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MINISTRIO DA CINCIA, TECNOLOGIA E INOVAO CONSELHO NACIONAL DE CONTROLE DE EXPERIMENTAO ANIMAL CONCEA

DIRETRIZES DA PRTICA DE EUTANSIA DO CONCEA

Braslia/DF 2013 1

______________________________________________________________________ Estas diretrizes se referem exclusivamente aos procedimentos de eutansia realizados com fins cientficos ou didticos.

1. Definio de eutansia Eutansia, do grego eu bom - e thanatos morte -, constitui-se no modo humanitrio de matar o animal, sem dor e com mnimo desconforto. a prtica de causar a morte de um animal de maneira controlada e assistida para alvio da dor e/ou do sofrimento. Neste caso, a eutansia se justifica, para o bem do prprio indivduo, em casos de dor ou sofrimento, a partir de um determinado nvel, que no podem ser mitigados de imediato, com analgsicos, sedativos ou outros mtodos ou quando o estado de sade ou bem-estar do animal impossibilite o tratamento ou socorro (de acordo com o 1 do art. 14 da Lei n 11.794, de 2008). Para facilitar as recomendaes destas diretrizes, o termo eutansia ser utilizado em todos os casos, ou seja, tanto quando se induz a morte para o bem do prprio indivduo quanto para fins cientficos, uma vez que as tcnicas so similares.

2. Critrios a serem adotados para eutansia Estas diretrizes objetivam estabelecer procedimentos que evoquem o mnimo de dor e sofrimento com a realidade da maioria dos estabelecimentos onde a eutansia realizada. Deve-se consultar profissional(is) com experincia na rea e grupos taxonmicos envolvidos para assegurar a adequao da tcnica, ou no caso de Biotrios, de acordo com a Resoluo Normativa no 6, de 10 de julho de 2012, os procedimentos de eutansia devem ser supervisionados, mesmo que no de forma presencial, pelo Responsvel Tcnico pelo Biotrio, que deve ter o ttulo de Mdico Veterinrio com registro ativo no Conselho Regional de Medicina Veterinria da Unidade Federativa em que o estabelecimento esteja localizado. Estas diretrizes foram criadas baseando-se no princpio de que a dor s reconhecida a partir de um estmulo nociceptivo, isto , quando o crtex cerebral e estruturas subcorticais forem funcionais. Por outro lado, quando o animal se encontra no estado de inconscincia, no ocorre a percepo da dor. Desta forma, o mtodo de eutansia no to crtico quando o animal se apresentar inconsciente ou anestesiado, desde que a conscincia no seja restabelecida antes do bito.

______________________________________________________________________ Do mesmo modo que outros procedimentos que envolvem os animais, alguns mtodos de eutansia requerem conteno fsica do animal, realizada de acordo com a espcie, raa, tamanho, estado de domesticao, comportamento, presena de dor e/ou doenas, grau de excitao e mtodo de eutansia. Por esta razo, a manipulao correta do animal fundamental para minimizar a dor e o sofrimento, para assegurar a segurana do pessoal envolvido e para proteger terceiros e outros animais. Os critrios comumente adotados para indicao de eutansia de uma forma individualizada so: animais gravemente feridos, com impossibilidade de tratamento, animais com doenas terminais em intenso sofrimento e animais idosos na falta de recursos para atender s suas necessidades. Entretanto, outras situaes de induo da morte podem ocorrer, como, por exemplo, o abate humanitrio de animais para consumo alimentar e quando os animais forem produzidos ou mantidos para propsitos cientficos ou didticos. O abate humanitrio para o consumo alimentar regido por legislao especfica do Ministrio da Agricultura Pecuria e Abastecimento ou outra que a venha substituir. No caso de induo da morte para fins cientficos, o mtodo empregado deve ser o mesmo utilizado para eutansia, ou seja, de uma forma indolor e sem sofrimento mental. Desta forma, como mencionado anteriormente, o termo eutansia ser utilizado para a ao de causar a morte, sem sofrimento e sem dor, de animais utilizados para propsitos cientficos e didticos. Em todos os casos anteriormente descritos, o mesmo mtodo deve ser utilizado para causar a morte do animal, independente da razo, exceto, em condies excepcionais, quando os animais so mortos como parte de um protocolo experimental e o mtodo tiver de ser compatvel com os fins cientficos. No caso especfico, o mtodo deve ser aprovado pela Comisso de tica no Uso de Animais - CEUA da Instituio, sem conflito com as diretrizes aqui estabelecidas. Em casos de estudos cientficos, necessrio estabelecer, antes do incio do estudo, critrios para o desfecho e induo de morte dos animais, como, por exemplo, o tamanho do tumor e o sofrimento fsico e psquico, no sentido de haver uma interveno imediata para evitar sofrimento desnecessrio. Em circunstncias no includas nestas Diretrizes, deve-se consultar profissional(is) com experincia na rea e grupos taxonmicos em questo, para selecionar as tcnicas aceitveis, bem como observar a legislao vigente poca sobre o tema especfico.

______________________________________________________________________ 3. Condies necessrias para eutansia do ponto de vista do executor A eutansia exige consideraes morais e ticas para que a prtica seja realizada de forma humanitria. A exposio constante dos tcnicos ao procedimento de eutansia pode afet-los psicologicamente sob diversas formas. Causar a morte de animais difcil do ponto de vista psquico, particularmente quando ocorre de forma frequente e resulta no envolvimento do executor com os animais. As circunstncias mais comuns do efeito emocional da eutansia nas pessoas se caracterizam quando h necessidade de causar a morte de um grande nmero de animais e de forma repetida. Alguns indivduos podem estabelecer mecanismos psquicos de defesa, de modo a reduzir a empatia e o respeito no manuseio dos animais, podendo outros experimentar um sentimento de pesar e tristeza pela perda da vida. Os envolvidos no devem trabalhar sob presso ou estar obrigados a praticar a eutansia. A pessoa responsvel pela eutansia deve ter conhecimento tcnico, usar mtodos humanitrios de manuseio, entender o motivo pelo qual o animal est sendo morto, estar familiarizado com o mtodo e estar informado sobre a finalidade a que se destinar o corpo do animal aps a morte. A participao ou exposio constante aos procedimentos de eutansia pode provocar alteraes na sade fsica e mental dos envolvidos, causar um estado psquico de profunda insatisfao com o trabalho e alienao, que pode se expressar em absentismo, agressividade, depresso ou falta de cuidado com os animais. Da a necessidade de adotar medidas relativas segurana, qualificao e preservao da sade do trabalhador, que considerem os aspectos ticos, psicolgicos e fsicos que envolvam rotineiramente os funcionrios nestas atividades. Como exemplo, deve-se estabelecer um programa institucional para minimizar o problema, como o acompanhamento peridico de profissionais credenciados para superviso de apoio e para garantir a estabilidade emocional dos envolvidos. A conscientizao dos profissionais que realizam a eutansia facilita sobremaneira o manejo, reduzindo o trabalho com os animais, no que concerne agressividade destes e favorece o bem-estar do animal. Devem-se desenvolver atividades interativas entre a equipe, prover rodzio de servio e entretenimento. Para realizao de eutansia, necessria qualificao especfica que abranja formao tcnica, tica e humanitria. O executor que realizar o procedimento deve possuir experincia e qualificao tcnica comprovada sobre o(s) mtodo(s) proposto(s), 4

______________________________________________________________________ conhecimento da(s) espcie(s), de mtodos humanitrios de conteno e das possveis respostas que inter-relacionem os mtodos e as espcies. Do ponto de vista do executor que realizar o procedimento, o mtodo deve ser visualmente aceitvel e de baixo risco para si e para equipe. Tambm se deve considerar o cuidado no uso e armazenamento dos frmacos, de acordo com a legislao especfica, para evitar o risco potencial do abuso do consumo de frmacos classificados como entorpecentes. 4. Condies necessrias para eutansia do ponto de vista do animal A eutansia no se limita apenas ao momento da morte. Todo o processo desde o alojamento dos animais conteno fsica deve ser cuidadoso para minimizar ao mximo o sofrimento, o medo, a ansiedade e a apreenso. A manipulao dos animais deve ser cuidadosa e, muitas vezes, conversar com o animal durante a eutansia pode ter um efeito calmante em animais acostumados com o manuseio. O uso de baixa luminosidade e um ambiente livre de rudos tambm deve ser preconizado. A sedao e a anestesia facilitam o processo. Os animais devem ser mortos em um ambiente silencioso, limpo, longe de outros animais e, preferencialmente, no local onde eles vivem. Um animal no deve assistir a eutansia de outro, devendo o cadver ser retirado do ambiente e o local, bem como os objetos utilizados serem limpos antes da entrada do prximo animal. Se os animais forem deslocados de seu ambiente, deve-se garantir acesso a alimento e gua at o momento da morte. Animais que no vivem em grupos devem ser submetidos eutansia individualmente. Os animais selvagens, com injria ou previamente estressados, so um desafio parte. Vrios mtodos utilizados em circunstncias normais podem ser inadequados e consideraes especiais devem ser levadas em conta, por meio de consulta a profissionais experientes no manuseio da(s) espcie(s). Devem-se minimizar ao mximo os estmulos visuais, auditivos e tteis. Quando houver dificuldade de conteno fsica ou risco para os operadores, deve-se realizar conteno qumica com sedativos e/ou analgsicos e/ou anestsicos. A via de injeo deve causar mnimo estresse e o uso de dardos e armas de captura podem ser necessrios. Nestes casos, pode ser til o uso de frmacos por via oral, misturados nos alimentos ou gua. A expresso da dor pode ser muito sutil nos animais. O fato de os animais no aparentarem dor, no indica que estes no esto sofrendo o fenmeno. necessria uma

______________________________________________________________________ qualificao especfica para o reconhecimento da dor, mesmo para tcnicos e profissionais experientes com a espcie. A expresso facial e posturas corporais indicam vrios estados emocionais. Algumas respostas comportamentais e fisiolgicas a um estmulo considerado nocivo incluem: vocalizao, ato de se debater, tentativas de escapar, agresso, salivao, mico, defecao, secreo de glndulas adanais, dilatao da pupila (midrase), aumento da frequncia cardaca (taquicardia) e respiratria (taquipnia), sudorese, tremores, espasmos e contraes musculares e timpanismo, no caso dos ruminantes. O medo pode causar paralisia em certas espcies, particularmente em coelhos, ovinos e aves. Tal ocorrncia no deve ser interpretada como perda da conscincia. A vocalizao, a alterao de comportamento e a liberao de odores ou feromnios por parte dos animais sob estresse podem causar ansiedade e apreenso em outros animais, da a importncia da ausncia de outros animais no ambiente. Da mesma forma quando do uso de cmaras de inalao, as mesmas devem ser limpas aps a morte de cada animal ou grupo de animais para assegurar que os demais no se exponham a resduos que desencadeiem sinais olfatrios de alarme. Do ponto de vista do animal, deve-se avaliar a compatibilidade do mtodo com a espcie, idade e seu estado de sade. O mtodo deve ser confivel, irreversvel e compatvel com as necessidades. Sistemas automatizados para fornecimento de agentes inalatrios podem oferecer vantagens para causar a morte simultnea de um grande nmero de animais, como os roedores. A eutansia de fetos e formas larvais deve ser considerada de modo especial, de acordo com a espcie e o tempo de gestao. De forma geral, ao confirmar a morte da gestante, os fetos tambm vo apresentar bito na sequncia. Entretanto, por serem mais resistentes hipxia podem apresentar um tempo maior de sobrevida. Desta forma no aconselhvel exteriorizar os fetos e induzir a morte de forma individual, pois o incio da respirao pode desencadear a conscincia. Caso sejam removidos, a morte deve ser induzida o mais rpido possvel e, caso permaneam vivos, deve-se assegurar o aquecimento e cuidados necessrios para a manuteno da vida. Os neonatos so muito resistentes ao efeito do CO2 e de outros agentes que causam hipxia. Neste caso outros mtodos devem ser utilizados, como, por exemplo, o deslocamento cervical em camundongos. Os fetos com idade maior que dois teros da 6

______________________________________________________________________ gestao e neonatos devem ser submetidos aos mesmos mtodos de eutansia que o os congneres adultos da mesma espcie, sempre que possvel.

5. Confirmao da morte do animal imperativa a confirmao da morte antes do descarte do animal, pois animais inconscientes podem parecer mortos, entretanto, podem se recuperar, o que inaceitvel. Todos os sinais a seguir devem ser associados para confirmar a morte do animal: ausncia de movimento respiratrio (apneia); ausncia de batimentos cardacos (assistolia), preferencialmente, por meio do uso de estetoscpio, ou equipamento que o substitua, como, por exemplo, doppler-ultrassom; ausncia de pulsao, mucosas plidas e perda do reflexo corneal ou queles apropriados para a espcie. A confirmao da morte deve ser realizada por profissional qualificado para tal fim. Em determinadas situaes, mais de um mtodo pode ser utilizado para eutansia; um que resulte em perda de conscincia e, o outro, que garanta a morte. Caso haja alguma dvida a respeito da morte do animal, um segundo mtodo deve ser utilizado. Quando a eutansia for realizada por dois mtodos consecutivos, como, por exemplo, o uso de CO2, pistola de dardo cativo ou deslocamento cervical, um segundo mtodo, como a exsanguinao, ou decapitao, deve ser aplicado imediatamente aps a insensibilizao e antes de o animal restabelecer a conscincia. Para animais fetais ou recm-nascidos, dois fatores devem ser levados em considerao ao escolher o mtodo de eutansia: os animais so mais resistentes a hipxia e a biotransformao dos frmacos mais lenta. Portanto, dois mtodos aceitveis para a espcie devem ser combinados e a morte deve ser confirmada utilizando os sinais descritos anteriormente.

6. Sumrio das diretrizes para eutansia Um mtodo adequado de eutansia deve: 1) 2) Tratar o animal com o mximo de respeito; O manejo pr-eutansia deve ser baseado nas caractersticas comportamentais de

cada espcie, no sentido de minimizar o risco de ansiedade, dor ou leses, antes da perda da conscincia; 7

______________________________________________________________________ 3) O mtodo deve ser selecionado para que a morte ocorra sem dor e sofrimento fsico e

mental; 4) O mtodo de eutansia deve produzir imediata perda da conscincia, seguido de

parada respiratria e cardaca e perda da funo cerebral; 5) O mtodo de eutansia deve ser apropriado para a espcie, idade e estado de sade

do animal; 6) 7) Deve-se confirmar a morte aps a eutansia e antes do descarte do cadver; As pessoas envolvidas no ato de matar devem ser qualificadas e ser competentes para

realizar o mtodo de forma efetiva e humanitria, reconhecer a dor e o sofrimento nas espcies em que atua, reconhecer e confirmar a inconscincia e morte do animal; 8) Ao selecionar um mtodo de eutansia, deve-se levar em considerao o impacto

psicolgico do pessoal envolvido, mas a prioridade sempre o bem-estar do animal; 9) As Comisses de tica das Instituies de Ensino e Pesquisa so responsveis pela

aprovao ou no do mtodo de eutansia em todas as pesquisas e aulas que envolvam o uso de animais; 10) Deve-se consultar profissional(is) com experincia na rea e nos grupos taxonmicos

em questo, para selecionar o melhor mtodo de eutansia, particularmente, se houver pouca informao para a espcie animal envolvida; ou no caso de Biotrios, de acordo com a Resoluo Normativa no 6, de 10 de julho de 2012, os procedimentos de eutansia devem ser supervisionados, mesmo que no de forma presencial, pelo Responsvel Tcnico pelo Biotrio, que deve ter o ttulo de Mdico Veterinrio com registro ativo no Conselho Regional de Medicina Veterinria da Unidade Federativa em que o estabelecimento esteja localizado. 11) Quando do uso de anestsicos inalatrios, as condies devem ser bem controladas e

o equipamento submetido manuteno e calibrao regulares; 12) Como forma de se assegurar que o procedimento seja realizado de forma eficiente e

humanitria, sempre que possvel, deve-se realizar um rodzio entre profissionais treinados para este fim.

______________________________________________________________________ 7. Modos de ao dos mtodos de eutansia. Os agentes usados para a eutansia atuam por trs possveis mecanismos: 1) hipxia direta ou indireta, 2) depresso neuronal e/ou 3) interrupo da atividade cerebral e destruio de neurnios vitais. No primeiro mecanismo (1), os agentes devem causar inconscincia antes da perda da atividade motora. A perda da atividade motora no pode ser equiparada perda da conscincia e ausncia de estresse. Desta forma, agentes que induzem paralisia muscular sem a perda da conscincia, como os bloqueadores musculares, no so aceitos de forma isolada para eutansia. Outras tcnicas que induzem hipxia podem desencadear atividade reflexa caracterizada por atividade motora aps a inconscincia, o que no acarreta sofrimento no animal. Os agentes que deprimem os neurnios cerebrais (2) causam inconscincia seguida de morte. Alguns destes agentes podem causar uma fase inicial de excitao ou delrio, quando ocorrem vocalizao e contraes musculares, seguido de inconscincia, depresso respiratria e parada cardaca por hipoxemia. A interrupo da atividade cerebral e destruio de neurnios vitais (3) podem ser causadas por concusso (trauma craniano), destruio direta do crebro ou despolarizao eltrica dos neurnios, que induz rpida inconscincia. A morte ocorre por destruio dos centros que controlam as atividades respiratria e cardaca ou pelo uso de mtodos adicionais ou complementares, como, por exemplo, a exsanguinao, para completar a eutansia. Pode ocorrer atividade muscular exacerbada aps a inconscincia e, apesar do aspecto desagradvel para o observador, o animal no apresenta sofrimento.

8. Mtodos de eutansia Um mtodo adequado de eutansia deve garantir a perda da conscincia de forma rpida, irreversvel e desprovida de experincia emocional ou fsica desagradvel, ou seja, o animal no deve apresentar dor, estresse, apreenso ou ansiedade. Independente do mtodo de eleio, a inconscincia deve anteceder a parada cardiorrespiratria, seguida da perda da funo cerebral. As caractersticas ideais de um mtodo de eutansia so: capacidade de causar a morte de forma rpida, sem dor, sofrimento, ansiedade e apreenso; irreversibilidade; confiabilidade; compatibilidade com os objetivos e necessidades, como exame post morten e 9

______________________________________________________________________ uso de material biolgico, bem como com a espcie, idade e estado de sade; fcil execuo e aprendizado; execuo com eficincia pela equipe disponvel; segurana para o pessoal envolvido; causar mnimos efeitos emocionais no executor que realiza o procedimento e observadores; custo vivel; viabilidade, quando for o caso, da disponibilidade do frmaco/substncia e possibilidade de se manter equipamento em condies adequadas. Aps o uso, o cadver deve ter um destino seguro e dentro das normas preconizadas pela legislao ambiental, para prover segurana para o pessoal envolvido com o descarte da carcaa e para que outros animais no possam ter acesso a ela. So consideradas caractersticas inaceitveis nos mtodos de eutansia: mtodos cruentos, uso de vcuo, uso isolado de miorrelaxantes e animal consciente antes da parada cardaca e respiratria. A seleo do mtodo de eutansia depende da espcie animal envolvida, da idade do animal, dos meios de conteno disponveis, da habilidade do executor que realizar o procedimento, do nmero de animais a serem mortos e do objetivo do protocolo. Os mtodos de eutansia podem ser divididos em fsicos ou qumicos. Dentre os qumicos, os mais frequentes so os agentes injetveis ou inalatrios. Normalmente, os agentes qumicos, como os anestsicos gerais injetveis ou inalatrios so preferveis, quando comparados aos mtodos fsicos, como o deslocamento cervical e decapitao. Entretanto, o propsito do estudo cientfico pode obstar o uso dos primeiros. Como princpio geral, os animais devem ser mortos pelo mtodo mais humanitrio para a espcie. Caso o mtodo de eutansia afete os resultados da pesquisa e possa inviabilizar as avaliaes, pode-se usar um mtodo aceito com restrio, sob aval da CEUA, desde que todas as precaues necessrias sejam tomadas para minimizar qualquer impacto sobre o bem-estar do animal. Se houver suspeita, mas sem evidncia, que um mtodo recomendado possa influenciar os dados, a necessidade de utilizar um mtodo alternativo deve ser validada em um estudo piloto. Ao utilizar um mtodo fsico de eutansia, o procedimento deve ser apropriado espcie e a aplicao do mtodo deve ser precisa. A experincia e a prtica do operador e a eficincia dos equipamentos utilizados tambm so crticas para a humanizao do procedimento. O pessoal deve ter qualificao e ser capacitado para manusear os animais e aplicar o mtodo de eutansia de uma forma que minimize estresse nos animais.

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______________________________________________________________________ As tabelas 1 e 2 resumem os mtodos de eutansia de acordo com a espcie, que podem ser classificados como "recomendados", "aceitos com restries" ou "inaceitveis". Os mtodos recomendveis so os preferidos, por causarem pouco ou nenhum sofrimento e se enquadrarem dentro das caractersticas ideais previamente descritas, particularmente por causar a morte de forma consistente e humanitria quando usado de forma isolada. O mtodo aceito com restrio aquele que no atende a todos os critrios ideais, por uma ou mais razes, conforme descritos a seguir: no produzir inconscincia to rpida quanto necessria; requerer habilidade e tcnica especficas e, portanto, maior possibilidade de erro; ser visualmente desagradvel; apresentar consideraes ocupacionais de sade e segurana associadas ao mtodo; ou no haver documentao cientfica conclusiva sobre o mtodo. Tais mtodos podem ser aceitos pela CEUA, se: plenamente justificados para o objetivo cientfico; a pessoa responsvel apresentar comprovada habilidade e qualificao para o emprego do mtodo; e for considerado o devido cuidado sade e segurana ocupacionais. Um mtodo inaceitvel se no se enquadrar nos critrios ideais e, por conseguinte, causar sofrimento nos animais, no ser humanitrio ou apresentar outros problemas significativos associados ao seu uso. Outros mtodos alm dos citados nas tabelas 1 e 2 podem ser utilizados em animais inconscientes, desde que estes no restabeleam a conscincia antes do bito, podendo tambm ser utilizados os mtodos usados para abate humanitrio, de acordo com legislao especfica do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento ou que a substitua, no caso de animais de produo paralelamente usados para fins cientficos.

8.1. Mtodos qumicos Baseiam-se no uso de substncias qumicas, preferencialmente, agentes anestsicos, e podem ser subdivididos em injetveis ou inalatrios. O uso de frmacos controlados deve ser supervisionado pelo mdico veterinrio, mesmo que no de forma presencial. Podem ser empregados isoladamente, por sobredosagem das substncias em relao s doses consideradas anestsicas para cada espcie, ou associados a outros mtodos que assegurem o bito aps a perda da conscincia. Quando o mtodo de escolha for injetvel, a via

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______________________________________________________________________ preferencial intravenosa. No entanto, dependendo da espcie, outras vias podero ser preconizadas. Quando considerada a via intraperitoneal, levando-se em conta que os barbitricos (como, por exemplo, o tiopental e o pentobarbital), apresentam um pH alcalino em soluo e, desta forma, podem produzir irritao ou dor, sugere-se a adio de lidocana ou outro anestsico local soluo a ser injetada. Sempre que possvel, deve-se realizar jejum prvio, para evitar regurgitao e aspirao do contedo gstrico. 8.1.1. Agentes inalatrios Pelo fato de o agente inalatrio ter de atingir uma concentrao alveolar para ser efetivo, esta tcnica leva algum tempo para induzir a inconscincia no animal. Quando a morte induzida pelos anestsicos inalatrios for lenta, um segundo mtodo deve ser aplicado para garantir a morte de forma rpida, antes que o animal restabelea a conscincia. A adequao do mtodo depende se o animal passa ou no por um perodo de estresse entre o tempo de incio da inalao do agente e o tempo at a perda da conscincia. Agentes que induzam convulso antes da perda da conscincia so inaceitveis. Algumas caractersticas comuns dos agentes inalatrios so: 1) quanto maior a concentrao administrada, mais rpida a perda da conscincia e mais humanitrio o mtodo, exceto o CO2; 2) deve-se garantir a manuteno adequada e peridica do equipamento; 3) os agentes apresentam diversos riscos sade humana, como exploso (ter), narcose (anestsicos inalatrios como o isofluorano), hipoxemia (nitrognio e monxido de carbono), vcio (xido nitroso, isofluorano) e efeitos crnicos

(teratogenicidade, mutagenicidade), da a necessidade de se disponibilizar um sistema antipoluio; 4) as concentraes alveolares aumentam lentamente em animais com hipoventilao ou que retm a respirao (ex. rpteis), sendo que, nestes casos, outros mtodos devero ser considerados para estas espcies; 5) os agentes inalatrios apresentam um longo perodo de latncia at causarem a inconscincia em neonatos, que mais prolongado em relao aos adultos, dada a maior resistncia hipxia, com diferenas, de acordo com o mtodo, de 10 minutos ou mais, no sendo indicados, dessa forma, em animais abaixo de 16 semanas de idade, a menos que seja para induzir inconscincia e seja complementado com outro mtodo a seguir; 7) o rudo emitido pela entrada dos gases pode 12

______________________________________________________________________ causar ansiedade e desconforto e, desta forma, o equipamento usado deve minimizar este problema; 8) os animais agrupados na mesma cmara devem ser da mesma espcie e, se necessrio devem ser contidos separadamente para no machucarem a si ou aos outros; 9) rpteis, anfbios, animais que mergulham e alguns mamferos podem reter a respirao e apresentar metabolismo anaerbico, prolongando sobremaneira o tempo at inconscincia, o que sugere que outros mtodos deveriam ser utilizados nestas espcies. Os anestsicos ou agentes inalatrios de escolha para eutansia devem induzir um rpido incio de ao, para causar pronta perda da conscincia e, portanto, mnimo desconforto. O odor deve ser agradvel ou, pelo menos, no ser irritante, e a segurana do funcionrio e do local deve ser considerada. Ao se utilizarem estes agentes para causar a morte simultnea de um grupo de animais, recomenda-se que em todas as vezes sejam introduzidos animais de mesma idade e que seja limitado o nmero de animais na cmara. Agentes de efeito lento, como o ter, no devem ser utilizados, pois o frmaco inflamvel e explosivo, irritante para as mucosas, alm do fato de que a disponibilidade de ter dietlico difcil e de que o ter sulfrico altamente txico para o homem. Os gases inalatrios mais utilizados para causar a morte de um grupo de animais so o monxido de carbono, o nitrognio, o argnio, o dixido de carbono (CO2). Estes gases so facilmente disponveis, inertes, inodoros, no inflamveis ou explosivos e de baixo custo. Produzem efeito rpido. Entretanto, apresentam restries do ponto de vista humanitrio, bem como podem causar danos sade dos operadores, como hipoxemia e efeitos crnicos, e risco de exploso no caso do monxido de carbono. O uso de nitrognio e argnio aceito, em casos excepcionais, apenas para aves. O uso de monxido de carbono vedado para qualquer espcie. A concentrao do agente utilizado para causar a morte varia na literatura cientfica. Se, por um lado, necessria uma rpida exposio a uma alta concentrao do agente, para induzir rpida inconscincia, por outro, particularmente no caso do CO2, altas concentraes deflagram intensa irritao das vias areas. A exposio a anestsicos inalatrios aversiva em roedores e pode ser estressante para outras espcies, como ces, gatos, fures e coelhos. Em algumas circunstncias, aconselhvel o uso prvio de sedativos. A cmara de eutansia deve ser grande o suficiente para permitir que o(s) animal(is) apoie(m) os membros e tenha(m) espao para virar(em) e ajustar(em) a postura. O sistema 13

______________________________________________________________________ de fornecimento do gs ou anestsico inalatrio deve garantir um controle da concentrao utilizada, particularmente com o uso de CO2.

8.1.1.1. Anestsicos inalatrios Dentre os anestsicos inalatrios mais indicados esto o halotano, o isofluorano e o sevofluorano. O halotano apresenta o menor custo e odor agradvel. Entretanto, possui a desvantagem de ser biotransformado em at 20% pelo ser humano, o que causa risco a sade dos operadores. O isofluorano apresenta efeito mais rpido que o halotano. Entretanto, seu odor pungente desagradvel e os animais podem reter a respirao, o que prolonga um pouco o tempo at a perda da conscincia. Entretanto, a biotransformao do isofluorano quase insignificante no ser humano (ao redor de 0,7%) e, portanto, mais seguro para o pessoal envolvido que o halotano. Dada a sua menor potncia, necessita de concentrao em torno de 60% maior que a do halotano para os animais atingirem a inconscincia. O sevofluorano possui odor aceitvel, efeito mais rpido que o isofluorano e baixa biotransformao para o ser humano. Entretanto, seu custo mais alto. O desfluorano apresenta efeito mais rpido que todos os anteriores. Entretanto, sua baixa potncia, que requer altas concentraes, odor pungente e custo alto, so fatores limitantes para o seu uso. Os anestsicos inalatrios podem ser embebidos em algodo ou disponibilizados sob a forma de vapor. No primeiro caso, para pequenos roedores, o algodo embebido com anestsico pode ser colocado em um recipiente fechado juntamente com o animal, idealmente com uma separao fsica entre o animal e o algodo, para evitar o contato direto do animal com o lquido no algodo, dada a irritao das mucosas, fazendo com que o animal seja exposto apenas ao vapor. No segundo caso, o anestsico fornecido, diludo em oxignio, por um vaporizador utilizado em anestesia inalatria, na maior concentrao possvel. Esta tcnica pode ser utilizada em animais maiores, como ces, gatos e animais silvestres, mas, para tal fim, uma cmara especfica deve ser utilizada ou por meio do uso de mscara em circuito anestsico aberto aps prvia sedao. Os agentes inalatrios apresentam algumas questes ocupacionais para os seres humanos, como maior incidncia de aborto espontneo, teratogenicidade, mutagenicidade e problemas respiratrios. Para evitar tal risco, devem-se utilizar sistemas de exausto, para minimizar o contato dos operadores com os anestsicos. 14

______________________________________________________________________ Vantagens: so indicados para animais abaixo de 7 kg ou em casos de dificuldade de venopuno; o halotano, isofluorano, sevofluorano e desfluorano no so inflamveis e nem explosivos nas concentraes utilizadas. Desvantagens: os animais podem se debater e apresentar excitao; h risco sade dos operadores e possibilidade de vcio; o ter um mtodo inaceitvel, pois, alm de causar irritao das vias areas e desencadear longo tempo at a morte, inflamvel e explosivo. Desta forma, pode ocorre exploso quando os cadveres so colocados em refrigeradores ou freezer e quando colocados em incineradores. Recomendaes: em ordem de preferncia, deve se utilizar halotano (vantajoso para o animal, mas no para o operador, dada a alta biotransformao no ser humano), isofluorano, sevofluorano e desfluorano para animais abaixo de 7 kg. Recomendvel: classes Amphibia e Reptilia, das espcies que no retm a respirao, seguido de outro mtodo de eutansia; Osteichthyes (peixes sseos) e Chondrichthyes (peixes cartilaginosos) seguido de outro mtodo de eutansia; classes Aves e Mammalia que no retm a respirao.

8.1.1.2. Dixido de carbono (CO2) Apesar de o CO2 apresentar efeito analgsico e anestsico geral em altas concentraes, no um mtodo humanitrio para nenhuma espcie. Concentraes a partir de 40-50% so desagradveis para os seres humanos, pois levam formao de cido carbnico nas mucosas e acima de 50% so nocivas. Tal fenmeno tambm ocorre nos animais. Em contrapartida, o tempo at a inconscincia inversamente proporcional concentrao utilizada. Diversos efeitos adversos so observados em ces, como dispneia, ataxia, espasmos musculares, mico, salivao, defecao, contraes tnicas e convulses, o que torna este mtodo inaceitvel nesta espcie. Apesar de o CO2 ser listado como um mtodo de eutansia, dados recentes o questionam, pois h alto risco de comprometer o bem-estar animal, quando utilizado em concentraes e taxa de preenchimento da cmara inadequados. Desta forma, o uso do CO2 como um agente de eutansia, bem como a sua forma de administrao, ainda est em debate.

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______________________________________________________________________ No deve ser empregado em peixes e anfbios, devido acidez da substncia e manuteno prolongada da atividade cerebral. Da mesma forma, no deve ser empregado em lagomorfos (coelhos), rpteis e animais que mergulham, bem como em sunos. Frangos tambm exibem sinais de averso, dor e sofrimento quando do uso de CO2. Vantagens: ausncia de odor; rpida depresso do sistema nervoso central; facilidade de aquisio, quando envasado em cilindros; custo vivel; no inflamvel e no explosivo; poucos danos sade do executor que realizar o procedimento; ausncia de resduos no animal, caso usado para consumo; no altera os marcadores colinrgicos e a concentrao de cortisol. Desvantagens: densidade maior que a do ar, o que torna necessrio o uso de uma cmara de pequena altura, para evitar que os animais assumam posio bpede; concentraes acima de 40% levam formao de cido carbnico nas mucosas, o que causa dor e sofrimento; altas concentraes (<80%) podem provocar leso do trato respiratrio cranial e do pulmo; altas concentraes causam estresse e sofrimento aos animais e, por outro lado, baixas concentraes no so eficazes; o tempo at o efeito prolongado em neonatos; alguns animais, como os peixes, animais que mergulham e que se enterram, apresentam alta tolerncia; no indicado para rpteis e anfbios, pois estes apresentam uma baixa frequncia respiratria; o mtodo mais lento que outros agentes inalatrios e intravenosos. Recomendaes: O CO2 no deve ser usado quando outros mtodos puderem ser utilizados para a pesquisa. O CO2 utilizado principalmente em roedores em cmaras especficas e s pode ser utilizado desde que haja possibilidade de mensurar as concentraes de CO 2. Para causar a morte em roedores deve-se preencher a cmara com um fluxo de 100% de CO2 na ordem de 20% do volume da cmara por minuto e manter o fluxo por pelo menos 1 minuto aps a morte clnica. Quando do uso de CO2, o excesso de gs deve ser eliminado na poro superior da cmara, paralelamente ao aumento gradual da concentrao de CO2, de forma que no ocorra pressurizao interna, nem entrada de ar ambiente na cmara. Cmaras grandes podem requerer mltiplas entradas de CO2 para garantir a difuso homognea. O uso de vlvulas de aquecimento em cmaras de fluxo contnuo e prolongado do gs evita a formao de gelo seco dentro das vlvulas e sistemas de regulao. Deve-se confirmar a morte dos animais antes de usar ou descartar o cadver, j que a reverso da conscincia pode ser rpida. Alguns roedores podem apresentar apneia, conferindo a falsa impresso de morte. A confirmao da morte deve ser realizada por mltiplos mtodos, como descrito anteriormente. S pode ser utilizado quando armazenado em cilindros, em equipamentos 16

______________________________________________________________________ com programa regular de manuteno e desde que a concentrao de CO2 fornecida ao(s) animal(is) seja mensurada. Recomendvel: nenhuma espcie Aceito com restrio (desde que as recomendaes anteriores sejam seguidas): aves e Rodentia (com exceo de neonatos)

8.1.1.3. Nitrognio e o argnio Estes agentes atuam por induo de hipoxemia. Compem 78% e 1% do ar ambiente, respectivamente. O uso de 98,5% de nitrognio por 45 a 60 segundos causa inconscincia em 76 segundos, confirmado pelo eletroencefalograma (EEG) e bito em 5 minutos em ces. Os sinais observados aps inconscincia so: hiperventilao, dispneia, vocalizao, convulso e tremores musculares. O uso prvio de acepromazina no aconselhado, j que prolonga sobejamente o tempo at o bito, chegando a 51 minutos. Desta forma, o uso destas substncias altamente questionvel do ponto de vista humanitrio, j que o nitrognio causa morte lenta e sofrimento considervel e o argnio no indicado para roedores. Vantagens: facilmente disponveis em cilindros; no inflamveis ou explosivos; baixo custo; baixo risco aos operadores. Desvantagens: a perda da conscincia ocorre apenas aps hipoxemia e hiperventilao, o que causa angstia respiratria; a sedao prorroga muito o tempo at o bito. Recomendaes: o nitrognio e o argnio causam estresse em algumas espcies, como os roedores; o mtodo requer concentraes de oxignio inferiores a 2% alcanadas rapidamente, o que difcil, e os animais devem estar em sedao profunda ou anestesiados. Entretanto, nestes casos, o tempo at a morte pode ser prolongado. Desta forma, um mtodo inaceitvel para roedores. aceito com restrio apenas para causar a morte de frangos. Neste caso, deve-se assegurar que a concentrao de CO2 seja menor que 30% e de O2 <2%. Este mtodo s apropriado quando for possvel a mensurao da concentrao de O2. O excesso de gs deve ser eliminado da cmara, de forma que no ocorra pressurizao interna, nem entrada de ar ambiente na cmara. S pode ser utilizado quando armazenado em cilindros e em equipamentos com programa regular de manuteno. Outros mtodos de eutansia so preferveis. 17

______________________________________________________________________ Recomendvel: nenhuma espcie. Aceito com restrio (desde que as recomendaes anteriores sejam seguidas): frangos.

8.1.1.4. Monxido de Carbono O monxido de carbono (CO) incolor, inodoro, no inflamvel, nem explosivo em concentraes de at 10%. Combina-se com a hemoglobina, formando a

carboxihemoglobina e bloqueia a captao de O2 pelos eritrcitos, com consequente hipoxemia fatal. No homem, os sintomas mais comuns frente a uma exposio inicial ao CO cefaleia, tontura, fraqueza, seguido, quando do aumento da concentrao de CO, de diminuio da acuidade visual, zumbido no ouvido, nusea, depresso progressiva, confuso mental, colapso e morte. A perda da conscincia pode ser acompanhada de convulso e espasmos musculares. Nos seres humanos, exposies de 0,32% a 0,45% de CO, por uma hora, induzem inconscincia e morte. Desta forma, este agente extremamente perigoso para o operador, devido alta toxicidade e dificuldade de deteco, pelo fato de ser inodoro e incolor. Adicionalmente, a exposio crnica de baixas concentraes desencadeia alteraes cardiovasculares e efeitos teratognicos. Mesmo quando do uso de cilindros de CO, este mtodo deve ser evitado pelo alto risco sade dos envolvidos. Inaceitvel: todas as espcies.

8.1.2. Agentes injetveis Dentre todos os mtodos, os agentes injetveis so os mais indicados para eutansia na maioria das espcies, pois, desde que o manejo prvio seja realizado de forma adequada, apresentam efeito rpido e confivel; no causam sofrimento fsico e emocional para o animal; so de baixo risco aos operadores; apresentam uma maior probabilidade de irreversibilidade; confiabilidade; menor custo; e melhor aspecto esttico em relao ao uso de agentes inalatrios e mtodos fsicos. As suas desvantagens so a necessidade de conteno individual dos animais e necessidade de experincia para administrao. Quando a conteno fsica do animal, para se realizar a administrao, for difcil ou causar estresse a ele ou risco ao operador, deve-se proceder previamente conteno qumica por outra via que no a injetvel. 18

______________________________________________________________________ Quando a via intravenosa for impraticvel para a eutansia, a via intraperitoneal pode ser utilizada. Considerando que pela via intraperitoneal os animais permanecem por tempo mais prolongado no estgio II (de excitao), estes devem ser colocados em espaos pequenos e em silncio para evitar traumas. As vias de administrao mais apropriadas para cada grupo taxonmico esto especificadas nos itens correspondentes. Qualquer frmaco que produza um estado de anestesia geral pode ser utilizado. Entre os de uso mais comum destacam-se o tiopental, o pentobarbital, a embutramina e o propofol. Desde que a inconscincia tenha sido confirmada, os anestsicos gerais podem ser seguidos por mtodos complementares, como bloqueadores neuromusculares e/ou cloreto de potssio, que causam apneia e assistolia, respectivamente. Em nenhuma hiptese os bloqueadores neuromusculares e/ou cloreto de potssio devem ser utilizados em animais sem a confirmao da inconscincia.

8.1.2.1 Barbitricos Os barbitricos causam depresso do Sistema Nervoso Central - SNC, com mnimo desconforto, desde que a injeo seja rpida. Aps a inconscincia, ocorre apneia e assistolia, como consequncia da hipxia. Estes efeitos ocorrem por depresso do crtex cerebral, centros respiratrio e vasomotor, respectivamente. Dentre os barbitricos, o pentobarbital possui a vantagem de apresentar maior durao de ao que o tiopental e, portanto, menor probabilidade de reverso do efeito. Vantagens: os barbitricos so anestsicos tradicionais, de efeito rpido, suave e com mnimo desconforto para os animais. So potentes depressores do SNC, cujos efeitos so amplamente conhecidos e previsveis. O baixo custo e a estabilidade da soluo reforam a recomendao dos barbitricos serem eleitos a melhor opo para eutansia de animais de vida terrestre. Desvantagens: pode ocorrer respirao agnica em animais j inconscientes, o que pode ser visualmente desagradvel e a permanncia do frmaco no cadver pode causar sedao nos animais que consomem a carcaa. Desta forma, o descarte do cadver deve ser adequado. Recomendaes: o mtodo de eutansia mais indicado para mamferos em geral. Na impossibilidade de uso intravenoso, nas condies citadas anteriormente, pode-se administrar por via intraperitoneal, desde que a soluo seja misturada com lidocana (10 mg/mL) ou outro anestsico local. Em aves, a via intracelomtica no utilizada na rotina 19

______________________________________________________________________ devido presena dos sacos areos, o que a torna esta via restrita a aves maiores, que deve ser realizada por profissionais experientes. Recomendvel: todas as espcies

8.1.2.2. Outros anestsicos injetveis O propofol, etomidato, metomidato ou embutramina tambm podem ser utilizados para eutansia e apresentam caractersticas e indicaes muito similares dos barbitricos. A embutramina comercialmente disponvel em associao a um miorrelaxante perifrico e um anestsico local. Estes frmacos podem ser administrados exclusivamente por via intravenosa. Recomendvel: todas as espcies.

8.1.2.3. Agentes injetveis aceitveis apenas como mtodo complementar Os anestsicos dissociativos no devem ser utilizados como agentes nicos para realizao de eutansia porque no promovem inconscincia, mas apenas dissociao do crtex cerebral. Podem causar excitao, catalepsia e convulso em altas doses e a dose letal muito alta. Entretanto, podem ser utilizados para conteno qumica de animais indceis, seguidos de complementao com anestsicos gerais. O cloreto de potssio deve ser precedido de anestesia geral (confirmao da inconscincia). Os operadores devem ter qualificao especfica e conhecimento das tcnicas anestsicas para serem competentes para confirmar a inconscincia. Os bloqueadores neuromusculares causam paralizao, dose dependente, da atividade muscular esqueltica, podendo provocar a cessao da respirao por paralisia dos msculos respiratrios. Portanto, s podem ser utilizados estando os animais sob anestesia geral profunda. O hidrato de cloral causa lenta depresso cerebral. Desta forma, a conteno pode ser difcil para alguns animais. A morte ocorre por hipoxemia, resultante de depresso progressiva do centro respiratrio, e pode ser precedida por respirao ofegante, espasmos musculares e vocalizao. inaceitvel como mtodo nico, devido a seus efeitos adversos

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______________________________________________________________________ importantes. Pode ser utilizado apenas aps anestesia geral ou associado com anestsicos gerais em equdeos e ruminantes. 8.2. Mtodos Fsicos Os mtodos fsicos de eutansia incluem pistola de insensibilizao, tiro com arma de fogo, deslocamento cervical, decapitao, eletrocusso, irradiao por micro-ondas especficos para eutansia, armadilhas, compresso torcica, exsanguinao ou sangria, macerao, concusso e perfurao craniana. Em todos os casos, imperativa a qualificao e habilidade do executor e, quando for o caso, a manuteno adequada do equipamento. Estes mtodos, em alguns casos, podem causar menos estresse e ser mais rpidos e prticos em relao a outros mtodos. Armadilhas, exsanguinao, concusso e perfurao craniana no so aceitos de forma isolada, mas podem ser utilizados em associao aos agentes anestsicos ou outros mtodos que causem inconscincia prvia. Os mtodos fsicos so normalmente de aparncia desagradvel, mas podem ser teis em situaes especficas. Os envolvidos devem estar conscientes a respeito das implicaes de aparncia do mtodo e informar aos observadores o que pode ocorrer. Considerando que a maioria destes mtodos envolve trauma, deve-se levar em conta o risco inerente para os animais e para o executor que realiza o procedimento. Desta forma, os cuidados devem ser extremos e a habilidade e experincia do executor so essenciais. A qualificao prvia deve ser realizada em animais mortos ou anestesiados e sob ensino e superviso de uma pessoa experiente, at que o aprendiz seja proficiente. Em muitos casos, os animais podem no morrer imediatamente, a depender do grau de injria cerebral, e, desta forma, recomenda-se que imediatamente aps, a morte seja garantida pelo emprego de um segundo mtodo, como, por exemplo, a exsanguinao ou perfurao craniana. So mtodos aceitos com restrio e no so prticos para causar a morte em um grande nmero de animais, salvo nos animais destinados ao consumo alimentar, de acordo com normas especficas do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento ou outra que a vier substituir.

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______________________________________________________________________ 8.2.1. Pistola de insensibilizao por ar comprimido (percussiva no penetrativa) e de dardo cativo (percussiva penetrativa) A primeira causa insensibilizao por concusso cerebral e a segunda destruio imediata do tecido cerebral por trauma penetrante. A pistola de dardo cativo penetrante apresenta maior eficincia, pois produz concusso e lacerao do tecido cerebral; j no mtodo de insensibilizao com a pistola de dardo cativo no penetrante a perda da conscincia se d pela concusso cerebral (trauma/golpe) e a conscincia do animal pode retornar em um curto espao de tempo. Podem ser utilizadas para ruminantes, equdeos, sunos e animais silvestres de grande porte, desde que seja possvel a conteno qumica ou fsica adequadas, para o correto posicionamento da pistola. A pistola deve ter fora suficiente para penetrar o crnio do animal-alvo e a localizao correta do impacto varia de espcie para espcie. Para tal, as pistolas de dardo cativo devem estar em perfeita manuteno para que o dardo consiga receber energia suficiente e produzir o estado de inconscincia quando atingir o crnio do animal. O posicionamento da pistola e a localizao correta do alvo variam de acordo com a espcie. Nos bovinos, deve-se apontar para o osso frontal, na interseco das duas linhas imaginrias, entre os cornos e os olhos contralaterais. O equipamento deve ser direcionado em ngulo de 90 graus em relao ao osso frontal e em contato direto com o crnio do animal. Nos equdeos, o alvo pouco acima da interseco das duas linhas imaginrias traadas, entre a insero das orelhas e os olhos contralaterais. Nos sunos, traa-se uma linha imaginria transversal no osso frontal que une a poro dorsal (superior) dos dois olhos e a outra longitudinal na linha mdia frontal, formando uma cruz; a pistola posicionada 2 cm dorsal (superior) e 0,5 cm lateral para um dos lados do ponto de interseco entre estas duas linhas imaginrias. Em ovinos e caprinos a pistola posicionada no centro da linha imaginria que tangencia a borda caudal do corno em sentido paralelo ao eixo longitudinal da cabea. Ao ser usada a pistola, ocorrem colapso e espasmos musculares. importante a monitorao dos sinais de conscincia dos animais insensibilizados, assim como a monitorao do equipamento. Em caso de dvida, deve-se insensibilizar novamente o animal. Logo aps a insensibilizao, necessrio causar a morte com outro mtodo. O tempo entre a insensibilizao e o procedimento de eutansia deve ser breve para evitar o retorno da conscincia do animal. 22

______________________________________________________________________ Vantagens: eficincia e baixo custo, podendo ser utilizado em condies de campo. Desvantagens: visualmente desagradvel. Recomendaes: Pode ser usada em equdeos e ruminantes; aceito com restrio em sunos e em outras espcies. No caso do uso de pistola de insensibilizao por ar (no penetrante), necessrio complementar o procedimento com outra tcnica, j que a primeira s causa inconscincia temporria do animal. Recomendvel: nenhuma espcie. Aceito com restrio: animais de grande porte das classes Aves, Reptilia e ordens artiodactila e perissodactila, bem como outros animais selvagens de grande porte.

8.2.2. Tiro com arma de fogo um dos principais mtodos para a coleta de aves em ambiente natural. insubstituvel para as espcies de aves difceis de serem capturadas, como aquelas que s so acessadas nas copas das rvores. Seu uso para a coleta de aves prediz que sejam mortas rapidamente. Caso o tiro no resulte em morte imediata, deve-se causar a morte por outro mtodo o mais rapidamente possvel. Para os demais grupos taxonmicos, deve ser usado apenas tiro na regio frontal do crnio, embasado nas mesmas consideraes da pistola de ar comprimido e de dardo cativo. Deve ser empregado apenas em casos extremos, como, por exemplo, em situaes de campo, em grandes animais domsticos ou silvestres, em que o sofrimento do animal e a indisponibilidade de outros mtodos justifiquem a eutansia imediata do animal. Quando o mtodo for empregado, um operador experiente e habilitado deve manusear a arma com extremo cuidado. Deve-se evitar ao mximo a presena de espectadores e, quando isto no for possvel, estes devem ser instrudos dos riscos e implicaes visuais desagradveis. A arma de fogo, bem como o seu porte devem estar legalizados pelas autoridades competentes e o procedimento no deve ser realizado em ambiente fechado. Devem ser utilizados calibres e tamanho de gro (no caso de cartucho) compatveis com os espcimes que sero eutanasiados. Vantagens: perda da conscincia instantnea, desde que o tiro acerte o local correto; necessrio em algumas situaes de campo, na ausncia da disponibilidade ou viabilidade de outros mtodos. 23

______________________________________________________________________ Desvantagens: Risco ao operador e observadores; requer executor experiente e habilitado; visualmente desagradvel; em situaes a campo pode ser difcil a imobilizao do animal para acertar o alvo; o tecido cerebral destrudo o que pode inviabilizar exames post morten; necessita equipamento em boa manuteno. Recomendaes: na ausncia de outros mtodos, aceito com restrio em equdeos, ruminantes, sunos e animais silvestres de grande porte, como cetceos, crocodilianos, grandes mamferos e aves; no deve ser usado na rotina, apenas em casos excepcionais, salvo em situaes alarmantes de surtos de doenas infectocontagiosas em animais de grande porte (e. g. febre aftosa). Recomendvel: nenhuma espcie. Aceito com restrio: aves de vida livre, em situaes de campo, especialmente para espcies difceis de serem acessadas (e.g., copas das rvores apesar de ser o nico mtodo disponvel para essas espcies -, classificado como aceito com restrio, devido a seu alto risco); animais de grande porte das classes Amphibia, Aves e Reptilia (crocodilianos) e ordens artiodactila e perissodactila, bem como outros animais selvagens de grande porte. Em todos os casos, apenas em situaes de campo.

8.2.3. Deslocamento cervical fundamental que o executor, que realiza o procedimento, seja bem qualificado, como descrito anteriormente, na introduo do tpico sobre mtodos fsicos. H poucos estudos cientficos que confirmam que um mtodo humanitrio. Entretanto, aparentemente, quando bem executado, causa leso imediata da medula espinhal e inconscincia, seguido de morte. Pode ser usado para causar a morte de aves de at 3 kg camundongos, ratos (abaixo de 150 g) e coelhos (abaixo de 1 kg) imaturos. Para camundongos e ratos, o polegar e o indicador devem ser colocados um de cada lado na regio cervical cranial (base do crnio) ou um basto pressionado na base do crnio. Com a outra mo, a base da cauda ou membros plvicos so tracionados caudalmente, para causar a separao das vrtebras cervicais em relao ao crnio. Para coelhos imaturos, o crnio seguro com uma das mos e os membros plvicos com a outra mo. O animal tracionado (esticado) e o pescoo estendido e girado dorsalmente para separar a primeira vrtebra cervical do crnio.

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______________________________________________________________________ Para aves de pequeno porte, o deslocamento cervical um mtodo comum de causar a morte, mas a perda da conscincia pode no ser instantnea e pode persistir por at 13 segundos. O tempo at perda da conscincia no acelerado mesmo que seja realizada a exsanguinao na sequncia. Vantagens: ausncia de contaminao do material biolgico; procedimento rpido quando executado de forma adequada e por profissional qualificado. Desvantagens: esttica desagradvel; requer grande habilidade do executor; pode ser usado apenas para algumas espcies. Recomendaes: deve ser executado exclusivamente por profissional experiente e capacitado; no indicado para hamsters devido forte musculatura cervical; s deve ser usado quando justificado cientificamente e na impossibilidade de outros mtodos para o objetivo do estudo; aps a realizao do procedimento, deve-se confirmar que o pescoo foi deslocado pela palpao da vrtebra e em caso da no separao das vrtebras, deve-se complementar com outro mtodo, tal como decapitao ou exposio ao CO2. No deve ser usado para causar a morte em um grande nmero de animais. Recomendvel: nenhuma espcie Aceito com restrio: coelhos abaixo de 1 kg previamente anestesiados; desde que haja interferncia comprovada da anestesia sobre os resultados da pesquisa, o mtodo poder ser utilizado em aves de at 3 kg, camundongos e ratos abaixo de 150 g sem a necessidade de anestesia prvia.

8.2.4. Decapitao A menos que a anestesia comprovadamente interfira no resultado da pesquisa, os animais deveriam ser anestesiados previamente antes do uso deste mtodo. Pode ser usado para pequenas aves, roedores, coelhos abaixo de 1 kg e pequenos anfbios. A atividade cerebral permanece por at 14 segundos aps a decapitao. Entretanto, aparentemente tal atividade no est relacionada com a percepo da dor. H disponibilidade comercial de guilhotinas especficas para roedores adultos e pequenos coelhos. Vantagens: No contamina o material biolgico a ser utilizado e no danifica o crebro; procedimento rpido. 25

______________________________________________________________________ Desvantagens: o manuseio e a conteno so estressantes para os animais; a permanncia de atividade cerebral aps a decapitao estabelece controvrsia se o mtodo humanitrio; risco de leso fsica no profissional que realiza o procedimento; visualmente desagradvel; requer habilidade do profissional. Recomendaes: mtodo aceito com restries em pequenas aves, roedores, coelhos < 1 kg e pequenos anfbios; preferencialmente deve ser utilizado aps a anestesia; o equipamento deve estar em boas condies de uso, a lmina periodicamente amolada e a limpeza realizada aps a morte de cada animal; o uso de cones plsticos para conteno fsica do animal reduz o estresse do manuseio, melhora o posicionamento do animal e reduz a possibilidade de injria no operador; o operador deve estar bem familiarizado com o mtodo; deve ser utilizado exclusivamente equipamento especfico para este fim. Recomendvel: nenhuma espcie. Aceito com restrio: pequenas aves, roedores, coelhos abaixo de 1 kg e pequenos anfbios nas condies de pesquisa em que os objetivos do estudo no permitem outro mtodo de eutansia, ou seja, desde que haja interferncia comprovada da anestesia sobre os resultados da pesquisa.

8.2.5. Micro-ondas Usado em neurobiologia para fixar os metablitos in vivo e manter a integridade anatmica cerebral. So produzidos especificamente para eutansia de ratos e camundongos e possuem potencia de 1,3 to 10 kW, dirigida para o crnio do animal. A potncia requerida para cessar a atividade enzimtica cerebral depende da eficincia do equipamento, do ajuste da cavidade ressonante e do tamanho do crebro do animal. H uma grande variedade de equipamentos e variao do tempo at perda da conscincia e eutansia. Um equipamento de 10 kW, 2.450-MHz, com potncia de 9 kW, aumenta a temperatura cerebral de camundongos de 18 a 28 g e ratos de 250 a 420 g, at 79 e 94 oC em 330 e 800 ms, respectivamente. Vantagens: a inconscincia atingida em menos que 100 ms e, a morte, em menos que 1 segundo; o mtodo mais eficaz para fixao de tecido cerebral in vivo para ensaios enzimticos.

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______________________________________________________________________ Observao importante: micro-ondas de uso domstico no podem ser utilizados em nenhuma condio. Recomendvel: nenhuma espcie. Aceito com restrio: uso em camundongos e ratos apenas com equipamentos especficos disponibilizados comercialmente e desde que haja interferncia comprovada da anestesia sobre os resultados da pesquisa.

8.2.6. Armadilhas Apesar de poder ser usada para causar a morte de animais de vida livre de pequeno porte para fins comercial, cientfico ou para proteo humana, o uso de armadilhas mecnicas fatais bastante controverso, pelo fato de que pode causar uma morte lenta e com sofrimento, dada a dificuldade de seleo do equipamento, dependncia da proficincia do operador e a possibilidade de causar intenso dano fsico em espcies que no sejam o alvo da captura. prefervel o uso de armadilhas que mantenham o animal vivo, seguido de outros mtodos aceitveis de causar a morte. A armadilha deve ser criteriosamente selecionada e testada cientificamente, de acordo com a ISO (International Organization for Standardization), literatura disponvel, tamanho, conformao, local de colocao (cho versus rvores), tipo de isca, tipo e sensibilidade do disparo. Em condies excepcionais, pode ser aceito com restrio, desde que todos os mtodos possveis tenham sido testados e falharam. Os animais que no apresentarem bito, aps a captura pela armadilha, devem ser submetidos eutansia o mais rpido possvel, por mtodos aceitos. O monitoramento deve ser contnuo para evitar que animais sejam presos e continuem vivos. Recomendvel: nenhuma espcie. Aceito com restrio: animais de vida livre de pequeno porte, com equipamentos especficos disponibilizados comercialmente e desde que haja interferncia comprovada da anestesia ou outros mtodos sobre os resultados da pesquisa.

8.2.7. Compresso torcica A compresso torcica pode ser utilizada para a eutansia de aves silvestres de pequeno porte (menos de 50 g de massa), exclusivamente em situao de campo. O mtodo maximiza o aproveitamento da carcaa por no danificar nenhum rgo interno. 27

______________________________________________________________________ Vantagens: Os animais perdem a conscincia rapidamente. Permite maximizar a utilizao da carcaa para alguns tipos de estudos, como anlises de contaminantes ou aqueles relacionados anatomia. Desvantagens: Dependendo do grau de domnio da tcnica pelo executor, pode resultar em situao visualmente desagradvel. A morte ocorre por asfixia. Recomendaes: Deve ser realizada por executor experiente. Recomendvel: nenhuma espcie Aceito com restrio: Para aves silvestres de pequeno porte (menos de 50 g de massa), exclusivamente em condies de campo. S deve ser utilizado quando da impossibilidade de realizao de mtodos recomendveis de eutansia.

8.2.8. Congelamento A imerso em nitrognio lquido pode ser aceita com restrio em fetos e neonatos de pequenos roedores e lagomorfos e em peixes de pequeno porte, com algumas espcies ornamentais, que no ultrapassem 200 mg (0,2 g) de peso. Para espcies de mdio e grande porte, podero ser utilizadas as fases de embrio, larva e ps-larva at 200 mg (0,2 g) de peso. A partir deste peso, recomendada a concusso cerebral ou decapitao.

8.2.9. Mtodos complementares a outros mtodos Atordoamento e seco medular induzem inconscincia, mas podem no causar o bito. Desta forma, estes mtodos devem ser complementados com outros mtodos, como anestsicos, exsanguinao ou decapitao.

8.2.9.1. Exsanguinao Realizada por meio da seco das artrias cartidas e veias jugulares. S pode ser utilizada aps a inconscincia do animal, como, por exemplo, aps o atordoamento, eletrocusso ou anestesia. Nunca deve ser usado isoladamente, nem como primeiro mtodo. No caso de roedores e lagomorfos, a exsanguinao pode ser feita por puno cardaca desde que o animal esteja sob efeito de anestesia geral. 28

______________________________________________________________________ 8.2.9.2. Atordoamento causado por golpe no crnio (concusso) Animais podem ser atordoados por um golpe no crnio ou pelo uso de pistola no penetrante. O uso de pistola j foi abordado anteriormente. Portanto, este item contempla apenas o atordoamento por golpe no crnio. difcil avaliar a perda da conscincia aps o atordoamento, mas esta caracterizada por perda de reflexo corneal. A concusso cerebral (golpe no crnio) s pode ser utilizada em circunstncias excepcionais, para alvio do sofrimento em situao de emergncia, de animais intensamente traumatizados, quando no houver outro mtodo disponvel no momento ou diante da total impossibilidade de uso de outros mtodos que possam comprovadamente interferir nos resultados da pesquisa. Sempre deve ser seguido por outro mtodo que assegure a morte, como decapitao, perfurao craniana ou exsanguinao. Recomendvel: nenhuma espcie. Aceito com restrio: anfbios, rpteis e peixes sseos e cartilaginosos.

8.2.9.3. Perfurao craniana Um instrumento perfurante fino, pontiagudo e afiado introduzido com fora e rapidez para produzir depresso imediata do SNC. No um mtodo aceito de forma isolada, pois h diversas outras opes humanitrias e, desta forma, usado apenas como mtodo adjunto, aps a confirmao do estado de inconscincia do animal. fundamental a comprovada qualificao e experincia do executor. Em sapos, deve-se primeiro anestesi-los, com injeo intravenosa ou intraperitoneal de sulfonato metano de tricana (MS-222), em soluo tamponada at o pH 7, injeo intracelomtica ou nos sacos linfticos dorsais de pentobarbital sdico ou imerso em soluo tamponada at o pH 7 de sulfonato metano de tricana ou benzocana.

8.2.9.4. Eletronarcose Utilizada em ruminantes, sunos, coelhos, peixes e aves domsticas. Os sinais de atordoamento eltrico efetivo so extenso dos membros, opistno, rotao ventral do globo ocular, espasmos tnicos seguidos de clnicos, com eventual flacidez muscular. Deve ser seguida de eletrocusso para induo de fibrilao ventricular, exsanguinao ou outro mtodo que garanta a morte. 29

______________________________________________________________________ 8.2.9.5. Eletrocusso Realizada com corrente alternada, causa morte por fibrilao cardaca, seguido de hipxia cerebral. Como a perda da conscincia ocorre apenas em at 30 segundos aps a fibrilao, s aceito desde que o animal esteja previamente inconsciente, por outro mtodo, inclusive eletronarcose. Desta forma, no pode ser usado como mtodo nico e sempre tem de ser precedido por outro mtodo que cause inconscincia prvia. Vantagens: considerado humanitrio, se os animais estiverem previamente inconscientes; no contamina o material biolgico; custo baixo. Desvantagens: risco ao operador; pouco til para um grande nmero de animais; visualmente desagradvel pelas contraes musculares espsticas; pode no ser confivel em causar a morte, principalmente em animais abaixo de 5 kg, pois pode haver restabelecimento do batimento cardaco; inadequado para animais com carapaa (e. g. tatus, jabotis). Recomendaes: requer habilidade do operador e equipamento adequado que garanta passagem suficiente de corrente eltrica no crebro; aceito com restries mesmo que se leve em conta as consideraes anteriores; as especificaes do equipamento variam de espcie para espcie; usado em ovinos e sunos para fins comerciais. S aceito como mtodo complementar, aps a confirmao da inconscincia. Neste caso, pode ser aceito com restrio em coelhos, ruminantes, equdeos e sunos.

9. Especificao dos mtodos de eutansia por grupo taxonmico

9.1. Coelhos abaixo de 1 kg, camundongos, hamsters, ratos e cobaias ordens Lagomorfa e Rodentia. 9.1.1. Eutansia em fetos e neonatos de roedores e lagomorfos 9.1.1.1. Fetos e neonatos O reconhecimento da maturidade do sistema nervoso (SN) o balizador para a escolha do mtodo adequado de eutansia a ser empregado quando o trabalho envolva fetos de animais. Os conceptos que se encontram na fase de desenvolvimento do seu SN, no qual sejam capazes de processar estmulos dolorosos, necessitam de tratamento tcnico-cientfico adequado para minimizar tais estmulos. 30

______________________________________________________________________ Em fetos de camundongo, rato e hamster at o 14 dia de gestao - nos quais a percepo da dor improvvel devido ao mnimo desenvolvimento neuronal neste estgio -, a eutansia da me ou a remoo do feto assegura morte rpida deste, por meio da perda do suprimento sanguneo. Na cobaia, esse perodo estendido at o 34 dia de gestao. A partir dessa fase (15 dia de gestao de camundongo, rato e hamster ou do 35 dia em cobaias), at o nascimento, o nvel de desenvolvimento da inervao possibilita a percepo da dor. Nestes casos, recomendam-se as mesmas tcnicas consideradas para os animais adultos. Sempre que possvel, o mtodo de escolha para a eutansia da me deve assegurar anxia cerebral rpida para o feto, com o mnimo distrbio no meio uterino.

9.1.1.3. Animais jovens e adultos Camundongos, hamsters, ratos e cobaias podem ser colocados em uma caixa hermeticamente fechada, contendo algodo embebido com halotano, isofluorano ou sevofluorano, desde que no haja contato direto do animal com o algodo. Preferencialmente, esta deve ter uma parte transparente para a visualizao do momento do bito do animal, confirmado a seguir pela ausncia de reflexo corneal e batimentos cardacos. Os anestsicos gerais injetveis, administrados por via intraperitoneal, tambm so aceitos quando usados em sobredoses a partir de trs vezes a dose requerida para a anestesia geral, em todas as espcies deste item. Entretanto, a soluo de barbitricos deve ser misturada com lidocana na concentrao de 10 mg/mL ou outro anestsico local, para minimizar a dor. A exsanguinao pode ser feita por puno cardaca, desde que o animal esteja sob efeito de anestesia geral. O deslocamento cervical, a decapitao, o uso de micro-ondas ou o CO2 so aceitos com restrio, desde que o objetivo do estudo seja incompatvel pelo uso de anestsicos gerais injetveis ou inalatrios. Nestes casos, excepcionais o pesquisador deve justificar e comprovar a qualificao do executor.

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______________________________________________________________________ 9.2. Coelhos acima de 1 kg, ces, gatos e fures ordens Lagomorfa e Carnvora. O mtodo aceito e mais indicado a sobredosagem de anestsicos gerais por via intravenosa ou em segunda opo sobredosagem de anestsicos inalatrios. Em neonatos ou animais muito pequenos, em que no seja possvel a canulao venosa, pode-se utilizar a via intraperitoneal em casos excepcionais, desde que a soluo seja adicionada de anestsico local, de acordo com o item anterior. No caso de coelhos acima de 1 kg, a exsanguinao pode ser feita por puno cardaca desde que o animal esteja sob efeito de anestesia geral.

9.3. Equdeos ordem Perissodactila Dentre os mtodos qumicos, o mais indicado o uso de um sedativo, como derivados fenotiaznicos ou agonistas de adrenorreceptor alfa-2, entre outros, especialmente em animais indceis, seguidos de ter gliceril guaiacol ou hidrato de cloral, associado ao tiopental sdico em sobredosagem. Dada necessidade de grandes volumes de injeo, deve-se introduzir previamente um cateter intravenoso, para evitar injees extravasculares. Tambm aceita a realizao de eutansia por meio de eletrocusso ou injeo de lidocana subdural na cisterna magna, desde que realizada anestesia geral prvia. Em casos excepcionais, em situaes a campo, em animais com injria intensa e sob extremo sofrimento, na ausncia de disponibilidade de anestsicos gerais, pode se considerar o uso de armas de fogo ou pistola de dardo cativo ou de insensibilizao para eutansia, devendo sempre ser executados por profissionais experientes e habilitados.

9.4. Ruminantes e sunos ordem Artiodactila

9.4.1. Ruminantes Para ruminantes, os mtodos recomendados so a sedao, seguida de barbitricos ou outros anestsicos gerais intravenosos, associados ou no a ter gliceril guaiacol ou hidrato de cloral. Aps confirmao da inconscincia e perda do reflexo corneal, esses mtodos podem ser complementados por aplicao de lidocana na cisterna magna, bloqueador neuromuscular e/ou cloreto de potssio ambos por via intravenosa. 32

______________________________________________________________________ Os mtodos aceitos com restrio nessas espcies so a eletrocusso precedida de anestesia geral; pistola de dardo cativo ou de insensibilizao por ar comprimido (seguida de outro mtodo que assegure a morte); ou atordoamento eltrico (eletronarcose), seguida de outro mtodo que assegure a morte. Estes mtodos s devem ser realizados em condies a campo e realizados por operador experiente e habilitado.

9.4.2. Sudeos Nessa espcie, deve-se utilizar sedao (podendo ser dispensada no caso de neonatos), seguida de barbitricos intravenosos (ou intraperitoneal, nos recm-nascidos) associados com anestsico local; outros anestsicos gerais intravenosos; ou ainda, anestsicos inalatrios. Estes mtodos devem ser utilizados at a confirmao da morte ou seguidos de outros mtodos para assegurar a morte. Os mtodos aceitos com restrio so os mesmos para os ruminantes.

9.5. Animais selvagens Alm das consideraes estabelecidas anteriormente, os animais selvagens apresentam caractersticas especiais que devem ser levadas em considerao, no que concerne a espcie, tamanho, condies de segurana, experincia dos profissionais e localizao dos animais (na natureza ou em cativeiro). As diferenas anatmicas so fatores importantes no que concerne a conteno mecnica, acesso ao sistema nervoso, quando se trata de mtodos fsicos e vias de administrao, particularmente o acesso venoso. A experincia dos profissionais com a espcie muito importante para o procedimento. Quando aplicvel, o manuseio e transporte dos animais para outros locais devem assegurar o mximo cuidado para evitar dor e sofrimento. Para animais selvagens de vida livre, parte dos mtodos sugeridos anteriormente no praticvel. Entretanto, as mesmas consideraes humanitrias dos animais em cativeiro devem ser levadas em conta, no sentido de se evitar a dor e o sofrimento. Em alguns casos, o uso de zarabatanas ou pistolas para atirar dardos contendo frmacos so extremamente teis para conteno qumica, para que, a seguir, seja realizada a eutansia de acordo com os mtodos anteriormente citados para animais domsticos e de experimentao. Neste caso, fundamental qualificao prvia do executor e o ambiente deveria ser evacuado de expectadores, quando for o caso. Em situaes extremas, em que no seja possvel 33

______________________________________________________________________ aproximar-se dos animais para o uso de dardos, pode-se lanar mo de armadilhas especficas para a espcie ou mesmo tiro com arma de fogo. Da mesma forma, os executores que realizam o procedimento devem ter experincia com ambas as tcnicas e deve-se atender legislao para o porte de armas de fogo. O uso de jaulas de conteno, em que os animais so pressionados por uma parede mvel, til para a realizao de injees de anestsicos em animais previamente capturados.

9.6. Aves classe Aves O mtodo de escolha o uso de anestsicos gerais intravenosos, ou no caso do barbitrico, tambm pode ser administrado por via intraperitoneal, desde que a soluo seja adicionada de anestsico local, como descrito previamente. Como segunda opo, pode-se utilizar anestsicos inalatrios em espcies que no retenham a respirao. Para as aves de vida livre que apenas podem ser acessadas nas copas das rvores, pode ser realizada a coleta de espcimes por meio de tiro com armas de fogo. Para as aves de pequeno porte de vida livre (com peso inferior a 50 gramas), aceitvel a utilizao da compresso torcica. Desde que os mtodos anteriores comprovadamente interfiram nos resultados da pesquisa, ou quando os animais utilizados na pesquisa forem provenientes ou destinados ao abate, devem-se utilizar os mtodos de abate humanitrio preconizados pelo Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento ou outro substitutivo legal, ou seja, o uso de CO2 ou eletronarcose em pequenas aves ou galinhas, seguido de exsanguinao ou outro mtodo que assegure a morte. Aves grandes devem ser submetidas eutansia, utilizando-se anestsicos gerais, como anteriormente descrito, ou em casos excepcionais pistolas de atordoamento ou de dardo cativo.

9.7. Anfbios, peixes e rpteis classes Amphibia, Osteichthyes (peixes sseos) e Chondrichthyes (peixes cartilaginosos) e Reptilia Devem-se levar em conta as diferenas metablicas, da anatomia e fisiologia respiratria e da grande tolerncia hipxia cerebral destas espcies. Outro aspecto a dificuldade de se reconhecer a morte nestes animais.

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______________________________________________________________________ Quando possvel, em peixes, a eutansia deve ser realizada em duas etapas: 1) anestesia at perda do equilbrio e 2) seguido de um mtodo fsico ou qumico que cause a morte cerebral. Os mtodos fsicos como a concusso (atordoamento), usados na aquicultura comercial, s devem ser utilizados aps a anestesia, exceto quando os animais se encontrarem sob situao de estresse extremo em que o tempo at o preparo da anestesia resultar em sofrimento prolongado. Em peixes, quando, por questes de comprovada incompatibilidade experimental, diante da total impossibilidade de uso de outros mtodos que possam comprovadamente interferir nos resultados da pesquisa e o uso de anestsicos no for possvel, o mtodo fsico deve assegurar rpida destruio do crebro por perfurao ou esmagamento aps o atordoamento. A eletrocusso no deve ser usada dada a possibilidade de fraturas espinhais e danos musculares. Em anfbios deve-se considerar a sensibilidade e permeabilidade cutnea bem como a capacidade de secreo de muco ou substncias txicas. A aplicao de gel ou solues por via cutnea ou mucosa oral pode ser de fcil acesso alm de apresentar efeito rpido.

9.7.1. Agentes injetveis Os barbitricos podem ser utilizados por via intravenosa, intra-abdominal ou intrapleuroperitoneal na maioria dos animais (60 a 100 mg/kg de pentobarbital ou tiopental), dependendo das caractersticas anatmicas. Caso a via intravenosa no seja praticvel, devese considerar a injeo associada de lidocana na mesma seringa com barbitricos, j que os mesmos podem causar dor local. Os espaos linfticos subcutneos podem ser utilizados em sapos. O tempo at o bito de at 30 minutos. Os anestsicos gerais, como os barbitricos, propofol, etomidato e metomidato, administrados por via intravenosa, podem ser utilizados em sobredosagem ou para produzir anestesia, antes de se usar outro mtodo para eutansia, como, por exemplo, o uso de bloqueadores neuromusculares e cloreto de potssio ou mesmo mtodos fsicos. Anestsicos locais, como a lidocana ou bupivacana, deprimem o sistema nervoso central de anfbios e rpteis e podem causar inconscincia e morte. Assim, podem ser usados para se obter eutansia na forma injetvel. Para anfbios e pequenos rpteis, tambm pode se aplicar a forma tpica.

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______________________________________________________________________ 9.7.2. Agentes externos Os agentes utilizados para imerso so indicados para peixes e anfbios, dados praticidade e possibilidade de eutansia simultnea de um grupo de animais. Devem ser tamponados at o pH 7, quando necessrio. Em diversas ocasies, estes mtodos devem ser seguidos de outros mtodos fsicos ou qumicos para assegurar a morte cerebral. Pode ser um mtodo de uso difcil em peixes que respiram ar ambiente ou que retm a respirao. O sulfonato metano de tricana ou MS222 pode ser administrado por diversas vias para causar a morte. Para peixes e anfbios, pode ser colocado na gua. Os peixes grandes podem ser removidos da gua e pode-se esguichar uma soluo concentrada da substncia sob as brnquias. Dada a acidez do frmaco, quando usado em concentraes superiores a 500 mg/L, a soluo deve ser tamponada com soluo de bicarbonato de sdio saturada, o que resulta em um pH da soluo de 7,0 a 7,5 e, desta forma, ser injetada nos espaos linfticos e cavidades pleuroperitoneais. A eficincia deste anestsico varivel e pode apresentar alguns efeitos adversos como perda de muco, irritao das brnquias e olhos, bem como danos a crnea. No homem, causa irritao por contato na pele e por inalao, bem como danos na retina. A benzocana, similar a tricana, pode ser usada para imerso e sistema de recirculao para peixes e anfbios em soluo tamponada at o pH 7. A forma isolada de benzocana no hidrossolvel e deve ser preparada, em acetona ou lcool. Por outro lado, o hidrocloridrato de benzocana hidrossolvel e pode ser usado diretamente para anestesia ou eutansia. Os peixes devem ser mantidos imersos na soluo por pelo menos 10 minutos aps cessar o movimento opercular. Solues de lidocana ou bupivacana, ou mesmo sua forma em gel, podem ser aplicadas nos anfbios e pequenos rpteis, causando rpida dessensibilizao local, seguida de efeitos depressivos no sistema nervoso central, chegando inconscincia e parada cardiorrespiratria. O mtodo apresenta a vantagem de fcil acesso e baixo custo, alm da estabilidade e segurana em trabalhar. Dependendo do indivduo, tamanho e temperatura ambiente, pode haver demora entre a inconscincia e a morte. Nestes casos, recomenda-se um mtodo complementar de eutansia aps a perda da conscincia. O eugenol e o leo de cravo da ndia podem ser utilizados para eutansia de peixes. O leo de cravo da ndia contm de 70 a 90% de eugenol. O eugenol, da classe dos fenilpropanoides, causa bloqueio neuromuscular competitivo, aparentemente potencializa o 36

______________________________________________________________________ acido gama aminobutirico (GABA) e antagonista de receptores NMDA. pouco solvel em gua e solvel em solventes orgnicos, como o lcool. O 2-fenoxietanol aceitos com restrio em peixes, desde que os outros mtodos recomendveis interfiram comprovadamente nos resultados da pesquisa. O 2-fenoxietanol pode ser usado em concentraes de 0,5 a 0,6 mL/L ou 0,3 a 0,4 mg/L para causar a morte em peixes. A morte ocorre por colapso respiratrio e os peixes devem ser mantidos imersos na soluo por pelo menos 10 minutos aps cessar o movimento opercular.

9.7.3. Agentes inalatrios Muitos rpteis e anfbios, incluindo os quelnios, so capazes de reter a respirao, realizar metabolismo anaerbico e sobreviver por longos perodos de anxia, de at 27 horas para algumas espcies. Desta forma, a induo da anestesia, perda da conscincia e tempo at a morte so muito prolongados. Os lacertdeos (lagarto, lagartixa, camaleo) e serpentes no retm a respirao da mesma forma que outros rpteis e anfbios e podem ser submetidos eutansia com os agentes inalatrios. No caso de peixes, os anestsicos inalatrios podem ser borbulhados na gua. Entretanto, mensurar a concentrao difcil e a volatilizao pode contaminar o ambiente. Para tal, deve-se criar um mecanismo antipoluio, para que o operador no tenha contato com os gases. Normalmente, deve-se utilizar uma concentrao de cinco a dez vezes a utilizada para anestesia. Os peixes, ao serem submetidos anestesia, tambm podem, como em outras espcies, passar por uma fase de excitao antes de atingir o plano anestsico. Desta forma, aconselhvel cobrir o tanque de gua. Deve-se umedecer constantemente os animais que eventualmente precisem ser retirados da gua. Os anestsicos podem ser diludos diretamente na gua ou administrados por sistemas de circulao ou sem circulao. No ltimo caso, o anestsico passa apenas uma vez pelas brnquias e depois descartado, enquanto que, no caso de circulao, o mesmo recolhido num reservatrio e novamente utilizado, para evitar o desperdcio e contaminao ambiental. Em ambos os sistemas, a gua, contendo o anestsico distribuda por meio de tubos de tamanho compatvel com a boca do peixe, por meio de gravidade ou manualmente utilizando-se uma seringa grande ou uma bomba de infuso.

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______________________________________________________________________ 9.7.4. Mtodos fsicos De forma geral, os mtodos fsicos devem ser complementares a outros mtodos e podem ser usados apenas aps os animais se apresentarem inconscientes. Quando usados, a morte deve ser confirmada e, quando necessrio, deve-se complementar com outro mtodo para assegurar a morte. A decapitao aceita com restrio em pequenos anfbios e em pequenos rpteis apenas aceita com restrio aps atordoamento. Em ambos os casos, este mtodo aceito com restrio em condies excepcionais, desde que haja interferncia comprovada da anestesia sobre os resultados da pesquisa. A decapitao com grandes lminas ou guilhotinas pode ser efetiva para algumas espcies com caractersticas anatmicas viveis. Como o SNC de peixes, anfbios e rpteis tolerante hipxia e hipotenso, a perfurao do crnio deve ser realizada imediatamente aps a decapitao. Em crocodilianos e outros grandes rpteis, pode-se utilizar pistola de insensibilizao por ar comprimido ou de dardo cativo ou ainda tiro com arma de fogo no crnio. Nestes casos, o posicionamento correto para o alvo fundamental. A maior parte de peixes, anfbios e rpteis pode ser submetida perfurao craniana ou outro mtodo fsico, apenas aps a induo da inconscincia. A seco ou perfurao da medula espinhal caudal ao crnio pode ser usada em alguns animais ectotrmicos. Entretanto, a morte s ocorre quando o crebro perfurado. Para estes animais, esta tcnica deveria ser seguida de decapitao e perfurao craniana ou por outro mtodo. A perfurao necessita de destreza e habilidade e deve ser realizada apenas por executor com garantida qualificao e competncia para tal. Em anfbios, o ponto de perfurao o foramen magnum, que identificado por uma leve depresso da pele na linha mdia dorsal, com o pescoo flexionado.

9.7.4.1. Resfriamento e congelamento Apesar da refrigerao temperatura de 4 oC, reduzir o metabolismo e facilitar o manuseio, no h evidncia que este processo minimize a dor. No um mtodo aceito nem sob a forma de congelamento rpido, dada formao de cristais de gelo na pele e tecidos, o que causa dor e sofrimento. O congelamento rpido s aceito quando os animais j tiverem sido anestesiados e, por conseguinte, estando inconscientes.

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______________________________________________________________________ 9.8. Mamferos aquticos Os mamferos aquticos merecem ateno especial devido s adaptaes anatmicas e fisiolgicas para a vida no ambiente aqutico. Devem ser considerados o tamanho e os grupos taxonmicos. O uso de barbitricos por via intravenosa indicado para a eutansia de pequenos pinpedes, pequenos cetceos e sirnios. Em grandes cetceos, pode-se utilizar mtodos qumicos como a sobredosagem de anestsicos gerais injetveis, como os barbitricos, associados ou no a outros agentes, como por exemplo o cloreto de potssio. Os opiides potentes (etorfina ou carfentanil) so os agentes mais indicados, embora no sejam disponveis comercialmente no Brasil. H um grande risco ao executor que realiza o procedimento, dada a grande potncia destes opiides, j que em casos de injees acidentais, podem causar a morte do profissional. O uso de arma de fogo pode ser considerado em situaes de campo, diante da inviabilidade de outros mtodos. Deve ser empregado por um operador experiente e habilitado no manuseio da arma. Deve-se evitar a presena de pblico e, quando isto no for possvel, o mesmo deve ser instrudo a respeito dos riscos e implicaes visuais desagradveis. A arma de fogo e seu porte devem estar legalizados pelas autoridades competentes e os calibres devem ser compatveis com o grupo taxonmico. Todos os mtodos, principalmente quando utilizados em animais de vida livre de grande porte, devem considerar a segurana da equipe envolvida no procedimento e da populao.

10. Consideraes finais e concluses A eutansia um procedimento que envolve consideraes tcnicas e ticas. O mtodo deve garantir a inconscincia antes de qualquer sofrimento fsico e mental. De forma geral, o melhor mtodo o uso de sobredosagem de anestsicos gerais, principalmente os barbitricos, iniciando-se a partir de trs vezes a dose necessria para a anestesia da espcie alvo, com o aumento da dose caso necessrio at a observao do bito. Estas recomendaes se baseiam no conhecimento cientfico atual, os quais podem sofrer modificaes ao longo do tempo, com incluso ou excluso de distintas tcnicas. Todos os mtodos apresentam seus prs e contras, que devem ser pesados para alcanar os 39

______________________________________________________________________ objetivos da eutansia e do procedimento experimental. A observao da legislao vigente, o bom senso e a anlise crtica dos profissionais envolvidos e da Comisso de tica da Instituio so fundamentais. Os membros das Comisses de tica da Instituio deveriam ter a oportunidade de presenciar os mtodos que so aprovados pela Comisso, para entender as implicaes dos procedimentos nos animais e os impactos nos envolvidos, no que concernem os aspectos de risco fsico, danos psquicos e potencial de abuso de substncias entorpecentes. O uso de agentes e mtodos j em uso no Brasil e exterior, porm no descritos nestas recomendaes, no podem ser utilizados. Mtodos novos que sejam lanados aps a publicao destas Diretrizes, s podem ser utilizados desde que comprovados os mecanismos de ao de forma cientfica, em literatura de impacto internacional e respeitados os preceitos aqui estabelecidos, ou seja, se forem rpidos e no causarem dor ou sofrimento. Em casos de dvida, a Comisso de tica deve consultar o CONCEA.

11. Referncias principais Australian Code of practice for the care and use of animals for scientific purposes. 84p. 2004 - http://www.nhmrc.gov.au/_files_nhmrc/publications/attachments/ea16.pdf AVMA. Report of the AVMA panel on euthanasia. 36p, 2007. Canadian Council of Animal Care guidelines on euthanasia of animals used in science 2010 - http://www.ccac.ca/Documents/Standards/Guidelines/Euthanasia.pdf Canadian Council of Animal Care guidelines on: the care and use of wildlife. 66p. 2003 http://www.ccac.ca/Documents/Standards/Guidelines/Wildlife.pdf Canadian Council of Animal Care guidelines on: the care and use of fish in research, teaching and testing, 87p. 2005 http://www.ccac.ca/Documents/Standards/Guidelines/Fish.pdf Close, B. et cal. Recommendations for euthanasia of experimental animals: Part 1. Laboratory Animals, v. 30, 293-316, 1996 http://la.rsmjournals.com/content/30/4/293.full.pdf Close, B. et cal. Recommendations for euthanasia of experimental animals: Part 2. Laboratory Animals, v. 31, p.1-32, 1997. http://la.rsmjournals.com/content/31/1/1.full.pdf Close, B.; Banister, K; Baumans, V.; Bernoth, E-M.; Bromage, N.; Bunyan, J.; Erhardt, W.; Flecknell, P.; Gregory, N., Hackbarth, H.; Morton, D.; Warwick, C. Recommendations for euthanasia of experimental animals: Part 2. LaboratoryAnimals, v.31, p.1-32, 1997. Conselho Federal de Medicina Veterinria. Resoluo no 1000, de 11 de ,maio de 2012 Dispe sobre procedimentos e mtodos de eutansia em animais, e d outras providncias. http://www.cfmv.org.br/portal/legislacao/resolucoes/resolucao_1000.pdf 40

______________________________________________________________________ Directive 2010/63/EU of The European Parliament and of The Council on the protection of animals used for scientific purposes of 22 September 2010. Official Journal of the European Union L 276/33-79. Guide for the care and use of laboratory animals, 8th ed. National Research Council (EUA) 2011 - http://grants.nih.gov/grants/olaw/Guide-for-the-Care-and-Use-of-LaboratoryAnimals.pdf Luna, S. P. L. & Teixeira, M. W. Eutansia: consideraes ticas e indicaes tcnicas. Revista CFMV (Braslia), v.13, p.60 - 69, 2007 Report of the ACLAM Task Force on Rodent Euthanasia http://www.aclam.org/Content/files/files/Public/Active/report_rodent_euth.pdf 2005 -

Svendsen, O., Kok, L., Lauritzen, B. Nociception after intraperitoneal injection of a sodium pentobarbitone formulation with and without lidocaine in rats quantied by expression of neuronal c-fos in the spinal cord a preliminary study. Laboratory Animals (2007) 41, 197 203. Vieira, A. M. L., Almeida, A. B., Magnabosco, C., Ferreira, J. C. P., Carvalho, J. L.B., Gomes, L. H., , Reichman, M. L., Paranhos, N. T., Garcia, R. C., Luna, S. P. L, Nunes, V. F. P., Cabral, V. B. Programa de controle de populaes de ces e gatos do estado de So Paulo. Boletim Epidemiolgico Paulista, Suplemento 7, v.6, 162p., 2009. Disponvel em ftp://ftp.cve.saude.sp.gov.br/doc_tec/outros/bepa_suple7v6_caesgatos.pdf West, G., Heard, D. J., Caulkett, N. Zoo animal and wildlifeimmobilization and anesthesia. Blackwell Publishing, Ames, Iowa, 1st ed. ISBN-13: 978-0-8138-2566-3/2007. 2007, 718p.

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______________________________________________________________________ Tabela 1: Agentes e mtodos de eutansia por grupo taxonmico* Classe/Ordem/Nome comum Mtodo Classe Amphibia - Anfbios (de acordo com a espcie) - exemplo sapo Sulfonato metano de tricana (TSS ou MS222) (imerso em soluo tamponada at o pH 7) Recomendveis Benzocana (injeo nos sacos linfticos subcutneos ou imerso em soluo tamponada at o pH 7) Barbitricos por injeo intravenosa, ou associado a lidocana, quando injetado nos sacos linfticos subcutneos ou intra-abdominal Anestsicos gerais intravenosos (exemplo: propofol) Anestsicos inalatrios (para espcies que no retm a respirao, seguido de outro mtodo de eutansia) Aceitos com restrio Decapitao e perfurao craniana Atordoamento e decapitao em animais de porte pequeno (no pode ser realizada com tesoura ou lmina) Pistola de ar comprimido ou de dardo cativo CO2, CO e outros mtodos no descritos nestas diretrizes

Inaceitveis

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______________________________________________________________________ Tabela 1: Agentes e mtodos de eutansia por grupos taxonmicos* (continuao) Classe/Ordem/Nome comum Mtodo Classe Aves (de acordo com a espcie) Barbitricos (intravenoso ou intraperitoneal por esta ltima via associados com anestsico local) Recomendveis Anestsicos gerais por via intravenosa (e.g. propofol), seguido ou no de cloreto de potssio por via intravenosa Anestsicos inalatrios seguidos, quando necessrio, de outros mtodos que assegurem a morte Aceitos com restrio Deslocamento cervical (apenas em aves at 3 kg) Tiro com arma de fogo (em animais de vida livre, principalmente os de hbitos em copas das rvores, em condies a campo e realizado por atirador habilitado) Pistola de dardo cativo para grandes aves Pistola de ar comprimido para grandes aves, seguido de outros mtodos para assegurar a morte CO2 desde que sejam seguidas as recomendaes desta diretriz Nitrognio ou argnio Decapitao com equipamento de uso especfico e comercialmente disponvel (no pode ser realizada com tesoura ou lmina) Atordoamento por eletronarcose, seguido de exsanguinao ou de outro mtodo que assegure a morte Compresso torcica (apenas em aves de vida livre com peso inferior a 50 gramas) Atordoamento, CO, macerao para pintos e outros mtodos no descritos nestas diretrizes

Inaceitveis

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______________________________________________________________________ Tabela 1: Agentes e mtodos de eutansia por grupos taxonmicos* (continuao) Classe/Ordem/Nome comum Mtodo Classes Osteichthyes (Peixes sseos) e Chondrichthyes (Peixes cartilaginosos) leo de cravo da ndia ou eugenol (imerso) Recomendveis Sulfonato metano de tricana (TSS ou MS222) (imerso em soluo tamponada at o pH 7) Benzocana ou outro anestsico local (imerso em soluo tamponada at o pH 7) Barbitricos por via intraperitoneal Anestsicos gerais (propofol, etomidato, metomidato) Anestsicos inalatrios, seguido de outro mtodo para assegurar a morte Aceitos com restrio Atordoamento ou anestesia geral e decapitao Atordoamento e destruio do crebro (perfurao craniana) 2-fenoxietanol (imerso) Atordoamento por eletronarcose, seguido de exsanguinao ou de outro mtodo que assegure a morte Congelamento com nitrognio lquido para pequenos peixes [at 200 mg (0,2 g)] Deslocamento cervical, decapitao/seco da medula espinhal, hipotermia, macerao, CO2 e outros mtodos no descritos nestas diretrizes

Inaceitveis

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______________________________________________________________________ Tabela 1: Agentes e mtodos de eutansia por grupos taxonmicos* (continuao) Classe Mammalia (Mamferos) Ordem Rodentia - Roedores e pequenos mamferos camundongos, ratos, hamster, gerbil, cobaios Barbitricos intravenoso ou intraperitoneal (neste caso associados com anestsico local) Recomendveis Anestsicos gerais intravenosos (exemplo propofol) Anestsicos inalatrios (e. g. isofluorano, para espcies que no retm a respirao) Exsanguinao por puno cardaca aps anestesia geral Aceitos com restrio CO2, desde que sejam seguidas as recomendaes desta diretriz Deslocamento cervical (ratos <150 g, camundongos) Decapitao com equipamento de uso especfico e comercialmente disponvel (lminas e tesouras afiadas podem ser utilizadas em neonatos) Micro-ondas especficos para esta finalidade (no aceito micro-ondas de uso domstico) Nitrognio lquido para fetos e neonatos de ratos e camundongos Atordoamento, seguido de exsanguinao (apenas em animais silvestres em situaes de campo) CO, ter, nitrognio, argnio e outros mtodos no descritos nestas diretrizes

Inaceitveis Ordem Lagomorpha Coelhos Recomendveis

Barbitricos Anestsicos gerais intravenosos (e. g. propofol, embutramina) Anestsicos inalatrios, seguido, se necessrio, de outros mtodos para assegurar a morte Exsanguinao por puno cardaca aps anestesia geral Deslocamento cervical (<1 kg), apenas se previamente anestesiado Decapitao com equipamento de uso especfico (<1 kg) - (no pode ser realizada com tesoura ou lmina) Atordoamento por eletronarcose, seguido de outro mtodo que assegure a morte Pistola de insensibilizao ou dardo cativo, seguido de outro mtodo que assegure a morte, em condies a campo e realizado por operador experiente e capacitado (animais selvagens) Atordoamento e deslocamento cervical, CO2, nitrognio, argnio, CO e outros mtodos no descritos nestas diretrizes 45

Aceitos com restrio

Inaceitveis

______________________________________________________________________ Tabela 1: Agentes e mtodos de eutansia por grupos taxonmicos* (continuao) Classe Mammalia (Mamferos) Ordem Carnivora Famlias Felidae (gatos), Canidae (ces) e Mustelidae (Fures) Barbitricos por via intravenosa ou intraperitoneal (apenas em animais muito pequenos ou recm-nascidos pela Recomendveis impossibilidade de injeo intravenosa, neste caso com adio de lidocana) Anestsicos gerais por via intravenosa (e. g. propofol, embutramina) Anestsicos inalatrios, seguido, se necessrio, de outros mtodos para assegurar a morte Aps a perda do reflexo corneal, os mtodos acima podem ser complementados por: injeo de lidocana na cisterna magna, bloqueador neuromuscular e/ou cloreto de potssio) Aceitos com restrio Eletrocusso, precedida de anestesia geral com perda de reflexo corneal Tiro com arma de fogo em condies de campo, exclusivamente para animais selvagens Nitrognio, argnio, CO2, CO, atordoamento, e outros mtodos no descritos nestas diretrizes

Inaceitveis

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______________________________________________________________________ Tabela 1: Agentes e mtodos de eutansia por grupo taxonmico* (continuao) Classe/Ordem/Nome comum Mtodo Classe Mammalia (Mamferos) Ordem Artiodactila Ruminantes bovinos, caprinos e ovinos Sedao, se necessrio, seguida de barbitricos ou outros anestsicos gerais intravenosos, associados ou no a ter Recomendveis gliceril guaiacol ou hidrato de cloral. Aps confirmao da inconscincia e perda do reflexo corneal, esses mtodos podem ser complementados por aplicao de lidocana na cisterna magna, bloqueador neuromuscular e/ou cloreto de potssio. Aceitos com restrio Eletrocusso, precedida de anestesia geral com perda de reflexo corneal Pistola de dardo cativo ou de insensibilizao por ar comprimido (neste caso, seguido de exsanguinao) em condies a campo, realizado por operador experiente Atordoamento eltrico (eletronarcose), seguido de outro mtodo que assegure a morte Tiro com arma de fogo (apenas em condies a campo e realizado por atirador experiente e habilitado) Atordoamento por concusso e outros mtodos no descritos nestas diretrizes

Inaceitveis Ordem Artiodactila Sunos Recomendveis

Sedao, se necessrio, seguido de barbitricos intravenoso (ou intraperitoneal, nos recm-nascidos, associados com anestsico local), ou outros anestsicos gerais intravenosos e, aps confirmao de inconscincia, caso necessrio, cloreto de potssio intravenoso Anestsicos inalatrios, com confirmao da morte ou seguido de outros mtodos, para confirmar a morte Eletrocusso, precedida de anestesia geral com perda de reflexo corneal Pistola de ar comprimido ou de dardo cativo, seguido de exsanguinao ou de outro mtodo que assegure a morte (em condies a campo e realizado por operador experiente) Atordoamento eltrico (eletronarcose), seguido de outro mtodo que assegure a morte (realizado por operador experiente) Tiro com arma de fogo (apenas em condies a campo e realizado por atirador experiente e habilitado) Argnio, CO2, perfurao craniana, CO e outros mtodos no descritos nestas diretrizes 47

Aceitos com restrio

Inaceitveis

______________________________________________________________________ Tabela 1: Agentes e mtodos de eutansia por grupo taxonmico* (continuao) Classe/Ordem/Nome comum Mtodo Classe Mammalia (Mamferos) Ordem Perissodactila Equdeos Cavalos, jumentos, burros Sedao, seguida de barbitricos ou outros anestsicos gerais intravenosos, associados ou no a ter gliceril Recomendveis guaiacol ou hidrato de cloral. Aps confirmao da inconscincia e perda do reflexo corneal, esses mtodos podem ser complementados por aplicao de lidocana na cisterna magna, bloqueador neuromuscular e/ou cloreto de potssio. Aceitos com restrio Pistola de insensibilizao por ar comprimido ou de dardo cativo, seguido de outro mtodo que assegure a morte (apenas em condies a campo e realizado por operador experiente) Tiro com arma de fogo (apenas em condies a campo e realizado por atirador experiente e habilitado) Eletrocusso, precedida de anestesia geral com perda de reflexo corneal Mtodos no descritos nestas diretrizes

Inaceitveis Mamferos marinhos Recomendveis

Barbitricos intravenosos Etorfina ou carfentanil Tiro com arma de fogo (apenas em condies a campo e realizado por atirador habilitado e experiente)

Aceitos com restrio

Ordem Primata - Primatas no humanos macacos Barbitricos (intravenoso) Recomendveis Anestsicos gerais intravenosos (exemplo propofol) Sedao profunda, seguida de anestsicos inalatrios, quando necessrio, seguido de outros mtodos para confirmao da morte Inaceitveis CO2, CO, nitrognio, argnio e outros mtodos no descritos nestas diretrizes

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______________________________________________________________________ Tabela 1: Agentes e mtodos de eutansia por grupos taxonmicos* (continuao) Classe Reptilia Rpteis (tartarugas, jabotis, serpentes, lagartos) Barbitricos (injeo intravenosa ou quando intraperitoneal associados com anestsico local) Recomendveis Anestsicos gerais intravenosos (exemplo: propofol, embutramina) Anestsicos inalatrios (para espcies que no seguram a respirao, seguido de outro mtodo de eutansia) Aceitos com restrio Pistola de dardo cativo (espcies maiores) Atordoamento seguido de decapitao e perfurao craniana (apenas em condies a campo) Tiro com arma de fogo (apenas crocodilianos) CO2 e outros mtodos no descritos nestas diretrizes

Inaceitveis

* Mtodos recomendveis causam pouco ou nenhum sofrimento e causam a morte de forma humanitria quando usados de forma isolada. * Mtodos aceitos com restrio no atendem todos os critrios ideais, requerem habilidade e tcnica, podem apresentar consideraes ocupacionais de sade e segurana ou podem no apresentar documentao cientfica conclusiva - podem ser aceitos pela CEUA, se: plenamente justificados para o objetivo cientfico, ou seja, forem insubstituveis por outros mtodos que comprometam os resultados experimentais, o responsvel apresentar comprovada habilidade e qualificao para o emprego do mtodo e se for considerado o devido cuidado sade e segurana ocupacionais. * Mtodos inaceitveis no se enquadram nos critrios ideais, no so humanitrios ou apresentam outros problemas significativos associados ao seu uso.

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______________________________________________________________________ Tabela 2: Mtodos de eutansia e suas caractersticas. Agente Modo de ao Tempo at efeito Barbitricos* Depresso direta do crtex cerebral, estruturas subcorticais e centros vitais, depresso do miocrdio, hipxia Outros anestsicos Depresso direta gerais do crtex intravenosos* cerebral, (e.g. propofol) estruturas subcorticais e centros vitais, depresso do miocrdio, hipxia Outros anestsicos Depresso direta gerais injetveis* do crtex (e.g. metomidato) cerebral, estruturas subcorticais e centros vitais, depresso do miocrdio, hipxia Anestsicos Depresso direta inalatrios* do crtex cerebral, estruturas Rpido para anestesia Praticidade Conteno necessria, habilidade para injeo intravenosa ou intraperitoneal, ou intra-abdominal ou nos sacos linfticos Conteno necessria, habilidade para injeo intravenosa Segurana Seguro, exceto pela possibilidade de uso como entorpecente, controle pela vigilncia sanitria Seguro, exceto pela possibilidade de uso como entorpecente, controle pela vigilncia sanitria Seguro, exceto pela possibilidade de uso como entorpecente, controle pela vigilncia sanitria Usar com sistema antipoluio, para minimizar Recomendvel Todos os grupos taxonmicos Aceitos com restrio No se aplica Eficcia e comentrios Altamente efetivo

Rpido para anestesia

No se aplica Todos os grupos taxonmicos

Altamente efetivo

Moderadamente rpido

Fcil utilizao em imerso; conteno necessria para injeo intramuscular

Todos os grupos taxonmicos

No se aplica

Altamente efetivo

Incio da anestesia moderadamente rpido; pode

Fcil utilizao em cmara ou recipiente fechado ou mscara facial;

Anfbios e rpteis que no retm a respirao,

No se aplica

Altamente efetivo, desde que os animais sejam expostos 50

______________________________________________________________________ subcorticais e centros vitais, hipxia ocorrer excitao na fase de induo borbulhamento na gua para peixes a exposio dos operadores assim como aves, peixes e mamferos que no retm a respirao Peixes, anfbios aos anestsicos em concentraes adequadas No usado em outras espcies Efetivo

Sulfonato metano de tricana tamponado

Depresso do SNC; hipxia

Muito rpido dependendo da dose

Fcil utilizao

Benzocana tamponada Atordoamento por concusso cerebral seguido de decapitao ou perfurao craniana Decapitao

Depresso do SNC; hipxia Interrupo de funcionamento dos centros vitais, depresso cerebral, hipxia Interrupo de funcionamento dos centros vitais, depresso cerebral, hipxia Destruio do tecido cerebral

Muito rpido Rpido

Fcil utilizao

Evitar o contato com a pele e olhos e formao de p e aerossis; usar em local com ventilao adequada, luvas, proteo ocular e mscara Seguro

Requer qualificao O uso de e habilidade do guilhotina e de executor lminas arriscado para o executor Requer qualificao O uso de e habilidade do guilhotina e de executor lminas arriscado para o executor Requer habilidade, conteno fsica adequada e alvo (posicionamento)

Peixes e anfbios No se aplica

No se aplica Alguns peixes, anfbios e rpteis

Efetivo Irreversvel, contraes musculares intensas

Rpido

No se aplica

Pistola de dardo cativo ou de ar comprimido (neste caso

Rpido

Seguro, desde No se aplica que manuseado de forma adequada e por

Pequenos anfbios, pequenas aves, roedores e coelhos (<1 kg) Anfbios, aves, rpteis e mamferos de grande porte

Irreversvel, contraes musculares intensas

Perda da conscincia instantnea. Entretanto, 51

______________________________________________________________________ seguido de outro mtodo para assegurar a morte) correto pessoa competente pode ocorrer atividade motora; usado em condies de campo Perda da conscincia instantnea, entretanto pode ocorrer atividade motora; atirador experiente

Tiro com arma de fogo

Leso de rgos vitais

Rpido

Requer, conteno fsica adequada e alvo (posicionamento) correto

Risco de acidente no executor e observadores

No se aplica

Deslocamento cervical

Interrupo de funcionamento dos centros vitais, depresso cerebral, hipxia

Rpido

Requer qualificao Seguro e habilidade do executor

No se aplica

Compresso torcica

Hipxia

Pode ser rpido

Requer qualificao Seguro e habilidade do executor

No se aplica

Dixido de carbono (exclusivamente acondicionado em cilindros e

Depresso direta do crtex cerebral, estruturas subcorticais e

Moderadamente rpido

Uso em cmara fechada

Mnimo risco

No se aplica

Mamferos, crocodilianos e aves de vida livre, em situaes excepcionais a campo (e.g. espcies encontradas apenas nas copas das rvores) Aves pequenas e mdias, camundongos, ratos (<200g); coelhos (<1kg) previamente anestesiados Aves de pequeno porte (menos de 50 gramas) de vida livre Frangos e pequenos roedores

Irreversvel, contraes musculares intensas

Situaes excepcionais em vida livre

Inadequado para animais imaturos ou neonatos; irritao das 52

______________________________________________________________________ seguindo as especificaes desta diretriz) Argnio, nitrognio centros vitais, depresso do miocrdio, hipxia Hipxia mucosas

Rpido

Fcil utilizao em cmara fechada de rpido preenchimento Fcil utilizao

Seguro, se houver boa ventilao no local Seguro

No se aplica

Frangos

2 fenoxietanol

Depresso do SNC, hipxia

Muito rpido dependendo da dose Muito rpido dependendo da dose

No se aplica

Peixes

leo de cravo ou eugenol

Micro-ondas especfico para esta finalidade, comercialmente disponvel Atordoamento por concusso, seguido de exsanguinao ou outro mtodo que induza a morte Eletronarcose

Bloqueio neuromuscular competitivo; no est claro se causa anestesia Inativao das enzimas cerebrais pelo aquecimento Destruio do tecido cerebral

Fcil utilizao

Seguro

Peixes

No se aplica

Efetivo, a no ser em neonatos; outros mtodos so preferveis Efetivo, mecanismo de ao pouco claro Efetivo, mecanismo de ao pouco claro Efetivo para necessidades especiais

Muito rpido

Requer qualificao Seguro e equipamento altamente especializado Requer habilidade, conteno fsica adequada e fora apropriada Seguro

No se aplica

Camundongos e ratos

Rpido

No se aplica

Roedores silvestres em situaes excepcionais e a campo Coelhos, ruminantes, sunos, peixes e galinhas Ratos, hamster

Deve ser realizado propriamente por executor experiente Contraes musculares intensas; usado em abatedouros Questionvel e 53

Depresso cerebral

Pode ser rpido

Nitrognio lquido

Depresso

Rpido

Requer qualificao Risco aos do executor; nem envolvidos sempre de fcil realizao Fcil utilizao Seguro

No se aplica

No se aplica

______________________________________________________________________ cerebral, morte por congelamento Exsanguinao por puno cardaca aps anestesia geral Choque hipovolmico Rpido Requer habilidade Seguro Pequenos roedores e coelhos. e pouco camundongos humanitrio at dois dias de vida No se aplica Efetivo

* Os agentes anestsicos devem ser adquiridos e utilizados de acordo com a legislao vigente

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