O si gni fi cado bi olgi co da clula de S ertoli na espermatognese

M.L. Pereira*, F. Garcia e Costa**

* Departamento de Biologia, Universidade de Aveiro ** Seco de Histologia e Anatomia Patolgica, Faculdade de Medicina Veterinria, Universidade Tcnica de Lisboa

Editado por: Clara Pinto Correia

Resumo
As c lulas de S ertoli s o um grupo de c lulas som ticas localizadas no epit lio semin paro. Neste trab alh o s o descritas algumas das suas caracter sticas morf olgicas relacionadas com o papel relevante q ue desempenh am na espermatog nese. Assim,s o ref eridos os aspectos citolgicos e ultrastruturais ligados s suas f unes de suporte e nutri o dos elementos da linh a germinativa e os q ue se prendem com as importantes f unes q ue exercem na evolu o e regula o da gametog nese masculina. D se particular nf ase ao signif icado das c lulas de S ertoli na f orma o e manuten o da b arreira h ematotesticular,dado o papel f ulcral q ue a mesma tem no desenvolvimento normal dos espermatozides e a importncia das suas alteraes em numerosos processos toxicolgicos.

Introduo
As c lulas de S ertoli s o c lulas som ticas q ue f azem parte, conj untamente com as c lulas da linh a germinativa, do epit lio q ue reveste os tub os semin f eros. As c lulas germinativas aloj amse em compartimentos delimitados pela memb rana das c lulas de S ertoli, mantendo com ela estritas relaes morf olgicas e f uncionais. Representam, aps a pub erdade, cerca de 1 0 % das c lulas do epit lio semin f ero e ocupam uma posi o estrat gica no mesmo. A sua disposi o, a ntima rela o com os elementos da linh a germinativa e actividade secretora, controlada e controladora de f actores h ormonais q ue condicionam a espermatog nese,f az com q ue desempenh em um papel crucial no desenvolvimento deste processo.

Morfologia das clulas de Sertoli

As c lulas de S ertoli s o c lulas som ticas q ue assentam na memb rana b asal do tub o semin f ero e atingem a superf cie do epit lio. S ob asicamente prism ticas ou piramidais, com cerca de 7 0m

de altura, embora os seus contornos se apresentem muito irregulares devido presena de numerosos recessos laterais onde se alojam os elementos da linha espermatognica ou seminal. (J gou 1992 ; Fawcett 1994). Constituem, aps a puberdade, cerca de 10% das clulas do tubo seminfero ocupando uma posio estratgica que lhes permite um ntimo contacto com todos os elementos da linha germinativa, situados entre a membrana basal e a luz do mesmo. Ao microscpio de luz (ML) o citoplasma da clula de Sertoli claro e est preenchido pelos elementos da linha germinativa, no sendo possvel observar os seus contornos. O n cleo, bem visvel nas preparaes histolgicas, apresenta contorno oval ou elipside, claro e tem um nuclolo bem evidente (Fawcett 1994). Embora o n cleo esteja em regra prximo da base da clula, a sua posio e a forma varia nas diferentes associaes celulares da linha espermatognica (Cross e Mercer 1993). Em microscopia electrnica de transmisso (TEM), observa-se que o invlucro nuclear se apresenta frequentemente endentado, com uma invaginao, cujo eixo maior perpendicular membrana basal. O nucleoplasma claro e contm um nuclolo caracterstico, de tipo reticular, associado a duas massas de heterocromatina (Cross e Mercer 1993; Fawcett 1994). O estudo da ultrastrutura destas clulas revela tambm, no citoplasma, um retculo endoplsmico rugoso (RER) pouco desenvolvido enquanto que o liso (REL) abundante sob a forma de redes de t bulos, situadas principalmente junto base da clula. P or vezes o REL apresenta-se organizado em cisternas que envolvem gotculas lipdicas (Fawcett 1994). As mitoc ndrias, de ultrastrutura tpica, tm forma esfricas ou so alongadas dispondo-se, neste caso, perpendicularmente membrana basal do tubo seminfero. O complexo de Golgi est bem desenvolvido. No citoplasma observam-se ainda grnulos de glicognio, lisossomas primrios e secundrios e gotculas lipdicas. Na espcie humana, a poro basal do citoplasma da clula de Sertoli apresenta corp sculos fusiformes, denominados incluses de Charcot-Bottcher, visveis ao ML. O citosqueleto constitudo por duas redes de filamentos de actina, uma na zona subjacente membrana plasmtica e outra envolvendo o n cleo; feixes de filamentos intermdios dispem-se paralelamente ao eixo maior da clula e, em certas fases da espermatognese, encontram-se numerosos microt bulos na zona supranuclear, paralelos aos mesmos. O grande desenvolvimento do citosqueleto est relacionado com o papel das clulas de Sertoli nos movimentos dos elementos da linha germinativa (Fawcett 1994).

A barreira hemato-testicular
Ainda ao nvel ultrastrutural, observa-se que as pores apical e laterais da clula de Sertoli apresentam um contorno irregular (Fig. 1). So evidentes reentrncias e prolongamentos destas clulas, como foi j referido, que formam compartimentos onde se alojam os elementos da linha germinativa. Estas caractersticas no so visveis ao ML o que levou os antigos histologistas a postular a existncia de um sinccio ser toliano. A TEM levou ao abandono deste conceito revelando que as clulas de Sertoli esto separadas e demostrando as junes que ligam os prolongamentos de duas clulas contguas.

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Figura 1 - Desenho esquemtico de uma seco do tubo seminfero, mostrando a organiz ao das clulas de Sertoli (S ) e clulas germinativas em vrios estdios de desenvolvimento (G ); (L ) Luz do tubo seminfero; (B) barreira hemato-testicular.

Ao microscpio electrnico foi ainda possvel observar que as clulas de Sertoli se ligam s da linhagem seminal atravs de especializaes juncionais caractersticas (ODonnell et al., 2000). As extenses citoplasmticas das clulas de Sertoli contactam com as das clulas adjacentes, atravs de complexos juncionais. Esto descritas junes do tipo g ap ou nex u s e ainda de tipo ad h er ens. Alm destas so muito importantes as junes de ocluso. Estas ltimas constituem a base morfolgica de uma barreira (Fig. 2) - a b ar r eir a h ematotesticu lar - a qual impede a

passagem de macromolculas entre o sangue, atravs do lquido situado no espao intersticial, e a luz do tubo seminfero. Criam-se assim dois compartimentos: - o basal, localizado entre aquelas junes e a membrana basal do tubo seminfero - o adluminal, acima das junes e em contacto com a luz do tubo. No primeiro situam-se as espermatognias e os espermatcitos na fase de preleptteno; no segundo todos os outros elementos da linha germinativa.

Figura 2 Ultrastrutura da barreira hemato-testicular de ratinho ( 30 000x

), evidenciando os elementos constituintes.

Vrios tm sido os estudos efectuados no mbito da caracterizao morfo-funcional da barreira hemato-testicular (Setchell 198 0; Heshmati el al., 198 4; Tindall et al., 198 5 ; Pelletier and By ers 1992; Jgou 1992; Ploen and Setchell 1992; Carreau et al., 1994; Pelletier 1995 ;I shizak a and Oshima 1997). I sto porque uma das funes mais importantes das clulas de Sertoli precisamente originar aqueles compartimentos onde se formam microambientes indispensveis espermatognese (Griswold 1995 ; 1998 ). Esta compartimentao isola as clulas onde ocorrem as fases meitica e ps-meitica da espermatognese as quais se processam no compartimento

adluminal. Por outro lado, os produtos de secreo das clulas de Sertoli, assim como os das clulas germinativas em meiose, determinam a composio do meio existente naquele compartimento, podendo influenciar o desenvolvimento destas ltimas. As junes entre as clulas de Sertoli modificam-se de modo a permitir a passagem dos espermatcitos em preleptteno do compartimento basal para o adluminal, quando estes iniciam a meiose, o que significa que existe uma dinmica das j un es que permite que as clulas envolvidas no processo da espermatognese caminhem no sentido da luz do tubo seminfero, sem ruptura da barreira (Lui et al., 2001). Estudos experimentais recentes demonstraram que a modificao das protenas associadas s junes de ocluso est na base do aumento da permeabilidade da barreira hemato-testicular, observada em vrias situaes experimentais e patolgicas (Tao et al., 2000; W iebe et al., 2000). Nestes casos ocorre alterao da espermatognese como consequncia da desorganizao do citosqueleto da clula de Sertoli. No estudo da barreira hemato-testicular a integridade da mesma pode ser demonstrada atravs de traadores. Assim, a funcionalidade desta barreira pode ser posta em evidncia, em bipsias testiculares, atravs da utilizao de traadores adicionados s solues fixadoras. Dentro destes contam-se o nitrato de nquel (Cavicchia et al., 1992), a peroxidase de rbano (Pereira 1995) e o nitrato de lantnio (Levy et al., 1999). Assim, em situaes normais em que a espermatognese no est afectada, as especializaes juncionais impedem a difuso do traador para o compartimento adluminal. Noutros casos o traador difunde-se livremente em direco ao lmen, tal como acontece em algumas situaes patolgicas (Meyer et al., 1996; Chung and Cheng 2001).

Papel das clulas de Sertoli na espermatognese

As clulas de Sertoli desempenham outros papis importante na espermatognese, alm da sua interveno na formao da barreira hemato-testicular, anteriormente referida. Fornecem o suporte estrutural e metablico necessrio s clulas germinativas e controlam a nutrio das mesmas durante a espermatognese, dado o seu ntimo contacto que com elas estabelecem. Fagocitam e digerem o citoplasma residual das espermtides, resultante da espermiognese. Estes fragmentos de citoplasma so tambm designados de corpos residuais. Digerem ainda clulas germinativas em degenerescncia. O grande nmero de lisossomas primrios, secundrios e tambm de aglomerados de pigmentos lipocrmicos, presentes no citoplasma, traduz esta intensa actividade digestiva (Fawcett 1994).

Tm tambm uma intensa actividade secretora, embora esta funo varie com a maturidade sexual. Participam na produo do fluido que serve para o transporte dos espermatozides. Nos tubos seminferos de animais que atingiram a maturidade sexual as clulas de Sertoli segregam numerosas protenas. No sobrenadante de culturas enriquecidas em clulas de Sertoli, foram identificadas mais de 10 protenas cuja secreo sensvel, entre outros, a estmulos hormonais. Uma dessas protenas, a androgen-binding proein (ABP) sabe-se que se liga testosterona e hidroxitestosterona segregada pelas clulas intersticiais, sendo um importante factor para a maturao das clulas seminais. Uma outra protena importante segregada pelas clulas de Sertoli a transf errina testicular, indispensvel maturao das clulas germinativas. O Fe da transferrina testicular resulta da captao, por receptores existentes na membrana da clula de Sertoli, da transferrina srica. A clula de Sertoli alm de sintetizar esta nova protena frrica, transporta-a em seguida para o compartimento adluminal. Demonstrou-se que a quantidade desta protena sintetizada pelas clulas de Sertoli estimulada pelo contacto com clulas da linha germinativa e que este estmulo varia com os estdio de desenvolvimento daquelas clulas (Cross and Mercer 1993; Fawcett 1994). Este facto demonstrativo da sensibilidade das clulas de Sertoli a factores provenientes das clulas da linha germinativa, para alm de hormonas como a testosterona e da FSH hipofisria. Por sua vez as clulas de Sertoli produzem uma protena, a inibina , com aco supressora da sntese da FSH pela hipfise. As clulas de Sertoli controlam ainda o movimentos das clulas da linha germinativa. O grande desenvolvimento do citosqueleto, j referido e que inclui abundantes filamentos de actina, filamentos intermdios e microtbulos, prende-se com este aspecto funcional. Alis a forma das clulas de Sertoli e a localizao do ncleo variam, como j se referiu, com os movimentos das clulas germinativas, que durante o processo de maturao se deslocam da base para o lume do tubo seminfero, ficando, numa fase final da espermatognese, as espermtides, j diferenciadas em espermatozides, ligadas, pela regio da cabea, parte apical das clulas de Sertoli. Na libertao dos esrmatozides para a luz do tubo seminfero, a espermia o, so ainda as clulas de Sertoli o factor determinante.

Aco de substncias txicas sobre as clulas de Sertoli

As clulas de Sertoli so susceptveis aco de numerosas substncias txicas, nomeadamente pesticidas e metais pesados, conduzindo morte das clulas germinativas (Boekelheide et al., 2000; Monsees et al., 2000). Vrios tm sido os dados da literatura que se referem a alteraes morfolgicas e funcionais destas clulas induzidas por xenobiticos. Assim, alguns afectam o

citoesqueleto das clulas de Sertoli (Hess and Nakai 2000; Raychoudhury et al., 2000). Outros induzem a condensao da cromatina dessas clulas somticas (Raychoudhury et al., 1999). Contudo, a alterao mais evidente em vrias situaes experimentais corresponde vacuolizao do citoplasma (Soldani et al., 1996; Contreras and Bustos-Obregon 1999). Adicionalmente, a modificao da permeabilidade da barreira hemato-testicular constitui ainda um alvo de extrema importncia em disfunes do testculo (Meyer et al., 1996; Wiebe et al., 2000; Mizushima et al., 2001).

Consideraes finais
Como ficou referido, a clula de Sertoli desempenha um papel fundamental na espermatognese (suporte mecnico, nutrio e movimento das clulas germinativas, regulao parcrina atravs da sntese de protenas, fagocitose, sntese e metabolismo de hormonas esterides e espermiao) contribuindo decisivamente para este processo. Sendo uma clula afectada em numeroso processos de intoxicao, as suas leses so nestes casos um factor primordial na patogenia das perturbaes da gametognese. Apesar da profundidade dos conhecimentos j obtidos sobre as clulas de Sertoli e o significado biolgico da barreira hemato-testicular, estes continuam a ser objecto de intensa investigao. Novas tcnicas, nomeadamente de biologia molecular, esto a ser utilizadas no desenvolvimento dos conhecimentos nesta matria.

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