OLHANDO MAIS DE PERTO O VIRUS DA ASA DEFORMADA (DWV Deformed Wing Virus)

American Bee Journal Vol. 147, Nov. 2007 pg. 962 a 964
Baseado na Entrevista com a Microbiologista/Virologista Dra. Elke Genersch1

Diretora do Institute for Bee Research, Hohen Neuendorf; Germany e Chefe do Diagnostics and Microbiology Division.

OLHANDO MAIS DE PERTO O VIRUS DA ASA DEFORMADA

Por Kirsten Traynor

Uma gripe com aparncia de resfriado que deixa o sujeito prostado durante 4 a 5 dias, uma desagradvel diarria que mantm o sujeito preso ao banheiro durante 2 dias, ou um ataque fulminante do corao que ocorre quando o sujeito sai para uma corrida, so, todos trs, diferentes cenrios provocados pelo mesmo vrus Coxsackie B.
Este vrus aparentemente inofensivo, que recebeu o nome de uma pequena cidade do Estado de Nova Iorque onde foi identificado pela primeira vez em matria fecal de crianas em 1948, pode causar sintomas completamente diferentes. A forma como o vrus afeta o homem depende do local do corpo onde ele se aloja. Quando voc ingere o vrus Coxsackie B, ele induz um resfriado ou infecta seu intestino e bao provocando diarria.
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Se voc ingere o vrus, resultando num resfriado, e acontecer de o vrus entrar em seu fluxo sangneo, ele pode passar para outros rgos. Se chegar a seu corao ele se reproduz assustadoramente alertando as clulas brancas do sangue. Estas lanam um ataque sobre as clulas infectadas do corao. O sistema imunolgico sente-se sitiado e entra em colapso, matando tanto as clulas infectadas como as saudveis. Se voc decidir fazer sua corrida diria, enquanto ainda apresentar corrimento pelo nariz, a atividade fsica pode produzir inflamao do msculo do corao, miocardite, que pode provocar batimentos irregulares do corao e morte sbita. Como ningum quer ver uma pessoa aparentemente saudvel soobrar repentinamente os mdicos freqentemente alertam as pessoas com sintomas gripais a evitar a atividade fsica. Situao semelhante ocorre com o vrus da plio, o vrus picorna. Quando ingerido ele entra no trato gastrointestinal onde pode se reproduzir e normalmente ser descartado pelos movimentos do intestino. Em 95% dos casos o vrus sobrevive por pouco tempo na corrente sangnea sem provocar nenhum sintoma clnico.

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Ocasionalmente, porm, o vrus se espalha e se reproduz em outras partes do corpo, incluindo alguns msculos e tecidos. A pessoa apresentar ento sintomas triviais no especficos devido infeco viral como febre, dor de cabea e dor de garganta. Mas, lamentavelmente, em cerca de 1 a 2% das pessoas infectadas o vrus da plio pode entrar no sistema nervoso central e se reproduzir destruidoramente na medula espinhal, no crebro e crtex motor. Esta reproduo em massa rompe o sistema nervoso, provocando paralisia temporria ou permanente. Mas o que tem a ver toda esta conversa sobre vrus no homem com o Vrus da Asa Deformada (Deformed Wing Virus - DWV)? Ela ajuda a explicar que o mesmo vrus pode provocar sintomas muito diferentes, dependendo da parte do corpo que ele conseguiu invadir. As abelhas que parecem saudveis, que no apresentam sintomas clnicos como asas deformadas, abdmens diminudos e descoloramento podem ainda assim serem portadoras do DWV. Em 2005 o Dr. Constanze Yue e a Dra. Elke Genersch do Institute of Bee Research Hohen Neuendorf na Alemanha descobriram que as abelhas s apresentam os sintomas clnicos se o DWV estiver em suas

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cabeas. Abelhas que no apresentam os sintomas clnicos freqentemente so portadoras do DWV em seus abdmenes e trax, mas nunca em suas cabeas. Em 2007 Yue et a.l reformularam sua concluso com base em novas pesquisas. Usando a tcnica do RTPCR ocasionalmente so encontrados traos de DWV nas cabeas de abelhas que no apresentam seus sintomas. Eles acreditam que isto pode explicar a existncia do DWV na gelia real produzida pelas glndulas hypofaringeanas localizadas na cabea da abelha. Porm, o sinal do DWV para as abelhas que no apresentam os sintomas muito fraco quando comparado com o sinal para as abelhas com sintomas de asas deformadas. (Ver Fig. 1)

Instituto Hohen Neuendorf para Pesquisa sobre Abelhas: Este prdio nos arredores de Berlim abriga as 6 Virus da Asa Deformada

instalaes do Hohen Neuendorf para as pesquisas sobre abelha. Antes de sua reconstruo, a pesquisa permitia disseminar as informaes aos apicultores da antiga Alemanha Oriental. Atualmente o Hohen Neuendorf foi reformado para o trabalho de procriao do Dr. Bienefeld. Recentemente o Hohen Neuendorf conseguiu destaque pelo excelente trabalho realizado pela Dr. Elke Genersch sobre o vrus da Cria Pdrica Americana.

Assim, por que as abelhas infectadas pelo DWV nem sempre apresentam sintomas clnicos? O vrus que chamamos de Virus da Asa Deformada provavelmente existe desde muito tempo antes de ter provocado asas deformadas. Os vrus so alguns dos mais antigos arqutipos do universo e grassavam no espao antes de existirem os organismos monocelulares. As primeiras abelhas devem ter aparecido h aproximadamente 80 milhes de anos atrs. Desde ento os vrus e as abelhas, seu anfitrio, tiveram bastante tempo para desenvolver um sistema equilibrado que lhes permitiu coexistir pacificamente. Os vrus permitem o florescimento do anfitrio no provocando nenhum sinal externo da doena. (Os virologista de insetos chamam esta situao de infestao dissimulada, porque sem os sintomas a invaso do vrus DWV, como uma operao de espionagem dissimulada, efetuada na clandestinidade.) As "abelhas
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saudveis", por sua vez, se multiplicam e enxameiam, produzindo novas geraes de abelhas infectadas pelo vrus. A transmisso vertical permite que o vrus passe prosperamente de uma gerao para outra. Transmisso vertical do virus ocorre quando ele passa do anfitrio para sua descendncia. O vrus s pode se transferir a um novo anfitrio se o anfitrio atual sobreviver e se reproduzir. Assim, na transmisso vertical de interesse do prprio virus se manter benigno com o passar do tempo, permitindo que seu anfitrio floresa e produza descendncia prspera. Agora, no caso da abelha, surge a questo, quem transmite o DWV: a rainha pelos ovos ou o zango pelo esperma? O laboratrio de pesquisa Hohen Neuendorf se props a pesquisar o assunto. Foram selecionadas aleatoriamente oito rainhas virgem de colnias diferentes que pareciam saudveis. Cada uma foi confinada numa pequena colnia livre de varroa at a rainha comear a botar ovos no fertilizados. Foram analisados vinte e quatro destes ovos de cada uma das rainhas virgens. Das oito rainhas, cinco produziram ovos DWV-negativos, significando que o vrus no foi encontrado em seus ovos;
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duas rainhas produziram s ovos DWV-positivos, enquanto a ltima rainha produziu 21 ovos negativos e 3 positivos.

Foi coletado esperma de zanges oriundos de quatro colnias aparentemente saudveis. Considerando que um zango produz uma quantidade limitada de esperma os pesquisadores coletaram o esperma de cinco zango de cada uma das quatro colnias. A metade de cada batelada foi analisada para a presena de DWV. A outra metade foi usada para inseminao instrumental das rainhas virgens. Dois grupos eram DWV-negativos, enquanto os outros dois grupos eram positivos. Foram analisados, tambm, o testculos, vesculas seminais e glndulas vesiculares de todos os zanges que forneceram semen. Surpreendentemente todas as trs partes do corpo eram DWV-positivo em todos os zanges, embora o esperma de dois deles eram DWV-negativo.
Abelhas com asas deformadas Abelhas que no apresentam os sintomas Trs abelhas que no apresentam os sintomas com fraco sinal RNA de vrus na cabea (raramente identificado at hoje)

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abdmen

abdmen

abdmen

abdmen

Para identificar como o DWV transmitido, se pelos ovos ou pelo esperma, a equipe realizou o seguinte cruzamento entre as rainhas virgens previamente testadas e os zanges: 1. (-/-) ovo de rainha DWV-negativa no fertilizada com esperma DWV-negativo (2 rainhas). 2. (-/+) ovo de rainha DWV-negativa no fertilizada com esperma DWV-positivo (3 rainhas). 3. (+/-) ovo de rainha DWV-positiva no fertilizada com esperma DWV-negativo (1 rainha). 4. (+/+) ovo de rainha DWV-positiva no fertilizada com esperma DWV-positivo (1 rainha). (A rainha que tinha posto ovos no fertilizados positivos e negativos tambm foi inseminada com esperma positivo.) Todas as rainhas, quando inseminadas com esperma
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abdmen

cabea

cabea

cabea

cabea

cabea

trax

trax

trax

trax

trax

DWV-positivo, mesmo que anteriormente tinham posto ovos no fertilizados DWV-negativos ou DWV-positivos, punham agora ovos fertilizados DWV-positivos. Assim se o esperma DWV-positivo todos ovos fertilizados sero DWV-positivos. Mas o fato de o ovo fertilizado ser positivo no significa, necessariamente, que a abelha operria ser positiva. Obviamente, voc no pode analisar o ovo e depois analisar a operria criada a partir daquele ovo, uma vez que o ovo destrudo no processo de anlise. Voc pode, porm, analisar vrios ovos fertilizados e posteriormente analisar operrias criadas da mesma colnia. A maioria dos ovos fertilizados com esperma de zango DWV-positivo se desenvolveram em operrias DWV-positivas no abdmen e/ou no trax. Mas, surpreendentemente, duas operrias de um cruzamento -/+ foram DWV-negativas na cabea, trax e abdmen. Embora os ovos fertilizados das suas irms tivessem sido DWV-positivos negativas. A descendncia de operrias de uma rainha -/apresentava freqentemente caractersticas DWV-positivas
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as

operrias

adultas

foram

DWV-

na cabea ou no trax. Assim, de onde elas receberam o DWV se no foi nem do esperma nem do ovo? Se conclue que o DWV deve estar presente tambm na comida larval. A comida larval passada da operria para a cria da mesma gerao o que significa que a comida larval prov os meios para a transmisso horizonral. Isto tambm pode explicar por que todos os zanges eram DWV-positivos, embora alguns viessem de ovos DWV-negativos. Quando o vrus passa horizontalmente entre os membros da mesma gerao no h necessidade de ele esperar pela reproduo bem sucedida do hospedeiro, o que permite que o virus se torne mais virulento com o tempo. Embora transmitido horizontalmente pela comida larval, o DWV no provocou nenhua manifestao dos sintomas clnicos at o aparecimento do caro da varroa. Antes da chegada do caro o DWV era uma infeco dissimulada, "definida como situao em que o vrus est presente no anfitrio sem a manifestao de sintomas claros da doena". Desde que a varroa invadiu nossas colmias, muitas colnias apresentaram os sintomas clnicos, enquanto outras pareciam sobreviver apesar da presena do caro em grande nmero. Inmeros so os
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relatos que informam como as colnias antigamente sobreviviam presena macissa de caros, por vezes da ordem de 10.000 por colnia. Agora o limite aceitvel caiu drasticamente. A presena de 3.000 caros indica normalmente que a colnia est condenada. O que alterou o quadro to drasticamente para as abelhas sucumbirem to facilmente a uma infesto muito menor? Para desvendar o quadro, convem analisar abelhas que nunca hospedaram o caro. Vinte e quatro abelhas coletadas no norte de Sucia onde o caro no foi at hoje identificado, foram analisadas no que se refere ao DWV. 40% da amostra estava infectada pelo DWV, mas somente no trax e abdmen. Em contrapartida, 100% das abelhas alems que estavam expostas ao caro desde 1976 eram DWV-positivo no trax e no abdmen.

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Tecnologia de PCR: Uma preta, pequena, imperceptvel e azul mquina postada sobre uma escrivaninha no laboratrio de biologia molecular de Hohen Neuendorf permite Dr. Elke Genersch identificar os virus em partes especficas do corpo. Polymerase Chain Reaction (PCR) se tornou rapidamente uma das tcnicas mais largamente utilizadas em biologia molecular. Ela permite ao investigador criar cpias de fragmentos especficos de DNA, inclusive genomas de virus, ampliando uma nica molcula de DNA rapidamente em muitos bilhes de molculas.

Mais

surpreendente,

as

abelhas

alems

que

apresentaram os sintomas clnicos tambm eram DWVpositivas na cabea! Ou seja de modo semelhante ao virus Coxsackie B e o vrus plio, a localizao do vrus altera os sintomas manifestados pelo hospedeiro. Assim surge a pergunta, como o DWV invade a cabea de abelhas que
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apresentam os sintomas? Os sintomas do DWV s aparecem quando os caros esto presentes, mas no existe uma correlao entre a intensidade de infestao pelo virus e o aparecimento dos sintomas de asas deformadas. Assim Yue e Genersch decidiram analisar com mais detalhes a varroa, por parecer que a parcela de caros que transmite o virus no sempre igual. Quando eles analisaram quatro colmias a hiptese se provou correta. (Ver Tabela 1). Numa colnia a infestao pelo caro era muito alta (2402 caros), mas no era possvel encontrar uma nica abelha deformada. Embora todas as abelhas desta colmia eram DWVpositivas, s 45% dos caros eram positivos. Uma segunda colmia com infestao semelhante, mas ligeiramente menor (2048 caros), apresentava abelhas deformadas. Nesta colmia, 100% dos caros eram DWV-positivos. Duas outras colmias, com baixas infestaes pelo caro (9 e 50 caros respectivamente), tambm possuiam 100% dos caros DWV-positivo, mas nenhuma abelha apresentava os sintomas. Por que nestas colmias no existia nenhuma abelha deformada? Devia-se to somente baixa infestao pelo caro? Ou havia alguma diferena
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fundamental nos caros? Parece que alguns caros so muito mais virulentos do que os outros. Os caros coletados das abelhas deformadas apresentaram maior quantidade de vrus DWV multiplicadores, enquanto entre os caros de abelhas que no apresentavam os sintomas a proporo de virus multiplicadores era bem menor. Abelhas deformadas tambm portavam o DWV replicadores na cabea, trax e abdmen, enquanto a maioria das abelhas sem sintomas no portavam. Porm, quando eles analisaram abelhas sem sintomas mas com altos nveis de DWV, eles encontraram alguns replicadores no trax e no abdmen, mas nunca na cabea. O nmero total de caros que invade a colnia no um indicador claro do dano que eles podem infligir nas abelhas como pensvamos ns. Os caros freqentemente portam DWV, mas a distribuio do vrus entre os caros no constante. Parece que os caros evoluram se tornando um vetor para o virus ao possibilitar sua transmisso horizontal. Considerando que o vrus pode passar de um hospedeiro para outro sem esperar pela reproduo prspera da abelha, ele pode se arriscar
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tornando-se mais virulento. Enquanto a comida larval s trocada

horizontalmente dentro de uma nica colnia, os caros podem invadir uma nova colnia atravs das pilhadoras ou trocando de hospedeiro enquanto as forrageadoras de colmias diferentes trabalham numa mesma flor. Isto possibilita que o caro portador do DWV transmita o virus horizontalmente de uma colnia infetada para uma colnia completamente nova. O vrus pode, assim, se arriscar e se tornar mais virulento porque, at mesmo quando seu hospedeiro morrer, o vrus transmitido a um hospedeiro saudvel novo pelo caro.

Dr. Elke Genersch (esquerda) & a Autora: Depois de uma longa entrevista, visitaram uma cafetera tpica de Viena Kirsten Traynor 17

em Hohen Neuendorf para continuar as discusses saboreando um delicioso pedao de bolo caseiro e uma taa de caf.

Mas como um vrus se torna mais virulento? O DWV um vrus RNA, o que significa que quando se reproduz, no tem um sistema embutido de comprovao para se certificar que a cpia uma reproduo perfeita. Isto permite ao vrus produzir muitas cpias imperfeitas, conhecidas como mutaes. Algumas destas mutaes podero ser inviveis, devido aos "erros" na sua codificao. Mas alguns "erros" podem trazer ao vrus uma vantagem, permitindo que se reproduza mais rapidamente ou infecte um novo transmissor no caro. Estas novas mutaes bem sucedidas criam mais cpias e mutaes, permitindo ao vrus se tornar mais e mais virulento.

Abelha deformada: Esta abelha operria emergiu com asas deformadas. A Dra. EIke Genersch descobriu que as abelhas com sintomas visuais de asas deformadas portam o Vrus Asa Deformado m suas cabeas. Abelhas deformadas 18 Virus da Asa Deformada

normalmente so evitadas por outras operrias.

Abelha Deformada Morta: Esta abelha deformada com abdmen tipicamente encurtado nunca emergeria do seu alvolo. Quando ela foi retirada de seu alvolo, vrios caros maduros podiam ser vistos rastejando sobre dela.

O trabalho sobre vrus nas abelha ainda est em sua infncia. Muita pesquisa precisa ser feita, assim pode evoluir para um quadro mais claro. Enquanto isso os apicultores precisam manter as populaes de caros sob controle, de forma que at mesmo se caro DWV-positivo invadirem suas colnias, podero ser dados passos para os controlar antes que suas abelhas apresentem os sintomas e as colnias entrem em colapso. Cada colnia que colapsa coloca no meio ambiente uma onda de caros que infectaro outras colnias. Se existirem outros apicultores em sua vizinhana, voc deve trabalhar para que todos controlem a populao de caros. Caso contrrio, voc pode estar dando todos os
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passos certos mas poder sofrer um reinfestao a partir de uma colmia vizinha em colapso. A monitorao natural dos caros ainda um mtodo mais efetivo por averiguar a presena de caros nas colnias. Um aumento sbito no nmero de caros depois de um tratamento efetivo um alerta para uma possvel reinfestao e alerta para tomar medidas apropriadas para salvar a colnia.

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