Extraccin antioxidante de mostaza (Brassica Juncea Mostaza Castaa) Semilla aplicada por ultrasonido de alta intensidad.

Jeremiah Dubie, Aaron Stancik, Matthew Morra, and Caleb Nindo. Las semillas oleaginosas de Mostaza castaa proporcionan materia prima que favorece la industria de los biocombustibles, tambin hay co-productos de valor aadido que sern necesarios para generar incentivos financieros para aumentar la produccin. Nuestro objetivo es utilizar el tratamiento de ultrasonido de alta intensidad para optimizar la extraccin de antioxidantes de mostaza (Brassica juncea). Las variables de extraccin asistida por ultrasonido (UAE), incluida la temperatura, la relacin de disolvente del material con la duracin de la sonicacin, y la concentracin de EtOH. Se analizaron extractos del contenido total de compuestos fenlicos (TPC), la actividad antioxidante y el contenido de sinapina. Extraccin convencional con agua y EtOH al 70% (v / v) a 80 C durante 3 30 min produjo 7,83 0,07 y 8,81 0,17 mg equivalentes de cido sinpico ( SAE ) / g de comida , respectivamente . Extraccin EAU a 40 C durante 30 min produjo similares muestras de compuestos fenlicos ( 8,85 0,33 mg SAE / g de comida ) como la extraccin etanlica caliente convencional , que requiere menos tiempo y la temperatura es ms baja. El TPC ms alto (13,79 0,38SAE mg / g de harina) fue en los extractos acuosos de 7 d. Soluciones sonicadas de sinapina pura y cido sinpico mostraron primera orden cintica de la reaccin con una mayor degradacin de los compuestos aislados que los presentes en los extractos. Sinapina contenida en extractos mostraron ( P < 0,05 ) la degradacin insignificante despus de 30 min de sonicacin . Nuestra investigacin indica que el tratamiento de ultrasonido puede ayudar a la extraccin de antioxidantes de B. juncea mediante la reduccin tanto de la temperatura como del tiempo, un requisito sin degradacin significativa de los antioxidantes primarios presentes. Palabras claves: Antioxidante, DPPH, semillas oleaginosas, cido sinpico, ultrasonido. Aplicacin Prctica: Las semillas residuales contienen compuestos con propiedades antioxidantes y antimicrobianas que se pueden incorporar en varios productos alimenticios para extender su vida til. Extraccin asistida por ultrasonido puede mejorar potencialmente la extraccin de estos compuestos para el desarrollo de productos con valor agregado.

INTRODUCCION: Los cultivos de semillas oleaginosas, incluyendo la colza (Brassica napus) y la mostaza (Brassica juncea y Sinapis alba) , son importantes ya que depende de su potencial para apoyar la industria de biocombustibles en crecimiento. Con mayores incentivos financieros para incrementar estos cultivos, los cuales pueden lograrse a travs de la extraccin de los co-productos de la semilla de valor agregado que queda despus de la extraccin de petrleo. Los antioxidantes son de vital importancia en los sistemas biolgicos debido a su capacidad para retardar la degradacin causada por la oxidacin. Los antioxidantes sintticos son muy eficaces, pero pueden tener efectos negativos para la salud, como el potencial patolgico, enzimas, lpidos y alteraciones Branen (1975). Por lo tanto, el uso de antioxidantes naturales a partir de extractos de plantas en los productos alimenticios ha ganado popularidad (Porkorny 2007). Los extractos de semilla de mostaza castaa (BSM) ( colza y mostaza ) tienen actividad potencial resultante principalmente de compuestos fenlicos ( Kozlowska y otros 1983; Shahidi y otros 1994; Wanasundara y otros,1995).

Las comidas contienen compuestos fenlicos bioactivos en la forma de cido 3,5 - dimetoxi - 4 hidroxicinmico (cido sinpico ) derivados, que han mostrado actividad antioxidante ms fuerte (AA ) que muchos otros antioxidantes artificiales y naturales (Wanasundara y Shahidi 1994 , RiceEvans y otros, 1996 ) . BSM y extractos a partir de los mismos materiales que se han utilizado en la carne de tierra para reducir la oxidacin de lpidos, extender la vida til y mantener la calidad (Saleemi y otros 1993 ; Brettonett y otros 2010 ; Lara- Lledo y otros 2012). Tcnicas de extraccin novedosas que mejoran la eficiencia de la extraccin incluyendo la aplicacin de alta intensidad y ultrasonido de baja frecuencia que se basa en los efectos fsicos de la cavitacin que continuamente se vienen desarrollando (Kentish y Ashokkumar 2011). El ultrasonido puede propiciar la destruccin de la pared celular, se podran producir fugas de material celular, mejorar la penetracin de disolvente en las clulas vegetales, facilitar la hidratacin, la inflamacin y mejorarla transferencia de masa ( Vntoru 2001 ; Vilkhu y otros, 2008) . Estos fenmenos pueden aumentar la extraccin de antioxidantes, al mismo tiempo que reduce significativamente el tiempo de extraccin, mejorando as la eficiencia global (Mason y otros, 1996 ; Albu y otros, 2004 ). La extraccin asistida por ultrasonido (EAU) es verstil y se puede utilizar tanto en escalas pequeas y grandes (Vntoru 2001). A pesar de los efectos beneficiosos conocidos de ultrasonido para la extraccin de compuestos bioactivos, los posibles efectos negativos de los ultrasonidos sobre los compuestos de inters no han sido adecuadamente investigados (Soria y Villamiel 2010). Los colapsos violentos que se producen durante la cavitacin transitoria puede generar extremas temperaturas y presiones superiores a 5000 K y 500 k localizadas (Hoffman y otros, 1996 ;Thompson y Doraiswamy 1999 ; Esclapez y otros 2011 ) . Estas condiciones pueden causar una serie de cambios qumicos que se produzca dentro de la burbuja de cavitacin y en el lquido circundante, incluyendo la formacin de radicales libres (Knorr y otros, 2004) y la degradacin de los compuestos bioactivos a travs de la oxidacin por los radicales hidroxilo, pirlisis, y supercrticos la oxidacin del agua (Hoffman y otros, 1996). La extraccin de compuestos fenlicos de BSM convencionalmente se ha logrado a travs de la utilizacin de disolventes orgnicos, en particular alcoholes y las altas temperaturas en tiempos de extraccin largas ( Shahidi y otros, 1994; Wanasundara y Shahidi 2005 ). Parametros convencionales de extraccin por lo general implican el uso de 70 % o 80 % de EtOH a 80 C. Las semillas se extraen durante 30 min y se filtran, y el residuo slido se extrae 2 veces ms en las mismas condiciones. El tratamiento con ultrasonido puede mejorar la extraccin de diversos compuestos que incluyen antioxidantes y antimicrobianos de BSM (Lin y otros, 2000 , Wang y otros, 2011). Sin embargo, adicionalmente se requiere una investigacin para maximizar el rendimiento de extraccin mientras se minimiza la posible degradacin causada por los efectos sonoqumicos de cavitacin transitoria. Nuestros objetivos son optimizar el rendimiento de antioxidantes extrados de BSM mediante ultrasonidos de alta intensidad y para cuantificar el efecto de la sonicacin sobre la degradacin de la extrada muestra de antioxidantes fenlicos. METODOS Y MATERIALES Materiales: Todos los experimentos se realizaron con las semillas que quedan despus del prensado en fro de B. juncea "Pacific Gold" (Brown y otros,1998), S. alba "IdaGold" (Brown y otros, 2004), y semillas de B. Napu en una prensa en la Universidad del campus de Idaho (Mosc, Idaho, EE.UU.). Aproximadamente el 90% del aceite fue extrado a partir de las semillas usando una trituradora de semillas mecnica (Peterson y otros 1983; Borek y Morra 2005). La harina obtenida despus de pulsar se ha contenido en agua entre el 4% y el 5% en el peso hmedo base y consisti en

escamas de forma irregular que eran aproximadamente 1 mm de espesor y de 1 a 3 cm de longitud (Hendrix y otros, 2012). Los compuestos de cido sin pico estndar 98%, 2,2-di (4-terc-octilfenil)1-picrilhidracilo radical libre (DPPH), 2,2 -Azino-bis (cido 3-etilbenzotiazolina-6-sulfnico) diamonio sal (ABTS) 99,0%, y el reactivo de Folin Ciocalteufenol se obtuvieron de Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, EE.UU.).

Extraccin convencional: La harina de semilla que se extrajo con etanol al 70% ya sea con agua desionizada de acuerdo con los procedimientos descritos por Shahidi y otros (1994) y Hassas-Roudsari y otros (2009). Seis gramos de comida se colocaron en un matraz Erlenmeyer de 200 ml a 120 ml, que se aadi disolvente. La mezcla se calent con agitacin en un bao de agua mantenido a 80 C durante 30 minutos y se filtr a travs Nr papel de filtro Whatman 2. El residuo slido se extrajo 2 veces ms en las mismas condiciones. Los extractos fueron combinados y se almacenan a 4 C hasta su anlisis. El BSM fue tambin extrada por triplicado, ya sea con etanol al 70% o agua desionizada durante 24 horas o con agitacin a temperatura am biente (22 1 C). UAE Las semillas de mostaza castaa fueron sometidas a alta intensidad de baja frecuencia tratamiento con ultrasonidos en un sistema por lotes. Los parmetros variaron individualmente (con todos los dems se mantienen constantes) para determinar sus efectos en la extraccin de los antioxidantes de la harina de mostaza. Se extrajo con etanol al 70% ya sea con agua desionizada en una proporcin de disolvente-a-50 del material de: 1. La solucin de extraccin (120 ml) se someti a 30 minutos de 20 kHz y 0,5 W / ml tratamientos de ultrasonidos (Branson Sonifier modelo S-450A, 400W, Danbury, Connecticut, EE.UU.) a 20 C. El titanio punta de la sonda cuerno del sonotrodo que tena una longitud de 10 cm con un dimetro de 1,9 cm y se insert 2 cm en la solucin de reaccin. Los parmetros fueron variando de forma individual en un diseo de 4 6 6 5 como sigue: temperatura ( 20 , 40 , 60 , y 75 C ) , disolvente - a - material de relacin ( 10 : 1 , 20 : 1 , 30 : 1 , 40 : 1 , 50 : 1 y 60 : 1 ) , la duracin ( 10 , 20 , 30 , 40 , 50 , y 60 min ) , y la concentracin de etanol en el disolvente ( 0 % , 30 % , 50 % , 70 % , y 95 % ) . Cada condicin de temperatura se mantuvo dentro de 1 C usando una cmara de reaccin de acero inoxidable con camisa colocado dentro de una camisa de plstico con agua de refrigeracin circulante desde un bao refrigerado ( bao y circulador modelo 2095, Forma Scientific , Marieta , Ohio, EE.UU.) . La temperatura se control utilizando termopares y un registrador de datos ( 21X Micrologger , Campbell Scientific , Logan , Utah, EE.UU.) . Se determin la potencia acstica entregado a la solucin de reaccin por el mtodo calorimtrico (Contamine y otros 1995 ) . La densidad de potencia acstica ( APD ) , que representa la intensidad del tratamiento ultrasnico y est inversamente relacionada con el volumen ( V ) de la solucin de reaccin , se determin a partir del aumento de la temperatura de la solucin de reaccin de acuerdo con la ecuacin .( 1 ) y ( 2 ).

Se calcul la potencia acstica (P) emitido a travs de la cavitacin por la tasa de aumento de la temperatura (dT / dt), la masa (m), y el calor capacidad (cp) de la solucin.

Bajo condiciones experimentales, el poder estaba decidido de 60 W y APD de 0.5 W / mL. Despus de la sonicacin , soluciones de extraccin se filtraron a travs del papel de filtro Whatman n 2 y se almacena a 4 C hasta su anlisis . Compuestos fenlicos totales y los ensayos de antioxidantes. Todas las muestras se analizaron para el contenido de fenoles totales (TPC) utilizando el reactivo fenol de Folin Ciocalteu y la actividad antioxidante total ( AA ) usando ensayos de DPPH y ABTS . Los resultados se compararon con la extraccin en caliente del disolvente convencional. Los extractos se analizaron utilizando cido sinpico como el estndar y los resultados se dan como mg de cido sinpico equivalentes / g de harina (SAE mg / g de harina). Los antioxidantes primarios en BSM son derivados del cido sinpico; por lo tanto , se consider cido sinpico como un estndar adecuado para cuantificar la capacidad antioxidante de los extractos. El TPC de los extractos se determin de acuerdo con el procedimiento esbozado por Amarowicz y otros (2004) . Cincuenta microlitros de extraer o estndar se aadieron (cido sinpico disuelto en etanol) a 4,5 cubetas de poliestireno ml que contienen 2.000 l de agua desionizada y 50 reactivo fenol de Folin Ciocalteu mezclado durante 15s. Los contenidos se dejaron reposar durante 3 min en una habitacin a temperatura antes de la adicin de 300 l de carbonato de sodio saturado solucin y una agitacin final por 15 s. Estos se les permiti en reposo durante otros 60 min a temperatura ambiente en la oscuridad antes del registro de la absorbancia a 725 nm (Lambda 35 UV / Vis Espectrofotmetro, Perkin Elmer, Akron, Ohio) con agua desionizada como referencia. La actividad antioxidante de DPPH de los extractos se determin por su capacidad para reducir el radical DPPH ( Naczk y otros, 2005). La solucin de DPPH fue preparado mediante la disolucin de 2,2 - di ( 4 - tertoctylphenyl ) - 1 picrilhidracilo en 95 % de etanol a una absorbancia de 0,70 0,10 . Quince microlitros de extracto o (cido sinpico estndar disuelto en etanol ) se aadieron a cubetas que contienen 2.000 l Solucin de DPPH y mezclado durante 15 s. Se permiti que los contenidos en reposo a temperatura ambiente durante 10 min antes de grabar la absorbancia a 517 nm utilizando etanol al 95 % como referencia. La actividad antioxidante de ABTS se determin de acuerdo de manera similar con el procedimiento esbozado por Re y otros (1999). Brevemente, 38,4 mg de ABTS y peroxidisulfato de potasio 6,6 mg se disolvieron en 10 ml de agua desionizada y se dej reposar a temperatura ambiente en la oscuridad durante 16 h . Despus de la incubacin , el 95 % de EtOH se aadi a la solucin hasta que la absorbancia alcanz 0,70 0,10 . Diez microlitros de extracto o (cido sinpico estndar disuelto en etanol ) se aadieron a cubetas que contienen 2.000 l Solucin de ABTS y mezclado durante 15s. Se permiti que los contenidos en reposo a temperatura ambiente durante 10 min antes de grabar la absorbancia a 734 nm utilizando etanol al 95 % como la solucin de referencia.

Extraccion y cinetica de la degradacin: La sinapina se refiere comnmente como el fenlico dominante compuesto en BSM ( Bouchereau y otros 1991 , Engels y otros 2012 ). Las muestras ( 0,5 ml ) se tomaron cada 10 minutos hasta 60 min y se analizaron por HPLC para determinar la cintica de la sinapina y la extraccin a partir de las semillas de mostaza castaa durante la sonicacin con la temperatura se mantiene constante en cualquiera de 20 1 75 1 o C. Las soluciones que contienen 200 mg / L de sinapina , 200 mg / l de cido sinpico , o una combinacin de ambos tambin se someti a ultrasonidos para investigar el efecto de los ultrasonidos de alta intensidad en la degradacin de sinapina. Y el cido sinpico . Un extracto etanlico caliente convencional se filtr a travs de un filtro de PES de 0,45 m Whatman y ultrasonidos a 20 C, despus de lo cual se tomaron muestras cada 10 min hasta 60 min y se le analiz mediante HPLC. Esta secuencia se compar con el uso de un extracto enriquecido con cido sinpico y soluciones puras de cualquier cido sinapina o sinpico para investigar los posibles efectos de otros compuestos en la solucin de reaccin. La degradacin de los compuestos fenlicos se ha encontrado que siga la primera orden cintica (Emery y otros, 2003) . La degradacin de los cido sinapina y sinpico fue modelado de acuerdo con la exponencial ecuacin de decaimiento (Ec. 3 ) donde Co es la concentracin inicial, Ct es la concentracin en el momento de la muestra ( t ) , y k es la tasa constante ( 1 / s ) . Los experimentos se realizaron dos veces.

El tiocianato de sinapina se purific de acuerdo con el mtodo de Mailer y otros (2008). La harina de las semillas de mostaza castaa se extrajo con 95% etanol utilizando un aparato Soxhlet durante 4 h. La solucin se filtr a travs de un filtro de membrana de 0,45-micras y se concentr utilizando un evaporador rotatorio (40 C). El extracto se diluy con agua desionizada a la que se aadi tiocianato de potasio (3% w / w de ltima concentracin), despus de lo cual los las soluciones fueron almacenadas a 4 Cfor 48 h. Los cristales de tiocianato de sinapina se recuperaron por centrifugacin y decantacin. Los cristales se disolvieron en etanol al 95% y se almacena a 4 C durante 24 h.

El analisis por hplc Los extractos se analizaron utilizando un Agilent 1200 HPLC equipado con un desgasificador en lnea, bomba binaria , inyector automtico , un termostato con compartimento de columna y detector de diodos (Agilent Technologies, Inc. , Santa Clara , California, EE.UU. ) .

La separacin se realiz en una columna de 250 x 2,00 mm, 5 m, 125 A del Aqua C18 (Phenomenex , Torrance, CA). Se realiz elucin en gradiente el cual uso de agua con cido frmico al 0,1 % como disolvente y metanol con 0,1 % de cido frmico como disolvente B. El gradiente se inici con 20 % de B en 0 min , aumentando a 80 % de B en 15 min , y disminuyendo a 20 % de B en 20 min con una postrun de 5 min . Disolventes y muestras de extracto se filtraron a travs de un filtro de membrana de 0,45 - micras . La columna se mantuvo a 25 C y la velocidad de flujo fue de 250 l / min . Los cromatogramas se adquirieron a 330 nm y se analizaron los datos utilizando el software ChemStation ( Agilent Technologies , Inc. ) . Peaks fueron etiquetados de acuerdo con sus tiempos de retencin relativos en comparacin a los de patrones de referencia. El analisis estadistico Cada condicin de tratamiento UAE se prob por triplicado y cada ensayo se realiz por triplicado para cada muestra . El anlisis por HPLC se llev a cabo por duplicado . Una forma de anlisis de varianza y Bonferroni t -se realizaron pruebas para evaluar los efectos de la extraccin de las condiciones sobre el rendimiento de fenoles totales y la actividad antioxidante de extractos (Software de Anlisis Estadstico SAS / STAT versin 9.2 ) . El mismo software se utiliz para calcular los coeficientes de correlacin entre los 3 ensayos.

RESULTADOS Y DISCUSION Extraccion convencional Los resultados de la extraccin convencional a cabo en las clulas de harina de semilla se presentan en la Tabla 1. El TPC del etanol caliente extracto es consistente con el rango de niveles mide en otras variedades de B. juncea (Mailer y otros 2008; Khattab y otros 2010). Se observaron las actividades antioxidantes ms altos del TPC y ABTS en el 24-h y los extractos acuosos 7-d. En contraste, la ms baja durante actividades antioxidantes DPPH se midieron en estos mismos 24-h y 7-d extractos acuosos.

Las actividades ms altos antioxidantes DPPH ocurrido en los extractos de etanol caliente, mientras que ABTS antioxidante en actividades en los extractos de etanol caliente eran equivalentes a los obtenidos en extractos de agua caliente. Todos los 3 extractos de etanol produjeron menor fenlico concentraciones y ABTS actividades antioxidantes que sus respectivos 24-h y los extractos acuosos 7-d. Lo contrario es cierto para DPPH en que los extractos de etanol produjo actividades ms altas que 24-h y 7 -d extractos acuosos. Estos fenmenos sugieren que hay diferentes compuestos presentes en los extractos de harina de semilla de mostaza que contribuirn a la actividad antioxidante y estos compuestos tienen diferentes solubilidades . Nuestros resultados tambin sugieren que estos compuestos tienen diferente comportamiento antioxidante basado en la falta de correlacin entre el DPPH y ensayos de ABTS . Adems, parece

que hay compuestos fenlicos solubles en agua que no proporcionan mucho AA en comparacin con los que se extraen con alcohol. UAE: UAE de antioxidantes de harina de semilla de mostaza castaa fue estudiado por diferentes parmetros como la temperatura , la duracin del tratamiento con ultrasonidos ,la concentracin de EtOH , y la relacin de disolvente a material. La tabla 2 muestra el efecto de la temperatura sobre el TPC y la actividad antioxidante. El ms alto contenido de compuestos fenlicos y AA se midieron en los extractos a 75 C con una tendencia a una mayor extraccin de compuestos fenlicos y antioxidantes con aumento de la temperatura. UAE extrae a 40 C tenido TPC de 8,85 0,33 mg SAE / g de harina, que era igual a extractos etanlicos calientes convencionales ( Tabla 1 ) en 8,81 0,17 mg SAE / g de harina ( P > 0,05 ) . UAE extrae a 75 C tuvieron significativamente mayores TPC y ABTS actividades antioxidantes que el convencional extractos en caliente de disolvente ( Tabla 1 ) ( P < 0,05 ) .

El efecto de la duracin del tratamiento con ultrasonidos en el TPC y la actividad antioxidante se presenta en la Tabla 3 . La sonicacin durante ms de 30 min consiste en no aumentar la concentracin de compuestos fenlicos en los extractos. Veinte minutos de sonicacin fueron suficientes para maximizar la extraccin de antioxidantes tal como se determina en tanto el DPPH y

ensayos de ABTS . La tabla 4 indica que el agua sola era suficiente en la extraccin de compuestos fenlicos y compuestos con actividad antioxidante ABTS , y ninguna ventaja fue obtenida mediante la adicin de etanol . Sin embargo, la inclusin de etanol ha mejorado la extraccin de compuestos con DPPH antioxidante actividad, con la mxima extraccin de tales compuestos se producen cuando se utiliz etanol al 70 % . El efecto del disolvente a materiales en relacin de TPC y AA se presenta en la Tabla 5 . Hubo una tendencia hacia una mayor extraccin de compuestos fenlicos y antioxidantes en mayor las relaciones de disolventes y una relacin de 40 : 1 fue suficiente para maximizar la extraccin de los 3 componentes . Los parmetros ms importantes UAE incluida la relacin de disolvente a materiales, composicin del disolvente,y la temperatura de extraccin .

Correlacion entre ensayos de antioxidantes: En las correlaciones entre los ensayos de antioxidantes se detect correlacin lineal significativa (p < 0,05 ) en todos los casos para los ensayos antioxidantes TPC , DPPH y ABTS . El ensayo ABTS correlacionado ms estrechamente con el TPC ( r = 0,912 ) que con el ensayo de DPPH ( r = 0,603 ) , y el ensayo de DPPH TPC y eran menos correlacionados ( r = 0,494 ) . Algunos estudios han reportado excelentes lineal las correlaciones entre los ensayos de actividad antioxidante y TPC (Huang y otros, 2005 ; Hassas - Roudsari y otros 2009 ) , mientras que otros han denunciado la falta de correlacin ( Costa y otros, 2009 ) . Wanasundara y otros ( 1995 ) analizaron la pasta de canola y concluyeron que el TPC no era el factor crtico en la determinacin de la actividad antioxidante . Costa y otros ( 2009 ) informaron que el TPC puede ser un indicador de la potencial actividad antioxidante , pero no hay necesariamente una correlacin lineal . En nuestro estudio , las correlaciones estn fuertemente influidas por la supuesta diferencia en la composicin entre los extractos alcohlicos y acuosos , elevando as la cuestin de si se debe usar alcohol en el disolvente de extraccin, o si agua sera preferible desde un punto de vista ambiental , pero inconvenientes podran incluir una mayor extraccin de compuestos indeseables tales como protenas, ms extensos requisitos de filtracin de la solucin de extraccin y una menor produccin de antioxidantes especficos .

Extraccion de rendimientos: Los rendimientos de extracto, en una base de la masa seca y mtodos convencionales de extraccin sometida a ultrasonidos se presentan en la Tabla 6. los rendimientos vari de 0,18} desde 0,01 hasta 0,33* 0,01 g / gmeal. El rendimiento ms bajo se obtuvo a partir de extractos UAE a 20 C y el rendimiento ms alto se obtuvo a partir de 7-d extractos acuosos. UAE extrae a 75 C teniendo el mismo rendimiento que los de extractos etanlicos convencionales, pero tuvieron mayor TPC y la actividad antioxidante. La fase acuosa de larga duracin extractos tenan los ms altos rendimientos, posiblemente debido a la mayor solubilidad de protena en agua en comparacin con el etanol. Parece que EAU con disolventes etanlicos es una tcnica eficaz para aumentar la extraccin de antioxidantes sin aumentar significativamente el masa de los extractos. Comparacion entre extractos bsm: La actividad de diversos extractos de BSM TPC y antioxidante son presentados en la Tabla 7.

El contenido sinapina de BSM varan ampliamente los lotes de B. juncea y B. napus comidas que van desde 7,3 hasta 14,3 mg / g, y 7,4 a 16,2 mg / g, respectivamente (Emery y otros, 2003 ) . Es de destacar que S. alba al parecer tiene mucho mayor TPC que cualquiera de B. juncea o B. napus , pero no parece que tienen una comparacion alta AA (Tabla 7 ) . S. comida alba contiene 4 - hidroxibencil glucosinolatos , que ha sido medido en los niveles mayores que 120 mol / g de harina ( Borek y Morra 2005 ) . basado el clculo de la equivalencia molar , 120 mmol 4 hidroxibencil glucosinolatos tendra el mismo contenido fenlico como 27 mg cido sinpico .

La sinapina y el acido sinapico: Los cromatogramas de los extractos acuosos ( Figura 1 ) indican que los principales componentes de los extractos son sinapina ( SP ) y acido sinapico ( SA ) . Extraccin de agua caliente dio lugar a extractos con un alta concentracin de sinapina con cido sinpico mnimo. Sin embargo ,si el extracto se le permiti permanecer en agua a 20 C durante 7 d , la concentracin de sinapina disminuye mientras que la de sinpico cido aumenta considerablemente. La sinapina es susceptible tanto a alcalina y a la hidrlisis enzimtica (mirosinasa ) ( Durkee y Thivierge 1975 ) , la produccin de cido sinpico y colina , y esto puede explicar estos cambios en la composicin del extracto .

Los resultados de la cintica de extraccin de sinapina durante la sonicacin se presentan en la Figura 2 . La extraccin de sinapina durante la sonicacin a 75 C fue ma yor que a 20 C ( P < 0,05 ) . El contenido de la sinapina correlacion positivamente con los cursos de poltica comercial y actividades antioxidantes de los Emiratos rabes Unidos extrae al aumentar la temperatura, lo que sugiere que la sinapina puede ser un importante fenlico antioxidante que se encuentra en B. extractos etanlicos comida de semillas. otros estudios han informado de una correlacin similar entre la sinapina y TPC en BSM ( Khattab y otros 2010 ; Thiyam y otros 2006 ) . La Figura 3 muestra la cintica de degradacin primera orden para la 4 sinapina y soluciones de cido sinpico . Las constantes de velocidad correspondientes para los compuestos son : cido sinpico puro ( k = 0,001662 ) > sinapina puro ( k = 0,001045 ) > cido sinpico en el extracto ( k = 0.0008542) > sinapina en el extracto ( k = 0,0001278 ) . La sinapina en extractos mostraron una degradacin insignificante durante la sonicacin ( P > 0,05 ) , mientras que todas las dems situaciones dieron lugar a una degradacin significativa ( P < 0,05 ) . cido sinpico parece ser ms susceptible a la degradacin sonoqumica de sinapina . Menos de la degradacin ocurrieron cuando estn presentes en los extractos tanto de cido sinpico y sinapina que contiene diversos componentes no identificados , en comparacin con la mismo compuesto cuando est presente como el nico componente de la sonicado solucin . Estos resultados sugieren que la susceptibilidad de estos compuestos a los efectos de la degradacin de la cavitacin ultrasnica

puede depender de su composicin molecular y si son presentar con otros componentes en solucin .

CONCLUSIN: Los datos de este estudio sugieren que el tratamiento con ultrasonidos puede ayudar a la extraccin de antioxidantes de harina de semilla de mostaza castaa (B. juncea) por la reduccin de tanto la temperatura y el requisito de duracin sin degradacin significativa de uno de los antioxidantes primarios presentes. El trabajo futuro se centrar en la incorporacin de la riqueza en antioxidantes y extractos BSM en un producto crnico para inhibir el deterioro y prolongar la vida til. El uso de la harina de mostaza para ello es especialmente atractiva porque estos alimentos tambin contienen glucosinolatos que hidrolizan para formar compuestos biolgicamente activos . Por ejemplo , 2 - Glucosinolatos propenilo en harina de semilla de B. juncea es enzimticamente hidrolizada a un isotiocianato de 2 - propenilo voltil con antimicrobiana propiedades ( Lin y otros, 2000 ; Lara- Lledo y otros 2012 ) . Si antioxidantes y antimicrobianos se pueden obtener en un solo

extracto de harina de semilla de mostaza, a continuacin, tanto qumica como microbiolgica se puede llegar a deteriorar de los alimentos puede ser inhibida .

AGRADECIMIENTOS Este proyecto fue apoyado por el USDA Natl . Inst . Trabajadores de la Alimentacin y la Agricultura competitiva subvencin nr 2011-67009-20094. Damos las gracias al Dr. Greg Moller (Universidad de Idaho, Facultad de Ciencias de la Alimentacin ) para proporcionar el equipo de ultrasonido de alta frecuencia utilizado en el estudio .