Tema 4 - Ingenieria Genetica Plantas

TEMA04: 04 UNIDADII:INGENIERAGENTICAAPLICADAALOSMICROORGANISMOS:
Elaboradopor:Ing.GloriaMaraMamaniGamarra 2013I
UNCP - Facultad de Ciencias Aplicadas - E.A.P. Ingeniera Agroindustrial Ctedra: Biotecnologa Catedrtica: Ing. Gloria Mara Mamani Gamarra Unidad II - Tema 5: Ingeniera Gentica aplicada a las Plantas
Plantas transgnicas
Tcnicas de transformacin de plantas
Especies transformadas
Beneficios y Riesgos
Cultivos de transgnicos en el mundo
Plantas transgnicas
Las plantas transgnicas o plantas modificadas genticamente son aquellas plantas a las que se han introducido un DNA exgeno en su genoma. El gen que proviene de otro organismo se denomina transgn y puede provenir de otras especies de plantas, de animales, de bacterias, de virus y de hongos, y muchas veces poseen combinaciones de ellos, ya que se necesitan armar complejos sistemas moleculares para garantizar la expresin de los genes forneos.
Construccin gnica
Figura 01: Construccin gentica. (1) Identificacin del gen de inters en este caso el gen que codifica una protena insecticida contra orugas que afectan a cultivos, esto de la bacteria Bacillus thruringiensis , (2) aislamiento del gen tcnicas del DNA recombinante, (3) integracin del trangen al genoma de la planta.
Elaborado por Ing. Gloria Mara Mamani Gamarra, Ing. David Dany Garca Ventocilla
Plantas transgnicas
Plantas transgnicas
Los genes que acompaan a los genes que otorgan la caracterstica deseada de la planta se llaman promotores y reguladores y son de elevada expresin (llamados enhancers). de virus, convencionalmente Estos genes provienen
Enhancer: secuencia de un gen que activa un promotor, aumentando la expresin gnica Enhancer = UAS = Upstream Activation Sequences Protena que codifica el enhacer (protena de unin del enhancer)
puesto que stos tienen mayor capacidad de expresin que los celulares (por las caractersticas infecciosas de los virus, que hacen que el sistema de expresin tenga prioridad con su genoma antes que con el de la clula) y de esta forma de garantiza que el material Figura 02: Un enhancer ("potenciador") o amplificador es una corta regin del ADN eucariota que puede unirse protenas ( (factores de transcripcin) p )p para aumentar los niveles de transcripcin p de g genes en un g grupo p de g genes. Un con p enhancer no tiene porqu estar localizado cerca de los genes sobre los que acta, ni siquiera en el mismo cromosoma. TF: Factor de Transcripcin: Un factor de transcripcin es una protena que participa en la regulacin de la transcripcin del ADN, pero que no forma parte de la ARN polimerasa.
Factor de trancripcin Para interaccionar con el complejo preininciador ( p (PIC) ) se forma un bucle en el DNA.
introducido se transcriba y se traduzca.
Plantas transgnicas
Plantas transgnicas
El desarrollo de las plantas se ha justificado desde sus inicios con la premisa de proporcionar beneficios a la humanidad mundo. por los En y surgir la como una son que el alternativa para apaliar el hambre en el actualidad negativos sobre fuertemente cuestionados y criticados efectos potencialmente tienen
Gigantes de la Biotecnologa
ambiente y la salud, y por el control del mercado que ejercen las compaas multinacionales dueas de las patentes de las plantas transgnicas las cuales introdujeron la tecnologa Terminator.
Figura 03: Empresas comercializadoras de semillas transgnicas. Actualmente Monsanto, Novartis, DuPont y Aventis manejan el 32% del mercado mundial de semillas y prcticamente el 100% del mercado mundial de semillas transgnicas.
Plantas transgnicas
Plantas transgnicas
La tecnologa Terminator, que
Tecnologa Terminator
inicialmente se cre como un medio de evitar la propagacin indeseada de plantas transgnicas, hoy es la herramienta perfecta para el dominio de los mercados, ya que los agricultores deben comprar cada vez la semilla a la empresa, porque la que obtienen de la cosecha es estril y no se puede volver a sembrar. Ya que dicha tecnologa, como antes hemos hecho referencia, hace que se activen un conjunto de genes que vuelven inviable al embrin de la semilla, impidiendo que sta germine en la prxima siembra.
Plantas transgnicas
Plantas transgnicas
Hablar de plantas transgnicas seguras en la actualidad es todava algo incierto ya que los genetistas controlan los efectos primarios (o lo que se quiere conseguir), pero no pueden controlar los efectos secundarios (mediados por procesos naturales de recombinacin y mutacin), que dan lugares a resultados no deseados e impredecibles. Las compaas controlan el transnacionales mercado de que los
No aceptacin de transgnicos
transgnicos en la actualidad, ponen como caballo de batalla a los efectos primarios de sus nuevas y privilegiadas variedades, pero las denuncias de efectos nocivos a la salud y el ambiente por p la ingesta g de alimentos Figura 04: Protestas contra la compaa biotecnolgica Monsanto. transgnicos, que se venden de manera abierta, aumenta da a da.
Plantas transgnicas

Un paso crucial en la obtencin de una planta transgnica es la transferencia del DNA exgeno a la misma mediante diversas tcnicas que se mencionan a continuacin: a) Transferencia gentica con
Agrobacterium tumefaciens
Agrobacterium tumefaciens (b) Transferencia gentica con
protoplastos (c) La biolstica es otro mtodo difundido, consiste en bombardear las clulas con partculas metlicas microscpicas recubiertas del DNA que se desea introducir. q Figura 05: Agrobacterium tumefaciensvista al microscopio.
Plantas transgnicas

a) Mecanismo va Agrobacterium tumefaciens. Agrobacterium tumefadens es una bacteria comn del suelo que infecta a las plantas y produce una tumefaccin o tumor del tejido, conocido como agalla de corona. Se ha demostrado que la causa de esta agalla plsmido relativamente g grande, , de es un p 200.000 pares de bases, denominado Ti (del ingls Tumour inducing) que est contenido en la bacteria. Una regin de este plsmido (T-DNA) se integra al DNA de la clula vegetal hospedadora y expresa alrededor de ocho genes, algunos de los cuales promueven el crecimiento del tumor y la produccin de unos aminocidos llamados opinas que la bacteria usa como alimento. El plsmido T se utiliz eficientemente como vector para la introduccin de genes en plantas con el uso de las propiedades de integracin de la regin T-DNA. Para ello se suprimieron los genes responsables del crecim1ento tumoral tumoral.
Agrobacterium tumefaciens
Figura 06: Tumores en plantas provocados por la infeccin de A. tumefaciens.

Plantas transgnicas

Estructura del plsmido Ti A b t i tumefaciens Agrobacterium t f i T DNA: Regin que se transfiere al genoma de la planta. Los genes que contiene slo se transcriben y traducen en las clulas de la planta. LB: Borde izquierdo. RB: Borde derecho. Onc: Oncogenes, genes para la sntesis de auxina y citoquinina. Ops: Genes para la sntesis de opinas. Vir: Genes de virulencia. OriV: Origen de replicacin en A. tumefaciens que permite la estabilidad del plsmido dentro de la bacteria. de
Estructura del plsmido Ti de Agrobacterium tumefaciens
Figura 07: Estructura del plsmido Ti de Agrobacterium tumefaciens

Plantas transgnicas

Mtodo de infeccin Agrobacterium t tumefaciens f i La bacteria se gua por las sustancias que la planta excreta de heridas pequeas, por las que se introduce (fenoles como acetosiringona, (fenoles, acetosiringona vainillina y p(OH)benzoico). Se ubica entonces en los espacios intercelulares y desde all transfiere a las clulas de la planta el fragmento de T-DNA o ADN-T, que se integra en alguna zona del genoma de la planta. l t Los L mecanimos i principales i i l se mencionan a continuacin: 1. Unin de las bacterias en la superficie de la clula husped. 2. La induccin de los genes vir por las seales de la planta. 3. Produccin de una copia de ADN-T. 4. Exportacin y transporte al ncleo de la clula vegetal. 5. Integracin de T-ADN en un p cromosoma del husped.
Mtodo de infeccin A. tumefaciens
Figura 08: Mtodo de infeccin Agrobacterium tumefaciens

Plantas transgnicas
Ciclo de la enfermedad agalla de corona

Las clulas transformadas se dividen rpidamente
T-ADN se integra en el cromosoma de la planta y la clula vegetal se transforma
T-DNA sale bacteria y entra en la clula vegetal herida
hiperplasia y la hipertrofia de clulas conduce a la formacin de agallas
vescula antiguo con varios nuevos centros de actividad agallas en el tallo y la raz de la planta muy infectado
Bacteria se une a la clula vegetal herida
Figura 09: Ciclo de la enfermedad agalla de corona

Plantas transgnicas

Transformacin t tumefaciens f i La obtencin de la plantas resistentes a los insectos fitfagos se ha hecho realidad con la obtencin de plantas transgnicas portadoras de un gen bioinsecticida de Bacillus thruringiensis . de Agrobacterium
Transformacin de Agrobacterium tumefaciens
Figura 10: Transformacin de Agrobacterium tumefaciens

Plantas transgnicas
Obtencin de la plantas resistentes a los insectos fitfagos
La obtencin de la plantas resistentes a los insectos fitfagos se ha hecho realidad con la obtencin de plantas transgnicas portadoras de un gen bioinsecticida de Bacillus thruringiensis . Bacillus thuringiensis (o Bt) es una bacteria grampositiva del suelo que en los estadios de esporulacin produce unos cristales de protenas de propiedades insecticidas. A estas protenas se las denomina cry (del ingls crystal) por su capacidad de formar cristales o -endotoxinas endotoxinas por su acumulacin en el interior de las bacterias y su carcter txico. Las protenas cry provocan la lisis de las clulas intestinales de los insectos. Estos bioinsecticidas se caracterizan por su especificidad, ifi id d pues slo l son txicos t i en escarabajos, moscas y mariposas (grupos de insectos causantes de la mayora de las plagas), y porque son prcticamente inocuas en humanos.
Figura 11: La obtencin de la plantas resistentes a los insectos fitfagos

Plantas transgnicas

(b) Transferencia protoplastos: gentica con
Transferencia gentica con protoplastos
Los protoplastos son clulas de cualquier tejido vegetal a las que se les ha liberado de la pared celular que es la barrera que impide el paso de grandes molculas como el ADN. La pared celular se elimina digirindola con un enzima. El gen que se ha de transferir se adiciona al medio de cultivo del protoplasto. Si se somete un protoplasto a descargas elctricas creamos diminutos poros en la membrana por los cuales puede penetrar el ADN. A este mtodo se le denomina electroporacin. Tambin podemos ayudar a introducir ADN en un protoplasto empleando sustancias como el polietilenglicol que desestabiliza la membrana celular. La dificultad principal que p q plantea este mtodo estriba en el escaso desarrollo de las plntulas generadas a partir de protoplastos. Est tcnica se emplea para la transformacin de las gramneas. En 1988 se obtuvo por primera vez cereales transgnicos a partir de la regeneracin de protoplastos con genes exgenos en medio de cultivo para clulas vegetales.
Figura 12: Transferencia gentica con protoplastos

Plantas transgnicas
Transferencia gentica por Biobalstica
(c) Transferencia gentica con el "can de partculas" (Biobalstica): Mtodo para transformar cualquier tipo de plantas. La biolstica, tambin mal llamada biobalstica, es un mtodo de transferencia genes en una clula, , con el directa de g objetivo de crear organismos transgnicos. Es el mtodo de transferencia directa ms utilizado para transformar las clulas vegetales.1 Consiste en propulsar los genes de inters dentro de las clulas con la ayuda de un can de ADN, ADN con lo cual se modifica el ADN de las clulas. Se utilizan microesferas de metal cubiertas de ADN (bolas de oro o tungsteno de un micrn de dimetro). Se proyectan a enorme velocidad sobre las clulas que deben modificarse con el fin de cruzar su pared. Estas bolas se retrasarn progresivamente cruzando las distintas capas celulares. Algunas de las clulas alcanzadas van entonces a integrar espontneamente los genes en su genoma. Pero el ncleo de la clula cl la incluye incl e el ADN de manera aleatoria.
Esquema del caos gnico Escape de gases Percutor Micropartculas
Membrana de retencin
Partculas recubiertas con DNA que codifica los genes deseados Caos de partculas
Cartucho de fogueo
Bala de plstico
Clulas o tejido blanco
Antes del bombardeo
Despus del bombardeo
Figura 13: Transferencia gentica por Biobalstica

Plantas transgnicas
Cultivos transgnicos
Tabla 01.-Especies comerciales ms importantes en las que se han conseguido plantas transgnicas y porcentaje de experimentos de campo. Especie Maz Nabo Papa p Tomate Soja Algodn Tabaco Total Experimentos de campo [%] 28 18 10 9,5 7,5 6 45 4,5 83,5
Plantas transgnicas
Especies vegetales transformadas y comercializadas

Tabla 02: Especies vegetales transformadas y comercializadas
Nombre comn lamo Albaricoque Alerce Alfalfa Algodn A i Apio Arndano Mtodo de transformacin Agrobacterium Biobalstica Agrobacterium Agrobacterium Agrobacterium Agrobacterium A b t i Agrobacterium Agrobacterium Biobalsitca Agrobacterium Biobalstica Electroporacin Microinyeccin Agrobacterium Biobalstica Agrobacterium Agrobacterium Polietienglicol Agrobacterium Agrobacterium Agrobacterium Agrobacterium Agrobacterium Electroporacin Agrobacterium Agrobacterium Agrobacterium Agrobacterium Nombre comn Lechuga Lino Maz Manzana Melocotn Meln Mostaza Nabo Patata Papaya Pepino Petunia Rbano Remolacha Soja Mtodo de transformacin Agrobacterium Agrobacterium Agrobacterium Biobalstica Electroporacin Agrobacterium Agrobacterium Agrobacterium Agrobacterium Agrobacterium Electroporacin Microinyeccin Agrobacterium Biobalstica Agrobacterium Agrobacterium Agrobacterium Agrobacterium Agrobacterium Biobalstica Agrobacterium Biobalstica Electroporacin Polietienglicol Agrobacterium Biobalstica Agrobacterium
Arroz Brcoli Caa de azcar Ciruelo Ctricos Clavel Crisantemo Esprrago Frambuesa Fresa Girasol Guisante Hinojo Kiwi
Tabaco Trbol Trigo Zanahoria
Plantas transgnicas Beneficios y riesgos
Tcnicas de transformacin de plantas Beneficios
Beneficios: Los beneficios del desarrollo de las plantas transgnicas hacen referencia sobretodo a incrementar la produccin de alimentos. 1. Resistencia a insectos. 2. Resistencia a herbicidas. 3. Mejora de la productividad y produccin. 4. Mejora de la calidad nutritiva. 5. Control de enfermedades virales. 6. Tolerancia al estrs ambiental.. 7. Produccin de frutos ms resistentes. 8. Produccin de plantas bioreactoras. 9. Fijacin de nitrgeno. 10. Mejora con fines ornamentales. 11. Produccin de frmacos y vacunas.
Figura 14: Mejora de la productividad y produccin

Figura 15: Control de enfermedades virales.

Figura 16: Resistencia a herbicidas.

Figura 17: Mejora de la calidad nutritiva.

Figura 18: Obtencin de productos de Calidad

Tcnicas de transformacin de plantas Riesgos
Riesgos: 1 Efectos de los Insecticidas Bt ya 1. a otras insectos no relacionados con las plantas de cultivo. 2. Produccin de sper plagas. 3. Resistencia a antibiticos. 4. Inestabilidad gentica. 5. Interaccin ecolgica negativa. 6. Riesgo a la biodiversidad. 7. Transferencia horizontal de genes. 8. Aparicin de alergias.
Figura 19: Propaganda en contra de los alimentos trangnicos

Plantas transgnicas
Cultivos transgnicos en el mundo

La superficie mundial de cultivos modificados genticamente (MG) alcanz las 170,3 millones de hectreas en 2012. Un total de 17,3 millones de agricultores sembraron semillas biotecnolgicas el pasado ao, 600.000 agricultores ms que en p 2011. Ms de la mitad de la superficie cultivada (52%) se encuentra en pases en vas de desarrollo. El 48% restante corresponde a tierras en pases desarrollados. Ms del 90% de los agricultores que sembraron semillas MG en 2012 (ms de 15 millones) fueron agricultores de escasos recursos de pases en vas de desarrollo. En estos pases la adopcin de estos cultivos fue 3 veces ms rpido que en los pases desarrollados. desarrollados Un total de 28 pases cultivaron semillas MG en 2012. De stos 20 fueron pases en vas de desarrollo y 8 eran industrializados. En estos 28 pases viven aproximadamente el 60% de la poblacin mundial (4 mil millones de personas).
Cultivos Biotecnolgicos
Figura 20: cultivos Biotecnolgicos en el mundo. Los diez pases con ms de 1 milln de hectreas cultivadas con plantas transgnicas, p g , fueron: Estados Unidos ( (69,5 , millones de hectreas), ), Brasil ( (36,6 , millones de hectreas), ), Argentina (23,9 millones de hectreas), Canad (11,6 millones de hectreas), India (10,8 millones de hectreas), China (4 millones de hectreas), Paraguay (3,4 millones de hectreas), Sudfrica (2,9 millones de hectreas), Pakistn (2,8 millones de hectreas), Uruguay (1,4 millones de hectreas) y Bolivia (1,8 millones de hectreas).
Plantas transgnicas
Cultivos Biotecnolgicos
Hace 15 aos la Unin Europea permiti por primera vez el cultivo de organismos modificados genticamente (OMGs). El maz Bt fue pionero en el marco comunitario convirtindose en el primer cultivo biotecnolgico al que tenan acceso los agricultores europeos. Desde entonces, la apuesta por estas semillas ha ido creciendo de forma constante reflejando la confianza de los agricultores por esta tecnologa. Espaa se encuentra a la cabeza en la p con el mayor y nmero Unin Europea de hectreas cultivadas de maz Bt.
Plantas transgnicas
Especies vegetales transformadas y comercializadas
En la Unin Europea p no se han autorizado nuevas construcciones genticas desde 1998, por lo que las modificaciones genticas aprobadas, con los fines que se mencionan, hasta la fecha son las se muestran el figura adjunta. adjunta

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Cultivos de transgnicos en el mundo

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introducido se transcriba y se traduzca.

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Agrobacterium tumefaciens (b) Transferencia gentica con

Tcnicas de transformacin de plantas

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Tcnicas de transformacin de plantas

Figura 06: Tumores en plantas provocados por la infeccin de A. tumefaciens.

Tcnicas de transformacin de plantas

Cultivos de transgnicos en el mundo

Tcnicas de transformacin de plantas

Estructura del plsmido Ti de Agrobacterium tumefaciens

Figura 07: Estructura del plsmido Ti de Agrobacterium tumefaciens

Tcnicas de transformacin de plantas

Cultivos de transgnicos en el mundo

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Mtodo de infeccin A. tumefaciens

Figura 08: Mtodo de infeccin Agrobacterium tumefaciens

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Ciclo de la enfermedad agalla de corona

T-ADN se integra en el cromosoma de la planta y la clula vegetal se transforma

T-DNA sale bacteria y entra en la clula vegetal herida

hiperplasia y la hipertrofia de clulas conduce a la formacin de agallas

Bacteria se une a la clula vegetal herida

Figura 09: Ciclo de la enfermedad agalla de corona

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Transformacin de Agrobacterium tumefaciens

Figura 10: Transformacin de Agrobacterium tumefaciens

Tcnicas de transformacin de plantas

Cultivos de transgnicos en el mundo

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Obtencin de la plantas resistentes a los insectos fitfagos

Figura 11: La obtencin de la plantas resistentes a los insectos fitfagos

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Cultivos de transgnicos en el mundo

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Transferencia gentica con protoplastos

Figura 12: Transferencia gentica con protoplastos

Tcnicas de transformacin de plantas

Cultivos de transgnicos en el mundo

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Transferencia gentica por Biobalstica

Esquema del caos gnico Escape de gases Percutor Micropartculas

Clulas o tejido blanco

Antes del bombardeo

Despus del bombardeo

Figura 13: Transferencia gentica por Biobalstica

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