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Arilmi GORRITI GUTIERREZ, Jorge ARROYO ACEVEDO, Luisa NEGRON BALLARTE, Bertha JURADO TEIXEIRA, Harold PURIZACA LLAJARUNA, Ilario SANTIAGO AQUISE, Evelyng TAYPE ESPINOZA, Fredy QUISPE JACOBO Antocianinas, fenoles totales y actividad antioxidante de las corontas del maz morado (Zea mays L.): Mtodo de extraccin Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas, vol. 8, nm. 6, noviembre, 2009, pp. 509-518, Universidad de Santiago de Chile Chile
Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=85617461006

Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas, ISSN (Versin impresa): 0717-7917 editor.blacpma@usach.cl Universidad de Santiago de Chile Chile

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 2009 The Authors 2009 Boletn Latinoamericano y del Caribe de Plantas Medicinales y Aromticas, 8 (6), 509 - 518 BLACPMA ISSN 0717 7917 Artculo Original | Original Article

Antocianinas, fenoles totales y actividad antioxidante de las corontas del maz morado (Zea mays L.): Mtodo de extraccin
[Anthocyanins, total phenolic compounds and antioxidant activity of purple corn (Zea mays L) cobs: Extraction method]
Arilmi GORRITI GUTIERREZ1, Jorge ARROYO ACEVEDO1, Luisa NEGRON BALLARTE1, Bertha JURADO TEIXEIRA1, Harold PURIZACA LLAJARUNA1, Ilario SANTIAGO AQUISE1, Evelyng TAYPE ESPINOZA1, Fredy QUISPE JACOBO2
1

Facultad de Farmacia y Bioqumica. Universidad Nacional Mayor de San Marco, Lima, Per. 2 Empresa AGRONEGOCIOS PERUAGRO S.R.L., Lima, Per

Abstract
Anthocyanins, total phenolic compounds and antioxidant activity of the extracts of purple corn cobs were evaluated in the investigation. The extractions were carried out in ethanolic solutions to 20% and pH 2 conditioned according to a factorial design with the factors temperature and times both in 4 levels. The results indicate anthocyanins between 11.567 and 37.127 mg/g cob, total phenolic compounds expressed as GAE between 23.426 and 76.962 mg GAE/g cob, and DPPH remaining between 17.06 and 68.80 %. The analysis of lineal regression indicates highly significant dependences between the antioxidant activity and total phenolic compounds (r2 = 0.9974). Keywords: Corn purple cob; Zea mays; Anthocyanins; Phenolic compounds; Antioxidant activity, DPPH.

Resumen
Las antocianinas, fenoles totales y actividad antioxidante de los extractos de corontas de maz morado fueron evaluados en la investigacin. Las extracciones se realizaron en soluciones etanlicas al 20 % y pH 2 acondicionadas segn un diseo factorial con los factores temperatura y tiempo ambos en 4 niveles. Los resultados indican antocianinas entre 11.567 y 37.127 mg/g de coronta, fenoles totales expresados como GAE entre 23.426 y 76.962 mg GAE/g de coronta, y DPPH remanente entre los 17.06 y 68.80 %. El anlisis de regresin lineal indica dependencias altamente significativas entre la actividad antioxidante y fenoles totales (r2= 0.9974). Palabras Clave: Maz morado; Zea mays; Antocianinas; Fenoles totales; Actividad antioxidante; DPPH.

Recibido | Received: January 30, 2009. Aceptado en Versin Corregida | Accepted in Corrected Version: June 15, 2009. Publicado en Lnea | Published Online: November 30, 2009 Declaracin de intereses | Declaration of interests: Authors have no competing interests. Financiacin | Funding: This work was financed by Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa de Per CONCYTEC, Proyecto No. 317-2007-CONCYTEC. This article must be cited as: Arilmi Gorriti Gutierrez, Jorge Arroyo Acevedo, Luisa Negron Ballarte, Bertha Jurado Teixeira, Harold Purizaca Llajaruna, Ilario Santiago Aquise, Evelyng Taype Espinoza, Fredy Quispe Jacobo. 2009. Antocianinas, fenoles totales y actividad antioxidante de las corontas del maz morado (Zea mays L.): Mtodo de extraccin. Bol Latinoam Caribe Plant Med Aromat 8(6):509 518. {EPub November 30, 2009}.

*Contactos | Contacts: Email arilmigorritig@gmail.com, agronegocios.peruagro@gmail.com.

BLACPMA es una publicacin de la Cooperacin Latinoamericana y Caribea de Plantas Medicinales y Aromticas This is an open access article distributed under the terms of a Creative Commons Attribution-Non-Commercial-No Derivative Works 3.0 Unported Licence. (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/ ) which permits to copy, distribute and transmit the work, provided the original work is properly cited. You may not use this work for commercial purposes. You may not alter, transform, or build upon this work. Any of these conditions can be waived if you get permission from the copyright holder. Nothing in this license impairs or restricts the author's moral rights. Este es un articulo de Acceso Libre bajo los trminos de una licencia Atribucin Creativa Comn-No Comercial-No trabajos derivados 3.0 Internacional (http://creativecommons.org/licenses/by-ncnd/3.0/deed.es) Usted es libre de copiar, distribuir y comunicar pblicamente la obra bajo las condiciones siguientes: Reconocimiento. Debe reconocer los crditos de la obra de la manera especificada por el autor o el licenciador (pero no de una manera que sugiera que tiene su apoyo o apoyan el uso que hace de su obra). No comercial. No puede utilizar esta obra para fines comerciales. Sin obras derivadas. No se puede alterar, transformar o generar una obra derivada a partir de esta obra. Al reutilizar o distribuir la obra, tiene que dejar bien claro los trminos de la licencia de esta obra. Alguna de estas condiciones puede no aplicarse si se obtiene el permiso del titular de los derechos de autor. Nada en esta licencia menoscaba o restringe los derechos morales del autor.

Gorriti Gutierrez et al.

Fenoles totales y actividad antioxidante de las corontas de Zea mays

INTRODUCCIN El maz morado es una variedad pigmentada de Zea mays L., cultivado en Amrica Latina, principalmente en Per y Bolivia, donde se utiliza en la elaboracin de bebidas Chicha morada, mazamorras y otros alimentos (Escribano-Bailn et al., 2004); el maz morado es uno de los cereales donde la composicin de antocianinas ha sido definida por estudios de espectrometra de masas (LCDAS-MS), 1H y 13C RMN bidimensional homo y heteronuclear, HSCCC y HPLC-MS (Escribano-Bailn et al., 2004), el estudio de componentes desarrollado por Pascual-Teresa et al. (2002) y Schwartz et al. (2003) de un extracto comercial de corontas de maz morado revela la presencia de un dmero y derivados mono y di-glicosidados de cianidina, pelargonidina y peonidina, Tabla 1. Las caractersticas estructurales de las antocianinas y los colores atractivos que presentan, su relativa estabilidad en medio acuoso segn el pH con la presencia de estructuras tales como el catin flavilium, una base quinoidal, una pseudo base carbinol y

una chalcona (Mazza & Miniati, 1993; Giusti & Wrosltad, 2001; Cabrita et al., 2004), determinan una mayor estabilidad frente a cambios de pH, temperatura y exposicin a la luz, debido a procesos de copigmentacin y asociacin intermolecular e intramolecular que se desarrollan en el medio (EscribanoBailn et al., 2004; Salas et al., 2004), convierten a estos compuestos en fuentes potenciales de colorantes naturales (Escribano-Bailn et al., 2004; CevallosCasals y Cisneros-Zevallos, 2004; Giusti & Wrolstad, 2003), y sustancias activas de alimentos funcionales, nutracuticos y medicamentos (Korhonen, 2002). Los dobles enlaces deslocalizados en estos polifenoles y la presencia de otros compuestos fenlicos en las corontas de maz morado determinan una serie de propiedades que fueron demostradas en estos compuestos (Duhard et al., 1997). El objetivo principal de la presente investigacin fue la identificacin de las condiciones de extraccin de los compuestos activos de las corontas del maz morado a travs de la determinacin de antocianinas, fenoles totales y actividad antioxidante.

Tabla 1 - Componentes de un extracto comercial de antocianinas de corontas de maz morado Pico 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Compuesto Dmero
a

Rf 14,0 28,8 34,8 37,2 39,8 42,3 43,2 47,7 48,9 49,5

[M]+ 899 449 433 463 535 519 549 563 547 577

Fragmentos [M+H]+ 737; 575; 423 287 271 301 449; 287 433; 271 463; 301 449; 287 433; 271 463; 301

AR (%) 1,8 54,3 6,1 14,7 11,6 3 5,5 2,6 0,2 0,1

Cianidina-3-glucsido Pelargonidina-3-glucsido Peonidina-3-glucsido Cianidina-3-(6-malonilglucsido) Pelargonidina-3-(6-malonilglucsido) Peonidina-3-(6-malonilglucsido) Cianidina-3-(6-etilmalonilglucsido) Pelargonidina-3-(6-etilmalonilglucsido) Peonidina-3-(6-etilmalonilglucsido)

a: Dmero formado por la condensacin directa de un flavan-3-ol y cianidian-3,5-diglucsido, AR: Abundancia relativa. Resultados encontrados por Pascual-Teresa et al. (2002).

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Fenoles totales y actividad antioxidante de las corontas de Zea mays

MATERIALES Y MTODOS Materiales y reactivos Las corontas de maz morado del cultivar testigo Joya (TJ) utilizados en la investigacin se obtuvieron de mazorcas recolectadas en un campo experimental del distrito de la Joya del Departamento de Arequipa, Per, ubicado aproximadamente en latitud sur 162527 y longitud oeste 714843 sobre los 1644 metros sobre el nivel del mar, entre los meses de febrero y abril del 2008. Todos los reactivos y solventes utilizados fueron de grado analtico Sigma Aldrich Chemical Co. y Merck. Mtodos Preparacin del extracto y determinacin de antocianinas segn el mtodo de pH diferencial Alrededor de 2,5 g de muestra (coronta molida y tamizada de maz morado) fueron extrados con 200 mL de solucin etanlica al 20 % y pH 2, bajo determinadas condiciones de tiempos de extraccin (30, 60, 120 y 240 min.) y temperaturas de extraccin (25, 60, 75 y 90 C). Los extractos obtenidos fueron filtrados a travs de papel filtro (Whatman No.1) con la ayuda de una bomba de vaco (COPELAMETIC, USA), y una alcuota del extracto se diluyen convenientemente en una fiola de 25 mL con las soluciones buffer de cloruro de potasio (pH 1) y acetato de sodio (pH 4.5). En las soluciones preparadas se determin el contenido de antocianinas segn el mtodo de pH diferencial, de acuerdo a Giusti & Wrosltad (2001) utilizando un espectrofotmetro UV-Vis (PHARO 300, Merck) y su contenido se expres como cianidina-3-glucsido de acuerdo a la siguiente expresin:
Antocianinas (mg/L)= A MW FD 1000/( l) (1)

Determinacin de fenoles totales La cantidad de fenoles totales se determin segn el mtodo de Folin-Ciocalteu usando cido glico como estndar, para esto se prepararon soluciones de 40, 80, 120, 160 y 200 ppm con las que se construy la curva de calibracin, dando un r2= 0,9994. El procedimiento para la evaluacin de fenoles totales fue el siguiente, una alcuota de la muestra (0,7 mL) se mezcl con 7 mL del reactivo de Folin-Ciocalteu, (10 %) dejndose en reposo por 3 min, seguidamente se mezclaron con 7 mL de carbonato de sodio (7,5 %) y la solucin resultante se dej en reposo por 2 horas a temperatura ambiente y en oscuridad, las absorbancias de las muestras fueron ledas a 760 nm en un espectrofotmetro UV-Vis. Todas las muestras fueron analizadas por triplicado, y los fenoles totales fueron expresados como equivalentes en miligramos de cido glico (GAE) por g de muestra (Fiskaa et al., 2007; Hlya, 2007; Zheng et al., 2007). Determinacin de la actividad antioxidante segn DPPH El efecto antioxidante de las muestras sobre el radical estable 2,2-difenil-1-picrilhidracilo (DPPH) se evalu de la siguiente manera, 0.1 mL de la muestra se procede a mezclar con 3.9 mL de una solucin 0,25 mM del radical DPPH, se homogeniza y dejan en reposo por 90 minutos en la oscuridad a 25 C, transcurrido el tiempo se procede a medir la absorbancia a 517 nm en el espectrofotmetro UVVis. El porcentaje remanente de DPPH en solucin fue calculado segn la ecuacin:
DPPH remanente (%) = (Ao Af)/ Ao x 100 (2)

Donde A (cambio en la absorbancia) = (A510 A700) a pH 1,0 (A510 A700) a pH 4.5; MW (del ingls molecular weight, masa molecular) = 449.2 g/mol para cianidina-3-glucsido; FD = factor de dilucin; l = longitud de paso de celda en cm; = 26900 (coeficiente de extincin molar) para cianidina-3-glucsido; 1000 = factor de conversin de gramos (g) a miligramos (mg); todos los anlisis fueron realizados por triplicado (n = 3), (Yang et al., 2007a; Wrolstad et al., 2003).

Donde: Ao, Af, representan respectivamente las absorbancias inicial del DPPH y de la muestra con DPPH despus de 90 min. Todos los anlisis fueron realizados por triplicado (n= 3), (Prez et al., 2003; Llorach et al., 2008; Iqbal et al., 2007).

Anlisis estadstico Todos los resultados fueron analizados en el paquete estadstico SAS V7 (SAS Institute Inc.), el anlisis factorial implementado a nivel de laboratorio para la preparacin de los extractos contemplo los factores: temperatura de extraccin (25, 60, 75 y 90 C; 4 niveles) y tiempo de extraccin (30, 60, 120 y 240 min; 4 niveles) bajo un pH de extraccin de 2 y una solucin etanlica al 20%. Los resultados fueron

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sometidos a un anlisis de varianza y prueba de rangos mltiples de Duncan (p<0,05) empleando el procedimiento GLM en un diseo completo al azar con arreglo factorial en el programa SAS, la hiptesis planteada en los experimentos fue que todos los tratamientos a la muestra (temperatura de extraccin y tiempo de extraccin) tienen el mismo efecto sobre la concentracin de antocianinas, fenoles totales y actividad antioxidante (Salinas y Daza, 1996; Chipana, 1997). RESULTADOS Y DISCUSIN Antocianinas La extraccin de antocianinas de las corontas de maz morado en solucin etanlica al 20% y pH 2, segn el diseo factorial que considero los factores temperatura de extraccin con los niveles 25, 60, 75 y 90 C, y tiempo de extraccin con los niveles 30, 60, 120 y 240 min, indica que existen diferencias altamente significativas con p < 0,01 para los diferentes tratamientos realizados a la muestra segn

el anlisis de varianza, y prueba de rangos mltiples de Duncan con p < 0,05, Tabla 2. Los valores encontrados para las antocianinas extradas de las corontas de maz morado, segn las diferentes condiciones de extraccin y la expresin (1), indican valores entre 11,567 mg/g coronta para el tratamiento 1 (Temperatura de 25 C y tiempo 30 minutos) y 37,127 mg/g coronta para el tratamiento 12 (temperatura de 75 C y tiempo de 240 minutos). De acuerdo al anlisis de significancia de Duncan con p < 0,05 se observa que las mejores condiciones de extraccin de antocianinas de las corontas de maz morado se realizan a la temperatura de 75 C y en tiempos de 120 y 240 min, Tabla 2 y Fig. 1, las condiciones extraccin con bajos contenidos de antocianinas corresponden a la temperatura de 25 C y el tiempo de 30 minutos. Las condiciones de extraccin en solucin etanlica al 20% y pH 2 se encuentran consideradas en la patente No. US 7, 192,456 B2 (Method of preparing a purified purple corn colour agent) que recomienda soluciones hidroalcohlicas al 20 40% y pHs cidos, (Takahito et al., 2007).

Tabla 2 - Antocianinas, fenoles totales y DPPH remanente en los diferentes tratamientos

Temperatura T 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 (C) 25 25 25 25 60 60 60 60 75 75 75 75 90 90 90 90 Tiempo (minutos) 30 60 120 240 30 60 120 240 30 60 120 240 30 60 120 240 Antocianinas (mg/g muestra) 11,567 1,272 e 15,322 0,564 e,d 15,721 0,717 e,d 22,000 0,840 c,d 21,130 2,039 c,d 29,437 3,330 a,b,c 34,629 2,290 a,b 34,734 3,793 a,b 25,939 1,543 b,c 32,649 0,986 a,b 35,233 0,733 a 37,127 10,226 a 26,177 3,493 b,c 32,841 4,605 a,b 33,286 2,705 a,b 34,010 10,421 a,b Fenoles totales (GAE mg/g muestra) 23,426 0,233 m 29,081 0,178 k 27,337 0,102 l 29,995 0,128 j 70,037 0,058 i 70,748 0,155 h 71,561 0,077 g 72,442 0,051 f 73,796 0,058 e 73,830 0,155 e 74,761 0,106 d 75,337 0,134 c 75,202 0,178 d 75,658 0,205 b 76,962 0,254 a 76,945 0,178 a DPPH remanente (%) 68,80 0,087 a 65,95 0,121 b 65,90 0,158 b 65,39 0,139 c 17,07 0,451 k 18,28 0,138 i,j 19,47 0,190 g 20,11 0,359 f 27,11 0,190 d 21,71 0,139 e 20,06 0,263 f 20,21 0,182 f 20,03 0,124 f 18,98 0,155 h 18,63 0,268 i,h 18,11 0,155 j

T: tratamiento, solucin de extraccin: 20% etanol, pH de extraccin: 2, valores promedio de 3 repeticiones desviacin estndar. Las medias seguidas por las mismas letras dentro de cada columna no son significativas en p < 0,05.

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Figura 1 - Contenido de antocianinas segn temperatura y tiempo de extraccin en los diferentes tratamientos.
40 A n to c ia n in a s (m g /g m u e s tr a )
25 C 60 C 75 C 90C

Figura 2 - Contenido de antocianinas segn factores individuales de temperatura y tiempo de extraccin

40

30

Antocianina (mg/g muestra)

32.737 a 29.983 a 30

31.579 a

20

20

16.279 b 2 (a)

10

10

0 30 60 120 240

0 0 30 60 90

Tiempo de extraccin (min)

Tem peratura de extraccin (C)

Yang et al. (2007a), en un trabajo relacionado con la optimizacin de extraccin de antocianinas de corontas de maz morado de un cultivar de la China en soluciones etanolicas y metanolicas en medio cido acondicionados con cido actico y ctrico, encontraron valores cercanos a 6 mg/g muestra (5,90 mg de antocianina/g muestra) segn diseo factorial, ese mismo ao Yang et al. (2007b) en otra investigacin relacionada con la cintica de degradacin trmica de antocianinas del maz morado en medio acuoso encontraron el valor de 0,680 mg de antocianina/g muestra, en ambos casos los valores fueron inferiores a los hallados en la investigacin. Escribano-Bailn et al. (2004) en una revisin de antocianinas en cereales mencionaron contenidos de 1642 mg/100g en base hmeda para el maz morado y 1779 mg/100g en base seca, cercanos a los encontrados en la investigacin. La investigacin desarrollada por Pedreschi y Cisneros-Zevallos (2007) sobre antocianinas de un extracto comercial de antocianinas del maz morado proveniente de Per, determin contenidos de antocianina/g de la fraccin acuosa (FA) segn HPLC-DAD en los niveles de 15,43 mg de cianidina 3-glucsido/g de FA, 2,33 mg de pelargonidina 3-glucsido/g de FA, 4,44 mg de peonidina 3-glucsido/g de FA, 10,37 mg de cianidina acilada 3-glucsido/g de FA, 2,83 mg de pelargonidina acilada 3-glucsido/g de FA y 4,85 mg de peonidina acilada 3-glucsido/g de FA, que hacen un total de 40,25 mg de antocianinas/g de FA, valores superiores a los encontrados en la investigacin.

40 Antocianina (mg/g m uestra) 28.675 a 30.990 a 31.968 a

30

20 21.203 b 10 2 (b)

0 0 50 100 150 200 250

Tiem po de extraccin (m in)

La evaluacin de los efectos individuales de la temperatura y el tiempo de extraccin sobre el contenido de antocianinas en los diferentes tratamientos segn pruebas de rangos mltiples de Duncan con p < 0,05 para determinar las mejores condiciones de extraccin considerando un solo factor (tiempo, temperatura), muestra que no existen diferencias de extraccin de antocianinas a las temperaturas de 60, 75 y 90 C, a pesar de que a los 75 C se observa el mayor valor promedio (32,737 mg/g de coronta), Fig. 2(a); segn el tiempo de extraccin las antocianinas extradas a 60, 120 y 240 min son estadsticamente similares, los valores se etiquetan como a, Figura 2(b); resultados que difieren cuando se evalan las interacciones entre ambos factores tiempo *temperatura, Tabla 2 y Fig.1, donde las mejores condiciones de extraccin

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corresponden a los tratamientos 11 y 12 con 35,233 y 37,127 mg/g de coronta, respectivamente. Fenoles totales El contenido de fenoles totales segn la metodologa de Folin-Ciocalteu muestra valores promedio expresados como equivalentes en mg de cido glico (GAE) por g de coronta para los extractos entre, 23,426 mg/g para las condiciones temperatura y tiempo de extraccin de 25 C y 30 min y 76,945 mg/g para la temperatura de 90 C y tiempo de 240 minutos. El anlisis de varianza de los fenoles totales encontrados en los diferentes extractos (16 tratamientos), de acuerdo al diseo factorial planteado indica diferencias altamente significativas con p < 0,01 para las diferentes condiciones de extraccin. Las mejores condiciones de extraccin de estos compuestos corresponden a los tratamientos 15 y 16 (temperatura de 90 C y tiempos de 120 y 240 min), segn la prueba de rangos mltiples de Duncan con p < 0,05 que en la Tabla 2 se etiquetan con letra a de la columna respectiva, Fig. 3.
Figura 3 - Fenoles totales segn temperatura y tiempo de extraccin en los tratamientos
100 25 C 80 G A E ( m g /g m u e s t ra ) 60 C 75 C 90 C

60

40

20

0 30 60 120 240

Tiempo de extraccin (min)

Pedreschi y Cisneros-Zevallos (2007) en un estudio sobre compuestos fenlicos del maz morado, al analizar por HPLC-DAD la fraccin de acetato de etilo (FAE) de un muestra comercial de antocianinas de maz morado, determinaron los siguientes compuestos fenlicos segn tiempos de retencin (tr): 14,61 mg de cido protocatechuico/g de FAE con un tr de 4,62 min, 8,46 mg de cido vanillico/g de FAE con un tr de 8,87 min, 6,98 mg de un fenlico
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desconocido/g de FAE con un tr de 14,36 min, trazas de cido p-coumarico con un tr de 14,67 min, 20 mg de derivado de quercetina/g de FAE con un tr de 15,90 min, 5,36 mg de derivado de quercetina/g de FAE con un tr de 16,40 min, 20,02 mg de derivado de quercetina/g de FAE con un tr de 16,92 min, 11,55 mg de derivado de hesperitina/g de FAE con un tr de 18,67 min, 23,10 mg de fenlico desconocido/g de FAE con un tr de 18,95 min, y 25,79 mg de compuestos fenlicos derivados del cido hidroxicinmico/g de FAE con tr de 21,01; 21,64; 22,44 y 22,81 min, haciendo un total de 135 mg de fenoles totales/g de FAE, resultado que se encuentra por encima de los encontrados en la investigacin donde se alcanzaron los 76,962 mg GAE/g de coronta; sin embargo es necesario indicar que la muestra investigada por Pedreschi y CisnerosZevallos (2007) corresponde a una FAE de una muestra comercial de antocianinas (extracto atomizado), mientras que la muestra investigada por nosotros fueron corontas de maz morado. Los efectos individuales de la temperatura y el tiempo sobre la extraccin de los fenoles totales en los diferentes tratamientos segn el anlisis de varianza indica diferencias altamente significativas con p < 0,01 para las temperaturas y tiempos de extraccin, las pruebas de rangos mltiples de Duncan con p < 0,05 para determinar las mejores condiciones de extraccin considerando un solo factor (tiempo, temperatura), muestran que existen diferencias de extraccin de estos compuestos a las temperaturas de 25, 60, 75 y 90 C, Fig. 4(a); y diferencias de extraccin segn los tiempos de 30, 60, 120 y 240 min para estos compuestos, la Fig. 4(b) grafica y etiqueta estos resultados; siendo estos diferentes cuando se evalan las interacciones entre ambos factores, Tabla 2 y Fig. 3, donde las mejores condiciones de extraccin corresponden a los tratamientos 15 y 16 donde se alcanzaron los 76,962 y 76,945 mg GAE/g de muestra respectivamente. Luque-Rodrguez et al. (2007) al investigar la extraccin liquida en soluciones calientes de etanolagua de antocianinas y otros compuestos fenlicos de residuos de cscaras de uva producidos en la elaboracin del vino, produjo en muestras deshidratadas a 40 C valores de fenlicos totales iguales a 126 mg GAE/g de cscara y 17 mg de antocianina/g de cscara a los 60 min, valores que fueron superiores en fenoles totales pero similares en antocianinas a los encontrados en la investigacin.

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Fenoles totales y actividad antioxidante de las corontas de Zea mays

Figura 4. Fenoles totales segn factores individuales de temperatura y tiempo de extraccin.

100 74.431 b GAE (mg/g muestra) 80 71.197 c 76.192 a

< 0,01 en el anlisis de varianza, es decir el diseo factorial implementado con los factores temperatura y tiempo en sus diferentes niveles permite rechazar la hiptesis planteada segn los resultado de la actividad antioxidante (similares comportamientos se observaron en antocianinas y fenoles totales).
Figura 5 - DPPH remanente (%) al variar las condiciones de temperatura y tiempo de extraccin

60 40 27.459 d 20 0 -10 10 30 50 70 90

4(a)
240

18.11 90C 20.21 75C 20.11 60C 65.39 25C

Tiempo de extraccin (min)

Tem peratura de extraccin (C)

120

18.63 90C 20.06 75C 19.47 60C 65.90 25C 18.98 90C 21.71 75C 18.28 60C 65.95 25C 20.03 90C 27.11 75C 17.06 60C 68.80 25C

66 62.329 c GAE (mg/g muestra) 62 60.615 d 58 62.655 b

63.679 a

60

4(b)
30
54

50 0 50 100 150 200 250

20

40

60

80

100

Tiem po de extraccin (m in)

DPPH rem anente (%)

Actividad antioxidante La actividad antioxidante de los fenoles simples y polifenoles presentes en los diferentes extractos obtenidos segn diferentes tiempos y temperaturas de extraccin, frente al radical estable 2,2-difenil-1picrilhidracilo (DPPH) se realiz segn la metodologa descrita, donde una alcuota de la solucin antioxidante de los extractos hidroalcohlicos de la coronta de maz morado diluidos convenientemente (1/4) se hicieron reaccionar con la solucin de DPPH (Prez et al., 2003; Llorach et al., 2008; Iqbal et al., 2007). Los resultados hallados al finalizar el tiempo de reaccin muestran valores de DPPH remanente (%) entre 68,80 % para el tratamiento 1 y 17,06 % para el tratamiento 5, Tabla 2, Figs. 5 y 6. Los valores de DPPH remanente (%) para ser evaluados estadsticamente en un anlisis de varianza y prueba de significancia de contrastes mltiples de Duncan con p < 0,05 se transformaron a ar cos eno DPPH .remanente.(%) , los resultados indican que existen diferencias altamente significativas con p
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Figura 6 - DPPH remanente (%) en los diferentes tratamientos.

16 15 14 13 12 11 Tratamientos 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 Blanco 0 20 40 60 80 18.11 j 18.63 i,h 18.98 h 20.03 f 20.21 f 20.06 f 21.71 e 27.11 d 20.11 f 19.47 g 18.28 i,j 17.07 k 65.39 c 65.90 b 65.95 b 68.80 a 100 100

DPPH rem anente (%)

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El anlisis de contrastes mltiples de Duncan con p < 0,05 muestra que los tratamientos 1-4 presentan la mayor cantidad de DPPH en solucin, siendo en consecuencia los tratamientos con las mas bajas capacidades antioxidantes, el anlisis tambin indica que los extractos con mayor capacidad antioxidante se encuentran en los tratamientos 5, 16, 15 y 14 debido a que presentaron las mas bajas cantidades de DPPH remanente (17,06; 18,11; 18,63 y 18,98%), las Figs. 5 y 6 describen estos resultados. El anlisis de significancia tambin indica que las extracciones de compuestos antioxidantes de las corontas de maz morado se realizan eficientemente a temperaturas entre los 60 y 90 C, y tiempos entre 60 y 240 minutos. Relaciones entre antocianinas, fenoles totales y actividad antioxidante El anlisis de varianza de la regresin lineal entre antocianinas y fenoles totales de los diferentes extractos de las corontas de maz morado indica relaciones altamente significativas con p< 0,01 y un r2= 0.5888, Fig. 7.
Figura 7 - Anlisis de regresin entre antocianinas y fenoles totales
60 Antocianina (mg/g muestra) 50 40 30 20 10 0 20 40 60 80

expresado en equivalentes Trolox con los fenoles totales de los frutos, encontrando relaciones cercanas a 1 (r2= 0,949).
Figura 8 - Anlisis de regresin entre DPPH remanente en solucin (%) y fenoles totales
80

y=
DPPH remanente (%) 60

-0. 9 893 x+

9 3.

269

R2

40

=0 . 97

74

20

0 20 40 60 80

GAE (m g/g m uestra)

6.7 33 3 5 5x + y = 0.3

2 0.588 8 8R =

GAE (m g/g m uestra)

Netzel et al. (2007) en el anlisis de frutos australianos nativos como origen de antioxidantes para alimentos, encontr relaciones similares a los encontrados en la investigacin con valores de r2= 0,545 entre antocianinas (mol/g peso fresco) y fenoles totales (mol/g peso fresco). La evaluacin de DDPH remanente en solucin (%) con los fenoles totales en los diferentes extractos a travs del anlisis de varianza de la regresin lineal muestra relaciones altamente significativas con p< 0,01 y r2=0,9774, indicando que la actividad antioxidante de los extractos del maz morado se debe a la presencia de compuestos fenlicos, Fig. 8; similares resultados hallaron Netzel et al. (2007) al evaluar la actividad antioxidante de los frutos nativos
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Por otro lado, Cai et al. (2004) en una investigacin relacionada con la actividad antioxidante y los compuestos fenlicos de 112 plantas de la medicina tradicional China asociadas con terapias del cncer, encontraron correlaciones altamente significativas en los extractos metanlicos (r2= 0,9638, 112 plantas; r2= 0,9530, 110 plantas) y acuosos (r2= 0,9580, 112 plantas, r2= 0,9504, 110 plantas) preparados a partir de las 112 plantas de la medicina tradicional China, sugiriendo que los compuestos fenlicos contribuyen significativamente a la capacidad antioxidante de las plantas. Entre los compuestos fenlicos se encuentran los polifenoles del tipo antocianina y otros fenlicos sencillos; dentro de la investigacin se evalo la relacin entre el DPPH remanente en solucin (%) con las antocianinas en los diferentes extractos, y los resultados del anlisis de varianza de la regresin lineal indican relaciones altamente significativas con p< 0,01 y r2= 0,5367, Fig. 9. CONCLUSIONES La extraccin de antocianinas en soluciones de etanol al 20 % y pH 2 de corontas de maz morado se realizan eficientemente a la temperatura de 75 C y tiempos entre los 120 y 240 minutos donde se alcanzaron los 35,233 mg/g coronta y 37,127 mg/g coronta, respectivamente, mientras los fenoles totales expresados como equivalentes de cido glico en mg/g de coronta llegaron a los 76,962 y 76,945 para los tratamientos 15 y 16 correspondientes a los 120 y 240 min y la temperatura de 90 C.

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Figura 9 - Anlisis de regresin entre DPPH remanente en solucin (%) y antocianinas

80

DPPH remanente (%)

60

y=40

1. 03 7

9x + 5 6. 3 18 R2

= 0.

536 7

20

0 0 10 20 30 40

Antocianina (m g/g m uestra)

La actividad antioxidante de las corontas de maz morado, expresada como porcentaje de DPPH remanente en solucin, se debe principalmente a los compuestos fenlicos presentes en solucin, estando en concordancia con lo informado en literatura. AGRADECIMIENTOS Los autores expresamos nuestro agradecimiento al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa de Per CONCYTEC, por el financiamiento a la presente investigacin del Proyecto No. 317-2007CONCYTEC.

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