UNIVERSIDAD DE COLIMA

POSGRADO INTERINSTITUCIONAL EN CIENCIAS PECUARIAS

AISLAMIENTO Y CARACTERIZACIN DE PROTEINAS
DE LAS SEMILLAS MADURAS DE Enterolobium cyclocarpum
PARA SU APROVECHAMIENTO ALIMENTICIO.
TESIS
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE
DOCTOR EN CIENCIAS PECUARIAS
PRESENTA:
JUAN CARLOS SERRATOS ARVALO
TUTOR:
DR. FERNANDO A. LPEZ-DELLAMARY-TORAL
ASESORES:
DR. JOS MANUEL PALMA GARCIA
DR. JOSE MANUEL HERNANDEZ
DR. ROGELIO ALONSO MORALES
DR. PEDRO GARZN DE LA MORA
COLIMA, MXICO NOVIEMBRE DE 2000.
UNIVERSIDAD DE COLIMA
POSGRADO INTERINSTITUCIONAL EN CIENCIAS PECUARIAS
EXTRACCIN Y CARACTERIZACIN DE PROTEINAS
DE ALMENDRA DE LAS SEMILLAS MADURAS DE
Enterolobium cyclocarpum PARA SU APROVECHAMIENTO
ALIMENTICIO.
TESIS
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE
DOCTOR EN CIENCIAS PECUARIAS
PRESENTA:
JUAN CARLOS SERRATOS ARVALO
ASESOR:
DR. FERNANDO A. LPEZ-DELLAMARY-TORAL
COASESORES:
DR. JOS MANUEL PALMA GARCIA
DR. JOS MANUEL HERNNDEZ
DR. ROGELIO ALONSO MORALES
DR. PEDRO GARZN DE LA MORA
TECOMAN, COLIMA, MXICO JULIO DE 2001
DEDICATORIAS:
A mi esposa: Mara Eugenia Prez de Serratos con amor y a mis hijos, Juan Carlos y Judith
Sofa quienes siempre me apoyaron.
A mis padres: Ignacio Serratos Castaeda (finado) y Carmen Arvalo de Serratos por su
ayuda espiritual
A mis hermanos: Javier, Hector, Ral, Jos, Luz (finada) y Rosa por su solidaridad fraterna.
MISTERIO DEL UNIVERSO:
El mundo semjase a un dado que gira, y todo se vuelve, y el hombre se transforma en
ngel, y el ngel en hombre, y la cabeza en pie, y el pie en cabeza. As se convierten y giran
todas las cosas, transformndose: esto en aquello, aquello en esto, y se vuelve lo de arriba
abajo. Porque en la raz de todo es uno, y en la transformacin y vuelta de las cosas esta
comprendida la redencin.
As como la mano que tapa el ojo quita la vista de la ms alta montaa, as la pequea vida
terrenal quita la vista de la gigantescas lumbreras y misterios que llenan el universo. Y
quien fuere capaz de quitrsela de los ojos, como se retira una mano, ver la intensa
luminosidad del interior del universo.
Palabras del rab Najman de Bratzlav
(Judo, siglo XVIII d. c.)
AGRADECIMIENTOS :
A todas aquellas personas que cedieron parte de su actividad para el avance del presente
estudio; el ms alto reconocimiento por tan noble actitud.
DR. Fernando Antonio Lpez- Dellamary Toral por su sabia conduccin y la invitacin
constante al razonamiento.
DR. Jos Manuel Palma Garca por sus agudas observaciones y anlisis critico.
DR. Jos Manuel Hernndez por los apoyos recibidos para efectuar electroforsis.
DR. Rogelio Alonso Morales por su ayuda cientfica y tcnica.
DR. Pedro Garzn de la Mora por su apoyo tcnico y cientfico.
A todas las autoridades y al personal que labora en la D.G.E.T.A de la SEP. Asimismo al
ITA-CIGA de Jalisco y en especial al ING. Hector Gonzlez Rodrguez, M.C. Mercedes G.
Limn Snchez, M.C. Manuel Alvarez Gallegos, DR. Carlos Arias Castro, ING. Ignacio
Gutirrez Gutirrez. Gracias a las facilidades que me brindaron fue posible continuar y
concluir estudios de doctorado.
Extraccin y caracterizacin de protenas de almendra de las semillas maduras de
Enterolobium cyclocarpum para su aprovechamiento alimenticio.
Estudio que presenta el P. de DR. Juan Carlos Serratos Arvalo para obtener el grado de
Doctor en Ciencias Pecuarias.
El presente trabajo se realiz sobre todo con el apoyo de la Universidad de Colima y el
CONACYT con el nmero de registro 96406.
Asimismo quiero hacer patente m agradecimiento al Departamento de Madera Celulosa y
Papel de la Universidad de Guadalajara y en lo particular a todos los que trabajan en el
Laboratorio de Qumica, tambin al CINVESTAV Unidad Zacatenco por el desarrollo de
las etapas experimentales.
NDICE.
Pginas
LISTA DE FIGURA.................................................................................................................I
LISTA DE CUADROS..............................................................................................................lI
LISTA DE GRFICAS................................................................................................................III
SUMMARY.......................................................................................................................2
INTRODUCCIN...........................
......................................................................3
HIPTESIS............................................................................................................................4
OBJETIVOS........................................................................................................................5
REVISIN DE LITERATURA........................................................................................6
6.1 Aspectos histricos..............................................................................................................6
6.2 Descripcin de la planta.......................................................................................................6
6.2.1 Corteza.................................................................................................................................7
6.2.2 Hojas....................................................................................................................................7
6.2.4 Frutos.................................................................................................................................7
6.2.5 Semillas.............................................................................................................................7
6.3 Procesamiento de frutos y semillas......................................................................................7
RESUMEN........................................................................................................1
6.2.3 flores..............................................................................................................................7
6.4 Almacenamiento....................................................................................................................9
6.5 Manejo de la especie en vivero.............................................................................................9
6.6 Tratamientos pregerminativos............................................................................................9
6.7 Germinacin...................................................................................................................9
6.9 Reproduccin biolgica.......................................................................................................9
6.10 Gentica.............................................................................................................................10
6.11 Crecimiento y desarrollo...................................................................................................10
6.12 Agroforestera....................................................................................................................11
6.14 Caractersticas mecnicas de la madera...........................................................................12
6.15 Perfil ambiental.............................................................................................................12
6.16 Propiedades medicinales y qumicas..............................................................................12
6.17 Silvicultura......................................................................................................................13
6.19 Plagas y enfermedades...................................................................................................13
6.20 Caractersticas nutricionales de E. cyclocarpum..........................................................14
6.21 Alimentacin animal....................................................................................................22
6.21.1 Rumiantes......................................................................................................................22
6.21.3 Ovinos.............................................................................................................................24
6.21.4 Pollos de engorda..........................................................................................................24
6.21.5 Ratas...........................................................................................................................29
6.8 Distribucion geografica....................................................................................................9
6.13 Agroindustria...............................................................................................................11
6.18 Edafologa....................................................................................................................13
6.21.2 Diversas espacies.....................................................................................................23
6.22 Interaccin de E. cyclocarpum con otras especies animales..........................................29
6.23 Otras especies de Enterolobium...................................................................................30
6.23.1 Enterolobium saman.................................................................................................30
6.23.2 Enterolobium contortisiliquum....................................................................................30
6.24.1 Cacahuate....................................................................................................................32
6.24.2 Soya..................................................................................................................................33
6.24.3 Frijol.........................................................................................................................33
6.24.4 Haba..............................................................................................................................34
6.25 Importancia de las protenas............................................................................................34
MATERIALES Y MTODOS
...............................................37
7.1 Sitio de recoleccin de especmenes................................................................................37
7.2 Anlisis de elementos........................................................................................................39
7.4 Cuantificacin de aminocidos.........................................................................................39
7.5 Protena soluble..................................................................................................................40
7.6 Fraccin de protenas........................................................................................................40
7.7 Contenido proteico............................................................................................................43
7.9 Prueba biolgica...............................................................................................................44
7.10 Anlisis estadstico.........................................................................................................44
6.23.2 Estudios de proteinas de otras leguminosas fundamentales en la alimentacion.......31
6.24.5 chicharos..................................................................................................................34
7.3 Anlisis de Kjeldahl.......................................................................................................39
7.8 Electroforesis en gel.....................................................................................................43
RESULTADOS
.........................................................................46
8.1 Anlisis elemental.............................................................................................................46
8.2 Anlisis de Kjeldahl.........................................................................................................46
8.3 Aminogramas.................................................................................................................48
8.5 Fracciones de protena.......................................................................................................50
8.6 Cuantificacin de protenas.............................................................................................51 50
8.7 Electroforsis en gel...................................................................................................52 52
8.8 Prueba biolgica..............................................................................................................55 55
DISCUSIN........................................................................57
58
9.1 Anlisis elemental............................................................................................................57 58
9.2 Aminogramas.................................................................................................................58 58
9.3 Distribucin de las fracciones de protena........................................................................60 60
9.4 Prueba biolgica...............................................................................................................62 62
9.5 Contenido de protena........................................................................................................63 63
CONCLUSIONES................................................................65
65
SUGERENCIAS....................................................................66
66
LITERATURA CITADA....................................................67
67
8.4 Prortena Soluble...........................................................................................................49
LISTA DE FIGURAS
Pgina
Figura 1 Perfil de la copa y fenologa de Enterolobium cyclocarpum...................8
Figura 2 Diagrama general de la metodologa utilizada................... ......................38
Figura 3 Flujograma de extraccin y separacin de las protenas de las................
semillas de E.cyclocarpum
41
Figura 4 Pesos molecular de protenas de E.cyclocarpum utilizando....................
diferentes diluciones
52
Figura 5 Peso molecular de las fracciones de protena de E.cyclocarpum.............. 53
Figura 6 Peso molecular de las subunidades de la albmina de E........................
cyclocarpum
54
Cuadro 1 Etapas de alimentacin en pollos................... ........................................25
Cuadro 2 Anlisis qumico-proximal de la semilla completa y almendra............
de E.cyclorcarpum
26
Cuadro 3 Consumo acumulado individual (Kg) de las dietas control y...............
experimental
27
Cuadro 4 Dietas de las semillas maduras y verdes de E.............................
cyclocarpum en comparacin con la dieta control (casena)
45
Cuadro 5 Anlisis elemental de tres leguminosas................... ...............................46
Cuadro 6 Anlisis de Kjeldahl de la almendra madura y verde cocidas de..........
E. cyclocarpum
47
Cuadro 7 Aminocidos presentes en la almendra madura y verde de E...............
cyclocarpum en relacin con el patrn FAO/WHO
48
Cuadro 8 Fracciones de protena de las semillas de E. cyclocarpum...................50
Cuadro 9 Anlisis de varianza de un diseo completamente al azar para............
consumo, ganancia y relacin de eficiencia proteca
55
Cuadro 10 Ganancia de peso, consumo y relacin de eficiencia proteca en........
ratas
56
LISTA DE GRFICAS
Pgina
Grfica 1 Cantidad de cido cianhdrico (HCN) sobre 100 gr. de muestra........
de semilla de E.cyclocarpum
15
Grfica 2 Cromatograma de los azcares presentes en la semilla................... .....16
LISTA DE CUADROS
Pgina
completa de E.cyclocarpum
Grfica 3 Digestibilidad in vitro comparativo entre diferentes harinas..............
(materia seca)
17
Grfica 4 Comparacin de la protena cruda contenida en ocho alimentos.......
de origen animal y vegetal
18
Grfica 5 Comparacin de los aminocidos esenciales presentes en siete.........
productos alimenticios
19
Grfica 6 Alveogramas de la harina de semillas completas de E......................
cyclocarpum y de la harina de trigo
21
Grfica 7 Ganacia de peso acumulado de las aves (Kg)...................................35 28
Grfica 8 Protena soluble de E. cyclocarpum...................................................49
Grfica 9 Curva de Bradford de las diferentes fracciones de protena de..........
E. cyclocarpum
51
Grfica 10 Curva de crecimiento de la ratas swiss wistar................... ...................56
Grfica 11 Consumo alimenticio de las ratas wistar.........................................59
I. RESUMEN
El objetivo del presente estudio fue la extraccin, purificacin y caracterizacin de las
protenas de las semillas maduras de Enterolobium cyclocarpum. Las semillas se
descascararon hasta conseguir almendras, molidas con un molino Wiley de criba 0.75
mm hasta obtener harina, la que se desengras por medio de ter de petrleo y
posteriormente se hizo el anlisis elemental, la determinacin de protena cruda (PC),
aminogramas, electroforesis, solubilidad, identificacin y cuantificacin de fracciones de
protena; as como el establecimiento de la relacin de la eficiencia proteica (REP). Los
resultados mostraron para el anlisis elemental valores en carbono 45%, oxgeno 42%,
hidrgeno 7% y nitrgeno 6%. El anlisis de Kjeldahl indic 34.5% de P.C de la almendra
de la semilla madura y sobresalieron los aminocidos limitantes lisina, leucina, isoleucina y
treonina. El estudio electrofortico de las semillas maduras expuso los siguientes pesos
moleculares 18 400, 29 000, 43 000, 68 000, y 97 400 daltons. La protena soluble fue de
27%. Las fracciones de protena extradas con base en diferentes solventes fueron:
globulinas (0.5 M NaCl) 37.6%, albminas (H
2
O) 29.3%, glutelinas-1 (50% cido actico)
25.9%, prolaminas (70% alcohol isoproplico) 6.7%, y 0.5% de sales, no se encontraron
glutelinas2 (0.1 M NaOH). Los pesos moleculares correspondientes para cada fraccin de
protena fueron: Albminas 7 000, 35 300, 49 500, 84 000, y 210 000, para glutelinas-
1, 49 500, y 84 000, en prolaminas 49 500, y 84 000 y en el caso de globulinas 49 500
daltons. Las cantidades de fracciones de protena fueron: globulinas 0.438 mg/ml,
albminas 0.418mg/ml,glutelinas-1, 0.142 mg/ml y prolaminas 0.0278 mg/ml. Existi
diferencia estadsticamente significativa (P<0.05) en la relacin de la eficiencia proteica
(REP) para el testigo (casena) 2.12
a
y almendra de semilla madura 1.86
a
con respecto a la
almendra de semilla verde 1.44
b
. En cuanto a ganancia diaria de peso la diferencia
estadstica (P<0.05) fue de casena con los mejores valores 2.33
a
con respecto de las dietas
con semillas maduras 1.96b y verdes 1.44b. La almendra de la semilla madura por sus
diferentes valores de N elemental, aminocidos, fracciones de protena, solubilidad,
cantidad de protena y (REP) puede ser una fuente de alimentos no convencional para la
alimentacin humana y animal.
II. SUMMARY
The objective of this study was the extraction, purification, and characterization of the proteins found in the
ripe seeds of the Enterolobium cyclocarpum. The seeds were peeled down to the almonds, ground with a
Wiley 0.75-mm sieve grinder to obtain a flour from which the fat was removed using petroleum ether.
Afterward, an elementary analysis was made determining the crude protein, aminograms, electrophoresis,
solubility, identification and quantification of protein fractions as well as the establis hment of the relation of
protein efficiency (PER). The results shown for the elementary analyses in values were carbon 45%, oxygen
42%, hydrogen 7% and nitrogen 6%. The Kjeldahl analysis indicated 34.5% of P.C. of the almond of the ripe
seed and the limiting amino acids lysine, leucine, isoleucine, and treonine are outstanding. The electrophoretic
study of the ripe seeds exposed the following molecular weights: 18 400; 29 000; 43 000: 68 000; and 97 000
daltons. The soluble protein was 27%. The fractions of protein that were extracted on the base of their
solvents were: globulin (0.5 M NaCl) 37.6%, albumin (H2O) 29.3%,glutelins-1 (50% acetic acid) 25.9%,
prolamin ( 70% is opropilic alcohol) 6.7%, and 0.5% salts; no glutelins-2 ( 0.1 MNaOH) were found. The
corresponding molecular weights for each protein fraction: Albumins 7 000; 35 300; 49 500; 84 000; and 210
000; glutelins-1 49 500 and 84 000; prolamins 49 500 and 84 000; globulins 49 500 daltons. The quantities in
fractions of proteins were: globulins 0.438 mg/ml, albumins 0.418 mg/ml, glutelines-1, 0.142 mg/ml, and
prolamines 0.0278 mg/ml. There was a statistically significant difference (P<0.05) in the relation of the
protein efficiency (PER) for the evidence (casein) 2.12a and the almond of the ripe seed 1.86a with regard to
the almond of the green seed 1.44b. Regarding the daily weight gain, the statistical difference (P<0.05) was of
casein with the best values 2.33a with regard to the diets with ripe seeds 1.96b and green seeds 1.44b. The
almond with the ripe seeds, because of its different values of elemental N, aminoacids, protein fractions,
solubility, amount of protein and (PER) is a possible source of non-conventional human and animal
alimentation.
lII. INTRODUCCIN
En Mxico y en la Amrica tropical, crece y se desarrolla una leguminosa arbrea conocida
vulgarmente con los nombres de parota, guanacastle, conacaste, sonaja y otros ms, cuyo nombre cientfico es
Enterolobium cyclocarpum (Martnez, 1966., Rzedowski y McVaugh, 1966). En ese contexto, (Hunter 1989),
describi a sta especie como endmica en Mxico y en algunas otras regiones del Continente Americano. En
la Repblica Mexicana existen alrededor de 1,500 de las aproximadamente 18,000 especies de leguminosas
registradas en el mundo y E. cyclocarpum es una de las ms importantes como reserva de protena (Sotelo,
1981).
Pennington y Sarukhan (1968) y Rzedowski (1986), describieron que E. cyclocarpum se localiza por
la vertiente del Golfo de Mxico, desde el sur de Tamaulipas hasta la Pennsula de Yucatn y en la costa del
Pacfico, desde Sinaloa hasta Chiapas, esta especie es propia de los bosques tropicales semicaducifolios.
Presenta una gran versatilidad y es una de las especies ms importantes de Mxico y del mundo por sus
caractersticas extraordinarias tomando en cuenta su altura y dimetro (Prez, 1997; Vargas, 1999). Adems
de su enorme biomasa, as como por sus mltiples aplicaciones, particularmente en lo que respecta a sus
propiedades alimenticias, ecolgicas, agroindustriales, qumicas, medicinales, perfil de crecimiento y
desarrollo entre otras de sus abundantes caractersticas.
E. cyclocarpum representa una importante alternativa por sus posibilidades de explotacin
agroindustrial por el potencial de su madera, follaje y semillas.
Las semillas de E. cyclocarpum forman parte de las protenas no convencionales, de las que an se
desconocen algunas de sus caractersticas bioqumicas y nutricionales, por lo cual, se plantea la necesidad de
extraerlas y caracterizarlas para un mejor aprovechamiento alimenticio.
Es de sealar que los alimentos ricos en protenas como la carne, la leche, el huevo y el pescado,
resultan escasos en Mxico y en la mayora de los pases pobres, por lo tanto son difciles de adquirir,
situacin que conlleva a la bsqueda de alimentos proteicos alternativos.
IV. HIPTESIS
La caracterizacin bioqumica y nutricional de las principales protenas de reserva permiten conocer
mejor el valor como nutrimento de la almendra de las semillas maduras de Enterolobium cyclocarpum
V. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL:
Extraer y caracterizar las protenas de la almendra de las semillas maduras de Enterolobium
cyclocarpum.
OBJETIVOS PARTICULARES:
1.-Determinar la composicin elemental de la almendra de la semilla madura (ASM) de E. cyclocarpum
2. - Extraer y fraccionar las protenas de la almendra de las semillas maduras de E. cyclocarpum.
3. - Caracterizar electroforticamente las protenas extradas de la almendra de las semillas maduras de
c l o c a r p u m .
4. - Determinar la relacin de la eficiencia de la protena (REP) con el uso de la (ASM) de E. cyclocarpum
Vl. REVISIN DE LITERATURA
6.1 Aspectos histricos. Posiblemente el nombre vernculo "parota" procede de las regiones
calientes de Mxico cerca de Coahuayana, Michoacn (McVaugh, 1987).
Su nombre cientfico proviene del griego Enteron "intestino" y Lobium en referencia a la forma y
apariencia semicircular de la vaina (Allen y Allen., 1981).
Primeramente descrito en 1809 con el nombre cientfico de Mimosa ciclocarpa, hasta que los
britnicos Jacq y Griseb botnicamente la denominaron como Enterolobium cyclocarpum, a pesar de ello en
la Nueva Espaa en 1887 aun se le conoca como Mimosa parota (Standley, 1922).
Tambin recibe los nombres comunes de Guanacaste, Huanacastle o Cuanacaste
(Alteracin del nhuatl Cauhuitl: rbol. y Nacaztli oreja ). Pich en Yucatn, orejn pichi o
guatope en Tabasco (Martnez, 1959 ). En Guatemala se le conoce como conacaste, anjera
en Colombia, caro hembra en el Salvador y Venezuela, rbol de las orejas en Cuba
(Standley,1922). En Costa Rica es considerado como rbol Nacional y existe una
poblacin llamada Guanacastle en alusin a esta especie.
6.2 Descripcin de la planta. E. cyclocarpum pertenece a la familia de las leguminosaceas
(Mimosoideaceas) y al gnero Enterolobium, algunos autores mencionan hasta 5 especies de este gnero, sin
embargo otros consideran hasta 11 especies: Enterolobium cyclocarpum., E. timbouva, E. contortisiliquum E.
barnebianum, E. barinense, E. maximum, E. manjollo, E. gummiferum, E. oldemanii, E. shomburkii y E.
glaziovii. (Allies Barney, 1996).
E. cyclocarpum es una de las especies mas importantes, rboles notablemente grandes y pueden ser
tan jvenes como adquirir solamente 30 aos o tan viejos como alcanzar 150 aos o ms (Janzen y Hallwachs
,1996 ).
Las caractersticas fenolgicas ms importantes de esta planta: son rboles que logran medir hasta 30
m de altura, con un dimetro de 3 m vainas de 7-12 cm., puede contener de 10 a 12 semillas las hojas son
compuestas bipinnadas (Figura 1), son vegetales de larga vida y de fructificacin tarda, producen semilla
hasta los 8 y 10 aos (Martnez., 1959; Pennington y Sarukhan., 1968; Nelson y Schubert, 1976; Gonzlez,
1980; Huerta., 1983, McVaugh, 1987). Aunque se puede acelerar el proceso de crecimiento y desarrollo
mediante el empleo de fitohormonas y el cultivo de tejido vegetal.
6.2.1 Corteza. La externa lisa granulosa con abundantes lenticelas, y la interna con un exudado
pegajoso, la madera blanca con vasos grandes y parenquima vasicentrico.
6.2.2 Hojas. Con yemas de 1 a 2 mm agudos cubiertas por estipulas verde-obscuras y pubescentes.
6.2.3 Flores. En cabezuelas axilares de 1.5 a 2 cm De dimetro sobre pednculos escasamente
pubescentes.
6.2.4 Frutos. Vainas de 7 a 12 cm de dimetro, aplanadas y enroscadas, leosas moreno-obscuras,
brillantes de sabor dulce con numerosas semillas.
6.2.5 Semillas. Ovoides y aplanadas de 2.5 X 1.5 cm morenas y brillantes con una lnea plida con la
forma del contorno de 10-17 semillas por vaina (Penhigton y Sarukhan 1968., Mc. Vaugh., 1987).
6.3 Procesamiento de frutos y semillas. Los frutos recolectados deben trasladarse en sacos de yute
al sitio de procesamiento y estos se colocan en zarandas para posteriormente secarlos uno o dos das al sol por
periodos de 3 a 4 horas. Las vainas se golpean para permitir su apertura, despus se procede manualmente a
extraer las semillas (CATIE, 1997).
6.4
Almacenamiento. La semilla es conveniente guardarla en recipientes hermticamente sellados, y depositarlos
F
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.

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en cmaras fras a 5 grados centgrados y contenidos de humedad de 6-8%, de esta forma conserva su
viabilidad hasta 11 aos con porcent ajes de germinacin hasta del 80% (CATIE, 1997).
6.5 Manejo de la especie en vivero. Las semillas se colocan de 1 a 2 cm de profundidad con el
micropilo hacia abajo, en cajas germinadoras con arena lavada, para su posterior trasplante. El crecimiento
temprano de la plntula es rpido y vigoroso. Las plantas estn listas para llevarse al campo de 2 a 3 meses
despus de la siembra, con una altura de 20-25 cm (CATIE, 1997).
6.6 Tratamientos pregerminativos. Con escarificacin manual, la germinacin se presenta de 4-10
das despus y se obtienen porcentajes de germinacin mayores de 90% otros tratamientos como inmersin
en agua caliente, fra cido sulfrico tambin son efectivos (Vzquez-Yaez y Prez,1977.; Hernndez y
Garca 1980).
6.7 Germinacin. La semilla fresca presenta una viabilidad de 80% y con tratamiento qumico se
obtienen porcentajes de germinacin entre 85 y 90%. La germinacin es espiguea y se presenta a los 4 das
despus de la siembra y finaliza a los 10 das (Vzquez-Yaez, 1977; Hernndez y Garca 1980)
6.8 Distribucin geogrfica. En el Continente Americano el alcance geogrfico de esta especie
incluye Mxico, sudoeste a travs de Centroamrica hasta Trinidad, Venezuela, Guyana, Brasil y tambin se
localiza en otras partes del mundo, los rboles son ornamentales y cultivados (Kline, 1986).
6.9 Reproduccin biolgica. Los rboles de E. cyclocarpum se reproducen por medio de la semilla
y con la hidratacin alcanzan hasta 100% de germinacin (Vzquez Yaez y Prez, 1977; Hernndez y
Garca 1980). Siguiendo con esta lnea de investigacin (Saenz y Fournier, 1982) notaron que tambin lo
favorece la presencia del hongo Ravenalia lagerthemiana. En un estudio de cultivo de tejidos de la semilla se
demostr morfogenticamente, una alta capacidad embriognica (Orea, 1987). Por otra parte (Hughes y
Styles, 1984) indicaron que sta especie tambin puede crecer a travs de estacas (Janzen., 1981; 1982),
menciona que las semillas se propagan por medio del excremento de los rumiantes y equinos (germinacin
endozica). En contrapartida en otros trabajos se sugiere que el escarabajo Stator generalis sobrevive a partir
de las semillas de E. cyclocarpum y puede afectar su dispersin (Johnson, 1982.; Gutteridge y Akkasaeeng,
1985; Siemens y Johnson, 1996). Por otro lado (Rocha y Lobo, 1996) estudiaron en cinco poblaciones de
Guanacastle (Costa Rica), la variacin y diferenciacin gentica que presentan los ecotipos de E.
cyclocarpum.
Las semillas de E. cyclocarpum muestran la propiedad de abortar pues al examinar sus frutos y
dividirlos en secciones basal, central y distal, se observa en forma general que la seccin distal present
mayor proporcin de aborto, estos patrones pudieran deberse a la competencia entre embriones (Villalobos
y Bianchi, 2000)
6.10 Gentica. Fragmentos de poblaciones de E. cyclocarpum en el sureste de Costa Rica se
analizaron genticamente para 13 locus polimrficos para determinar el nmero de donadores de polen por
rbol y tarifa del flujo de genes dentro de esos fragmentos y se comprob que los frutos son polinizados por el
mismo tipo de polen (Hamrick y Preston, 1998). El mismo autor junto con su grupo de investigadores
estimaron el polen, el flujo y el efectivo tamao de poblaciones fragmentadas de E. cyclocarpum en Costa
Rica (Apsit et al, 1999). Los nombres de la familia de los genes que codifican la protena del fitocromo de
muchas plantas, esta estandarizndose universalmente. Esos nombres fueron reconocidos por la CPGN
recopilndose en una base de datos. Las posiciones 37-615 o codones 13-205 solamente se analizaron, esta
informacin se agrup y represent el gen de la familia del fitocromo de las plantas de la familia de las
leguminosas y el correspondiente a E. cyclocarpum
TACCCAGCCACTGACATTCCACAGGCTGCACGTTTTCTATTTATGAAGAATAAGGTGCGTAATGA
TA (CPGN, 2000).
6.11 Crecimiento y Desarrollo. Segn (NAS, 1979; Martnez y Urea, 1993; Beltrn y Rodrguez,
1997), consignaron que esta leguminosa crece rpidamente y su dimetro se incrementa hasta 10 cm por ao,
se pueden obtener 225 Kg o hasta 725 Kg de vainas anualmente y los rboles en conjunto se emplean como
cerco vivo para la proteccin de bienes inmuebles, cultivos y animales, con un aceptable porcentaje de
sobrevivencia y nmero de brotes. En lo que se refiere a la cantidad de semilla (Francis, 1988) calcula que un
rbol adulto produce en promedio 2000 vainas, cada una 10-16 semillas (900-1,200 / Kg ). Tambin por
medio de la tcnica de propagacin vegetativa y con el auxilio de hormonas (auxinas) se incrementan los
propgulos (Thirunavoukkarasu et al, 1999).
6.12 Agroforestera. En diversos pases se demostr que E.cyclocarpum es una especie potencial
para utilizarla en los sistemas agroforestales, particularmente en el Suroeste de Nigeria usndose en
Agroforestera en estudios comparativos con Leucaena leucocephala y Gliricidia sepium en lo que respecta a
la formacin de tallos, raz y nodulaciones, mostrndose un temprano crecimiento y desarrollo (Ezenwa,
1999). En Costa Rica en sistemas silvopastoriles que se conciben como una combinacin natural o una
asociacin deliberada de uno o de varios componentes leosos (arbustivos y/o arbreos) dentro de una pastura
de especies de gramneas y de leguminosas herbceas nativas o cultivadas y su utilizacin en rumiantes y
herbvoros en pastoreo E. cyclocarpum constituye una especie que rene las condiciones para concebirla
como propia en silvopasturas para la alimentacin animal (Botero y Russo, 1999).
6.13 Agroindustrial. En lo que se refiere a sus caractersticas agroindustriales, la madera se emplea
en la construccin de vigas y tablas para canoas, carretas, trabajos de carpintera y ebanistera, as como la
fabricacin industrial de duelas y lambrines as lo constan (Standley, 1922; Gonzlez, 1984). Adems las
vainas frescas poseen un lquido viscoso, que se puede emplear como aglutinante, para aglomerados fabriles
de carbn. (Espejel y Martnez, 1979). Tambin se menciona que de la madera se obtienen chapas, cajas,
muebles finos, gabinetes de cocina, guardarropas, salas de departamento, paneles, chapas decorativas, interior
de construcciones, cortes de superficie, moldeadoras, maquinaria de molino y pulpa para papel, aunque se
indica que el aserrn de la madera es picante y causa irritacin de la mucosa nasal y alergias en algunos
individuos (Kline, 1986; Niembro, 1986). Por otra parte, en un trabajo en el que se emple ciclohexano y
etanol crudos, se extrajeron de la corteza de E. cyclocarpum y Dalbergia granadillo fracciones que se
aislaron por medio de columnas cromatograficas con gel de slice y revelaron una alta actividad antifungal
(Rutiaga et al, 1998)
6.14 Caractersticas mecnicas de la madera. Algunas de las caractersticas ms importantes son:
densidad de la madera, 400 Kg. /m cbico, resistencia al aplastamiento 30 Mega-Pascal (Ricker y Daly,
1998.,Usda Forest Service, 1988). En una investigacin que se llev a cabo en la Universidad de Florida,
se determinaron las especies arbreas idneas como especmenes que conservan energa y susceptibles de
plantarse en esa regin, E. cyclocarpum mostr las siguientes caractersticas: persistencia de las hojas
(deciduas) forma del rbol (extenso) velocidad de crecimiento (firme), densidad de sombra (mediana) tamao
(grande) tolerancia a la sequa (moderada) tolerancia a la sal (baja)los comentarios generales fueron, la
madera es quebradiza y los desperdicios pueden causar problemas (Meerow y Black, 1993).
6.15 Perfil ambiental. E. Cyclocarpum se seala como una especie relativamente segura, en los
diferentes pases en donde se encuentra dentro de los hbitats naturales, de tal manera que no se consigna
como una especie en peligro de extincin (World Conservation Monitoring Center, 1992). Sin embargo se
adopt una comisin y se integr con diversos pases, comprometindose a respetar los acuerdos y
prohibindose por ley no explotar ciertas especies arbreas con propsitos para la construccin y
facilitndose su crecimiento y desarrollo, en esa lista esta E. cyclocarpum como una especie prohibida por ley
y no se recomienda para sobre explotarla (Dobson, 2000)
6.16 Propiedades medicinales y qumicas. La goma que exuda el tronco tiene aplicaciones
teraputicas para atacar problemas de bronquitis, resfriados y hemorroides (Gonzlez, 1942.; Mendieta y del
Amor., 1984). En cuanto a las propiedades qumicas de esta leguminosa (Gmelin et al, 1959) aislaron de las
semillas de E. cyclocarpum, por medio de hidrlisis cida, un nuevo aminocido, el cido -2, 3-
diaminopropinico, de la pulpa y cscara se aislaron saponinas triterpnicas, con propiedades ictiotxicas y
bactericidas (Domnguez y Franco, 1979). En otro trabajo (De Pinto et al., 1986., 1994) encontraron en el
exudado de la goma del tronco de E. cyclocarpum, algunos carbohidratos que fueron identificados despus de
la hidrlisis como (enlace1-3)-galactosa, -L arabinosa, rhamnosa y -D-Acido glucornico. En Costa Rica se
destina la corteza del rbol de E. cyclocarpum en la elaboracin de jarabe para combatir resfriados (Brook
Caughlin, 2000).
6.17 Silvicultura. En otro orden de ideas (Habte y Musoko, 1994), observaron respuestas favorables
en la asociacin de la endomicorriza vesculo-arbuscular E. cyclocarpum, enriqueciendo los suelos pobres en
fsforo. Esta forma de simbiosis permite a muchas plantas que crecen en suelos infrtiles absorber fsforo y
otros nutrimentos poco mviles en forma ms eficiente que en la condicin no micorrizada, como
consecuencia las plantas pueden crecer mejor y producir ms biomasa. Tambin se indica el uso de
inoculantes puros de Rhizobium para la fijacin de nitrgeno en rboles, creciendo ms vigorosamente estos
sin necesidad de recurrir a fertilizaciones nitrogenadas y se considera una fijacin biolgica de nitrgeno ya
que los inoculantes contienen billones de clulas de Rhizobia seleccionadas y provocan nodulaciones de las
races y entre las especies arbreas E. cyclocarpum responde satisfactoriamente (Agroforester Tropical Seeds
University of Hawaii, 2000)
6.18 Edafologa. E. cyclocarpum puede tolerar un amplio rango de tipos de suelos, desde alcalinos
(pH abajo de 5) los mejores crecimientos se presentan en suelos profundos de mediana textura arenosos y
arcillosos, determinndose un aceptable drenaje, aunque los rboles podran prosperar en sitios anegados
(Echenique-Manrique y Plumtre 1990).
6.19 Plagas y enfermedades. Enterolobium no presenta serios problemas en lo que se refiere a las
enfermedades y problemas de insectos, aunque es atacado por el hongo Fusarium y con agrupacin de
insectos que causan perjuicios provocados por la cada de partes del rbol en estado de maduracin y ramas
quebradas por la lluvia, ambos factores reducen la permanencia de E.cyclocarpum en las plantaciones urbanas
y en otros sitios, aunque las semillas no son atacadas por predadores, las vainas verdes ocasionalmente son
presas de cotorras y el fruto adicionalmente interrumpido por la mordedura de la boca del Asphondylia
enterolobii (Echenique-Manrique y Plumtre 1990).
Asimismo, es susceptible al ataque del psilido ( Heteropsylla cubana ), situacin sealada en el
estado de Colima, Mxico; comunicacin personal (Prez-Guerrero 1999).
6.20 Caractersticas nutricionales de E. cyclocarpum. Distintos autores mencionan acerca de la
utilizacin de E. cyclocarpum como potencial alimenticio por sus componentes nutritivos para la formulacin
de dietas para humanos y animales. Una de las caractersticas indeseables de E. cyclocarpum, consiste en la
presencia de factores antinutricionales, como los inhibidores de tripsina, glucsidos cianognicos, y
saponinas, que se pueden eliminar, ya que son termolbiles (Sotelo et al., 1978; 1980; Aguilar y Zolla, 1982).
Los glicsidos son complejos, constituidos por un factor qumico no azucarado y un azcar. Cuando
el azcar que contiene el compuesto es glucosa, se le conoce como glucsido. , en el reino vegetal existe una
serie de glicsidos que por hidrlisis producen cido cianhdrico, por lo que reciben el nombre comn de
glicsidos cianogenticos o cianofricos y son txicos para el hombre y los animales.
La presencia en las almendras de las semillas maduras (ASM) de E. cyclocarpum de
glucsidos cianognicos no constituye un peligro toxicolgico ya que la concentracin de HCN fue de 76 mg
sobre 100 g de muestra de semillas y representan una cantidad mnima de apenas 39 p.p.m. (Serratos,
1989).La absorbancia y transmitancia que se obtuvo de la muestra que se estudi de las (ASM) de
E. cyclocarpum permitieron calcular la concentracin de cido cianhdrico (HCN) (Grfica 1 ).
Grfica 1. Cantidad de cido cianhdrico (HCN) sobre 100 gr de muestra
de semilla de E. cyclocarpum
La concentracin de cido cianhdrico (HCN) que se detecto en las almendras de semilla madura
de E. cyclocarpum fue de 76 mg. presente en 100 gr. de muestra
(Giral y Echegoyen, 1949; Massiu y Cravioto, 1950) descubrieron la presencia de los aminocidos
limitantes treonina y lisina en cantidades apreciables en las semillas en comparacin con otras leguminosas
como haba verde (Fava sativa), alberjn (Vicia sativa) garbanza (Cicer arietinum) y lenteja (Lens esculenta).
Tambin las semillas de E. cyclocarpum contienen altos porcentajes de protena hasta ms del 34%.Por otra
parte mediante cromatografa lquida se analizaron los glcidos y los picos del cromatograma en la (Grfica
2), se aprecia la mayor concentracin de glucosa con 31.25%, despus arabinosa 3.95% y galactosa 3.7%
(Serratos, 1989).
Grfica 2. Cromatograma de los azcares presentes en la semilla
completa de E. cyclocarpum
Se muestran los picos correspondientes a la presencia de distintas cantidades de los
monosacaridos galactosa, arabinosa y glucosa, la extensin del rea bajo la curva indica la
cantidad del glsido presente que se determin mediante cromatografa lquida
Las semillas contienen alta proporcin de los cidos grasos linoleico, oleico, palmtico y cido
linolnico en relacin con la soya ( Ezeagu ,1998).
Al comparar la digestibilidad in vitro de diferentes alimentos (Grfica 3)entre los que se
encontraron el material crudo de soya (Glicine maxima),almendra de parota (Enterolobium cyclocarpum),el
trigo (Triticum), y el sorgo (Sorgum vulgare), el mayor coeficiente de digestibilidad 71.04% fue para la soya,
seguida de la parota con 59.63%, el trigo con 30.07% y por ltimo el sorgo con 18.24% (Serratos, 1989).
Grfica 3. Digestibilidad in vitro comparativo entre diferentes harinas
(Materia seca)
Coeficientes de digestabilidad "in" que la harina de almendra madura de degestibilidad
En la (Grfica 4), se comparan diferentes alimentos en donde se hace evidente que la semilla de E.
cyclocarpum es proteaginosa, y constituye una importante alternativa alimenticia para la poblacin, ya que
contiene porcentajes importantes de protena cruda en comparacin con otros alimentos de origen animal y
vegetal (Serratos, 1989).
Grfica 4. Comparacin de la protena cruda contenida en ocho alimentos
de origen animal y vegetal.
Los resultados de Serratos (1989), sobre la composicin aminoacdica de las semillas de E.
cyclocarpum como un alimento no convencional es fundamental por su aporte en particular de lisina, adems
de otros aminocidos limitantes como son leucina, valina y treonina con relacin a los alimentos de consumo
tradicional como el maz, trigo, soya, huevo y otros (Grfica 5)
En la comparacion de la protena cruda de ocho alimentos de origen animal y vegetal .Se observa en la
grafica de barras que las amendras maduras de las semillas de un elevado porcentaje de protenas.
Grfica 5. Comparacin de los aminocidos esenciales presentes en siete
productos alimenticios.
(Estrada, 1976; Gmez, 1985), indicaron que las semillas de E. cyclocarpum, se consumen
tradicionalmente en el rgimen alimenticio de los huastecos y los indios de Chiapas, quienes ocasionalmente
sustituyen el maz en los aos de malas cosechas, tambin son un alimento tpico en los estados de Morelos,
Guerrero, Michoacn, Colima y Jalisco, donde se consumen tostadas y/o molidas o mezcladas con diferentes
carnes.
En un anlisis comparativo de la harina de trigo y E. cyclocarpum para determinar sus caractersticas
reolgicas para la panificacin, se determin que las semillas de E. cyclocarpum no es una harina conveniente
para la industria de la panadera, sin embargo es posible incluirla en cantidades de 5,10, hasta 15%
(Serratos, 1989), situacin ejemplificada en la (Grfica 6).
Grfica 6. Alveogramas de la harina de semillas completas de E.
cyclocarpum y de la harina de trigo.
Harina de trigo
6.21 Alimentacin animal
(Sumerfield y Bunting, 1980), afirman que la produccin intensiva de protena animal en los pases
subdesarrollados es baja, debido principalmente al alto costo de convertir la protena vegetal en animal, lo que
ocasiona una desnutricin, que afecta al 60% de la poblacin, por tal motivo, diversos estudios se han
encaminado a obtener alimentos de origen vegetal, ricos en protena y de bajo costo, entre algunos de los
vegetales que ms prometen por su alto contenido protenico se encuentran las especies de la familia
leguminosae.
6.21.1 Rumiantes
Para aprovechar los aumentos en la productividad que resulta por la eliminacin de protozoarios del
rmen del ganado, es conveniente proporcionarles dietas ricas en azcares tratadas con lcalis, para lo cual se
requiere un mtodo sencillo y eficaz, as la necesidad del empleo de follajes de tres rboles forrajeros entre
los cuales se consider a E.cyclocarpum que contienen sustancias fenlicas en sus hojas, como instrumento
para reducir la poblacin ruminal de protozoarios, no demostraron ninguna tendencia clara acerca de este
posible efecto (Rosales et al 1989). En otro trabajo en el que se midi el efecto de la suplementacin de las
Tenacidad (P), Extensibilidad (MM), Expansividad (G), Elasticidad P/G y
Superficie (S).
En el alveograma de la harina de trigo se puede constatar las caractersticas ptimas en cuanto a
su tenacidad (P) extensibilidad (MM) expansividad (G) elasticidad P/G y superficie(S) en el
alveograma de la harina de E. cyclocarpum los parmetros son menores respecto de la harina
patrn (trigo).
Harina de E. cyclocarpum
hojas de E. cyclocarpum en la funcin ruminal de borregos, se encontr, que la poblacin de hongos se
increment con bajo y alto nivel de hoja, los protozoarios del rumen se elevaron por bajos niveles de inclusin
de la dieta, pero decrecen ostensiblemente por altas cantidades de suplementacin, la presencia de saponinas
en las hojas podra contribuir a la reduccin del nmero de protozoarios en el fluido ruminal, particularmente
el protozoario Holotricho (Navas-Camacho et al., 1993). En un estudio en el que se midi la degradabilidad
ruminal y postruminal del nitrgeno por medio de la tcnica de digestibilidad in vitro con bolsas mviles de
nylon, en especies que pueden aprovecharse con fines de ramoneo, destac E. cyclocarpum ya que tiene alta
proporcin de protena sobrepasante en rumen y una gran cantidad de esta protena digerida dentro del
intestino, por lo tanto representa un potencial como suplemento proteico (Kaitho et al., 1998).
(Ortiz et al 1989), analiz el valor nutritivo del fruto del rbol de E. cyclocarpum en cuanto a su
composicin qumica y digestibilidad, en ganado bovino, en animales jvenes, el promedio de la
digestibilidad in vitro fue de 69.4%, para la dieta con fruto de E. cyclocarpum y de 74.04% para la dieta
testigo, diferencia que no se consider estadsticamente significativa. Adems, se hizo un estudio de
alimentacin ad libitum, por un periodo de 45 das, en el cual se encontr que los animales alimentados con la
dieta de fruto de E. cyclocarpum ganaron 1.10 kg./da y los del grupo testigo 1.67 kg./da, diferencia que no
fue estadsticamente significativa. Asimismo la vaina madura es degustable para el ganado por su alto
contenido en azcares (6%), hierro, calcio, fsforo y cido ascrbico ( Espejel y Martnez, 1979).
6.21.2 Diversas especies
Hernndez (1981), refiere acerca del aprovechamiento alimenticio de E. cyclocarpum, con las
especies de ganado bovino, caprino y equino, por medio del ramoneo, corte de ramas y harina del fruto,
calcul como partes aprovechables un 20% de ramillas y 100% de vaina.
(Gutteridge y Shelton 1992; Martnez y Urea 1993), determinaron la digestibilidad del follaje para
pequeos rumiantes, in vitro e in situ, con los porcentajes del 68.6 y 87.6, correspondientemente estos rboles
son decorativos, por sus enormes copas y elegante follaje, se utiliza como sombra y cerco vivo en las zonas
agrcolas y ganaderas. En otro estudio, el objetivo fue medir el efecto sobre conversin alimenticia, ganancia
de peso y porcentaje de rendimiento en canal de toretes en finalizacin, con niveles de 10, 20 y 30% de fruto
de parota (Enterolobium cyclocarpum) cruda y molida. Se emplearon 12 animales con edad y peso promedios
de 16 meses y 320kg alimentados en corraletas individuales; se emplearon dietas isoproteicas e isocalricas
con base de rastrojo de maz, sales minerales y los tres tratamientos con parota. Los promedios de las
ganancias en los tres niveles 10, 20 y 30% fueron: 1.30kg, 1.18kg y 1.38kg respectivamente, en cuanto a
conversin alimenticia los valores fueron 9.21kg, 9.10kg y 7.88kg sin diferencias estadsticas significativas
(p<0.05). Del rendimiento en canal se obtuvieron los siguientes valores: 56.81%, 53.88% y 55.16% (Velasco
et al. 1996).
(Crdenas y Llamas, 1993), en ovejas con una alimentacin ad libitum, con vainas de E.
cyclocarpum, rastrojo de maz, sorgo, pasta de soya, melaza, urea y minerales, concluyeron que la vaina de E.
cyclocarpum, con niveles hasta del 48%, permiten consumos altos de MS.
(Moscoso et al., 1995), analizaron el efecto del fruto de E. cyclocarpum, en los niveles de 0, 12, 24 y
36%, respecto de la dieta control consistente en 30% de pasto (Digitaria eriantha) y una mezcla de grano de
sorgo y semillas de algodn, en dietas para corderos, infirieron que el fruto de E. cyclocarpum aumenta la
ganancia de peso.
6.21.4 Pollos de engorda
Se realiz una prueba en pollos de engorda con semillas completas de parota (Enterolobium
cyclocarpum) en porcentajes de sustitucin de 10 y 20% para los grupos experimentales, y los animales
control recibieron alimento balanceado convencional con base en sorgo y soya las dietas fueron isoproteicas e
isocalricas (Cuadro 1), la composicin qumica de la semilla completa y de la almendra se contempla en el
(Cuadro 2), se consideraron 75 animales con 3 tratamientos y 5 repeticiones y los resultados que se
obtuvieron en cuanto a las variables de consumo acumulado y ganancia acumulada se distinguen en el
(Cuadro 3) y la (Grfica 7) respectivamente (Serratos, 1989).
6.21.3 Ovinos
Cuadro 1. Etapas de alimentacion en pollo.
Se muestra la composicin de las dietas control y experimental en la que se incluy harina de semilla
completa de E. cyclocarpum en los porcentajes de 10 y 20%, en sustitucin de la soya; para las dos
etapas productivas del pollo de engorda. Asimismo, se presenta el anlisis calculado, de las dietas
que fueron isocaloricas e isoprotecas.
Cuadro 2. Anlisis qumico proximal de la semilla completa y de la
almendra de Enterolobium cyclocarpum.
A. Anlisis qumico proximal de la semilla completa de
E. cyclocarpum
.
Puede apreciarse la diferente composicin nutricional de las semillas completas y de las
almendras sobre todo en el contenido de fibra y protenas.
B. Composicin qumica de la almendra
Cuadro 3. Consumo acumulado individual (Kg) de las dietas
control y experimental.
Cantidad semanal de alimento consumido.
Se distingue que el mayor consumo alimenticio correspondi al grupo de
animales control seguido de los animales en los que se sustituy la protena
representada por la soya en un 10%, se encontr una relacin directamente
proporcional entre el alimento consumido y el peso final. Con el mximo
porcentaje de inclusin del 20% se produjo el menor consumo.
Grfica 7. Ganancia de peso acumulado de las aves (Kg)
La ganancia de peso acumulada en pollos de engorda fue significativamente
mayor para el grupo testigo que alcanz 1.708 Kg, seguido del grupo con el nivel
del 10% con 1.538 Kg que difiri estadsticamente de este y del grupo con el
menor peso correspondi al nivel del 20%, estos animales tuvieron 1.304 Kg al
final de la prueba. Mediante la prueba Duncan los tres grupos fueron diferentes
entre s a una P < .01.
6.21.5 Ratas
En ratas se midi el efecto de diferentes concentraciones de harina de almendra de E. cyclocarpum
sobre el crecimiento y la utilizacin del alimento y de la protena en contraste con harinas de frijol de soya y
de semillas de algodn; los resultados indicaron que la harina de frijol de soya y la harina de semilla de
algodn que aportaban un 10% de protena a la dieta, produjeron incrementos ponderados de 94 y 106 g
cantidad aproximadamente al doble del aumento que dio 10% de protena de la almendra de E. cyclocarpum,
esto es 53 g en 28 das. El ndice de eficiencia proteica aumento de 1.30 a 1.70 a medida que el contenido de
almendra de E. cyclocarpum de la dieta ascenda y luego disminuy hasta 1.36 cuando la dieta contena 85%
de la almendra (Bressani et al., 1966).
6.22 Interaccin de E. cyclocarpum con otras especies animales. Desde el punto de vista ecolgico
E. cyclocarpum figura como una planta de crecimiento relativamente rpido y es abundante en reas
perturbadas. Nativa desde Mxico hasta Brasil, su historia natural corresponde a un rbol que posee flores
redondas blancas y se reproducen en marzo y abril al mismo tiempo que las hojas de 4 a 8 semanas antes de la
poca lluviosa (Janzen, 1982; Hunter, 1989). Estas flores son atacadas por una mosca productora de agallas
(Aspendylia enterolobil). Dentro de la agalla se forma un hongo del cual la larva de la mosca se alimenta. Sus
frutos se dan al mismo tiempo que la produccin de las hojas, una vez que los frutos estn totalmente
desarrollados de la floracin del ao anterior, empiezan a madurar y tornarse pardos caen en marzo-abril y
son degustadas por el ganado, los caballos, las dantas, sanas, y tambin por las loras amazonas quienes sacan
las semillas verdes, su madera es muy valiosa ya que es resistente a los hongos, el corazn de la madera es
pardo rojiza (Janzen 1982; Hunter, 1989). Un rasgo caracterstico es la presencia del ratn (Liomy salvini).
Se encuentra desde la mitad del Pacfico de Oaxaca, Mxico hasta los bosques secos de Costa Rica Central y
es una especialista en buscar, guardar y comer semillas de plantas leosas del bosque como el rbol de E.
cyclocarpum por lo que se le considera un depredador de las semillas (Fleming, 1983; Janzen, 1982; 1986).
Las semillas maduras de E. cyclocarpum son duras al extractarlas cuando caen de los frutos maduros
y la dispersin de las semillas ocurre cuando se acumula en el abono de las diferentes especies recurrentes en
la megafauna y muchas de estas semillas despus son cosechadas por ratones (Lyomy salvini) (Janzen, 1982;
1986).
Las semillas estn extremadamente duras y para partirlas requieren una sierra elctrica de velocidad,
contienen igualmente dureza en su tegumento pero son rpidamente ablandadas en el proceso de germinacin
y el roedor (Lyomi salvini) puede roer a travs de la semilla seca, grandes mamferos, tales como caballos,
vacas y tapir generalmente no rompen las semillas sin germinar, pero el Pecaries collorin muele casi todas las
semillas (Janzen y Hallwachs, 1996). Se demostr que el tapir (Tapirus bairdii) puede dispersar semillas y
es capaz de depredar hasta el 78% de las semillas de E. cyclocarpum (Olmos, 1997). Entre las muchas
especies de rboles que utiliza el chango para su alimentacin, tambin E. cyclocarpum es una fuente
importante de nutrientes y energa (Rylan, 1996).
6.23 Otras especies de enterolobium importantes.
6.23.1 Enterolobium saman
Aparte de E. cyclocarpum actualmente se usan otras especies de Enterolobium con
propsitos alimentarios como ocurre con la especie Enterolobium saman, de la cual se
aprovechan las semillas como suplemento proteico en la alimentacin humana y el fruto en
la alimentacin de cabras a niveles de 20 y 30% (Thomas et al., 1976; Raj y Kutty, 1986).
6.23.2 Enterolobium contortisiliquum
En Brasil se gener una importante lnea de investigacin desde hace mucho tiempo, y se relaciona
con la especie Enterolobium contortisiliquum dichos trabajos fueron desarrollados por diferentes
investigadores bajo el siguiente orden cronolgico:
En un estudio fitoqumico que se realiz en el laboratorio; se descubri la presencia de saponinas
triterpenicas en las semillas de E. Contortisiliquum (Kent y Amengual, 1949).
Posteriormente se aislaron del fruto de E. contortisiliquum los componentes qumicos lupilo y lupeol,
sapogeninas, digitonina y taninos (Marx y Bernard 1966-1967).
Con base en una metodologa de instrumentacin analtica por espectroscopia de masas y resonancia
magntica, se encontraron en las semillas de esta leguminosa el glucsido 3-0-D glucopiranosil 21 beta-E
cinamoiloxiolean -12- en 28-oic cido (Delgado y Silva, 1987).
Con grandes posibilidades de aplicacin en mejoramiento de los suelos; se estudi la nitrificacin de
la bacteria Bradyrhizobium spp, en asociacin con la leguminosa E. contortisiliquum y el efecto en el
mejoramiento de los suelos cidos al percibir incrementos notables de ndulos radiculares y la consiguiente
fijacin de nitrgeno (Ribeiro et al., 1987).
Asimismo en un estudio qumico-nutricional se purificaron y caracterizaron a partir de las semillas
de esta leguminosa dos tipos de inhibidores nutricionales la serino-proteinasa y mercapto-proteinasa (Oliva et
al 1987.,1988).
Por otra parte se logr el aislamiento, purificacin y caracterizaron a partir de las semillas de E.
contortisiliquum de una protena a la que denominaron enterolobina responsable de una cierta actividad
hemoltica y precisaron que tiene un peso molecular de 55,000 daltons (Valle de Souza y Morthy 1989).
En concordancia con sta lnea de investigacin se estudi la actividad inflamatoria y hemoltica de
la enterolobina en ratas; en dichos trabajos concluyeron que esta protena es un potente inductor en la
exudacin de la membrana pleural (pleuritis) y a nivel tisular de la infiltracin celular en la formacin de
edema en la pata de los roedores (Castro - Fara - Neto et al., 1991).
En un estudio sobre anlisis enzimolgico; se purificaron y parcialmente caracterizaron la enzima
Arilamidasa obtenindola de las semillas de E. contortisiliquum esta enzima posee la
caracterstica de actuar sobre aminocidos y enlaces peptdicos con un pH optimo de 6.5 (Costa et al., 1991).
No solamente se confirm el efecto inhibidor de la enterelobina en el plasma humano, sino que esta
tambin acta conjuntamente con otras protenas como la serino-proteinasa, calicrena y tripsina bovina factor
XII (Sampaio et al., 1992).
Adems se ha demostrado que la enterolobina es txica respecto de la larva del del coleptero
Calloso bruchus maculatus y el lepidptero Spodoptera littoralis; y por medio de un secuenciador de
aminocidos estudiaron el ordenamiento qumico de los aminocidos y establecieron la probable similitud que
tienen con las bacterias de la especie de Aeromona como A. hydrophila y A. sobria (Souza et al., 1993.,
1994).
En una investigacin acerca de la estructura proteica de las semillas de E.contortisiliquum pudieron
separarse un conjunto de endopeptidasas benzoil - arginina, P-nitroanilida, acetil - fenilalanina - arginina - P.
nitroanilida. (Silva et al., 1994)
6.24 Estudios de protenas de otras leguminosas fundamentales en la alimentacin.
Las semillas de leguminosas como frijoles, lentejas, soya, chcharo, haba, cacahuate
son constituyentes valiosos de la dieta humana y animal en muchas regiones del planeta y
pertenecen al grupo de las leguminosas comestibles o legumbres. Son importantes puesto
que generalmente pueden ser comidas slo despus de haber sufrido preparaciones
mnimas como el remojo o el hervido, pueden cultivarse en diferentes climas y tipos de
suelo, por lo cual, la importancia universal de las semillas de las leguminosas resulta obvia
como fuente de protena.
6.24.1 Cacahuate.
(Si-Yin Chung et al., 1994) hallaron que las protenas del cacahuate (Arachis
hypogae) son estructuralmente diferentes entre cacahuates maduros e inmaduros al seguir
un mapeo peptdico por medio de la enzima arginil - endopeptidasa. En otra investigacin
(Monteiro y Prakash 1994), identificaron cual es el orden efectivo de las fracciones de
protena del cacahuate como araquina, conaraquina I y conaraquina II, estas representan el
75% del total de las protenas de reserva del cacahuate.
6.24.2 Soya.
(Vaintraub y Haram, 1995), comprobaron la accin de la papana, subtilisina y pepsina, sobre los
inhibidores de la tripsina llamados tambin de Kunitz, que forman parte de la fraccin 2S de la protena de la
soya (Glicine max) y es uno de los factores ms importantes en la baja nutricional del frijol de soya.
Asimismo (Petruccelli y Aon, 1994) estudiaron las fracciones 7S y 11S de la protena de la soya y
el efecto que tienen sobre las propiedades funcionales de emulsificacin.
En esa misma lnea de estudio(Siepaio y Meunier, 1995). Examinaron el efecto de las protenas de la
soya beta conglicina y glicina as como de la enzima transglutaminasa, que es catalizadora de las protenas
solubles e insolubles tales resultados tiles en la texturizacin, solubilidad y propiedades emulsificantes de la
soya.
6.24.3 Frijol.
Por otra parte (Idouraine et al., 1992), evaluaron el frijol sirio (Phaseolus acutifolius), que es una
leguminosa indgena propia de las zonas ridas y semiridas del Suroeste de Mxico y los Estados Unidos,
usaron ratones para medir la actividad inhibidora de la tripsina y la hemaglutinacin, as como la presencia
del cido ftico.
(Carbonaro et al., 1993), solubilizaron las protenas del frijol (Phaseolus vulgaris) tanto en crudo
como cocidas para medir el efecto de los cambios qumicos de sus aminocidos como la lisina (acetilacin y
succinilacin) y arginina (Fenilgliosal).
En otro estudio (Chi - Wah y Dixon, 1994), determinaron las fracciones de las protenas de reserva
del frijol (Vigna unguiculata) constituidas por albminas, globulinas, glutelinas y prolaminas.
Por otro parte (Alli Inteaz et al., 1993), identificaron y caracterizaron una protena cristalina
separada de semillas secas del frijol blanco arrionado (Phaseolus vulgaris) llamada faseolina con un peso
molecular de 60 KDA.
6.24.4 Haba.
En otras leguminosas (Kause et al., 1996) estudiaron las propiedades fitoqumicas relacionadas con
la fraccin 11S globulina (legumina) el principal almacn de protenas del haba (Vicia faba).
6.24.5 Chcharo.
En lo que respecta al chcharo (Larr Colette et al 1993), midieron el efecto de la enzima
tranglutaminasa como un catalizador de la polimerizacin de los polipptidos constitutivos de la legumina del
chcharo(Pisum sativum). As mismo(Embarek Guerdan et al., 1993), estos autores a partir de la semilla del
chcharo (Pisum sativum hortense) que es la semilla de leguminosa ms usada para la alimentacin de cerdos
y otros animales, en Europa, aislaron las enzimas dioxigenasa y liasa, que actan sobre los cidos grasos.
6.25 Importancia de las protenas.
Las protenas son macromolculas complejas que pueden constituir el 50% o ms del peso seco de las clulas
vivas y tienen un papel fundamental en su estructura y funcin; su masa molar varia de unos 5,000 a varios
millones de daltons; estos biopolmeros estn constituidos de carbono, hidrgeno, oxgeno, nitrgeno y
azufre; algunas contienen hierro, cobre, fsforo o zinc (Cheftel at al, 1989). La palabra protena deriva del
griego y significa "ser primero" lo que indica la gran importancia de estos compuestos para la vida; para la
sntesis de sus propias protenas, de cidos nucleicos y de otras sustancias nitrogenadas el hombre solo puede
utilizar el nitrgeno orgnico proveniente de las protenas animales y vegetales, a diferencia de los animales
requieren de un consumo directo de protenas, los vegetales pueden sintetizarlas a partir de molculas
sencillas, como nitrgeno inorgnico, agua y CO
2
(Badui, 1990). En el cuerpo humano existen alrededor de
5'000,000 de protenas diferentes, constituyen las fibras musculares, el colgeno, el pelo, las uas, las
enzimas, los anticuerpos y diversas hormonas, hay cadenas polipeptdicas asociadas con otras molculas en la
hemoglobina, los citocromos, el material gentico, la membrana celular entre otras muchas ms (Delfin,
1998).
Las protenas pueden clasificarse en dos grupos: las hemoprotenas que contienen nicamente
aminocidos y las heteroprotenas que estn formadas por aminocidos y diversos compuestos no proteicos,
generalmente calificados como grupo prosttico y segn su naturaleza qumica se pueden distinguir: las
nucleoprotenas (ribosomas, virus), las lipoprotenas (plasmtica), las glicoprotenas (globulina), las
fosfoprotenas (casena), las hemoprotenas (hemoglobina, citocromo C, catalasa, mioglobina) y las
metaloprotenas (alcohol deshidrogenasa, anhidrasa carbonica) (Cheftel et al., 1989)
Las protenas poseen una extraordinaria diversidad de funciones y pueden clasificarse
arbitrariamente en tres categoras principales: protenas de estructura, protenas con actividad biolgica y
protenas alimentarias. La estructura primaria corresponde a la secuencia de los aminocidos en una protena,
la estructura secundaria y terciaria se refiere a la organizacin tridimensional de la cadena polipeptdica y la
cuaternaria corresponde a la distribucin geomtrica entre las diversas cadenas polipeptdicas unidas entre s
por enlaces, las protenas dotadas de actividad biolgica tienen un papel activo en todos los procesos
biolgicos y las alimenticias son aquellas que resultan sabrosas digestibles no txicas y econmicamente
utilizables por el hombre (Davila ,1996). Una de las tcnicas ms utilizada para el estudio de las protenas
consiste en el empleo de la electroforesis y el fundamento de separacin de esta tcnica, se basa en el
movimiento que tiene un componente proteico a travs de un medio elctricamente conductivo, en respuesta a
una aplicacin de voltaje. Por lo cual, la carga elctrica efectiva y/o el radio molecular, son las caractersticas
bioqumicas de las protenas, que se han usado para el desarrollo de los procedimientos electroforticos y el
rea de aplicacin desde clulas, partculas, cidos nucleicos, protenas, peptidos, aminocidos, cidos
orgnicos, bases, drogas, pesticidas y aniones inorgnicos y cationes (Westermeier, 1997).
Con base a lo anteriormente expuesto, es necesario efectuar trabajos en los que se genere un
conocimiento ms preciso acerca de las caractersticas bioqumicas y nutrimentales de las protenas de reserva
de un determinado ingrediente alimenticio sujeto a un anlisis; en ese tenor, E. cyclocarpum reviste un inters
especial para saber cuales son sus protenas de reserva y otras de sus propiedades an desconocidas; por lo
cual es fundamental la extraccin, la purificacin y la caracterizacin de las protenas de depsito que
contiene para un cabal aprovechamiento alimenticio.
E. cyclocarpum representa una importante alternativa por sus posibilidades de explotacin
agroindustrial por el potencial de su madera, follaje y semillas.
Las semillas de E. cyclocarpum forman parte de las protenas no convencionales que an se
desconocen algunas de sus caractersticas bioqumicas y nutricionales, por lo cual se plantea la necesidad de
extraerlas y caracterizarlas para un mejor aprovechamiento alimenticio.
VlI. MATERIALES Y MTODOS
7.1 Sitio de recoleccin de especimenes
Para el presente trabajo, se utilizaron las semillas de E. cyclocarpum obtenidas a partir de frutos
completos maduros que se recolectaron en la poblacin de Cmala, Colima durante los meses de febrero hasta
junio en cantidad suficiente para efectuar el desarrollo experimental.
El municipio de Cmala representa el 7.2% de la superficie del Estado, colinda al norte con el
estado de Jalisco, al este con el Estado de Jalisco y los municipios de Cuauhtemoc y Villa de lvarez; al sur
con el municipio de Villa de lvarez; y al oeste con los municipios de Villa de lvarez, Minatitlan y el
Estado de Jalisco.
El ayuntamiento de Cmala muestra las siguientes coordenadas geogrficas extremas: Al norte
1932, Al Sur 1918 de latitud Norte, al Este 10337 y al Oeste 10357 de Longitud Oeste (INEGI, 1995).
Primeramente se procedi a lavar y desinfectar con una solucin de cloro y agua las semillas
desenvainadas. Las semillas maduras se descascararon manualmente con un martillo para separar el
tegumento de las almendras secas, posteriormente con las almendras verdes desecadas triturndose con un
molino Wiley criba de .75 mm, hasta obtener la harina de E. cyclocarpum. El pulverizado desengrasndolo
con ter de petrleo durante 6 hrs, en un equipo Soxhlet. Despus en orden sucesivo se realizaron:
El anlisis de Kjendahl, el anlisis elemental, aminogramas, protena soluble, fraccin de protenas,
contenido proteico, electroforsis y una prueba biolgica (Figura 2).
de E. cyclocarpum
Anlisis de Kjeldahl
(AOAC, 1990)
ASM ASV
Anlisis elemental
ASM
Aminogramas
ASM ASV
Protena soluble
ASM
Prueba biolgica sobre
Relacin Eficiencia Proteca
(REP)
ASM ASV
Fraccin de protenas
(Hu y Essen, 1981)
ASM
Contenido proteico
(Bradford, 1976)
ASM
Gel electroforesis
(Laemmli, 1970)
ASM
ASM = Almendra semilla madura
ASV = Almendra semilla verde
Harina Desgrasada
Figura 2. Diagrama general de la metodologa par la extraccion y caracterizacin de las semillas de
E. cyclocarpum.
7.2 Anlisis de elementos
Por medio de un analizador de elementos EA1108 Fison's se oxidaron 100 mg de muestra para
someterlas a combustin, el producto pas por una columna con helio que separa y detecta por conductividad
trmica y manda la seal proporcionando la concentracin individual de carbono, nitrgeno, hidrgeno y
oxgeno de los componentes de la muestra de almendra de E. cyclocarpum simultneamente se compar con
soya (Glycine max ) y frijol terciopelo (Stizolobium deeringianum ).
7.3 Anlisis de Kjeldahl. Para conocer el porcentaje de protena cruda, grasa cruda, cenizas, fibra
cruda, humedad y E.L.N. se utilizaron las tcnicas descritas por la A.O.A.C. (1990)
7.4 Cuantificacin de aminocidos. Para la cuantificacin de los aminocidos de las semillas
maduras y verdes de E. cyclocarpum se us un cromatgrafo tipo HPLC (High Performance Liquid
Chromatography) segn el mtodo de (Walter, 1992). El cromatgrafo fue de la marca Waters; equipados
con dos bombas reciprocantes de flujo variable modelo 6000 A, inyector de volumen variable 6 k, un
detector de fluorescencia modelo 420, un programador de gradientes modelo 660. Un procesador de datos
automtico, modelo 730 y un controlador automtico de temperatura para columnas modelo 111. Los
disolventes utilizados fueron grado cromatografa HPLC marca Merk, el agua fue preparada en el laboratorio
por desmineralizacin con resinas de intercambio inico Amberlite, se purificaron con columnas de carbn y
destilacin en equipo de vidrio. Todos los disolventes, as como las muestras fueron filtradas por medio de
membranas de 0.22 micrmetros de poro, tipo GVWP millipore, previamente a su introduccin al sistema
cromatogrfico. Las hidrlisis de los materiales se consiguieron con 100 mg de muestra respectivamente, se
purg el tubo o ampolleta con nitrgeno (ya con la muestra) conectndose a la lnea de vaco con la muestra
congelada en bao de dixido de carbono slido, acetona, sellando el cuello del tubo con soplete de oxgeno,
manteniendo la presin reducida (Techniques HandBook 1985). La hidrlisis practicndola con 5 ml., de HCl
6 N, en presencia de fenol ( 40 A 50 ml/10 ml. DE HCL 6 N) a 105 grados centgrados durante 24 hrs.
Despus del tiempo de hidrlisis se procedi a romper el tubo al transferir cuantitativamente el contenido a
un matraz de rotavapor de 100 ml., con agua grado cromatogrfico, se evapor casi a sequedad a presin
reducida y a 60 grados centgrados, se rehidrat dos veces con 5 ml de agua y se transfiri el residuo con
metanol. Se coloc agua 7.3 ml en un matraz aforado de 100 ml., se centrfugo y filtr en una membrana
millipore el sobrante y se us directamente en la derivacin.
7.5 Protena soluble. Se calcul el porcentaje de la protena soluble de la almendra de E.
cyclocarpum , para lo cual previamente se pesaron 10 mg de muestra y se le agreg NaOH 1 M
posteriormente se ley en un Microplate reader.
7.6 Fraccin de protenas. Con base a los mtodos de (Hu y Essen 1981; Knabe et al., 1989), se
realiz la extraccin y fraccin de las protenas de las semillas de E. cyclocarpum efectuadas con cinco
diferentes solventes: Agua, 0.l5 M NaCl, 2-propanol (IPA) al 70%, cido actico glacial al 50 %, y 0.1 M
NaOH, segn la secuencia descrita por Kwan et al (1996).
Figura 3. Diagrama de flujo del protocolo de extraccin y separacin de las protenas de E. cyclocarpum
por sus diferentes solventes.
Solvente-Harina (10:1)
centrifugacin en agua 20,000 r.p.m. 30 min.
Fraccin soluble en agua (al bminas)
Residuo
0.5 M NaCl Fraccin soluble de NaCl (globulinas)
Residuo
70 IPA Fraccin soluble de alcohol (prolaminas)
Residuo
Enjuagar (Agua )
Acido actico 50% Fraccin soluble de cido actico ( glutelinas 1 )
Residuo
Agua enjuagar
Residuo
0.1 M NaOH Fraccin soluble en NaOH (glutelinas 2 )
Residuo
(Kwon et al., 1996)
La harina de E. cyclocarpum se agit mediante un agitador magntico para cada uno de los solventes
en proporcin de 1:10 (P/V) durante 14-16 h a 4 grados centgrados. Los residuos insolubles, fueron
removidos por centrifugacin a 20,000 r.p.m. durante 30 minutos, la extraccin de cada solvente fue repetida
tres veces y todo el sobrenadante para cada solvente se reuni hasta obtener una fraccin representativa de
cada solubilidad. Cada fraccin fue dializada en contra de sus propios solventes y despus con agua
desionizada. El producto de la dilisis se someti al proceso de liofilizacin y la protena en polvo obtenida se
almacen en un congelador a 20 grados centgrados.
Para hacer la dializacin se diseo un sistema de flujo de contracorriente, consistente en el empleo
de cartuchos de hemodilisis de Cuprofan (Nitrato de celulosa y poliuretano) interconectados por mangueras
y tubos de Tygon (polmero) a una bomba peristltica acoplada a un aparato de reflujo, un enfriador y en la
parte central se coloc la muestra en un recipiente de vidrio adherido a una tina de plstico con anticongelante
y movimiento continuo por el agitador magntico, para conservar la temperatura a 4 grados centgrados
durante 14-16 hrs. Para revisar la efectividad del sistema en la entrada y la salida del cartucho de hemodilisis
se monitore con ninhidrina por medio de tubos de ensaye y se anotaron los cambios de coloracin, el rojo
con ausencia de protena y el azul sensible a la misma.
Estos resultados se calcularon con base a cada uno de los pesos de las fracciones de protena con
base seca.
El sobrenadante de cada solvente para obtener su respectiva fraccin de protena se someti a un
proceso de dilisis, posteriormente se tomaron alcuotas de dicho dializado para liofilizarlo y se pesaron las
fracciones de protena calculndose de la siguiente manera:
Clculos:
Peso en g de la fraccin X ml de Dializado
= Cantidad de la fraccin de Protena
de Protena 100 ml de Liofilizado
7.7 Contenido proteico. Cada fraccin de protena se ensay para determinar su cantidad con
fundamento en el mtodo de Bradford (1976), por medio de la utilizacin de las protenas estndar
seroalbmina bovina (BSA) y ovoalbmina, el contenido de nitrgeno se modific a protena por la
conversin del factor 6.25
La solucin de Bradford se prepar de la siguiente forma:
Se pesaron 200 mg de azul de Comassie G-250 y se agregaron 100 ml de etanol con agitacin
continua de manera que no se formaran grumos, al mismo tiempo se aadi agua destilada. Se colocaron 200
ml, de cido fosfrico y se continu agregando agua destilada hasta aforar a 2 litros. Se filtr en un embudo
Buchner y se guard en un recipiente mbar (Bollag, 1991). Sucesivamente se elabor una curva patrn con
albmina disuelta en NaCl 0.15 M, el procedimiento consisti en tomar con una micropipeta alcuotas de 2.5,
5, 10, 20, 25 , 30 y 40 microlitros, con diferentes puntas ependorff se completaron todos los volmenes hasta
100 microlitros con NaCl 0.15 M, se adicionaron a los tubos 1 ml de solucin de Bradford y se ley en el
espectrofotmetro a 595 nm (Rosemberg, 1996).
7.8 Electrofresis en gel. Se recurri a dodecil-sulfato de sodio poliacrilamida gel electroforesis
(SDS-PAGE) cargado con 12% (P/V) de gel de acrilamida de acuerdo al procedimiento de Laemmli (1970).
Las fases sucesivas para realizar la electrofresis consistieron en montaje de las placas de vidrio, fijndose
correctamente con los espaciadores de plstico para despus preparar el gel de poliacrilamida. Se utilizaron
10 mg de harina de E. cyclocarpum solubles en 1 ml de una solucin .1M de NaOH guardndose en el
refrigerador durante 24 hrs, posteriormente se agregaron en un tubo de ensaye de 100 microlitros de muestra y
100 ml de buffer de muestra a un pH de 8.8; despus se desnaturaliz la protena a 100 grados centgrados
durante 3 minutos, se centrifug y se tomaron 20 microltros de muestra para colocarse en cada uno de los
carriles del gel. Ulteriormente se colocaron las placas de vidrio en la cmara de electrofresis ponindose la
tapa con los electrodos se prendi la fuente de poder y se aplicaron de 85-110 voltios durante 3-7 hrs.
Despus se ti el gel con azul de Comassie y se desti con una solucin de metanol 5 % y cido actico
glacial al 7% para de esta forma poder apreciar el perfil molecular. Un gel con harina de parota ASM de
E. Cyclocarpum en donde se utilizaron los siguientes marcadores. Los marcadores de peso molecular
conocidos de la marca Bio-Rad que se utilizaron para esta determinacin fueron: Lisozima (14 300), b-
lactoglobulina (18 400), anhidrasa carbnica (29 000), ovoalbmina (43 000), seroalbmina bovina (68 000),
fosforilasa B (97 400) y miosina (200 000). Tambin posteriormente se realiz un segundo gel con las
fracciones de las protenas de la ASM de E. Cyclocarpum en donde los marcadores utilizados fueron miosina
(210 000), b-galactosidasa (127 000), seroalbmina Bovina 84 000, ovoalbmina (49 500), anhidrasa
carbnica (35 300), inhibicin de la tripsina de Soya 28 100, lisozima 20 500 y aprofinina (7 000). En un
tercer gel se determinaron las subunidades de las albminas en donde se emplearon los marcadores de peso
molecular correspondientes a miosina (210 000), b-galactosidasa (127 000), seroalbmina Bovina 84 000,
ovoalbmina (49 500), anhidrasa carbnica (35 300), inhibicin de la tripsina de Soya 28 100, lisozima 20
500 y aprofinina (7 000).
7.9 Prueba biolgica. Para determinar la calidad nutricional de las protenas de las semillas de E.
cyclocarpum; se efectu una prueba biolgica en la que se precis la relacin de eficiencia proteica (REP)
para lo cual se emplearon 15 ratas del mismo sexo recin destetadas de la cepa Swiss Wistar de un peso
promedio de 65 g dejando un periodo de adaptacin de 3 das; se mantuvieron en jaulas individuales y los
animales quedaron divididos en tres grupos de cinco ratas distribuidos aleatoriamente en cada uno de los
tratamientos. Se registro el peso corporal de cada animal al inicio del experimento y posteriormente tanto el
peso de la rata como el alimento ingerido una vez por semana hasta el da 28 (final del estudio).
7.10 Anlisis estadstico. Se someti a un anlisis de varianza para un diseo completamente al azar
con tres tratamientos y cinco repeticiones, Prueba de Tukey para diferencia entre medias con un nivel de
significancia P < 0.05%. (Steel y Torrie, 1985).
Las dietas fueron isoproticas e isocalricas (Cuadro 4), con el anlisis bromatolgico respectivo de
cada una ellas (Franco et al., 1990; Lucas y Aragn, 1994).
Los tratamientos fueron: dieta Testigo con base en casena, dieta con almendra de semilla madura
(ASM) cocida, y dieta con almendra de semilla verde (ASV) cocida con base a las tablas de la (N.R.C. 1995).
Las variables evaluadas fueron:
Ganancia de peso total (g) y ganancia diaria de peso g
Consumo de alimento y relacin de la eficiencia proteica g
REP = Incremento en peso
Consumo protena
Cuadro 4. Dietas de las semillas maduras y verdes de E cyclocarpum en comparacin con la dieta
control (casena)
Dieta 1 Dieta 2 Dieta 3
Ingredientes Base seca Base seca
Parota Verde 282,49
Parota Madura 255,10
Casena 111,11
Glucosa 200,00 200,00 200,00
Sacarosa 200,00 200,00 200,00
Almidn 163,49 180,82 201,39
Alfa-celulosa 65,78 72,69 192,5
Vitaminas 10,00 10,00 10,00
Minerales 35,00 35,00 35,00
DL-metionina 2,00 2,00 -
Aceite de Maz 41,24 44,39 50,00
Anlisis
Calculado
Materia seca 92.10 94.8 93.4
Humedad 7.4. 5.2 6.6
Protena cruda 10 10 10
Grasa cruda 5 5 5
Cenizas totales 22 22 22
Fibra Cruda 6 6 6
E.L.N. 49.10 51.8 50.4
E.M.Kcal/Kg3300 3300 3300 3300
VlII. RESULTADOS
8.1 Anlisis elemental. Se compar tres leguminosas comestibles, dos fuentes de consumo
tradicional soya y frijol y una de tipo no convencional E. .cyclocarpum. Los resultados para nitrgeno como
elemento fundamental de las protenas, ubic a la parota en forma intermedia respecto de las otras
leguminosas estudiadas, el mximo valor correspondi a la soya y el menor fue para el frijol (Cuadro 5).
Cuadro 5. Anlisis elemental de tres leguminosas.
ELEMENTOS
Alimentos Nitrgeno Carbono Hidrgeno Oxgeno
Parota (E. cyclocarpum) 6.09 44.86 6.95 41.11
Soya (Glycine max) 7.27 44.49 6.61 41.63
Frijol (Stizolobium deeringianum) 4.42 43.9 6.65 44.92
8.2 Anlisis de Kjeldahl. La almendra de las semillas de E. cyclocarpum destac por su alto valor
de protena cruda, tanto para almendra de semilla verde 38.2% como para almendra de semilla madura 34.5
con 4 unidades porcentuales a favor de la ASV, aunque la ASM result superior en grasa cruda (Cuadro 6).
Se utilizaron tres dietas; semillas maduras y verdes de E. cyclocarpum en
comparacin con la casena; dichas dietas isoproteicas e isocaloricas.
Cuadro 6. Anlisis de Kjeldahl de la almendra madura y verde cocidas de E. cyclocarpum.
PORCENTAJE DE LA
ALMENDRA MADURA
PORCENTAJE DE LA
ALMENDRA VERDE
Materia seca 92.7% 95.3%
Humedad 7.3% 4.7%
Protena cruda 34.5% 38.2%
Grasa cruda 3.1% 2.2%
Cenizas totales 3.4% 3.1%
E.L.N. 51.7% 51.8%
8.3 Aminogramas. Los valores para los aminocidos limitantes resultaron de la siguiente manera.
Para el caso de la ASM se obtuvieron valores de 4 aminocidos por arriba de las recomendaciones del patrn
FAO/WHO y solamente 2 aminocidos para la ASV, sobresalieron los valores de la ASM para lisina y
treonina (Cuadro 7).
Cuadro 7. Aminocidos presentes en la almendra madura y verde de E. cyclocarpum en
relacin con el patrn FAO/WHO
100g Protena
E. cyclocarpum Aminocido
Madura Verde
FAO/WHO Diferencia %
Asparagina
10.54 12.42
Glutamina 14.45 15.59
Serina 4.57 8.64
Histidina 3.98 2.75
Glicina 5.45 8.21
Treonina 5.44 5.37 4.0 +36
Arginina 5.77 5.57
Alanina 4.04 8.40
Tirosina 4.04 2.98
Metionina 0.99 1.37 3.5 *
Valina 4.08 5.39 5.0 ** + 7.8%
Fenilalanina 3.85 3.57 6.0 cubre 64%
Isoleucina 4.11 3.64 4.0 + 2.75
Leucina 8.22 6.62 7.0 +17.4
Lisina 7.82 2.53 5.5 + 42.2%
Triptofano 0.23 ***N I 1.0 cubre 23 %
* Metionina + Cistina
** Fenilalanina + Tirosina.
*** No Identificado
8.4 Protena soluble. El porcentaje de la protena soluble obtenido para la protena de parota fue de
27%, comparativamente menor a lo observado con respecto de seroalbmina bovina y ovoalbmina utilizadas
como patrn de referencia (Grfica 8).
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
E. cyclocarpum Sero albmina bovina
Ovoalbmina
1
2 3 4 5
Grfica 8. Protena soluble de E. cyclocarpum
8.5 Fracciones de protena. Las globulinas fueron la fraccin ms abundante de las protenas de ASM
de parota, enseguida se ubicaron las albminas y glutelinas-1 y en menor proporcin las prolaminas. Por
ltimo la proporcin inextractable de las protenas significo el 0.5% (Cuadro 8)
EXTRACTADA (%)
Albminas Agua desionizada 29.3 %
Globulinas 0.5 M NaCl 37.6 %
Prolaminas 70% Isopropil Alcohol 6.7 %
Glutelinas-1 50% cido Actico 25.9 %
Protenas inextractables 0.1 M NaOH 0.5%
8.6 Cuantificacin de las fracciones de protenas. En una dilucin de 10 microlitros se detectaron
las siguientes cantidades de fracciones de protenas: Globulinas 0.438 mg/ml y albminas 0.418 mg/ ml. Para
otra dilucin, en una concentracin de 50 microlitros las fracciones obtenidas fueron: Glutelinas-1 0.142
mg/ml y prolaminas 0.0278 mg/ ml (Grfica 9).
Grfica 9. Curva de Bradford de las diferentes fracciones de protena de E. cyclocarpum
0.4000
0.5000
0.6000
0.7000
0.8000
0.9000
1.0000
1.1000
1.2000
Albnias
Glutelinas-1
Globulinas
.572
.428
.417
Fraaccin
EXTRACCION DE SOLVENTES
TOTAL DE LA PROTEINA
Cuadro 8. Fracciones de Proteinas de las semillas de E. cyclocarpum
BSA = Seroalbmina bovina
mg/ml BSA
8.7 Electroforesis en gel. De los siete marcadores de peso molecular conocidos que se compararon
como la presencia de bandas proteicas en los geles de E. cyclocarpum, solamente correspondieron con cinco
de los pesos moleculares, establecindose relacin con fosforilasa 97 400, seroalbmina bovina 68 000,
ovoalbmina 43 000, anhidrasa carbnica 29 000 y -lactoglobulina 18 400 (Figura 4).
Figura 4. Peso molecular de protenas de E. cyclocarpum utilizando diferentes diluciones
10 l 20 l 30 l
Carril Carril Carril Testigo
1 2 3
F
M
SAB
OA
AC
Testigo = Marcadores de peso molecular conocidos ordenados en forma descendente
M = Miosina (200 000)
F = Fosforilasa B (97 400)
SAB = Seroalbmina bovina (68 000)
O = Ovoalbmina (43 000)
AC = Anhidrasa carbnica (29 000)
-l = -lactoglobulina (18 400)
L = Lisozima (14 300)
Carril 2,3 y 4 = Diferentes diluciones de la almendra de semilla madura de Enterolobium cyclocarpum
Carril 2,3, y 4 = Diferentes
L
1
-l
En la figura 5, se muestran los pesos moleculares de las fracciones de protena de las semillas de E.
cyclocarpum comparados con cinco pesos moleculares de protenas conocidas, los cuales correspondieron
a: Prolaminas 84 000 y 49 500; glutelinas-1 84 000 y 49 500; globulinas 49 500 y albminas 49 500
daltons.
Figura 5. Peso molecular de las fracciones de protena de E. cyclocarpum
En cuanto a las subunidades dentro de las fracciones de las protenas estudiadas, solamente las
albminas presentaron dichas subunidades, estos resultados se muestran en la figura 6. En donde se
compararon con ocho protenas de peso molecular conocido como referencia, se aprecian pesos moleculares
del orden: 210 000, 84 000, 49 500, 35 300 daltons.
Testigo Glu Pro Glo Alb Glu Pro Glo Alb
M
-G
SAB
O
AC
Testigo = Marcadores de peso molecular conocidos en orden decreciente.
M = Miosina (200 000)
G = Beta Galactosidasa (127 000)
SAP = Seroalbumina Bovina (84 000)
O = Ovoalbumina (49 500)
AC = Anhidrasa Carbonica (35 300)
Figura 6. Pesos molecular de las subunidades de la albmina de E. cyclocarpum.
1 2 3 4 5 6 7 8 Testigo
8.8 Prueba biolgica. En el cuadro 9 se anota el anlisis de varianza para el diseo completamente
al azar, en donde el consumo no exisiti diferencia estadstica. En cuanto a las variables ganancia de peso y
para la relacin de la eficiencia proteica resultaron estadsticamente significativos con un nivel de P<0.01 y
P<0.001 respectivamente.
Cuadro 9. Anlisis de varianza de un diseo completamente al azar para consumo, ganancia y relacin
de eficiencia proteica.
VARIABLE F.V. G.L. S.C. C-M. F. P>F C.V.
Consumo Tratamientos
Error
2
12
2045
11640
1022
970
1.05 0.38 10.67%
- G
SAB
O
AC
ITS
L
A
Testigo = Marcadores de peso molecular conocidos en orden decreciente
M = Miosina (210 000)
-G = Beta - Galactosidasa (127 000)
SAP = Seroalbmina Bovina (84 000)
O = Ovoalbmina (49 500)
AC = Anhidrasa Carbnica (35 300)
ITS = Inhibidor de la Tripsina de Soya (28 100)
L = Lisozima (20 500)
A = Aprofinina (7 000)
Carriles 1 al 8 = Fracciones de protena de la albmina
M
Total 14 13685
Ganancia
de Peso
Tratamientos
Error
Total
2
12
14
1577
1399
2976
784
116.6
6.76 0.01 20.14%
Relacin
de Eficiencia
Proteica
Tratamientos
Error
Total
2
12
14
1.18
0.53
1.70
0.54
0.04
13.36 0.001 11.61%
En cuanto al comportamiento productivo, en el cuadro 10 se observan los valores del peso inicial,
peso final, ganancia diaria de peso, consumo y REP. La mxima ganancia diaria de peso se obtuvo con el
grupo testigo alimentados con casena, con menores ganancias para ambos grupos alimentados con ASM y
ASV (P<0.05). Diferente comportamiento se obtuvo en la REP, en donde el grupo testigo y ASM tuvieron
similar comportamiento y con los menores resultados para ASV (P<0.05).
Cuadro 10. Ganancia de peso, consumno y relacin de eficiencia proteica en ratas
P.I. P.F.
GDP
(g)
Consumo
g/da REP
Testigo
64.5 729.9 2.33a 10.86 2.12
S. Madura
65.4 122 1.962b 9.82 1.86a
S. Verde
66.6 105.4 1.44b 7.21 1.44b
a, b literal distinta significa diferencia estadstica (P<0.05) Prueba de Tukey
En la grfica 10, se indica la curva de comportamiento en cuanto a ganancia de peso, en donde el
grupo testigo (casena) alcanz 129.90 g como peso final; las ratas alimentadas con semilla madura
obtuvieron 122 g de peso y los animales con semilla verde 105.4 g de peso final durante cuatro semanas que
dur el estudio.
150
200
250
300
350
C
o
n
s
u
m
o

A
l
i
m
e
n
t
i
c
i
o

(
g
)
304.3
295.3
276.3
6 0
8 0
1 0 0
1 2 0
1 4 0
0 1 2 3 4 5 6
S e ma n a s
Ca s e n a A S M A S V
129. 9
105. 4
122. 0
0 1 2 3 4
64. 5
65. 4
66. 6
Grfica 10. Curva de crecimiento de las ratas swiss wistar
En la grfica 11, se indica la dinmica de consumo de los
diferentes tratamientos en donde se obtuvo un comportamiento
similar a travs del tiempo.
Grfica 11. Consumo Alimenticio de las ratas wistar.
IX. DISCUSIN
9.1 Anlisis elemental. El contenido de nitrgeno elemental en la semilla madura de E. cyclocarpum
se ubic en 6.09%, este valor result en 0.16 unidades menos que el factor de conversin 6.25 normalmente
utilizado cuando se calcula, el valor de protena cruda empleando el mtodo de Kjeldahl. Por lo tanto, con
este resultado no se sobre estimara el contenido de protena cruda de la semilla de E. cyclocarpum. Es
conocido que este factor de ajuste, se modifica dependiendo del tipo de alimento. Este factor se aproxima al
obtenido para el arroz 5.95% y tiende a ser menor comparado con la leche y sus derivados 6.38%, datos
obtenidos de una revisin realizada por Kirk et al (1996). Asimismo, cuando se compar en forma elemental
con otras dos leguminosas, se mostr una gran variacin entre ellas, resultando con 7.27% para el caso de la
soya y de 4.42% para el frijol.
9.2 Aminogramas. Comparativamente en estudios sobre la composicin qumica de 15 leguminosas
segn anlisis de Sotelo et al (1978), descubrieron en las semillas de E. cyclocarpum, la mayor cantidad de
los aminocidos limitantes en el siguiente orden de importancia: Leucina, lisina, treonina y fenilalanina por
encima de los valores del patrn de la FAO/WHO en esa lnea de investigacin, se encontraron los
aminocidos limitantes, leucina, lisina y treonina, la nica diferencia se present respecto de la fenilalanina
ya que esta no fue superior a los patrones de referencia.
El aporte de aminocidos limitantes isoleucina, leucina, lisina y treonina por la
semilla madura de parota, result superior comparado con el patrn de referencia de la
FAO/WHO (1990), sobresale lisina con 42.2% y treonina con 36% por arriba de lo
recomendado por la FAO. Por otra parte, el contenido de lisina, ubicado en 7.82% result
similar a lo aportado por otros alimentos de reconocido valor proteico como la leche, la
cual contiene 7.1% cuando es desgrasada y 7.2% en leche entera (Martn y Palma, 1999).
Cabe mencionar que en el caso de la fenilalanina y el triptofano solamente se cubri con el
54 y 23% de las necesidades recomendadas por la FAO/WHO (1990).
Cada aminocido tiene una cadena lateral caracterstica que influencia sus
propiedades fisicoqumicas y, por lo tanto, las propiedades de la protena que lo contienen
en el caso de la ASM de E. cyclocarpum los aminocidos isoleucina y leucina presentan
cadenas laterales no polares o hidrfobas y son menos solubles en el agua que los
aminocidos polares; sin embargo, la treonina tiene cadenas polares sin carga hidrfilas, y
es capaz de formar enlaces hidrgeno con algunas molculas tales como el agua; por otra
parte la lisina corresponde al grupo de aminocidos con cadena lateral cargada
positivamente ( pH prximo a 7) (Cheftel et al., 1989).
La lisina es un aminocido estrictamente esencial debido a la carencia total de la
enzima transaminasa que se encargara de sintetizarla, a partir del cetocido
correspondiente, en todos los organismos superiores. La lisina es el primer aminocido
limitante en dietas de cerdos y el segundo en dietas de pollos de engorda, ya que la mayora
de los ingredientes utilizados comercialmente son diferentes en este aminocido y la ASM
de E. cyclocarpum lo contiene por arriba de los patrones de requerimiento (Kerr y Kid,
1997).
Adems en el caso de la treonina que fue el segundo aminocido mas abundante de
la ASM de E. cyclocarpum, este forma parte de protenas estructurales como es el msculo
y participa en la formacin de glicina (otro aminocido esencial en el caso de las aves)
tambin forma parte de enzimas digestivas y secreciones intestinales como moco, clulas
de la mucosa y protenas del sistema inmunolgico, niveles subptimos de treonina en la
dieta disminuyen dramticamente la digestibilidad de la protena a nivel del tracto
gastrointestinal (Austic, 1997).
El grupo de aminocidos alifticos de cadena ramificada que comprende la valina,
la leucina y la isoleucina tienen una estrecha relacin con el metabolismo de los
carbohidratos y de los cidos grasos en su biosntesis (Chongo,1988).
Asimismo se realizaron estudios para evaluar la interaccin potencial entre la lisina
y treonina en pollos de engorda y, se not una interaccin entre estos dos aminocidos
sobre el aumento de peso entre los 18 y 54 das con mayor ganancia de peso en los
animales equivalentes al 100 y 83% o bien del 105 y 100% respectivamente de lo
recomendado en el NRC (1994) segn investigaciones de (Kerr y Kid, 1997). Estos
resultados se pueden extrapolar a las cantidades de aminocidos presentes en la ASM de E.
cyclocarpum como una fuente alternativa de lisina y treonina en la alimentacin de pollos
de engorda.
En la actualidad se emplea el concepto de protena ideal y se refiere a una
combinacin perfecta de protenas o aminocidos que cubran exactamente los
requerimientos animales tanto para crecimiento como para mantenimiento. Con base a las
afirmaciones de (Mariscal Landin, 1997) la alimentacin representa cerca del 70% de los
costos de produccin pecuaria y, dentro del costo total de los nutrimientos, la protena y los
aminocidos implican alrededor del 35%, pero sus efectos sobre la productividad representa
del 40% al 60%.
9.3 Distribucin de las fracciones de protena.
La mayor parte de las fracciones de protena de las semillas de leguminosas, contienen globulinas y
albminas y en algunos casos ausencia de prolaminas y glutelinas. Sin embargo en otras leguminosas como
el chcharo y el garbanzo se tienen todas las fracciones (Jambunathan et al., 2000; Casey et al., 1992).
En este sentido la alverja (Lathyrus sativus), es una leguminosa que se usa como alimento en
personas y animales, las semillas contienen de 18.2-34.6% de protenas con la distribucin de sus fracciones
en este orden: Globulinas 13.3%, albminas 6.69%, glutelinas 3.8% y prolaminas 1.5% (Muelhlbauer et al.,
1997).
Es de sealar que las semillas de las leguminosas no tienen una buena definicin de sus fracciones
solubles, en comparacin con los cereales (Hu et al., 1981).
Que difieren dramticamente en su contenido de aminocidos lmitantes, se sugiere incrementar la
proporcin de polipptidos con perfil de aminocidos deseables, purificacin y caracterizacin de mayores
componentes proteicos presentes en las semillas de leguminosas para aumentar la calidad proteica como se
realiz en el presente trabajo.
Las fracciones de protena contenidas en la harina de las semillas de E. cyclocarpum se basaron en la
clasificacin de Osborne (1924), dicho autor dividi las protenas del trigo dentro de cuatro clases de
fracciones solubles en la siguiente forma: Albminas porque son solubles en agua. globulinas solubles en sal,
gliadinas solubles en 70-90% de alcohol y gluteninas las cuales son neutras, insolubles en soluciones
acuosas, salinas y alcohol. A partir de este criterio, las respectivas fracciones de protena desde el trigo se
aplicaron a otros cereales incluso a las leguminosas y generalmente se conocen como albminas, globulinas,
prolaminas y glutelinas, tambin tales fracciones de protena de los diferentes cereales exhiben similitudes en
la proporcin de sus aminocidos.
La proporcin encontrada de las fracciones proteicas de las semillas maduras de E. cyclocarpum
difieren en forma general de las sealadas para el caso de los pastos tropicales, las cuales son ricos en
albminas 31% y prolaminas 23%, con menor proporcin para globulinas 11% y glutelinas 10% (Coto et al.,
1987). Aunque en forma particular, el contenido de la semilla madura de E.cyclocarpum result con 29.3%
similar al contenido de los pastos tropicales y menor en el caso de las prolaminas con 6.7%. Este fenmeno,
determinar la solubilidad de la protena, que a su vez est relacionada con la degradabilidad de la misma
(Coto et al., 1987).
Por fraccionamiento de las protenas de leguminosas con base al mtodo de solubilidades de Osborne
se ha observado que el elevado contenido de globulinas en las semillas de la mayora de las leguminosas
indica que su funcin es principalmente como protenas de reserva, que se movilizan durante el transcurso de
la germinacin y dicha fraccin proteica se puede separar por ultra centrifugacin o cromatografa en dos
componentes principales presentes en todas las leguminosas, vicilina (7S) y la legumina (11S).
En la ASM de E. cyclocarpum la fraccin globulina fue el mayor porcentaje encontrado y en el caso
de la soya se denomina glicina y la del cacahuate araquina (Belitz y Grosch, 1988).
El mayor almacn de las semillas de las leguminosas se ha clasificado en dos tipos la legumina 11S y
la vicilina 7S; ambos tipos de protena pueden coexistir en una sola especie; y se ha propuesto que la
evolucin de vicilina y legumina proceden de un gen ancestral comn (Mc. Pherson et al., 1990).
La fraccin globulina en leguminosas es alta (60 90%), las prolaminas y glutelinas son fracciones
menores en estos materiales (Paredes, 1985) sin embargo en la ASM de E. cyclocarpum la fraccin proteica
globulina se present en mayor porcentaje; pero tambin se encontr en una alta cantidad las albminas y
enseguida las glutelinas y prolaminas.
Todo parece indicar que a diferencia de los cereales en leguminosas y oleaginosas existe una notable
carencia de conocimientos sobre la biofsica qumica de las protenas (Paredes, 1985).
Por otra parte se estudio la masa molecular del principal almacn de las semillas de las leguminosas,
la legumina (11S) que es una gl+obulina de 300 400 daltons, la vicilina (7S) una globulina de 150 200
daltons (Mc. Pherson, 1990).
La globulina (11S) de la soya se ha estudiado con mucho detalle, contiene 6 subunidades por
molcula y cada subunidad esta formada por una mitad proteica bsica y otra mitad cida, que estn unidas
entre s mediante uno o ms puentes disulfuro y la globulina (7S) tiene propiedades similares; en la
composicin de sus aminocidos con excepcin de la metionina (Belitz y Grosch, 1988).
En el caso de la ASM de E. cyclocarpum no se han estudiado las caractersticas que presentan las
fracciones de protena globulinas, albminas, glutelinas y prolaminas en lo que respecta a su estructura
tridimensional, la secuenciacin de sus aminocidos y otras propiedades funcionales y fisicoqumicas.
9.4 Prueba biolgica. Los resultados obtenidos en la relacin de la eficiencia de la protena, el
Testigo en el que se utiliz casena como protena pura (REP) 2.12, peso final 129.90 estos parmetros fueron
superiores a la dieta 1 y 2 con semillas de E. cyclocarpum madura y verde, estos productos no difieren de
otros estudios que se realizaron. En una investigacin en la que se emplearon ratas y semillas de E
.cyclocarpum, con varias semillas de leguminosas, en comparacin con la casena fortificada con metionina
(control) se concluy que todas las semillas fueron inferiores en calidad respecto de la casena, pero las
semillas pueden utilizarse como complemento o suplemento alimenticio (Proll et al., 1998). Los resultados de
la REP mostraron una eficiencia estadstica similar de la casena con la harina de la semilla madura de E.
cyclocarpum las implicaciones nutricionales para su inclusin en dietas destinadas a especies de estmago
simple o en particular para el humano resulta de gran importancia. Sobretodo cuando se considera, que las
poblaciones de origen rural pueden ser las beneficiadas, debido a que son las ms susceptibles por tener bajos
indicadores nutricionales, fenmeno que para nuestro pas ha sido discutido.
Por otra parte Proll et al (1998), sealaron menores indicadores de REP cuando compararon la
casena fortificada con metionina y diferentes semillas de leguminosas, en donde estuvo incluida la parota,
fenmeno distinto al encontrado en el presente ensayo. Estos autores consideraron que debido a esta
situacin, las semillas pueden ser utilizadas como un complemento o un suplemento alimenticio y no como la
base de la alimentacin, situacin de todas formas favorable para nuestro objeto de estudio, debido a las
implicaciones existentes en utilizar protena de fuentes no convencionales.
9.5 Contenido de protena. La cuantificacin del contenido de protena presenta limitantes en los
diversos mtodos que normalmente se utilizan: el anlisis de los aminocidos individuales es muy exacto,
pero costoso y se requiere mucho tiempo; el mtodo de Lowry es exacto en productos animales pero
susceptible a muchas interferencias en compuestos que se localizan en las plantas; el mtodo de Bradford
mide solamente protenas intactas; faltan aminocidos libres y pequeos polipptidos; el mtodo de Biuret
mide solamente pptidos grandes pero no dipeptidos, aminocidos libres y amidas cidas: de stos mtodos el
ms frecuentemente empleado es el mtodo de Kjendahl ya que es simple y econmico mide directamente y
exactamente el contenido total de nitrgeno de una muestra; un factor de conversin es usado para estimar la
protena cruda no obstante varios autores disputan el factor de conversin de 6.25 comnmente usado para
convertir el valor del nitrgeno dentro de la protena cruda (Conklin - Britain et al., 1999).
El contenido de protena del tejido de las plantas es usualmente estimado por la multiplicacin del
nitrgeno total por una conversin del factor de 6.25. Esta tcnica asume a todo el nitrgeno originado de la
protena; cuando se aplica a la pulpa del fruto, sobrestima el contenido de la protena porque la pulpa
tpicamente contiene aminocidos libres y muchos compuestos nitrogenados con metabolitos secundarios
(Levey et al., 2000).
El mtodo de la ninhidrina modificado para el total de la protena; ste procedimiento mide todos los
aminocidos es rpido y razonablemente exacto es un nuevo mtodo para estimar la protena y aminocidos
libres en la pulpa de los frutos y se utiliza como porcentaje el factor de conversin de 5.64 o diferentes
factores segn la parte de la planta en la que se estime el contenido de la protena (Conklin - Brittain et al.,
1999; Levey et al., 2000). Por lo tanto en relacin con los resultados que se obtuvieron conversin de 6.25
para estimar la protena es posible que se sobrestimen esos valores.
Una de las consecuencias prcticas fundamentales del presente trabajo consisti en plantear la
posibilidad de obtener aislados proteicos de las semillas de leguminosas que contengan 90% de protenas o
incluso ms, ya que la funcin principal de las protenas es aportar el nitrgeno y los aminocidos necesarios
para la sntesis de las protenas corporales y las dems sustancias nitrogenadas.
X. CONCLUSIONES
La almendra de la semilla madura de E. cyclocarpum constituye un alimento no convencional para el
consumo alimenticio de las personas y los animales, por su alto valor proteaginoso y biodisponibilidad dado
su contenido de N elemental, protena cruda, contenido de protena, fracciones de protena, as como por su
aporte de algunos aminocidos limitantes como la lisina, leucina, isoleucina y treonina y por su relacin de
eficiencia proteica similar al de la casena.
Xl. SUGERENCIAS
1.- Purificar an ms las fracciones de las protenas de las semillas de E .cyclocarpum mediante
cromatografa de columna, emplendose Sephadex e identificndose el ordenamiento constitutivo de sus
aminocidos, a travs de un secuenciador de aminocidos hasta conocer cabalmente la estructura primaria de
las protenas.
2.- Proseguir con el estudio del aislamiento y caracterizacin de las protenas de las semillas de las
leguminosas, ya que se desconocen muchas de sus protenas de reserva y son fundamentales en la
alimentacin humana y/o animal.
3.- Establecimiento de lneas de investigacin en las que se centre el estudio de las protenas
alimentarias de las leguminosas.
4.-Generar otros trabajos de investigacin bsica a nivel de postgrado, en este aspecto actualmente
est desarrollndose una propuesta de tesis doctoral que aborda el tema de ecologa qumica respecto de E.
cyclocarpum.
5.- Formacin de recursos humanos en los mbitos de la investigacin cientfica
6.- Obtener aislados de protena de las semillas de leguminosas, con ms pureza y mayor porcentaje
protenico que los concentrados proteicos que actualmente circulan en el mercado.
XlI. LITERATURA CITADA
Aguilar, A. y Zolla, C. 1982. Plantas txicas de Mxico. Unidad de Investigacin Biomdica en Medicina
Tradicional y He rbolaria del IMSS. Pg. 46.Mxico, D.F.
University of Hawaii 2000. Agroforester Tropical Seeds. Pp.1-4.
Allen, O. and Allen, K. E. 1981.The Leguminosae a source book of characteristic, uses, and nodulation. The
University of Wisconsin Press. Pp.267-69 U.S.A.
All, I. Bernard, F. Gibbs, M.K. Okoniewska, Y. and France, D.1993. Identification and characterization of
phaseolin polypeptides in a crystalline protein isolated from whitekidney beans (phaseolus
vulgaris).41(1):1830-1834
All, I.Bernard F. Gibbs, M K. Okoniewska, Y. and France, D.1994. Identification of phaseolin polypeptide
subunits in a crystalline food protein isolate from large lima beans (Phaseoluys lunatus). J. Agric.
Food Chem. 42(2): 2679-2683.
Allies, C. and Barneby, W.G. 1996.Silk tree, guanacaste, monkey, earring a generic system for the
synandrous mimosaceae of the Americas. Memory of the New York botanical garden. 74 :245-251
U.S.A.
A.O.A.C. 1990. Official methods of analysis of the association official analytical chemist. 13 st ed.
Washington U.S.A.
Apsit, V. Hamrick, J and Nason, J. 1999. Estimating pollen flow and effective population sizes of fragmented
Enterolobium cyclocarpum population in Costa Rica. University of Georgia. Abstract number 2886
XVI International Botanical Congress. Pp. 310-13.
Austic, R. 1997. Suplementacin de aminocidos para dietas bajas en protenas y su impacto en el balance
cido base en pollos de engorda. Noveno ciclo de conferencias sobre aminocidos sintticos. Fermex
.Pg. 1 11. Mxico, D.F.
Badui, D. S. 1990. Qumica de los alimentos. Edit. Alhambra Universidad segunda edicin. Pg. 15-
430.Mxico,D.F.
Belitz, H. y Grosch N. 1988. Qumica de los alimentos. Editorial Acribia. Pg. 585 594. Espaa.
Bradford M.C. 1976. A rapid an sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein
utilizing the principle of protein dye binding Anal. Biochem. 72: 248-254.
Beltrn, R. G. y Rodrguez A. 1997. Anlisis bromatolgico y estimacin del valor nutritivo de la parota
Enterolobium cyclocarpum Jacq en Villa de Alvarez, Col. Memorias XXI Congreso Nacional de
Buiatra Colima, Col Mx. Pg. 260-262
Bollag, M. D. 1991. Protein Methods.Wiley-Liss . Pp.50-55 U.S.A.
Botero, R. y Russo, R. 1999. Utilizacin de arboles y arbustos fijadores de nitrgeno en sistemas sostenibles
de produccin animal en suelos cidos tropicales. Escuela de Agricultura de la Regin Tropical
Hmeda. Conferencia electrnica de la FAO. Pg.1-16
Bressani, R. Jarquin, R. Elas, L. G. y Braham, J. G. 1966. Anlisis qumico de la harina de almendra de
conacaste (Enterolobium cyclocarpum) y su evaluacin biolgica en ratas y pollos. Turrialba. 16:330-
339 Costa Rica
Brook, C. 2000. Selected plants of medicinal value in Costa Rica. University of New Hampshire. Pp.1-4
England.
Carbonaro, M. Vechini, and Carnovale, . 1993. Protein solubilty of raw and cooked beans (Phaseolus
vulgaris) role of the basic residues. J. Agric. Food Chem. 41: 1169-1175.
Crdenas, J. y Llamas, G. 1993. Ad libitum consumption and digestibility of sheep feed containing guanacaste
pods (Enterolobium cyclocarpum). Cenid Microbiologa. Pp. 130.-133 Mxico D.F.
Casey, R and Domoney, C. 1992. The protein composition of legume seeds its variability and potential. 1re
Conference Europeenne sur les Proteagineux. Pp.381-86 France.
Castro-Fara-Neto, H. Martins, M. Boza, P. Prez, S. Correa Da Silva, M, and Mor, L. 1991. Pro-inflamatory
activity of enterolobin a hemolity protein purified from seed of the brazilian tree Enterolobium
contortisiliquum. Toxicon. 29 (9): 1143-1150
.
Cheftel, J; Cuq J. and Lorient, D. 1989. Protenas alimentarias bioqumica, propiedades funcionales, valor
nutritivo, modificaciones qumicas. Editorial Acribia.Pg.1337 Espaa.
Chongo, G. 1988. Bioqumica nutricional metabolismo de las aminocidos. Pg. 85 114. La Habana, Cuba.
Coto, G. 1987. Nutricin proteica de rumiantes. Instituto de Ciencia Animal. La Habana, Cuba. Pg. 1-49.
CPGN. 2000. Gene families encoding phytochromes. Pp. 235-239.
CATIE (Centro Agronmico Tropical de Investigacin y Enseanza). 1997. Nota tcnica sobre manejo de
semillas forestales Enterolobium cyclocarpum (Jacq.) Griseb. Pg. 1-5 Costa Rica.
Costa, R. Stella, R. and Alves, K. 1991. Purification and partial characterization of Enterolobium
contortisiliquum seed arylamidase. Braz J. Med. Biol. Res. 24 (4): 337-344.
Chi-Wah, C. and Dixon, P. 1994. Aminoacid composition and subunit constitution of protein fraction from
cowpea (vigna unguiculata L. Walp) seeds J. Agric. Food. Chems. 42 :1857-1860.
Davila, Ortiz, G. 1996. Mtodos para el estudio bioqumico de protenas. Instituto Politcnico Nacional.
Centro de Desarrollo de Productos Biticos
Apuntes Pg. 1106Morelos Mx.
Delfn, A. Chino, U. 1998. Biomolculas. Universidad Nacional Autnoma de Mxico. primera edicin. Pg.
1 165 Mxico D.F.
Delgado, M. and Da Silva, M. 1987. 3-O--d-glucopyranosyl-21-e-cinnamoyloxyolean 12-en-28-oil acid, a
new triterpene glucoside of Enterolobium contortisiliquum (vell) Morong. Qim. Nova 9(2): 119-122.
De pinto, G. Martnez, M. De Corredor, A. Rivas, C. y Orlando, E. 1994. Chemical an 14C NMR studies of
Enterolobium cyclocarpum gum and Hs degradation products. Phytochemistry. 37 (5):1311-1315.
De Pinto, G. Ludovic, de C. 1986. Analitical study of the gum exudates from Enterolobium cyclocarpum. Act.
Cient. Venez. 37 (1) 92-3
Dobson, B. 2000. Trees prohibited law or not recommended. Broward Country Library. Pp.1-7 U.S.A.
Domnguez, A. y Franco, R. 1979. Plantas medicinales de Mxico XXXV estudio qumico de la corteza y
fruto del guanacastle o parota Enterolobium cyclocarpum; Jacq; una leguminosa. Rev. Latinoamrica.
Quim. 10:46.
Echenique-Manrique, and Plumtre. 1990. A guide to the use de Mexican and Belizean timber propagation.
Pp.1-28.
Embarek, Guerdan. Rison, Rivo. H. Rabinovitch, Chable, Tixier, M. and Beneytout, J. 1993. Presence of fatty
acid degrading enzyme in a certain variety of peas
(Pisum sativum hortense) C.V. Solara) J. Agric. Food Chem. 41: 1593-1597.
Espejel, J. Martnez E. 1979. El guanacaste. Inireb Informa Comunicado 33 Pg.1.6 Verz. Mx.
Estrada, F. 1976. Leguminosas silvestres de valor alimenticio. Boletn Informativo. Universidad de
Guadalajara. Pg. 1-10.Guad.Jal.Mx.
Ezeagu, E. Petzke, K. Lange, E. Metges, C. 1998. Fat content and fatty acid composition of oil extracted from
selected wild-gathered tropical plant seed from Nigeria. J. Am.Oil Chem. Soc. 75(8):1031-1035.
Ezenwa, I.1999.Experiences with Enterolobium cyclocarpum ,a potential species for agroforestry systems in
southwest Nigeria. Department of Grassland Management. National Grassland Research
Institute.University of Arkasas. Pp. 1-8
FAO. 1964. Las leguminosas en la nutricin humana. Pp. 14-48.U.S.A.
FAO/WHO. 1965. Food and Agriculture Organisation / Word Health Organisation.
Fleming, T.H. 1983. Liomys salvini (ratn, semiespinosa, guardafiesta, spiny pocket mouse). In Costa Rica
Natural History, D. H. Janzen ED, University of Chicago Press, Chicago, Pp.475-477.U.S.A.
Francis, J. 1988. Enterolobium cyclocarpum (Jacq) Griseb. guanacaste. earpod-tree. leguminosae. legume
family. USDA Forest Service. Southern Forest Experiment Station So-ITF-SM-15
Franco, G. Daz, C. Ruiz, C. 1990. Mtodos de anlisis utilizados para evaluacin de protenas. Centrode
Investigacin y de Estudios Avanzados del IPN. Departamento de Biotecnologa y Bioingeniera Pgs.
94-102.Morelos, Mx.
Giral, D. Y Echegoyen, M. 1949. Determinaciones de treonina en alimentos mexicanos y en otros productos.
Rev. Ciencia 9: 300-302
Gmelin, R. Strauss, G. and Hasenmaier, G. 1959. A new aminoaacid from mimosaceae .Z. Physiol. Chem.
314: 28-32.
Gmez, P. 1985. Los Recursos biticos de Mxico (Reflexiones) Inireb-Alhambra, Pg.. 25-29. Veracruz,
Mx.
Gonzlez, C. 1984. Especies vegetales de importancia econmica de Mxico. Edit. Porra. Pg.13-
305.Mxico D.F.
Gonzlez, C. 1942. Estudio bioqumico de la parota (Enterolobium cyclocarpum). Tesis Escuela Nacional de
Biologa IPN. Pg. 1-90. Mxico D.F.
Gonzlez, R. 1980. Experimental forest plantations in Costa Rica. Agr. Cost. 4 (1):99-109.
Gutteridge, R. and Akkasaeeng, R. 1985. Evaluation of nitrogen fiting tree Res. Reports, (3) :46-47.
Gutteridge, R and Shelton, H. 1992. Forage tree legumes in tropical agriculture Edit. Cab International, Pp.
185.U.S.A.
Habte, M. and Musoko, M. 1994. Changes in the vesicular-arbuscular mucorrhizal dependency of Abizia
ferruginea and Enterolobium cyclocarpum in response to soil phosphorus concentration. Plant. Nutr.
17 (10): 1769-80.
Hamrick, J. and Preston, R. 1998. Temporal variation in the breeding structure of fragmented Enterolobium
cyclocarpum population.University of Georgia.Pp.1-6.U.S.A.
Hernndez, S. 1981. Especies arbreas forestales susceptibles de aprovechamiento como forraje. Ciencia
Forestal. 6: 31-39
Hernndez, R and Garca, F. 1980. Anatomical changes and in the storage substances during the process of
water uptake of Enterolobium cyclocarpum seeds. Act. Cient. Venez. 31 (2) 167-73
Hu, B. and Esen. 1981. Heterogeneity of soybean seed proteins: Onedimensional electrophoretic profiles of
six different solubility fractions. J.Agric. Food. Chem. 29: 297-501.
Huerta, C. 1983. La Parota Enterolobium cyclocarpum (Jacq) Griseb como un recurso forestal de las zonas
clido-hmedas en Jalisco. Fac. de Agronoma Tesis de licenciatura Universidad de Guadalajara.
Pg.1-86.Guad.Jal.Mx.
Hughes, C. and Styles, B. 1984. Exploration and seeds collection of multiple purpouse dry zone trees in
Central Amrica. International. Tree Crops Journal. 3 :1-31.
Hunter, I. 1989. Seed dispersal and germination of Enterolobium cyclocarpum (Jacq) Griseb. (Leguminosae:
Mimosoideae): Are megafauna necessary ? Journal of Biogeographyc. 16: 369-378.
Idouraine, A. Shridhar, K. Sathe, and Weber, 1992. Biological evaluation or flour and protein extract of the
tepary bean (Phaseolus acutifolius) J. Agri. Food. Chem. 40, 1856-1859
INEGI. 1995. Comala Estado de Colima, Cuaderno Estadstico Municipal. Colima Col.Mx.
Jambunathan, R. Singh, U. and Subramanian, V. 2000. Grain quality of sorghum, pearl millet, pigeon-pea
and chick-pea. International crop research institute for the smi-arid tropics, Patanchern India. Pp.1-8.
India
Janzen, D. 1981. Guanacaste tree Seed-swallowing by Costa Rican Range Horses. Ecology. 62: 592-687.
Janzen, D.1981. Enterolobium cyclocarpum seed passage rate and survival in horses Costa Rica plistocene
seed dispersal agent. Ecology. 62: 593-601
Janzen, D.1982. Removal of seed from horse dung by tropical rodents; influence of habitat and amount of
dung. Ecology. 63: 1887-1960
Janzen, D and Martin,1982. Neotropical anachronism: The fruits the gomphotheres Ate. Science. 215:19-27
Janzen, D. 1986. Mice big mammal and seed., it matters who defecates what where. An frugivores and seed
dispersal. A. Estrada and T. H. Fleming, eds, Dr. W. Junk publisher, Dordrech, Holland. Pp. 251-271
Janzen, D and Hallwachs, W. 1996. Mature dormant seeds of the guanacaste tree (Enterolobium
cyclocarpum, Fabacea). Pp. 1-7. U.S.A.
Johnson, C. 1982. Survival of stator generalis (Coleoptera: Bruchidas) in host seeds outside its geographycal
range. J. of the Kansas Enthomological Soc. 55.718-724
Kaitho, R. Umunna, N. Nsahlaiiv, Tamminga S. and Van Bruchem. 1998. Nitrogen in browse species.
Ruminal degradability and post-ruminal digestibility measured by movile nylon bag and in vitro
techniques. J.Sci. Food. Agric. 76(4):488-498.
Kerr, B. Y Kidd, M, 1997. Nutricin para elevar al mximo la produccin de carne de pechuga en pollos.
Noveno ciclo de conferencias sobre aminocidos sintticos. Fermex p.p. 11 31. Mxico, D.F.
Kirk, R. Sawyer, R. y Egan, H. 1996. Composicin y anlisis de alimentos de Pearson. Segunda edicin.
CECSA.Pg.1-25. Mxico D.F.
Kline, M. 1986. Enterolobium cyclocarpum Guanacastle. In a guide to useful woods of the Worl, Flynn Jr.
J. H. Editor, King Philip Publishing Co. Portland, Maine. Pp.7-250.U.S.A.
Knabe, D. Larue, D. Gregg, E. Martinez, G. and Tankley, T. 1989. Apparent digestibiity of nitrogen and
amino acids in protein feed stuffs by growing pigs. J. Anim. Sci. 67: 441-458.
Kause, J-P. Mothes, R. and Schwenke, K. 1996. Some physicochemical and Interfacial properties of native
and acetylated legumin from faba beans (Vicia faba L.). J. Agric. Food Chem. 44: 429-437.
Kent, F. and Amengual, M. 1949. Phytochemical study; of the glucide portion of the saponins of some
autochthonous leguminosae. Arch. Farm. Bioquim. Tucuman. 4: 205-218.
Laemmli, V. 1970. Cleavage of structural protein during the assembly of the head of bacteriophage T4.
Nature. 227:680-685.
Larr, C. Marileusa, C. Steffi, D. Michel, C. and Jacques, G. 1993. Action of Transglutaminase on the
Constitutive Polypeptides of Pea Legumin J. Agric. food Chyem. 41: 1816-1820.
Levey, D. Bisell, H. and Okeefe, S. 2000. Conversion of nitrogen to protein and amino acids in wild fruits.
Journal of Chemical Ecology. 26(27):1749-1763.
Lucas, F. y Aragn, M. 1994. Manual de prcticas de nutricin. Departamento de alimentos y biotecnologa.
Divisin de ingeniera Fac. de Quim. U.N.A.M.Pg. 20-25.Mxico D.F.
Mariscal Landin, G. 1997. digestibilidad ileal, una herramienta para formular a protena ideal. Noveno ciclo
de conferencias sobre aminocidos sintticos. Fermex p.p. 47 63. Mxico, D.F.
Martn, P y Palma J. 1999. Manual para fincas y ranchos ganaderos. Agrosystems Editing. Pg.
120.Colima.Col.Mx.
Martnez, M. 1959. Plantas tiles de la flora mexicana.Pg.656 Ediciones Botas.Mxico D.F.
Martnez, M. 1966. Catlogo de nombres vulgares y cientficos de plantas mexicanas. Pg.1247 Edit. F.C.E.
Mxico D.F.
Martnez, M. y Urea, C. 1993. Prendimiento de estacas para postes vivos SARH-CIPAC. Pg.1-7.Mxico
D.F.
Mc Pherson, A. Gibbs, E. Kara, B. 1990. Evolution of legume seed storage proteins a domain common to
legumins and vicilins 15. European journal of biochemistry 189(1): 614 623.
Mc Pherson, A. Ping Ko, T. 1990. The three dimensional structure of canavalin from jack bean (canavalia
ensiformis). European journal of biochemistry 189(1): 729 744.
Mc Vaugh, R. 1987. Flora Novogaliciana. A Descriptive account of the vascular plants of western Mxico
Ann arbor the University of Michigan press. 5:176-178.
Marx, C and Bernard, M. 1967. Occurence of a triterpene of the B-amyrin type its lactone of machaerinic
acid, in the fruits of Enterolobium contortisiliquum. An. Ass. Brazil Quim. 23 (1-5): 5-7.
Marx, C. and Bernard, T. 1966. Lupeol, lupeyl acetate, and saponins in the fruits of Enterolobium
contortisiliquum. Ann. Assoc.Brazil Quim. 22 (3/4) 31-35
Massiu, G. Guzmn, J. y Cravioto, R. 1950. Contenido en aminocidos, indispensables en algunas semillas
mexicanas. Ciencia. 10: 1424
Meerow, A and Black, J. 1993. Enviroscaping to conserve energy trees for south Florida. University of
Florida. Pp. 1-4.U.S.A.
Mendieta, R. y Del Amor, S. 1984. Catlogo de las plantas medicinales del Estado de Yucatn. Pg 143.
Inireb. CECSA. Mxico.
Monteiro, V. and Prakash, V. 1994. Effect of proteases on arachin, conarachin I, and conarachin II from
peanut (Arachis hypogae L.) J. Agric. Food Chem. 42: 268-273.
Monteiro, V.and Prakash, V.1994. Functional properties of homogeneous protein fractions from peanut
(Arachis hypogae L.). J. Agric. Food Chem. 42: 274-278.
Moscoso, C. Velez, A. and Agudeln, . 1995. Effects of guanacaste tree (Enterolobium Cyclocarpum Jacq
Griseb) fruit as replacement for sorghum grain an cotton seed meal in lamb diets. Small Ruminant
Research. 18: 121-124.
Muelhlbauer, F. and Abebe-Tullu. 1997. Lathyrus sativus L .University of Saskachewan Canada.Pp. 1-
6.Canada.
National Academy of Science. 1979. Tropical Legumes Resource for the future. Pp. 200-201. U.S.A.
National Research Council. 1995. Nutrient requirements of laboratory animals.Pp. 11-102.U.S.A.
Navas-Camacho, A. Cuesta, A. Anzola, A. and Leon, J. 1993. Effect of supplementation with a tree legume
forage on rumen function. Livestock Research for Rural Development. 5 (2): 1-13
Niembro, R. 1986. rboles y arbustos tiles de Mxico. Pg. 87-88 Ed. Limusa. Mxico.D.F.
Nelson R. and Schubert, H. 1976. Adaptability of Selected tree species planted in Hawaii forest service
resource bulletin Pacific Southwest forest and range experimental station. Pp.21-25. U.S.A.
Oliva, M. Sampaio, M. and Sampaio, C. 1987. Serine-and sh-protenas e inhibitor from Enterolobium
contortisiliquum beans purification and preliminary characterization. Braz. J. Med. Biol. Res. 20 (6):
767-770.
Oliva, M. Sampaio, M. and Sampaio C. 1988. Purification and partial characterization of a thiol protenas e
inhibitor from Enterolobium contortisiliquum. Biol. Chem. Hoppe- Seyler. 369 (Suppl.): 229-232
Olmos, F. 1997. Tapir as seed disperser and predator. Tapir Specialist Group.pp.1-12
Orea, C. 1987. Estudio Morfogentico en Guanacastle (Enterolobium cyclocarpum). Tesis de Maestra, C.P.
Pg.1-59.Estado de Mxico Mx.
Ortiz, M; Gonzlez, J and Bressani, R. 1989. Nutritional Value of the onacaste (Enterolobium cyclocarpum)
tree fruits on young bovine calfs. Turrialba (IICA). 39 (2): 209-214.
Osborne, T. 1924. The vegetables Protein.2nd ed.Logmam Green .London.125 pages.
Paredes, L. Ordorica, F. Guevara, L. Covarrubias, A. 1985. Las protenas vegetales: Presente y futuro en la
alimentacin. Rev, ciencia y desarrollo. P.p. 331 348. Mxico, D.F.
Penhigton, T y Sarukhan, K. 1968. Manual para la identificacin de campo de los principales rboles
tropicales de Mxico. . Pgs.11-521. INIF-FAO. Mxico.
Prez-Guerrero. 1999. Comunicacin personal.
Prez, R.1997. Los rboles ms sobresalientes de Mxico y del mundo. Revista Chapingo Ciencias Forestales
1:33-38.
Petruccelli and Aon, M. 1994. Relationship between the method of obtencion and the structural and
functional properties of soy protein isolates 2. surfaces propiertis. J. Agric. Food Chem. 46: 2170-
2176.
Proll, J. Petzke, K. Ezeagu, E. and Metges, C. 1998. Low nutritional quality of unconventional tropical crop
seed in rats source. Journal of Nutrition 128 (11): 2014-2022
Raj, S. and Kutty, M. 1986. Food conversion efficiency and nitrogen balance in Cirrhinus mrigala fingerling
fed on tree pelleted feeeds componded with wild legumes. Indian Inst. Sc. 65 (6): 59-64
Ribeiro, W. Franco, A. and Lopes, E. 1987. Efficiency and competitiveness of Bradyrhizobium S.p.p. Strain
on the legume tree Enterolobium contortisiliquum. Rev. Braz. Cienc. 10 (3): 219-225.
Ricker, M. y Daly, D. 1998. Botnica econmica en bosques tropicales. pag. 73-74
Editorial Diana. Mxico D.F.
Rocha, O. and Lobo, A. 1996. Genetic variation and differentiation among five populations of the Guanaste
tree (E. Cyclocarpum) in Costa Rica. Int. Journal Plant SCI. 157(2): 234-239.
Rosales, M. Lared, M. Cuesta, A. Anzola, H. and Hernndez, L. 1989. Use of tree foliages in the control of
rumen proptozoa. Livestok Procuduction for Rural Development. 1 (1): 78-84
Rosemberg, M 1996. Protein analysis and purification. BenchtopTechniques. Birkhauser Pp.112-114.U.S.A.
Rutiaga, Q. Windeisen, E. and Shumacher, P. 1998. Antifungal activity of heartwood extracts from Dalbergia
granadillo and Enterolobium cyclocarpum. Institu fur Holzforschung der Universitat Munchen
,Winzererstr.45,D-807997 Abstrac Volume 53 ( 5): pp.308-330
Ryland, B. 1996. Neotropical primates. Primate Specialist Group 4 (4):7-25
Rzedowski, D. y Mc Vaugh, R. 1966. La Vegetacin de la Nueva Galicia. Contribution from the University
of Michigan Herbarium P.p. 16-17.U.S.A.
Rzedowski, D. 1986. La Vegetacin de Mxico. Pgs.9-432 Edit. Limusa. Mxico.
Saenz, R. y Fournier, O. 1982. Enterolobium cyclocarpum (Jacq) Griseb; un nuevo hospedero para Ravenalia
Lager Heimiana. Diet. 32: 333-336
Sampaio, M. Motta, S. Oliva, M. Araus, M. Stella, R. Tanaka, A. and Batista, F. 1992. Action of plant
protenase inhibitor on enzym of the kalikrein kinim system. Agents Action Suppl. 36: 191-199
Serratos, J. 1989. Utilizacin de semillas de parota (Enterolobium cyclocarpum) para la alimentacin humana.
Tesis de Maestra. 1-65.Universida deGuadalajara.Guad.Jal. Mx.
Siemens, H. and Johnson, C. 1996. Bruchid oviposition patterns beneath guanacaste trees (Mimosaseae) in
Venezuela: probable consecuences of extint seed dispersers. Biotropica. 28(1): 96-104.
Siepaio, Muriel, and Claude, J. Meunier. 1995. Polimerization of soybean proteins and spinach rubisco by
FXIII with respect too the laveling of reactive glutaminyl residues. J. Agric. Food Chem. 43, 568-573.
Si-Yin Chung, Abul, H. Ullah, and Timothy, H. Sanders. 1994. Peptide mapping of peanut proteins:
Identification of peptides as potential Indicators of peanut maturity. J. Agric. Food Chem. 42: 623-26.
Silva, G. Oliva, M. Sampaio, M. Araujo, M. and Sampaio, C. 1994. Isolation and partial characterization of
endopeptidase from Enterolobium contortisiliquum seeds. Braz. J. Med. Biol. Res. 27(6): 1294-1302
Sotelo, A. 1981. Leguminosas Silvestres, Reserva de Protenas para la alimentacin del futuro ICT 3;28-32
Sotelo A. Giral F. Lucas, B. and De la Vega, A. 1978. Chemical composition content in fifteen leguminous
seeds. Quart. D. Crude Drug. Res. 16: 143-9
Sotelo, A. Lucas, B. Uvalle A. And Giral, F. 1980. Chemical composition and toxic factors content of sixteen
leguminous seeds(11) Quart. D. Crude Drug. Res. 18: 9-16
Sotelo, A. Lopez, H. Hernndez, M. Infante A. y Cruz, M. 1978. Inhibidores de tripsina y hemaglutininas en
algunas leguminosas comestibles. I.M.S.S. 9:1-15
Souza, M. Richardson, M. Fonte, W. and Morhy, L. 1994. Homology between the seeds cytolisin enterolobin
and bacterial aerolysina. J. Protein Chem. 13 (18): 659-667.
Souza, M. Morhy, L. Richardson, M. and Hilder, V. 1993. Effects of the cytolytic seed protein enterolobin on
coleopteran and lepidopteran insect larvae. Entomol. Exp. Appl. 69 (3) 231-238.
Standley, P. 1922. Trees and shrubs of Mexico contrib V.S. Nat Herb 23 (Part 2): 171-515.U.S.A.
Steel y Torrie. 1985. Bioestadsticas Principios y Procedimientos. Pg 1-422. Editorial McGraw Hill. Mx.
Sumerfield, R. and Bunting, A. 1980. Advances in Legume Science. Pp.8-475. U.S.A.
Techniques Han Book 1985. Aminoacid Analysis Theory. Pp.1-84.U.S.A.
Thirunavoukkarasu, M. and Brahman, M. 1999. Vegetative Propagation of Enterolobium cyclocarpum
(Jacq.) Griseb. By Coppice Shoot Cuttings. Journal of Sustainable Forestry 8(1): 27-34.
Thomas, C. Devasia, P. Kundikutty, N. and Nandakumaran, M. 1976. Studies of feeding of goats 3;
evaluation of studies of the nutritive value of raintreel Enterolobium saman or samanae saman fruit
meal for growth. Kerala journal of Veterinary Science7 (1): 13-19
University of Essex, Colchester, UK. 1994. Gel Elentrophoresis Essential Data
University of heart Fordshire, Hatfield, Uk. 1994. Methods in Molecular Biology. Volume 32.Pp.1-200.
England.
USDA Forest Service. 1988. P.p. 1033-1038
VaintraubIosif, A. and Haram, B. Yattara. 1995. Proteolysis of kunitz soybean trypsin Inhibitor. Influence on
its activity. J. Agric. Food Chem. 43: 862-866.
Valle de Souza, M. and Morhy, L. 1989. Enterolobin a hemolytic protein from Enterolobium contortisiliquum
seeds (leguminosae-mimosoideae) purification and characterization. Ann. Acad. Braz. Cienc. 61 (4):
405-412
Vargas, M; F. 1999. Compendio de rboles histricos y notables de Mxico. Instituto Nacional de Ecologa.
Pg.1-24.Mxico D.F.
Vzquez-Yaez, C .y Prez, G. 1977. Notes on the morphology seed, anatomy and physiology of the seeds of
Enterolobium cyclocarpum. Turrialba. 27: 27-430.
Velasco, A. Malgarejo, V. y Velasco, N. 1996. Conversin alimenticia,ganancia de peso y rendimiento en
canal de novillos alimentados con diferente proporcin de fruto de parota (E. Cyclocarpum). XX
Congreso Nacional de Buiatra. Acapulco, Gro. Memorias. 301-304.
Villalobos, F. y Bianchi, G. 2000. Abortos de semillas de Enterolobium cyclocarpum ( mimosoideae ):efecto
de la posicin relativa dentro del fruto. .Pg. 1-2. Instituto Centroamericano de Biologa y
Conservacin. San Jos Costa Rica.
Walter, J. Wolf, R. Peterson, E. and Mardell, L. Schaer, 1992. Preparative reversed-phase high-performance
liquid chromatography of soybean proteins and characterizarion of fractions by gel electrophoresis. J.
Agric. Food Chem. 40: 1809-1816.
Westermeier, R. 1997. Electrophoresis in practice. A guide to methods and applications of DNA and protein
separations. V. C. H. Second Edition Pp.1-44.U.S.A.
World Conservation Monitoring Center 1992. Pp. 1050-1055.U.S.A.