Quim. Nova, Vol. 26, No.

5, 726-737, 2003 CARACTERIZAO E ESTABILIDADE FSICO-QUMICA DE SISTEMAS POLIMRICOS NANOPARTICULADOS PARA ADMINISTRAO DE FRMACOS

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Scheila Rezende Schaffazick e Slvia Stanisuaski Guterres* Faculdade de Farmcia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Ipiranga 2752, 90610-000 Porto Alegre - RS Liane de Lucca Freitas e Adriana Raffin Pohlmann Instituto de Qumica, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonalves, 9500, 91501-970 Porto Alegre - RS Recebido em 28/10/02; aceito em 27/2/03

PHYSICOCHEMICAL CHARACTERIZATION AND STABILITY OF THE POLYMERIC NANOPARTICLE SYSTEMS FOR DRUG ADMINISTRATION. Polymeric nanoparticle systems such as nanocapsules and nanospheres present potential applications for the administration of therapeutic molecules. The physico-chemical characteristics of nanoparticle suspensions are important pre-requisites of the success of any dosage form development. The purpose of this review is to present the state of the art regarding the physico-chemical characterization of these drug carriers, in terms of the particle size distribution, the morphology, the polymer molecular weight, the surface charge, the drug content and the in vitro drug release profiles. Part of the review is devoted to the description of the techniques to improve the stability of colloidal systems. Keywords: nanoparticles; polymers; characterization.

INTRODUO O controle da liberao de frmacos em stios de ao especficos, atravs da utilizao de vetores, capazes de permitir a otimizao da velocidade de cedncia e do regime de dosagem das substncias, tem sido uma rea de intensa pesquisa nos ltimos dez anos. Dentre os vetores, incluem-se as micropartculas e os sistemas coloidais (lipossomas e nanopartculas). As nanopartculas, constitudas por polmeros biodegradveis, tm atrado maior ateno dos pesquisadores em relao aos lipossomas, devido s suas potencialidades teraputicas, maior estabilidade nos fludos biolgicos e durante o armazenamento1-3. As nanopartculas polimricas so sistemas carreadores de frmacos que apresentam dimetro inferior a 1 m. O termo nanopartcula inclui as nanocpsulas e as nanoesferas, as quais diferem entre si segundo a composio e organizao estrutural (Figura 1). As nanocpsulas so constitudas por um invlucro polimrico disposto ao redor de um ncleo oleoso, podendo o frmaco estar dissolvido neste ncleo e/ou adsorvido parede polimrica. Por outro lado, as nanoesferas, que no apresentam leo em sua composio, so

Figura 1. Representao esquemtica de nanocpsulas e nanoesferas polimricas: a) frmaco dissolvido no ncleo oleoso das nanocpsulas; b) frmaco adsorvido parede polimrica das nanocpsulas; c) frmaco retido na matriz polimrica das nanoesferas; d) frmaco adsorvido ou disperso molecularmente na matriz polimrica das nanoesferas)

*e-mail: nanoc@farmacia.ufrgs.br

formadas por uma matriz polimrica, onde o frmaco pode ficar retido ou adsorvido2,4,5. Estes sistemas tm sido desenvolvidos visando inmeras aplicaes teraputicas, sendo planejados, principalmente, para administrao parenteral, oral ou oftlmica. Uma das reas mais promissoras na utilizao das nanopartculas a vetorizao de frmacos anticancergenos2,6-8 e de antibiticos2,9,10, principalmente atravs de administrao parenteral, almejando uma distribuio mais seletiva dos mesmos e, assim, um aumento do ndice teraputico. Com relao administrao oral de nanopartculas, as pesquisas tm sido direcionadas especialmente : a) diminuio dos efeitos colaterais de certos frmacos, destacando-se os antiinflamatrios no-esterides (diclofenaco11,12, indometacina13-15), os quais causam freqentemente irritao mucosa gastrintestinal e b) proteo de frmacos degradveis no trato gastrintestinal, como peptdeos16,17, protenas8,18 e/ou hormnios19, aumentando a biodisponibilidade dos mesmos. Outro grande interesse nas nanopartculas sua administrao oftlmica20-23, visando o controle da liberao, o aumento da biodisponibilidade ocular e/ou a diminuio dos efeitos colaterais devido absoro sistmica de certos frmacos. Existem vrios mtodos relatados na literatura para a preparao de nanopartculas polimricas, os quais podem ser, de uma forma geral, classificados em mtodos baseados na polimerizao in situ de monmeros dispersos (cianoacrilato de alquila)24-28 ou na precipitao de polmeros pr-formados11,29-33, tais como poli(cido ltico) (PLA), poli(cido ltico-co-cido gliclico) (PLGA), poli(-caprolactona) (PCL) e, ainda, os copolmeros do cido metacrlico e de um ster acrlico ou metacrlico. A Figura 2 apresenta as principais etapas dos diferentes mtodos de preparao de nanopartculas34-36. Independentemente do mtodo de preparao os produtos so obtidos como suspenses coloidais aquosas. Entretanto, durante o tempo de armazenamento, pode ocorrer a agregao das nanopartculas no meio, resultando na formao de precipitados37,38. Alm disso, problemas de estabilidade qumica do polmero ou das demais matrias-primas, incluindo o frmaco, podem ocorrer39-41. A conseqncia de uma estabilidade fsico-qumica limitada, em funo do tempo, constitui um obstculo para a aplicabilidade industrial das sus-

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Este artigo tem como objetivo revisar as principais metodologias empregadas para a caracterizao fsico-qumica de nanopartculas polimricas, visando a compreenso do comportamento fsico-qumico destes sistemas. As proposies das formas de associao e os perfis de liberao do frmaco, a partir das estruturas coloidais polimricas, sero enfocados. Alm disto, tambm sero abordados estudos referentes secagem das suspenses de nanopartculas, empregando-se liofilizao ou nebulizao, como estratgia para aumentar a estabilidade fsico-qumica destes sistemas. CARACTERIZAO FSICO-QUMICA Avaliao morfolgica As microscopias eletrnicas de varredura56-60 (MEV) ou de transmisso59,61,62 (MET) tm sido muito empregadas na obteno de informaes relativas forma e ao tamanho das nanopartculas. A MET pode permitir tambm a diferenciao entre nanocpsulas e nanoesferas, possibilitando, inclusive, a determinao da espessura da parede das nanocpsulas63,64. A tcnica de criofratura tambm tem sido empregada para auxiliar a anlise morfolgica destes sistemas10,60,63,65-67. Um trabalho que exemplifica a utilizao da MET, associada tcnica de criofratura, o realizado por Rollot e colaboradores63, o qual demonstrou que nanoesferas apresentam forma esfrica, com estrutura polimrica slida, ao passo que, as nanocpsulas so formadas por um fino (cerca de 5 nm) invlucro polimrico ao redor do ncleo oleoso. A utilizao de microscopia eletrnica, tambm associada tcnica de criofratura, permitiu evidenciar a organizao morfolgica de nanocpsulas de poli(cianoacrilato de etila), nas quais o leo, um triacilglicerol (Miglyol 812), est circundado por uma parede polimrica65. Gouvender e colaboradores68, atravs de MET, mostraram que a incorporao de quantidades baixas ou elevadas de frmaco no alterou a morfologia de nanopartculas formadas por PLA-blocopoli(xido de etileno). Santos-Magalhes e colaboradores33, atravs de MEV, verificaram a presena de uma segunda populao de partculas, com cerca de 2 m de dimetro, em uma suspenso de nanocpsulas de PLGA, aps 3 meses da preparao, a qual apresentava dimetro inicial de 180 52 nm. Outra tcnica que tem sido empregada para caracterizar a morfologia de superfcie das nanopartculas a microscopia de fora atmica69-72, a qual fornece informaes com alta resoluo em trs dimenses, em escala nanomtrica, sendo capaz ainda de resolver detalhes de superfcie em nvel atmico72. Feng e colaboradores69 empregaram esta tcnica visando um estudo morfolgico mais detalhado de nanoesferas de PLGA, preparadas empregando-se diferentes emulsificantes. Atravs do estudo, foi verificada uma topografia complexa na superfcie das partculas e, mediante a anlise seccional das amostras, foi revelada a presena de pequenas cavidades e de poros. Distribuio de tamanho de partcula De uma forma geral, as nanopartculas obtidas atravs de diferentes mtodos, aps a preparao, apresentam uma distribuio unimodal, com um baixo ndice de polidisperso22,73,74. Os mtodos usuais para a determinao da distribuio de tamanho das nanopartculas consistem em espectroscopia de correlao de ftons e MEV ou MET52. Dependendo da formulao, podem ser verificadas diferenas de tamanho de partculas conforme o mtodo empregado na sua determinao, uma vez que a microscopia eletrnica fornece uma imagem da partcula isolada do meio, enquanto a espectroscopia

Figura 2. Mtodos usuais, empregados na preparao de nanopartculas polimricas, baseados na utilizao de monmeros dispersos (A34; B35) ou na precipitao de polmeros pr-formados (C36)

penses aquosas de nanopartculas. Neste sentido, o interesse pelo desenvolvimento de formas farmacuticas slidas de nanopartculas um ponto de convergncia das pesquisas. Os problemas de estabilidade limitada podem ser minimizados atravs da secagem das suspenses42,43. A sublimao (liofilizao) tem sido bastante utilizada para a desidratao de sistemas coloidais, principalmente lipossomas44-47 e nanoesferas38,41,48, empregando-se um crioprotetor ou lioprotetor, geralmente um carboidrato, para evitar a agregao das partculas durante o congelamento das suspenses. Recentemente, o nosso grupo de pesquisa desenvolveu um mtodo de secagem por asperso (nebulizao) para a obteno de ps nebulizados contendo nanopartculas polimricas49,50, utilizando como adjuvante o dixido de silcio (Aerosil 200). Os produtos secos podem ser utilizados na obteno de formas farmacuticas slidas, tais como cpsulas e comprimidos, o que interessante sob o ponto de vista tecnolgico e industrial. Em funo de sua natureza coloidal, dificuldades tcnicas so encontradas na caracterizao fsico-qumica das nanopartculas. A caracterizao das suspenses engloba a avaliao morfolgica, a distribuio de tamanho de partcula, a distribuio de massa molar do polmero, a determinao do potencial zeta e do pH, a determinao da quantidade de frmaco associado s nanoestruturas, a cintica de liberao do frmaco e, ainda, a avaliao da estabilidade em funo do tempo de armazenamento51,52. O conjunto de informaes obtidas pela caracterizao destes sistemas pode conduzir proposio de modelos que descrevam a organizao das nanopartculas em nvel molecular, que ser dependente da composio quali-quantitativa das formulaes. Na literatura, esto disponveis alguns artigos de reviso referentes a nanopartculas, os quais so direcionados principalmente aos diferentes mtodos de preparao1,2,4,5,8,29,53 e s potencialidades teraputicas destes sistemas1,2,8,9,17,52,54. Um artigo de reviso consistente sobre caracterizao de nanopartculas foi publicado por Maghenhein e Benita51 e outros artigos de reviso1,52,55 abordam alguns aspectos da caracterizao fsico-qumica, embora estes no sejam o foco principal dos mesmos. Desta forma, artigos de reviso atualizados, direcionados especificamente caracterizao fsicoqumica e, principalmente, voltados proposio das formas de associao de frmacos a nanocpsulas e a nanoesferas polimricas no so encontrados na literatura.

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de correlao de ftons possibilita a determinao do raio hidrodinmico das partculas em suspenso75. Vrios estudos10,23,39,57,63,76-78 (Tabela 1) tm sido desenvolvidos para a avaliao dos principais fatores que afetam o dimetro das partculas de sistemas nanoestruturados. Geralmente, as nanopartculas, mesmo preparadas atravs de diferentes mtodos, apresentam dimetros mdios entre 100 e 300 nm37,50,75-81, no entanto, partculas com dimetros em torno de 60 a 70 nm68 ou mesmo inferiores a 50 nm podem ser obtidas77. A composio quali-quantitativa57 e o mtodo de preparao das nanopartculas so fatores determinantes do dimetro mdio e da polidisperso das partculas. No caso das nanocpsulas, um fator importante, que influencia o dimetro das partculas, a natureza do leo utilizado como ncleo. Os resultados so atribudos s diferenas de viscosidade82, hidrofobicidade23 ou tenso interfacial64 das substncias empregadas. Outra observao relevante que a adio de monmero emulso63 (mtodo de polimerizao interfacial) ou, ainda, a presena do polmero23 (mtodo de deposio de polmero pr-formado) podem conduzir diminuio de tamanho de partcula em relao emulso devido, provavelmente, reduo da energia livre interfacial do sistema, no primeiro caso, ou mediante um efeito estabilizador do polmero ao redor das gotculas, no segundo. Empregando-se o mtodo de polimerizao in situ, a presena do frmaco no meio pode alterar10 ou no77 o dimetro mdio das partculas, uma vez que esse, assim como o tipo de tensoativo em-

pregado, podem interferir ou no na sntese e deposio das cadeias oligomricas formadas78. A presena do frmaco no meio reacional influencia o processo de nucleao, conduzindo a partculas maiores com ampla distribuio de tamanho10. Em alguns estudos7,10,76,78, quando o frmaco foi adicionado aps o trmino da polimerizao, o tamanho destas no foi alterado pela sua associao. Utilizando-se o mtodo de precipitao de polmeros pr-formados, a presena do frmaco na fase orgnica, antes da precipitao do polmero em meio aquoso, tambm pode73 ou no39,37 influenciar o dimetro mdio de partculas. importante mencionar que a tendncia agregao e sedimentao das nanopartculas dispersas, em funo do tempo, pode ser monitorada pela determinao de mudanas na distribuio de tamanho de partculas22,38,39. Massa molar e distribuio de massa molar do polmero A determinao da distribuio de massa molar do polmero, aps preparao, pode fornecer informaes em relao influncia de componentes da formulao sobre o processo de polimerizao10, sobre a ocorrncia de reaes qumicas entre o frmaco e o polmero77 e, ainda, sobre a degradao do polmero, em funo do tempo39. A tcnica comumente utilizada para a determinao da distribuio de massa molar do polmero a cromatografia de excluso de tamanho39,83,84. Outra tcnica que pode ser empregada o espalhamento

Tabela 1. Parmetros que influenciam o dimetro mdio de nanocpsulas e de nanoesferas preparadas atravs de diferentes mtodos Frmaco Mesilato de pefloxacino ou Ofloxacino Polmero* PECA Mtodo de preparao polimerizao em emulso Resultados - a presena do ofloxacino no meio de polimerizao aumentou o dimetro das NS em comparao s formulaes sem frmaco, preparadas com Triton X10, Tween 80 ou Pluronic F68 como tensoativos - a presena do pefloxacino no meio de polimerizao aumentou o dimetro das NS apenas no caso da formulao preparada com Pluronic F68 - para ambos os mtodos, as NC preparadas com Labrafil apresentaram dimetro menor que as preparadas com Miglyol 840 e a concentrao de leo no influenciou o dimetro das partculas - as concentraes de leo e de frmaco no influenciaram o dimetro das NC - aumento da concentrao do polmero ocasionou aumento do dimetro das NS - o aumento da velocidade de agitao e aumento da concentrao do tensoativo ocasionaram reduo do dimetro das partculas - dimetro das NC menor que o dimetro das gotculas da nanoemulso correspondente - adio do frmaco aps a formao das NS no alterou o dimetro - o aumento da concentrao de HCl ou do tensoativo diminuiu o dimetro das NS - aumento da concentrao de monmero ocasionou o aumento do dimetro das NS - o aumento da concentrao do frmaco ocasionou o aumento do dimetro das NS Ref. 10

Metipranolol

PCL PIBCA

precipitao de polmero pr-formado polimerizao interfacial precipitao de polmero pr-formado emulsificao-difuso

23

Diclofenaco -

PLA PLA

39 57

Cloridrato de betoxolol -

PIBCA PIBCA PIBCA PIHCA

polimerizao interfacial polimerizao em emulso polimerizao em emulso

63 76 77

Sulfato de amicacina

PIBCA

polimerizao em emulso

78

*PIBCA: poli(cianoacrilato de iso-butila); PECA: poli(cianoacrilato de etila); PIHCA: poli(cianoacrilato de iso-hexila); PLA: poli(cido ltico); PCL: poli(-caprolactona); NC: nanocpsulas; NS: nanoesferas.

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de luz esttico, mediante a anlise da intensidade de luz espalhada pelas partculas10,85. Atravs da comparao da distribuio de massa molar entre nanoesferas de poli(cianoacrilato de iso-butila) contendo ou no ampicilina, um antibitico -lactmico, no foram observadas mudanas significativas neste parmetro, aps a adio do frmaco no meio reacional, levando os autores a concluir que no houve interaes qumicas entre a ampicilina e a macromolcula em formao77. Por outro lado, Alonso e colaboradores78 verificaram que a presena de sulfato de amicacina, um antibitico aminoglicosdeo, no meio de polimerizao, conduziu obteno de cadeias de poli(cianoacrilato de butila) com maior massa molar, em relao quelas preparadas sem o frmaco. Fresta e colaboradores10 verificaram que ofloxacino, um antibitico fluorquinolnico, funciona como um iniciador da polimerizao, conduzindo a cadeias polimricas com menor massa molar, enquanto que o mesilato de pefloxacino foi capaz de levar formao de cadeias polimricas de maior massa molar, em relao s partculas obtidas na ausncia destes frmacos. Reich86 verificou, atravs de estudos de distribuio de massa molar, que a estabilidade qumica das nanopartculas de PLA, em fluidos gstrico e intestinal artificiais, foi dependente das caractersticas do polmero e do pH do meio. E, ainda, que a distribuio de massa molar foi levemente influenciada pela presena de enzimas e/ ou do tensoativo (poloxamer 188) adsorvido. Potencial zeta O potencial zeta reflete o potencial de superfcie das partculas, o qual influenciado pelas mudanas na interface com o meio dispersante, em razo da dissociao de grupos funcionais na superfcie da partcula ou da adsoro de espcies inicas presentes no meio aquoso de disperso51,64. Este parmetro determinado utilizando-se tcnicas de eletroforese75,78,87. Os fosfolipdeos (lecitinas), os poloxamers (copolmeros dos xidos de etileno e de propileno) e os polmeros constituintes das nanopartculas so os principais componentes presentes nas formulaes capazes de influenciar o potencial zeta. Especialmente os polisteres, como o PLA, e as lecitinas fornecem um potencial negativo interface, enquanto que, os poloxamers (tensoativos no-inicos) tendem a reduzir o valor absoluto deste parmetro52. Em mdulo, um valor de potencial zeta relativamente alto importante para uma boa estabilidade fsico-qumica da suspenso coloidal, pois grandes foras repulsivas tendem a evitar a agregao em funo das colises ocasionais de nanopartculas adjacentes. As caractersticas de superfcie das partculas tambm podem alterar a resposta biolgica do frmaco associado. Quando se administram intravenosamente sistemas de nanopartculas convencionais, estes so rapidamente removidos da circulao sangunea pela ao de clulas do sistema fagocitrio mononuclear, dificultando a chegada do frmaco ao stio de ao. Diferentes estratgias tm sido propostas para modificar a distribuio in vivo das nanopartculas, baseadas principalmente na reduo da hidrofobicidade da superfcie das partculas atravs da adsoro fsica de um polmero hidroflico [poli(etilenoglicol)]1,88,89. Calvo e colaboradores87 prepararam nanoemulses e nanocpsulas de PCL, nas quais quitosana (um polissacardeo catinico) foi incorporada s formulaes para fornecer potencial de superfcie positivo s partculas ( = +37 mV a = +61 mV), objetivando facilitar a interao destas com as membranas biolgicas fosfolipdicas, alm de prevenir a desestabilizao das nanoestruturas de polister devido adsoro de ctions e protenas catinicas presentes nos fluidos biolgicos. A determinao do potencial zeta tambm pode ser til na

elucidao do mecanismo de associao de frmacos s nanopartculas40,78. Um exemplo desta abordagem o trabalho de Alonso e colaboradores 78 , em que o potencial zeta de nanoesferas de poli(cianoacrilato de butila) foi determinado para se inferir sobre o mecanismo pelo qual o frmaco, sulfato de amicacina, e este polmero interagem. Desta forma, foi verificado que, quando o frmaco foi adicionado s nanopartculas em quantidades crescentes, a reduo, em mdulo, do potencial zeta foi concordante com o aumento da taxa de associao do frmaco. Os autores sugeriram que ocorre uma interao eletrosttica entre o frmaco e o polmero. Estudos comparativos entre nanocpsulas, nanoesferas e nanoemulso foram realizados para a proposio de modelos descritivos da organizao destas nanopartculas. Calvo e colaboradores22 observaram os efeitos da composio das diferentes formulaes sobre os valores do potencial zeta. Foi verificado que a presena da fase oleosa, nas nanocpsulas e nanoemulses, conferiu a estas um potencial zeta mais negativo ( = -41,94 mV e = -42,32 mV, respectivamente) em relao s nanoesferas ( = -16,33 mV). Tendo em vista a semelhana dos resultados obtidos para nanocpsulas e nanoemulses, os autores sugeriram que a camada polimrica ao redor das gotculas de leo seria um delgado filme polimrico. Com o mesmo objetivo, Losa e colaboradores23 determinaram valores de potencial zeta similares para nanocpsulas e nanoemulses, concluindo que a camada polimrica ao redor das gotculas de leo poderia no ser contnua. Por outro lado, Mosqueira e colaboradores64 no observaram alterao do valor do potencial zeta em funo da natureza do ncleo oleoso (triglicerdeo dos cidos cprico e caprlico, succinato de diglicerila dos cidos cprico e caprlico, dicaprilato/ dicaprato de propilenoglicol, oleato de etila, leo mineral, dodecano, leo de soja) utilizado para a preparao de nanocpsulas de PLA, concluindo que o leo deveria estar completamente encapsulado pelo polmero. Alm disto, sugeriram, atravs de comparaes dos valores de potencial zeta de diferentes formulaes, que a lecitina, utilizada como tensoativo, poderia estar localizada na superfcie externa do polmero ou misturada com o filme polimrico ao redor do ncleo oleoso. pH das suspenses Informaes relevantes sobre a estabilidade de suspenses nanoparticuladas podem ser obtidas mediante o monitoramento do pH, em funo do tempo. Por exemplo, a alterao do pH pode ser indcio de degradao do polmero39,90. Em um trabalho realizado por Calvo e colaboradores22 foi verificada uma diminuio da massa molar da PCL em suspenses de nanocpsulas e de nanoesferas, aps 6 meses de armazenamento, com conseqente diminuio do pH destas formulaes. No entanto, a diminuio dos valores de pH de suspenses coloidais polimricas, em um curto perodo de tempo, pode ser atribuda tanto ionizao de grupos carboxlicos presentes no polmero, quanto hidrlise, dependendo da hidrofobicidade do polister. Suspenses de nanopartculas preparadas com PCL apresentaram reduo dos valores de pH, num perodo de 3,5 meses37. Este fato foi atribudo exposio de maior nmero de grupos cidos carboxlicos terminais, em funo do tempo, promovida pela relaxao das cadeias polimricas. Em outro trabalho do nosso grupo de pesquisa91, a diminuio do pH de suspenses de nanocpsulas de poli(cido metacrlico-co-metacrilato de metila) (Eudragit S90), monitorado durante os primeiros 45 dias aps a preparao, foi tambm atribuda dissociao dos grupos carboxlicos, presentes como grupos pendentes no polmero, que, em funo do tempo, se posicionam na interface partcula/gua devido relaxao das cadeias polimricas.

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Determinao da taxa de associao e da forma de associao do frmaco A determinao da quantidade de frmaco associada s nanopartculas especialmente complexa devido ao tamanho reduzido destas, que dificulta a separao da frao de frmaco livre da frao associada1,51. Uma tcnica de separao bastante utilizada a ultracentrifugao33,76,78,92, na qual a concentrao de frmaco livre, presente na suspenso, determinada no sobrenadante, aps a centrifugao. A concentrao total de frmaco, por sua vez, geralmente determinada pela completa dissoluo das nanopartculas em um solvente adequado. Por conseguinte, a concentrao de frmaco associada s nanoestruturas calculada pela diferena entre as concentraes de frmaco total e livre. Outra tcnica que tambm tem sido empregada a ultrafiltrao-centrifugao23,39,37,52, na qual uma membrana (10 kDa) empregada para separar parte da fase aquosa dispersante da suspenso coloidal. A concentrao livre do frmaco determinada no ultrafiltrado e a frao de frmaco associada s nanoestruturas calculada tambm pela subtrao das concentraes total e livre. A Tabela 2 exemplifica alguns valores de taxas de associao de diversos frmacos22,37-39,50,77,87,90,91,93,94 a nanocpsulas ou a nanoesferas preparadas com diferentes polmeros. De acordo com os estudos publicados, diversos fatores so capazes de influenciar a quantidade de frmaco associada aos sistemas nanoestruturados, dentre os quais destacam-se as caractersticas fsico-qumicas do frmaco22,39, o pH do meio7,73,93,94, as caractersticas da superfcie das partculas ou a natureza do polmero18, a quantidade de frmaco adicionada formulao7, a ordem de adio do frmaco na formulao, ou seja, antes (incorporao) ou aps (incubao) formao das nanoestruturas10,95, a natureza do leo utilizado23 (no caso das nanocpsulas) e o tipo de tensoativo adsorvido superfcie polimrica76,96. Modificando-se as caractersticas de superfcie das partculas, possvel obter diferentes taxas de associao do frmaco por adsoro, para uma mesma concentrao inicial do mesmo. Este parmetro provavelmente muito importante para determinar a capacidade de prolongar o tempo de ao do frmaco76. Portanto, relevante determinar a isoterma de adsoro de frmacos superfcie das nanopartculas, uma vez que a mesma fornece informaes de como o frmaco est distribudo na superfcie das partculas e, ainda, sobre a capacidade de associao do mesmo. Experimentalmente76, em uma dada temperatura, diferentes quantidades de frmaco so adicionadas a um determinado volume de suspenso. Aps estabelecido o equilbrio, pela distribuio do frmaco entre a fase fluida e o adsorvente (nanopartculas), uma alquota de cada mistura ultracentrifugada e a concentrao do frmaco determinada no

sobrenadante. A isoterma de adsoro, que expressa a variao da concentrao de equilbrio no adsorvente, obtida plotando-se os valores de concentrao de equilbrio contra os valores de frmaco adsorvido. Alm disso, uma pequena variao nas quantidades adsorvidas pode induzir a grandes diferenas no perfil de liberao do frmaco, principalmente para aqueles fracamente ligados s nanopartculas1,95,97. Em relao s nanoesferas, diferentes formas de associao do frmaco so descritas, sendo relatado que este pode estar dissolvido ou disperso dentro da matriz polimrica, ou ainda que pode estar adsorvido ao polmero4,5. No entanto, at o presente momento, no est clara a diferena entre a adsoro do frmaco matriz polimrica e a sua disperso molecular na partcula. Por outro lado, nas nanocpsulas, as quais foram desenvolvidas para aumentar a eficincia de associao de frmacos lipoflicos, estes deveriam estar encapsulados pela membrana polimrica, ou seja, dissolvidos no ncleo oleoso. Entretanto, alguns artigos relatam a possibilidade da adsoro do frmaco parede polimrica das nanocpsulas4,5,52,53,98,99. Segundo Fresta e colaboradores10, os frmacos, quando associados pelo processo de incorporao, estariam dissolvidos, dispersos, adsorvidos ou quimicamente ligados matriz polimrica. Por outro lado, utilizando-se o mtodo de incubao, dependendo da natureza qumica do frmaco e do polmero, esse poderia estar adsorvido s nanoestruturas91. Em vista disto, outro ponto que merece destaque, a proposio da forma de associao do frmaco s nanopartculas, a qual bastante complexa, uma vez que os mtodos disponveis apenas determinam a concentrao de frmaco associada aos sistemas, ou seja, no so capazes de diferenciar se o frmaco est adsorvido ou retido na matriz polimrica das nanoesferas, ou se est dissolvido no leo das nanocpsulas e/ou adsorvido parede polimrica. Neste contexto, os pesquisadores tm feito inferncias a respeito da associao do frmaco s nanopartculas atravs de estudos comparativos de potencial zeta40,78, de perfis de liberao91,94, de distribuio de massa molar do polmero77, de estudos de adsoro e/ou de taxa de associao do frmaco s nanoestruturas7,10,76,94,95,100, ou, ainda, atravs do uso de sondas fluorescentes28. A Tabela 3 apresenta alguns exemplos de trabalhos nos quais foram obtidas algumas informaes a respeito da provvel forma de associao de frmacos7,28,77,91,94,95,100 s nanoestruturas, incluindo oligonucleotdeos ou peptdeos como a insulina. Outro interessante trabalho, que objetivou a quantificao de uma frao de frmaco adsorvida superfcie das nanopartculas, foi desenvolvido por Gref e colaboradores101. Neste estudo, atravs da utilizao de espectroscopia eletrnica para anlise qumica, foi possvel determinar a quantidade de ciclosporina A, um imunossupressor, presente na superfcie de nanopartculas de PLA (16%) e de PLAbloco-poli(etilenoglicol) (8%).

Tabela 2. Taxas de associao de alguns frmacos a nanopartculas polimricas Frmaco Indometacina Diclofenaco Ciclosporina A Ampicilina Diazepam Pentamidina Etionamida Insulina Polmero* PCL, PLA PLA, PCL, Eudragit S90 PCL PIBCA PCL PLA Eudragit S90 Quitosana

Sistema NC, NS NC, NS NS NS NC NS NC, NS NS

Mtodo de anlise ultrafiltrao ultrafiltrao ultracentrifugao ultracentrifugao ultracentrifugao ultrafiltrao ultrafiltrao ultracentrifugao

Taxa de associao (%) 94-100 100 90-98 75 92-94 48-75 39-62 87-96

Ref. 22, 93 37, 39, 50 38 77 87 90 91 94

*PIBCA: poli(cianoacrilato de iso-butila); PLA: poli(cido ltico); PCL: poli(-caprolactona); NC: nanocpsulas; NS: nanoesferas.

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Tabela 3. Forma de associao de diferentes frmacos a nanocpsulas ou a nanoesferas polimricas Frmaco Hematoporfirina Oligonucleotdeo Ampicilina Etionamida Insulina Doxorrubicina Oligonucleotdeo Polmero* PIBCA PIHCA PIBCA PIBCA Eudragit S90 Quitosana PIBCA MMA/EMA Mtodo de preparao polimerizao em emulso polimerizao interfacial polimerizao em emulso precipitao de polmero pr-formado geleificao ionotrpica polimerizao em emulso polimerizao radicalar Mtodo de anlise isotermas de adsoro - ultracentrifugao sonda fluorescente liberao ultracentrifugao liberao ultrafiltrao incubao - liberao ultrafiltrao isotermas de adsoro centrifugao incubao quantificao Forma de associao - adsoro do frmaco na superfcie das NS - dissoluo do frmaco no ncleo aquoso das NC - reteno do frmaco pela matriz polimrica das NS - interao eletrosttica do frmaco com as NC e NS - interao eletrosttica do frmaco com as NS - forte adsoro do frmaco nas NS - interao do frmaco por pares inicos com as NS Ref. 7 28 77 91 94 95 100

*PIBCA: poli(cianoacrilato de iso-butila); PIHCA: poli(cianoacrilato de iso-hexila); MMA/EMA: copolmero de metacrilato de metila e metacrilato de monometilaminoetila; NC: nanocpsulas; NS: nanoesferas.

Calorimetria exploratria diferencial, difrao de raios X e espectroscopia no infravermelho Outras tcnicas empregadas para a determinao da forma de associao do frmaco a nanopartculas incluem a calorimetria exploratria diferencial, a difrao de raios X e/ou a espectroscopia no infravermelho. A seguir, sero descritos alguns exemplos do emprego destas tcnicas. Os mtodos termo-analticos, tais como calorimetria exploratria diferencial (DSC), so de grande utilidade para a anlise de polmeros102, e tm sido utilizados tambm para investigar interaes entre os polmeros e os frmacos em diversas formulaes de microesferas103 e nanopartculas22,79. Deste modo, informaes teis podem ser obtidas a respeito da morfologia do polmero cristalino e sobre o estado de disperso slida ou molecular do frmaco associado a estes sistemas polimricos51,103. Anlises atravs de DSC tm sido utilizadas tambm para estudar as interaes intermoleculares entre frmacos e adjuvantes, sendo de grande utilidade em estudos de pr-formulao, na medida em que podem ser obtidas informaes sobre potenciais incompatibilidades fsicas ou qumicas entre o frmaco e os adjuvantes104. Tambm possvel investigar reaes qumicas, como polimerizao, depolimerizao e degradao102. A caracterizao do estado fsico de indometacina associada a nanocpsulas e a nanoesferas de PCL, realizada por DSC e difrao de raios X, indicou que o frmaco est disperso molecularmente na matriz polimrica22. Adicionalmente, atravs do uso de espectroscopia no infravermelho, foi verificada a ausncia de reaes qumicas entre a indometacina e o polmero. Empregando-se DSC, raios X e espectroscopia no infravermelho tambm foi verificado que o diclofenaco sdico estaria disperso molecularmente em nanoestruturas preparadas com uria-formaldedo105. Ainda, atravs de DSC e raios X106, foi verificado que um frmaco anti-hipertensivo diidropiridnico estaria molecularmente disperso na matriz de nanoesferas, preparadas com PCL, PLA ou PLGA. Alm do emprego de DSC na elucidao da forma de associao dos frmacos s nanoestruturas, esta tcnica tambm pode ser aplicada na obteno de informaes a respeito da organizao de outros componentes das formulaes nestes sistemas. Assim, anlises por DSC107 permitiram propor que o monoestearato de sorbitano,

um tensoativo, estaria dissolvido no ncleo oleoso (triglicerdeo dos cidos cprico e caprlico) das nanocpsulas de PCL. No caso das nanoesferas, foi proposto um sistema bifsico polmero-tensoativo, onde o monoestearato de sorbitano estaria disperso na matriz polimrica. CINTICA DE LIBERAO IN VITRO DO FRMACO Segundo Soppimath e colaboradores1, a liberao dos frmacos a partir de sistemas nanoparticulados polimricos depende de diferentes fatores: a) da dessoro do frmaco da superfcie das partculas; b) da difuso do frmaco atravs da matriz das nanoesferas; c) da difuso atravs da parede polimrica das nanocpsulas; d) da eroso da matriz polimrica ou e) da combinao dos processos de difuso e eroso. Mtodos como a difuso em sacos de dilise22,23,76 e a separao baseada na ultracentrifugao77,96,101, na filtrao a baixa presso108 ou na ultrafiltrao-centrifugao91,95 tm sido utilizados para este fim. Li e colaboradores109 verificaram que a albumina, utilizada como protena modelo, associada a nanopartculas de PLGA ou de PLGAbloco-poli(etilenoglicol) apresentou uma rpida liberao inicial, a qual pode estar relacionada com uma frao da protena adsorvida superfcie das partculas. Numa segunda etapa, o perfil de liberao apresentou forma sustentada, atribuda difuso da protena atravs da matriz polimrica e eroso desta. De forma semelhante, Fresta e colaboradores10 verificaram uma liberao bifsica de mesilato de pefloxacino ou ofloxacino a partir de nanoesferas de poli(cianoacrilato de etila), com uma liberao rpida inicial, seguida por uma fase de liberao muito lenta, com uma cintica de primeira ordem. A velocidade de liberao de cisplatina, um anticancergeno, a qual tambm apresentou-se bifsica, foi afetada pela composio das nanopartculas. A diminuio da razo PLGA/poli(etilenoglicol) aumentou a velocidade de liberao do frmaco74. Bapat e Boroujerdi95 sugeriram que a liberao de doxorrubicina, uma antraciclina antineoplsica, incorporada a nanopartculas de poli(cianoacrilato de iso-butila), pode ser controlada e dependente da taxa de eroso da partcula. Em outro estudo, a cintica de liberao de doxorrubicina conjugada quimicamente ao grupo carboxlico

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terminal do PLGA, atravs de uma ligao ster, foi sustentada, podendo ser controlada pela massa molar do polmero6. A liberao de clonazepam, utilizado como frmaco modelo, associado a nanoesferas, constitudas pelo tribloco PCL-blocopoli(etilenoglicol)-bloco-PCL seguiu aproximadamente uma cintica de pseudo ordem zero110. Quanto maior a massa molar do tribloco, mais lenta foi a cintica de liberao do frmaco, sendo esta controlada predominantemente por um mecanismo de difuso do que pela degradao do copolmero. Em um trabalho realizado em nosso laboratrio91, suspenses de nanocpsulas ou de nanoesferas de Eudragit S90 contendo etionamida, um tuberculosttico, preparadas pela adio do frmaco antes (incorporao) ou depois (incubao) da formao das nanopartculas, tiveram seus perfis de liberao avaliados para se determinar o mecanismo de associao do frmaco aos colides. Foi observada a liberao rpida e total do frmaco a partir das formulaes obtidas por incubao e liberao de 80% e de 90% a partir das nanopartculas preparadas por incorporao. Desta forma, esta comparao levou proposio de que o frmaco estaria majoritariamente adsorvido superfcie das partculas. Esta adsoro seria decorrncia da formao de um sal entre o cido conjugado da etionamida e os nions carboxilatos do polmero. Tendo em vista os estudos realizados, a cintica de liberao de frmacos a partir de nanoesferas apresenta-se, geralmente, na forma de uma exponencial (primeira ordem), provavelmente devido difuso do frmaco da matriz polimrica para o meio e/ou eroso da matriz polimrica, liberando o frmaco1,10,108,109,111. No caso das nanocpsulas, o frmaco, teoricamente dissolvido no ncleo oleoso, seria liberado desta estrutura vesicular mediante a sua difuso atravs da parede polimrica, podendo apresentar cintica de ordem zero1. Neste sentido, Fresta e colaboradores66 verificaram que os perfis de liberao de carbamazepina, etosuximida e fenitona (anticonvulsivantes), associadas a nanocpsulas de poli(cianoacrilato de etila), seguiram aproximadamente uma cintica de ordem zero. Desta forma, o mecanismo de liberao destes frmacos corresponderia, principalmente, difuso dos mesmos a partir do ncleo oleoso em direo parede polimrica. Alm disto, a rpida liberao inicial dos frmacos poderia, segundo os autores, ser atribuda a uma pequena quantidade destes adsorvida superfcie das partculas. Watnasirichaikul e colaboradores112 tambm estimaram que a cintica de liberao de insulina a partir de nanocpsulas de poli(cianoacrilato de etila) segue uma cintica de ordem zero. Por outro lado, Calvo e colaboradores22, com base na similaridade entre os perfis de liberao de indometacina, associada a nanocpsulas de PCL e nanoemulso, sugeriram que a parede polimrica das nanocpsulas no influencia o processo de liberao, sendo este afetado somente pela partio do frmaco entre as gotculas de leo e o meio aquoso externo. Comparando estes resultados com o perfil de liberao da indometacina a partir de nanoesferas, a rpida liberao deste frmaco foi interpretada pelos autores como decorrente da difuso desta atravs da matriz polimrica. Losa e colaboradores23, estudando a liberao de metipranolol, um -bloqueador antiglaucoma, a partir de nanocpsulas e nanoemulso, verificaram que no houve influncia significativa da parede polimrica na liberao do frmaco, sugerindo que o passo limitante do processo de liberao do frmaco a partio do mesmo entre as fases oleosa e aquosa. Por outro lado, Valero e colaboradores113 verificaram diferenas significativas entre a suspenso de nanocpsulas de poli(cianoacrilato de iso-butila) e a emulso controle, quanto aos perfis de liberao da triancinolona, principalmente durante as primeiras 10 h. Alm disto, a liberao de triancinolona a partir das nanocpsulas apresentou-se bifsica, com uma rpida liberao inicial, seguida por uma fase de liberao muito lenta de primeira ordem.

ESTABILIDADE DAS SUSPENSES DE NANOPARTCULAS POLIMRICAS As suspenses coloidais normalmente no possuem tendncia separao de fases, at alguns meses aps a preparao, pois o processo de sedimentao lento para partculas submicromtricas, sendo minimizado pelo movimento Browniano. No entanto, com o tempo, pode ocorrer a aglomerao das partculas e, conseqentemente, a sedimentao. Vrios fatores influenciam a estabilidade das suspenses coloidais como, por exemplo, a adsoro de molculas ativas superfcie das nanopartculas e a presena de tensoativos adsorvidos. Alm disto, a avaliao da estabilidade qumica dos polmeros formadores dos colides, sob diferentes condies de armazenagem, de fundamental importncia38,51. O tamanho de partcula, o potencial zeta, a distribuio da massa molar do polmero, o teor de frmaco e o pH so geralmente os parmetros fsico-qumicos que podem ser utilizados para monitorar a estabilidade das suspenses coloidais polimricas22,23,36,39,114. Poucos estudos referentes estabilidade de nanopartculas contendo diferentes frmacos so encontrados na literatura22,23,37,38,114,115 (Tabela 4). A aplicabilidade industrial de nanopartculas dispersas em meio aquoso pode ser limitada, devido aos problemas de baixa estabilidade fsico-qumica, em perodos de armazenamento prolongados. As principais limitaes so a agregao das partculas, a estabilidade qumica do polmero, do frmaco ou de outras matrias-primas e, ainda, a liberao prematura da substncia ativa37,39-41,51. Alm disto, importante enfatizar que formas farmacuticas lquidas so propensas proliferao microbiana, havendo a necessidade de adio de conservantes116. Apesar disto, poucos trabalhos, relacionados a suspenses de nanopartculas, tm se preocupado em avaliar a adio de tais componentes s formulaes117,118. Tendo em vista que estes problemas fsico-qumicos e microbiolgicos possam ser retardados ou evitados atravs de uma operao de secagem42, vm crescendo o interesse pelo desenvolvimento de formas farmacuticas slidas de nanopartculas, ampliando as perspectivas para a utilizao clnica destes sistemas carreadores de frmacos43,50,107,119,120. A desidratao das suspenses de nanopartculas tem sido realizada atravs das operaes de sublimao (liofilizao)40,41 ou de asperso (spray-drying ou nebulizao)50,107. Liofilizados de nanopartculas A liofilizao consiste na remoo da gua (gelo) atravs de sublimao121-123 e tem sido amplamente empregada para a secagem de suspenses de nanoesferas38,40,41,89,124-126. Entretanto, no caso das suspenses de nanocpsulas, poucos trabalhos, utilizando esta operao, tm sido desenvolvidos87,99,127,128. Este mtodo foi empregado para a secagem de suspenses de nanocpsulas, contendo indometacina, preparadas com PLA e benzoato de benzila como ncleo das vesculas127,128. Entretanto, aps a re-hidratao dos produtos liofilizados, armazenados temperatura ambiente, mais de 50% do frmaco associado foi liberado. Grsoy e colaboradores128 atriburam estes resultados a mudanas na estrutura da parede das nanocpsulas, e Chasteigner e colaboradores127 sugeriram que, durante o estgio de congelamento, as tenses provocadas pela cristalizao da gua poderiam quebrar as nanocpsulas, ocasionando a perda do contedo das mesmas para a fase aquosa. Em trabalho realizado pelo nosso grupo de pesquisa129, experimentos de inchamento/dissoluo mostraram que filmes polimricos de PCL ou de PLA foram rapidamente dissolvidos pelo benzoato de benzila, sugerindo que, quando so empregadas estas matrias-primas, as nanopartculas formadas seriam micelas e no nanocpsulas.

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Tabela 4. Estudos de estabilidade de suspenses de nanopartculas polimricas, em funo do tempo de armazenamento Frmaco Indometacina Polmero* PCL Sistema NC, NS Condies de armazenagem t.a. 6 meses Resultados - taxa de associao inalterada - diminuio do pH - discreta reduo do potencial zeta (NC) - potencial zeta inalterado - aumento do dimetro mdio - diminuio da taxa de associao - reduo do teor do frmaco - reduo do pH - precipitao - taxa de associao inalterada - aps 4 meses formao de agregados - agregao aps 60 dias das formulaes de pH 2,67 - reduo do pH e do teor de frmaco aps 60 dias das formulaes de pH 7,0 - discreta reduo do teor do frmaco t.a. - acentuada reduo do teor do frmaco 50 C Ref. 22

Metipranolol

PIBCA PCL PCL Eudragit S90 PCL PCL

NC

4 C 3 meses

23

Diclofenaco

NC, NS

t.a. 3,5 meses

37

Ciclosporina A Flurbiprofeno

NS NS

8 / 25 C 3 meses 4 / 25 / 40 C 6 meses

38 114

Indometacina

PCL PLA

NC, NS

t.a. / 50 C 3 meses

115

*PIBCA: poli(cianoacrilato de iso-butila); PCL: poli(-caprolactona); PLA: poli(cido ltico); NC: nanocpsulas; NS: nanoesferas; t.a.: temperatura ambiente. Portanto, as mudanas na estrutura da parede polimrica das nanocpsulas, propostas por Grsoy e colaboradores128, ocorreriam antes da etapa de congelamento, devido dissoluo do polmero pelo benzoato de benzila e as tenses provocadas pela cristalizao da gua, propostas por Chasteigner e colaboradores127, ocorreriam em estruturas micelares, no ocasionando a quebra de nanocpsulas. Conseqentemente, a operao de liofilizao no pode ser rejeitada para a secagem de suspenses de nanocpsulas, quando o leo no dissolve o polmero e a estrutura das partculas corresponde a uma vescula. A caracterizao dos liofilizados de nanopartculas geralmente feita aps a ressuspenso do produto em gua e pode envolver a observao visual do efeito Tyndall e da presena de grumos, a determinao do dimetro de partcula, da taxa de associao do frmaco e do pH38,40,41,48,87,124-126. Alm disto, alguns trabalhos empregam DSC41 e microscopia eletrnica99 para caracterizar estes sistemas. Em artigos recentes, tm sido relatado que a presena de um crioprotetor fundamental para a desidratao de suspenses de nanopartculas atravs de liofilizao. Os crioprotetores mais comuns, citados na literatura so os carboidratos (glicose, sacarose, manitol, frutose), sendo os mono- e dissacardeos os mais efetivos na manuteno das caractersticas iniciais de tamanho das partculas38,40,41,48,87,124-126. Este efeito crioprotetor ou lioprotetor dos acares atribudo formao de uma matriz amorfa ao redor das nanopartculas, promovendo um espaamento entre as mesmas, evitando, assim, a agregao durante o congelamento, tornando-as ressuspendveis41,48. A seleo dos carboidratos mais adequados para atuarem como crioprotetores, na liofilizao de nanopartculas, tem sido feita pelo ndice de redisperso, o qual obtido pela relao entre os dimetros mdios de partcula aps a ressuspenso dos liofilizados e antes da secagem. Para um adequado efeito protetor, geralmente, necessrio adicionar quantidades elevadas de carboidrato. O produto apresenta um aspecto de slido aglomerado38,40,41,48,87,124-126. Cabe ressaltar que, quando estas formulaes so planejadas para a administrao parenteral, a manuteno do tamanho mdio das partculas um fator crtico. Em um de nossos trabalhos99 foram obtidos ps liofilizados de micropartculas contendo nanocpsulas ou nanoesferas, destinados administrao oral, empregando-se o dixido de silcio coloidal (3% m/v) como adjuvante. Anlises atravs de MEV dos ps liofilizados evidenciaram micropartculas no esfricas, as quais, em aumentos maiores, apresentaram-se nanorrevestidas (Figura 3). A operao de retirada da gua das suspenses causa a formao das micropartculas pela deposio das nanopartculas orgnicas sobre as nanopartculas do dixido de silcio. Nebulizados de nanopartculas A operao de secagem por nebulizao consiste na passagem da soluo ou da suspenso, atravs de um orifcio atomizador, para a cmara de secagem sob a forma de gotculas, em co-corrente, contracorrente ou fluxo misto de ar quente, que promove a rpida secagem das gotculas. As partculas slidas secas so, ento, separadas e recolhidas, podendo apresentar-se sob a forma de ps finos, granulados ou aglomerados123,130. Freitas e Mller131 empregaram a nebulizao como uma alternativa liofilizao, objetivando aumentar a estabilidade de nanopartculas formadas por lipdeos slidos, utilizando como adjuvante carboidratos (manitol, lactose, trealose, sorbitol, glicose e manose). Recentemente, nosso grupo de pesquisa49 descreveu, pela primeira vez, o uso da nebulizao para a secagem de suspenses de nanopartculas polimricas, com intuito de implementar a estabilidade destes sistemas. Utilizando esta metodologia, a partir de suspenses aquosas de nanopartculas pode-se obter produtos pulverulentos. Esta caracterstica torna estes produtos interessantes como intermedirios no desenvolvimento de formas farmacuticas compartimentadas como cpsulas e comprimidos50,107,129 de ampla

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Figura 3. Fotomicrografias: comparao do liofilizado da disperso aquosa do dixido de silcio puro (a e b) com o liofilizado de nanocpsulas de poli(caprolactona) preparado na presena de dixido de silcio (c e d)

aplicao industrial. Os ps nebulizados tm sido caracterizados atravs de MEV, da determinao do teor de frmaco, do rendimento da nebulizao, da umidade residual15,50,107,129, da liberao in vitro dos frmacos associados15 e, ainda, mediante anlises atravs de DSC107. Alm da caracterizao fsico-qumica, estudos farmacocinticos12 e avaliao da tolerncia gastrintestinal12,15, em ratos, de antiinflamatrios no-esterides associados a nanopartculas nebulizadas, tm sido realizados. A MEV tem sido empregada para a observao de nanopartculas adsorvidas superfcie do adjuvante de secagem (dixido de silcio coloidal), aps a secagem das suspenses atravs de nebulizao (spray-drying)50,107,129. Foi possvel evidenciar a presena de micropartculas de dixido de silcio revestidas por nanocpsulas, preparadas com PCL ou Eudragit S90 e Miglyol 810 (leo), cujos dimetros apresentavam-se semelhantes aos das partculas em suspenso aquosa, antes da secagem50. Por outro lado, para ps nebulizados de nanoesferas de PCL no foram observadas nanopartculas, com tamanho semelhante s suspenses de origem, adsorvidas superfcie do dixido de silcio, sugerindo que a operao de secagem por spray-drying causou uma alterao na organizao das nanoesferas de PCL107,115. Estes estudos mostram a possibilidade de preparao de forma controlada de ps microparticulados nanorrevestidos49. CONCLUSO A compreenso do comportamento fsico-qumico das nanopartculas polimricas objeto de inmeras pesquisas, sendo que as principais dificuldades encontradas, para a caracterizao dos

mesmos, so conseqncias do tamanho reduzido destas partculas. A caracterizao fsico-qumica desses sistemas s possvel mediante a combinao de diversas tcnicas de anlise. Um dos maiores desafios, que ainda persiste, a elucidao da forma de associao dos frmacos a estas nanopartculas, visando a otimizao da taxa de associao e a compreenso dos fatores que influenciam o perfil de liberao dos frmacos. Entretanto, algumas generalizaes podem ser assumidas com base na anlise dos resultados especficos, produzidos pela ampla gama de trabalhos publicados empregando diferentes frmacos, composio de adjuvantes e tipos de sistemas coloidais. Ainda que, de uma forma geral, as nanopartculas polimricas apresentem uma distribuio unimodal com baixo ndice de polidisperso, seus dimetros mdios podem ser fundamentalmente dependentes da composio quali-quantitativa dos sistemas, bem como do mtodo e condies operacionais de preparao. Estes mesmos fatores, somados solubilidade e partio do frmaco nos sistemas, influenciam os teores e as taxas de associao. As formas de associao dos frmacos dependem do tipo de interaes destes com o polmero e o leo, no caso de nanocpsulas, no sendo estritamente dependente do coeficiente de partio do frmaco entre a fase oleosa e a aquosa. Quando interaes inicas entre o frmaco e o polmero podem se estabelecer, mesmo que o primeiro seja lipoflico, a adsoro parece ser a forma de associao preferencial. Diversos avanos tm sido alcanados, tanto no acmulo de informaes relativas aos fenmenos fsico-qumicos envolvidos, quanto em relao ao desenvolvimento de formulaes de nanopartculas mais estveis, o que tm ampliado as perspectivas de emprego clnico destes sistemas.

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AGRADECIMENTOS Os autores agradecem FAPERGS, PROPESQ-UFRGS e ao CNPq/MCT. REFERNCIAS

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Vol. 26, No. 5

Caracterizao e Estabilidade Fsico-qumica de Sistemas Polimricos

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