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La fragmentacin del ADN en espermatozoides humanos

Agustn Garca-Peir agusti.garcia@uab.es

I. Introduccin

Seminogram

Male infertility 50%


(de Kretser, 1997)

Motility Morphology Volume pH Liquefaction

Meiotic studies DNA integrity

FISH on sperm

I. Introduccin

Sperm DNA integrity analysis

Sperm DNA fragmentation causes infertility and fail of pregnancy

DNA damage origins

Sakkas & Alvarez 2010

I. Introduccin

Situacin de compromiso

Fragmentacin del ADN por estrs oxidativo

Aitken & De Iuliis 2010

I. Introduccin

Asociacin de la fragmentacin con: fertilizacin implantacin riesgo de aborto salud del recin nacido
cncer desrdenes neurolgicos

importancia de la evaluacin del dao en el ADN espermtico en el diagnstico de la infertilidad masculina

Lewis S, Focus on Reproduction (2012)

I. Introduccin

Resumen
Los datos existentes no dan soporte a la existencia de una relacin entre fragmentacin y resultados de reproduccin En la actualidad, los resultados de las pruebas de integridad de ADN de esperma no predicen embarazos logrados de forma natural o a travs de IIU, FIV o ICSI Sin embargo, investigaciones posteriores puede conducir a la validacin de la utilidad clnica de estos pruebas

Recomendacin
Evidencias insuficientes para recomendar el uso de la fragmentacin de forma rutinaria en la evaluacin y tratamiento de la pareja infrtil

Comprehensive Analysis of Sperm DNA Fragmentation by Five Different Assays: TUNEL Assay, SCSA, SCD Test and Alkaline and Neutral Comet assay

I. Mtodos de fragmentacin del ADN

II. Resultados de Fragmentacin en grupos de pacientes

III. Implicaciones clnicas del tipo de rotura (cadena sencilla o doble).

I. Metodologas

N=40

Mayor sensibilidad con el mtodo COMETA

I. Metodologas

Todos los mtodos correlacionan con todos excepto el cometa neutro


Techniques Alkaline Comet - Neutral Comet Alkaline Comet - SCD Alkaline Comet - SCSA Alkaline Comet - TUNEL Neutral Comet - SCD Neutral Comet - SCSA Neutral Comet - TUNEL SCD - SCSA SCD - TUNEL SCSA - TUNEL n 183 68 43 39 68 43 39 96 93 93 Coefficient 0,28 0,61 0,59 0,72 0,23 0,00 0,19 0,71 0,70 0,79 p-value 0,000 0,000 0,000 0,000 0,064 0,998 0,252 0,000 0,000 0,000

I. Metodologas

Embarazo

I. Metodologas

En relacin a embarazar:
Mejor tcnica: Cometa alcalino Peor tcnica : SCSA
Technique Alkaline Comet Neutral Comet SCD test SCSA TUNEL n 183 183 123 98 93 Area 0'937 0'516 0'869 0'792 0'903 Cut-off value 45,37% 34,37% 22,75% 18,90% 20,05% Sensitivity 0,850 0,970 0,730 0,595 0,764 Specificity 0,920 0,320 0,918 0,875 0,952

I. Introduccin

Resumen
Los datos existentes no dan soporte a la existencia de una relacin entre fragmentacin y resultados de reproduccin En la actualidad, los resultados de las pruebas de integridad de ADN de esperma no predicen embarazos logrados de forma natural o a travs de IIU, FIV o ICSI Sin embargo, investigaciones posteriores puede conducir a la validacin de la utilidad clnica de estos pruebas

Recomendacin
Evidencias insuficientes para recomendar el uso de la fragmentacin de forma rutinaria en la evaluacin y tratamiento de la pareja infrtil

I. Introduccin

SCD 14%

COMET 11%

TUNEL 33%

SCSA 42%

I. Metodologas Induccin fragmentacin mediante ROS


% SDF (Sperm DNA fragmentation) Concentracin deH2O2 (mol/L)

Induccin fragmentacin con nucleasas

% SDF (Sperm DNA fragmentation)

Tiempo de incubacin (min.)

Cometa Neutro (dsDNA)

Cometa Alcalino (ssDNA)

I. Metodologas

Dao por estrs oxidativo Dao por nucleasas

Rotura de cadena sencilla Rotura de cadena doble

Detectado por cometa alcalino Detectado por cometa neutro

% SDF (Sperm DNA

fragmentation)

Concentracin deH2O2 (mol/L)

Tiempo de incubacin (min.)

I. Metodologas

Doble anlisis mediante ensayo Cometa en condiciones neutras y alcalinas

Tres perfiles de fragmentacin del ADN: A) bajo ssSDF y bajo dsSDF


% SDF

B) Alto ssSDF y alto dsSDF

C) Bajo de ssSDF y alto dsSDF

II. Fragmentacin en grupos de pacientes

N=240

Fertile 1 Low ssSDF Low dsSDF

Fertile 2 Low ssSDF High dsSDF

SMN

TZ

AZ

ATZ

OATZ

CV

OCV

CRC

RPL

II. Fragmentacin en grupos de pacientes

Low ssSDF High dsSDF

p > 0.05
Fertile 2 Low ssSDF High dsSDF Ribas-Maynou et al. 2012

RPL

III. Implicaciones clnicas del tipo de rotura (cadena sencilla o doble).

Cadena simple Embarazo <45%

Cadena doble Riesgo de Aborto >77%

III. Implicaciones clnicas del tipo de rotura (cadena sencilla o doble).

III. Implicaciones clnicas del tipo de rotura (cadena sencilla o doble).

Ctrol DNA no fragmentado

Rotura de doble cadena inducida

Capacidad de embarazo
1. Low ssSDF & Low dsSDF Fertile donors
2. Low ssSDF & High dsSDF Fertile donors 3. Recurrent Miscarriage patients 4. Normal semenogram patients 5. Teratozoospermic patients 6. Chromosome reorganisation carriers (depending on the reorganisation) 7. Operated clinical varicocele

8. Asthenozoospermic patients
Fertile 1

Fertile 2

SMN

TZ

AZ

ATZ

OATZ

CV

OCV

CRC

RPL

9. OligoAsthenoTeratozoospermic patients 10.AsthenoTeratozoospermic patients 11.Clinical varicocele

Riesgo de Aborto asociado a factor masculino


1. Recurrent miscarriage patients (RPL) 2. Low ssSDF & High dsSDF Fertile donors

3. Chromosome reorganisation carriers (CRC)

4. Patient analysis

(depending on the reorganisation) 4. Clinical varicocele (CV) 5. Operated clinical varicocele (OCV) 6. ATZ patients 7. OATZ patients 8. AZ patients 9. TZ patients
Fertile 1 Fertile 2 SMN TZ AZ ATZ OATZ CV OCV CRC RPL

10. Normal semenogram patients (SMN)

11. Low ssSDF & Low dsSDF

Single-stranded DNA damage

4. Patient analysis

Ribas-Maynou et al. 2012

Double-stranded DNA damage

4. Patient analysis

Ribas-Maynou et al. 2012

II. Fragmentacin en grupos de pacientes

Gracias por su atencin UAB Jordi Benet Joaquima Navarro Alba fernndez-Encinas Jordi Ribas-Maynou (tesis doctoral)

HOSPITAL PARC TAULI Maria Jos Amengual Carlos Abad


HOSPITAL MUTUA DE TERRASSA Elena Prada UNIVERSITY OF HAWAY Steve Ward

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