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Metabolismo de nucletidos
Carlos V, emperador del sacro imperio romano (1519-1558), que tambin rein bajo el nombre de Carlos I, rey de Espaa (1516-1556), fue uno de los gobernantes ms poderosos de Europa. Bajo su reinado, el imperio espaol conquist los imperios azteca e inca del Nuevo Mundo. Carlos V tambin padeca graves ataques de gota, un estado patolgico causado por la alteracin del metabolismo de los nucletidos. Este retrato de Tiziano muestra la mano izquierda del emperador hinchada, que deja descansar con sumo cuidado sobre su regazo. Un anlisis reciente de una parte de su dedo, que se ha conservado como una reliquia religiosa, confirma el diagnstico de gota. [Erich Lessing/Art Resource, NY.]
dems de ser los materiales de construccin para pptidos y protenas, los aminocidos sirven de precursores para muchas clases de molculas pequeas que tienen importantes y variadas funciones biolgicas. Repasemos brevemente algunas de las molculas derivadas de los aminocidos (Figura 32.1). La histamina, un componente del sistema inmunitario cuya sobreproduccin provoca una respuesta alrgica, se obtiene a partir de la his-
555
NH2 N N
Adenina
NH2 N N H N O N H
Citosina
HO
+H N 3
N N H
Esfingosina Histamina
NH3+
HO
I HO O
+H 3N
O NH2 N N H R
Unidad nicotinamida del NAD+
+
H I COO
HO HO
H N
CH3
NH3+
HO HO I
Tiroxina (Tetrayodotironina) Adrenalina
Serotonina
HO
HO
N H
5,6-Dihidroxiindol
Figura 32.1 Seleccin de biomolculas derivadas de los aminocidos. Los tomos procedentes
de los aminocidos se muestran de color azul.
tidina por descarboxilacin. La tirosina es un precursor de las hormonas tiroxina (tetrayodotironina), que controla la velocidad de los procesos metablicos por todo el organismo, y adrenalina, la hormona del lucha o huye. La adrenalina tambin es un precursor del 5,6-dihidroxiindol, un precursor de la melanina, un pigmento polimrico complejo que se forma durante la exposicin al sol y que constituye la base qumica del bronceado. El neurotransmisor serotonina (5-hidroxitriptamina) y el anillo de nicotinamida del NAD1 se sintetizan a partir del triptfano. El extremo reactivo de las esngosina, un intermediario de la sntesis de esngolpidos, procede de la serina. Ahora vamos a considerar con ms detalle unos compuestos bioqumicos especialmente importantes que proceden de los aminocidos: las bases de los nucletidos. Las purinas y las pirimidinas se obtienen, principalmente, a partir de aminocidos y son los precursores del DNA, del RNA y de varias coenzimas. Comenzamos con un estudio de la sntesis de nucletidos. Los productos iniciales de la sntesis de nucletidos son los ribonucletidos y veremos cmo se convierten estos compuestos en desoxirribonucletidos, los sustratos para la sntesis del DNA. Despus, nos ocuparemos de la regulacin de la sntesis de nucletidos. Por ltimo, consideraremos algunos estados patolgicos ocasionados por alteraciones en el metabolismo de los nucletidos.
556
Base
Adenina (A) Guanina (G) Uracilo (U) Citosina (C)
Ribonuclesido
Adenosina Guanosina Uridina Citidina
Ribonucletido (5-monofosfato)
Adenilato (AMP) Guanilato (GMP) Uridilato (UMP) Citidilato (CMP)
Base
Adenina (A) Guanina (G) Timina (T) Citosina (C)
Desoxirribonuclesido
Desoxiadenosina Desoxiguanosina Desoxitimidina Desoxicitidina
Desoxirribonucletido (5-monofosfato)
Desoxiadenilato (dAMP) Desoxiguanilato (dGMP) Desoxitimidilato (TMP)* Desoxicitidilato (dCMP)
*Es raro encontrar el timidilato en la forma ribosa y, por tanto, por convencin, se omite la d minscula en la abreviatura.
tidos. Todos los desoxirribonucletidos se sintetizan a partir de los correspondientes ribonucletidos. El azcar desoxirribosa se genera mediante la reduccin de la ribosa integrada en un nucletido completamente formado. Adems, el grupo metilo que diferencia la timina del DNA del uracilo del RNA se aade en el ltimo paso de esta ruta. Un nuclesido est formado por una base prica o pirimidnica unida a un azcar, y un nucletido es un ster fosfato de un nuclesido. Por ejemplo, la adenosina es un nuclesido formado por la base adenina y el azcar ribosa. El ATP es un nucletido, el ster fosfato (en esta caso, un trifosfato) de la adenosina. Los nombres de las principales bases del RNA y del DNA, as como los de los nuclesidos y nucletidos que se obtienen a partir de ellas se incluyen en la Tabla 32.1.
Nucletido
Nucletido
O HO
O C O
O P
O C NH2
O O
HO
Bicarbonato
Carboxifosfato
cido carbmico
Posteriormente, el cido carbmico es fosforilado por otra molcula de ATP dando lugar al carbamilfosfato.
O HO C NH2
ATP ADP 2
O O O P O
O C NH2
cido carbmico
Carbamilfosfato
El carbamilfosfato reacciona con el aminocido aspartato formando carbamilaspartato, en una reaccin catalizada por la aspartato transcarbamilasa (ATCasa). Esta
enzima alostrica regula la sntesis de nucletidos de pirimidina, como veremos ms adelante (p. 565). La reaccin catalizada por la carbamilfosfato sintetasa (CPS II) es idntica a la de la carbamilfosfato sintetasa (CPS I) que interviene en la sntesis de urea (p. 527). Sin embargo, la CPS II utiliza la glutamina, en vez del amoniaco, como fuente de nitrgeno y no necesita N-acetilglutamato.
Aspartato
C N 3 4 5C C 2 1 6C N
Anillo de pirimidina
O O
2
O O C NH2
Aspartato
Pi
OOC
HN H
O O
NH2 COO
Aspartato transcarbamilasa
H H
Carbamilaspartato
Carbamilfosfato
UTP
CTP al RNA
Despus, el carbamilaspartato se cierra sobre s mismo formando dihidroorotato, que se oxida por el NAD1 dando lugar al orotato.
O O
H
+
TTP
dCTP al DNA
OOC
HN H
H2O
HN H
NAD
NADH + H+
O HN C NH O H
Orotato
NH O
OOC
H H
Carbamilaspartato
H H
Dihidroorotato
Llegados a este punto, el orotato se acopla al 5-fosforribosil-1-pirofosfato (PRPP), una forma activada de la ribosa que puede aceptar bases de nucletidos. El PRPP se sintetiza a partir de la ribosa 5-fosfato, formada durante la ruta de las pentosas fosfato, mediante la adicin de pirofosfato procedente del ATP, en una reaccin catalizada por la PRPP sintetasa.
2O POH C 3 2
O HN O N H
Orotato
O OH
ATP
2O
3POH2C
O O
O O P O
O O P
2
C O +
HO
OH
HO
OH
PRPP
Ribosa 5-fosfato
2O
3POH2C
O O
O O P O
O O P
2
HO
OH
El orotato reacciona con PRPP formando orotidilato, un nucletido de pirimidina, en una reaccin impulsada por la hidrlisis del pirofosfato, tal y como se indica al margen. A continuacin, el orotidilato se descarboxila formando uridina monofosfato (UMP, o uridilato), uno de los dos principales nucletidos de pirimidina precursores del RNA. Esta reaccin est catalizada por la orotidilato descarboxilasa.
O HN O
H+ CO2
2O 3POH2C
5-Fosforribosil-1-pirofosfato (PRPP)
O HN O O N H
PPi
2O
3POH2C
N C O O
O HN O
2O 3POH2C
Orotidilato descarboxilasa
HO
N C O O
OH
HO
OH
Orotidilato
Uridilato
HO
OH
Orotidilato
558
NH2 N O
4O 3PO3PO3POH2C
N
ATP ADP + Pi
HO
UTP
OH
HO
CTP
OH
CH3 H
CO2 Aspartato
Glicina
N 1 6 5C C2 N
3 4C
N10-Formiltetrahidrofolato Glutamina
7 8C 9
ribosa-P
IMP
Las purinas, al igual que las pirimidinas, se sintetizan de novo a partir de materiales de partida sencillos (Figura 32.4). A diferencia de la sntesis de pirimidina, el primer paso para el ensamblaje de la purina consiste en su unin a la ribosa. La sntesis de novo de la purina requiere PRPP, al igual que la biosntesis de pirimidina pero, en el caso de la purina, el PRPP proporciona la plataforma sobre la que se van construyendo las bases paso a paso. El paso comprometido inicial es el desplazamiento del pirofosfato del PRPP por parte del amoniaco en vez de por una base previamente ensamblada, para producir 5-fosforribosil-1-amina, con la amina en conguracin b. En esta reaccin, catalizada por la glutamina fosforribosil amidotransferasa, es la glutamina, de nuevo, la que aporta el amoniaco.
2O POH C 3 2
ATP
GTP al RNA
O O
O O P O
O O P
2
PPi
2O
3POH2C
NH2
O
H3N + Glu H2O + Gln
dATP
dGTP al DNA
HO
OH
PRPP
HO
OH
5-Fosforribosil-1-amina
Para ensamblar el anillo de purina se necesitan otros nueve pasos. La biosntesis de novo de la purina se lleva a cabo mediante reacciones sucesivas de activacin por fosforilacin, seguida de un desplazamiento, tal y como se muestra en la Figura32.5. El producto nal es el nucletido inosina monofosfato (IMP, o inosinato). Los aminocidos glicina, glutamina y aspartato son importantes precursores La sntesis de las purinas depende del tetrahidrofolato, un destacado transportador de unidades monocarbonadas activadas (p. 546).
El inosinato, aunque forma parte de algunas molculas de RNA, acta fundamentalmente como precursor de otras purinas. El inosinato se encuentra en la base de una ruta ramicada que da lugar tanto al AMP como al GMP (Figura 32.6, en la p. 562). El adenilato se sintetiza a partir del inosinato mediante la sustitucin del tomo de oxgeno del grupo carbonilo en la posicin C-6 por un grupo amino. La adicin de aspartato seguida de la eliminacin de fumarato proporciona el grupo amino. Durante la sntesis del intermediario adenilsuccinato a partir de inosinato y aspartato, se necesita GTP en vez de ATP. La guanosina monofosfato (GMP, o guanilato) se sintetiza mediante la oxidacin del inosinato a xantina monofosato (XMP, o xantilato), seguida de la incorporacin de un grupo amino al C-2. Durante la oxidacin del inosinato, el aceptor de hidrgeno es el NAD1. El grupo carbonilo del xantilato se activa mediante la transferencia de un grupo AMP procedente del ATP. Posteriormente, el amoniaco generado por la hidrlisis de la glutamina desplaza el grupo AMP para formar guanilato, en una reaccin catalizada por la GMP sintasa. Hay que sealar que la sntesis de adenilato requiere GTP, mientras que la sntesis de guanilato necesita ATP, una diferencia que, como ya veremos (p. 566), permite que el ujo a travs de cada rama sea equilibrado.
560
O H
THF
O
ADP + Pi
THF
H
ATP
H H N P-ribosa
P-ribosa-NH2
Fosforribosilamina
P-ribosa
H N
C O
CH2
H 3N + Glu H2O + Gln
C N H
CH2
Glicinamida ribonucletido
Formilglicinamida ribonucletido
C C
N C C O O P-ribosa
C C HN
N C H O
N P-ribosa
ADP + Pi HO
ATP + O C
C C
N C H NH2
N P-ribosa
NH2
Carboxiaminoimidazol ribonucletido ATP + Asp ADP + Pi
C O
5-Aminoimidazol ribonucletido
OOC
C C
N C C H
N P-ribosa
O O N
C CH2 C H C O O
COO
C C
N C O C NH2
THF
O C H THF
Fumarato
N
7
P-ribosa
NH2
NH2
5-Aminoimidazol4-(N-succinilcarboxamida) ribonucletido
5-Aminoimidazol4-carboxamida ribonucletido
C C H N
N C H O C NH2
9 H2 O
H ribosa
C C
N C O C NH C H
N P-ribosa
N P-ribosa
O
5-Formaminoimidazol4-carboxamida ribonucletido Inosinato (IMP)
561
H N
GDP + Pi
OOC
HN COO N N
H COO
N
Fumarato
NH2 N N
N N P-ribosa N
Inosinato
O NH
GTP + Asp
N P-ribosa
N P-ribosa
Adenilato (AMP)
Adenilsuccinato
N
NAD + H2O
+
O NH N H O
H 3N + Glu H2O + Gln AMP + PPi
N N P-ribosa N
O NH NH2
N
NADH + H+
ATP
P-ribosa
Xantilato
Guanilato (GMP)
Figura 32.6 Generacin de AMP y de GMP. El inosinato es el precursor del AMP y del GMP.
ElAMP se forma mediante la adicin de aspartato seguida de la liberacin de fumarato. El GMP se genera mediante la adicin de agua, la deshidrogenacin por NAD1 y la sustitucin del tomo de oxgeno del grupo carbonilo por un NH2 procedente de la hidrlisis de la glutamina.
genes de varias enzimas de la ruta con el gen de la protena uorescente verde (GFP), que permite visualizar las enzimas, y se transfectaron en clulas. Cuando las clulas crecan en presencia de purina, la GFP se encontraba esparcida de forma difusa por todo el citoplasma (Figura 32.7A). Cuando las clulas fueron transferidas a un medio de crecimiento carente de purinas, comenz la sntesis de purinas y las enzimas se asociaron entre s formando unos complejos denominados purinosomas (Figura32.7B). Se repitieron los experimentos con otras enzimas de la ruta de la sntesis de purina y los resultados fueron idnticos: la sntesis de purina se produce cuando las enzimas forman los purinosomas. Qu es lo que induce la formacin de los complejos? Aunque las causas todava no estn muy claras, parece ser que una fosfatasa, que presumiblemente responde de alguna manera a la ausencia de purinas, induce la formacin del complejo, mientras que una quinasa, en respuesta a la presencia de purinas, parece provocar el desmantelamiento del purinosoma.
Las bases de purina se recuperan mediante dos enzimas que presentan distintas especicidades. La adenina fosforribosiltransferasa cataliza la formacin de adenilato, Adenina 1 PRPP h adenilato 1 PPi, mientras que la hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa (HGPRT) cataliza la formacin de guanilato y de inosinato que, como ya hemos visto, es un precursor del guanilato y del adenilato. Guanina 1 PRPP h guanilato 1 PPi
ADP
GDP
CDP
UDP
Productos de la ribonucletido reductasa
Ribonucletido reductasa
Ribonuclesido reductasa
TTP
S Desoxirribonuclesido difosfato + R S
A su vez, la tiorredoxina reducida se regenera gracias al ujo de electrones procedentes del NADPH. Esta reaccin est catalizada por la tiorredoxina reductasa, una avoprotena. Los electrones uyen desde el NADPH al FAD unido a la reductasa y, de all, al disulfuro de la tiorredoxina reducida, a la ribonucletido reductasa y, por ltimo, a la unidad ribosa.
SH
NADPH + H+ FAD
S T RR S SH T RR SH
Tiorredoxina (T)
TR SH S
NADP
FADH2
TR S
563
O HN O N CH3 + dihidrofolato H
desoxirribosa-P
Desoxiuridina monofosfato (dUMP)
desoxirribosa -P
Timidilato (TMP)
El tetrahidrofolato se regenera a partir del dihidrofolato producido durante la sntesis de timidilato. Esta regeneracin se consigue gracias a la dihidrofolato reductasa, utilizando NADPH como reductor.
H2N HN O N H N + NADPH + H+ HN H N O
Dihidrofolato
H2N HN
H N H N H + NADP+
O COO H COO
HN H N O
Tetrahidrofolato
COO H COO
Aspecto clnico
Algunos frmacos anticancergenos muy eficaces bloquean la sntesis de timidilato
En las clulas que se dividen rpidamente, la sntesis de DNA necesita un abundante suministro de timidilato, el nico nucletido especco para el DNA. La vulnerabilidad de estas clulas a la inhibicin de la sntesis de TMP ha sido aprovechada en la quimioterapia contra el cncer. La timidilato sintasa y la tetrahidrofolato reductasa son las dianas elegidas para la quimioterapia (Figura 32.9). El uorouracilo, un frmaco anticancergeno, se convierte, in vivo, en uorodesoxiuridilato (F-dUMP). Este anlogo del dUMP acta como un sustrato normal para la sntesis de TMP antes de inhibir de forma irreversible la timidilato sintasa. El F-dUMP constituye un ejemplo de inhibicin suicida, en el que una enzima convierte un sustrato en un agente inhibidor que interrumpe la actividad cataltica de la enzima (p. 132). La sntesis de TMP tambin se puede bloquear inhibiendo la regeneracin del tetrahidrofolato. Anlogos del dihidrofolato, como la aminopterina y el metotrexato (ametopterina), son potentes inhibidores competitivos de la dihidrofolato reductasa.
COO N N H2N N NH2
Aminopterina (R = H) o metotrexato (R = CH3)
HN N R N O H
COO
El metotrexato es un frmaco de muy ecaz para el tratamiento Fluorouracilo de muchos tumores de crecimiento rpido, como es el caso de la leucemia aguda o del coriocarcinoma, un cncer que se origina en clulas de la placenta. Sin embargo, el metotrexato mata a las Fluorodesoxiuridilato clulas que se estn replicando rpidamente, sean malignas o no. (inhibidor suicida) Las clulas madre de la mdula sea, las clulas epiteliales del tracto intestinal y los folculos pilosos son sensibles a la accin de este antagonista del folato y dan cuenta de sus efectos secunTMP dUMP darios txicos, entre los que se incluyen el debilitamiento del sisTimidilato sintasa tema inmunitario, nuseas y prdida del cabello. Los anlogos del folato como la trimetoprima poseen una intensa actividad antibacteriana y antiprotozoaria. La trimetoprima se une a la dihidrofolato reductasa de mamferos con una intensidad 105 veces menor que a las reductasas N 5, N10-MetilentraDihidrofolato de los microorganismos sensibles a ella. Pequehidrofolato as diferencias en las hendiduras donde se locaGlicina NADPH + H+ lizan los centros activos de esas enzimas explican la actividad antimicrobiana tan selectiva de la Dihidrofolato reductasa trimetoprima. Para tratar infecciones se utiliza Serina mucho una mezcla de trimetoprima y sulfameNADP+ Tetrahidrofolato toxazol (un inhibidor de la sntesis de folato).
NH2 N H2N N OCH3 OCH3
OCH3
Trimetoprima
Aspartato + carbamilfosfato
ATCasa
carbamilaspartato
UMP
UDP
UTP
CTP
ATP
La carbamilfosfato sintetasa es otro punto donde tambin se produce retroinhibicin, tanto en procariotas como en eucariotas.
565
Adenilsuccinato
AMP
Ribosa 5-fosfato
PRPP
Inhibido por IMP, AMP y GMP
Fosforribosilamina
IMP Xantilato
Inhibido por GMP
GMP
Regulacin de la especificidad hacia el sustrato ADP GDP UDP CDP + + + dADP dGDP dUDP dCDP dATP dGTP TTP dCTP
+ ATP
Figura 32.11 Regulacin de la ribonucletido reductasa. (A) Cada subunidad del dmero de la
reductasa contiene dos centros alostricos, adems del centro activo. Uno de los centros alostricos regula la actividad global y el otro regula la especificidad hacia el sustrato. (B) Patrones de regulacin de la ribonucletido reductasa por parte de los distintos nuclesidos difosfato.
32.6 Alteraciones en el metabolismo de los nucletidos pueden dar lugar a estados patolgicos
Los nucletidos de una clula se estn renovando continuamente. Los nucletidos se degradan a nuclesidos mediante hidrlisis, gracias a las nucleotidasas. La ruptura fosforoltica de los nuclesidos para generar bases libres y ribosa-1-fosfato (o desoxirribosa-1-fosfato) est catalizada por las nuclesido fosforilasas. Como ya se ha comentado, algunas de las bases son reutilizadas para formar nucletidos mediante las rutas de recuperacin. Otras se degradan a productos que sern excretados (Figura 32.12). Una insuciencia en una enzima puede alterar estas rutas, dando lugar a un estado patolgico.
O N N H NH N NH2
H2O NH4+
Guanina
H2N N N N N
H2O Pi
H2N N N N N
H2O NH4+
O N N NH N
Pi Ribosa 1-P Nuclesido fosforilasa
O N N H NH N
O2 + H2O
O
H2O2
N N H
NH N H O
Nucleotidasa
Adenosina desaminasa
Xantina oxidasa
ribosa Adenosina
ribosa Inosina
Hipoxantina
Xantina
Xantina oxidasa H2O + O2
H2O2
O N NH N H O
H+
O H N O N H NH O
N H
Urato
N H cido rico
Aspecto clnico
La prdida de la actividad adenosina desaminasa provoca lainmunodeficiencia combinada grave
Si la comparamos con la de otros nucletidos, la ruta de la degradacin del AMP incluye una etapa adicional. En primer lugar, se elimina el fosforilo por medio de una nucleotidasa para formar el nuclesido adenosina (ver la Figura 32.12). En la etapa adicional, la adenosina se desamina mediante la adenosina desaminasa formando inosina. Por ltimo, se elimina la ribosa por medio de la nuclesido fosforilasa generando hipoxantina y ribosa-1-fosfato. Algunas formas de la inmunodeciencia combinada grave (SCID), una enfermedad inmunolgica, estn relacionadas con una insuciencia en la actividad adenosina desaminasa. Las personas con este trastorno padecen graves infecciones recurrentes que, a menudo, provocan la muerte a una edad temprana. La SCID se caracteriza por una prdida de clulas T, que son fundamentales para la respuesta inmunitaria. Aunque el fundamento bioqumico de la enfermedad no se ha determinado con claridad, la ausencia de adenosina desaminasa hace que los niveles de dATP aumenten hasta alcanzar valores entre 50 y 100 veces superiores a lo normal, lo que provoca la inhibicin de la ribonucletido reductasa y, en consecuencia, la sntesis de DNA. A menudo, la SCID se denomina enfermedad del nio burbuja porque los primeros tratamientos exigan aislar al paciente completamente del entorno. El tratamiento actual consiste en un transplante de mdula sea. La insuciencia de adenosina desaminasa ha sido la primera enfermedad gentica que se ha tratado mediante terapia gnica. n
Aspecto clnico
Niveles elevados de urato en el suero inducen la gota
Durante la degradacin del AMP se produce hipoxantina que es oxidada por la xantina oxidasa primero a xantina y, posteriormente, a cido rico. En ambas reacciones, el oxidante es el oxgeno molecular, que se reduce a H2O2 que, posteriormente, se descompone en H2O y O2 por medio de la catalasa. A pH siolgico, el cido rico pierde un protn dando lugar a urato (ver la Figura 32.12). En los seres humanos, el urato es el producto nal de la degradacin de las purinas y se excreta por la orina. Niveles elevados de urato en el suero (hiperuricemia) provocan la gota, una dolorosa enfermedad de las articulaciones. En esta enfermedad, la sal sdica del urato cristaliza en el uido y en el revestimiento de las articulaciones (Figura 32.13). Con frecuencia, el urato sdico se acumula en la pequea articulacin de la base del dedo gordo del pie, aunque tambin se acumula en otras articulaciones. Cuando las clulas del sistema inmunitario engullen los cristales de urato sdico se produce una dolorosa inamacin. Los riones tambin pueden resultar daados por la precipitacin de cristales de urato. La gota es un problema mdico frecuente que afecta al 1% de la poblacin de los pases occidentales. Es nueve veces ms frecuente en hombres que en mujeres. Uno de los tratamientos contra la gota consiste en la administracin de alopurinol, un anlogo de la hipoxantina. El mecanismo de accin del alopurinol es interesante: primero acta como un sustrato y, posteriormente, como un inhibidor de la xantina oxidasa. La oxidasa hidroxila el alopurinol para formar aloxantina (oxipurinol) que, a continuacin, permanece fuertemente unida al centro activo. Vemos aqu otro ejemplo de inhibicin suicida. La sntesis de urato a partir de hipoxantina y xantina disminuye poco despus de la administracin de alopurinol. Las concentraciones de hipoxantina y de xantina en el suero aumentan, mientras que la de urato diminuye. En los seres humanos, los niveles medios de urato en el suero estn muy prximos a su lmite de solubilidad y son ms elevados que los observados en otros primates. Cul es la ventaja selectiva de un nivel de urato tan elevado que sita a mucha gente al borde de un ataque de gota? Resulta que el urato provoca un efecto notablemente benecioso: es muy ecaz a la hora de neutralizar especies reactivas del oxgeno. De hecho, el urato es un antioxidante casi tan ecaz como el ascorbato (vitamina C). El elevado nivel de urato en los seres humanos puede hacer que disminuya la incidencia
OH N N N H
Alopurinol
del cncer y, si lo comparamos con el de otros primates, puede contribuir de forma signicativa a la mayor esperanza de vida de los humanos. n
grabado a color procede de la Granger Collection, New York / The Granger Collection. La cita se ha extrado de R. L. Wortmann, Gout and hyperuricemia. En Kellys Textbook of Rheumatology, 8. ed., G. S. Firestein, Ed. (Saunders Elsevier, 2008), pp. 1481-1524. (B)Cortesa del Dr. James McGuire.]
Aspecto clnico
El sndrome de Lesch-Nyhan es una dramtica consecuencia de las mutaciones en una enzima de las rutas de recuperacin
Las mutaciones en los genes que codican enzimas de la biosntesis de nucletidos pueden reducir los niveles de los nucletidos necesarios y pueden provocar la acumulacin de intermediarios. Una ausencia prcticamente total de la hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa, una enzima de la ruta de recuperacin de guanilato e inosinato (p. 562), provoca inesperadas y devastadoras consecuencias. La manifestacin ms sorprendente de este defecto congnito del metabolismo, denominado sndrome de Lesch-Nyhan, es un comportamiento autodestructivo compulsivo. A la edad de 2 3aos, los nios que presentan esta enfermedad empiezan a morderse los dedos y los labios y, si nadie se lo impide, pueden llegar a arrancrselos. Estos nios tambin se comportan de forma agresiva con otros nios. Otras caractersticas del sndrome de Lesch-Nyhan son el retraso mental y la espasticidad. Los elevados niveles de urato en el suero provocan la formacin de piedras en el rin durante la infancia y, algunos aos despus, aparecen los sntomas de la gota. La enfermedad se hereda como un trastorno recesivo ligado al cromosoma X y afecta principalmente a los varones. Las consecuencias bioqumicas de la prctica ausencia de hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa son una elevada concentracin de PRPP, un notable aumento en la velocidad de biosntesis de purinas mediante las rutas de novo y una produccin excesiva de urato. La relacin entre la ausencia de la transferasa y los extraos sntomas neurolgicos es un misterio, aunque evidencias recientes sugieren que la carencia de hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa provoca, mediante mecanismos an no determinados, un desequilibrio en las concentraciones de neurotransmisores clave. El sndrome de Lesch-Nyhan demuestra que las rutas de recuperacin para la sntesis de IMP y de GMP no son un capricho. Adems, el sndrome de Lesch-Nyhan pone de maniesto que la ausencia de una sola enzima puede originar comportamientos anormales como la automutilacin y la agresividad extrema. Sin duda, el esclarecimiento de las bases moleculares de estos trastornos mentales beneciar a la psiquiatra. n
Aspecto clnico
La insuficiencia de cido flico provoca defectos al nacer, como la espina bfida
La espina bda es un tipo de defecto congnito que se caracteriza por una formacin incompleta o defectuosa del tubo neural durante las primeras etapas del desarrollo. En los Estados Unidos, la incidencia de los defectos del tubo neural es, aproximadamente, de uno por cada 1.000 nacimientos. Diversos estudios han demostrado que, si las mu-
569
Resumen
32.1 Panormica general de la biosntesis de nucletidos y la nomenclatura En las rutas de novo, los nucletidos se pueden sintetizar exclusivamente a partir de pequeas molculas precursoras mediante una serie de reacciones. Alternativamente, en las rutas de recuperacin se pueden reciclar bases intactas para unirlas a la ribosa activada. Un nuclesido consta de una base unida a un azcar ribosa o desoxirribosa, mientras que un nucletido es un ster fosfato de un nuclesido. 32.2 Una vez ensamblado el anillo de pirimidina, se une al azcar ribosa Para formar un nucletido de pirimidina, primero se forma el anillo de pirimidina y, despus, se une a la ribosa fosfato. El 5-fosforribosil-1-pirofosfato es el donador de la unidad ribosa fosfato. La sntesis del anillo de pirimidina comienza con la formacin de carbamilaspartato a partir de carbamilfosfato y aspartato, una reaccin catalizada por la aspartato transcarbamilasa. Una deshidratacin, la formacin de un anillo y una oxidacin dan lugar al orotato, que reacciona con PRPP formando orotidilato. La descarboxilacin de este nucletido de pirimidina genera UMP. A continuacin, la aminacin del UTP da lugar al CTP. 32.3 El anillo de purina se ensambla sobre la ribosa fosfato El anillo de purina se ensambla a partir de diversos precursores: glutamina, glicina, aspartato, N10-formiltetrahidrofolato y CO2. El paso comprometido de la sntesis de novo de los nucletidos de purina es la formacin de 5-fosforribosilamina a partir de PRPP y glutamina. El anillo de purina se ensambla sobre la ribosa fosfato, a diferencia de la adicin de ribosa a un anillo de pirimidina ya formado. La adicin de glicina, seguida de una formilacin, una aminacin y la formacin de un anillo, generan el ribonucletido 5-aminoimidazol. Este intermediario contiene el anillo completo de cinco tomos que forma parte del esqueleto de purina. La adicin de CO2, del tomo de nitrgeno del aspartato y de un grupo formilo, seguida del cierre del anillo, generan inosinato, un ribonucletido de purina. El AMP y el GMP se forman a partir del IMP. Los ribonucletidos de purina tambin se pueden sintetizar mediante una ruta de recuperacin en la que una base ya formada reacciona directamente con el PRPP. 32.4 Los ribonucletidos se reducen a desoxirribonucletidos Los desoxirribonucletidos, los precursores del DNA, se forman mediante la reduccin de ribonuclosidos difosfato. Estas conversiones estn catalizadas por la ribonucletido reductasa. La tiorredoxina transfiere electrones desde el NADPH a los grupos sulfhidrilo de los centros activos de esta enzima. El TMP se forma por la metilacin del dUMP. En esta reaccin, el donador de un grupo metileno y de un hidruro es el N5,N10-metilentetrahidrofolato, que se convierte en dihidrofolato. El tetrahidrofolato se regenera mediante la reduccin del dihidrofolato por el NADPH. La dihidrofolato reductasa, que cataliza esta reaccin, se inhibe por anlogos del folato como la aminopterina y el metotrexato. Estos compuestos, junto con el fluorouracilo, un inhibidor de la timidilato sintasa, se utilizan como frmacos anticancergenos. 32.5 La biosntesis de nucletidos se regula mediante retroinhibicin En E. coli, la biosntesis de pirimidina se regula mediante la retroinhibicin de la aspartato transcarbamilasa, la enzima que cataliza el paso comprometido. El CTP inhibe esta enzima, mientras que el ATP la estimula. La retroinhibicin de la glutamina-PRPP amidotransferasa por nucletidos de purina es importante a la hora de regular su biosntesis.
Problemas571
32.6 Alteraciones en el metabolismo de los nucletidos pueden dar lugar aestados patolgicos En los seres humanos, las purinas se degradan a urato. La incapacidad para desaminar la adenosina provoca la inmunodeficiencia combinada grave. La gota, una enfermedad que afecta a las articulaciones y que provoca artritis, est relacionada con una acumulacin excesiva de urato. El sndrome de Lesch-Nyhan, una enfermedad gentica que se caracteriza por automutilaciones, retraso mental y gota, se debe a una insuficiencia de hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa. Esta enzima es esencial para la sntesis de nucletidos de purina a travs de las rutas de recuperacin. Los defectos en el tubo neural son ms frecuentes cuando una mujer embarazada presenta insuficiencia de derivados del folato durante los primeros meses de gestacin, lo que, probablemente, se debe al importante papel que desempean estos derivados en la sntesis de precursores del DNA.
Trminos clave
nuclesido (p. 557) nucletido (p. 557) nucletido de pirimidina (p. 557) carbamilfosfato sintetasa (CPS) (p. 557) 5-fosforribosil-1-pirofosfato (PRPP) (p.558) orotidilato (p. 558) purina (p. 560) inosinato (p. 560) hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa (HGPRT) (p.563) ribonucletido reductasa (p. 563) timidilato sintasa (p. 564) dihidrofolato reductasa (p. 564) inmunodeficiencia combinada grave (SCID) (p. 568) gota (p. 568) sndrome de Lesch-Nyhan (p. 569) espina bfida (p. 569)
Problemas
1. Desde el principio o extraer, ahorrar y reutilizar. Qu diferencias hay entre la sntesis de novo de los nucletidos y la sntesis mediante rutas de recuperacin? 5 2. Ribosa fosfato activada. Escriba una reaccin ajustada para la sntesis de PRPP a partir de glucosa a travs de la rama oxidativa de la ruta de las pentosas fosfato. 3. Fabricando una pirimidina. Escriba una reaccin ajustada para la sntesis de orotato a partir de glutamina, CO2 y aspartato. 5 4. Identificando el donador. Cul es el reactante activado durante la biosntesis de cada uno de los siguientes compuestos? 5 (a) Fosforribosilamina. (b) Carbamilaspartato. (c) Orotidilato (a partir de orotato) 5. Una s en lugar de una t. Qu diferencias hay entre un nuclesido y un nucletido? 6. Ascielos. Asigne a cada trmino la descripcin correspondiente. 5 (a) Exceso de urato _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (b) Ausencia de adenosina desaminasa _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (c) Ausencia de HGPRT _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (d) Carbamilfosfato sintetasa _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (e) Inosinato _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (f) Ribonucletido reductasa _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (g) Ausencia de cido flico _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (h) Glutamina fosforribosiltransferasa _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (i) Un solo anillo _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (j) Anillo bibclico _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ (k) Precursor del _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ CTP_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 1. Espina bfida 2. Precursor del ATP y del GTP 3. Purina 4. Sntesis de desoxinucletidos 5. UTP 6. Sndrome de LeschNyhan 7. Inmunodeficiencia 8. Pirimidina 9. Gota 10. Primera etapa de la sntesis de pirimidina 11. Paso comprometido de la sntesis de purina
19. Nitrgeno marcado. Se lleva a cabo la biosntesis de purinas en presencia de [15N]-aspartato y se purifica el GTP y el ATP recin formados. Qu posiciones aparecern marcadas en los dos nucletidos? 5 20. Suministros necesarios. Por qu las clulas cancerosas son especialmente sensibles a los inhibidores de la sntesis de TMP? 6
Problemas de integracin de captulos
SO2NH2
Proponga u mecanismo para el efecto inhibidor de la sulfanilamida. 9. Un donador generoso. Qu importantes reacciones biosintticas utilizan PRPP? 10. Alcanzando el equilibrio. Cul es la relacin recproca entre sustratos que tiene lugar durante la sntesis de ATP y de GTP? 6 11. Siga el rastro del ATP. Cuntas molculas de ATP se necesitan para sintetizar una molcula de CTP partiendo de cero? 12. Encuentre el marcaje. Supongamos que se cultivan clulas en presencia de aminocidos cuyos tomos de carbono a han sido marcados con 13C. Identifique los tomos de la citosina y de la guanina que estarn marcados con 13C. 5 13. Siga el rastro de los carbonos. Se incubaron las clulas de un cultivo tisular con glutamina marcada con 15N en el grupo amida. Posteriormente, se purific el IMP y se observ que contena algunos tomos de 15N. Qu tomos del IMP estaban marcados? 5 14. Bloqueos. Si una cepa bacteriana carece de los siguientes compuestos bioqumicos, cul es el intermediario de la sntesis de purina que se acumular en cada caso? 5 (a) Aspartato. (b) Tetrahidrofolato. (c) Glicina. (d) Glutamina. 15. Mecanismo de accin. Cul es el fundamento bioqumico del tratamiento de la gota con alopurinol? 6 16. Terapia complementaria. En algunos casos, a los pacientes con leucemia agua que estn siendo tratados con frmacos anticancerosos se les administra alopurinol. Por qu se utiliza el alopurinol? 6 17. Insuficiencia de folato. Suponga que alguien padece una insuficiencia de folato. En su opinin, cules seran las clulas ms afectadas? Los sntomas pueden incluir diarrea y anemia. 18. Corrigiendo insuficiencias. Suponga que se encuentra una persona con insuficiencia de una de las enzimas necesarias para la sntesis de IMP. Cmo habra que tratar a esa persona?
21. Estn en todas partes! Los nucletidos desempean diversas funciones en la clula. D un ejemplo de un nucletido que participe en cada una de las funciones o procesos siguientes: (a) Segundo mensajero (b) Transferencia de grupos fosforilo (c) Activacin de carbohidratos (d) Activacin de grupos acetilo (e) Transferencia de electrones (f) Quimioterapia (g) Efector alostrico 22. Ejercitando el msculo. En el tejido muscular tienen lugar algunas reacciones interesantes que facilitan la generacin de ATP para la contraccin. 6
Fumarato Adenilsuccinato liasa
Adenilsuccinato
2 ADP
ATP + AMP
Adenilsuccinato sintetasa
H2O
NH3
IMP
Durante la contraccin muscular, el ATP se convierte en ADP. La adenilato quinasa convierte dos molculas de ADP en una molcula de ATP y otra de AMP. (a) Por qu esta reaccin resulta beneficiosa para el msculo que se contrae? (b) Por qu la constante de equilibrio para la adenilato quinasa es aproximadamente igual a 1? El msculo puede metabolizar AMP utilizando el ciclo de los nucletidos de purina. la reaccin inicial de este ciclo, catalizada por la AMP desaminasa, consiste en la conversin de AMP en IMP. (c) Cmo podra la desaminacin del AMP facilitar la formacin del ATP en el msculo? (d) Cmo puede el ciclo de los nucletidos de purina contribuir a la generacin aerbica de ATP? 23. Estilos distintos. Los seres humanos contienen dos enzimas carbamilfosfato sintetasa distintas. Una utiliza como sustrato el glutamato, mientras que la otra utiliza amoniaco. Cules son las funciones de estas dos enzimas? 24. Su pato mascota. Usted sospecha que su pato mascota tiene gota. Por qu se lo tendra que pensar dos veces antes de administrarle una dosis de alopurinol camuflada en el pan?
Problemas573
25. Inhibiendo la biosntesis de purinas. Las amidotransferasas se inhiben por el antibitico y agente antitumoral azaserina (O-diazoacetil-l-serina), que es un anlogo de la glutamina. 5
O N N O
+H N 3
H COO
27. Hiperuricemia. Muchos pacientes con insuficiencia de glucosa-6-fosfatasa presentan niveles elevados de urato en el suero. La hiperuricemia se puede inducir en personas normales mediante la ingestin de alcohol o mediante un ejercicio extenuante. Proponga un mecanismo comn que explique estas observaciones. 28. Carbono marcado. Se aade succinato marcado uniformemente con 14C a clulas que estn participando activamente en la biosntesis de pirimidinas. Proponga un mecanismo mediante el cual, los tomos de carbono del succinato se puedan incorporar a la pirimidina. En qu posiciones estar marcada la pirimidina? 5 29. Aqu pasa algo raro. Se incubaron clulas con glucosa marcada con 14C en el carbono 2, mostrado en rojo en la figura inferior. Despus, se purific el uracilo y se observ que contena 14C en los carbonos 4 y 6. Explique este patrn de marcaje. 5
CHO C C C C H HO H H OH H OH OH
Azaserina
En clulas tratadas con azaserina, qu intermediarios de la biosntesis de purinas se acumularan? 26. El medio HAT. Las clulas mutantes incapaces de sintetizar nucletidos mediante las rutas de recuperacin son herramientas muy tiles en biologa molecular y celular. Suponga que la clula A carece de la timidina quinasa, la enzima que cataliza la fosforilacin de timidina a timidilato, y que la clula B carece de hipoxantina-guanina fosforribosiltransferasa. (a) Las clulas A y B no proliferan en un medio HAT, que contiene hipoxantina, aminopterina o ametopterina (metotrexato) y timina. Sin embargo, la clula C, formada mediante la fusin de las clulas A y B s crece en este medio. Por qu? (b) Suponga que se quieren introducir genes forneos en la clula A. Disee un sencillo mtodo que le permita distinguir las clulas que han captado el DNA forneo de las que no. 5
CH2OH