Reduca(Biologa).SerieParasitologa.1(1):4962,2008.

ISSN:19893620

ManualdelaboratoriodeParasitologa 6.Coccidiossanguneos
IgnacioGarcaMs.BenitoMuozArajo.AmayaAguirreInchaurbe. IgnacioPoloRoldn.AnaGarcaMoreno.PabloRefoyoRomn.

DepartamentodeZoologayAntropologaFsica.FacultaddeCienciasBiolgicas. UniversidadComplutensedeMadrid.c/JosAntonioNovais,2.28040Madrid. igarmas@bio.ucm.estitomu@bio.ucm.esaaguirre@bio.ucm.es ipolorol@bio.ucm.esagmoreno@bio.ucm.espablorefoyo@teleline.es

Resumen: En este artculo se revisan los conceptos bsicos sobre los Coccidios sanguneos. Se describen las caractersticas morfolgicas y el ciclo vital, as como los caracteres empleados para su diagnosis. Se aportan descripciones detalladas de las cuatro especies con inters biosanitario: Plasmodium vivax (Grassi y Feletti, 1890); Plasmodium ovale Stephens, 1922; Plasmodium falciparum Weich, 1897 y Plasmodium malariae(Laveran,1881). Palabrasclave:Coccidiossanguneos.Plasmodium. INTRODUCCINTERICA EntrelosdiversosmiembrosdelordenEucoccidia,losrepresentantesdelsuborden Haemosporina son, sin ninguna duda, los ms interesantes. Este suborden est constituido por coccidios heteroxenos que utilizan en su ciclo vital dos hospedadores, un vertebradoyuninvertebradohematfago.Enelvertebradoserealizalaesquizogoniayel principiodelagamogoniayenelinvertebradoelrestodelagamogoniaylaesporogonia. Elcigotoqueseformaalfinaldelagamogoniaesmvilyrecibeelnombredeoocineto. En el vertebrado, el parsito vive durante parte del ciclo vital en las clulas sanguneas,siendotransmitidoporunvectorhematfago(hospedadorinvertebrado). El gnero ms importante es Plasmodium, que contiene ms de 150 especies parsitas de anfibios, reptiles, aves y mamferos, a los que provoca el paludismo o malaria. PALUDISMOHUMANO El hombre puede ser infectado de modo natural por cuatro especies del gnero Plasmodium,causantesdediversoscuadrosclnicosconocidosconelnombregenricode paludismo o malaria: P. vivax, causante de la denominada fiebre terciana benigna; P. 49

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ISSN:19893620 falciparum, causante de la fiebre terciana maligna o estivootoal; P. ovale, productora de la fiebre terciana ovale y P. malariae, causa de la fiebre cuartana. Las cuatro especies son transmitidas, en condiciones naturales, mediante la picadura de mosquitos hembras delgneroAnopheles.Unindividuopuedeestarparasitadosimultneamentepormsde una especie, siendo relativamente frecuentes las combinaciones P. falciparumP. ovale y P.falciparumP.malariae. CICLOVITAL El ciclo vital de Plasmodium sp. es el correspondiente a un coccidio heteroxeno; la esquizogoniayelprincipiodelagamogonia(formacindelosgametocitos)serealizanen el hombre, en tanto que el final de la gamogonia (formacin de los gametos y fecundacin)ylaesporogoniatienelugarenelvector,unmosquitoanofeleshembra(Fig. 1).

Figura1.EsquemadelciclovitaldePlasmodiumsp.

Elparsitoesintroducidoenlasangrehumanaenformadeesporozoto,mediante la picadura del vector. Durante unos 30 minutos los esporozotos vagan por la sangre hasta que, en un momento determinado, desaparecen de sta para penetrar en las clulas del parnquima heptico (hepatocitos). Los esporozotos se transforman en trofozotosyposteriormenteenesquizontesquetrassudivisindarnlugaramillaresde merozotos que pasarn, posteriormente, a la sangre. Esta fase, que dura 515 das, se 50

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ISSN:19893620 conoce con el nombre de preeritroctica o exoeritroctica. En algunas especies (P. vivax y P.ovale)algunosdelosesporozotosqueentranenlasclulashepticaspermanecensin evolucionar; estos individuos reciben el nombre de hipnozotos y son causas de recidivas (recadas). Losmerozotosresultantesdelafasepreeritrocticapasanalasangreeinvadenlos eritrocitos, inicindose la fase eritroctica. El merozoto, tras la penetracin en el eritrocito, se transforma en un trofozoto joven de aspecto anular (anillo joven) y posteriormente en trofozoto maduro (anillo maduro). Posteriormente, los trofozotos se transforman en esquizontes, que tras su segmentacin dan lugar a un nmero determinado demerozotos(entre 8y32 segnlaespecie) quesonliberadosala sangre al ser destruido el eritrocito. Despus de varias esquizogonias, algunos merozotos se diferencianengametocitos(macroymicrogametocitos). El plasmodio se alimenta de la hemoglobina del eritrocito y el resultado de su degradacin es un pigmento insoluble (pigmento paldico) que queda inicialmente depositado en el citoplasma del parsito y es liberado a la sangre tras la rotura del eritrocito. La rotura de los eritrocitos parasitados es sincrnica y se realiza con intervalos caractersticos para cada especie de plasmodio, dando lugar a la aparicin de los paroxismosfebrilescaractersticosdelpaludismo. El ciclo contina cuando las hembras de Anopheles toman sangre infectada. En el estmago del mosquito todas las formas del parsito son destruidas, excepto los gametocitos.Elmacrogametocitosediferenciaenunmacrogametoyelmicrogametocito se divide para formar 48 microgametos (proceso conocido como exflagelacin). El macrogameto tras la fecundacin se transforma en un oocineto que atraviesa el epitelio estomacal del insecto y se ubica entre aqul y la lmina basal, transformndose en un ooquiste. En el ooquiste se forman millares de esporozotos (no se originan esporoquistes) que tras su liberacin pasan a la cavidad general y, posteriormente, a las glndulas salivales, desde donde sern transmitidas a un nuevo hospedador humano. El ciclo del parsito en el mosquito se realiza en 1035 das, segn la especie y las condicionesambientales. PLASMODIOSHUMANOS Plasmodiumvivax(GrassiyFeletti,1890) Especie difundida tanto en las regiones tropicales como en las templadas y subtropicales.Esresponsabledel40%delpaludismomundial. Sloparasitaenloseritrocitosjvenes,porloquemenosdel2%delasclulasrojas apareceninfectadas.Produceaccesosfebrilescada48horas.Curaespontneamente,sin tratamiento,alos25aos.Puedenpresentarserecadas(recidivas). 51

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ISSN:19893620 PlasmodiumovaleStephens,1922 Se encuentra principalmente en frica tropical, aunque ha sido citada su presencia espordica en otras regiones. Raramente aparecen ms del 2% de las clulas rojas infectadas, por infectar slo a los reticulocitos. Produce accesos febriles cada 48 horas. Curaespontneamente,sintratamiento,en1ao.Puedenpresentarserecidivas. PlasmodiumfalciparumWeich,1897 Especie ampliamente distribuida en zonas tropicales y subtropicales. Representa el 50% de los casos de paludismo. Parasita a todo tipo de eritrocito, por lo que en un frotis pueden verse muchos parsitos. En la sangre perifrica normalmente slo se observan trofozotos y gametocitos. Produce accesos febriles cada 3648 horas. Suele provocar la muertesintratamiento. Plasmodiummalariae(Laveran,1881) Especiepropiadelasregionestropicalesysubtropicales.Esresponsabledel7%del paludismo mundial. Parasita a eritrocitos viejos, por lo que raramente se encuentran infectadasmsdel1%delasclulasrojas.Lainfeccin,sintratamiento,puededurahasta 20aos.Puedenpresentarserecrudescencias. IDENTIFICACINDELPLASMODIO Las diversas especies de Plasmodium pueden ser separadas y diagnosticadas basndose en sus caractersticas morfolgicas y el modo de desarrollarse durante la fase eritrocticaenelhombre. Las caractersticas morfolgicas del parsito a tener en cuenta para el diagnstico sonlossiguientes(Fig.2): a)Aspectodeleritrocitoparasitado aumentoonodeltamao. coloracin. presenciadegranulaciones(Schffner,Maurer,...). existenciadeinfeccionesmltiples

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Figura2.MorfologadelosestadiosdePlasmodiumsp.

b)Caractersticasdeltrofozoto tamao,formaynmerodeparsitosporeritrocito. nmerodencleosporanillo. presenciadeformascondisposicinespecial. aspectoydistribucindelpigmentopaldico. c)Caractersticasdelesquizonte tamaoyforma. nmeroydisposicindelosmerozotos. formaydistribucindelpigmentopaldico. d)Caractersticasdelosgametocitos tamaoyforma. formaydistribucindelpigmentopaldico.

Los caracteres morfolgicos antes mencionados se aprecian bien cuando se utiliza, para teir las extensiones sanguneas, alguno de los colorantes de Romanowsky, como Giemsa,MayGrundwaldoLeishman.Estoscolorantestienelparsitodiferencialmente: de rojo la cromatina nuclear, de azul el citoplasma y pardo negruzco el pigmento paldico. Todotcnicoqueintentediagnosticarelpaludismodebeestarfamiliarizadoconlos diferentes elementos sanguneos y sus alteraciones, a fin de evitar una desafortunada confusin(Fig.3). 53

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Figura 3. Diferentes elementos sanguneos (A) basfilo, (B) eosinfilo, (C) linfocito, (D) monocito, (E) neutrfiloy(F)plaquetas(flechas).

TRABAJODELABORATORIO Lafinalidaddeestasesinprcticaesladeadquirirlosconocimientosbsicospara identificarlosplasmodioshumanosapartirdefrotissanguneos(desangreperifrica)de individuosinfectados. Plasmodiumvivax En un nico frotis sanguneo puede observarse todos los estadios del parsito, es decir,trofozotos,esquizontesygametocitos. Caractersticasdelplasmodioydeleritrocitoparasitado(Fig.5.4) a)Clulahospedadora Aspecto (dimensin y forma): ms grande de lo normal (1 a 2 veces); oval o redondo. Granulaciones: puntos de Schffner presentes generalmente en todos los eritrocitosparasitados,exceptoenlasprimerasformasanulares. Colordelcitoplasma:decolorado,plido. Infeccionesmltiples:enocasiones. 54

Reduca(Biologa).SerieParasitologa.1(1):4962,2008.
ISSN:19893620 b)Trofozoto Joven: forma de anillo con un dimetro aproximado de 1/3 del dimetro del eritrocito. El citoplasma formando crculo alrededor de la vacuola. El ncleo aparececomoungrnulodensodecromatina.

Maduro:formaameboideirregularqueocupacasitodoelcitoplasmadeleritrocito. El citoplasma encierra una o dos vacuolas pequeas. En el citoplasma se pueden apreciarfinosgrnulosdepigmentopardo.

c)Esquizonte Maduro:grandeeirregular,ocupandocasitodoelcitoplasmadeleritrocito.Con16 (12a24)merozotos,dispuestosirregularmente.

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Reduca(Biologa).SerieParasitologa.1(1):4962,2008.
ISSN:19893620 d)Gametocitos Macrogametocito: grande, redondeado u oval. Ncleo compacto y excntrico. Citoplasmahomogneo.Conpigmentofinodecolorpardoclarodifundidoportodo elcitoplasma.

Microgametocito:grande,redondeadouoval.Ncleoconcromatinasincompactar central, que suele teirse dbilmente de rosa o prpura. Citoplasma reducido a un haloplidooincoloro.Pigmentouniformementedistribuidoenpequeosgrnulos.

Plasmodiummalariae Todos los estadios del parsito pueden estar presentes en un mismo frotis, pero las formasanularesjvenessuelenserescasas. Caractersticasdelplasmodioydeleritrocitoparasitado a)Clulahospedadora Aspecto (dimensin y forma): no suele haber modificacin de las dimensiones; a vecespuedenverseeritrocitosparasitadosligeramentemspequeos. Granulaciones: ninguna. En preparaciones teidas en exceso puede observarse un punteadomuyfinodecolorrosaplido(puntosdeZiemann). Colordelcitoplasma:normal. Infeccionesmltiples:raramente. 56

Reduca(Biologa).SerieParasitologa.1(1):4962,2008.
ISSN:19893620 b)Trofozoto Joven: los anillos son muy parecidos a los de P. vivax. Ocasionalmente pueden observarse formas en "ojo de pjaro" (un anillo de citoplasma rodea al ncleo situado centralmente). El pigmento paldico aparece en las primeras formas como grnulosgruesosdecolorpardonegruzco.

Maduro:citoplasmacompacto,oval,redondooenbanda,ocupandogranpartede laclulahospedadora.Pigmentoabundanteenformadegrnulospardonegruzcos voluminosos.

c)Esquizonte Maduro: con 8 (6 a 12) merozotos dispuestos, tpicamente, en roseta y con el pigmentopaldicoenposicincentral.

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ISSN:19893620 d)Gametocitos Macrogametocito: redondeado. Ncleo excntrico. Citoplasma homogneo. Pigmentopaldicoengranosfinosdifundidoportodoelcitoplasma.

Microgametocito: redondeado. Ncleo con cromatina sin compactar, teido muy dbilmente y difcil de discernir; ocupa gran parte del citoplasma. Pigmento paldicodistribuidouniformemente.

Plasmodiumfalciparum En la sangre perifrica normalmente slo se observan trofozotos y gametocitos. Los esquizontes no suelen detectarse (salvo que el paciente se encuentre en extrema gravedad) debido a que se adhieren a las paredes de los vasos internos (no se vern enlaprctica).

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Reduca(Biologa).SerieParasitologa.1(1):4962,2008.
ISSN:19893620 Caractersticasdelplasmodioydeleritrocitoparasitado(Fig.5.6) a)Clulahospedadora Aspecto (dimensin y forma): no hay modificacin ni en dimensiones ni en tamao. Granulaciones: las clulas que contienen trofozotos maduros pueden presentar grnulosdeMaurer,elementosrojosenformadecoma. Colordelcitoplasma:normal,peroavecespresentauntinteazulado. Infeccionesmltiples:comnmente. b)Trofozoto Joven:formadeanillodepequeasdimensiones.Elcitoplasmaesescaso(delgado) y encierra una vacuola pequea. El ncleo es pequeo. Son frecuentes las formas con dos ncleos. Puede haber varios anillos por eritrocito. A veces se observan anillos en el borde del eritrocito (formas aplicadas o accol). El pigmento paldico seobservaenformadegrnulosfinosrepartidosporelcitoplasma.

Maduro: no se suele observar en sangre perifrica, salvo en infecciones graves, ya queeldesarrollodeestafaseserealizaenloscapilaresdelasvsceras. c)Esquizonte No se suele observar en sangre perifrica, salvo en infecciones graves, ya que el desarrollodeestafaseserealizaenloscapilaresdelasvsceras.

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Reduca(Biologa).SerieParasitologa.1(1):4962,2008.
ISSN:19893620 d)Gametocitos Macrogametocito: forma caracterstica de media luna o banana con los extremos puntiagudos o redondeados. El ncleo es compacto y ocupa el tercio medio del citoplasma. El pigmento se distribuye principalmente alrededor del ncleo, en formadegrnulosnegros.

Microgametocito: forma de media luna, similar al macrogametocito, con el que a veces se confunde. El ncleo presenta cromatina difusa y suele ocupar las dos terceras partes del organismo. El pigmento paldico se presenta como en los macrogametocitos.

Plasmodiumovale Todoslosestadiosdelparsitopuedenestarpresentesenunmismofrotis. Caractersticasdelplasmodioydeleritrocitoparasitado(Fig.5.7) a)Clulahospedadora Aspecto (dimensin y forma): hasta un 60% de los eritrocitos parasitados son ovales y tienen mayor dimetro de lo normal y algunos (2030%) tienen los extremosirregularesyrasgados Granulaciones:. granulaciones de Schffner en todas las etapas, desde la aparicin delosprimerosanillos. Colordelcitoplasma:decolorado,plido Infeccionesmltiples:enocasiones 60

Reduca(Biologa).SerieParasitologa.1(1):4962,2008.
ISSN:19893620 b)Trofozoto Joven:esmuyparecidoaldeP.vivax,peromsgrandeymsameboide.Pigmento formandopequeasmasasdecolorpardooscuro(menosqueenP.vivax).

Maduro: generalmente compacto, sin vacuola. Pigmento como en el trofozoto joven.

c)Esquizonte Maduro: relativamente grandes, ocupando hasta 3/4 partes del citoplasma del eritrocito. Con 8 (8 a 12) merozotos colocados en racimos irregulares. Pigmento concentradoenunamasa.

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ISSN:19893620 d)Gametocitos Macrogametocito:similaraldeP.vivaxperomspequeo.

Microgametocito:similaraldeP.vivaxperomspequeo.

BIBLIOGRAFADECONSULTA Ash,L.R.yOriel,T.C.1980.AtlasofHumanParasitology.ASCPPress,Chicago. Ash, L. R. y Oriel, T. C. 1987. Parasites: A Guide to Laboratory Procedures and Identification.ASCPPress,Chicago. Peters, W. y Gilles, H. M. 1989. A Colour Atlas of Tropical Medicine and Parasitology. WolfeMedicalPublications,London. RECURSOSELECTRNICOS MuseovirtualdeParasitologa.FacultaddeCc.Biolgicas.UCM.Madrid,Espaa. http://www.ucm.es/centros/webs/fbio/index.php?tp=Museo%20Virtual%20de%20P arasitologa&a=servicios&d=16028.php

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