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Introduo
Melhoramento gentico tem influenciado:
Adaptabilidade e produtividade dos cultivos. Tcnica gentica molecular: Dcada de 80; Os estudos de identificao, caracterizao e mapeamento gentico, esto sendo realizados com maior segurana, rapidez e eficincia.
Melhoramento gentico
Aspectos fundamentais no programa de melhoramento gentico:
Seleo dos genitores; Mecanismos de herana dos caracteres;
Marcadores Genticos
Qualquer caracterstica morfolgica ou molecular que diferencia indivduos, e que seja facilmente detectvel.
Sucesso no melhoramento depende da capacidade de distinguir fatores genticos herdveis dos ambientais
Marcadores
so
unidades
cromossoma
marcadores
MARCADORES MORFOLGICOS
normalmente
So utilizadas desde os tempos de Mendel, como fentipos de fcil identificao visual, tais como:
O forte efeito dos genes determinantes de marcadores morfolgicos podem afetar a anlise gentica de grande numero de caracteres de importncia agronmica. Poucos caracteres podem ser estudados ao mesmo tempo. O ambiente pode modificar a expresso dos marcadores morfolgicos causando um confundimento na anlise.
Marcadores Gentico-Moleculares:
Viabiliza a caracterizao gentica de grande nmero de procedimentos relativamente simples e rpidos. seleo de genitores superiores; Deteco de marcadores para genes de interesses diversos. Podem ser divididos: Marcadores aloenzimas) baseados em enzimas (isoenzimas e
limitado em nmero.
Marcador de DNA
DNA
Ambiente
DNA
Separao em gel
1
4
Vantagens RFLP
Esto disponveis em grande nmero. Exibem grande variabilidade natural; No so influenciado pelo ambiente; So livres de efeito de epistasia, oque permite a avaliao de diversos marcadores ao mesmo tempo.
RAPD
AA
AA Aa aa
Aa
aa
RAPD - Aplicaes
Habilidade para detectar regies do genoma altamente varivel (5-10 loci por primer)
Mapas genticos com ampla cobertura do genoma Estrutura e diversidade gentica de populaes naturais, (mesmo altamente aparentadas). BAGs Estudos de hibridao inter e intraespecfica. Filogenia entre espcies Seleo assistida para caracteres agronmicos
RAPD - Vantagens
Simplicidade e rapidez - o polimorfismo pode ser detectado direto no gel sem sondas nem istopos radiativos.
RAPD - Limitaes
Dominantes Pouca reprodutibilidade Baixo contedo de informao gentica por loco.
S um alelo detectado. As demais variantes allicas so consideradas conjuntamente como nulas. Deve-se procurar padronizar bem as condies de reao e de amplificao, com uso de controles, alm do registro das bandas ntidas e consistentes.
5 3 5
3 5 3 5
Gentipo 2
3
Sequncia ausente no gentipo 2
G1
G2
Polimorfismo entre gentipos de aveia aps amplificao com primers OPM17, OPM18, OPM19.
RAPD - resumo
Rpido Simples Baixo custo Sem uso de radio-istopos Marcador dominante Problemas de reproducibilidade Problemas de interpretao
Fonte: IPGRI
Microssatlites (SSR)
Sequence-Tagged Microsatlites (STMS) tambm conhecido como microssatlite ou Sequence Repeat (SSR) Normalmente locus simples e multi-allico Simple
Co-dominante
Altamente reprodutvel
Microssatlites (SSR)
altamente informativo - vrios alelos por locos deteco por PCR
Microssatlites (SSR)
ACTTCATTAA TGTCTTAGGT GGCAGAATAC TTTGATGCAA CAATTTCAAG GGGTGCTGAC ATTAAGTTGG CTGCCAATTG GATAATGGGT GATATTGCTG CCTATATGAA AAATGAAAAG CTTTCTATTA ATGAGATCAA ACTTATGCCA GAAGAGCTAG TAGAGCTGAT AGCTTCCATT AAAGGTGGGA CTATCAGTGG AAAGATTGGA AAGGAGGTAA GCATTTGCTT CTTTNACTGA TGCCACTTTC ATGTTCAAAC ATTTGTTAGT AATCCTGTCT ATTTATTTTC ATGGAAGAAT TTTACTAGCT ATTATTCTCC ACTGTGTAGA TGTGATTTTA TAGTTTGTTT GGATATATAA TTATTGTTCG TGTTTTTTTT TTTAATCCAA ACTTTATAAT CTTTCCAAGT GCTTTTCTCC TCCCTGTCTT TTTCCTCTAC CACACACACA CACACACACA CACACTCATA CAGAAAAAGG AAAAAGGAAA GAAAGAGAAC AGGAGATATA AAAACCTTTT TTCTTTATCA ATTAGATAAT TAGTTATAAA AGTTTTTCTC CTGCTTCTTA TCCCTCCGCT AAATGCCTGA TTAACTTTCT GCTGGTAAAG ATTTAAAATA ACTTGTTAAT TTTGGACATG
Primer FOR
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN CACACACACACACACACAC NNNNNNNNN NNNNN NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN GTGTGTGTGTGTGTGTGTG NNNNNNNNNNNNNN
Repetio CA
Primer REV
Microssatlites
Deteco do polimorfismo Gis de agarose Gis de acrilamida (detecta diferenas de at 2pb) colorao direta: nitrato de prata (barato) Colorao indireta: marcao radioativa ou fluorescente
Microssatlites vantagens
Codominante
Multiallico
Mais alto PIC (ndice de informao polimrfico) Populao de estudo no precisa ter reconhecida diversidade gentica Pode-se trabalhar com populao mais informativa, do ponto de vista de caracteres biolgicos ou de interesse econmico; Ampla cobertura do genoma (distribuio ao acaso e freqente)
Microssatlites limitaes
Muito trabalho para desenvolver os marcadores Diversas plantas com hbito algamo e reconhecida diversidade gentica, pode-se usar tcnicas menos onerosas.
Microssatlites (SSR)
Southern blot - clones SSRs positivos 32P
Amplificao insertos clonados
MELHORAMENTO GENTICO
Isoenzimas pouco utilizados em virtude do baixo Nmero de marcadores teis disponveis. SSR muito utilizados no mapeamento gentico, Identificao de gentipos; RAPD cada vez menos utilizados, perdendo espao Para marcadores do tipo AFLP e ISSR , que geram mais Polimorfismo e so mais reprodutveis.