo (cerca de 6 vezes)

2. Onde colher
a) Veia jugular; b) Veia coccgea; c) Veia mamria; e d) em sunos, veia
cava cranial

3. Como colher
Utilizar sistema a vcuo ou seringa e agulha

a) Pesquisa de anticorpos

5. Exames b) Pesquisa direta

do agente

4. Recipiente e quantidade
sem anticoagulante: capacidade 10 mL.

a) Tubo de ensaio

b) Tubo de ensaio
com EDTA K2: capacidade 5 mL

6. Temperatura da amostra para transporte

a e b) Refrigerada (+2C a +8C)

7. Tempo crtico para chegada ao laboratrio

At 48 horas
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Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento - MAPA Departamento de Sade Animal Esplanada dos Ministrios Bloco D, Anexo A, Sala 301 70043-900 - Braslia, DF - Brasil Tel.: 00 55 61 3218-2701 Fax: 00 55 61 3226-3446 http://www.agricultura.gov.br 0800 - 7041995 Organizao Pan-Americana da Sade OPAS/OMS Sade Pblica Veterinria Centro Pan-Americano de Febre Aftosa PANAFTOSA Av. Presidente Kennedy, 7778 CEP: 25040-004 Duque de Caxias, Rio de Janeiro Brasil Tel.: 00 55 21 3661-9003 Fax: 55 21 3661-9001 http://www.panaftosa.org.br

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