REPORTE

Efecto de la temperatura y metales pesados sobre la actividad enzimtica de la Amilasa Salival.

BCT I
Cuevas Palacios Laura Montserrat. Fras Urrea Gabriela Ameyalli. Pedro Martn Reyes Equipo 2

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Introduccin

Propiedades y reacciones que cataliza la Amilasa Salival Alfa-amilasa (nombre comn), o nombre sistemtico 1,4-glucano-4-glucanohidrolasa, tiene un peso molecular de 45 000 y dentro de las amilasas existen los grandes grupos: las amilasas y . Las amilasas beta hidrolizan la porcin amilsica del almidn hasta dar maltosa. Rompen los enlaces -1,4glucano de los polisacridos, eliminando unidades sucesivas de maltosa a partir del extremo no reductor de la cadena. A diferencia de las amilasas , las amilasas suprimen rpidamente la propiedad de la amilosa de dar un color azul con el yodo; adems la aparicin de maltosa es mucho ms lenta en las reacciones catalizadas por la amilasa que en las catalizadas por amilasas . Dichas amilasas hidrolizan los enlaces -1,4-glucano en los monosacridos que contienen tres unidades de glucosa con enlace -1,4 o ms.

La enzima alfa-amilasa, presente en la saliva, inicia la degradacin del almidn. Hidroliza al azar los enlaces alfa (1,4) que unen residuos de glucosa en el almidn, a excepcin de los enlaces cercanos a los extremos y a los puntos de ramificacin de las cadenas. Por la accin de esta enzima activada por iones cloruro, en la boca la longitud de la cadena del almidn se reduce de varios miles a unas ocho unidades de glucosa. La alta concentracin de protones del estmago inactiva la alfa-amilasa salival La AMILASA SALIVAL o TIALINA, sta es una amilasa que tiene como sustratos: almidn dextrgeno glucgeno

Sobre el almidn acta produciendo en la etapa final maltosa, pasando por una etapa intermedia de dextrinas. AMILASA ALMIDN AMILODEXTRINA (azul) ERITRODEXTRINA (rojo)

ACRODEXTRINA (color yodo, se considera incoloro) MALTOSA

Diferencias entre Amilasa Salival y Amilasa Pancretica

Amilasa salival es secretada en la glndula salival esta digiere el almidn en maltosa, mientras que la amilasa pancretica es secretada en el pncreas y digiere maltosa en glucosa..

Mecanismo de accin de los metales pesados La amilasa tiene activadores e inhibidores: Activadores: 1) 2) 3) 4) 5) 6) Cloruro Yoduro Bromuro Nitratos aa (el mejor es la asparagina) Calidad de la dieta ( rica en HC la estimulan, pero una rica en lpidos y protenas, no es buen estimulante).

Inhibidores: 1) Sales de Hg y Ag (plata) Protena que est en el germen del trigo

Interpretacin grfica del efecto de pH y temperatura en la actividad de las enzimas (presentar grfica y explicacin).

Objetivos El alumno: Determinar cualitativamente la actividad de la amilasa salival a diferentes temperaturas. Determinar cualitativamente la actividad de la amilasa salival con algunos metales. Analizar los efectos de la temperatura y metales sobre la actividad de la amilasa salival.

Resultados

Imagen I. Efecto Hipercrmico

Metal Plata (Ag) Mercurio (Hg) Plomo (Pb) Cobre (Cu)

Inhibicin X X X

Imagen II. Efecto de los metales (Ag, Cu, Pb, Hg)

Imagen III. Efecto de la temperatura 0, 25, 37, 70 y 100C respectivamente.

Imagen IV. Efecto de pH (HCL, ph 4, 7, 10, NaOH)

Discusin de Resultados Conclusiones

La amilasa es la responsable de comenzar la degradacin del almidn en la boca, su temperatura ptima es de 38C, es decir; por encima y por debajo de esta temperatura, la enzima disminuye e incluso pierde sus propiedades digestivas. As mismo, si el almidn est muy concentrado la amilasa no lo puede degradar tan fcilmente.

Bibliografa Clark, J.M. Bioqumica experimental. Ed. Acribia, Espaa 1996. Rendina G. Tcnicas de Bioqumica Aplicada. Ed. Interamericana, Mxico 1974. Karp G. Biloga Celular. McGraw-Hill. 1996.

Cuestionario 1. Cul es el efecto de la temperatura sobre las protenas?

2. De qu manera interfieren los metales sobre la actividad enzimtica?

3. Cmo se denomina a la modificacin de la estructura primaria de las protenas? Y de la estructura terciaria? 4. Qu es la contante de Michaelis-Menten? Cmo se obtiene grficamente? Qu indica? Para determinar la velocidad de una reaccin se incuba a la temperatura deseada una mezcla que contenga todos los ingredientes requeridos, excepto uno, en cual inicie la reaccin cuando se aada. Si al inicio de la reaccin no se encuentran productos en la mezcla, entonces la velocidad de aparicin del producto suministra una medida de la velocidad de reaccin. Para trazar una curva se determina la velocidad inicial para una serie de mezclas incubadas que contengan la misma cantidad de enzima, pero una concentracin creciente de sustrato (velocidad de Rx vs concentracin de sustrato). De esta cuerva se puede concluir que la velocidad inicial de reaccin de vara notablemente con la concentracin de sustrato. KM: Es igual a la concentracin de sustrato cuando la velocidad de reaccin corresponde a la mitad de la Vmax. El valor de KM proporciona una medida de la afinidad de la enzima por el sustrato, cuando mayor sea el valor, menor ser la afinidad; un valor tpico de KM es de 10 -4M. 5. Cmo se modifican los valores de Km para los distintos tipos de inhibidores? Los inhibidores enzimticos son molculas con capacidad para enlazarse a una enzima y disminuir su actividad. Los bioqumicos emplean inhibidores para estudiar las propiedades de las enzimas y muchas compaas bioqumicas producen inhibidores enzimticos que acta como frmacos, antibiticos o plaguicidas. Los inhibidores competitivos compiten con el sustrato por el acceso al sitio activo de una enzima,

mientas que en los inhibidores no competitivos, el sustrato e inhibidor no compiten por un sitio de enlace disponible, por lo general el inhibidor acta en un sitio diferente del sitio activo de la enzima. El inhibidor no competitivo reduce la Vmx sin afectar la KM, en tanto que el inhibidor competitivo aumenta la KM sin afectar la Vmx.