CELULAS CONTROL DE COOMBS

1. Preparar una dilucin 1/10 de reactivo ANTI-Rh (D) y colocar un volu en pe!ue"o (por e#e plo$ %00ul) en un tu&o de prue&a previa ente rotulado co o c'lula( control de coo &( ()))). %. Prepara una (u(pen(in de he at*e( al +0, lavado en --..

/. A"adir al pri er tu&o0 !ue contiene la dilucin del reactivo Anti-D0 el volu en de e(ta (u(pen(in (%00ul). 1. Incu&ar a /23 por /0-1+ inuto(. inuto(0 de&iendo ho o4eni5ar la

i( o

e5cla cada 10

+. Tran(currido el tie po de incu&acin0 (e vuelve a ho o4eni5ar y (e prepara una (u(pen(in al /, de e(ta e5cla con --.. 6. De e(ta 7or a !uedan preparada( la( c'lula( control de coo &( (4l&ulo( ro#o( (en(i&ili5ado( con Anti-Rh). 2. 8(ta (u(pen(in (e puede utili5ar por /-+ d*a( y de&e dar una reaccin de %9 al en7rentarla con el reactivo de anti4lo&ulina hu ana coo &(.

PRUEBA CRUZADA MAYOR

FINALIDAD $ (e reali5a para veri7icar la co pati&ilidad entre lo( :R del donante y el pla( a del receptor0 e( decir0 veri7ica (i en el pla( a del receptor e;i(ten anticuerpo( diri4ido( contra ant*4eno( pre(ente( en lo( :R del donante.

FASE SALINA 1. 8n un tu&o 1%;2+ de&ida ente rotulado0 colocar II 4ota( de (uero o pla( a del receptor. %. A4re4ar I 4ota de una (u(pen(in de he at*e( al /, del donante (preparada previa ente). /. <e5clar y centri7u4ar a 1000rp (e4undo(. durante 1 inuto o a /+00rp por 1+

1. reali5ar la lectura de la prue&a 0 inclinando el tu&o (1+3apro;)7rente a una l= para o a4lutino(copio0 a4itar (uave ente ha(ta !ue (e de(prenda el &otn de :R del 7ondo del tu&o0 (i e(te &otn (e di(uelve (in 7or ar

4ru o(0 e( decir !ue no hay a4lutinacin0 la prue&a re(ulta co pati&le y (e continua con la (i4uiente 7a(e. -i el &otn (e de(prende 7or ando 4ru o(0 e( indicativo de inco pati&ilidad0 (e continua con la( otra( 7a(e(0 teniendo en cuenta !ue e(te donante no e( co pati&le con el receptor. >o( re(ultado( (e anotan tu&o en ano y (e re4i(trara ?o@ para la au(encia de a4lutinacin y (e 4raduara en cruce( para el ca(o contrario0 teniendo en cuenta par= etro( e(ta&lecido(.

FASE PROTEICA-TERMICA
+. >ue4o de reali5ar la lectura0 al i( o tu&o0 (e le a4re4an II 4ota( de al&u ina &ovina al %%,(potenciador de a4lutinacin) en 5ona( (inclinando el tu&o y de#ando !ue la al&u ina (e de(lice por la( parede( del i( o). 6. Incu&ar en &a"o ar*a a /23) por %0 a /0 inuto(.

2. Retirar del &a"o y (in a4itar0 centri7u4ar en la( condicione( y a indicada(. A. >eer y anotar re(ultado( co o (e indico anterior ente.

B. Del i( o odo la pre(encia de a4lutinacin indica inco pati&ilidad e inha&ilita al donante parea e(te receptor0 la au(encia de a4lutinacin indica co pati&ilidad y (e de&e (e4uir con la (i4uiente 7a(e.

FASE DE COOMBS
10. Reali5ar de % a 1 lavado(0 teniendo en cuenta lo( par= etro( e(ta&lecido(. 11. >ue4o del Clti o lavado (e de&e tener cuidado de eli inar toda la (alina de tal 7or a !ue (olo !ueden :l&ulo( Ro#o( en el 7ondo del tu&o0 en(e4uida a4re4ar II4ota( de reactivo de coo &( (anti4lo&ulina hu ana.)0 e5clar y centri7u4ar co o ya (e indico. 1%. >eer y anotar lo( re(ultado( tu&o en ano.

1/. -i hay a4lutinacin0 (e in7or a inco pati&le y (e 7inali5a la prue&a. -i re(ulta co pati&le (e de&e reali5ar la (i4uiente 7a(e.

FASE DE CONTROL DE CO0MBS

11. Al tu&o con re(ultado( co pati&le0 (e le a"aden II4ota( de c'lula( control de coo &( ())))0 (e centri7u4a y (e procede a leer0 de&i'ndo(e o&tener una a4lutinacin de %9. >a au(encia de a4lutinacin en e(ta 7a(e invalida la prue&a y e(ta de&e (er repetida0 haciendo un previo control de calidad al reactivo.

PRUEBA CRUZADA MENOR

FINALIDAD $ (e reali5a para veri7icar la co pati&ilidad entre lo( :R del receptor y el

pla( a del donante0 e( decir0 veri7icar (i en el pla( a del donante e;i(ten anticuerpo( diri4ido( contra ant*4eno( pre(ente( en lo( :R del receptor.

FASE SALINA 1. 8n un tu&o 1%;2+ de&ida ente rotulado0 colocar II4ota( de (uero o pla( a del
donante.

%. A4re4ar I 4ota de una (u(pen(in de he at*e( al /, del receptor (preparada

previa ente).

/.

e5clar y centri7u4ar a 1000rp

durante 1

inuto o a /+00rp

por 1+ (e4undo(.

1. 1.reali5ar la lectura de la prue&a0 inclinando el tu&o (1+3 apro;.) 7rente a una

l= para o a4lutino(copio0 a4itar (uave ente ha(ta !ue (e de(prenda el &otn de :R del 7ondo del tu&o0 (i e(to &otn (e di(uelve (in 7or ar 4ru o(0 e( decir !ue no hay a4lutinacin0 la prue&a re(ulta

)o pati&le y (e continua con la (i4uiente 7a(e0 (i el &otn (e de(prende 7or ando 4ru o(. 8( indicativo de inco pati&ilidad0 (e continCa con la( otra( 7a(e(0 teniendo en cuenta !ue e(te donante no e( co pati&le con el receptor. >o( re(ultado( (e anotan tu&o en ano y (e re4i(trara ?o@ para la au(encia de a4lutinacin y (e 4raduara en cruce( para el ca(o contrario0 teniendo en cuenta par= etro( e(ta&lecido(.

FASE PROTEICA - TERMICA

+. lue4o de reali5ar la lectura0 al i( o tu&o (e le a4re4an II 4ota( de al&u ina &ovina al %%,( potenciador de a4lutinacin) en 5ona (inclinando el tu&o y de#ando !ue la al&u ina (e de(lice por la( parede( del i( o). 6. incu&ar en &a"o ar*a a /23)por %0 a inuto(.

2. retirar del &a"o y (in a4itar0 centri7u4a en la( condicione( ya indicada(. A. leer y anotar re(ultado co o (e indico anterior ente.

B. del i( o odo la pre(encia de a4lutinacin indica inco pati&ilidad e inha&ilita al donante parea e(te receptor0 la au(encia de a4lutinacin indica co pati&ilidad y de&e (e4uir con la (i4uiente 7a(e.

FASE DE COOMBS
10. Reali5ar de % a 1 lavado0 teniendo en cuenta lo( par= etro( e(ta&lecido(. 11. >ue4o del Clti o lavado (e de&e tener cuidado de eli inar toda la (alina de tal 7or a !ue (olo !ueden :l&ulo( Ro#o( en el 7ondo del tu&o0 en(e4uida a4re4ar II 4ota( de reactivo de coo &( (anti4lo&ulina hu ana.)0 e5clar y centri7u4ar co o ya (e indico. 1%. >eer y anotar lo( re(ultado( tu&o en ano.

1/. -i hay a4lutinacin0 (e in7or a inco pati&le y (e 7inali5a la prue&a. -i re(ulta co pati&le (e de&e reali5ar la (i4uiente 7a(e.

FASE DE CONTROL DE COOMBS

1+. Al tu&o con re(ultado co pati&le0 (e le a"aden II 4ota( de c'lula( control de coo &( ())))0 (e centri7u4a y (e procede a leer0 de&i'ndo(e o&tener una a4lutinacin de %9. >a au(encia de a4lutinacin en e(ta 7a(e invalida la prue&a y e(ta de&e (er repetida0 haciendo un previo control de calidad.

PRUEBAS DE ANTIGLOBULINA DIRECTA (COOMBS DIRECTO)

8( u(ada para detectar la (en(i&ili5acin ?in vivo@ de lo( 4l&ulo( ro#o(. 8( de 4ran valor en el dia4no(tico de$ 8n7er edad he ol*tica del reci'n nacido. Ane ia he ol*tica autoin une. Ane ia he ol*tica y (en(i&ili5acin inducida por dro4a(. Inve(ti4acin de reaccione( po(-tran(7ucionale(.

PROCEDIMIENTO:
1. 8n un tu&o de en(ayo de 10 o 1% ; 2+ Paciente al /, (u(pendida en ((7. 0 colocar una 4ota de c'lula( ro#a( del

%. A4re4ar (u7iciente ((7 al tu&o0 tratando de o&tener una (u(pen(in uni7or e de >a( c'lula(. /. )entri7u4ar a /000rp ; % inuto( para e pa!uetar lo( 4l&ulo( ro#o( en el .ondo del tu&o. Decantar co pleta ente toda la (alina. 1. A4re4ar una( 4ota( de (alina 7re(ca al tu&o0 re(u(pender la( c'lula( y a4re4ar =( ((7 para reali5ar el (e4undo lavado. +. )entri7u4ar nueva ente y repetir el lavado(. i( o procedi iento ha(ta co pletar 1

6. In ediata ente de(pu'( del cuarto lavado a4re4ar do( 4ota( de reactivo de Anti4lo&ulina hu ana (Rvo de coo &() y e5clar. 2. )entri7u4a a /100rp ; 1+ (e4undo( o 1000 ; 1 inuto(.

A. 8;a inar el tu&o para o&(ervar (i hay a4lutinacin0 4raduarla en cruce( y anotar el re(ultado tu&o en ano. B. >a( prue&a( ne4ativa( de&en con7ir ar(e con c'lula( control de coo &(. Al tu&o De la prue&a ne4ativa (e a4re4a una 4ota de c'lula( control de coo &(0 e5clar0 centri7u4ar0 leer y anotar lo( re(ultado( tu&o en ano.

INTERPRETACION$
-i la prue&a de Anti4lo&ulina ue(tra a4lutinacin0 (e interpreta po(itiva0 (i4ni7ica !ue hu&o (en(i&ili5acin ?in vivo@ de lo( eritrocito( y (e in7or a$ Prueba de A !"#$%bu$" a % de &%%'b( d"re&!% )%("!"*%+ (e"alando en cruce( la inten(idad de la reaccin e#e plo$ /919.etc.

-i no hu&o a4lutinacin0 la prue&a e( ne4ativa y (i4ni7ica !ue no hu&o auto(en(i&ili5acion eritrocitaria.

-i la prue&a de anti4lo&ulina e( ne4ativo0 (er= v=lida0 (ola ente0 (i la prue&a control de coo &( e( po(itiva. 8n e(te ca(o (e in7or a Prueba de A !"#$%bu$" a % de C%%'b( D"re&!% Ne#a!"*%,

PRUEBAS DE ANTIGLOBULINA INDIRECTA (COOMBS INDIRECTO)

Per ite detectar la (en(i&ili5acin ?in vivo@ de lo( 4l&ulo( ro#o(. >a prue&a de Anti4lo&ulina indirecta (e u(a en$

Deteccin (con c'lula( detectora( o@ c'lula( pantalla@) e identi7icacin (con c'lula( panel) de anticuerpo( irre4ulare(. 8n la parte 7inal de la prue&a de co pati&ilidad. Deteccin de ant*4eno( no de o(tra&le( por otra( t'cnica($ D D 0 EeII0 Du77y0 Eidd0 etc. Prue&a( e(peciale($ con(u o antileucocitario(0 antipla!uetario(. de anti4lo&ulina0 e(tudio de anticuerpo

-en(i&ili5acin con Rh (anticuerpo anti-Rh).

PROCEDIMIENTO:
1. Rotular do( tu&o( de en(ayo de 10 ;2+ o 1%;100 autocontrol (Ac). 0 uno co o T)I y otro co o

%. )olocar en a &o( tu&o(0 II 4ota( de (uero 7re(co en e(tudio. /. A4re4ar una 4ota de una (u(pen(in al /, de :l&ulo( Ro#o(0 :rupo -an4u*neo ?F@0 7actor Rh po(itivo al tu&o rotulado co o T)I0 y una 4ota de (u(pen(in al /, de :l&ulo( Ro#o( del paciente al tu&o rotulado co o autocontrol. 1. A4re4ar a a &o( tu&o II 4ota( de al&u ina &ovina poli eri5ada o al&u ina al %%, o al /0,0 centri7u4ar0 leer y anotar lo( re(ultado( tu&o en ano. +. Incu&ar a /2) por 1+ a /0 en ano. inuto(. )entri7u4ar0 leer y anotar lo( re(ultado( tu&o

6. >avar 1 vece( con (u7iciente ((7 co o en la prue&a directa0 decantado cada ve5 toda la (alina. 2. A4re4ar do( 4ota( del reactivo anti4lo&ulina hu ana polie(peci7ico y A. )entri7u4ar0 leer y anotar lo( re(ultado( tu&o en ano. e5clar.

B. )o pro&ar la( prue&a( ne4ativa( con c'lula( control de coo &(.

INTERPRETACION:
Prue&a( de Anti4lo&ulina ne4ativa Prueba( de A !"#$%bu$" a e#a!"*a, a( prue&a control de coo &( po(itiva$

Prue&a( de Anti4lo&ulina ne4ativa =( prue&a( de control ne4ativa$ prue&a no validaG repetir todo el procedi iento. Averi4uar la cau(a del error.

Prue&a de autocontrol po(itiva0 indica autoa4luitinacion0 e( decir0 evidencia la pre(encia de auto anticuerpo.

DETERMINACION DEL ANTIGENO D

-&% (uer% a !"-D de A!a )r%!e. a M/!%d% e !ub%, 0, Preparar una (u(pen(in de c'lula( al /, en ((70 previa ente lavada0 una ve5. 1. Identi7icar apropiada ente do( tu&o de 10 ; 2+ Rh y (u )orre(pondiente control Rh 2, 8n el tu&o identi7icado para la prue&a Rh0 colocar una 4ota del reactivo Rh 3, 8n el tu&o identi7icado por el control Rh0 colocar una 4ota de control Rh ((e puede Dtili5ar al&u ina &ovina al %%, co o reactivo control Rh). 4, A4re4ar a cada tu&o una 4ota de (u(pen(in de :R al /,rp 5, <e5clar y centri7u4ar a /000rp la A4lutinacin. ;% inuto(. ; % inuto(. .o 1%;2+ 0 para la prue&a

6, Re(u(pender (uave ente el &otn de c'lula( del 7ondo del tu&o y leer en cruce(

LECTURA E INTERPRETACION DE LA REACCION A#-A&

8l 4rado de a4lutinacin o he at*e( o inten(idad de la he oli(i( de&e anotar(e0 tu&o en ano0 con cada lectura. Todo el per(onal de&e e plear la i( a etodolo4*a e interpretacin de la( lectura(. Dna e(cala reco endada para la lectura de la a4lutinacin e( la (i4uiente$ 19 /9 7ondo( )laro. %9 19 Hario( 4ru o( de ta a"o :ru o( pe!ue"o( y ediano0 7ondo claro. Dn &otn (olido de eritrocito(0 7ondo claro Dn 4ra o 4rande y vario( uy pe!ue"o( o vario( 4ru o( 4rande(0

ucho( eritrocito( li&re(0 7ondo tur&io.

I 9 8(ca(o( 4ru o( F Jp Jt Ne4ativo.

uy pe!ue"o(0 co o arenilla0 7ondo tur&io.

Je oli(i( parcial. he oli(i( total.

SUSPENSI7N DE 8EMATIES AL 29
1. Rotular co o corre(ponde un tu&o de en(ayo. %. )olocar 1cc (apro;) de (olucin (alina 7i(iol4ica (--.$ cloruro de (odio al 00A+00B,). /. A4re4ar una al*cuota (%-1 4ota() de (an4re (o&tenida con anticoa4ulante)0 e5clar. 1. A"adir lue4o0 --. ha(ta llenar la( tre( cuarta( parte( del tu&o0 utili5ando una pel*cula de para7il 0 tapar el tu&o y e5clar por inver(in ((in a4itar) una( 1+a %0 vece(. +. )entri7u4ar a 1000rp por un inuto o a /+00rp durante 1+ (e4undo(.

6. 8li inar la (alina inclinando el tu&o0 teniendo cuidado de !ue no cai4an lo( 4l&ulo( ro#o(. 2. Repetir de(de el pa(o 1 ha(ta el 6 ha(ta co pletar cuatro lavado(. A. >ue4o del Clti o lavado0 !ueda un &otn de 4l&ulo( ro#o(0 de e(te pa!uete de he at*e( e;traer con una icropipeta /0ul y (u(penderlo( en otro tu&o previa ente rotulado y !ue conten4a B20ul de --.. B. 8(ta (u(pen(in tiene un tie po de duracin de apro;i a de / a + d*a(.

INTERPRETACION ANTI-R: 9 (9) d'&il

9

CONTROL R: 9

INTERPRETACION
Rh po(itivo Po(i&le DD Rh ne4ativo o po(i&le Du Autoa4lutinacion (inve(ti4ar dicha (ituacin)

KPracticar la prue&a Du

PRUEBA PARA LA DETERMINACION DE DU

Para e(ta prue&a pueden (er u(ado( lo( i( o( tu&o( e pleado( en la deter inacin de ant*4eno D0 a eno( !ue la( in(truccione( del 7a&ricante (e"alen otro 'todo.

PROCEDIMIENTO:
1. Incu&ar a /2) a &o( tu&o( por 1+ &ovina). %. >avar lo( tu&o( 1 vece(. /. A4re4ar a cada tu&o do( 4ota( de reactivo de coo &(. <onoe(peci7ico 1. )entri7u4ar +. Re(u(pender (uave ente el &otn de c'lula( el 7ondo y leer en cruce( la a4lutinacin. inuto( (no e( nece(ario a4re4ar al&u ina

INTERPRETACION: ANTI-R: 9 9 CONTROL R: 9 INTERPETACION Rh Ne4ativo Rh Po(itivo Prue&a no valida. Llo!ueo in vivo por anticuerpo. -e de&e proceder a la prue&a Rh con (uero anti-D (alino0 o anti-D de ol'cula( I4: odi7icada.