Laboratorio

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Molculas esenciales para la vida
Objetivos
Al finalizar este laboratorio el estudiante podr: 1. Reconocer las molculas esenciales para la vida, los grupos funcionales que las componen y sus caractersticas. 2. Conocer pruebas para la identificacin de grupos funcionales. 3. Definir qu es una reaccin Redox. 4. Identificar mediante pruebas qumicas las molculas de importancia biolgica presentes en muestras sin identificar (desconocidos).

INTRODUCCIN
os organismos se distinguen de la materia inanimada por estar compuestos de molculas orgnicas, que incluyen carbohidratos, grasas, protenas y cidos nucleicos. Estas molculas son orgnicas porque estn compuestas en gran medida por tomos de carbono. Los tomos de carbono pueden formar una gran diversidad de molculas porque pueden enlazarse con hasta cuatro elementos para formar el esqueleto de las molculas orgnicas. Adems de carbono, las molculas orgnicas contienen varios o todos estos elementos: hidrgeno, oxgeno, nitrgeno, azufre y fsforo. Los tomos de carbono se unen unos a otros tomos para formar cadenas que varan en su extensin y arreglo (pueden ser rectas, ramificadas o formar anillos). Los enlaces entre tomos de carbono, y entre stos y otros tomos, pueden ser sencillos o dobles. Una de las molculas orgnicas ms simples es metano (CH4), formada por enlaces sencillos de un tomo de carbono con cuatro tomos de hidrgeno. Si se cambiara uno o varios de los tomos de hidrgeno por otros grupos de tomos, las propiedades de la molcula nueva cambiaran drsticamente. Estos grupos de tomos se conocen como grupos funcionales. A continuacin se detallan algunas caractersticas de varios grupos funcionales importantes (vea tambin la Tabla 4.1).
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GRUPOS FUNCIONALES:
Grupo hidroxilo: -OH Es un tomo de oxgeno unido a un tomo de hidrgeno. Es un grupo polar1 porque el tomo de oxgeno tiene una carga parcial negativa. Se disuelve en agua debido a la interaccin del grupo hidroxilo con las molculas de agua. Est presente en carbohidratos y alcoholes. Dos ejemplos de alcoholes sencillos: metanol y etanol. Grupo carbonilo: -CO Es un tomo de carbono unido a un tomo de oxgeno por un enlace covalente doble. Si el grupo carbonilo se encuentra al final de la molcula y est unido a un tomo de hidrgeno, el compuesto orgnico se conoce como un aldehdo.
Aldehdo O || RCH

Si el grupo carbonilo se encuentra en el medio de la molcula, el compuesto orgnico se conoce como una cetona.

Cetona O
||

RCR

Es un grupo polar porque el tomo de oxgeno tiene una carga parcial negativa. Est presente en los carbohidratos. Un ejemplo de un aldehdo es formaldehdo, y un ejemplo de una cetona es acetona. Grupo carboxilo: -COOH Es un tomo de carbono unido a un tomo de oxgeno por un enlace covalente doble, y unido por un enlace covalente sencillo con otro tomo de oxgeno, que a su vez est enlazado a un tomo de hidrgeno.
1

El arreglo geomtrico de los tomos en algunas molculas hace que algunas molculas tengan partes con cargas elctricas positivas y otras partes con cargas elctricas negativas. En este caso, la molcula es polar, o sea, que tiene polos elctricos. De no tener cargas la molcula es una molcula no polar. El que una molcula sea polar determina si puede reaccionar con otras molculas o que pueda formar soluciones. Ejemplo de una molcula polar es el agua, que tiene cargas negativas hacia un lado de la molcula, por parte del oxgeno, y cargas positivas, por parte del hidrgeno, hacia el otro lado.

Es un grupo altamente polar debido a los dos tomos de oxgeno. Est presente en los cidos orgnicos, como los aminocidos. Dos molculas que contienen este grupo son el cido actico y el cido frmico.

D. Grupo amino: -NH2 Es un tomo de nitrgeno unido covalentemente a dos tomos de hidrgeno. Es un grupo bsico dbil. Los compuestos que tienen este grupo funcional se conocen como aminas. Est presente en los aminocidos y en los cidos nucleicos. Dos ejemplos de molculas que contienen este grupo son cisteina y triptofano (aminocidos).

E. Grupo sulfhidrilo: -SH Es un tomo de azufre unido a un tomo de hidrgeno. Es un grupo importante para las protenas porque les provee estabilidad interna. Los compuestos que tienen este grupo funcional se conocen como tioles. Un ejemplo de un tiol es el etanetiol.

F. Grupo fosfato: -OPO3 Es un tomo de oxgeno unido covalentemente a un carbono, con los dems tomos de oxgeno unidos al fsforo. Es un componente importante de los fosfolpidos y de los cidos nucleicos. Los compuestos que tienen este grupo funcional se conocen como fosfatos orgnicos. Una molcula que posee grupos fosfatos es el ATP, o trifosfato de adenosina, que es la fuente principal de energa de las clulas.

Tabla 4.1 Grupos funcionales ms importantes y ejemplos de molculas que los poseen.

Grupo funcional
Hidroxilo OH

Clase de molcula
Alcoholes

Ejemplo
H H | | HCCOH | | H H (Etanol) H H O | | HCCC | | \ H H H (Propanal)
H O H | || | CCCCC | | H H

(a) Carbonilo

Aldehdos

(b) Carbonilo

Cetonas

Carboxilo

cidos carboxlicos (cidos orgnicos)

(Acetona) H O | HCC | \ H OH (cido Actico) H H | HCN | \ H H (Metilamina) H H | | HCCSH | | H H (Etanetiol) O OH OH H || | | | HCCC OPO | | | | O H H H (Fosfato glicerol)

Amino H N \ H Sulfhidrilo SH

Aminas

Tioles

Fosfato O || OPO | O Fosfatos orgnicos

EJERCICIO 4.1
IDENTIFICACIN DE MOLCULAS BIOLGICAS

El propsito de los ejercicios de esta seccin es familiarizarle con algunas de las pruebas que se utilizan para detectar molculas orgnicas segn sus propiedades nicas. Por lo general, se puede determinar la clase de molcula orgnica aadiendo un reactivo que reacciona con un grupo funcional particular. Si el grupo funcional est presente, el reactivo formar un color especfico. De lo contrario, no habr cambio de color. Esto es un ejemplo de una prueba colorimtrica. Las pruebas que detectan la presencia de molculas orgnicas son pruebas cualitativas, mientras que las pruebas que permiten determinar la cantidad de una molcula orgnica son pruebas cuantitativas. Las pruebas colorimtricas pueden ser cuantitativas si la intensidad del color formado es proporcional a la cantidad de sustancia orgnica.

A. Carbohidratos
Los carbohidratos son componentes estructurales importantes de las clulas y son adems una forma importante de almacenar energa. Estas molculas usualmente contienen carbono, hidrgeno y oxgeno en una proporcin de 1:2:1. Los carbohidratos se clasifican como monosacridos, disacridos o polisacridos, dependiendo del tamao y la complejidad de la molcula (Figura 4.1). Los monosacridos se componen de una sola molcula de azcar. Cuando dos monosacridos se unen se produce un disacrido, y cuando dos o ms se unen se produce un polisacrido.

Carbohidratos

Monosacridos

Disacridos

Glucosa Fructosa Polisacridos

Sacarosa Lactosa

Almidn Celulosa

Figura

4.1

Ejemplos de carbohidratos.

A.1. Prueba de Benedict:

Muchos monosacridos, como la glucosa y la fructosa, y algunos disacridos, se conocen como azcares reductores porque poseen un aldehdo libre (no enlazado a los otros grupos en la molcula). La Prueba de Benedict se usa para detectar la presencia de azcares reductores porque el reactivo de Benedict contiene cobre y ste se reduce en presencia de azcares reductores. Durante esta reaccin el azcar se oxida. La reaccin antes mencionada se conoce como una reaccin oxidacin-reduccin (REDOX) porque la oxidacin del azcar sucede simultneamente con la reaccin de reduccin del cobre.2

Reaccin de Benedict antes de calentar la solucin: O Reactivo de Benedict oxidado + RC \ H

(azcar reductor)

Reaccin de Benedict despus de calentar la solucin: O Reactivo de Benedict reducido + RC \ OH

(azcar oxidado)

Cuando se aade el reactivo de Benedict al azcar reductor, y se aplica calor, el color de la mezcla cambia a naranja o ladrillo intenso mientras mayor sea la abundancia de azcares reductores. Un cambio a color verde indica la presencia de menos azcares reductores. Las azcares que no reducen, como la sacarosa, no producen cambios en color y la solucin se mantiene azul.

Los monosacridos que forman anillos no son azcares reductores porque no tienen un grupo aldehdo libre, pero pueden reducir si se convierten en monosacridos abiertos.

Oxidacin: reaccin en la cual una sustancia pierde electrones, recibe un oxgeno o es privada de hidrgeno. Reduccin: reaccin en la cual una sustancia gana electrones, es privada de oxgeno o recibe un tomo de hidrgeno.

M A T E R I A L E S

Tubos de ensayo pequeos Lpiz de cera Goteros Jugo de cebolla Jugo de papa

Solucin de 5% sacarosa Solucin de 5% fructosa Solucin de 5% glucosa Reactivo de Benedict

P R O C E D I M I E N T O

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10.

Marque seis tubos de ensayo pequeos a 1 y 3 centmetros del fondo y rotlelos del 1 al 6. Aada jugo de cebolla hasta 1 cm en el tubo 1. Aada jugo de papa hasta 1 cm en el tubo 2. Aada agua hasta 1 cm en el tubo 3. Aada sacarosa hasta 1 cm en el tubo 4. Aada fructosa hasta 1 cm en el tubo 5. Aada glucosa hasta 1 cm en el tubo 6. Aada reactivo de Benedict hasta los 3 cm en los seis tubos. Caliente los tubos por 3 minutos en un bao de agua hirviendo. Remueva y observe los colores obtenidos. P R E C A U C I N
C uid a d o a l t ra b a ja r co n lo s m eche ro s . No llen e d e ma sia d o el b a o d e a g u a . Us e p i n za s p a ra so s ten e r lo s tu b o s d e en sa yo ; e l co n ten id o e s ta r mu y ca li en te . E l rea c ti vo d e B en ed ic t es c u s ti co y p u ed e ca u s a rl e q u e ma d u ra s.

11. Anote los resultados en la Tabla 4.2 y comprelos con los resultados negativos y positivos que aparecen en la Figura 4.2. Tabla 4.2 Resultados de la prueba de Benedict para azcares reductores Tubo Contenido Color antes de calentar Color despus de calentar 1 Jugo de cebolla 2 3 4 5 6 Jugo de papa Agua Sacarosa Fructosa Glucosa
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12. Por qu se hace el experimento en un tubo con agua? 13. A juzgar por las estructuras qumicas de sacarosa, fructosa y glucosa, cules son azcares reductores? 14. Qu color muestra una reaccin negativa en presencia de azcares reductores? 15. Cul de los tubos contiene ms cantidad de azcares reductores? 16. Qu suceder si se hace la prueba con azcar de mesa? 17. Son todos los monosacridos azcares reductores? 18. Son los disacridos y polisacridos azcares reductores?

A.2. Prueba de Yodo:

La prueba de yodo se usa para detectar almidn. El almidn es un polmero de glucosa producido por las plantas y es una fuente importante de energa almacenada. La molcula de almidn forma hlices entre las cuales se inserta el yodo, tiendo el almidn de azul oscuro a negro.

M A T E R I A L E S

Tres tubos de ensayo pequeos Jugo de cebolla Jugo de papa Yodo Goteros Lpiz de cera

P R O C E D I M I E N T O

1. 2. 3. 4. 5. 6.

Marque tres tubos de ensayo a 1 centmetro del fondo y rotlelos del 1 al 3. Aada jugo de cebolla hasta 1 cm en el tubo 1. Aada jugo de papa hasta 1 cm en el tubo 2. Aada agua hasta 1 cm en el tubo 3. Aada de 3-4 gotas de yodo a cada tubo. Anote los resultados en la Tabla 4.3 y comprelos con los resultados en la Figura 4.2. Tabla 4.3 Resultados de la prueba de yodo para almidn Tubo Contenido Positivo 1 Jugo de cebolla 2 3 Jugo de papa Agua

Negativo

7. Cul de los tres tubos contiene ms almidn? 8. Cul es la funcin del almidn para la planta de papa?

B. Grasas (o Lpidos)
Los lpidos, igual que los carbohidratos, son una fuente importante de energa almacenada. Los lpidos son componentes importantes de las membranas celulares, de algunas vitaminas, de ciertas hormonas y del colesterol. Los lpidos son solubles en solventes no-polares y son muy poco solubles en agua porque se componen principalmente de cadenas de hidrocarbonos.

B.1. Prueba de Sudn para identificacin de grasas:

Detecta las cadenas de hidrocarbonos. El reactivo de Sudn produce una reaccin hidrofbica donde los grupos no-polares (los hidrocarbonos) se agrupan y son rodeados por molculas del reactivo. La prueba de Sudn tie los hidrocarbonos de rojo (Figura 4.2).

M A T E R I A L E S

Tubos de ensayo Agua y aceite Reactivo de Sudn

P R O C E D I M I E N T O

1. 2. 3. 4.

Aada 1 mL de agua y 1 mL de aceite al tubo 1. Aada slo 2 mL de agua al tubo 2. Aada una gota del reactivo de Sudn y mezcle. Anote sus resultados

5. Qu capa de la mezcla ti de rojo?

B.2. Prueba de Sudn para detectar grasas en almidn, agua destilada y aceite vegetal:
M A T E R I A L E S

Tijeras, lpiz Agua destilada Aceite vegetal Solucin de almidn

Tenazas Tres goteros Papel de filtro Plato Petri

Reactivo de Sudn Secadora de cabello

(opcional)

P R O C E D I M I E N T O

1. Corte un pedazo de papel de filtro que quepa en el fondo de un plato Petri. 2. Con un lpiz escriba las siguientes letras en el papel de filtro:

A = almidn D = agua destilada V = aceite vegetal

3. Dibuje un crculo pequeo al lado de cada letra; aqu se colocar cada solucin. 4. Utilizando goteros aada un poco de cada producto en el crculo correspondiente sobre el papel de filtro. 5. Deje que el papel se seque completamente. 6. Sature el papel con varias gotas de reactivo de Sudn.
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7. Lave el papel con agua en el plato Petri. 8. Seque el papel de filtro con una secadora de cabello, si est disponible. 9. Refirase a la Figura 4.2, y anote los resultados en la Tabla 4.4

Tabla 4.4 Resultados de la prueba de Sudn para grasas Mancha Solucin Intensidad de color A Almidn D Agua destilada V Aceite vegetal 10. Qu revelan los resultados sobre el almidn, el agua destilada y el aceite vegetal?

11. Contienen estos tres productos la cantidad de grasa esperada?

C. Protenas
Las protenas son componentes estructurales de las clulas, controlan sus procesos metablicos y actan como mensajeros qumicos. Adems, son parte importante de los anticuerpos, enzimas y receptores celulares. Las protenas estn formadas por cadenas de aminocidos. Debido a la presencia de los grupos amino y carboxilo, los aminocidos resisten cambios en pH y son amortiguadores importantes en soluciones biolgicas.

C.1. Prueba de Biuret:

El reactivo de Biuret se compone de hidrxido de sodio y sulfato de cobre. El grupo amino de las protenas reacciona con los iones de cobre del reactivo de Biuret y el reactivo cambia de azul a violeta (Figura 4.2). P R E C A U C I N
El r ea ct ivo d e Bi u re t e s c u s ti co y p u ed e ca u sa r q u ema d u ra s .

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M A T E R I A L E S

Tubos de ensayo Lpiz de cera Albmina

Caldo de pollo Reactivo de Biuret

P R O C E D I M I E N T O

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

Marque tres tubos de ensayo a 1 y a 3 cm del fondo. Aada albmina hasta 1 cm del fondo del tubo 1. Aada caldo de pollo hasta 1 cm del fondo del tubo 2. Aada agua hasta 1 cm del fondo del tubo 3. Aada el reactivo de Biuret hasta los 3 cm del fondo de los tres tubos. Refirase a la Figura 4.2 para comparar colores. Anote los resultados en la Tabla 4.5. Tabla 4.5 Tubo 1 2 3 Resultados de la prueba de Biuret para almidn Contenido Positivo Albmina Caldo de pollo Agua

Negativo

8. Cul es el componente principal de la albmina?

9. Podemos concluir por los resultados que hay protenas en el caldo de pollo?

10. Qu otras molculas biolgicas podra esperar encontrar en el caldo de pollo?

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D. cidos Nucleicos
Las clulas tienen dos tipos de cidos nucleicos: el cido ribonucleico (ARN) y el cido desoxiribonucleico (ADN). El ADN compone los genes que contienen la informacin hereditaria, mientras que el ARN es importante durante la sntesis de protenas. En este ejercicio, a travs de un procedimiento sencillo aislar el ADN de las frutas.
M A T E R I A L E S

Por grupo: Frutas (fresa, kiwi, tomate, guineo o mang) o cebollas Filtro de caf o gasa de cocinar (Cheese cloth) Tubo de ensayo Embudo cnico Varilla de vidrio o palito de madera Vaso pequeo (beaker) o matraz Licuadora Alcohol 70% (fro, en hielo) Solucin ltica *

L a s fr ut a s p u ed e n se r f r esc a s o c o ng e la d a s . S i s o n c o ng el a d a s, se d e b e n d esc o ng e la r a nte s d e l la b ora t or i o. S e p u ed e u ti liz a r c ua lq u ie r fr uta , p er o la s fr es a s u s ua l me nt e p ro d uc e n u na ma y or c a nt id a d d e AD N .

P R O C E D I M I E N T O

* Prepare de antemano la solucin ltica: Solucin ltica Mezcle lquido de fregar (o champ sin acondicionador) con agua en una razn de 1:9 A cada 100 ml de solucin preparada aada 1 gr de NaCl.

1. Seleccione una fruta y corte en pedazos hasta tener el equivalente a media taza. 2. Ponga los pedazos en la licuadora y aada 10 ml de la solucin ltica. 3. Macere en la licuadora hasta que se forma un pur.
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4. Coloque el embudo cnico con el filtro de caf o gasa sobre el vaso o matraz y filtre el lquido. 5. Transfiera el lquido filtrado a un tubo de ensayo hasta llegar a aproximadamente 5 cm del fondo del tubo. 6. Coloque el tubo de ensayo en hielo por 5 minutos. 7. Mzcle por inversin dos a tres veces. 8. Eche 5 ml del alcohol fro al tubo y agite suavemente con movimientos circulares. 9. Dentro de poco tiempo, se observarn tres capas: En el fondo , el extracto de fruta. En el medio , los hilos de ADN. En la capa superior , el alcohol. 10. Remueva el ADN con la varilla de vidrio y descrbalo (color, textura, apariencia).

11. Cul es la funcin de la solucin ltica?

12. Por qu fue importante utilizar alcohol a una temperatura fra?

EJERCICIO 4.2
IDENTIFICACIN DE MOLCULAS BIOLGICAS EN DESCONOCIDOS

Todas las molculas orgnicas presentes en nuestro cuerpo se derivan directamente o indirectamente de los alimentos que ingerimos. Las cantidades y proporciones de estas molculas orgnicas varan de un alimento a otro. Los granos y las papas, por ejemplo, son ricos en almidn, mientras que las carnes son ricas en protenas y grasas. Para determinar el valor nutricional de los alimentos hay que identificar las molculas orgnicas que contienen.
M A T E R I A L E S

Tubos de ensayo pequeos Goteros Lpiz de cera Yodo

Reactivo de Sudn Reactivo de Benedict Reactivo de Biuret

P R O C E D I M I E N T O

1. El instructor le entregar a cada grupo de dos a cuatro muestras desconocidas, a las cuales se les realizarn pruebas para detectar los compuestos presentes. 2. Cada prueba debe tener un control.
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3. Consulte la Figura 4.2 para determinar si los resultados fueron negativos o positivos y anote los resultados en la Tabla 4.6. Tabla 4.6 Resultados pruebas de desconocidos Muestra Pruebas Prueba del Carbohidratos Grasas desconocido Benedict Yodo Sudn 1 2 3 4 4. Cules de los siguientes se encontraron en cada desconocido? Desconocido 1 2 3 4 Azcares ________ ________ ________ ________ Almidn ________ ________ ________ ________ Grasas ______ ______ ______ ______ Protenas ________ ________ ________ ________ ADN ______ ______ ______ ______

Prueba Protenas Biuret

6. Cules fueron los controles positivos y negativos en el experimento. Por qu son tiles estos controles?

6. Prepare un informe sencillo que presente y discuta los resultados de este experimento.

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INFORMACIN ADICIONAL Recursos del tema se pueden encontrar en: http://www.mhhe.com/physsci/chemistry/chang Denniston, Topping and Caret (2004). General, Organic, and Biochemistry , 4ta Ed. Mc Graw Hill. New York. USA Boyer, B (1999). Concepts in Biochemistry, Brooks/Cole Publishing. http://employees.csbsju.edu/ssaupe/biol115/chem_biol.htm Solomon, Berg & Martin (2004). Biology, 7th Ed. Brooks Cole Publ.

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Resultados de la Prueba de Benedict: Color ladrillo: Positivo (concentracin alta de azcar) Color verde: Positivo (concentracin baja de azcar) Color azul: Negativo

Resultados de la Prueba de Yodo: Color negro o azul oscuro: Positivo (presencia de almidn) Color blanco transparente: Negativo

Resultados de la Prueba de Sudn: Color rojo: Positivo (contiene cadenas de hidrocarbonos) Color original o transparente: Negativo

Resultados de la Prueba de Biuret: Color violeta: Positivo (contiene grupos amino) Color azul: Negativo

Figura

4.2

Resultados positivos y negativos de las pruebas para la deteccin e identificacin de molculas orgnicas.

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LABORATORIO 4: MOLCULAS ESENCIALES PARA LA VIDA

PLAN DE ENSEANZA PARA LOS INSTRUCTORES

Destrezas que el estudiante adquirir a partir de este laboratorio:

1. 2. 3. 4. Trabajo grupal e individual Comunicacin escrita Aplicacin del laboratorio anterior (Cmo escribir un informe cientfico) Utilizacin de equipo de laboratorio y pruebas qumicas simples

Manejo del laboratorio:

Prepare el bao de Mara temprano durante el laboratorio. Los estudiantes deben estar familiarizados con conceptos qumicos bsicos. De no ser as, debe darse un repaso al comienzo del laboratorio. Los estudiantes deben usar bata de laboratorio, gafas de seguridad y zapatos cerrados porque trabajarn con sustancias corrosivas, tintes y mecheros. Recurdele a los estudiantes que deben venir preparados para el prximo laboratorio. A partir de este ejercicio se preparar un informe corto para entregar basado en lo aprendido en el laboratorio 3. Se prepararn el ttulo, los autores y el resumen, basados en el ejercicio 4.2.

Manejo del tiempo:

1. Prueba corta (si no se dio asignacin).............................(10 minutos) 2. Presentacin de objetivos y repaso de qumica...............(10 minutos) 3. Ejercicio 4.1: Identificacin de molculas biolgicas A.1: Azcares reductoras...........................................(20 minutos) A.2: Prueba de almidn.............................................(10 minutos) B.1: Grasas.................................................................(15 minutos) C.1: Protenas.................................................(10 minutos) D: cidos nucleicos .................................................. (10 minutos) 4. Discusin resultados (Ejercicio 4.1)......(10 minutos) 4. Ejercicio 4.2: Desconocidos............................................(35 minutos) 5. Discusin resultados (Ejercicio 4.2).........(10 minutos) 6. Resumen y conclusiones(15 minutos) 7. Instrucciones del informe corto.(10 minutos) 8. Visita al invernadero para tomar datos (experimento del laboratorio 2)(10 minutos) 9. Recoger el laboratorio.......................................................( 5 minutos)

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