FACULDADES OSWALDO CRUZ

IDENTIFICAO E HIDRLISE DOS CARBOIDRATOS (Relatrio nmero 01)

SO PAULO 2014

2 Nome da Experincia: Identificao e Hidrlise dos Carboidratos Nmero da Experincia Nome: Nome: Nome: Nome: Danyele Bertanha Fernando Rodrigues Gabriela Gandra Rodrigo Victorino 01 Data da Realizao da Experincia Nmero: Nmero: Nmero: Nmero: 11-18/03/2014 15.12.161 15.12.085 15.12.162 15.12.111

3 1. INTRODUO

Os carboidratos ou hidratos de carbono so biomolculas que possuem a frmula mnima (CH2O)n. Classificam-se em monossacardeos, dissacardeos, oligossacardeos e polissacardeos. Os monossacardeos so classificados como aldoses (aldedos) ou cetoses (cetonas) em funo do grupo funcional que apresentam e, de acordo com o nmero de tomos de carbono, so tambm classificados como trioses, tetroses, pentoses, hexoses, etc. Dissacardeos, trissacardeos e oligossacardeos so formados pela condensao de monossacardeos, envolvendo a perda de gua (ligao glicosdica). So alguns exemplos de carboidratos encontrados nos sistemas vivos: -D-ribose: encontrada compondo cidos nuclicos; -D-Glicose: Encontrado na forma livre em frutas e, na forma polimrica, em diversos vegetais e animais. o acar que transportado pelo sangue e empregado pelos tecidos como fonte de energia; -D-Frutose: Est no mel e nas frutas. convertido em glicose no fgado. -D-Galactose: Obtido da hidrlise da lactose. Transforma-se em glicose no fgado; -Lactose: Dissacardeo composto por galactose e glicose. Encontrado no leite; -Sacarose: Dissacardeo constitudo por frutose e glicose. Encontrado em frutas e no mel; -Amido: polmero de glicose. Encontrado principalmente em cereais e razes. Sua hidrlise produz glicose. Tem funo de reserva energtica; -Glicognio: Polmero de glicose, presente no fgado e msculos. uma reserva de energia em animais. Sua hidrlise produz glicose.

4 2. OBJETIVOS

Este experimento tem como objetivo identificar os carboidratos atravs de suas diferenas funcionais e estruturais:

-Acares redutores: Carboidratos que apresentam em sua estrutura molecular a hidroxila do carbono anomrico livre (no envolvida em ligaes glicosdicas) so denominados acares redutores. Estes acares so capazes de reduzir ons de Cu2+ estabilizados em soluo por agentes complexantes (azul), formando um precipitado de xido cuproso (cor laranja a vermelho tijolo). A colorao da soluo final e/ou do precipitado depender apenas da concentrao do carboidrato presente na soluo. Os testes mais comuns para acares redutores so o de Fehling e o de Benedict.

-Reao com cidos: cidos concentrados hidrolisam e desidratam carboidratos formando furfurais ou hidroximetilfurfurais, aldedos derivados do furano. Na presena de derivados fenlicos ocorre a formao de complexos coloridos, permitindo a identificao qualitativa de monossacardeos. A reao de Molish indica a presena de carboidratos em geral que formam furfurais (pentoses) ou hidroximetilfurfurais (hexoses) pela ao desidratante de cidos concentrados (H2SO4) na presena de naftol. J a reao de Seliwanoff (HCl + resorcinol) nos permite diferenciar cetoses de aldoses, j que as cetonas produzem furfurais mais rapidamente.

-Reao com Lugol: Esta reao importante na determinao na identificao qualitativa de carboidratos. Os homopolissacardeos, como o amido, apresentam uma estrutura tridimensional da cadeia glicosdica em forma de espiral. O tomo de iodo metlico presente no lugol se complexa com a cadeia de -amilose, a partir de dois grupos hidroxilas e dois hidrognios, encaixando-se perfeitamente dentro dessa espiral, provocando a formao da colorao azul caracterstica de reao positiva. Em cadeias ramificadas, mas no helicoidais, h formao da colorao vermelha (glicognio e dextrinas). O lugol tambm nos permite diferenciar glicose de frutose, j que o grupo aldedo reage mais rapidamente formando um sal.

5 3. REAGENTES

Soluo de sacarose 0,1 M Soluo de amido 0,5% Soluo de glicose 0,1 M Soluo de edulcorante 0,5% Algodo Soluo de frutose 0,1 M Soluo de lactose 0,1 M Soluo de acar comum 1% Reagente de Molish Reagente de Lugol Reagente de Seliwanoff Reagente de Benedict H2SO4(conc.) e H2SO4 0,1 M HCl(conc.) e HCl 0,1 M

6 4. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

4.1.

Identificao dos Carboidratos

4.1.1. Reao com Reagente de Molish

Foram preparados 6 tubos de ensaio contendo aproximadamente 1 mL de: a) H2O b) Glicose 0,1 M c) Sacarose 0,1 M d) Amido 0,5% e) Edulcorante 0,5% f) Algodo + H2O Em cada um dos tubos foi adicionado 4 gotas de reagente de Molish, seguido de agitao. A seguir foi adicionado vagarosamente 1 mL de H2SO4(conc.) em cada um dos tubos, observando as possveis alteraes.

4.1.2. Reao com Iodo

Foram preparados cinco tubos de ensaio contendo 1 mL das seguintes substncias: a) gua b) Glicose 0,1 M c) Sacarose 0,1 M d) Amido 0,5% e) Algodo + gua

7 Em cada um dos tubos foi acrescido 5 gotas de Reagente de Lugol e observadas as possveis alteraes. O tubo (d) foi moderadamente aquecido e, observado antes, durante e depois de tal aquecimento.

4.1.3. Reao com Seliwanoff

Foram dispostos quatro tubos de ensaio contendo aproximadamente 3 mL de Reagente de Seliwanoff acrescidos de 5 gotas das seguintes substncias: a) gua b) Frutose 0,1 M c) Glicose 0,1 M d) Sacarose 0,1 M Os tubos de ensaio foram colocados em banho-maria e observados sucessivamente, durante 10 minutos.

4.1.4. Reao do Acar Redutor Reao de Benedict

Em oito tubos de ensaio foram adicionados cerca de 1 mL das seguintes substncias: a) gua b) Glicose 0,1 M c) Frutose 0,1 M d) Sacarose 0,1 M e) Amido 0,5% f) Lactose 0,1 M g) Acar comum 1% h) Edulcorante 0,5%

8 Em cada um dos tubos foi acrescido 1 mL de Reativo de Benedict, seguido de aproximadamente 5 minutos de aquecimento em banho-maria fervente. Foram observadas as possveis alteraes.

4.2.

Hidrlise de Carboidratos

4.2.1. Hidrlise de Dissacardeo

Foram adicionados a um tubo de ensaio (A) 1 mL de sacarose 0,1 M + 4 mL de H2SO4 0,1 M. Aps agitao foi retirada uma alquota de 1 mL, neutralizada com soluo de NaOH e, identificada em um tubo de ensaio como T0. O tubo de ensaio (A) foi colocado em banho-maria fervente, e aps 10 minutos foi retirada alquota de 1 mL, neutralizada com NaOH e, identificada como T10. Foram adicionados aos tubos, T0 e T10, 1 mL de Reagente de Benedict, os quais sofreram agitao e foram colocados na sequncia novamente no banho-maria fervente. Foram observadas as possveis alteraes nos tubos T0 e T10.

4.2.2. Hidrlise de Polissacardeo

Em um erlenmeyer foram adicionados 10 mL de soluo de amido 0,5%, acrescido de 5 gotas de HCl(conc.). Aps breve agitao foram retiradas duas alquotas de 1 mL, rotuladas como T0B e T0L; a amostra T0B foi neutralizada para posterior anlise com Benedict. O erlenmeyer foi aquecido diretamente no bico de Bnsen, com suporte da tela de amianto, mantendo-se a fervura controlada. Aps 10 minutos de fervura foram retiradas duas alquotas de 1 mL cada, rotuladas como T10B e T10L respectivamente, tendo a amostra T10B sofrido neutralizao posterior. Aps o resfriamento dos tubos, foram adicionados 4 gotas de Lugol aos tubos T0L e T10L e, aos tubos T0B e T10B foram adicionados 1 mL de Reativo de Benedict, estes dois ltimos foram transferidos novamente para o banho-maria fervente. Foram realizadas as devidas observaes quanto as possveis modificaes.

9 5. RESULTADOS E DISCUSSES

5.1.

Identificao dos carboidratos

5.1.1. Reao com Reagente de Molish

Substncia gua Glicose Sacarose Amido Edulcorante Algodo + gua Negativo Positivo Positivo Positivo Negativo Positivo

Resultado

Na reao de Molish o cido sulfrico concentrado promove a hidrlise e a desidratao dos compostos, os monossacardeos ento do origem ao Furfural e, este reage com o alfa-naftol produzindo um complexo violeta. Por este teste possvel identificar acares no geral (mono, di e polissacardeos). Experimentalmente obtemos que a glicose, sacarose, amido e algodo so carboidratos, contrariamente gua e ao edulcorante (que no apresentaram alterao de cor), informaes que conferem com a literatura.

5.1.2. Reao com Iodo

Substncia gua Glicose Negativo Negativo

Resultado

10 Sacarose Amido Algodo + gua Negativo Positivo Negativo

O teste feito com iodo especfico para amido, resultando em cor. Experimentalmente obtemos positivo apenas para o amido, confirmando que as demais substncias no so amido, logo no possuem estrutura helicoidal de reserva.

5.1.3. Reao de Seliwanoff

Substncia gua Frutose Glicose Sacarose

Resultado Negativo Positivo Negativo Positivo

A reao de Seliwanoff identifica cetoses, a partir da colorao vermelha, vinda da reao de separao de aldoses e cetoses promovida pelo cido concentrado, e seguida de reao do furfural formado com o resorcionol. Este teste nos forneceu resultado positivo para frutose e sacarose, indicando que essas duas substncias contm em suas composies grupos funcionais cetoses, o que se mantm fiel literatura.

5.1.4. Reao de Benedict

Substncia gua Glicose Negativo Positivo

Resultado

11 Frutose Sacarose Amido Lactose Acar comum Edulcorante Positivo Negativo Negativo Positivo Negativo Negativo

A reao de Benedict nos permite identificar se o acar ou no redutor, ou seja, se possui grupamento glicosdico livre, os quais so capazes de reduzir ons Cu2+, que origina o xido cuproso (precipitado vermelho), indicador de reao positiva. Experimentalmente obtemos que so acares redutores a glicose, lactose e frutose, o que pode ser confirmado na literatura.

5.2. Hidrlise de Carboidratos

5.2.1. Hidrlise de dissacardeo

Sacarose T0 T10 Negativo Positivo

Resultado

O tubo T0 com resultado negativo e, o tubo T10 com resultado positivo, indicanos que a hidrlise s ocorreu com o aquecimento da amostra, uma vez que no foi utilizado cido concentrado.

5.2.2. Hidrlise de polissacardeo

12 Benedict T0B T10B Resultado Negativo Positivo T0L T10L Lugol Resultado Positivo Negativo

Na hidrlise do amido foi utilizado primeiramente o teste de Benedict, que indica acares redutores (a hidroxila glicosdica livre nos indica que as ligaes entre os monossacardeos foram quebradas). Os resultados foram negativos antes do aquecimento (T0B), pois foi utilizado cido diludo, o qual sozinho no capaz de hidrolisar as molculas do carboidrato. Aps o aquecimento (T10B), o teste de Benedict foi positivo, indicando que ocorreu a hidrlise das molculas. Paralelamente foi realizado teste com Lugol, nos dando resultados opostos, positivo antes do aquecimento e, negativo enquanto aquecido. O lugol indica a presena de estruturas helicoidais, presentes no amido, pelo teste foi demonstrado que essas estruturas estavam intactas antes do aquecimento, nos fornecendo a colorao azul tpica, e com o aquecimento, foi descaracterizada a estrutura dando negativo para o teste.

13 6. CONCLUSO

A partir dos experimentos realizados, pode-se constatar a organizao dos carboidratos, como identific-las, bem como as etapas do processo de hidrlise em alguns oligossacardeos e polissacardeos. Mostrou-se tambm como suas propriedades podem variar de acordo com o meio reacional, como distinguir uma aldose de uma cetose, como se comporta um carboidrato redutor e um noredutor. Concluindo-se assim, que essa prtica foi de suma importncia para a assimilao e complemento dos assuntos aprendidos nas aulas tericas.

14 7. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

CISTERNAS, J.R.; VARGA, J. e MONTE, O. Fundamentos de Bioqumica Experimental. 2 ed. So Paulo: Editora Atheneu, 2001.

LEHNINGER Bioqumica. 4 ed. Sarvier, 2006.