PROPOSTA DE INVESTIGAO FCT - UNL | Espectroscopia em Bioqumica

Teste de gravidez com recurso Espectroscopia de Emisso de Fluorescncia

1. Introduo
A gonadotrofina corinica humana hCG, uma glicoprotena hormonal que est envolvida na reproduo humana, sendo secretada pela placenta aps a fertilizao, ou seja, aps a fecundao do vulo pelo espermatozide. No inicio da gravidez, as concentraes de hCG no soro e na urina da mulher aumentam rapidamente, sendo por isso, um bom marcador para os testes de gravidez. Esta hormona composta por duas subunidades, denominadas de alfa e beta. A maior parte dos testes qumicos para deteo da gravidez, baseia-se na presena da subunidade beta da hCG, no sangue ou urina. Assim, uma elevada concentrao da subunidade beta da hormona hCG, nomeadamente valores acima de 30 mUI/mL, associada a processos de gestao, que sugerem um resultado positivo para o teste de gravidez. Nesta proposta de investigao, prope-se a deteo da gravidez, recorrendo a um mtodo espectroscpico de emisso de fluorescncia, com vista a determinar e quantificar molculas de hCG fluorescentes previamente marcadas, na amostra de urina, em oposio ao recurso dos habituais e comuns testes de gravidez, vendidos em farmcias. Para isso, recomenda-se a recolha da amostra de urina da paciente logo de manh, ao levantar, uma vez que nessa altura do dia a urina se encontra no seu estado mais concentrado, o que facilita a deteo da hormona hCG no organismo.

2. Objectivo
Detetar a presena da hormona hCG na urina, atravs do recurso espectroscopia de emisso de fluorescncia.

3. Metodologia
Recorrer ao ensaio de imuno-fluorescncia, que uma tcnica que permite a deteo ou localizao de antignios numa amostra, a partir de uma marcao com anticorpos conjugados a uma molcula fluorescente (fluorforo). Assim, esta tcnica iria usar um anticorpo conjugado, neste caso o anticorpo monoclonal anti-beta hCG, fluorescente (marcado com fluorforo), que permitiria a deteo precisa e sensvel de antignios, as hormonas hCG, presentes numa amostra de urina. Esta deteo s seria possvel atravs da emisso de fluorescncia do produto final - tcnica da espectroscopia de emisso de fluorescncia.

4. Procedimento Experimental
O mtodo utilizaria o anticorpo monoclonal anti-beta hCG marcado com um fluorforo (que uma substncia que absorve luz ultravioleta e emite luz visvel, tornando-se fluorescente). Como fluorforo, poder-se-ia usar isotionato de fluorescena ou compostos de rodamina, uma vez que so dos compostos mais usados para a conjugao com anticorpos, de forma a torn-los fluorescentes sob condies adequadas de iluminao. O anticorpo especfico marcado com fluorforo, isto , o anticorpo monoclonal anti-beta hCG conjugado, seria adicionado amostra de urina. Uma vez que a urina contm o antignio em estudo, a hormona hCG, ento iria ocorrer a ligao anticorpo-antignio, formando-se um complexo estvel. Por sua vez, este complexo iria emitir fluorescncia, que seria posteriormente detetada e analisada, permitindo assim a determinao da concentrao da hormona hCG presente na amostra de urina em estudo. Ou seja, a fluorescncia emitida pelo produto final, seria proporcional concentrao da hormona hCG.

Susana Maria da Silva Oliveira n 33845 LBq