HUMAN TENOCYTES ARE STIMULATED TO PROLIFERATE BY ACETYLCHOLINE THROUGH AN EGFR SIGNALLING PATHWAY

1. 2. 3. 4. 5. G Fong, L J Backman, G Andersson, A Scott, P Danielson

Abstracto
Introduccin Los estudios sobre la rtula y los tendones de Aquiles humano han demostrado que las clulas del tendn no slo tienen la capacidad de producir la acetilcolina (ACh), sino tambin expresar los receptores muscarnicos de ACh (mAChRs), de subtipo M2 (M 2 R), y que tanto la produccin y el receptor expresin parece estar aumentado en tendinosis.Hipercelularidad y la angiognesis son caractersticas histopatolgicas clave en el tejido tendinosis. En este estudio, el objetivo fue probar la hiptesis de que la ACh aumenta la tasa de proliferacin de tenocitos travs de mAChR estimulacin, as como investigar si este mecanismo est mediado por la activacin extracelular (fosforilacin) del receptor del factor de crecimiento epidrmico (EGFR), que tiene han mostrado inducir la sntesis de ADN y la proliferacin celular en otros tipos de clulas fibroblsticas, a travs de una va intracelular incluyendo la activacin / fosforilacin de la protena activada por mitgeno quinasas ERK1 / 2. Mtodos tenocitos Aquiles humano se sembraron en placas de cultivo de clulas y se incubaron en condiciones privadas de suero. Las clulas fueron pre-tratados con el inhibidor de EGFR AG1478, la metaloproteinasas de matriz (MMP) GM6001 inhibidor o antagonista mAChR atropina. Despus las clulas se estimularon con ACh (10 -6 M) o el vehculo. Para determinar los niveles de fosfato ERK1 / 2 y fosfo-EGFR, se realiz un anlisis de transferencia Western. 5-bromo-2'-desoxi-uridina (BrdU) y la tincin de cristal violeta se utilizaron para evaluar la proliferacin celular y la viabilidad celular, respectivamente. Resultados Las clulas de los tendones humanos primarios en cultivo expresado enzimas relacionadas con la sntesis de ACh (colina acetiltransferasa y transportador vesicular de acetilcolina), junto con vimentina y tenomodulin, que confirman el fenotipo tenocitos. Las clulas tambin expresaron la M 2 R. Mediante la administracin exgena de ACh, los tenocitos fueron estimuladas a proliferar de manera significativa y aumento de la viabilidad.Adems, Western blot mostr que la ACh estimulacin result en aumento de la fosforilacin de EGFR y ERK1 / 2. Cuando las clulas se expusieron a la atropina, o la sustancia de EGFR-bloqueo, el efecto proliferativo de ACh disminuy. Al mismo tiempo, el aumento de ERK1 / 2 fosforilacin inducida por incubacin con ACh fue bloqueada de manera efectiva en la presencia del antagonista de la atropina mAChR. La inhibicin de EGFR o MMP con los bloqueadores especficos reduce la fosforilacin de ERK1 / 2. Discusin Sobre la base de los resultados del presente estudio, as como de los estudios previamente establecidos, proponemos que tenocitos humanos, con su capacidad innata para producir acetilcolina, aumentan la produccin de ACh durante el desarrollo de la tendinosis. A travs de un bucle autocrino, la ACh producido por tenocitos estimula mAChRs en la superficie de la clula, activando de esta manera las MMP para escindir un ligando de EGFR asociada a la superficie

celular. El ligando se une a EGFR que a su vez aumenta despus de la activacin de ERK1 / 2 fosforilacin, lo que lleva a un aumento de la proliferacin celular y la hipercelularidad como se ve en la tendinosis (figura 1 ). En una etapa temprana de la tendinosis, hipercelularidad podra ser una parte de una curacin o respuesta adaptativa, pero en la etapa crnica proliferacin tenocitos excesiva podra ser perjudicial para la estructura y la funcin del tendn. El sistema colinrgico no neuronal del tejido del tendn es, pues, un posible objetivo para el futuro de modulacin de estos procesos en la tendinosis.

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Figura 1.
Esquema de las vas celulares propuestos implicados en la proliferacin inducida por ACh de las clulas del tendn humanos. ACh estimula unidas a la membrana receptores ACh muscarnicos (mAChRs) que a su vez activan las metaloproteinasas de matriz (MMP) para escindir un ligando EGFR asociada a la superficie celular. El ligando se une a EGFR que a su vez aumenta la proliferacin celular a travs de la fosforilacin de la protena activada por mitgeno quinasas ERK1 / 2.

INFLAMMATORY MECHANISMS INVOLVED IN TENDON OVERUSE: RECENT INSIGHTS

Alex Scott, Hayedeh Behzad Br J Sports Med 2013;47:e2 doi:10.1136/bjsports-2013-092459.10

Esta presentacin sintetizar y revisar los resultados recientes de nuestro laboratorio y otros "en los mecanismos inflamatorios implicados en las lesiones por uso excesivo del tendn. La tendinopata es un estado de engrosamiento del tendn y el dolor crnico, por lo general como resultado de uso excesivo. Trabajos recientes han demostrado que la carga repetitiva de las clulas del tendn humanos derivados conduce a la regulacin positiva de TAC1, el ARNm que codifica para la sustancia P 1 -un neuropptido pro-inflamatoria que se sabe que contribuyen al dolor del tendn. 2 Adems, el trabajo previo ha encontrado que mastocitos estn presentes en mayor nmero en el tendn crnicamente en exceso, 3 y que desgranulan en respuesta a la SP, la liberacin de sustancias que influyen directamente en la remodelacin del colgeno tenocitos humano. As, tanto SP y uno de sus principales objetivos-la mastocitos estn excesivamente representados en el tejido tendinopathic. Los mastocitos tienen una alta afinidad por tenocitos humanos, formando elaborados uniones intercelulares, y la liberacin de sustancias que influyen sustancialmente el comportamiento tenocitos que podran tener relevancia para mejorar los resultados despus de una lesin o uso excesivo. Por ejemplo, la inhibicin de mastocitos resulta en una reduccin de TGF-beta-genes relacionados (relacionado con la cicatrizacin) y reduce la cantidad de engrosamiento del tendn despus de una lesin. 4 Adems, los mastocitos inducen un gran aumento de la COX-2 expresin por tenocitos humanos. Es posible que una estrategia clnica que incorpora inhibidores de mastocitos podra mejorar en los resultados con el tratamiento estndar. 5

PLATELET RICH PLASMA FOR CHRONIC TENDINOPATHY

K Harmon, J Drezner, A Rao Br J Sports Med 2013;47:e2 doi:10.1136/bjsports-2013-092459.31 Introduccin generadores de la etiologa, patogenia, y dolor en la tendinopata crnica an no se han dilucidado. Las terapias biolgicas, como sangre autloga (AB) y plasma rico en plaquetas (PRP) inyecciones, destinadas a estimular la curacin de tendones degenerativas, han mostrado una promesa, pero la investigacin clnica es limitada. Mtodos El propsito de este estudio fue investigar prospectivamente el efecto clnico del tratamiento con AB o PRP inyeccin en pacientes con tendinopata crnica. Los pacientes mayores de 18 aos eran elegibles para el estudio si tenan ms de 3 meses de los sntomas y haban fracasado el tratamiento conservador tpico como la terapia fsica, inyecciones de corticosteroides, el masaje, la acupuntura y / o quiroprctica. Todos los tendones fueron evaluados mediante ecografa musculoesqueltica y los pacientes recibieron tratamiento con AB, rico en leucocitos PRP (LR-PRP), o PRP-leucocitos pobres (LP-PRP), se inyecta bajo la gua del ultrasonido en las zonas tendinopathic. Los pacientes fueron seguidos utilizando escalas de dolor analgica visual (EAV), las puntuaciones de resultado validadas especficas del sitio, y una escala de Likert de post-tratamiento a las 6 semanas, 12 semanas, 6 meses y un ao. Una disminucin en la VAS de 20 se consider una mejora clnicamente significativa.Likert puntuaciones posteriores al tratamiento de gran parte o completamente resuelto tambin se consideraron clnicamente significativos. Resultados 99 tendones fueron tratados con edad promedio 48,5 aos (rango 19-82). 44% eran mujeres y 56% hombres. Los pacientes tenan sntomas durante un promedio de 34,4 meses antes del tratamiento. Las condiciones tratadas incluyen epicondilosis lateral (17), la tendinosis tendn de la corva proximal (22), la tendinosis de Aquiles (11), la tendinosis patelar (10), fasciosis plantar (9) y otros tendinopatas (30).

De los pacientes con al menos 12 semanas de seguimiento, 10 tenan AB, 77 LR-PRP y 12 inyecciones LP-PRP. Para la inyeccin AB, la duracin media de los sntomas fue de 12,3 meses y la media de seguimiento fue de 22,2 semanas. 70% de los pacientes ABI tena alguna mejora, aunque slo el 40% mejor al menos 20 puntos en EVA. Disminucin promedio en la EVA fue de 15,2. De los pacientes que mejoraron, la disminucin media de la EVA fue de 23,1. 60% de las personas con inyecciones AB consideraban su mayor parte o completamente mejorado. Para LR-PRP la duracin media de los sntomas fue de 35,8 meses y la media de seguimiento fue de 33,4 semanas. 78% de los pacientes mejoraron en absoluto con el 62% que tiene por lo menos una disminucin de 20 puntos en la EVA. La disminucin media de VAS fue de 21,8, pero para aquellos que mejor, se observ una disminucin de 30.9. 54% de los pacientes LR-PRP se calificaron como su mayor parte o completamente mejorado. Para LP-PRP la duracin media de los sntomas fue de 37,6 semanas antes del tratamiento y la media de seguimiento fue de 39,3 semanas. 92% de los pacientes mejoraron en absoluto con 83% la disminucin de EVA de al menos 20. La disminucin media de VAS fue de 25 y para los que mejor fue 29,1. 50% de los pacientes LP-PRP se calificaron como su mayor parte o completamente mejorado. Conclusin Las terapias biolgicas tales como AB y PRP inyeccin fueron moderadamente eficaces para el tratamiento de la tendinopata recalcitrante, y PRP parece ser ms eficaz que el AB. Deberan llevarse a cabo ms estudios que comparen estos tratamientos entre s, con otras opciones de tratamiento y el placebo para definir mejor su utilidad clnica e indicaciones en el tratamiento de la tendinitis crnica.

EFFECTS OF MAST CELLS ON THE FUNCTION OF ISOLATED HUMAN TENOCYTES

H Behzad, A Scott Br J Sports Med 2013;47:e2 doi:10.1136/bjsports-2013-092459.45

Introduccin La tendinopata, una condicin patolgica causada por el uso excesivo del tendn, afecta negativamente a millones de personas en los entornos deportivos y ocupacionales en todo el mundo. Los mecanismos moleculares que subyacen en el desarrollo de la tendinitis son poco conocidos, sin embargo, el aumento del nmero de mastocitos se han detectado en las muestras de la tendinopata rotuliana humanos. Los mastocitos son conocidos por aumentar la proliferacin de fibroblastos y la produccin de colgeno que conduce a la fibrosis en algunos tejidos. El presente estudio se llev a cabo para determinar los efectos de los mastocitos en fibroblastos aislados de tendones humanos (tenocitos) y explorar un posible papel de los mastocitos en el desarrollo de la tendinopata. Mtodos tenocitos humanos primarios fueron aisladas de los tendones isquiotibiales de donantes sanos. Microscopa de luz y electrnica se utilizaron para examinar una asociacin fsica entre las clulas cebadas (HMC-1) y tenocitos, in vitro. Ensayo de contraccin de gel de colgeno se utiliz para examinar los efectos de los mastocitos en tenocitos aislados. La viabilidad celular y la proliferacin se evalu mediante el ensayo de MTS. La expresin de genes se cuantific por qPCR. Resultados HMC-1 mastocitos se muestran mediante microscopa ptica y electrnica de unirse fsicamente a tenocitos primarios a travs de uniones adherentes. La inmunotincin para el factor de clulas madre (SCF), un factor de crecimiento de mastocitos, mostr que la expresin homognea de esta protena en la superficie de tenocitos. Adems, qPCR mostr un aumento en la expresin de SCF tenocitos mRNA en la presencia de mastocitos. En otros experimentos,

tanto en las clulas cebadas y sonicados mastocitos, se mostr a inducir tenocitos mediada por la contraccin del gel de colgeno, lo que parece estar impulsado por el TGF-1. Ensayo de MTS mostr un aumento mediada por mastocitos en la supervivencia y la proliferacin tenocitos. Discusin Estos hallazgos sugieren que, o bien a travs de la asociacin fsica con tenocitos y / o liberacin de mediadores, los mastocitos podran jugar un papel en la regulacin y activacin de tenocitos. Otros estudios estn en marcha para investigar los mecanismos moleculares de las interacciones clula-mstil tenocitos y si stas podran desempear un papel en la patognesis de la tendinopata.