Extrao de DNA A extrao dos cidos nuclicos (DNA e RNA) o primeiro passo para a realizao da maioria das metodologias

s de biologia molecular. Pode se obter DNA a partir de in!meros tipos de tecidos e clulas" e existe uma in#inidade de protocolos para realizao de tal procedimento. A escol$a do protocolo de extrao de DNA depender de di%ersos #atores como& tipo de tecido a ser utilizado" grau de pureza e de integridade necessria para a aplicao em 'ue o DNA ser utilizado (P(R" se')enciamento" clonagem g*nica" etc.) (+artlett" ,--.). / primeiro relato sobre isolamento de DNA data de 0123 e #oi realizado por 4riedric$ 5iesc$er" a partir de leuc6citos presentes em pus. 5iesc$er lisou estas clulas com uma soluo alcalina e precipitou o material nuclear com soluo salina. 7ste material nuclear 'ue posteriormente seria con$ecido como DNA" #oi c$amado de nucle8na. +asicamente" o processo de extrao de DNA consiste em duas etapas. A primeira etapa a extrao propriamente dita e consiste no rompimento das membranas celulares (e conse')ente exteriorizao do DNA). A segunda #ase consiste na puri#icao do DNA em soluo" ou se9a" :retirada; dos outros componentes celulares da soluo (restos de membrana" prote8nas" RNA) (Romano" 0333). / rompimento das membranas celulares geralmente #eito com detergentes (<D< dodecil sul#ato de s6dio ou (=A+ brometo de cetiltrimetilam>nio). A utilizao de agentes caotr6picos como o tiocianato de guanidina impede o DNA de se ligar nas outras molculas" #acilitando sua separao na segunda #ase do processo. Ap6s esta #ase" de%e se separar o DNA dos outros componentes celulares. ?sto #eito por meio da adio de subst@ncias 'ue #aam com 'ue a soluo torne se $eterog*nea e 'ue o DNA #i'ue dissol%ido em apenas uma das #ases" como por exemplo" 'uando se utiliza fenol para desnaturar as prote8nas" #icando o DNA na #ase a'uosa e as prote8nas na inter#ace entre as #ases org@nica e a'uosa. Ama alternati%a B utilizao dos sol%entes org@nicos como o #enol #azer a separao das prote8nas utilizando altas concentraCes de sal ( salting-out). (por exemplo Acetato de PotssioDAcetato de s6dio). Ap6s separar o DNA dos outros componentes celulares" pode se proceder a uma precipitao do DNA para garantir a mxima pureza do material" esta precipitao geralmente #az se utilizando lcool (etanol ou isopropanol) gelado 'ue" em presena de ctions mono%alentes" promo%e uma transio estrutural na molcula de cido nuclico" resultando em agregao e precipitao (Regitano" ,--0E Aze%edo" ,--.).

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