DETERMINACIN DE FOSFATASA ALCALINA Informe de Laboratorio #10 Bioqumica II

lunes, 20 de agosto de 2012

Informe de Laboratorio #10 DETERMINACIN DE FOSFATASA ALCALINA MARCO TERICO Fosfatasa Alcalina La Fosfatasa Alcalina (FA) es una enzima que se encuentra en casi todos los tejidos del cuerpo, pero es mayor su presencia en el hgado, las vas biliares y los huesos. La fosfatasa alcalina tiene un gran variedad de isoenzimas con leves diferencias en su estructura, que sugieren diferentes orgenes por cada tejido (FA1 del hgado, FA2 del hueso). Estas isoenzimas pueden ser cuantificadas por separado si es necesario. Una de las mayores fuentes de fosfatasa alcalina es el hueso por ello en los nios y adolescentes con crecimiento seo esta enzima est normalmente elevada. Se realiza en el contexto de otras pruebas hepticas (GOT, GPT, Bilirrubina, GammaGT) y se utiliza para evaluar problemas o alteraciones del hgado. Es muy sensible, sobre todo, en problemas de obstruccin de las vas biliares. Es la enzima ms sensible a los problemas hepticos producidos tumores metastsicos. Suele asociarse a la elevacin de la gamaGT, excepto que en los problemas seos en solo se eleva la fosfatasa alcalina. FUNDAMENTO Las fosfatasas alcalinas (FAL) catalizan la hidrlisis del 4-nitrofenilfosfato (4-NFF) formando 4nitrofenol y fosfato inorgnico, actuando el tampn alcalino como aceptor del grupo fosfato. La reaccin se controla cinticamente a 405 nm a partir de la velocidad de formacin del 4nitrofenol, proporcional a la actividad FAL presente en la muestra.

MATERIALES Pipeta automtica, de ul Muestra (sangre) Tubo rojo, para suero sanguneo

 Espectrofotmetro Tubos de ensayo Cubeta de 1cc Vacutainer, campana y aguja Algodn y alcochol REACTIVOS R1. FAL tampn. Cloruro de magnesio R2. FAL sustrato. 4-NFF PROCEDIMIENTO 1. Tomar la muestra de sangre en tubo rojo 2. Preparar el Reactivo de Trabajo mezclando: 4ml de R1 y 1 ml de R2 3. Preincubar el reactivo de trabajo, muestras y controles a la temperatura de reaccin. 4. Ajustar a 0 el fotmetro con agua destilada. 5. Pipetear en una cubeta:

Reactivo de trabajo Muestra

Desconocido 1ml 20ul

6. Mezclar suavemente por inversin. 7. Insertar la cubeta en el compartimiento a 405nm y poner el cronmetro en marcha. 8. Incubar durante 1 minuto y anotar la absorbancia inicial. 9. Repetir las lecturas exactamente a los 1,2 y 3 minutos. 10. Calcular la diferencia entre absorbancias. 11. Calcular el promedio de los resultados para obtener el cambio promedio en absorbancia por minuto (A/min).

NORMALIDAD 25C Nios, hasta 480 U/L (8,0 ktal/L) Adultos, hasta 180 U/L (3,0 ktal/L)

30C Nios, hasta 590 U/L (9,8 ktal/L) Adultos, hasta 220 U/L (3,7 ktal/L) 37C Nios, hasta 800 U/L (13,3 ktal/L) Adultos, hasta 270 U/L (4,5 ktal/L) RESULTADOS

Blanco 0.000 Muestra (Absorbancia Inicial, 1er min, 2do min y 3er min) Factor 2764 Tiempo Muestra Inicial 0,224nm 1er minuto 0,228nm 2do minuto 0,225nm 3er minuto 0,226nm 0,228nm - 0,224nm= 0,004 0,228nm - 0,225nm= 0,003 0,226nm - 0,226nm= 0,001 0,004 + 0,003 + 0,001 = 0,008 / 3 = 0,0026 0,0026 * 2764 = 7,3706 U/l

CONCLUSIN Para la determinacin utilizamos tubo tapa roja para obtener suero sanguneo debido a que si usamos el de tapa lila que contiene anticoagulante EDTA va a inhibir la actividad enzimtica. Lo que se realiz fue una determinacin cintica debido a medimos la diferencia de reaccin enzimtica de la muestra al inicio, 1er, 2do y 3er minuto. Adems se la determin a 405nm y no

tuvo color. Para el resultado se calcul la diferencia entre las absorbancias y se las dividi para 3, para obtener el promedio de los minutos. Despus se multiplic para el factor que fue dado 2764. BIBLIOGRAFA Fosfatasa Alcalina (s.f.). TuOtroMdico.com. Recuperado de: http://www.tuotromedico.com/temas/fosfatasa_alcalina.htm ALKALINE PHOSPHATASE BR (s.f.). Linear Chemicals, S.L. Recuperado de: http://www.linear.es/ficheros/archivos/8_1103005C.pdf