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No. 1 NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO El trabajo en el laboratorio requiere la observacin de una serie de normas de seguridad que eviten posibles accidentes debido a desconocimiento de lo que se est haciendo o a una posible negligencia de los alumnos y alumnas que estn en un momento dado trabajando en el laboratorio. La bioseguridad se refiere a las medidas para evitar la transmisin de agentes lesivos (biolgicos qu!micos o f!sicos" tanto a los usuarios como a los encargados de dar un servicio mdico. El riesgo ms importante es la infeccin no obstante se debe de tomar en cuenta todos los riesgos de accidentes que pueda llevar a lesiones. Los centros de atencin mdica producen desechos slidos y l!quidos los cuales para fines prcticos son clasificados en comunes, peligrosos y especiales. Los desechos comunes provienen de actividades administrativas de recreacin de cocina y preparacin o venta de alimentos. #u destino depende de un manejo municipal que los lleva usualmente a un relleno sanitario administrativo por la municipalidad. Los desechos peligrosos son los producidos en instituciones dedicadas al cuidado de pacientes que por naturale$a pueden afectar la salud humana animal y medio ambiente. Esta categor!a de desechos se dividen en% Bio in!ecciosos" sangre y derivados secreciones humanas equipo materiales contaminados con las mismas material pun$o cortante (principalmente agujas hipodrmicas". #u$micos% reactivos de laboratorio corrosivos t&icos y citot&icos. ' Ra%ioac&i'os. Los desechos Especiales son mobiliario y equipo en desuso objetos de gran tama(o frmacos y reactivos de laboratorio vencidos y otros que no deben ser depositados en los recipientes normales de desechos. )*+,-# 1. Lavado de manos. .. /ada grupo de prcticas se responsabili$ar de su $ona de trabajo y de su material. 0. El uso de la bata es de carcter obligatorio ya que evita posibles proyecciones de sustancias qu!micas lleguen a la piel. 1or supuesto adems evitars posibles deterioros en tus prendas de vestir. 2. #i tienes el pelo largo es conveniente que lo lleves recogido. 3. En el laboratorio est terminantemente prohibido% fumar tomar bebidas comer y jugar con sus compa(eros. 4. #e debe de llevar $apatos cerrados. 5. 6rabajar con guantes. 7. 1resentarse a la hora indicada por el docente 8. )o entrar bolsas maletas o mochilas. 19. )o abrir las vitrinas con materiales o reactivos. 11. 6apar los microscopios despus de usarlos 1.. ,anejar los equipos y materiales cuidando su conservacin y orden.

10. )o sacar del laboratorio material o equipo 12. :esechar el material inservible en el basurero. #eg;n su clasificacin. 13. ,antener limpia el rea de trabajo 14. :ejar limpio y en su lugar los instrumentos utili$ados. 15. )o manchar mesas instrumentos o equipos del laboratorio. 17. <ueda prohibida la entrada permanencia y uso del laboratorio a personas no -utori$adas. =6>L>?-/>@) :E 1+*:=/6*# <=A,>/*# 1. -ntes de utili$ar un compuesto asegurarse bien de que es el que se necesita fijarse bien el rtulo. .. /omo regla general no tocar ning;n producto qu!mico. 6u profesor o profesora te lo proporcionar. 0. )o devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos utili$ados sin consultar con el profesor. 2. Es muy importante que cuando los productos qu!micos de desecho se viertan en la pila de desagBe aunque estn debidamente neutrali$ados debe dejarse que circule por la misma abundante agua. 3. )o tocar con las manos y menos con la boca los productos qu!micos. 4. )o pipetear con la boca. =tili$ar la bomba manual una jeringuilla. 5. Los cidos requieren un cuidado especial. /uando queramos diluirlos nunca echar agua sobre ellosC siempre al contrario es decir cido sobre agua. 7. Los productos inflamables (gases alcohol ter etc." no deben estar cerca de fuentes de calor. #i hay que calentar tubos con estos productos se har al ba(o de ,ar!a nunca directamente a la llama. 8. #i se vierte sobre ti cualquier cido o producto corrosivo lvate inmediatamente con mucho agua y avisa al profesor. 19. -l preparar cualquier disolucin se colocar en un frasco limpio y rotulado convenientemente. =6>L>?-/>@) :EL D>:+>* 1. /uidado con los bordes y puntas cortantes de los tubos u objetos de vidrio. .. El vidrio caliente no se diferencia a simple vista del vidrio fr!o. 1ara evitar quemaduras dejarlo enfriar antes de tocarlo. 0. Las manos se protegern con guantes o trapos cuando se introdu$ca un tapn en un tubo de vidrio. 2. #i tienes que calentar a la llama el contenido de un tubo de ensayo observa cuidadosamente estas dos normas% a.6ener sumo cuidado y tener en cuenta que la boca del tubo de ensayo no apunte a ning;n compa(ero. 1uede hervir el l!quido y salir disparado por lo que podr!as ocasionar un accidente. b. /alentar el tubo de ensayo lateralmente y no por el fondo agitar suavemente.

=6>L>?-/>@) :E L- E-L-)?1. /uando se determinan masas de productos qu!micos con balan$a se colocar papel filtro sobre los platos de la misma y si es necesario porque el producto a pesar fuera corrosivo se utili$ar un vidrio de reloj. .. #e debe evitar cualquier perturbacin que condu$ca a un error como vibraciones debidas a golpes aparatos en funcionamiento soplar sobre los platos de la balan$a etc.

INCLUIR EN INVESTIGACIN
1. (lasi!icar el la)ora&orio por ni'eles %e )ioseguri%a% * clasi!icar microorganismos por grupo %e riesgo en el &ra)a+o ,ue reali-ar. el grupo %e clase * %e)er. presen&arlo por escri&o. /. Normas %el mane+o %e %esec0os comunes. 1. Normas para el mane+o %e ma&erial pun-o cor&an&e. 2. Normas para mane+o %e ma&erial )ioin!eccioso no ana&3mico. 4. Normas para el mane+o %e ma&erial )ioin!eccioso ana&3mico. 5. Normas %e mane+o %e ma&erial )ioin!eccioso l$,ui%o. 6. Normas para el mane+o %e resi%uos ,u$micos 7l$,ui%os8. 9. Normas para el mane+o %e mues&ras %e la)ora&orio. :. Normas en el momen&o %e &omar mues&ras )iol3gicas. 1;. Normas para el mane+o %e ins&rumen&os * e,uipos.

Entregar trabajo la siguiente semana en per!odo de laboratorio o d!a mircoles 18 de febrero .912.

No. / ES<E(TRO=OTOMETRIA O)+e&i'o <ue el estudiante despus de haber reali$ado su prctica de laboratorio est en la capacidad de conocer como funciona un espectrofotmetro. De!inici3n %e espec&roscopia ,todo instrumental en el cual se mide la interaccin de compuestos qu!micos con radiacin electromagntica. Estos instrumentos electrnicos acortan considerablemente el tiempo para e&traer informacin aumenta la capacidad para obtener informacin estructural y requiere cantidades muy peque(as de muestra. 6odas las sustancias qu!micas interact;an con radiacin electromagntica de alguna manera. /uando una molcula absorbe energ!a ocurre una transformacin o perturbacin que puede ser temporal o permanente. La radiacin de baja energ!a puede causar simplemente una rotacin molecular o la vibracin un enlace. La energ!a viaja en ondas y corresponden a una lu$ blanca que en el interior del aparato se hace pasar a travs de un prisma el cual descompone la lu$ separndolas en sus colores constituyentes (seg;n longitud de onda" formando un abanico de colores en los e&perimentos de f!sica de lu$. La lu$ del sol es una forma de energ!a conocida como energa electromagntica, llamada radiacin que viaja en ondas r!tmicas. La distancia entre las crestas de ondas electromagnticas se conoce con el nombre de longi&u% %e on%as se representa por una letra griega llamada lambda (F" y su dimensin se e&presa en manmetros (nm" (1 nm G 19 m". El n;mero de ondas que pasan por un punto en un tiempo dado o n;mero de ondas por unidad de distancia es la !recuencia que se e&presa como ciclos por segundo o hert$ (H$".

Lu$ visible La lu$ que llega a nuestros ojos y nos permite ver es un peque(o conjunto de radiaciones electromagnticas de longitudes de onda comprendidas entre los 299 nm y los 539 nm. Espectrofotmetro Es un aparato instrumental electrnico que es utili$ado para medir las proporciones de lu$ de diferentes longitudes de onda que son absorbidas y transmitidas por una solucin coloreada que contiene compuestos qu!micos. La espectrofotometr!a se refiere a los mtodos cuantitativos de anlisis qu!micos que utili$an la lu$ para medir la concentracin de las sustancias qu!micas. #e conocen como mtodos espectrofotomItricos y seg;n sea la radiacin utili$ada como espectrofotometr!a de absorcin visible (colorimetr!a" ultravioleta o infrarroja. Los espectrofotmetros que se utili$an habitualmente proporcionan longitudes de onda que van de 029 a 1999 nm utili$a lmpara incandescente de tungsteno como fuente de emisores y de los .99 a 1999 nm cuando poseen la combinacin de lmparas de deuterio y tungsteno. Los componentes bsicos son% fuente de radiacin selector de longitud de onda portamuestra detector y dispositivo de registro. El espectrofotmetro tiene un botn donde un prisma sea movido y conforme va girando permite que en cada momento sea diferente color de lu$ la que es dirigida sobre una pie$a metlica que posee una rejilla por la que podr pasa la energ!a del rayo que en este momento se haya escogido. Eso permite que se pueda elegir que color se har pasar a travs de la rejilla. #imultneamente que cambia el color aparece en la ventana de lectura de longitud de onda la que corresponde al color que estamos usando. :espus de la rejilla esta el espacio donde se colocan los tubos de ensayo con las sustancias que se estn estudiando. )o se usara lu$ blanca (policromtica" que emite la bombilla (monocromtica". El tubo de ensayo (cubeta ptica" recibe un rayo de lu$ monocromtica que posee una determinada cantidad de energ!a en funcin de su color. El contenido de la cubeta ptica (solvente y soluto" podr absorber alguna parte de la energ!a de ese rayo luminoso a su paso a travs de la misma y la lu$ que logre atravesar la solucin seguir su curso hasta chocar contra un dispositivo (foto celda o tubo fotoelctrico" sensible a la cantidad de energ!a que logra pasar convirtindola en electricidad y trasladndola por medio de un galvanmetro a una pantalla donde el movimiento de una aguja demuestra los cambios en la cantidad de energ!a que logr llegar a la foto celda.

#i el rayo luminoso no encuentra ning;n obstculo en su camino la pantalla mostrar su energ!a en 199J y si una sustancia por ejemplo absorbe la mitad de la energ!a del rayo luminoso en la pantalla se observar su energ!a en el 39J. En otras palabras, el selector separa y seleccin las longitudes de onda que se presentan a la muestra desde la fuente un ha$ se trasmite directamente al detector el ha$ de la muestra que pasa a travs de la misma antes de alcan$ar el detector. #i la muestra interact;a con radiacin de una longitud de onda en particular la absorbe y la intensidad del ha$ de muestra disminuye. El detector compara la intensidad de los haces de referencia y de la muestra. El porcentaje del ha$ de la muestra que se trasmite se registra como un pico o banda en el dispositivo de registro. /on la incorporacin de una computadora en los instrumentos la presentacin y comparacin de los haces de muestra y de referencia se pueden hacer de manera diferente pero el 1+>)/>1>* no cambia.

Espectrofotmetro sus partes%

Dentajas de la espectrofotometr!a% Las ventajas de la espectrofotometr!a sobre otros mtodos anal!ticos de laboratorio son% es rpida precisa verstil fcil de usar y eficiente en costo. Los espectrofotmetros se han mejorado en precisin y versatilidad en los ;ltimos a(os con los avances de la tecnolog!a y hoy se consideran indispensables en un laboratorio de qu!mica anal!tica. =sos de la espectrofotometr!a La espectrofotometr!a se usa para diversas aplicaciones como% anlisis cuantitativo y cualitativo de soluciones desconocidas en un laboratorio de investigacin estandari$acin de colores en diversos materiales como plsticos y pinturas deteccin de niveles de contaminacin en aire y agua y determinacin de tra$as de impure$as en alimentos y en reactivos. 1armetros que utili$a la espectrofotometr!a (e&presada en J" Los espectrofotmetros miden en J de transmitancia (6" y absorbancia (-". 6ransmitancia% La transmisin se puede considerar una doble refraccin. #i pensamos en un cristalC la lu$ sufre una primera refraccin al pasar del aire al vidrio sigue su camino y vuelve a refractarse al pasar de nuevo al aire. 1. #i despus de este proceso el rayo de lu$ no es desviado de su trayectoria se dice que la transmisin es regular como pasa en los vidrios transparentes. .. #i se difunde en todas las direcciones tenemos la transmisin difusa que es la que pasa en los vidrios transl;cidos. ' si predomina una direccin sobre las dems tenemos la mi&ta como ocurre en los vidrios orgnicos o en los cristales de superficie labrada. 0. El porcentaje de transmitancia se refiere a la cantidad de radiacin que pasa a travs de la muestra y alcan$a el detector.

2. =na solucin l!mpida no absorbente mostrar una lectura de 199J de transmitancia en un espectrofotmetro calibrado. -bsorbancia (e&presada en logaritmos" La absorcin es un proceso muy ligado al color. El ojo humano slo es sensible a las radiaciones pertenecientes a un peque(o intervalo del espectro electromagntico. #on los colores que me$clados forman la lu$ blanca. #u distribucin espectral apro&imada es% 1. /uando la lu$ blanca choca con un objeto una parte de los colores que la componen son absorbidos por la superficie y el resto son reflejados. Los componentes reflejados son las que determinan el color que percibimos. .. #i la refleja toda es blanco y si la absorbe todas es negro. =n objeto es rojo porque refleja la lu$ roja y absorbe las dems componentes de la lu$ blanca. #i iluminamos el mismo objeto con lu$ a$ul lo veremos negro porque el cuerpo absorbe este componente y no refleja ninguna. 0. Las unidades de absorbancia van de 9 a .. 2. La absorbancia se relaciona con la transmitancia como%

- G K log 6 G K log >L>9

Ejemplo% =na sustancia que absorbe el 09J de la energ!a del rayo mostrar!a en la pantalla un 59J de transmitancia y un 09J de absorbancia. El concepto se aplica de la misma forma y por esa ra$n una sustancia que logre absorber el 39J de la engr!a del rayo luminoso nos dar una transmitancia del 39J. /omo norma general siempre se utili$a la -bsorbancia debido a que las cifras obtenidas en logaritmos pueden graficarse en mejor forma cuando el procedimiento de fonometr!a es utili$ado en estudio de investigacin mdica.

La mayor!a de los componentes biolgicos tales como prote!nas grasas carbohidratos y los cidos nuclIicos absorben lu$ en alguna parte de fonometr!a es utili$ado en estudios de investigacin mdica. E-#E# 6E*+>/-# 1-+- EL /-L/=L* :E /*)/E)6+-/>M) :E #=#6-)/>-# E>*L*N>/-# /uando el rayo de lu$ llega a la cubeta ptica lleva el 199J de su energ!a. medida que penetra en la sustancia puede ir perdiendo su potencia en funcin de tres variables% 1. El grado de concentracin de solutos en la sustancia que anali$a. .. La longitud del medio absorbente o sea la distancia que el rayo debe recorrer depende del ancho del tubo que se esta utili$ando. 0. Longitud de onda (o color" del rayo que se esta usando. #i la sustancia que se esta estudiando tiene un color determinado se comporta diferente frente a los diferentes colores de lu$ que se puedan hacer pasar a travs de ella. 1or ello la fraccin de la lu$ incidente (lo" absorbida por una solucin a una determinada longitud de onda esta relacionada con la concentracin de la especie que absorbe y con el espesor de la capa absorbente. Ley de Eeer% #e aplica cuando un rayo de lu$ monocromtica pasa a travs de un medio absorbente su intensidad disminuye e&ponencialmente a media que la concentracin del medio absorbente aumenta. Ley de Lambert% #e aplica cuando un rayo de lu$ monocromtica pasa a travs de un medio absorbente su intensidad disminuye e&ponencialmente a media que la longitud del medio absorbente aumenta. La combinacin de ambas leyes puede e&presarse en forma integral de la manera siguiente% Long >o L > G e c > :onde% >o G intensidad de la lu$ incidente. > G intensidad de la lu$ transmitida. e G coeficiente de absorcin molar ( unidades de litros por mol por cm" c G especie absorbente. > G espesor de la muestra absorbente.

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Ley de LamberKEeer% #upone que la lu$ incidente es paralela monocromtica y que las molculas del solvente y el soluto estn orientadas al a$ar de manera uniforme. La e&presin log (>oL>" se denomina absorbancia y se designa como -. Es la base matemtica que permite calcular cuanta energ!a puede haber sido absorbida por la sustancia que se estudia. Es importante considerar que cantidad de mil!metros de espesor de una solucin absorben en una cubeta ptica de 19 cm (medida estndar" no absorbe una cantidad constante de la lu$ incidente. La absorbancia (-" es directamente proporcional a la concentracin de la solucin absorbente. El coeficiente de absorcin molar var!a tanto con la naturale$a del compuesto absorbente como con las propiedades del solvente la longitud de onda del rayo utili$ado el pH de la solucin y el estado de o&idorreduccin de los componentes las cuales pueden presentar perdida o ganancia de protones o electrones al asociarse. El uso del espectrofotmetro se puede obtener los datos para elaborar una grfica del espectro de absorcin de cualquier sustancia en la cual podemos comparar objetivamente las diferencias de cada sustancia en funcin de su coeficiente de absorcin molar y de la longitud de onda del rayo empleado. =na grfica construida con el espectrofotmetro ( - vrs. c " muestra la absorbancia a diferentes longitudes de onda nos proporciona la informacin necesaria para saber cual es la longitud de onda a la que se absorbe mas la lu$ un compuesto en solucin. 1or ello cuando la necesidad de hacer un anlisis de un compuesto especial se tendr que ajustar el fotmetro a la longitud de onda de m&ima absorbancia ya que en la calibracin se obtendr las determinaciones ms e&actas ante cualquier variacin de la concentracin de la muestra que obtengamos conteniendo este compuesto. Los ordenamientos espec!ficos de los tomos o de las molculas poseen espectros de absorcin caracter!sticos y por eso pueden utili$arse para identificar molculas y medir sus concentraciones. :ebe tenerse en cuenta que la ley de Eeer no toma en cuenta la lu$ dispersada o reflejada y no se cumple por altas concentraciones del material absorbente. La base de calorimetr!a y de la espectrofotometr!a radica en que muchas sustancias tienen color propio o pueden dar lugar a productos finales coloreados en ciertas reacciones qu!micas. E&iste relacin entre la intensidad de este color y la concentracin del producto final o sea la concentracin de uno o varios de los reactivos de esta manera la intensidad del color puede utili$arse para medir la concentracin.

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/lculo de la concentracin de /ompuestos% El espectrofotmetro permite conocer la concentracin de un compuesto en una solucin en casi todas las tcnicas de laboratorio deber a proceder con la preparacin de tres tubos% 1. 6ubo blanco. .. 6ubo estndar. 0. 6ubo muestra. Tu)o )lanco 6ubo que contiene diluyente (estabili$adores del pH reactivos colorantes y en$imas que producen la reaccin" sin la sustancia en estudios. Los usos% 1. #irve para la calibracin del espectrofotmetro desechando la absorbancia de todos los componentes diferentes de la sustancia en estudio. .. Esto permite que la sustancia sin reaccionar en la cubeta ptica permita ajustar manualmente la absorbancia en cero y transmitancia en 199J. 0. :e esta forma la misma sustancia en otros tubos ya no interfiera en las pr&imas lecturas. Tu)o es&.n%ar" /ontiene la sustancia del blanco O la sustancia del estudio a concentracin conocida. #e define como una absorbancia patrn dependiente de la concentracin. 1. #e prepara en el laboratorio pesando determinada cantidad de la sustancia que vamos a anali$ar y diluyndola en un determinado volumen de solvente o bien es proporcionado a travs de una casa comercial. .. Esto permite comparar su absorbancia (en funcin a su concentracin" con la de la muestra. Tu)o mues&ra" /ontiene lo mismo que el tubo blanco slo que en este caso se agrega la sustancia en estudio (muestra" cuya concentracin no se conoce. #e prepara a partir de fluidos biolgicos (sangre l!quido cefalorraqu!deo orina u otros" en los que se desea medir la concentracin de alg;n soluto. 1ara calcular la concentracin de la muestra se utili$a la siguiente formula% /oncentracin :e la ,uestra G /oncentracin del Estndar P -bsorbancia de la Estndar

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-bsorbancia de la ,uestra

A> / Log %e ?T
BIBLIOGRA=@A 1. /-,1EELL ). -. Eiology. 6he Eenjamin /umming 1ublishing /ompany ,enlo 1arQ /alifornia 1875. .. H-RS and *#E+. 1ractical 1hysiological /hemistry. 2th Ed. ,cNraTKHill /o. #. -. 1843. 0. L')/H ,. U. ,todos de Laboratorio. .V edicin *mega #. -. Earcelona 18875 2. #6+*6HE+ N. S. Wisica aplicada de las ciencias de #alud. ,acNraTKHill Latinoamrica #. -. Eogota /olombia. 1879.

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No. 1 DETERMINA(IAN DE GLU(OSA EN SANGRE Mecanismos para man&ener la glicemia" :espus de un ayuno de varias horas y en condiciones de reposo la concentracin de glucosa en sangre es de 43 a 199 mg L dl. :espus de la ingestin de alimentos sobrevienen al$as hasta de 1.9 a 129 mgL dl y unas horas despus regresan a los valores en ayunas. :e la misma manera las modificaciones producidas por las emociones violentas el ejercicio intenso y la a;n inanicin son equilibrados para volver a lo normal. #i la glucosa de la sangre se mantiene dentro de los l!mites estrechos es por que la serie de los fenmenos que concurren a proporcionar glucosa a la sangre se equilibran con los mecanismos que la sustraen de ella. En ayunas la ;nica fuente de glucosa sangu!nea es el h!gado. La velocidad de formacin y degradacin del glucgeno heptico es uno de los factores ms importantes en la regulacin de la glicemia. /omo la salida de glucosa del h!gado depende en gran parte de la concentracin de glucosa en la sangre cuando sta se modifica funciona el mecanismo glucognico el glucogenol!tico debido a las hormonas relacionadas% La insulina% que favorece la utili$acin y captacin de glucosa y es secretada al elevarse la glucemia el glucagn y la epinefrina impulsores de la glucogenlisis y son secretados por pncreas y glndulas suprarrenales cuando hay hipoglucemia. La hormona insulina tiene gran importancia en la participacin de la regulacin de glucosa sangu!nea se produce en las clulas beta del pncreas en respuesta a la hiperglucemia la administracin de insulina produce hipoglucemia inmediata. La adrenalina y la noradrenalina impiden la liberacin de la insulina. 1or otro lado el glucagn se opone a la accin de la insulina es producido en las clulas alfa del pncreas y es secretado cuando hay hipoglucemia llegando a travs de la vena porta al h!gado para producir glucogenlisis y gluconeognesis. *tras hormonas influyen en la hiperglucemia como la hormona del crecimiento que inhibe la utili$acin de la glucosa y favorece la de cidos grasos los glucocorticoides que aumentan la gluconeognesis la adrenalina secretada cuando hay est!mulos estresantes causa glucogenlisis. -l ascenso de la glucosa sangu!nea por arriba de 1.9 mgLdl se denomina hiperglucemia y puede ser signo de muchas enfermedades la hiperglucemia siempre se da despus de una comida pero se regula por medio de la insulina que lleva la glucosa a los tejidos para su almacenamiento ya que es el principal combustible celular.

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La hiperglucemia se da por la disminucin de la entrada de glucosa a las clulas por la disminucin de la utili$acin de glucosa por varios tejidos y por el aumento en la produccin por el h!gado. La entrada de glucosa a las clulas la da la insulina si la glucosa no entra a las clulas el cuerpo necesita tomar energ!a de otro lado por lo general de las grasas la degradacin de las grasas causa cuerpos cetnicos y consecuentemente cetosis el h!gado en este caso aumentar!a la produccin de glucosa al ver que las clulas no estn recibiendo la suficiente glucosa agravando el problema. La hipoglucemia est presente en el ayuno pero es fcilmente regulada por los procesos gluconeognicos o glucogenol!ticos si e&iste una buena reserva de glucgeno se considera una hipoglucemia cuando los niveles de glucosa sangu!nea estn por debajo de los 49 mgLdl y esta es mucho mas peligrosa que la hiperglucemia ya que fcilmente puede causar un shocQ hipoglucmico con convulsiones y coma por falta de glucosa para el funcionamiento cerebral. La principal causa de hipoglucemia es la presencia de insulina en e&ceso y se puede regular por el glucagn o la adrenalina como se mencionaba anteriromente ya que son antagnicos. Las causas principales de hipoglucemia en una persona sana son muy obvias como por ejemplo ayunos prolongados desnutricin por vmitos y diarrea ejercicio en e&ceso etc. En el caso de una persona que se le suministre insulina tendr que ser muy bien controlada ya que al darse en gran cantidad y s! no hay buenos niveles de glucosa en sangre la insulina en e&ceso que entr se encarga de la poca glucosa que e&iste poniendo en riesgo al paciente causndole una hipoglucemia severa. La enfermedad que se caracteri$a por hiperglucemia es la :iabetes ,ellitus en este caso la insulina de la persona es de baja calidad o hay total ausencia de ella causando que la glucosa no pueda entrar en las clulas y se adquiere la energ!a de las grasas o l!pidos. E&isten dos tipos de :iabetes% 1. La Diabetes tipo I o tambin llamada insulino dependiente las clulas beta del pncreas se han destruido debido al desarrollo de anticuerpos en contra de los receptores de insulina. .. La Diabetes tipo II o no insulino dependiente que sta es la que presenta el 89J de los afectados y por lo general son obesos y aunque producen insulina es de muy mala calidad y los receptores trabajan mal. Los principales s!ntomas son la hiperglucemia la polifagia polidipsia y poliuria causndole mucha fatiga y desnutricin.

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La gran complicacin es la glucosilacin nerviosa y vascular que inclusive un infarto o cortadas peque(as pasan desapercibidos sin olvidar el pie diabtico que muchas veces se tienen que amputar. *tro gran problema es la cetosis por los cuerpos cetnicos que pueden llegar a causar la muerte en especial a los de diabetes tipo >. Da&os cl$nicos ,ue se o)&ienen con la cur'a %e Tolerancia a la Glucosa" Las caracter!sticas de la curva de la glucosa sangu!nea despus de la administracin de una cantidad conocida de glucosa indica la tolerancia a esta. La diabetes mellitus tipo > se caracteri$a por la disminucin de la tolerancia a la glucosa debido a la disminucin de secrecin de insulina en respuesta a la carga de glucosa. Esto se manifiesta por la hiperglucemia glucosuria y metabolismo de las grasas. La tolerancia a la glucosa disminuye en la diabetes tipo > en trastornos relacionados con lesin heptica infecciones diabetes tipo >> que se acompa(a de obesidad y aumentos de concentraciones plasmticas de cidos grasos disminuye la tolerancia bajo la influencia de algunos frmacos y algunas veces en la arteroesclersis. La insulina incrementa la tolerancia a la glucosa su administracin disminuye el contenido sangu!neo de glucosa e incrementa la utili$acin y almacenamiento heptico de esta. =n e&ceso de insulina puede producir hipoglucemia intensa y esta resulta en convulsiones y muerte a menos que se administre glucosa de inmediato. En las insuficiencias hipofisiaria y corticosuprarrenal se incrementa la tolerancia a la glucosa debido a la disminucin del antagonismo de la accin de la insulina a cargo de la hormonas secretadas por estas glndulas. MB&o%os %e me%ici3n" -ntes se utili$aban mtodos no espec!ficos que aprovechaban las propiedades reductoras de la glucosa los que eran susceptibles a error causado por la presencia de sustancias reductoras distintas a la glucosa presentes tambin en sangre. -ctualmente se utili$an mtodo en$imtico altamente espec!fico. Glucosa OCi%asa <eroCi%asa" la glucosa es o&idada a cido glucnico y per&ido de hidrgeno por la accin de la en$ima glucosa o&idasa. El per&ido de hidrgeno en presencia de pero&idasa o&ida el cromogeno (2K aminofena$onaLfenol" convirtindolo en un compuesto coloreado rosado fuerte X rojo cuya intensidad es proporcional a la concentracin de glucosa en la muestra. :K glucosa O *. O H.*KKKKN*:KKKKKKK :K gluconato O H.*. H.*. O fenol O 2Kaminofena$onaKKKKKKK1*:KKKKK compuesto coloreado O H.*

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Glucosa 0eCo,uinasa" la glucosa es fosforilada por el triofosfato de adenosina (-61" en presencia de la en$ima he&oquinasa. La grlucosa X4Kfosfato (NK4K1" formada es o&idada a 4Kfosfogluconato (4K1N" en presencia de dinucletido de nicotinamida ()-:". Esta reaccin es catali$ada por la en$ima glucosaK4K fosfato deshidrogenasa (NK4K1:H". :urante esta o&idacin una cantidad equimolar de )-: es reducida a )-:H. El consecuente incremento en la absorvancia a 029 nm es directamente proporcional a la concentracin de glucosa.

MATERIALES -lgodn. Hipoclorito de sodio al 2.5.J (dilucin 1%19". Uabn antisptico. :escartador de puntas de pipeta. Nradillas. Liga. Nuantes. Eata. Ueringas para puncin venosa de 3cc. ,icropipetas de volumen variable. 1apel absorbente. 1untas de pipeta para micropipetas de volumen variable. +ecipiente descartador para pun$ocortantes. 6ubos vacutainer sin anticoagulante. Diales de almacenamiento -lcohol Espectrofotmetro /entr!fuga -gua :estilada +eactivo de Nlucosa <RO(EDIMIENTO #e debe de e&traer 3 ml de muestra de sangre venosa (de un estudiante en ayuno y que tenga inters personal de verificar sus niveles de glicemia" la cual se deber colocar en

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un tubo si anticoagulante el cual se deber de centrifugar por 19 minutos para separa las clulas sangu!neas y obtener el suero el cual servir para prepara el tubo de muestra. La hemolisis visible (suero rojo por destruccin de eritrocitos" hace inadecuada la muestra. La bilirrubinas no interfieren mientras sean menor a .9 mgLdl Ycido ;rico Z .9mgLdl y hemlisis ligera. El resultado debe ser antes de dos horas desde el momento de la e&traccin de la muestra por la destruccin en$imtica de la glucosa (gluclisis" por los eritrocitos y leucocitos esto es proporcional al tiempo y a la temperatura siendo m&imo a los 05[/. 'a separado el suero este se puede procesar en un pla$o no mayor de 2 horas a temperatura ambiente (.3[/" o .2 horas en refrigeracin. 1. +otular un tubo \E] (estndar". #e prepara agregando 19 ^L de la solucin estndar de glucosa con valor conocido o tambin llamado calibrador y luego 1 ml de +eactivo de glucosa. -gitar e incuba 19 minutos o .3 a temperatura ambiente. .. +otular un tubo \,] (muestra". #e agrega 19 ^L de muestra y 1ml de reactivo de glucosa. -gitar e incubar. 0. +otular el tercer tubo \E] (blanco". #e prepara al colocar 19 ^L de agua y 1 ml de reactivo de glucosa. -gitar e incubar. 2. /alibrar el espectrofotmetro con 393 nm de longitud de onda y medir la absorbancia en un pla$o no mayor de 09 minutos (margen de estabilidad de las reacciones efectuadas". 1ara L/+ la muestra debe ser .9 ^L ya que la concentracin es baja. Luego el resultado obtenido se le divide entre .. EstndarG 199 mgLdl Wormula% _,` G Estndar P -bsorbancia de la ,&L-bsorbancia del estndar. Dalores %e re!erencia 5; a 11; mgE%l Es importante la separacin rpida del suero o plasma de los componentes celulares para evitar gluclisis lo cual disminuir el valor de la glucosa. El mtodo de glucosa o&idasaKpero&idasa interfiere los anticoagulantes citrato y o&alato mientras que en le mtodo glucosa he&oquinasa no interfiere ning;n anticoagulante. BIBLIOGRA=@A 1. ,anual de prcticas de laboratorio de Eioqu!mica Neneral y Eioqu!mica >>. Nuatemala% Wacultad de /iencias <u!micas y Warmacia (=#-/". .990. pp 91K 90. .. ,urray +obert et al. Bioqumica ! "arp!r 15V. Edicin. El ,anual ,oderno ,&ico :W. .995.

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No. 2 (UER<OS (ETANI(OS EN LA ORINA Nom)res al&erna&i'os" /uerpos cetnicos en orinaC /etonas urinariasC Ycido acetoactico y cido betahidro&ibut!rico. Los cuerpos cetnicos (acetoacetato y :("K0Khidro&ibutirato" son compuestos que se producen en las mitocondrias del h!gado a partir de acetilK/o-. El ciclo de Lynen sinteti$a acetoacetato el cual se transforma en$imticamente en 0K hidro&ibutirato. El equilibrio de esta reaccin est controlado por la proporcin mitocondrial de [)-:O]L[)-:H]. La proporcin de [hidro&ibutirato]L[acetoacetato] en la sangre var!a entre 1%1 y 19%1. La acetona un compuesto relacionado se forma como producto de la descarbo&ilacin espontnea del acetoacetato. El acetoacetato e 0Khidro&ibutirato son productos normales del metabolismo. #e forman principalmente a partir de los productos de degradacin de cidos grasos o como producto del metabolismo de algunos aminocidos (leucina fenilalanina tirorina". Los cuerpos cetnicos son liberados por el h!gado a la sangre donde son captados por rganos y tejidos perifricos que los metaboli$an por medio del ciclo de Srebs. ,ediante la produccin de cuerpos cetnicos el h!gado puede abastecer a los tejidos perifricos con un combustible hidrosoluble originado de la degradacin de las grasas. Especialmente el cerebro que no puede utili$ar los cidos grasos transportados en la sangre puede cubrir una gran parte de sus requerimientos energticos con los cuerpos cetnicos despus de un cierto per!odo de adaptacin metablica. )ormalmente el h!gado produce ;nicamente las cantidades de cuerpos cetnicos que los rganos perifricos pueden metaboli$ar. 1or lo tanto los niveles sangu!neos de stos son bajos y no e&ceden de 9.. mmolLl en la sangre de mam!feros bien alimentados. /antidades mas altas en la sangre (ce&onemia" y en la orina (ce&onuria" caracteri$an un estado llamado ce&osis. Los cuerpos cetnicos son cidos moderadamente fuertes y su prdida continua por la orina produce prdida del catin amortiguador lo cual causa deplecin progresiva de la reserva alcalina y como causa cetoacidosis. Esto puede ser mortal en la diabetes sacarina no controlada. La forma ms simple de cetosis ocurre en la inanicin e implica la deplecin de los carbohidratos disponibles acoplada a la movili$acin de cidos grasos libres. )inguna otra situacin en la cual la cetosis ocurre parece diferir cualitativamente de este patrn general del metabolismoC cuantitativamente una e&cesiva produccin de cuerpos cetnicos puede producir los estados patolgicos asociados a la diabetes mellitus. *tras formas no patolgicas asociados a la diabetes mellitus. *tras formas no patolgicas de cetosis ocurren en condiciones de alimentacin rica en grasas y bajas en carbohidratos y despus de ejercicio fuerte en el estado de posabsorcin. Las cetonas estn usualmente presentes en la orina pero por debajo del nivel de deteccin de los mtodos de anlisis de rutina. #in embargo se observan cuerpos

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cetnicos positivos en sujetos normales en ayunas y hasta en un 09J de las muestras de orina de la ma(ana en las mujeres embara$adas. Los anlisis de cetonas en orina que utili$an reactivos a base de nitroprusiato pueden dar falsos positivos en presencia de frmacos que contienen el grupo K#H como es el caso del captopril un frmaco antihipertensivo. +esultados falsos negativos tambin son posibles cuando las tiras reactivas han estado e&puestas al aire durante un largo tiempo o si las muestras de orina son muy cidas como ocurre despus de la administracin de grandes dosis de cido ascrbico (vitamina /" -unque en todas las consultas deben e&istir Qits para la determinacin de cuerpos cetnicos en la orina el profesional deber tener en cuenta que ninguna de las tcnicas hoy disponibles permiten diagnosticar o monitori$ar una cetoacidosis diabtica. E&isten mtodos de determinacin del cido 0Khidro&ibut!rico el cuerpo cetnico predominante en la sangre y estos mtodos son preferidos a los anlisis de cuerpos cetnicos en la orina. =orma en ,ue se reali-a el eCamen" NiFos o a%ul&os" 1ara tomar la muestra de orina la persona recoge una cantidad limpia (ade la mitad de la miccina". 1ara esto los hombres y los ni(os deben tener limpia la cabe$a del pene mientras las mujeres y las ni(as deben lavar el rea que hay entre los labios de la vagina con agua y jabn y enjuagar muy bien. /uando se inicie el proceso de eliminacin de la orina se debe dejar que una peque(a cantidad de sta caiga a la ta$a del ba(o (as! se limpia la uretra de sustancias contaminantes". 1osteriormente en un recipiente limpio se recomienda recoger apro&imadamente una o dos on$as (09 a 49 ml" de orina y retirarlo. Winalmente se debe entregar este recipiente. Be)Bs" Es necesario lavar completamente el rea alrededor de la uretra y abrir una bolsa colectora de orina (bolsa plstica con una cinta adhesiva en un e&tremo" y luego colocarle la bolsa al beb. - los ni(os se les puede introducir todo el pene dentro de la bolsa y el adhesivo se pega a la piel. - las ni(as se les coloca la bolsa sobre los labios mayores. #e le puede colocar el pa(al al beb de la manera usual asegurndose de cubrir y asegurar la bolsa. #e recomienda revisar al beb frecuentemente y retirar la bolsa despus de que ste haya orinado en ella. Los bebs activos pueden despla$ar la bolsa as! es que puede necesitarse ms de un intento para obtener una muestra. Winalmente se debe verter la orina en un recipiente limpio y entregarla. Las cetonas urinarias se miden usualmente como una aprueba rpidaa con una tirilla (tira de orina" que contiene una $ona sensible al color impregnada de qu!micos espec!ficos que reaccionan con los cuerpos cetnicos. =n cambio de color es un indicador cualitativo de la presencia de cetonas.

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Los tres cuerpos cetnicos se presentan casi siempre juntos en la orina y tienen esencialmente la misma significancia. Las pruebas usuales para la cetonuria investigan la acetona el cido acetilactico o ambos a la ve$. La reaccin de nitroprusiato revelar cualquiera de estos compuestos aunque con sensibilidad muy diferente. )o e&iste un ensayo directo sencillo y satisfactorio para el cido betaKHidro&ibut!rico de la orina. La reaccin del cloruro frrico para el cido acetilactico no la de la acetona pero la reaccin no es sensible ni espec!fica por lo cual es poco aplicable a la cl!nica salvo qui$s como prueba confirmatoria que debe reali$arse directamente con la orina. La reaccin de nitroprusiato (en particular la variante de +othera" es mucho ms sensible (por lo menos cinco veces ms" al cido acetilactico que a la acetona. :e aqu! cuando se aplique directamente a la orina el resultado depender en gran parte de las cantidades relativas de ambas sustancias. La orina fresca puede dar una prueba positiva la misma orina dejada en reposo al poco tiempo despus de la descomposicin del cido acetilactico y su transformacin en acetona puede dar una prueba negativa. La prueba no es completamente espec!fica para los cuerpos cetnicos pero cuando es positivo indica fuertemente su presencia. Es probablemente la prueba ms usada en los trabajos cl!nicos para la cetonuria y se han propuesto infinidad de variantes en su tcnicaC con todo no puede considerarse enteramente satisfactoria. BIBLIOGRA=@A. 1. NY++>#. U et al. )uevo ,anual ,ercQ de >nformacin ,dica en Neneral. Espa(a. ,ercQ #harp b :*H,E. .995. pp 889. .. ,anual de prcticas de laboratorio de Eioqu!mica Neneral y Eioqu!mica >>. Nuatemala% Wacultad de /iencias <u!micas y Warmacia (=#-/". .990. pp 14K 18. 0. ,urray +obert et al. Bioqumica ! "arp!r 15V. Edicin. El ,anual ,oderno ,&ico :W. .995.

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No. 4 DETERMINA(IAN DE (OLESTEROL SGRI(O El colesterol est presente en los tejidos y en el plasma como colesterol libre o almacenado combinado con un cido graso de cadena larga como ster de colesterilo. En el plasma ambas formas son transportadas en lipoprote!nas. El colesterol es un l!pido anfiptico y como tal es un componente estructural esencial de membranas y de la capa e&terna de las lipoprote!nas plasmticas. #e sinteti$a a partir del acetilK/o- en muchos tejidos y es el precursor de todos los otros esteroides en el cuerpo como corticorsteroides hormonas se&uales cidos biliares y vitamina :. /omo un producto caracter!stico del metabolismo de los animales el colesterol se encuentra en los alimentos de origen animal el colesterol se encuentra en los alimentos de origen animal como la yema de huevo carne h!gado y cerebro. El origen del colesterol en el organismo tiene dos fuentes la e&terna y el que produce el propio organismo. :ebido a que el organismo puede producir su propio colesterol e&iste la posibilidad que personas que no consuman colesterol tengan niveles sangu!neos elevados por tener alg;n desorden genticoKmetablico que conlleva a dicha elevacin. Estos desordenes son ms com;n de lo que se cree y son la principal causa de ateroma y de enfermedades vasculares entre ellas el infarto agudo al miocardio. 1or esto la importancia de determinar en forma preco$ los niveles elevados de colesterol en los pacientes. *tros desrdenes en los cuales puede haber alteracin del colesterol srico sonC diabetes hipotiroidismo y ciertos tipos de desrdenes renales. En el hipertiroidismo y desnutricin puede haber valores bajos. El h!gado es el lugar de s!ntesis principal pero la piel glndulas adrenales gnadas intestino e incluso la aorta pueden efectuar la bios!ntesis del colesterol. #e estima que el h!gado puede producir 1.3 gr por d!a. El colesterol por ser una grasa es poco soluble en agua por lo que si se transportara libre por la sangre ser!a en forma de gotas de colesterol y se ver!a en nuestra sangre como gotas de grasa. 1ero el caso es que la naturale$a ha ideado una manera de hacer soluble en agua al colesterol y transportarlo por la sangre y esto es por medio de lipoprote!nas. Las lipoprote!nas son complejos lipoproteicos mediante los cuales el colesterol steres de colesterol los triglicridos y fosfol!pidos son transportados a travs de la sangre. E&isten distintos tipos de lipoprote!nas. /ada uno de estos tipos de tiene un propsito diferente y se descompone y se e&creta de forma ligeramente distinta. Las principales lipoprote!nas son los quilomicrones las lipoprote!nas de muy baja densidad (DL:L" las lipoprote!nas de baja densidad (L:L" y las lipoprote!nas de alta densidad (H:L". El colesterol transportado por las L:L se denomina colesterol L:L y el transportdo por las H:L se denomina colesterol H:L.

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El cuerpo regula los niveles de lipoprote!nas (y por lo tanto lo niveles de l!pidos" incrementando o disminuyendo la velocidad de produccin de las lipoprote!nas. El organismo tambin puede regular la velocidad con que las lipoprote!nas entran o son retiradas del torrente circulatorio. Los niveles de colesterol y triglicridos var!an considerablemente de un d!a a otro. :e una medicin a otra los niveles de colesterol pueden variar alrededor de un 19J y los niveles de triglicridos pueden variar hasta un .3J. MB&o%o %e me%ici3n" El colesterol y sus steres se liberan de las lipoprote!nas con el uso de detergentes. Los steres son hidroli$ados por la en$ima colesterasa. Luego act;a la en$ima colesterol o&idasa con produccin de H.*.. El H.*. puede medirse utili$ndolo para la conversin de yoduro en yodo el cual se valora espectrofotomtricamente o bien puede reaccionar en presencia de pero&idasa con 2Kaminoantipirina y fenol formando un compuesto coloreado que es tambin medido.

MUESTRA" #uero o plasma heparini$ado. #i bien se recomienda procesar las muestras dentro de las 27L5. hs las mismas pueden conservarse una semana en heladera y dos meses en congelador. Dalores %e Re!erencia" Has&a /;; mgE%l El H:L sinteti$ad en el h!gado remueven el colesterol no utili$ado por las clulas (dentro de ciertos l!mites de concentracin" transportndolo hacia el h!gado para su degradacin. El H:L es conocido como un componente l!pido protector contra las enfermedades coronarias. Dalores %e Re!erencia" Mu+eres I %e 14 mgE%l Hom)rs I %e 24 mgE%l

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Las L:L producto del metabolismo de las DL:L en plasma son las encargadas del transporte del colesterol e&geno (y en mucho menor proporcin endgeno" hacia el interior de las clulas. :iversos estudios epidemiolgicos han confirmado que el e&ceso de colesterol L:L con respecto a un valor cr!tico (189.9 mgLdl" debe ser considerado un factor de riesgo para el desarrollo de enfermedad card!aca coronaria considerando que el efecto protector de las H:L slo parece tener relevancia dentro cierto rango de concentraciones de colesterol circulante. 6ales halla$gos permiten deducir que los valores aislados de colesterol H:L o de L:L no pueden tomarse como !ndices predictivos de riesgo sino que es necesario conformar un perfil lip!dico con los valores de colesterol total colesterol H:L y colesterol L:L.

Entre ms bajo sea el valor de colesterol L:L es mejor para el paciente esto significa que est transportando menos colesterol hacia los tejidos perifricos. Dalores %e Re!erencia J %e 14; mgE%l. BIBLIOGRA=@A. 1. NY++>#. U et al. )uevo ,anual ,ercQ de >nformacin ,dica en Neneral. Espa(a. ,ercQ #harp b :*H,E. .995. pp 1199. .. ,anual de Eioqu!mica L-E*/L>1. Nuatemala% -ntigua Wacultad de /iencias <u!micas y Warmacia (=#-/". .993. pp 95 K 98. 0. ,urray +obert et al. Bioqumica ! "arp!r 15V. Edicin. El ,anual ,oderno ,&ico :W. .995. .

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No. 5 DETERMINA(IAN DE TRIGLI(ERIDOS 6riacileglicridos o triacilgliceroles% son acilgliceroles un tipo de l!pidos formados por una molcula de glicerol que tiene esterificados son el principal tipo de grasa transportado por el organismo. +ecibe el nombre de su estructura qu!mica. Luego de comer el organismo digiere las grasas de los alimentos y libera triglicridos a la sangre. Estos son transportados a todo el organismo para dar energ!a o para ser almacenados como grasa. El h!gado puede cambiar cualquier fuente de e&ceso de calor!as en triglicridos. La )ios$n&esis %e &riglicBri%os La s!ntesis de triglicridos tiene lugar en el ret!culo endoplsmico de casi todas las clulas del organismo pero es en el h!gado en particular en sus clulas parenquimatosas los hepatocitos y en el tejido adiposo (adipocitos" donde este proceso es ms activo y de mayor relevancia metablica. En el h!gado la s!ntesis de triglicridos est normalmente conectada a la secrecin de lipoprote!nas de muy baja densidad (DL:L su acrnimo en ingls" y no se considera un sitio de almacenamiento fisiolgico de l!pidos. 1or tanto toda acumulacin de triglicridos en este rgano es patolgica y se denomina indistintamente esteatosis heptica o h!gado graso. 1or el contrario el tejido adiposo tiene por principal funcin la acumulacin de energ!a en forma de triglicridos. #in embargo la acumulacin patolgica de triglicridos en el tejido adiposo (obesidad" se asocia aparentemente de forma causal con una serie de anormalidades endocrinoK metablicas cuyas causas son actualmente motivo de intensa investigacin dado el impacto de ellas en la mortalidad global de la poblacin contempornea. =na m!nima cantidad de triglicridos son normalmente almacenados en el m;sculo esqueltico y card!aco aunque solamente para consumo local. (ausas %e ni'eles al&os %e &riglicBri%os" E&ceso de peso% los triglicridos aumentan generalmente a medida que aumenta el peso. Los triglicridos se elevan a medida que se aumenta de peso o se ingieren demasiadas calor!as especialmente provenientes de a$;car y del alcohol. El alcohol aumenta la produccin de triglicridos en el h!gado. Los niveles de triglicridos aumentan regularmente con la edad. -lgunas drogas como los anticonceptivos esteroides diurticos causan aumento en los niveles de los triglicridos. -lgunas formas de altos niveles de triglicridos ocurren entre miembros de una misma familia.

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O)ser'aciones La medicin es ms precisa si no se ha comido en las 12 horas previas al e&amen. #i el colesterol tiene un valor normal un nivel elevado de triglicridos no parece ser un factor de riesgo de enfermedad cardiaca pero s! puede ser riesgoso al asociarse con diabetes y pancreatitis. MATERIALES Ueringas Liga -lcohol -lgodn /entrifuga 6ubos de ensayo plsticos ,icropipeta manual de 19 ml ,icropipeta manual de 1999 ml Diales 1untas plsticas Espectrofotmetro +ejilla plstica -gua destilada +eactivo de triglicridos <RO(EDIMIENTO #e e&trae el suero y se coloca en un vial de almacenamiento. /on la ,icropipeta de 1999 ^l e&traemos el reactivo de trigliceridos y lo colocamos en un vial. /on la ,icropipeta de 19 ^l e&traemos el suero y se agrega al reactivo de triglicridos. -gitar. #e incuba por 19 minutos a 05[/. #e lee en el espectrofotmetro >nterpretacin de resultado. Dalores %e re!erencia" J /;; mgE%L Los niveles de triglicridos var!an con la edad y tambin dependen de qu tan reciente ingiri alimentos antes del e&amen. BIBLIOGRA=@A

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1. R-:E l. N Ur. <u!mica *rgnica. 1renticeKHall Hispanoamericana #. -. 1880 pp. 101. 1131 y 113.. .. 6-'L*# N. -. <u!mica *rgnica para estudiantes de medicina y biolog!a. 1era Ed. Editorial -lambra #. -. 1852 Earcelona Espa(a. 1p .78 ..0 a ..4. 0. ,urray +obert et al. Bioqumica ! "arp!r 15V. Edicin. El ,anual ,oderno ,&ico :W. .995. 2. /urso de Eioqu!mica. .do a(o de la /arrera de ,dico y /irujano. /entro =niversitario de *riente (/=)*+>". =niversidad de #an /arlos de Nuatemala. .919.

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No. 6 DETERMINA(IAN DE BILIRRUBINA EN SANGRE La bilirrubina es un producto de degradacin de las prote!nas que contienen el grupo hemo como es la hemoglobina. El proceso de formacin y metabolismo se e&plica a continuacin% Los hemat!es viejos defectuosos o da(ados son retirados por unas clulas fagoc!ticas llamadas macrfagos que estn situados por ejemplo en el ba$o. :entro de estos macrfagos la hemoglobina se metaboli$a y el hemo se transforma en la bilirrubina que es liberada a la sangre. Esta bilirrubina es muy poco soluble en agua y para su transporte en sangre va unida a la alb;mina (bilirrubina no conjugada o indirecta insoluble en agua". =na ve$ que llega al h!gado esta bilirrubina es captada por el h!gado. -ll! el h!gado la une al cido glucurnico (bilirrubina conjugada o directa insoluble al agua" de forma que la bilirrubina se hace ms soluble. Este glucurnido de bilirrubina se secreta activamente en la bilis y se dirige hacia el intestino. Las bacterias intestinales metaboli$an esta bilirrubina y la transforman en una serie de pigmentos denominados urobilingenos. Estos pigmentos son los que le dan a las heces el t!pico color amarillo marrn. =na parte de estos urobilingenos dado que son ms solubles en agua se reabsorben hacia la sangre y son eliminados por los ri(ones a la orina. /uando hay una elevacin de bilirrubina directa en sangre entonces se puede filtrar por el ri(n y aparece en orina con lo que sta puede coger un color anaranjado. La presencia en orina de bilirrubina y urobilingeno se puede detectar de forma fcil cualitativamente empleando tiras reactivas. =n aumento de la concentracin en sangre de bilirrubina total conduce a una situacin denominada ictericia. La ictericia se puede definir como una decoloracin amarillo verdosa de la piel y membranas mucosas por una acumulacin de bilirrubina. La ictericia se puede clasificar en 0 grupos fundamentalmente% 1. Ic&ericia pre0ep.&ica. 1or ejemplo la producida por una hemlisis. El incremento de la rotura de hemat!es produce una hiperbilirrubinemia no conjugada que ser superior a la capacidad de depuracin del h!gado. Habr un aumento de bilirrubina indirecta en sangre y la bilirrubina directa ser prcticamente normal. En orina habr generalmente una elevacin de urobilingeno y no se detectar la bilirrubina ya que la bilirrubina no conjugada al ir fuertemente unida a la alb;mina no filtra por el ri(n a la orina.

.. Ic&ericia pos&0ep.&ica. 1or una obstruccin e&traheptica como es una coledocolitiasis La obstruccin hace que la bilirrubina conjugada vuelva a la sangre y no pase al intestino. La hiperbilirrubinemia ser fundamentalmente directa con lo que habr un aumento tambin de bilirrubina en orina. -l eliminarse poca bilirrubina hacia el intestino se forma muy poco urobilingeno con lo que las heces sern plidas. =na ve$ retirada la obstruccin las heces han de recuperar el color y la orina ha de ser positiva para urobilingeno.

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0. Ic&ericia 0ep.&ica. Es un estado intermedio entre las dos anteriores. 1uede ser debido a to&inas o infecciones como por ejemplo la hepatitis v!rica o bloque de la e&crecin de la bilis. 1ero el defecto se encuentra en le h!gado en s! y puede ser heredado o adquirido. Habr un aumento de bilirrubina directa e indirecta en sangre. En orina habr una elevacin de bilirrubina y el urobilingeno estar poco aumentado o incluso puede estar disminuido MB&o%o %e me%ici3n" La bilirrubina total y la Eilirrubina directa se miden por una reaccin de dia$otiti$acin. 1ara ambas mediciones la bilirrubina forma con el cido sulfan!lico dia$oado un colorante a$oicoC en el caso de la bilirrubina total se a(ade un catali$ador (cafe!na ben$oato de sodio acetato de sodio" el cual permite la medicin tanto de la bilirrubina directa como el de la indirecta mientras que en la medicin de la bilirrubina directa no se a(ade el catali$ador por lo que la bilirrubina indirecta no es medida. Es necesario trabajar con un blanco para cada muestra para eliminar la coloracin dada por sueros ictricos. El valor de la bilirrubina indirecta se obtiene de la diferencia entre la bilirrubina total y la bilirrubina directa as!% Eilirrubina indirecta G Eilirrubita 6otal X Eilirrubina >ndirecta

Dalores %e Re!erencia Bilirru)ina To&al 0as&a 1 mgE%l Bilirru)ina %irec&a 0as&a ;./4 mgE%l Bilirru)ina in%irec&a 0as&a ;.94 mgE%l O)ser'aciones La bilirrubina del suero no es muy estable. Las determinaciones deben hacerse tan rpido como sea posible. #i la muestra no puede ser procesada inmediatamente se debe guardar en la oscuridad y en refrigeracin. #i se congela ser estable por varios meses. BIBLIOGRA=@A. 1. NY++>#. U et al. )uevo ,anual ,ercQ de >nformacin ,dica en Neneral. Espa(a. ,ercQ #harp b :*H,E. .995. pp 839. .. ,anual de Eioqu!mica L-E*/L>1. Nuatemala% -ntigua Wacultad de /iencias <u!micas y Warmacia (=#-/". .993. pp 98 K 11. 0. ,urray +obert et al. Bioqumica ! "arp!r 15V. Edicin. El ,anual ,oderno ,&ico :W. .995.

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No. 9 DETERMINA(IAN DE (REATININA La creatinina es un compuesto orgnico generado a partir de la degradacin de la creatina y es un producto de desecho del metabolismo normal de los m;sculos que usualmente es producida por el cuerpo en una tasa muy constante y normalmente filtrada por los ri(ones y e&cretada en la orina. La medicin de la creatinina es la manera ms simple de monitori$ar la correcta funcin de los ri(ones pues si estos no funcionan adecuadamente la creatinina se acumula en la sangre. La importancia cl!nica radica en que puede indicar una posible disfuncin o insuficiencia renal incluso antes de que se presenten s!ntomas. La creatinina es una prueba diagnstica esencial ya que se ha observado que su concentracin en sangre indica con bastante fiabilidad el estado de la funcin renal. 1or esto la creatinina puede avisar de una posible disfuncin o insuficiencia renal incluso antes de que se presenten s!ntomas. Es un derivado de los aminocidos muy parecido a ellos en cuanto a su estructura molecular. #e sinteti$a de forma natural en el h!gado el pncreas y en los ri(ones a partir de aminocidos como la arginina la glicina y la metionina a ra$n de un gramo de creatina por d!a. /onstituye la fuente inmediata y directa para regenerar -61 y proveer de energ!a a las clulas musculares. Nran parte de la creatina se almacena en todos los m;sculos del cuerpo (alrededor del 89J" se sabe que un adulto que tenga 59 Qg de peso corporal posee cerca de 1.9 g de creatina. La finalidad del almacenamiento es la creacin junto con el fsforo de la fosfocreatina presente en las clulas musculares de los vertebrados as! como algunos invertebrados se encuentra presente con la en$ima creatina quinasa. Los m;sculos no son capaces de sinteti$ar la creatina y es por esta ra$n por la que la toman del torrente sangu!neo. . Ma&eriales * MB&o%os sangre -guja -lgodn -lcohol Liga 6ubos de ensayo sin coagulante /entr!fuga 1ipetas -utomticas de 3 a 39^ 19 a 199^ y 199 K 1999^. 6ips Espectrofotmetro -gua destilada Diales Reac&i'os Ycido 1!crico +eactivo de /reatinina o Euffer.

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<roce%imien&o /alibracin del Espectrofotmetro% /uando el espectrofotmetro est listo indicamos la casilla de lo que se quiere anali$ar en este caso /reatinina luego colocamos los parmetros para que pueda reali$ar el anlisis estos son% 6emperatura% 05 c/ Longitud de *nda% 399 (reactivo pide 28. pero el espectrofotmetro nos da n;meros complejos y buscamos el que mas se apro&ime" Dolumen de ,uestra% .3^ Dolumen de reactivo 1% 299^ Dolumen de reactivo .% 199^ Leer inmediatamente 1reparacin% 6omamos 299^ del reactivo 1 y lo colocamos en un vial luego a(adimos 199^ de cido 1!crico o reactivo .y lo a(adimos al mismo vial luego 39^ de suero lo mesclamos rpidamente con la misma pipeta automtica y lo pasamos por el espectrofotmetro. Esperamos 79 segundos para que nos de el resultado. Los 'alores %e re!erencia" Los resultados de las pruebas de laboratorio pueden variar dependiendo de la edad gnero historia cl!nica el mtodo usado para esta prueba y muchos otros factores. Hom)res" ;.5 a 1./ mgE%L Mu+eres" ;.4 a 1.1 mgE%L O)ser'aciones Los adultos con mucha masa muscular pueden tener ms creatinina en la sangre que la poblacin normal. Las personas ancianas por otro lado pueden tener menos creatinina en la sangre de lo normal. -lgunos frmacos pueden producir una elevacin anormal de las concentraciones de creatinina en sangre. =na concentracin muy elevada de creatinina en la sangre puede indicar la necesidad de someterse a dilisis para eliminar las sustancias de desecho de la sangre. BIBLIOGRA=IA. 1. ,urray +obert et al. Bioqumica ,oderno ,&ico :W. .995. .. >nserto de reactivo. ! "arp!r 15V. Edicin. El ,anual

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No. : DETERMINA(IAN DE <ROTEINAS EN SUERO :e los solutos presentes en el plasma las prote!nas estn en mayor concentracin. Las prote!nas tienen diversas funciones en el ser humano% )utricin% constituyen una porcin del fondo com;n de los aminocios del cuerpo. 6ransporte% enla$ando iones metlicos hormonas y l!pidos. ,antenimiento de presin osmtica coloidal% sirve para mantener un volumen normal de sangre y un contenido normal de agua en el l!quido intersticial y los tejidos. ,antenimiento del balance cidoKbase. /oagulacin de la sangre y cicatri$acin de las heridas. Herencia.

:e las prote!nas la alb;mina y globulinas alfa y beta y qui$s globulinas gama no inmunes son sinteti$adas en el h!gado. Las globulinas gama inmunes (anticuerpos" son sinteti$adas en los linfocitos E. Impor&ancia cl$nica" En los estados patolgicos el total de prote!nas puede variar por ejemplo% Aumen&o %e pro&e$nas 70iperpro&einemia8" :eshidratacin% por la disminucin del volumen de agua e&iste una concentracin de soluto alta. Mieloma mKl&iple% 1resencia de niveles elevados de prote!nas espec!ficas de mieloma. Disminuci3n %e pro&e$nas 70ipopro&einemia8" #!ndrome nefrtico% se pierde alb;mina en orina. <uemaduras graves hemorragias e&tensas heridas abiertas. 1er!odo largo de baja ingesta o deficiente absorcin de prote!nas. El mdico puede solicitar un valor de prote!nas totales o bien requerir los valores de las fracciones de alb;mina o globulina y la proporcin de ellos -LN. MB&o%os %e Me%ici3n" El mtodo ms com;nmente utili$ado es el de E>=+E6 seg;n el cual al tratar una solucin de prote!na con iones cobre en un medio moderadamente alcalino se forma un complejo quelato coloreado entre el in cobre en un medio moderadamente

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alcalino se forma un complejo quelato coloreado ente el in cobre y los grupos carbonilo y amino de los enlaces pept!dicos dando un color p;rpura.

Dalores %e Re!erencia" 5.1 9.1 gE%l. O)ser'aciones" Las pruebas para la determinacin de prote!na no deben reali$arse con sueros hemolisados lipmicos ni ictricos. BIBLIOGRA=@A. 1. ,anual de Eioqu!mica L-E*/L>1. Nuatemala% -ntigua Wacultad de /iencias <u!micas y Warmacia (=#-/". .993. pp 90. .. ,urray +obert et al. Bioqumica ! "arp!r 15V. Edicin. El ,anual ,oderno ,&ico :W. .995.

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No. 1; DETERMINA(IAN DE L(IDO MRI(O Los humanos convierten los principales nucletidos de purina adenosina y guanosina en cido ;rico. La adenosina se desamina inicialmente a inosina por la adenosina desaminasa. La fosforlisis de los enlaces )KNlicos!dicos de la inosina y guanosina se catali$a por la nuclesido de purina fosforilasa% se libera ribosa 1Kfosfato y una base de purina. 1osteriormente la Hipo&antina y la guanina forman Pantina en reacciones catali$adas por la &antina o&idasa y la guanasa respectivamente. La &antina formada se o&ida a cido ;rico en una segunda reaccin catali$ada por la &antina o&idasa. :e esta forma la &antina o&idasa proporciona un sitio potencial para la intervencin farmacolgica en los pacientes con hiperuricemia y gota. La cantidad de cido ;rico depende de la ingestin diettica de purinas y de la velocidad del catabolismo de las purinas endgenas o sea las formadas en el interior del organismo. En situaciones normales se forman 3 gramos de purinas al d!a y solo 9.3 gramos se convierten en cido ;ricoC por lo tanto la mayor parte de las purinas formadas son reutili$adas. D$as %e Eliminaci3n. La e&crecin neta del cido ;rico total en personas sanas es en promedio de 299 a 499 mgL.2h. es eliminado por v!a renal o por las heces. ,uchos compuestos farmacolgicos y naturales influyen en la absorcin y la secrecin renal de urato de sodio. La mayor parte del cido ;rico se disuelve en la sangre y viaja a los ri(ones donde sale a travs de la orina. #i el cuerpo produce demasiado cido ;rico o no lo elimina lo suficiente la persona se puede enfermar. Los altos niveles de cido ;rico en el cuerpo se denominan hiperuricemia. (ausas por las ,ue aumen&a o %isminu*e. La Hiperuricemia se debe principalmente a una alta ingesta de alimentos ricos en prote!na como las carnes y tambin el alcohol algunas enfermedades tambin pueden causar hiperuricemia como es el caso de la leucemia ya que hay un aumento del catabolismo pur!nico. 6ambin son numerosos los casos de hiperuricemia por trastornos genticos del catabolismo debido a falta de en$imas espec!ficas. La disminucin del cido ;rico o Hipouricemia y la alta e&crecin de Hipo&antina y &antina se relacionan con la deficiencia de la &antina o&idasa debido a un defecto gentico o a un da(o heptico severo. En la deficiencia grave de &antina o&idasa los pacientes pueden mostrar &antinuria y litiasis &ant!nica. =n buen tratamiento para bajar las concentraciones altas de cido ;rico seria la utili$acin del -lopurinol ya que es un inhibidor de la &antina o&idasa. Go&a" La gota es una enfermedad metablica persistente que produce un aumento del cido ;rico circulante este se deposita en las articulaciones produciendo%

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:epsitos de cido ;rico que se convierten en cristales afilados en las articulaciones o coyunturas y frecuentemente se acumulan en el dedo gordo del pie. :epsitos de cido ;rico (llamados tofo gotoso" que aparece como un chichn debajo de la piel. 1iedras (clculos" renales debido a los cristales de cido ;rico en los ri(ones. En las personas con gota el cido ;rico se acumula y forma cristales puntudos que se pueden acumular alrededor de las articulaciones. Esto causa dolor e hincha$n en las articulaciones afectadas. Este problema se suele asociar tambin a la diabetes obesidad y enfermedades renales. La gota tiene cuatro etapas% la asintomtica (sin s!ntomas" la aguda la intercr!tica y la crnica. Reac&i'os +eactivo de cido ;rico% 1999^l ,uestra de suero sangu!neo% .9^l Ma&eriales Liga Ueringa de 0cc -lgodn -lcohol Espectrofotmetro /entr!fuga 1 pipeta automtica de 199K1999 ^l 1 pipeta automtica de 19 X 199 ^l 6ips Diales 6ubos de ensayo

<roce%imien&o /olocar 1999 ^l de reactivo de cido ;rico en un vial. /olocar .9 ^l de suero en el vial que contiene reactivo. ,e$clar ligeramente #e deja reposar por 3 minutos. -l transcurrir los 3 minutos se coloca en el espectrofotmetro para reali$ar la prueba. #e leen los resultados y se interpreta la prueba. Dalores %e re!erencia Hombres% 0.2K5.9 mgLdl ,ujeres% ..2K 3.5 mgLdl

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No. 11 DETERMINA(IAN DE UREA EN SANGRE E&piacin del ciclo de la =rea% El h!gado es el principal rgano donde se forma la ureaC tres aminocidos la ornitina citruilina y arginina promueven la formacin de urea en rebanadas del h!gadoC la en$ima arginasa hidroli$a la arginina y la convierte en ornitina y urea. El amonio obtenido por la desaminacin de los aminocidos a travs de la deshidrogenacin glutmica en el sustrato de la carbamilfosfato sintetasa en$ima que junto con el /*. y el -61 catali$a la formacin de carbamilfosfato que es el alimentador por e&celencia del ciclo de la urea. La reaccin se lleva a cabo en varias etapas y necesita de la )K-cetil glutamato como modulador alostrico positivo. )H2O/*.O\-61OH.* H.) K /K * X 1*0H. O .-:1 O 1i * /-+E-,>LW*#W-6* El gasto de dos molculas de -61 despla$a el equilibrio de la reaccin a la derecha y fuer$a la s!ntesis del carbamilfosfato. La ornitina se convierte en citruilina directamente por el paso del carbamilo del carbamilfosfato a la ornitina en la reaccin de transcarbamilacin. La citrulina es por lo tanto una carbamilornitina cuya s!ntesis se reali$a en la mitocondria de la cual sale al citosol para continuar el ciclo. La formacin de arginina es un proceso mas complejo que requiere la presencia de aspartato -61 y ,gO.. El primer paso es la formacin de arginoKsuccinato por la consideracin (en presencia de -61 y ,gO." de citrulina y aspartato. El arginosuccinato se fragmenta en arginina (lista para ser atacada por arginasa" y fumarato que entra al ciclo de Qrebs y permite la regeneracin de aspartato. Winalmente la arginasa hidroli$a a la arginina en urea y ornitina la cual queda disponible para penetrar a la mitocondria e iniciar el ciclo aceptando otro carbamilfosfato. :ada la to&icidad y la necesidad de manejar las concentraciones cambiantes de )H 2O el ciclo de la urea muestra una gran capacidad de ajuste pudiendo de acuerdo con la dieta formarse y eliminarse cada .2 horas en condiciones normales de 3 a 39 gramos de urea. Los mecanismos de ajuste pueden ser lentos requiriendo de 0 a 2 d!as para instalarse por depender de la cantidad de en$imas presentes o rpidos bajo control hormonal instalados en minutos en este caso en relacin con mayor acopio de sustratos sobre

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todo de acetilglutamato el modulador alostrico positivo de la carbamilfosfato sintetasa que forma carbamilfosfato alimentador del ciclo. #e conocen algunos cuadros cl!nicos por bloqueos parciales del ciclo de la urea. #e caracteri$an por hiperamonemia retraso mental vmitos y aversin a comidas ricas en prote!nas. #e mejoran si disminuyen las prote!nas en la dieta y se suministran cetocidos correspondientes a los aminocidos esenciales pues estos al eliminarse disminuyen la hiperamonemia. 6o&icidad del amon!aco y s!ntomas. El amon!aco generado por las bacterias entricas se absorbe en la sangre de la vena porta por tanto sta contiene niveles mas altos de amon!aco que la sangre sistmica. 'a que un h!gado sano metaboli$a rpidamente el amon!aco de la sangre portal la sangre perifrica se encuentra virtualmente libre de amon!acoC esto resulta esencial puesto que a;n cantidades m!nimas de amon!aco son t&icas para el sistema nervioso central. En caso de que la sangre portal no pase por el h!gado el amon!aco en sangre sistmica puede elevarse a niveles t&icos. Esto puede ser consecuencia de una disminucin pronunciada en la funcin heptica o al desarrollo de comunicaciones colaterales entre venas porta y sistmicas como sucede en la cirrosis. Los s!ntomas de into&icacin por amon!aco incluyen temblor lenguaje poco entendible visin borrosa y en casos graves coma y muerte. Estos s!ntomas se asemejan a los del coma heptico que se presenta cuando los niveles de amon!aco en sangre y en cerebro se elevan en forma significativa. El tratamiento se orienta a la reduccin de los niveles sangu!neos de amon!aco. La to&icidad del amon!aco parece residir en provocar en el h!gado y el cerebro una disminucin del Kcetoglutarato. -l disminuir el Kcetoglutarato baja el ritmo de actividad del ciclo de Srebs as! como el de las o&idaciones de sustratos en las clulas lo que acarrea una grave inhibicin de la respiracin en el cerebro y un aumento en la produccin de cuerpos cetnicos por el h!gado. /ausas de disminucin y aumento de urea en sangre% El cuerpo produce en promedio .3 a 09 gramos de urea al d!a algo ms en personas que comen dieta rica en prote!nas menos en personas con dieta pobre en prote!nas. Los dos factores principales que establecen el ritmo de e&crecin de urea son% 1. .. La concentracin de urea en el plasma y La intensidad de filtracin glomerular.

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Estos factores aumentan la concentracin de urea principalmente porque la carga de urea que penetra en los t;bulos pro&imales es igual al producto de la concentracin plasmtica de urea por la intensidad de filtracin glomerular. =na eleccin muy importante que debe aprenderse de estas relaciones es que en pacientes con insuficiencia renal es importante considerar la intensidad de filtrado glomerular en valores altos. /uando la intensidad de filtracin glomerular disminuye demasiado la concentracin de urea en sangre aumenta hasta un nivel proporcionalmente mayor. El nitrgeno est presente en otro qu!mico llamado urea. La urea es un producto de desecho producido cuando el cuerpo ha digerido las prote!nas. La urea es llevada a travs de la sangre a los ri(ones los cuales filtran la urea de la sangre y la depositan en la orina. Las enfermedades renales muchas veces dificultan el filtrado correcto de la urea. Esto causa niveles altos de urea en sangre. El anlisis tambin se reali$a a pacientes que estn sometidos a dilisis renal para ver si se est reali$ando bien esta funcin. /iertos medicamentos alteran las funciones de ciertos rganos como el ri(n y este estudio ayuda a monitorear si los medicamentos y la dosis son correctos. Este anlisis se debe pedir cuando se sospecha de problemas renales o cuando se quiere saber sobre la dieta del paciente muchas veces alta en prote!nas aunque tambin es indicador de malnutricin en concentraciones bajas de urea. Concentraciones altas de urea pueden ayudar a diagnosticar tambin fallo card!aco hemorragias gastrointestinales hipovolemia (quemaduras y deshidratacin" inanicin obstrucciones renales como clculos o tumores. Concentraciones bajas de urea pueden ayudar a diagnosticar dietas pobres en prote!nas fallo heptico embara$o y e&ceso de hidratacin entre otras. MB&o%o %e me%ici3n" En la actualidad se acostumbra reportar el valor del nitrgeno de urea en ve$ de la urea total. En presencia de tiosecarba$ida% La urea forma un color rojo en solucin de cido diacetilmono&ima lo que se mide espectrofotomtricamente. =reasa% =tili$a la en$ima ureasa que pasa la urea a amon!aco y di&ido de carbono. El amon!aco en presencia de nitroprusiato forma un compuesto coloreado verde cuya absorbancia es medidaC o bien los iones amonio formados reaccionan con fenol e

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hipoclorito de sodio (reaccin de Eerthelot" formando un compuesto de color a$ul medido tambin espectrofotomtricamente. Dalores %e Re!erencia" Urea &o&al" 1; 4; mgE%l * ni&rogeno %e urea %e 4 /1 mgE%l. BIBLIOGRA=@A. 1. L-N=)- U et al. Eioqu!mica. 2ta edicin. UNH +:>6*+E#. 1p. 115 a 1.1. .. ,=++>-. +S et al. Eioqu!mica de Harper. 13V ed. 1astrana D, trad. ,&ico% El manual moderno .995. pp. 043 050. 0. N='6*)% - /. Wisiolog!a ,dica. 3ta edicin. E:>6*+>-L >)6E+)-/>*)-L. 1p.249. 2. ,urray +obert et al. Bioqumica ! "arp!r 15V. Edicin. El ,anual ,oderno ,&ico :W. .995.

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No. 1/ DETERMINA(IAN DEL GRU<O SANGU@NEO ABO * R0. Wue descubierto a principios del siglo PP por Sart Lanndsteiner que demostr que cuando se combinan dos muestras de sangre en algunos casos se me$claban sin signos apreciables de reaccin pero en otro se produc!a aglutinacin de los glbulos rojos. En e suero esta aglutinacin se atribuye a la presencia de ant!geno en los glbulos rojos y anticuerpos en el suero. El grupo sangu!neo -E* es el grupo ms importante para medicina transfusional. Este sistema involucra tres ant!geno% - E H. el antigeno H es convertido en el grupo - o E por accin de las transferasa - ()KacetilKgalactosamina" o la transferasa E (:K galactosa" el fenotipo * es el resultado de una glicosiltransferasa inactiva la cual es capa$ de glicosilar al ant!geno (lKfucosa". El sistema -E* est formado principalmente por 2 grupos #angu!neos cuya informacin gentica se encuentra codificada en el cromosoma 8. El desarrollo del ant!geno - y E se inician en etapas tempranas de la vida fetal apro&imadamente 4 semanas de la vida y van aumentando lentamente hasta alcan$ar el nacimiento. Landsteiner clasific los eritrocitos individuales en cuatro tipos% - E -E y *. En la actualidad se reconoce que los grupos - y E representan ant!genos de carbohidratos sobre los eritrocitos. En la membrana de los glbulos rojos pueden e&istir unos carbohidratos cuya especificidad reside en los en los a$ucares terminales de un oligosacrido. Estas corresponder!an a lo que denominan an&$genos. En el plasma sangu!neo tenemos an&icuerpos. Evidentemente un individuo del grupo no podr tener anticuerpos antiK- pues esto no ser!a viable (la sangre coagular!a". -s!%

los individuos - tendrn anticuerpos antiKE los individuos E tendrn anticuerpos antiKlos individuos -E no tendrn anticuerpos de este tipo los individuos * tienen los dos tipos de anticuerpos.

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Nrupo sangu!neo

-E

Nlbulos rojos

En la membrana En el plasma

-nt!geno -ntiKE

-nt!geno E -ntiK-

-nt!genos - y E )o anticuerpos

)o ant!genos -ntiK- y -ntiKE

:e la misma manera el factor +h es otra prote!na que e&iste en los glbulos rojos de algunas personas. #u nombre viene del mono en el que fue descubierta el macacco rhesus. El factor +h positivo es un factor hereditario dominante. Este asunto tiene especial importancia en donaciones de sangre. /omo hemos visto un individuo - tiene en su plasma anticuerpos antiKE as! que no podr recibir sangre de un individuo E pues estos anticuerpos provocar!an la coagulacin de la sangre del donante en los vasos sangu!neos de la persona receptora. En la siguiente tabla vemos las compatibilidades a la hora de donar y recibir sangre. /omo vemos el grupo -E puede recibir de cualquier otro grupo y de s! mismo as! que se llama "receptor universal". El grupo * sin embargo puede donar a cualquier grupo as! que se conoce como "donante universal".

RE(E<TOR D grupo - grupo E grupo -E grupo * O grupo SI NO SI NO N NO SI SI NO A grupo E N grupo -E NO NO SI NO T SI SI SI SI E grupo *

Ma&eriales"

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#olucin antiK#olucin antiKE #olucin antiK:(anti +h" 6arjetas de identificacin

,aterial pun$ante estril -lgodn -gua o&igenada =na gota de sangre

TBcnica1" 1. /olocar en la tarjeta o portaobjetos una gota se suero antiK- una de antiKE una me$cla de antiK- y antiKE y una gota de antiK: cada una en su casilla correspondiente como se indica en la

W>N=+- 1.

W>N=+- 1 .. 1inchar la yema del dedo previa desinfeccin con alcohol o agua o&igenada. :epositar una gotita de sangre en cada casilla y me$clar con los sueros.

2.

W>N=+- ..

W>N=+- . 0. *bservar los resultados. El grupo sangu!neo del individuo corresponder con el de la casilla en la que la sangre haya coagulado. #i el individuo es del grupo -E la sangre coagular en las tres primeras casillas. -dems si la sangre coagula en la casilla aantiK:a el individuo ser +h. positivo de lo contrario ser +h negativo. W>N=+- 0.

W>N=+- 0

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En las tarjetas de la W>N=+- 2 se puede observar el aspecto que presentan dos casos opuestos. En la tarjeta superior se observa que no e&iste coagulacin en ninguna casilla. Las tres primeras corresponden a los sueros del grupo sangu!neo por lo que interpretamos que esta persona pertenece al grupo * la cuarta es la del factor +h y al no e&istir coagulacin interpretamos que es +h negativo. En la tarjeta inferior vemos coagulacin en todas las casillas por lo que de una forma similar interpretamos que el alumno es del grupo sangu!neo -E y +h positivo W>N=+- 2 6cnica .% 1. /. 1. 2. 4. (olocar una go&a %el An&i A en un &u)o limpio * ro&ula%o. (olocar una go&a %e An&i B en un segun%o &u)o limpio * ro&ula%o. (olocar una go&a %e An&i D en un &u)o limpio * ro&ulao. Agregar a ca%a &u)o una go&a %e suspensi3n %e cBlulas %e / a 4?. Me-clar el con&eni%o %e los &u)os gen&ilmen&e * cen&ri!ugar 1 minu&o a 1,;;; rpm. 5. Gen&ilmen&e resuspen%er el )o&3n %e cBlulas * eCamine si 0a* aglu&inaci3n. 6. In&erpre&ar resul&a%os.

No. 11 DENO<UN(IAN

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1ara obtener por venipuntura la muestra se e&trae directamente de una vena del paciente con aguja hipodrmica estril y una jeringuilla o un tubo al vac!o. La vena seleccionada debe ser grande y accesible y cerca de la superficie de manera que pueda verse o palparse. Las venas son la fuente de sangre para un n;mero mayor de anlisis sangu!neos y como v!a de introduccin de agentes teraputicos. El paciente debe estar acostado y si est sentado deber apoyar el bra$o. Lugar de la toma de muestra: #e reali$a en las venas del antebra$o siendo las ms fciles del pliegue del codo mediana bas!lica mediana ceflica y la cubital o radial ocasionalmente se puede utili$ar las venas del dorso de la mano yugular e&terna y femoral. E uipo a !tili"ar% a. Ueringas hipodrmicas de calibre .9 y .1 b. 6ubos vacutainer en e&tracciones en gran n;mero c. -lcohol et!lico al 59J d. Ligadura e. -lgodn f. 6ubos o frascos para recoleccin de sangre. #reparaci$n: a. Lavarse las manos con agua y jabn b. Etiquetar el frasco c. /olocarla aguja estril en la jeringa pero mantenerla tapada hasta utili$arla d. >nspeccionar y limpiar el rea de la puncin e. >nspeccionar la aguja y la punta de esta que no este h;meda para evitar hemlisis. #rocedimiento: a. /olocar la ligadura alrededor del bra$o del paciente . pulgadas arriba del codo y apretarla. 1+E/-=/>@)% no %e+ar ,ue el &orni,ue&e permane-ca en su lugar por m.s %e / minu&os b. >nstruir al paciente para abrir y cerrar la mano varias veces (si no se hace palpable la vena a puncionar". c. Locali$ar la vena deseada por medio de palpacin o inspeccin. d. Limpiar con algodn y alcohol el rea seleccionada. e. 1edir al paciente que cierre el pu(o y estire el bra$o. f. Wijar la vena elegida con los dedos !ndice y pulgar. NO TO(AR EL AREA DESIN=E(TADA.. g. #ostener la jeringa con la mano derecha apro&imadamente a un ngulo de 09 grados con respecto al bra$o del paciente introdu$ca a travs de la piel inmediata adyacente a la vena que se va a puncionar. h. #i la presin de la vena es baja habr necesidad de sacar un poco el embolo para asegurar que la aguja a entrado en la vena.

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i. >ntroducir la aguja un poco ms adentro de la vena para evitar para evitar que se salga de la vena mientras se e&trae la sangre. 1+E/-=/>@)% NO TRAS<ASAR LA DENA j. -flojar EL torniquete. /olocar un algodn con alcohol en el lugar de la puncin pedirle al paciente que abra la mano sacar la aguja y oprimir el algodn con la otra mano por 0 a 3 minutos o pedir al paciente que lo haga. 1+E/-=/>@)% quite el torniquete antes de sacar la aguja de lo contrario se puede formar un hematoma en el sitio de la puncin. Q. #i uso anticoagulante invertir inmediatamente el tubo varias veces. l. :escartar adecuadamente en bote rojo y la jeringa en bolsa roja. Causas de error: a. =so del torniquete por ms tiempo del debido b. Hemlisis de los eritrocitos por uso de jeringas o tubos h;medos. c. Lipemia d. >ctericia e. /ontaminacin bacteriana f. =sos equivocados de los anticoagulantes. 1. mediana bsica .. mediana ceflica 0. cubital o radial

Ceflica Mediana ceflica Radial Mediana

Baslica Mediana baslica Cubital anterior

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<UN(IAN (A<ILAR =tili$ada para obtener peque(as muestras de sangre o en pacientes de corta edad. Lugar de la punci$n: Los lugares ms adecuados son la superficie palmar o lateral de la punta del dedo en los infantes se reali$a la misma en el taln o dedo gordo del pie. E uipo a utili"ar: a. -lgodn b. -lcohol c. Lanceta d. /ubre o porta objetos tubos capilares heparini$ados pipetas especiales. #rocedimiento: a. El lugar de puncin debe estar caliente b. Limpiar el lugar de la puncin con alcohol c. -plicar presin al rea y luego hacer la puncin perpendicular d. Limpiar la primera gota que apare$ca e. )o apretarse ni escurrir el algodn f. /olocar un algodn con alcohol para controlar la salida de sangre g. El muestreo de sangre en recin nacidos o ni(os peque(os presenta un problema especial. #-)N+E /-1>L-+% se obtiene mejor la sangre por puncin venosa del taln o primer dedo del pie. En recin nacidos los valores de hemoglobina de la sangre capilar son mucho mayores que los valores obtenidos en la sangre venosa de cordn umbilical. %ecomendaciones: a. =tili$ar lanceta desechable b. )o puncionar un dedo de la mano que haya estado hacia abajo c. +eali$ar la puncin en el lado lateral del dedo. d. #i una muestra no puede ser procesada de inmediato el tubo que la contenga debe de taparse y refrigerarse. 1ara algunas pruebas es necesario separarse el plasma de los glbulos rojos. Las muestras para recuento de plaquetas determinacin de !ndice de sedimentacin y tiempo de protrombina no debe de guardase mas de dos horas.

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ANTI(OAGULANTES #i la sangre venosa va a utili$arse para recuentos hematolgicos es necesario usar un anticoagulante. #e emplean anticoagulantes secos para evitar dilucin de la muestra que disminuir la concentracin de los elementos de la sangre. OCala&os" -ct;an removiendo el calcio de la sangre en forma insoluble de o&alato de calcio ya que no afecta el valor globular medio y o interfiere en la velocidad de sedimentacin. (i&ra&os" -ct;an como anticoagulantes por la combinacin de calcio formando una sal insoluble de calcio el citrato trisdico no se usa como anticoagulante de rutina sino para investigacin de coagulacin. EDTA" Es la sal di potsica di sdica del cido etiloendiaminotetrcetico vuelven insolubles las sales de calcio. #e usa la concentracin de 1 mg de polvo por mL de sangre preservndola .2 hr. la sangre refrigerada y es posible el recuento de plaquetas horas pasadas es el anticoagulante ms caro. Heparina" Es el mejor anticoagulante para prevenir la hemlisis y para las pruebas de fragilidad osmtica la ventaja es que no introduce electrlitos. #in embargo posee una desventaja la cual consiste en aumentar la celularidad morfolgica. BIBLIOGRA=@A. 1. #tites :aniel 1.C 6err -bba >.C 1arsloT 6ristram N. Inmunolo#a B$sica % Clnica, ,anual ,oderno 19a. edicin. .99.. .. Noldsby +ichard -. 6homas. et al. Inmunolo#a, 3ta. Edicin. ,cNraTKHill >nteramericana #. -. de /. D. ,&ico :. W. .990. 0. Levinson Rarren. ,icrobiolog!a e >nmunolog!a ,dica. 7va. Edicin. . ,cNraTK Hill >nteramericana #. -. Espa(a. .994.