Fosfolipasas A2: grandes familias y mecanismos de accin Artculo de revisin

FOSFOLIPASAS A2: GRANDES FAMILIAS Y MECANISMOS DE ACCIN

Grgory Alfonso Garca MD, MSc, (c)* , Ananas Garca Cardona, DDC**

Resumen
Las fosfolipasas A2 (PLA2) constituyen un diverso grupo de enzimas con respecto a secuencia, funcin, localizacin y requerimiento por cationes divalentes. Ellas juegan rol importante en una variedad de procesos celulares, incluyendo la digestin y metabolismo de fosfolpidos, as como la produccin de precursores para reacciones inflamatorias. Estas enzimas catalizan la hidrlisis de sn-2 posicin de glicerofosfolpidos membranales para liberar cido araquidnico (AA), un precursor de eicosanoides. La misma reaccin tambin produce lisofosfolpidos, los cuales representan otra clase de mediadores lipdicos. Adems, varios receptores de superficie han sido identificados, como PLA2R1. Revisaremos el conocimiento actual de las propiedades y funciones de este ubicuo y diverso grupo familiar y la evidencia reciente de la actividad fundamental que PLA2 juega en el campo patobiolgico. Palabras clave: bioqumico, enzimologa, gentica, fosfolipasa AZ (PLA2). Abreviaturas: PLA2, fosfolipasas A2.

A2 PHOSPHOLIPASES: EXTENDED FAMILIES AND MECHANISMS OF ACTION

Abstract
A2 phospholipases (PLA2) constitute a diverse group of enzymes with respect to sequence, function, location and divalent cations. They play an important role in various cell processes, including phospholipid metabolism and digestion, as well as, production of precursors for inflammatory reactions. These enzymes catalyze the hydrolysis of the sn-2 position of cell membrane phosphoglycerides to release arachidonic acid (AA) a precursor of eicosanoids. The same reaction also produces lysophospholipids, which represent another class of lipidic mediators. Additionally, several cell surface receptors have been identified as PLA2R1. We will review the present knowledge on the properties and functions of these ubiquitous and diverse family group and the recent evidence of the fundamental activity which PLA2 plays in the pathobiological field. Key words: biochemical, enzymology, genetics, A2 phospholipase (PLA2).

Fecha recibido: abril 21 de 2009 - Fecha aceptado: agosto 10 de 2009 * Experto Gentica, Bioqumica y Biologa Celular y Molecular Humana. Docente experto Farmacologa y Toxicologa Humana. Facultad de Medicina. Unidad de Educacin. Unisnitas. Grupo de Medicina Translacional. Instituto de Investigacin. Unisnitas. Laboratorio de Inmunologa Clnica. Facultad

de Ciencias. Pontificia Universidad Javeriana. Bogot DC, Colombia. ** Docente Coordinador. Unidad de morfologa. Facultad de Medicina y Facultad de Terapia, Rehabilitacin y Desarrollo Humano. Instituto de Ciencias Bsicas, Quinta Mutis. Universidad Colegio Mayor de Nuestra Seora del Rosario. Bogot DC, Colombia.

Repertorio de Medicina Repert.med.cir. y Ciruga.2009;18(4):199-209 Vol 18 N 4 2009

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Introduccin
Descritas desde 1967, las fosfolipasas A2 (PLA2) son enzimas del tipo hidrolasa-lipasas, las cuales inducen cambios en la composicin membranal, activan la cascada inflamatoria y generan vas de sealamiento celular (transduccin de seales). Son responsables de la movilizacin de cidos grasos poli-insaturados liberados desde la posicin sn2 de los glicerofosfolpidos, lo cual incluye el cido araquidnico (AA). Estn clasificadas en las PLA2 citoslica de alto peso molecular y las PLA2 secretorias de bajo peso molecular. Pertenecen a la familia de las fosfolipasas, superfamilia de las lipasas y megafamilia de las hidrolasas. Previamente los autores y otros colaboradores hicieron una revisin sobre el tema, por lo cual se decidi profundizar sobre ciertas reas en esta publicacin.1 En la nomenclatura propuesta por IUBMB (International Union of Biochemistry and Molecular biology), las PLA2 se cobijan bajo la clasificacin EC 3.1.1.4.2

pos, es decir, del I al XVI, con diversos subgrupos nominados con letras maysculas, comprometiendo la totalidad de enzimas conocidas en acariotas (virus), procariotas (bacterias) y eucariotas (hongos, reptiles y mamferos). En la Tabla 1 se expone la clasificacin grupal de Dennis.3,4 La asignacin a los distintos grupos depende de los mecanismos catalticos de las enzimas, lo que ha determinado que la actividad hidrolasa puede ser por la presencia de cualquiera de los tres siguientes mecanismos consistentes en diadas aminoacdicas presentes en los centros catalticos: histidina/aspartato, serina/aspartato y serina/histidina/aspartato. Los quince grupos a su vez se pueden clasificar grosso modo en cinco tipos principales enzimticos (Figura 1): 1) enzimas secretorias (sPLA2), 2) enzimas citoslicas (cPLA2), 3) enzimas calcio-independientes (iPLA2) que pueden ser citoslicas, secretorias o mixtas, 4) enzimas degradantes de los mediadores autocoides conocidos como factores activadores plaquetarios (PLA2-PAF-AH), y 5) enzima lisosomal calcio-independiente (L-PLA2), que tambin posee actividad 1-O-acil-ceramida-sintasa y transacilasa. En nuestra especie se conocen cinco genes y un pseudogen ms, que estn relacionados con las PLA2, muchas de las cuales muestran similitud con las iPLA2 y pertenecen a la familia de las patatinas, por cuanto se

Metodologa
Para efectuar esta revisin se consult la literatura cientfica mdica humana, haciendo una bsqueda electrnica en las bases PUBMEDLINE (National Library of Medicine database) y EMBASE (The bibliographic database for biomedical and pharmacological information). Se utiliz la matriz de bsqueda human phospholipase A2, para los ltimos cinco aos. Se seleccionaron los artculos pertinenes en la medida en que mostraban importancia biomdica en el tema principal y los subtemas analizados, y adems que sus autores fueran reconocidos investigadores de frontera en el campo propuesto para esta revisin.

Esenciales en la diversidad de las PLA2

Las PLA2 se han podido clasificar por su funcionalidad y localizacin celular y tisular en dos grandes tipos: citoslicas de alto peso molecular y secretorias de bajo peso molecular. Por su dependencia de calcio en variedades: calcio-dependientes y calcio-independientes. Se utilizan nmeros romanos para los diecisis (16) gru-

Figura 1. Clasificacin de las PLA2.

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Tabla 1. Clasificacin de las PLA2

Grupo IA IB IIA IIB IIC IID IIE IIF III IVA IVB IVC IVD IVE IVF V VIA-1 VIA-2 VIB VIC VID VIE VIF VIIA VIIB VIIIA VIIIB IX X XIA XIB XII XIII XIV XV XVI Organismos biolgicos que los poseen y sitios anatmicos donde suelen expresarse Cobras y crtalos Pncreas humano y porcino Sinovia humana y veneno de vboras caza ratones Vbora de Gabn Testculos de murinos Pncreas y bazo humanos y murinos Cerebro, corazn y tero humanos y murinos Testculos y embriones humanos y murinos Humanos, murinos, lagartos y abejas Humano y murino Humano Humano Humano y murino Murino Murino Corazn, pulmones y macrfagos humanos y murinos Humano y murino Humano y murino Humano y murino Humano y murino (Neuropathy Target Esterase) Humano Humano Humano Humano, murino, porcino, bovino Humano, bovino Humano Humano Veneno de vbora (conodipina M) Leucocitos, timo y bazo humanos Races vegetales tuberculares Races vegetales tuberculares Humano y murino Parvovirus Hongos y bacterias simbiticas Humano, murino y bovino Tejido adiposo Otros nombres Variedad Secretoria Secretoria Secretoria Secretoria Secretoria Secretoria Secretoria Secretoria Secretoria Citoslica Citoslica Citoslica Citoslica Citoslica Citoslica Secretoria Citoslica Citoslica Membranal-microsomal Microsomal Membranal

cPLA2 a cPLA2 b cPLA2 g cPLA2 d cPLA2e cPLA2z iPLA2 iPLA2 b iPLA2 g iPLA2d, NTE iPLA2 psilon, adiponutrina iPLA2 z, TTS-2.2 iPLA2h, GS2 Lp-PLA2 PAF-AHII PAF-AHIb (subunidad a1) PAF-AHIb (subunidad a2)

Secretoria Secretoria Secretoria Secretoria Citoslica Citoslica Citoslica Secretoria Secretoria Secretoria Secretoria Secretoria Secretoria Secretoria Lisosomal Asociada con membrana, intracelular calcio-dependiente

PLA2-I PLA2-II

ACS, LPLA2, LLPL AdPLA, HREV107, HRASLS3, NY-REN-65

encontraron inicialmente en estos tubrculos. Otras son la otoconin (protena de la matriz de la otoconias del odo interno) y la PLA2L-HERV (corte y empalme alternativo de un retrovirus endgeno humano).5 En esta revisin discutiremos en su orden la informacin concerniente a la bioqumica estructual y gentica de las variedades cPLA2, las iPLA2, las sPLA2 y las PLA2-PAF-AH; el

papel de las PLA2 en sealamiento celular, en forma directa como citoquina, sus receptores e indirecta como ruta biosinttica de ligandos de sealamiento (lpidos autocoides); y los roles especializados de las sPLA2 y la iPLA2. No tocaremos en esta revisin la temtica de la L-PLA2, dado que la informacin estructural y funcional no est an aclarada del todo.
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PLA2 citoslicas (cPLA2)

Muchas de estas enzimas tambin muestran actividad lisofosfolipasa y transacilasa. Excepto la PLA2G4D que posee una mayor especificidad para clivar cido linoleico, todas las dems de manera preponderante clivan cido araquidnico. Estas enzimas son de peso molecular variable entre 61 y 114 kilodalton (kDa) y su centro cataltico utiliza una residuo de serina. La fosforilacin de la serina del centro cataltico aumenta la actividad enzimtica. Ellas pertenecen al grupo IV y se distinguen seis subgrupos: IVA, IVB, IVC, IVD, IVE y IVF. Todas excepto la tipo IVC poseen un dominio C2, que les permite en presencia del calcio ser reclutadas a las membranas celulares, ya que en esta forma reconocen fosfolpidos. La tipo IVC es acilada por medio de farnesilacin a la plasmalema, lo cual es consecuente con lo mencionado antes. La presencia del dominio C2 no slo les permite ser reclutadas en presencia de calcio, sino que al unir a fosfolpidos membranales les confiere activacin. cPLA2a, es decir IVA es regulada por fosforilacin, evidencindose tres sitios claves: a) un residuo de serina (ser505) fosforilado por diversas serina/treonina-kinasas del tipo MAPKs (mitogen-activated protein kinase kinase); b) un residuo serina (ser515) fosforilada por CaMKII (calmodulina kinasa II); y c) un residuo serina (ser727) fosforilado por MNK1 (mitogen-activated protein kinase-interacting serine/threonine kinase 1).6,7 cPLA2a es regulada en forma por la interaccin directa con la protena citoesqueltica vimentina,8 miembros de la familia proteica S1009 y miembros de la familia proteica de las annexinas.10 cPLA2 es tambin en forma positiva regulada por la protena PLIP (PLA2interacting protein), la cual es una protena derivada del mismo gen codificante de TIP60/HTATIP (HIV-1 TATinteracting protein, 60-KD). TIP60 es una enzima del tipo histona-desacetilasa, es decir, que est involucrada en la regulacin de la expresin gnica, y una variedad por corte y empalme alternativo de su ARNm (splicing) produce una protena con actividad reguladora de la actividad de la cPLA2a (Figura 2).11 An no hay claridad sobre el papel de los mecanismos de transduccin en seales conocidos como sistemas de protenas G trimricos, si la activacin que se ejercera es directa o indirecta. Los sistemas de protenas

Figura 2. Regulacin de la cPLA2.

G que poseen las subunidades a Go o Gi (Gi1, Gi2 y Gi3) se acoplan al sealamiento dependiente de fosfolipasas PLC, PLD y PLA2, mientras que las subunidades G12 o G13 se ligan a la activacin de las protenas G monomricas de la familia Rho que en forma consuetudinaria activan a las PLD. Este sistema activatorio posee un bucle en el cual las protenas G monomricas Rho activan de manera directa a las MAPK-ERK, las cuales pueden luego fosforilar y activar a las cPLA2.12

PLA2 calcio-independientes
Variedades citoslicas calcio-independientes Las variedades citoslicas calcio-independientes pertenecen al grupo VI y se conocen dos miembros y por ende dos genes: la variedad PLA2G6A con cinco tipos distintos por corte y empalme alternativo (splicing) del ARNm y la variedad PLA2G6B con dos tipos distintos de GPVIB por el mismo mecanismo. Lo que caracteriza desde el punto de vista bioqumico a este grupo es la presencia de un tipo muy particular de repeticiones proteicas que se describieron al principio en los miembros de la familia de las anquirinas. Estas secuencias anquirnicas estn repetidas en un nmero variable de siete a ocho veces. Las repeticiones anquirnicas son

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responsables por la formacin de oligmeros o de la asociacin con otras protenas que tambin contengan este tipo de repeticiones. Con respecto a las variantes por corte y empalme alternativo, hay evidencia de que son inhibidores competitivos enzimticos por oligomerizacin. El ATP estabiliza la estructura de la PLA2G6A.13,14 Otras variedades calcio-independientes Las PLA2-VIA es citoslica y las PLA2-VIB y VIC son membranales. Las PLA2-VID, PLA2-VIE y PLA2VIF se han identificado como variedades enzimticas involucradas en el metabolismo lipoproteico, dada su actividad como acil-glicerol-transacilasas y tri-acil-glicerollipasas. PLA2G6C posee tambin actividad lisofosfolipasa. Como si fuera poco, es probable que la PLA26D tambin denominada como adiponutrina y la PLA2G6E denominada como desnutrina, posean actividad hormonal. De ellas, la PLA2G6C muestra adems una actividad esterasa detoxificante en el sistema nervioso.15 PLA2 secretorias Estas PLA2 se encuentran en insectos, moluscos, reptiles, mamferos, parvovirus, hongos y bacterias simbiticas, y mamferos. Las variedades secretorias (sPLA2) son protenas de bajo peso molecular (1418kDa) y estructuralmente contienen de cinco a ocho puentes disulfuro. Su actividad enzimtica depende de una diada histidina-aspartato en su centro cataltico y requieren de calcio en concentraciones micromolares.16 Las sPLA2 corresponden a los grupos IB, IIA, IIC, IID, IIE, IIF, III, V, X y XII (XIIA y XIIB). Las PLA2 de los grupos sPLA2IIA y sPLA2V poseen una regin carboxi-terminal con mino-cidos bsicos que les permite interactuar con glicosaminoglicanos (GAG) del tipo heparn-sulfato y heparina, presentes en proteinglicanos (PG), en especial PG membranales y en particular los Glypicanes (GPC), de los cuales se conocen seis en nuestra especie: GPC1, GPC2 (tambin denominado cerebroglycan), GPC3, GPC4 (tambin denominado K-glypican), GPC5 y GPC6. La interaccin con GPC desencadenan cascadas de sealamiento intracelular desde la plasmalema. (Figura 3).17,18

Recambio del surfactante

Digestin gastrointestinal Actividad antimicrobial

Actividad anticoagulatoria

sPLA2

Cascada de segundos mensajeros: trasduccin de seales

Mitocondra: decisin vida o muerte celular

Figura 3. Roles y receptores biolgicos para las Spla2.

PLA2 PAF-AH (PLA2G7 y PLA2G8)

Estas enzimas tienen un ncleo cataltico con una triada serina-histidina-aspartato. Hidroliza cidos grasos de cadenas corta y mediana a partir de di-acil-gliceroles, tri-acil-gliceroles y fosfolpidos, pero en particular frente a la fosfatidilcolina. Tambin posee una actividad de hidrolasa tipo fosfolipasa A1(PLA1), aunque disminuye en forma proporcional al largo de los cidos grasos en la posicin sn2. Un elemento particular en esta temtica es la PLA2G7 secretoria inflamatoria mieloide, conocida clsicamente como la acetil-hidrolasa para los PAF, enzima que es producida por clulas inflamatorias de origen mieloide y que se caracteriza por estar en estrecha asociacin con lipoprotenas plasmticas y lesiones aterosclerticas muy vulnerables por ser lesiones de novo. La PLA2G7 degrada tanto los PAFs como cidos grasos de cadena corta oxidados, a partir de la posicin sn2 de los fosfolpidos. Hay evidencia consistente del rol de la PLA2G7B como protector del tipo barredor, de fosfolpidos oxidados y de la PLA2G7A como proinflamatorio al degradar fosfolpidos oxidados en el contexto de lipoprotenas LDL (low density lipoprotein).
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La PLA2G7 cerebral denominada PAF-AHIb o PLA2G8 est constituida por varias subunidades: 1) a(B1), por corte y empalme alternativo (splicing) se generan a1y a2, las cuales forman homo o heterodmeros. Los homodmeros a1/a1 y a2/a2, y el heterodmero a1/ a2, varan su actividad sobre distintos sustratos de acuerdo con el tipo de dimerizacin; 2) b(B2), regulatoria principal; y 3) g(B3), regulatoria accesoria. De estas subunidades, an hay discusin cuales son regulatorias y catalticas.19,20

tos finales poseen actividades biolgicas y se les llama isoprostanos.31 Los cidos grasos libres insaturados per se, pueden actuar por medio de receptores, como los del tipo serpentina asociados con sistemas de protenas G trimrico GPR (G protein-coupled receptor) como son GPR40 para cidos grasos de cadena media, GPR41 para cidos grasos de cadena corta, GPR43 para cidos grasos de cadena corta y GPR120 para cidos grasos de cadena larga.32 Tambin los receptores nucleares como los miembros de la familia PPAR (peroxisome proliferator-activated receptor).33 La Figura 4 esquematiza la gama biosinttica descrita. Estos autocoides poseen infinidad de funciones y el avance bioqumico ha permitido reconocer una plyade de biomolculas y actividades, con roles complejos en regulacin de los estados sueo-vigilia, respuesta inmune e inflamacin, fertilidad, reproduccin y nocicepcin.
Pla2 Fosfolpidos Lisofosfolpidos

Roles de las PLA2 en comunicacin celular

Es claro que la PLA2 posee dos mecanismos de accin: el directo hace correlacin con su actividad enzimtica y el indirecto lo hace con su novedosa actividad como un mediador de comunicacin celular (MCC).

Mecanismo directo
La PLA2 puede liberar cidos grasos insaturados (por lo regular el cido araquidnico y menor el cido linoleico) desde fosfolpidos de membrana plasmtica, para que ste sea tomado como sustrato para la biosntesis de autocoides. La afinidad por sustratos vara entre las distintas PLA2, es as que las sPLA2 poseen preferencia cataltica por tres fosfolpidos: fosfatidilglicerol, fosfatidilcolina y fosfatidilserina. Todas las membranas celulares y las de compartimentos subcelulares pueden ser blanco de las PLA2.21,22 Existen varias rutas para la biosntesis de lpidos autocoides eicosanoides, como la de las ciclo-oxigenasa (prostaglandinas, tromboxanos)21,22, la ciclo-oxigenasa acetilada por aspirina, que genera lpidos muy especiales denominados como protectinas y resolvinas23,24; la de las lipo-oxigenasas (leucotrienos)21,22,23,24,25; la biosinttica de los endocanabinoides (ej.: anandamida)26; la de biosntesis de los PAFs (factores activadores de plaquetas)27; la de los citocromos (ej.: HETEs-cidos hidroxi-eicosa-tetraenoicos- y EETs-cidos eicosatetraenoicos) 28,29; la de los endovaniloides (ej.: araquidonil-dopamina)30 y tambin por medio de mecanismos anenzimticos, es decir, en ausencia de enzimas se pueden ciclar los cidos grasos mediante la oxidacin dependiente de radicales libres, donde los produc-

cido araquidnico

Leucotrienos

HETEs y ETEs

Isoprostanos

PAFs

Endovaniloides

Endocanabinoides

Prostaglandinas y tromboxanos

Figura 4. Gama biosinttica y diversidad de los eicosanoides.

Mecanismo indirecto: PLA2 como un MCC del tipo citoquina

El trmino MCC se refiere a toda sustancia sintetizada por las clulas de un organismo o una organizacin

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multicelular con la finalidad de generar comunicacin entre sus diversos componentes y en ese orden de ideas favorecer las respuestas orquestadas frente a estmulos de ndole endgeno o exgeno, todo ello en veras de producir un proceso de homeostasis, situacin que incluye fenmenos como la morfognesis como la cicatrizacin y la regeneracin. El trmino MCC equivale al de primer mensajero o ligando. Los MCC son de naturaleza variada si nos referimos a sustancias qumicas o por decirlo en forma ms adecuada sustancias bioqumicas, pero no todas son de naturaleza orgnica, es decir, que posean carbono. Desde hace tiempo se conocen los receptores denominados tipo N expresados en las membranas de las clulas cerebrales en los mamferos y que median los efectos neurotxicos de ciertas PLA2, aunque no han sido del todo aislados y clonados. En los ltimos aos se ha estudiado a fondo el papel del llamado receptor tipo M, pues miembros de las sPLA2 tienen actividad funcional como MCC actuando a travs del receptor membranal especfico denominado PLA2R1 (phospholipase A2 receptor 1 ), que es una protena de 180 kD, transmembranal del tipo I, cuyo gen codificante se encuentra en el cromosoma 2 (locus 2q23-q24). El PLA2R1 es miembro de la familia de las lectinas, protenas que reconocen carbohidratos libres o en contextos glicolipdicos y/o glicoprotecos. El rastreo gentico lo hace pertenecer al subgrupo VI de lectinas, donde comparte familiaridad con miembros como la lectina DEC205 (en nomenclatura de antgenos hemato-inmunes, CD205) y MCR1 (macrophage mannose receptor 1), presente en clulas presentadoras de antgenos (APC) como las dendrticas. Existe variable afinidad por el PLA2R1 entre las distintas sPLA2, teniendo alta afinidad las sPLA2 IB, IIA, IIE, IIF, V y X. PLA2R1 tiene funciones accesorias, conclusiones tomadas a partir de que una versin soluble de este receptor se deriva a partir del clivamiento (corte proteoltico) desde la membrana, accin catalizada por metalo-proteinasas, y otras versiones se derivan a partir del corte y empalme alternativo del ARNm. Estas versiones solubles actan como inhibidores de las PLA2 mediante el mecanismo de seuelo (decoy), encontrando que la actividad cataltica es menguada. PLA2R1 tie-

ne una cascada de sealamiento intracelular donde se han dilucidado componentes como la p38MAPK (mitogen-activated protein kinase), e incluso, lejos de ser curioso y no coincidente, las cPLA2. Esto ltimo en especial cuando el ligando es PLA2G2A y PLA2G10. PLA2R1 tambin funciona como un receptor de aclaramiento (clearance) para las PLA2, en particular parece ser importante esto dada la expresin en macrfagos reticuloendoteliales. Una amplia variedad de clulas expresan este receptor, en particular las de linaje hamatoinmune y la gran mayora de la evidencia muestra un rol activatorio que culmina en proliferacin celular, migracin, liberacin hormonal, produccin de mediadores lipdicos y produccin citoqunica. Como lo mencionamos antes, proteinglicanos de superficie ricos en heparn-sulfato y heparina, tambin pueden funcionar como receptores. Reportes recientes muestran que los dmeros integrnicos V3 and 41 funcionan como receptores para sPLAIIA en lneas celulares monocticas.34

Otros receptores para sPLA2

Por ltimo, no se puede olvidar que las PLA2 extracelulares junto con la protoporfirina IX y las 3 endozepinas DBI (diazepam binding inhibitor), TTN (triakontatetraneuropeptide) y ODN (octadecaneuropeptide), son ligandos de los receptores perifricos para benzodiacepinas (PBR). stos se clasifican en dos grupos, perifricos PBR (peripheral-type benzodiazepine receptors) y los receptores centrales (CBR), estos ltimos corresponden a los del neurotransmisor inhibitorio GABA (cido g-amino butrico). Los PBR son tambin denominados como protena translocadora (TSPO) de 18 kDa. Los PBR son abundantes en el sistema cardiovascular, plaquetas, eritrocitos, linfocitos, clulas mononucleares fagocticas, endotelio, msculo estriado esqueltico, msculo liso, vascular y mastocitos. Los PBR tambin se ubican subcelularmente en la mitocondria, donde se acoplan a diversas protenas tales como IBP (isoquinoline carboxamide binding protein), las protenas VDAC (voltage-dependent anion channel) VDAC1 y VDAC2, y ANT ( adenine nucleotide transporter). El PBR mitocondrial regula tanto los procesos de apoptosis endgena mediada por este organelo, como la biosntesis esteroidea35 (Figura 3).
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Funciones especializadas de las sPLA2 y la iPLA2

Dejando de lado la actividad ya explicada de la cPLA2 como mecanismo base en la biosntesis de lpidos autocoides y el rol de la PLA2-PAF-AH como la enzima fuente en la catlisis sinttica de los autocoides PAF, slo nos quedan por discutir los roles especializados de la sPLA2 y la iPLA2, ya que estn involucradas gracias a su actividad cataltica en comunicacin celular puesto que liberan lpidos autocoides,21,31 e inmunidad innata, al funcionar como citotocinas frente a las membranas celulares de agentes patgenos o clulas neoplsicas, como algunas formas secretorias producidas por las clulas de Paneth del intestino que poseen actividad microbicida.36,37 Se ha encontrado que son antibacteriales las PLA2G2A, PLA2G5, PLA2G10 y PLA2G1238,39, antifngica la PLA2G5,40,41antivirales las PLA2G5 y PLA2G1042 y antirretroviral contra el HIV1, la PLA2G10.43 Esta actividad se atribuye en principio a su propiedad fosfolipasa y a su rol como citotoxina del tipo perforina. Se espera el hallazgo de otros mecanismos directos e indirectos. Fertilidad, por cuanto su deteccin ha sido determinada en el epitelio germinador seminfero, en los espermatozoides maduros y en la prstata (en especial en el lbulo posterior y glndulas parauretrales). La actividad de la PLA2G7 es detectable en el semen humano y esta enzima es un factor candidato para decapitacin espermtica, mientras que sus sustratos PAFs (factores activadores plaquetarios) son cualificados como candidatos para capacitacin espermtica. As mismo, el acrosoma espermtico posee diversas enzimas lisosomales y entre ellas una PLA2 no caracterizada an, la cual degrada el 1-palmitoil-2docosahexaenoil-sn-glicero-3-fosfocolina (PDPC), el cual es el principal fosfolpido del espermalema.44 Los autocoides eicosanoides denominados como endocanabinoides (ver adelante) son claves en el proceso de implantacin placentaria.45 Continuando con similares temticas, las PLA2G2A y PLA2G4A juegan un rol en la consecusin del parto.46 Permeabilidad cutnea, dado que las sPLA2 degradan lpidos polares en los estratos ms exteriores epidrmicos, generando cidos grasos, los cuales en conjuncin con la ceramida, son los mayores impermeabilizadores del estrato crneo y disyuntivo.47,48 Digestin gastrointestinal: la

PLA2G1B es un producto exocrino del jugo pancretico.49 Recambio del surfactante alveolar por parte de la PLA2G2A.50 Actividad anticoagulatoria, ya que PLA2G2A, PLA2G2D y PLA2G5 inhiben la actividad protrombinasa a travs de su unin con el factor Xa (factor X activado). Este fenmeno parece ser un retrocontrol negativo fisiolgico, si partimos del hecho de que normalmente muchos lpidos autocoides son procoagulatorios trombgenos. Un proceso similar es el que explica el rol patofisiolgico de las PLA2 presentes en venenos de vboras.51,52 Las iPLA2 calcio-independientes intervienen en el remodelamiento membranal, dado que participan en forma activa en el mantenimiento y reciclaje de fosfolipdicos, en particular las iPLA2 y PLA2G7B. Esta ltima incluso parece ser un mecanismo importante en el barrido de fosfolpidos oxidados en piel. 15, 53,54 Comunicacin y sealamiento celular , ya que est involucrada en la ruta de salvamento de calcio, la cual consiste en que cuando hay disminucin franca de las concentraciones de calcio a nivel intracelular, se activa el flujo plasmalmico a travs de canales y bombas de influjo, ruta denominada SOC (s tore-operated channels), y donde sobresale el papel de un complejo ternario de membrana constituido por las protenas Orai1, STIM1 y TRPC1.15,55,56,57,58 Apoptosis, debido a que una variante de la PLA2VIA es clivada por enzimas de muerte celular como las CASPASAS (aspartate-specific cysteine protease), tras lo cual son activadas y participan en el empacado de cuerpos apoptticos. Adems, ya en la superficie de los cuerpos apoptticos acta sobre los fosfolpidos y se liberan en forma secundaria mediadores lipdicos autocoides que promueven una respuesta inmune tolerante, mediante la biosntesis de PGE2 y lipoxinas.15,59 Una variedad enzimtica especfica de PLA2VIB se encuentra en los peroxisomas, y podra estar involucrada en diversos procesos del metabolismo de lpidos en rganos como el hgado.15,60 La PLA2G6C es una enzima axonal implicada en la detoxificacin de compuestos organofosforados.61 Las iPLA2 calcio-dependientes implicadas en particular en sealamiento intracelular son importantes en la regulacin del metabolismo lipdico, como sucede con la adiponutrina y la desnutrina15, 62,63 (Figura 5).

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Remodelamiento de fosfolpidos de membrana Apoptosis Funcin peroxisomal

6.

Ghosh M, Tucker DE, Burchett SA, Leslie CC. Properties of the Group IV phospholipase A2 family. Prog Lipid Res. 2006; 45(6): 487-10. Shimizu T, Ohto T, Kita Y. Cytosolic phospholipase A2: biochemical properties and physiological roles. IUBMB Life. 2006; 58(5-6): 328-33. Grewal S, Herbert SP, Ponnambalam S, Walker JH. Cytosolic phospholipase A2-alpha and cyclooxygenase-2 localize to intracellular membranes of EA.hy.926 endothelial cells that are distinct from the endoplasmic reticulum and the Golgi apparatus. FEBS J. 2005; 272(5): 1278-90. Bailleux A, Wendum D, Audubert F, Jouniaux AM, Koumanov K, Trugnan G et al. Cytosolic phospholipase A2-p11 interaction controls arachidonic acid release as a function of epithelial cell confluence. Biochem J. 2004; 378(Pt 2): 307-15.

7.

8.

Regulacin del metabolismo intermedio lipidico: adiponutrina y desnutrina Figura 5. Roles biolgico de la ipla2.

Ruta de salvamento del calcio

9.

10. Parente L, Solito E. Annexin 1: more than an anti-phospholipase protein. Inflamm Res. 2004; 53(4): 125-32. 11. Sheridan AM, Force T, Yoon HJ, OLeary E, Choukroun G, Taheri MR et al. PLIP, a novel splice variant of Tip60, interacts with group IV cytosolic phospholipase A(2), induces apoptosis, and potentiates prostaglandin production. Mol Cell Biol. 2001; 21(14): 4470-81. 12. Mariggi S, Bavec A, Natale E, Zizza P, Salmona M, Corda D et al. Galpha13 mediates activation of the cytosolic phospholipase A2alpha through fine regulation of ERK phosphorylation. Cell Signal. 2006; 18(12): 2200-08. 13. Mosavi LK, Cammett TJ, Desrosiers DC, Peng ZY. The ankyrin repeat as molecular architecture for protein recognition. Protein Sci. 2004; 13(6): 1435-48. 14. Li J, Mahajan A, Tsai MD. Ankyrin repeat: a unique motif mediating protein-protein interactions. Biochemistry. 2006; 45(51): 15168-78. 15. Akiba S, Sato T. Cellular function of calcium-independent phospholipase A2. Biol Pharm Bull. 2004; 27(8): 1174-78. 16. Murakami M, Kudo I. Secretory phospholipase A2. Biol Pharm Bull. 2004; 27(8): 1158-1164. 17. Fransson LA. Glypicans. Int J Biochem Cell Biol. 2003; 35(2): 125-29. 18. Fransson LA, Belting M, Cheng F, Jnsson M, Mani K, Sandgren S. Novel aspects of glypican glycobiology. Cell Mol Life Sci. 2004; 61(6): 1016-24. 19. Arai H. Platelet-activating factor acetylhydrolase. Prostaglandins Other Lipid Mediat. 2002; 68-69: 83-94. 20. Karasawa K, Harada A, Satoh N, Inoue K, Setaka M. Plasma platelet activating factor-acetylhydrolase (PAF-AH). Prog Lipid Res. 2003; 42(2): 93-14. 21. Cook JA. Eicosanoids. Crit Care Med. 2005; 33(12 Suppl): S488-91. 22. Khanapure SP, Garvey DS, Janero DR, Letts LG. Eicosanoids in inflammation: biosynthesis, pharmacology, and therapeutic frontiers. Curr Top Med Chem. 2007; 7(3): 311-40. 23. Chiang N, Serhan CN. Cell-cell interaction in the transcellular biosynthesis of novel omega-3-derived lipid mediators. Methods Mol Biol. 2006; 341: 227-50.

Conclusin
La temtica y la problemtica de las PLA2 ha avanzado de manera vertiginosa en las reas de las ciencias naturales y es necesaria una aproximacin a su biologa, bioqumica, gentica y patobiologa para conocer los diversos fenmenos fisiolgicos y patolgicos. Es un amplio campo en plena expansin y con esperanzadores mecanismos farmacolgicos y terapeticos.

Referencias
1. Garca GA, Gaitn AA, Garca Cardona A, Clavijo D, Meja R, Cobos Claudia et al. Aspectos biomdicos de las fosfolipasas A2 en la especie humana. Med UNAB. 2008; 11(1): 14-27. IUPAC, IUBMB, [BASE DE DATOS EN INTERNET]. LONDON: INTERNATIONAL UNION OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY; 1977, [FECHA DE ACCESO 20 DE ABRIL DEL 2009]. DISPONIBLE EN: http:// www.chem.qmul.ac.uk/iupac/jcbn/index.html#2. OMIM [base de datos en Internet]. Baltimore: Johns Hopkins University; 1966, [fecha de acceso 20 de abril del 2009]. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/dispomim. HUGO [base de datos en Internet]. Bethesda: National Library of Medicine and others (exp.: Celera Genomics and the Sanger Center); 1989, [fecha de acceso 20 de abril del 2009]. Disponible en: http:/ /www.hugo-international.org/index.html. Schaloske RH, Dennis EA. The phospholipase A2 superfamily and its group numbering system. Biochim Biophys Acta. 2006; 1761(11): 1246-59.

2.

3.

4.

5.

Repertorio de Medicina y Ciruga. Vol 18 N 4 2009

207

Fosfolipasas A2: grandes familias y mecanismos de accin

24. Serhan CN. Novel chemical mediators in the resolution of inflammation: resolvins and protectins. Anesthesiol Clin. 2006; 24(2): 341-64. 25. Kuhn H, ODonnell VB. Inflammation and immune regulation by 12/15-lipoxygenases. Prog Lipid Res. 2006; 45(4): 334-56. 26. Smita K, Sushil Kumar V, Premendran JS. Anandamide: an update. Fundam Clin Pharmacol 2007; 21(1): 1-8. 27. Stafforini DM, McIntyre TM, Zimmerman, GA Prescott SM. Platelet-activating factor, a pleiotrophic mediator of physiological and pathological processes. Crit Rev Clin Lab Sci. 2003; 40(6): 643-72. 28. Spector AA, Fang X, Snyder GD, Weintraub NL. Epoxyeicosatrienoic acids (EETs): metabolism and biochemical function. Prog Lipid Res. 2004; 43(1): 55-90. 29. Elbekai RH, El-Kadi AO. Cytochrome P450 enzymes: central players in cardiovascular health and disease. Pharmacol Ther. 2006; 112(2): 564-87. 30. Van Der Stelt M, Di Marzo V. Endovanilloids. Putative endogenous ligands of transient receptor potential vanilloid 1 channels. Eur J Biochem. 2004; 271(10): 1827-34. 31. Montuschi P, Barnes P, Roberts LJ 2nd. Insights into oxidative stress: the isoprostanes. Curr Med Chem. 2007; 14(6): 703-17. 32. Milligan G, Stoddart LA, Brown AJ. G protein-coupled receptors for free fatty acids. Cell Signal. 2006; 18(9): 1360-65. 33. Kostadinova R, Wahli W, Michalik L. PPARs in diseases: control mechanisms of inflammation. Curr Med Chem. 2005; 12(25): 2995-09. 34. Burke JE, Dennis EA. Phospholipase A2 biochemistry. Cardiovasc Drugs Ther. 2009; 23(1): 49-59. 35. Veenman L, Gavish M. The peripheral-type benzodiazepine receptor and the cardiovascular system. Implications for drug development. Pharmacol Ther. 2006; 110(3): 503-24. 36. Muller CA, Autenrieth IB, Peschel A. Innate defenses of the intestinal epithelial barrier. Cell Mol Life Sci. 2005; 62(12): 12971307. 37. Keshav S. Paneth cells: leukocyte-like mediators of innate immunity in the intestine. J Leukoc Biol. 2006; 80(3): 500-08. 38. Beers SA, Buckland AG, Koduri RS, Cho W, Gelb MH, Wilton DC. The antibacterial properties of secreted phospholipases A2: a major physiological role for the group IIA enzyme that depends on the very high pI of the enzyme to allow penetration of the bacterial cell wall. J Biol Chem. 2002; 277(3): 1788-93. 39. Nevalainen TJ, Graham GG, Scott KF. Antibacterial actions of secreted phospholipases A2. Biochim Biophys Acta. 2008; 1781(12): 1-9. 40. Diaz BL, Satake Y, Kikawada E, Balestrieri B, Arm JP. Group V secretory phospholipase A2 amplifies the induction of cyclooxygenase 2 and delayed prostaglandin D2 generation in mouse bone marrow culture-derived mast cells in a strain-dependent manner. Biochim Biophys Acta. 2006; 1761(12): 1489-97. 41. Satake Y, Diaz BL, Balestrieri B, Lam BK, Kanaoka Y, Grusby MJ et al. Role of group V phospholipase A2 in zymosan-induced eicosanoid

generation and vascular permeability revealed by targeted gene disruption. J Biol Chem. 2004; 279(16): 16488-94. 42. Mitsuishi M, Masuda S, Kudo I, Murakami M. Group V and X secretory phospholipase A2 prevents adenoviral infection in mammalian cells. Biochem J. 2006; 393(Pt1): 97-106. 43. Kim JO, Chakrabarti BK, Guha-Niyogi A, Louder MK, Mascola JR, Ganesh L, et al. Lysis of human immunodeficiency virus type 1 by a specific secreted human phospholipase A2. J Virol. 2007; 810028(3): 1444-50. 44. Zhu J, Massey JB, Mitchell-Leef D, Elsner CW, Kort HI, Roudebush WE. Platelet-activating factor acetylhydrolase activity affects sperm motility and serves as a decapacitation factor. Fertil Steril. 2006; 85(2): 391-94. 45. Wang H, Xie H, Dey SK. Endocannabinoid signaling directs periimplantation events. AAPS J. 2006(2); 8: E425-432. 46. Lappas M, Rice GE. Phospholipase A2 isozymes in pregnancy and parturition. Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids. 2004; 70(2): 87-100. 47. Burke JR. Targeting phospholipase A2 for the treatment of inflammatory skin diseases. Curr Opin Investig Drugs. 2001; 2(11): 1549-1552. 48. Maury E, Juli S, Charvron M, Gall Y, Chap H. Lipids and skin inflammation: role of phospholipases A2. Pathol Biol (Paris). 2003; 51(5): 248-52. 49. Whitcomb DC, Lowe ME. Human pancreatic digestive enzymes. Dig Dis Sci 2007; 52(1): 1-17. 50. Touqui L, Wu YZ. Interaction of secreted phospholipase A2 and pulmonary surfactant and its pathophysiological relevance in acute respiratory distress syndrome. Acta Pharmacol Sin 2003; 24(12): 1292-96. 51. Mounier CM, Bon C, Kini RM. Anticoagulant venom and mammalian secreted phospholipases A(2): protein- versus phospholipid-dependent mechanism of action. Haemostasis. 2001; 31(3-6): 279-87. 52. Kini RM. Anticoagulant proteins from snake venoms: structure, function and mechanism. Biochem J. 2006; 397: 377-87. 53. Matsuzawa A, Hattori K, Aoki J, Arai H, Inoue K. Protection against oxidative stress-induced cell death by intracellular plateletactivating factor-acetylhydrolase II. J Biol Chem. 1997; 272(51): 32315-20. 54. Marques M, Pei Y, Southall MD, Johnston JM, Arai H, Aoki J, et al. Identification of platelet-activating factor acetylhydrolase II in human skin. J Invest Dermatol. 2002; 119: 913-9. 55. Smani T, Zakharov SI, Leno E, Csutora P, Trepakova ES, Bolotina VM. Ca2+-independent phospholipase A2 is a novel determinant of store-operated Ca2+ entry. J Biol Chem. 2003; 278(14): 1190915. 56. Smani T, Zakharov SI, Csutora P, Leno E, Trepakova ES, Bolotina VM. A novel mechanism for the store-operated calcium influx pathway. Nat Cell Biol. 2004; 6: 113-20. 57. Bolotina VM, Csutora P. CIF and other mysteries of the storeoperated Ca2+-entry pathway. Trends Biochem Sci. 2005; 30: 378-87.

208

Repertorio de Medicina y Ciruga. Vol 18 N 4 2009

Fosfolipasas A2: grandes familias y mecanismos de accin

58. Cheng KT, Liu X, Ong HL, Ambudkar IS. Functional requirement for Orai1 in store-operated TRPC1-STIM1 channels. J Biol Chem. 2008; 283(19): 12935-40. 59. Balsinde J, Balboa MA. Cellular regulation and proposed biological functions of group VIA calcium-independent phospholipase A2 in activated cells. Cell Signal. 2005; 17: 1052-62. 60. Yang J, Han X, Gross RW. Identification of hepatic peroxisomal phospholipase A(2) and characterization of arachidonic acidcontaining choline glycerophospholipids in hepatic peroxisomes. FEBS Lett. 2003; 546: 247-50.

61. Peterson B, Knotts T, Cummings BS. Involvement of Ca2+independent phospholipase A2 isoforms in oxidant-induced neural cell death. Neurotoxicology. 2007; 28: 150-60. 62. Duncan RE, Ahmadian M, Jaworski K, Sarkadi-Nagy E, Sul HS. Regulation of lipolysis in adipocytes. Annu Rev Nutr. 2007; 27: 79-101. 63. Jaworski K, Sarkadi-Nagy E, Duncan RE, Ahmadian M, Sul HS. Regulation of triglyceride metabolism. IV. Hormonal regulation of lipolysis in adipose tissue. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2007; 293: G1-4.

AVISO INSTRUMENTACION QUIRURGICA (MORADO)

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