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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD BIOQUMICA CLINICA II GUA PARA PRCTICA DE LABORATORIO No.3 1. TEMA: Determinacin cuantitativa de glucosa basal y postprandial en suero sanguneo. 2. OBJETIVOS: 2.1. OBJETIVO GENERAL: Determinar las concentraciones de glucosa en suero en condiciones de ayuno y postprandial con el mtodo enzimtico colorimtrico punto final.

2.2.

OBJETIVO ESPECFICO: - Explicar claramente como se debe preparar el paciente para realizarse esta prueba. - Conocer los valores referenciales de glucosa postprandial en suero sanguneo. - Identificar las condiciones pre-analticas y post analticas necesarias para la determinacin de Glucosa Postprandial. - Calcular la concentracin de glucosa basal y postprandial en la muestra de suero obtenido. - Interpretar los resultados obtenidos de su paciente y correlacionarlos con su importancia biomdica. - Interpretar los trminos linealidad y lmite de deteccin para estas determinaciones. 3. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS: - Temporizador. - 1 Gradilla - 10 Tubos de ensayo pequeos, perfectamente limpios y secos - Pipeta automtica de 10 L y 1000L y puntas - Tubos vacutainer Tapa roja Espectrofotmetro con compartimiento de Medicin termostatado a 37C para leer a (50020nm). Centrifuga Calculadora (individual) Frasco mbar de 25mL perfectamente limpio y seco

(Obtener los SUEROS das antes de la practica) de un compaero con obesidad y/o antecedentes familiares de diabetes. Suero del estudiante en ayunas uno por grupo, Suero del mismo estudiante despus de dos horas de haber ingerido un desayuno habitual. Obtener suero correctamente para inhibir al mximo la glucolisis y codificar correctamente. REACTIVOS: - Agua destilada, Solucin salina - GLUCOSA R1. MONOREACTIVO: Tampn fosfato pH 7.5, glucosa Oxidasa, peroxidasa, 4aminoantipirina, Fenol. CAL. PATRN DE GLUCOSA O STANDARD: Glucosa 100mg/dL (5.55mmol/L). ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Analizar las muestras de suero de inmediato o refrigerarlas. Estables una semana a Temperatura de refrigeracin 4-8C. Lic. Franklin Ramos, guardar en refrigeracin los sueros entregados, previa a su cordial solicitud verbal. BIOQUMICA CLINICA II
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4. FUNDAMENTO TEORICO
Las determinaciones de glucosa son fundamentales en el diagnostico y tratamiento de las enfermedades relacionadas con el metabolismo de los carbohidratos y se realizan en sangre total, plasma, suero, LCR, liquido pleural y orina. La sangre venosa es la muestra de eleccin para el anlisis de glucosa. A temperatura ambiente en la muestra obtenida, la glucosa se metaboliza a una velocidad de 7mg/dL/h (0.4mmmol/L/h), y a 4C la prdida es aproximadamente 2mg/dL/h. el ndice de metabolizacin es mayor en presencia de contaminacin bacteriana o leucocitosis. Una muestra de suero es vlida para el anlisis de glucosa si es separado de las clulas en un plazo de 30 minutos; no obstante para tiempos superiores, debe aadirse un conservante como el fluoruro sdico (tubo tapa gris) para inhibir la glicolisis. En muestras de suero sin bacterias contaminantes o leucocitosis, un retraso superior a 90 minutos en la separacin del suero aun puede proporcionar resultados clnicamente aceptables. El diagnostico de diabetes se establece cuando la concentracin plasmtica en ayunas es mayor o iguala 126mg/dL (7.0mmol/L) al menos en dos ocasiones; la prueba debe realizarse tras 8 horas de ayuno y menor de 140mg/dL (7.8 mmol/L) dos horas postprandial. Es suficiente para el diagnostico de diabetes la deteccin de niveles ocasionales de glucosa plasmtica mayores o iguales a 200mg/dL(11.1 mmol/L) asociados a sntomas de hiperglucemia (p.ej., poliuria, polidipsia, polifagia, prdida de peso inexplicable). En la prueba de tolerancia a la glucosa oral se utiliza una sobrecarga de glucosa de 75 gramos y considera como diagnostico de diabetes un nivel de glucosa superior o igual a 200mg/dL. Para la deteccin precoz de la diabetes gestacional se recomienda una prueba de sobrecarga con 50 gramos de glucosa oral, si la concentracin de glucosa tras una hora es igual o superior a 140mg/dL se aconseja la realizacin de una prueba completa de tolerancia con 100gramos de glucosa oral durante tres horas. El diagnostico de diabetes gestacional se establece cuando la mujer iguala o supera al menos dos de los cuatro niveles de glucosa plasmticos siguientes: en ayunas 105mg/dL, despus de una hora190mg/dL, a las dos horas 165mg/dL y a las tres horas 145mg/dL. Antes de realizar la prueba de tolerancia oral a la glucosa los sujetos deben ingerir al menos 150 gramos diarios de Carbohidratos durante los tres das anteriores, el anlisis debe realizarse en ayunas, los sujetos en estudio en el transcurso de la noche no pueden comer, beber t, caf o alcohol , hacer ejercicios violentos o fumar cigarrillos. Es preferible recoger las muestras de sangre venosa en tubos de tapn gris (Fluoruro de sodio +EDTA). Los niveles de hemoglobina glucosilada (HbA1C) son tiles en la monitorizacin del control de la glucemia. (Henry, 2005) DIABETES MELLITUS INSULINO DEPENDIENTE (DMID) Usualmente aparece en personas jvenes, con mayor frecuencia entre los 15 y los 20 aos, aunque puede comenzar antes de los 40 aos. Se trata de personas no obesas que abruptamente presentan los sntomas y signos clsicos manifiestos y prdida de peso. En no pocos casos se presenta con episodios de cetoacidosis diabtica (CAD). LA CETOACIDOSIS DIABTICA (CAD) En ingls Diabetic Ketoacidosis, DKA, hace referencia a una descompensacin de la diabetes mellitus que, junto con el estado hiperosmolar y la hipoglicemia secundaria, son las tres principales complicaciones agudas de la diabetes mellitus. A diferencia de las complicaciones crnicas, esta complicacin se desarrolla en cuestin de horas y pone en peligro la vida del paciente, por lo que se considera una urgencia mdica. Los cuerpos cetnicos son el cido acetoactico (acetoacetato) y el cidobetahidroxibutrico (hidroxibutirato); una parte del acetoacetato sufre descarboxilacin dando acetona (una cantidad insignificante en condiciones normales); los dos primeros son cidos y el tercero, una cetona. SINTOMATOLOGA Inicialmente los sntomas son los propios de una Diabetes Mellitus descontrolada: poliuria, polifagia y polidipsia, a los que se le aade malestar general, cefalea, BIOQUMICA CLINICA II
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debilidad, astenia y adinamia. Conforme la deshidratacin y la alteracin hidroelectroltica se acentan, se aade desorientacin y sopor (especialmente en pacientes debilitados o ya enfermos), as como nasea, vmito y dolor abdominal. La exploracin fsica muestra datos tpicos de deshidratacin (boca y conjuntivas secas, ojos hundidos, piel seca, pulso dbil, hipotensin, respiracin superficial), junto con datos de gravedad (hipotensin severa, pulso no detectable, falta de reaccin a estmulos) y algunos ms especficos como la respiracin de Kussmaul (respiracin rpida, profunda, irregular) provocada por la acidosis metablica y el "aliento cetnico" o aliento con olor a frutas cidas, provocado por la salida de acetona a travs del aliento. DATOS DE LABORATORIO El elemento ms destacable es la hiperglucemia que, casi invariablemente, se encuentra en niveles por encima de los 250 mg/dL. El grado de acidosis metablica se evala a travs de la medicin del pH sanguneo y la concentracin de bicarbonato. En casos leves el pH flucta entre 7.25 a 7.30, y el bicarbonato entre 15 a 18 mEq/L; sin embargo en casos graves pueden descender hasta <7.00 y <10 mEq/L respectivamente, concentraciones que se asocian con estupor y coma. DIAGNSTICO La CAD se caracteriza por hiperglucemia, cetosis y acidosis metablica (con aumento del anion gap). Es frecuente que el bicarbonato srico sea <10 mmol/L, y el pH arterial oscile entre 6.8 y 7.3, dependiendo de la gravedad de la acidosis. El ascenso del nitrgeno de la urea sangunea (BUN) y de la creatinina srica refleja el decremento de volumen intravascular. Aunque las determinaciones de creatinina srica pueden estar falsamente elevadas por el acetoacetato (uno cuerpo cetnico). Se encuentra a menudo leucocitosis, hipertrigliceridemia e hiperlipoproteinemia. El sodio srico est disminuido a consecuencia de la hiperglicemia, porque la hiperglicemia hace que salga agua de las clulas y terminan diluyendo el sodio srico. (Wikipedia, 2013) DIABETES MELLITUS NO INSULINODEPENDIENTE (DMNID) Habitualmente comienza en la edad media, despus de los 40 aos; generalmente se trata de sujetos obesos o con sobrepeso. La sintomatologa es gradual y moderada, pero si no es detectada puede conducir a un coma hiperosmolar. Con frecuencia, el diagnstico se realiza en un individuo asintomtico al que se le detectan cifras de glicemia elevadas en un examen corriente de laboratorio. Es excepcional que estos pacientes presenten CAD. En la primera visita, el mdico debe realizar una cuidadosa evaluacin del paciente que incluya una historia completa de los antecedentes familiares y personales. Se debe hacer nfasis en los factores de riesgo, infecciones previas, hbitos dietticos, consumo de medicamentos, as como efectuar una detallada descripcin de los sntomas referidos por el paciente, incluidos aspectos psquicos relacionados con la afeccin. De igual forma, el mdico debe realizar un examen fsico integral y prestar especial atencin a los sistemas afectados por la diabetes, para detectar complicaciones precoces o daos iniciales en los ojos, la cavidad oral, tiroides, aparato musculo esqueltico, sistema cardiovascular, abdomen, piel, pies, sistema nervioso (central y perifrico), entre otros. Tambin deben medirse el peso y la talla para calcular el ndice de masa corporal (IMC). (Batista, Ortega, & Fernndez, 1998) El ndice de masa corporal (IMC) es una medida de asociacin entre el peso y la talla de un individuo

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La informacin obtenida luego de este examen clnico permitir hacer una evaluacin inicial del estado del paciente, la que determinar la conducta y el seguimiento que se le debe dar, as como la necesidad de su valoracin por otros especialistas y los estudios de laboratorio que ser necesario realizar en lo adelante. Los anlisis de laboratorio tienen la finalidad de evaluar el estado de control metablico y la presencia de complicaciones. En ese sentido, debe efectuarse la determinacin de la glucosa plasmtica en ayunas y posprandial de 2 horas, los niveles de hemoglobina glicosilada (HbA1), las cifras de lpidos en ayunas (colesterol total, LDL-colesterol, HDL-colesterol y triglicridos), de la creatinina srica, proteinuria, glucosuria y cetonuria, los niveles de TSH (en pacientes con DMID), realizarse un electrocardiograma (EKG) y otros exmenes que se requiera indicar. ETIOPATOGENIA DEL PIE DIABTICO: (Mecanismos integrados en su patogenia)

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MTODO DE ANALISIS: Enzimtico Colorimtrico, Punto Final CONDICIONES DE REACCION: Color proporcional a la concentracin VALORES DE REFERENCIA (SUERO) GLUCOSA EN AYUNAS

Adultos 70-105 mg/dL (3,89-5,83mmol/L) Nios 60-110mg/dL (3,33-6,11mmol/L) Neonatos 40-60mg/dL (2,22-3,33mmol/L) GLUCOSA POSTPRANDIAL - 65-139 mg /dl valores normales de glucosa post prandial. - En la persona no diabtica, los valores de glucosa postprandial tras dos horas no exceden de 140 mg/dl. - 140-200 mg/ dL Indica tolerancia alterada de la glucosa. >200 mg / dL es Diagnostica de Diabetes Mellitus. - Los niveles aumentan moderadamente en personas mayores de 50 aos 5. DISEO EXPERIMENTAL - Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente - Pipetear en los tubos rotulados: TUBOS Reactivo Standard muestra 1 muestra 2 BLANCO 1mL STANDARD 1mL 10L MUESTRA 1 1mL 10L MUESTRA 2 1mL 10 L

MUESTRA 1 = suero obtenido en ayunas MUESTRA 2 = suero obtenido despus de 2 horas del ingesta del desayuno habitual Mezclar y reposar los tubos 10 minutos a temperatura ambiente cinco minutos a 37C. Leer la absorbancia (A) del patrn y de la muestra frente al blanco del reactivo. El color es estable 2 horas protegido de la luz (glucosa). Calcular la concentracin de glucosa, Para expresar los resultados en unidades SI aplicar: mg/dL*0.0555=mmol/L Muestras con concentraciones superiores a 500mg/dL deben diluirse 1:4 con solucin salina y repetir el ensayo. Multiplicar los resultados por 4. Limite de deteccin=0.63mg/dL Linealidad= hasta 500mg/dL

6. CALCULOS

con:

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7. CUESTIONARIO 7.1. Explique los mecanismos involucrados en la patogenia de las complicaciones crnicas de la Diabetes Mellitus, tomando en cuenta los siguientes organizadores grficos.

7.2.
7.3. 7.4.

7.5. 7.6. 7.7.

Utilizando organizadores grficos e imgenes describa las complicaciones agudas y crnicas (microangiopata, macroangiopatia y neuropata) de la Diabetes Mellitus. Describa los factores predisponentes, precipitantes y agravantes en la aparicin y evolucin del Pie Diabtico. En qu situaciones el mdico solicita las pruebas de laboratorios, curva de tolerancia oral a la glucosa y hemoglobina glicosilada? En que fluidos biolgicos se dosifican cada una de ellos. En qu fluido biolgico se dosifica Hemoglobina glicosilada y mtodo de anlisis es usado? Qu es un bypass gstrico metablico? En qu casos se utiliza? En qu pacientes se utiliza? Pros y Contra de su utilizacin. Realizar un glosario de los siguientes trminos: poliuria, polifagia, polidipsia, etiopatogenia, astenia, adinamia, cefalea, sopor, estupor, coma, cetosis, leucocitosis, hemoglobina glicosilada, proteinuria, glucosuria y cetonuria.

BIBLIOGRAFA
Batista, R., Ortega, L., & Fernndez, G. (1998). http://www.bvs.sld.cu/revistas/res/vol11_1_98/res02198.htm Revistas medicas Cubanas. Obtenido de

Henry, J. (2005). El Laboratorio en el Diagnostico Clnico. Madrid: Marbn. Wikipedia, O. (05 de 2013). Cetoacidosis diabtica. Obtenido de http://es.wikipedia.org/wiki/Cetoacidosis_diab%C3%A9tica

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