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CLASIFICACIN DE LAS BACTERIAS. CARACTERSTICAS GENERALES DE LAS FAMILIAS ENTEROBACTERIACEAS, MICROCOCACEAS, VIBRIONACEAS Y ESTREPTOCOCACEAS NDICE

1. INTRODUCCIN ................................................................................................................ 1 2. SISTEMA DE CLASIFICACIN UNIVERSAL PARA LAS BACTERIAS: BERGEY'S MANUAL OF DETERMINATIVE BACTERIOLOGY. ........................................................... 1 3. F. ENTEROBACTERIACEAS ............................................................................................ 3
3.1. ENTEROBACTERIAS. CLASIFICACIN ............................................................................................. 3 3.2. INTERS CLNICO DE LAS ENTEROBACTERIAS: ACCIN PATGENA .................................... 5 3.3. AISLAMIENTO. CARACTERES BIOQUMICOS. DIAGNSTICO BACTERIOLGICO DE LA FAMILIA ENTEROBACTERIACEAS ............................................................................................................... 5

4. GNERO VIBRIO, FAMILIA VIBRIONACEAS. ............................................................ 8

4.1. CONCEPTO Y CARACTERES DEL GNERO VIBRIO ...................................................................... 8 4.2. CLASIFICACIN. ESPECIES MS IMPORTANTES DEL GNERO VIBRIO .................................. 8 4.3. AISLAMIENTO. CARACTERES BIOQUMICOS. DIAGNSTICO BACTERIOLGICO DE VIBRIO ................................................................................................................................................................. 8

5. GNERO STAPHYLOCOCCUS. (F. MICROCOCCACEAS) .......................................... 9

5.1. CLASIFICACIN. ESPECIES MS IMPORTANTES DEL GNERO STAPHYLOCOCCUS ........... 9 5.2. ACCIN PATGENA E INTERS CLNICO ....................................................................................... 9 5.3. AISLAMIENTO. CARACTERES BIOQUMICOS. DIAGNSTICO BACTERIOLGICO DE STAPHYLOCOCCUS ........................................................................................................................................ 10 Aislamiento: .................................................................................................................................... 10 5.3.1. Caracteres bioqumicos: .................................................................................................................. 10 5.3.2. Diagnstico bacteriolgico de Staphylococcus: .............................................................................. 10 5.3.3.

6. GNERO STREPTOCOCCUS. (F. ESTREPTOCOCACEAS)....................................... 11

6.1. CONCEPTO Y CARACTERES DEL GNERO STREPTOCOCCUS. ................................................ 11 6.2. CLASIFICACIN. ESPECIES MS IMPORTANTES DEL GNERO STREPTOCOCCUS ............ 11 6.3. ACCIN PATGENA E INTERS CLNICO ..................................................................................... 12 Streptococcus del grupo A (S. pyogenes). ....................................................................................... 12 6.3.1. Streptococcus del grupo D. ............................................................................................................. 12 6.3.2. Streptococcus del grupo N. ............................................................................................................. 12 6.3.3. 6.4. AISLAMIENTO. CARACTERES BIOQUMICOS. DIAGNSTICO BACTERIOLGICO DE STREPTOCOCCUS ........................................................................................................................................... 12

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1. INTRODUCCIN
En general, las formas de vida pertenecen a dos reinos: el animal y el vegetal. Sin embargo, existen formas muy sencillas de vida que no son fciles de clasificar taxonmicamente. ste sera el caso de los microorganismos. Algunos de ellos presentan caracteres del reino animal, como su capacidad de movimiento, produccin de energa, etc, mientras que otros microorganismos se asocian a vegetales, porque presentan clorofila y obtienen energa a partir de la luz por fotosntesis, tal y como lo hacen las plantas verdes. Precisamente, por estas similitudes y diferencias con ambos reinos, ha sido necesario adoptar decisiones arbitrarias que han permitido poder clasificar taxonmicamente los microorganismos. Todo comenz con Darwin, en 1859, cuando consider a los microorganismos como seres vivientes que no tenan porque pertenecer claramente a uno u otro grupo. Posteriormente Haeckel, en 1866, fue ms all, y habl de un tercer reino denominado protista que inclua seres vivos con caractersticas animales y vegetales y cuya organizacin era demasiado sencilla. A partir de aqu, y segn el grado de complejidad de sus estructuras celulares, los protistas se dividieron en: 1. Protistas superiores, que corresponden a hongos, protozoos y casi todas las algas que poseen clulas eucariotas (ncleo verdadero) semejantes a plantas o animales y englobados en estos reinos. 2. Los protistas inferiores, que incluyen las bacterias y el grupo de algas cianofceas, que se caracterizan por ser clulas procariotas. Actualmente las bacterias forman un reino propio denominado MONERAS. Durante el siglo XX se ha intentado crear un sistema de clasificacin til y universalmente aceptado para las bacterias. En la actualidad el sistema de clasificacin ms aceptado a nivel mundial es el Manual de Bergey (Bergey's Manual of Determinative Bacteriology), cuya primera edicin apareci en 1923. Ha permitido clasificar todas las bacterias hasta el momento encontradas en un total de 19 secciones subtituladas con nombres comunes de tipo descriptivo y afines, tal y como se indicar a continuacin. Aqu van a ser expuestas las ms importantes, aunque para ms detalle, sera conveniente la consulta de la octava edicin de Bergey's Manual (1974). La novena edicin del Manual (1994) para identificacin (no para clasificacin, que sera el Manual Bergeys de bacteriologa Sistemtica) clasifica las bacterias en cuatro categoras: 1. Eubacterias gram negativas con pared celular: grupos del 1-16. 2. Eubacterias gram positivas con pared celular: grupos del 17-29 3. Eubacterias carentes de pared celular: grupo 30 4. Arqueobacterias: grupos 31-35

2. SISTEMA DE CLASIFICACIN UNIVERSAL PARA LAS BACTERIAS: BERGEY'S MANUAL OF DETERMINATIVE BACTERIOLOGY.
Las bacterias se encuentran clasificadas dentro del reino Moneras, donde se incluye un total de 19 secciones. - Seccin V: en dicha seccin nos vamos a encontrar el Orden Espiroquetales, con la Familia Espiroquetaceae, que engloba un total de 5 gneros. Aqu s se encuentran muchas especies patgenas para el hombre Gneros: Spirochaeta, Treponema, Borrelia, Leptospira y Cristispira Ejemplo de especies patgenas para el hombre: Treponema pallidum (sfilis), Borrelia recurrentes (fiebres recurrentes), Leptospira spp (leptospirosis).

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- Seccin VI: en dicha seccin se encuentran las bacterias curvadas o espiraladas e incluye la Familia Espiracaceae con los gneros Spirilum y Campylobacter, alguna de cuyas especies se asocia a procesos patgenos del hombre. Adems, dentro de dicha seccin, existe un total de 4 gneros de afiliacin dudosa, no asociados a procesos infecciosos en el hombre. - Seccin VII: en esta seccin se incluyen bacilos y cocos aerobios Gram-. Se va a dividir en un total de 5 familias. Nos encontramos con bacterias con gran importancia clnica para el hombre, como el gnero Pseudomonas, el Gnero Brucella, agente etiolgico de las brucelosis o fiebres de malta en el hombre, o algunas especies del Gnero Bordetella, como B. pertussis, responsable de la tosferina. - Seccin VIII: en esta seccin se encuentran los bacilos Gram- anaerobios facultativos. Est formada por dos importantes familias: Familia Enterobacteriaceae Familia Vibrionaceae La Familia Enterobacteriaceas est formada por un total de 12 gneros: Gnero Escherichia Gnero Serratia Gnero Salmonella Gnero Proteus Gnero Shigella Gnero Yersinia Gnero Enterobacter Gnero Edwardsiella Gnero Citrobacter Gnero Hafnia Gnero Klebsiella Gnero Erwinia Estos gneros presentan especies patgenas para el hombre, por ejemplo Salmonella typhi (fiebres tifoideas), Shigella disenteriae (disentera bacilar), Yersinia pestis (peste), etc. La familia Vibrionaceas se caracteriza por presentar forma de coma o bacilo incurvado. Incluye un total de 5 gneros, entre ellos el Gnero Vibrio, que presenta especies patgenas para el hombre, como por ejemplo la especie Vibrio cholerae, agente etiolgico del clera. Adems, en la seccin VIII se incluye aproximadamente un total de 9 gneros de afiliacin hasta el momento dudosa. Dentro de estos gneros se encuentran especies con inters clnico para el hombre, como es el caso del Gnero Haemophylus con la especie H. influence, responsable de algunas meningitis en nios. Seccin X: en esta seccin se encuentran cocos y cocobacilos Gram- y aerobios. Se incluye la Familia Neiseriaceae con los gneros Neisseria, Branhamella, Moraxella y Acinetobacter, con importancia clnica para el hombre en alguna de s especies como por ejemplo N. meningitidis (meningitis) y N. gonorroheae (gonorrea). - Seccin XIV: en esta seccin se encuentran bacterias en forma de coco y Gram+. Familia Micrococaceas, con 3 gneros: Gnero Micrococcus, Gnero Staphylococcus y Gnero Planococcus. Alguno de stos presenta gran inters clnico para el hombre, como S. aureus. Familia Streptococaceas, con un total de 5 gneros, siendo el Gnero Streptococcus el ms importante de todos ellos debido al efecto patgeno para el hombre de alguna de sus especies, como por ejemplo, S. pyogenes. - Seccin XV: en esta seccin se encuentran las bacterias bacilares y cocoideas formadoras de endosporas. Incluye la Familia Bacilaceas: Gnero Bacillus Gnero Clostridium De todos estos gneros los ms importantes desde un punto de vista clnico son el Gnero Bacillus [p.e. B. antrhacis (antrax o carbunco)] y el Gnero Clostridium [p.e., Cl. tetani (ttanos)] y Cl. botulinum (botulismo), etc.

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- Seccin XVI: aqu se encuentran las bacterias bacilares Gram- no formadoras de esporas. Incluye la Familia Lactobacilaceas con el Gnero Lactobacillus, que tiene inters en la industria alimenticia y otros gneros como Listeria. - Seccin XVII: en esta seccin se encuentran los actinomices y otros microorganismos relacionados. Se incluyen el Orden Actinomicetales, con un total de 7 familias, y otros microorganismos relacionados con esta seccin, tales como el Gnero Corinebacterium. Orden Actinomicetales. Presenta las siguientes familias: Familia Actinomicetaceas, con un total de 5 gneros de los que el ms importante desde un punto de vista clnico para el hombre es el Gnero Actinomyces. Familia Micobacteriaceas, con el Gnero Mycobacterium, que presenta gran importancia clnica por su efecto patgeno, p.ej.: Mycobacterium tuberculosis (tuberculosis) y Mycobacterium leprae (lepra). Dentro de esta seccin se encuentran adems el Gnero Corynebacterium con alguna especie patgena para el hombre, p.e. Corynebacterium diptheriae. - Seccin XVIII: en esta seccin se encuentran todas las Rickettsias, que son bacterias que presentan ciertas similitudes con virus. En esta seccin nos encontramos 2 importantes rdenes: Orden Rickettsiales y Orden Clamidiales. A) Orden Rickettsiales. Incluye las siguientes familias: Familia Rickettsiaceas. Importante, desde un punto de vista clnico para el hombre, es el gnero Rickettsia. B) Orden Clamidiales. Incluye una sola familia: Familia Chlamidiaceas, que presenta un solo gnero, el Gnero Chlamydia, del que se han descrito procesos patgenos para el hombre en alguna de sus especies. - Seccin XIX: esta seccin la forman micoplasmas, que son bacterias que se diferencian del resto porque no presentan pared bacteriana. Aqu se encuentra la Familia Micoplasmaceae con el Gnero Mycoplasma, del que alguna de sus especies se ha asociado a ciertos procesos patgenos.

3. F. ENTEROBACTERIACEAS
Las Enterobacterias corresponden a una gran familia de bacilos o cocobacilos Gramaerobios y/o anaerobios facultativos, mviles (con flagelacin peritrica) o inmviles, que la ltima edicin del Manual de Bergey's clasifica, junto a la Familia Vibrionaceas, dentro de la Seccin VIII. Las Enterobacterias se caracterizan por ser fermentadoras de glucosa con o sin produccin de gas (metabolismo oxidativo-fermentativo), suelen ser huspedes habituales del tracto gastrointestinal del hombre y de los animales, produciendo en muchas ocasiones efectos patgenos de gravedad variable, en otros casos pueden actuar como saprfitos formando parte de la flora gastroinstestinal, aunque tambin como consecuencia de esto se puede encontrar en el agua y en el suelo. Van a ser bastante resistentes a los agentes externos; de ah su amplia distribucin. En muchos casos, las Enterobacterias se pueden comportar como potencialmente patgenas, es decir, cuando las condiciones del husped se lo permiten (bajas defensas) originando numerosas infecciones de tipo oportunista. Esta familia interesa en gran medida para anlisis microbiolgicos porque, adems de ser alterantes de determinados alimentos incluso patgenos, indican la CALIDAD MICROBIOLGICA DE LOS ALIMENTOS. Para ello se realiza un recuento de UFC/g.

3.1.

ENTEROBACTERIAS. CLASIFICACIN

De acuerdo con la ltima edicin del Manual de Bergey's, la Familia Enterobacteriaceas y la Familia Vibrionaceas se encuentran englobadas en la Seccin VIII. Concretamente la Familia Enterobacteriaceas se va a clasificar en funcin de sus caracteres bioqumicos (pruebas
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bioqumicas) y sus propiedades antignicas. Las caractersticas ms importantes de la Familia Enterobacteriaceae son las siguientes: Bacilos o cocobacilos Gram-. Aerobios y anaerobios facultativos. De 1 a 4 m de longitud. Pueden ser mviles (flagelos peritricos) o inmviles. No producen citocromo oxidasa. Oxidasa (-) Fermentan la glucosa en todos los casos, presentando un metabolismo fermentativo. Reducen los nitratos a nitritos y, en ocasiones, a nitrgeno atmosfrico. Son capaces de fermentar otros azcares y alcoholes con la consiguiente produccin de cidos y, en ocasiones, tambin gas. (Estudio realizado en medio KIA). Puede producir gran cantidad de fermentos, como por ejemplo gelatinasas, descarboxilasas, ureasas, galactoxidasas, desaminasas, etc. Algunas son capaces de producir SH 2 como, por ejemplo, Proteus. Otras producen indol, como E. coli, lo que facilita su identificacin. Presenta similitudes bioqumicas con otras familias, como por ejemplo Vibrionaceae; de ah que se estudien conjuntamente, aunque esta ltima es oxidasa (+). As, pues, de acuerdo con todo lo dicho, todas las enterobacterias pueden clasificarse atendiendo a sus propiedades bioqumicas; de hecho en la ltima edicin del Manual del Bergey's se han tomado como base para su clasificacin estudios bioqumicos, que han dado lugar a ms de 20 gneros con un total aproximado de 100 especies; de acuerdo con esto tenemos: Gnero Salmonella: S. choleraeuis, S. typhi, S. paratyphi, S. enteritidis, etc. Gnero Shigella: S. dysenteriae entre las especies ms importantes. Gnero Eschericha: E. coli, E. blattae (especie nueva). Gnero Citrobacter: C. flerundii, entre las especies ms importantes. Gnero Klebsiella: K pneumoniae, K. terrigena, etc. Gnero Enterobacter: E. cloacae, E. aerogenes, etc. Gnero Hafnia. Gnero Serratia: S. marcescens, S. liquefaciens, etc. Gnero Proteus: P. vulgaris, P. miriabilis, etc. Gnero Providencia: P. alcalifaciens, etc. Gnero Morganella: M. morgan, la ms importante. Gnero Yersinia: Y, pestis, Y. enterocolitica, entre las especies ms importantes. Las Enterobacterias siempre fueron clasificadas segn su capacidad para fermentar la lactosa, con la consiguiente produccin de cido, en tres grupos: Enterobacterias fermentadoras rpidas de lactosa (coliformes): Son microorganismos indicadores de la calidad microbiolgica de los alimentos y de la sanidad. Incluyen los gneros Escherichia, Enterobacter y Klebsiella. Enterobacterias fermentadoras de lactosa, ms lentamente:* poco / no coliformes Gneros Citrobacter, Serratia, Hafnia, Yersinia y la especie Shigella sonnei. Enterobacterias no fermentadoras de lactosa (no coliformes), que incluyen los gneros Salmonella, Shigella, Proteus, Morganella, Providencia y Edwardsiella.

Esta clasificacin fue de gran utilidad ya que las enterobacterias patgenas, como por ejemplo Shigella o Salmonella, se incluyen dentro de las no fermentadoras de lactosa, pero existen numerosas excepciones como la Yersinia pestis que es una bacteria que fermenta de forma lenta la lactosa y tambin es muy patgena para el hombre; de ah que esta ltima clasificacin no se utilice demasiado desde un punto de vista taxonmico.

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3.2. INTERS CLNICO DE LAS ENTEROBACTERIAS: ACCIN PATGENA

El inters clnico suscitado por la Familia Enterobacteriaceas estriba en su mayor o menor accin patgena, que va a depender de los siguientes factores: a) Antgenos estructurales que van a proporcionar a la bacteria propiedades antifagocitarias y de resistencia a agentes antibiticos, as como incrementar su capacidad de adherencia a las clulas que infecta. b) Endotoxinas. Son productos txicos que no son vertidos al medio externo pero son responsables en muchos casos de alteraciones vasculares y fiebre. c) Enterotoxinas. Son productos txicos que son vertidos al medio externo por parte de la bacterias ejerciendo una accin altamente txica y directa sobre las clulas, como por ejemplo la toxina de Shigella o algunas cepas de E. coli. Dentro de las Enterobacterias con ms inters clnico distinguimos: Enterobacterias patgenas o muy patgenas para el hombre (Salmonella, Shigella, Yersinia y algunas cepas de E. coli productoras de diarreas. Enterobacterias oportunistas (E. coli, Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Hafnia, Citrobacter, Proteus, Morganella y Providencia). Este tipo de bacterias suele formar parte de la flora Gram (-) del tubo digestivo como saprfitos y en algunas ocasiones podran comportarse como patgenos, siempre y cuando aparecieran factores debilitantes en el husped.

Tabla 1. Efecto patgeno de alguna de las especies ms importantes de la Familia Enterobacteriaceae.

3.3. AISLAMIENTO. CARACTERES BIOQUMICOS. DIAGNSTICO BACTERIOLGICO DE LA FAMILIA ENTEROBACTERIACEAS

Para la identificacin de los distintos gneros y especies de la Familia Enterobacteraceas es necesario partir de unas pruebas directas, un aislamiento en medio de cultivo especfico y una identificacin bacteriana a travs de pruebas bioqumicas. a) Tras la recogida de la muestra se realizar una prueba directa que consiste en una tincin de Gram que en casos positivos deber dar Gram (-). b) Se sometern a un aislamiento a travs de medios selectivos que inhiban el crecimiento de las bacterias Gram (+) permitiendo slo el crecimiento de ciertas Gram (-) como las Enterobacterias. Entre estos medios nos vamos a encontrar con los siguientes: Medio Levine (eosina azul de metileno), medio agar o caldo McConkey, medio xilosa lisina desoxicolato (XLD) para patgenos, medio SS (aislamiento Salmonella Shigella), medio agar lactosado con prpura de bromocresol para aislamiento de coliformes, medio caldo bilis y verde brillante para aislar igualmente

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coliformes, medio agar ENDO, medio agar Hektoen para aislar enterobacterias patgenas, etc. c) El tercer paso de la identificacin de enterobacterias consiste en la realizacin de pruebas bioqumicas que incluyen las siguientes: prueba de Hugh-Leiffson (O/F, oxidacin-fermentacin), que permitir apreciar el metabolismo oxidativo y/o fermentativo (fermentativo para las enterobacterias); prueba en medio KIA (kligleriron-agar), que permitir demostrar si el microorganismo problema utiliza la glucosa y/o lactosa, con o sin produccin de SH 2 y/o gas; prueba del indol en medio lquido peptonado; prueba de la reduccin de nitratos a nitritos en caldos nitratados; prueba de la utilizacin del citrato, determinacin de su movilidad en medio ornitinmovilidad, por ejemplo; prueba de la produccin de la Beta-galactoxidasa (ONPG); prueba del rojo de metilo en medio de caldo glucosado; prueba de la determinacin de la acetoina (prueba de Voges-Proskauer); y finalmente, la prueba para determinar la produccin de desaminasas, que proporciona un carcter diferencial importante. En bacteriologa es muy frecuente determinar las pruebas bioqumicas a efectos prcticos a travs de pruebas multitest de determinacin rpida, como por ejemplo, las tiras API; en el caso concreto de enterobacterias son especialmente tiles las tiras 20E, que corresponden a pruebas multitest con un total de 20 pruebas claves para determinacin rpida de enterobacterias.

Figura 2. Tiras API.

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Tabla 3. Caractersticas bioqumicas diferenciales ms importantes de enterobacterias.

Fig. 4. Identificacin presuntiva de Salmonella.

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4. GNERO VIBRIO, FAMILIA VIBRIONACEAS.

4.1. CONCEPTO Y CARACTERES DEL GNERO VIBRIO
El Gnero Vibrio son bacilos Gram (-) anaerobios facultativos de morfologa curva, no esporulados y mviles gracias a su flagelacin loftrica. Generalmente son oxidasa (+), prueba que va a servir para diferenciarlo de la Familia Enterobacteriaceas. Aguantan muy bien altas concentraciones de cloruro sdico y su crecimiento se facilita en medios alcalinos.

Tabla 4. Diferenciacin de la Familia Vibrionaceae con las Familias Enterobacteriaceae y Pseudomonadaceae

4.2. CLASIFICACIN. ESPECIES MS IMPORTANTES DEL GNERO VIBRIO

De acuerdo con la ltima edicin del Manual de Bergey's, el Gnero Vibrio se encuentra en la seccin VIII. Dentro de la familia nos encontramos con 5 Gneros: Vibrio, Aeromonas, Pleisomonas, Photobacterium y Lucibacterium. Dentro del Gnero Vibrio, que es el ms importante de todos, existen en torno a unas 20 especies distintas, de las que la mitad son patgenas para el hombre, como por ejemplo V. cholerae, que es el agente causal del clera, que provoca en el hombre diarreas graves hasta llegar a la deshidratacin, y, si no hay tratamiento, la muerte.

4.3. AISLAMIENTO. CARACTERES BIOQUMICOS. DIAGNSTICO BACTERIOLGICO DE VIBRIO

a) Toma de muestra, procedindose de inmediato a su anlisis debido a que V. cholerae es muy sensible a los agentes externos y podra con facilidad lisarse. b) Examen directo por medio de tinciones. Entre ellas se incluyen una tincin de Gram en la que V. cholerae aparecer como Gram (-) y con forma de coma; y una extensin en fresco para poder comprobar su movilizacin observndose mejor esta caracterstica al microscopio de contraste de fases. c) Aislamiento de V. cholerae a partir de medios de cultivo especficos que impedirn el crecimiento de gran parte de microorganismos. Entre estos medios cabe destacar el medio teluritotaurocolato-gelatina-agar (TTGA), donde V. cholerae crecer formando colonias pequeas con centro negro debido a la utilizacin del telurito. Tambin se pueden utilizar agua peptonada alcalina (pH en torno a 9) que en estas condiciones inhibir el crecimiento de muchas otras bacterias y no de V. cholerae. d) A partir de las colonias sospechosas se realizar una batera de pruebas bioqumicas; la prueba de la oxidasa va a diferenciarle de la Familia Enterobacteraceae. e) Pruebas serolgicas, para las que se utilizarn sueros estndares especficos que permitan establecer una caracterizacin serolgica, as como determinar anticuerpos por tcnicas de aglutinacin.

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5. GNERO STAPHYLOCOCCUS. (F. MICROCOCCACEAS)

En el Manual de Bergey: La familia Micrococaceas est formada por los gneros Micrococcus, Staphylococcus, Stomatococcus y Planococcus. El gnero Staphylococcus corresponde a cocos Gram (+), inmviles, aerobios y anaerobios facultativos, no formadores de esporas y de tamao entre 0.5 y 2 m. Se agrupan en forma de racimos, producen catalasa en su metabolismo y degradan por fermentacin los azcares. Crecen bien en medios generales y son bastante resistentes a muchos agentes externos; de ah su amplia distribucin en la naturaleza. Es frecuente que formen parte de la flora normal de las mucosas y de la piel e, incluso, en procesos infecciosos, tales como intoxicaciones alimentarias, heridas y en general en distintos procesos patgenos.

5.1. CLASIFICACIN. ESPECIES MS IMPORTANTES DEL GNERO STAPHYLOCOCCUS

Dentro del Gnero Staphylococcus, se pueden distinguir las siguientes especies: Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus saprophyticus. S. aureus es con diferencia la especie ms patgena, agente etiolgico de muchas infecciones. Es reconocido por el pigmento de color amarillo que forma. Bioqumicamente produce coagulasa y fermenta el manitol. En su pared celular se han encontrado en torno a 30 antgenos distintos. S. epidermidis y S. saprophyticus son estafilococos oportunistas, estn frecuentemente en el medio ambiente, en la piel y mucosas, ocasionando, slo en situaciones de debilidad por parte del paciente, casos de patogenicidad. No producen toxinas, no producen coagulasa, no fermentan el manitol y no forman el pigmento amarillo caracterstico de S. aureus.

Tabla 5.1. Caractersticas diferenciales del Gnero Staphylococcus.

5.2.

ACCIN PATGENA E INTERS CLNICO

El efecto ms o menos patgeno de S. aureus para el hombre depender de: Antgenos presentes en la pared: presentan propiedades antifagocitarias e inducen a la formacin de estructuras pigenas, muy caractersticas. Toxinas: - hemolisinas, lisan con facilidad los eritrocitos adems de tener efectos txicos sobre otras clulas - enterotoxinas: enterotoxinas, que son responsables de casos de intoxicaciones alimentarias y cuadros de enterocolitis Enzimas (coagulasas, penicilinasas, etc). La coagulasa es capaz de coagular el plasma sanguneo. Las penicilinasas van a romper el anillo B-lactmico de las penicilinas, creando resistencias frente a estos antibiticos. As pues, y en funcin de la mayor o menor presencia de estos factores de virulencia, S. aureus puede ser o no altamente patgeno para el hombre; de cualquier forma, S. aureus es frecuente en
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la mucosa nasal, en la piel (sobre todo en las manos), o en la flora bacteriana normal de la persona sana. Se exige el anlisis en todos los alimentos debiendo presentar ausencia de este microorganismo en 25 g de producto.

5.3. AISLAMIENTO. CARACTERES BIOQUMICOS. DIAGNSTICO BACTERIOLGICO DE STAPHYLOCOCCUS

5.3.1. Aislamiento:
a) Se necesitar de medios selectivos que faciliten el crecimiento de estafilococos e inhiban el crecimiento de otros grmenes contaminantes. Para ello consideraremos el carcter halfilo de Staphylococcus, es decir, S. aureus es capaz de crecer en medios ricos de cloruro sdico; adems, es capaz de fermentar el manitol, lo que le distinguir de otros. Por esto, el medio especialmente utilizado es el medio manitol salado o medio Chapman, que va a impedir el crecimiento de muchsimos otros microorganismos y la fermentacin del manitol diferenciar S. aureus del resto de Staphylococcus. b) Si partimos de muestras no contaminadas se puede utilizar agar sangre que permita observar las caractersticas de las colonias, su color y su posible hemlisis.

5.3.2. Caracteres bioqumicos:

Los estafilococos presentan un poder fermentativo alto, degradan con facilidad muchos azcares, como glucosa, sacarosa, fructosa, manosa, etc. Esta actividad fermentativa origina cidos, como por ejemplo, el cido lctico, hecho que es detectado mediante la presencia de indicadores de pH para poder comprobar esta fermentacin. Con respecto al metabolismo proteico, los estafilococos no producen indol, s licuan la gelatina (gelatinasa +), son catalasa positivo, lo que les va a diferenciar de Streptococcus, reducen los nitratos a nitritos, crecen muy bien a 37 C dando colonias relativamente grandes que pueden ser aplanadas y lisas y es frecuente apreciar fenmenos de alfa y beta-hemolisis en medios de agar sangre o agar chocolate, son oxidasa negativo y en general todos ellos son cocos Gram+.

5.3.3. Diagnstico bacteriolgico de Staphylococcus:

Toma de muestra con torunda estril en condiciones de total asepsia. Estudio microscpico de la muestra mediante tincin de Gram. Aislamiento y cultivo. Hacer crecer en medio Chapman o manitol salado y agar sangre. Tras el periodo de incubacin, observar las colonias. Realizar pruebas de identificacin, que incluyen pruebas de coagulasa, de fermentacin de glucosa (medio de oxidacin fermentacin), prueba de la catalasa, prueba de la gelatinasa, prueba de las hemolisinas alfa y beta y prueba de fermentacin del manitol. Estudio de la sensibilidad a la novobiocina (tcnica anloga a antibiograma) para diferenciar S. epidermidis de S. saprophyticus.

Fig. 5.1. Identificacin presuntiva de distintas especies del gnero Staphylococcus.

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6. GNERO STREPTOCOCCUS. (F. ESTREPTOCOCACEAS)

6.1. CONCEPTO Y CARACTERES DEL GNERO STREPTOCOCCUS. De acuerdo con la ltima edicin del Manual de Bergey's, se considera al Gnero Streptococcus englobado dentro de la Seccin XIV. Los estreptococos van a corresponder a cocos Gram + de tamao relativamente pequeo (entre 1 y 1,5 m), anaerobios facultativos y que se disponen en pares y sobre todo en cadenas. Son catalasa y oxidasa negativa y fermentan la glucosa con la produccin consiguiente de cidos. Muchas especies del Gnero Streptococcus son saprfitas para el hombre, otras son oportunistas y algunas patgenas. Son muy importantes en el anlisis microbiolgico ya que son microorganismos indicadores de una posible contaminacin fecal, debido a contaminacin directa por heces o derivados de contaminacin cruzada por los instrumentos utilizados, ya que si las materias primas que entraron estaban contaminadas, la lnea de produccin se contamina y tambin los siguientes productos tendran presencia de Streptococos.

6.2. CLASIFICACIN. ESPECIES MS IMPORTANTES DEL GNERO STREPTOCOCCUS

Aunque existen distintas clasificaciones a la hora de encuadrar los estreptococos, una de las ms utilizadas consiste en el estudio de: El tipo de hemlisis. Se basa en la capacidad de romper hemates alrededor de sus colonias en medio agar sangre o agar chocolate. De acuerdo con esto, tenemos: o hemoltico: son no hemolticos. o -hemolticos: hemlisis parcial (decoloracin en torno a la colonia). o -hemolticos: son llamados estreptococos hemolticos produciendo halos de transparencia grandes en torno a su colonia. Sus caracteres antignicos. Los antgenos que se encuentran en el Gnero Streptococcus se sitan en su pared celular y en su cpsula. Reacciones serolgicas especficas. En general, los estreptococos tambin pueden clasificarse en funcin de su comportamiento antignico frente a diversas pruebas serolgicas de aglutinacin, inmunofluorescencia, etc.. Adems, en esta clasificacin se completar con pruebas bioqumicas. El resultado de todo esto es la clasificacin en tres importantes grupos: Streptococcus Beta hemolticos, que corresponden a los grupos A, B, C, G y F. Streptococcus correspondientes al grupo D (enterococo), que pueden ser alfa, Beta y Gamma hemolticos y grupo D no enterococo. Streptococcus tipo Viridans.

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6.3.

ACCIN PATGENA E INTERS CLNICO

6.3.1. Streptococcus del grupo A (S. pyogenes).

En general, los estreptococos que pertenecen al grupo A son patgenos en su mayora y van a corresponder al 90% de las infecciones estreptoccicas. Son Beta-hemolticos muy sensibles a los agentes externos y en general se pueden encontrar con facilidad en la mucosa nasal y farngea de las personas enfermas y sanas. Su efecto patgeno es debido a la presencia de enzimas, toxinas y antgenos de superficie. Son capaces de producir muchos procesos infecciosos en el hombre, anginas, sinusitis, meningitis, etc. Su nombre se debe a que producen pus.

6.3.2. Streptococcus del grupo D.

Son estreptococos Alfa, Gamma y en ocasiones Beta-hemolticos, que resisten muy bien a los agentes externos, incluso a antibiticos. Se van a dividir en enterococos y no enterococos. Los enterococos van a corresponder a S. faecalis (origen humano) y S. faecium (origen vegetal) entre otros. Son saprfitos del intestino del hombre, crecen bien en medios ricos en NaCI. Estos enterococos son los indicadores de contaminacin fecal, aparecen por falta de higiene en la manipulacin de los alimentos.

6.3.3. Streptococcus del grupo N.

Streptococcus del grupo N. Corresponden a los estreptococos lcticos, se utilizan en las industrias lcticas, no patgenos para el hombre, no hemolticos, muy resistentes a los agentes externos y fermentadores de lactosa. Ejemplos de grupo son, S. lactis, S. cremosi, etc.

6.4. AISLAMIENTO. CARACTERES BIOQUMICOS. DIAGNSTICO BACTERIOLGICO DE STREPTOCOCCUS

a) Toma de muestra. Se tomarn en condiciones de total asepsia y se obtendrn de la rinofaringe con hisopo estril. La muestra se analizar lo antes posible, ya que los estreptococos son muy sensibles a los agentes externos. b) Se realizar un frotis de las muestras obtenidas para una tincin de Gram donde, a priori, la presencia de cocos Gram + tendr una orientacin diagnstica importante que se verificar con otras. c) Aislamiento por cultivos. Partiendo de la muestra se sembrar por agotamiento en placa de agar sangre o chocolate a fin de investigar sus posibles hemlisis. d) Pruebas bioqumicas. Se realizarn al menos las siguientes pruebas: prueba de la catalasa, que deber dar siempre negativo, hecho que le va a diferenciar de cualquier estafilococo; prueba de hemlisis en medio de agar sangre, etc. e) Haremos crecer a la bacteria problema en medios enriquecidos al 6,5% de NaCI, que permite el crecimiento slo de enterococos del grupo D, el resto no crecen. f) Identificar los distintos grupos antignicos por mtodos serolgicos (clasificacin de Lancefield). Este mtodo consiste en partir de extractos con estreptococos problema por hidrlisis cida a 100C y enfrentarlos con sueros especficos estandarizados y observaremos dnde se produce la precipitacin. g) Pruebas serolgicas. Son pruebas de carcter inmunolgico muy utilizadas y se basan en la bsqueda de anticuerpos en la muestra frente a toxinas y enzinas. En la actualidad existen unos kits que constan de 5 antgenos estreptoccicos. Es un mtodo de determinacin muy rpido.

T 12: CLASIFICACIN DE LAS BACTERIAS.