Processos gerais e sntese de aminocidos; Rui Fontes

Processos gerais no metabolismo proteico e sntese de aminocidos

1- Um determinado nmero de molculas de cada protena endgena sofre hidrlise durante um dia mas, nos indivduos adultos saudveis, um nmero equivalente sintetizado. A percentagem de molculas afetadas por este processo de renovao depende principalmente da protena em anlise sendo muito baixa no caso do colagnio (cerca de 0,2% de renovao diria), relativamente modesta no caso das protenas dos msculos esquelticos (2% dia-1), elevada no caso das protenas das vsceras (7-15% dia-1) e elevadssima no caso de enzimas reguladas por transcrio/traduo (renovao total em horas). Considerando o conjunto das protenas de um adulto (cerca de 10-12 kg de protenas num adulto normal com 70 kg) cerca de 300 g de protenas sofrem hidrlise por dia e um valor idntico sofre re-sntese o que representa uma taxa de renovao (turnover) de cerca de 3% (em mdia, 1 cadver proteico novo por ms; 100%/3% dia1 =33 dias). Apesar da sua modesta taxa de renovao, porque as protenas dos msculos constituem cerca de 30-40% da massa total de protenas do organismo, a sua taxa de renovao responsvel por cerca de 1/4 da taxa global. Em geral, um indivduo adulto saudvel mantm constante a quantidade total de protenas endgenas. De facto, a massa de protenas endgenas flutua ao longo de um dia aumentando no perodo ps-prandial e diminuindo durante o jejum. No entanto, tendo em conta a massa total de protenas, as variaes percentuais so mnimas e, alm disso, considerando um perodo de 24h (ou mais) pode dizer-se que a velocidade de hidrlise , no adulto, igual de sntese. Um indivduo que est nestas condies diz-se em equilbrio azotado (ou que tem um balano azotado nulo). O uso do adjetivo azotado para referir a existncia de um balano nulo na massa de protenas endgenas dos adultos resulta do facto de a esmagadora maioria do azoto presente no organismo ser o azoto dos resduos aminoacdicos das protenas. 2- A hidrlise das protenas endgenas catalisada por protases e a dos polipeptdeos formados por peptdases acabando na libertao dos aminocidos constituintes. Muitas protenas citoplasmticas e do retculo endoplasmtico sofrem hidrlise atravs de um sistema localizado no citoplasma das clulas e que se designa sistema da ubiquitina-proteossoma. So alvos preferenciais deste sistema as protenas que tm alteraes estruturais, as que tm taxas de renovao elevada (caso das enzimas reguladas por transcrio/traduo, por exemplo), mas tambm algumas protenas com taxas de renovao relativamente baixas como as protenas das miofibrilas musculares. As protenas que vo ser degradadas por este sistema so primeiramente conjugadas com uma molcula proteica designada por ubiquitina. Este processo envolve um sistema enzimtico em que se consome ATP e, em vrios ciclos de ubiquitinao, forma-se uma cadeia de molculas de ubiquitina ligadas protena alvo. As protenas poliubiquitinadas vo ser reconhecidas por uma estrutura proteica em forma de barril designada por proteossoma e no seu interior que as protenas poliubiquitinadas vo ser degradadas por diversas protases libertando polipeptdeos. Estes polipeptdeos saem para o citoplasma onde so hidrolisados por peptdases. Um outro sistema de degradao de protenas envolve os lisossomas. Neste sistema podem ser degradadas protenas que vm do meio extracelular (via endocitose) assim como organelos inteiros e grandes pores de citoplasma (num processo designado por autofagia). Neste sistema as protenas so digeridas por protases com pH timo cido que se designam por catepsinas; os aminocidos libertados acabam por sair para o citoplasma das clulas. As protenas segregadas para o lmen do tubo digestivo ou que resultam da descamao do epitlio so, juntamente com as protenas da dieta, hidrolisadas pelas protases e peptdases digestivas. 3- A esmagadora maioria dos aminocidos formados durante a hidrlise das protenas endgenas (cerca de 300 g dia-1) reutilizada na sntese de novas molculas proteicas. No entanto, uma parte no reutilizada porque uma parte das molculas dos aminocidos libertados no catabolismo das protenas endgenas sofre transformaes irreversveis ficando excluda do ciclo de reutilizao. Esta perda obrigatria de aminocidos endgenos (cerca de 25 g dia-1 no adulto)1 , em grande parte, uma consequncia da presena,
A perda obrigatria de aminocidos (obligatory aminoacids losses) pode, na prtica, ser determinada avaliando as perdas de azoto do organismo num indivduo que tem uma dieta equilibrada sob todos os pontos de vista exceto um: no ingere protenas. A ureia difunde do sangue para o lmen intestinal e, no lmen do clon, por ao das bactrias convertida em amnio; este amnio reabsorvido e, no fgado, vai ser novamente reconvertido em ureia. Este processo constitui um ciclo entero-intestinal ureia-amnio e retarda a excreo da ureia sintetizada a partir do catabolismo dos aminocidos. Por isso, necessrio esperar vrios dias antes de se tornarem patentes as consequncias (diminuio da excreo de ureia na urina) da excluso das protenas da dieta.
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nas clulas, de enzimas que tm como substratos aminocidos e catalisam transformaes catablicas irreversveis incluindo desaminaes e oxidaes. O azoto dos aminocidos que sofrem catabolismo maioritariamente transformado em ureia (que se perde na urina) enquanto o seu esqueleto carbonado (a parte desprovida de azoto) pode ser oxidado a CO2, em ltima anlise contribuindo para a sntese de ATP. O azoto das protenas no se perde apenas na forma de ureia. A urina contm outros compostos azotados que, em ltima anlise, tambm provm do metabolismo dos aminocidos; dentre estes de destacar a creatinina, o cido rico, o io amnio e, embora em quantidades muito mais pequenas, aminocidos (modificados ou no) e catabolitos de hormonas e neurotransmissores que tiveram aminocidos na sua gnese. Tambm se perdem aminocidos endgenos nas fezes pois uma parte das protenas do epitlio intestinal que descama, das mucinas segregadas (glicoprotenas do muco) ou mesmo parte das enzimas digestivas no so completamente digeridas (ou so digeridas pelas bactrias presentes no lmen do clon e os produtos usados na sntese proteica bacteriana). O facto de, em mdia, 16% da massa das protenas ser azoto permite estabelecer uma relao entre a massa de azoto perdida nas excrees e a massa de protenas que essa massa de azoto representa. Assim, para converter a massa do azoto excretado em equivalentes de massa de protenas multiplica-se a massa do azoto excretado por 6,25 (100/16 = 6,25). Tal como acontece na maioria das situaes, em condies de ingesto proteica nula mas equilibrada sob todos os outros aspetos, a maioria do azoto sai do organismo na urina. Nestas condies, cerca de 70% do azoto correspondente s perdas obrigatrias de aminocidos perde-se na urina (50% na forma de ureia e 20% na forma de creatinina, amnio e outros compostos) e cerca de 20% nas fezes; os restantes 10% correspondem s perdas de protenas inteiras na pele que descama, nas unhas e cabelos que crescem, nas secrees nasais, no fluxo menstrual ou na ejaculao e na ureia que est presente no suor. 4- Poderia pensar-se que, para repor as perdas obrigatrias de 25 g de aminocidos dia-1, bastaria ingerir uma quantidade equivalente de protenas, mas no isso que acontece. A absoro de aminocidos no intestino, leva a um aumento transitrio da sua concentrao nas clulas e a um aumento da velocidade do seu catabolismo: uma parte substancial dos aminocidos ingeridos fica sujeita ao das enzimas catablicas sofrendo, junto com os libertados na hidrlise das protenas endgenas, oxidao e desaminao irreversvel. Alm disto, uma parte das protenas ingeridas no chega a ser absorvida e perde-se nas fezes. Os trabalhos experimentais com seres humanos adultos saudveis apontam para valores da ordem dos 50 g dia-1 como o mnimo de protenas a ingerir para repor as perdas obrigatrias de aminocidos [1]. Nas situaes em que a massa de protenas endgenas est a aumentar diz-se que h um balano azotado positivo; na condio contrria diz-se que o balano azotado negativo; o balano azotado nulo quando no h aumento nem diminuio da massa proteica. Porque uma boa aproximao realidade considerar que a massa de aminocidos livres (cerca de 150 g no organismo inteiro) estacionria, quando o balano azotado positivo (negativo, nulo) a massa de azoto ingerido superior (inferior, igual) de azoto excretado; caso exista uma diferena entre os valores da sntese e da hidrlise de protenas endgenas (ou seja, se houver variao na sua massa global de protenas endgenas) essa diferena reflete-se numa diferena equivalente entre o azoto ingerido e o azoto excretado. Assim uma outra definio de balano azotado baseia-se na diferena entre a massa de azoto ingerido e a massa de azoto excretado (ou na diferena entre os valores de massa de protenas correspondente). Um indivduo que, durante um determinado perodo de tempo (uma semana ou um ms, por exemplo), est em balano azotado nulo e ingere 50 g de protenas /dia, perde na urina, fezes, pele, nariz e genitais uma massa de azoto equivalente (50 g 0,16 = 8 g de azoto /dia) e a sua massa proteica endgena, embora possa ter sofrido flutuaes dirias, no variou no intervalo de tempo considerado. Um indivduo que num terminado perodo de tempo excretou, por exemplo, 10 g de azoto em excesso relativamente ao ingerido dever ter perdido uma massa proteica endgena de 62,5 g (10 g de azoto 6,25 g de protena/ g de azoto = 62,5 g de protena). 5- Poderia pensar-se que a massa de protenas ingeridas seria um importante fator na definio da variao da quantidade de protenas do organismo. A massa de gordura do organismo aumenta quando o valor calrico da dieta superior despesa energtica mas, no caso do azoto, o sistema funciona de forma diferente. A massa de protenas endgenas baixa (balano azotado negativo) se a ingesto for inferior quantidade necessria para repor as perdas obrigatrias (25 g dia-1) e fazer face ao acrscimo de perdas resultante da ingesto (outros 25 g dia-1), mas uma ingesto de protenas acima do montante necessrio para cobrir as necessidades (50 g dia-1) resulta apenas no catabolismo dos aminocidos excedentrios e num aumento da produo de ureia. Ao contrrio do que acontece com a massa de gordura, a quantidade de cada uma das protenas do organismo s depende da dieta na medida em que (i) esta pode constituir um fator limitador da sua sntese e (ii), acessoriamente, na medida em que o aumento da massa de gordura

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acompanhado pela formao de vasos sanguneos, de adipcitos e de tecidos de suporte (que contm protenas). Ingerir mais protenas que as necessrias para repor os aminocidos que sofrem catabolismo, no provoca, por si s, balano azotado positivo. 6- Considerando o organismo como um todo, o balano entre a massa de protenas que sofre hidrlise e a que sintetizada , em grande medida, dependente do que acontece com as protenas dos msculos. Ao contrrio do que acontece com a maioria das protenas cuja sntese e degradao depende em grande medida de fatores de regulao especficos, as protenas musculares ou, mais precisamente, as protenas diretamente envolvidas no processo contrtil (a actina e a miosina), sofrem variaes de massa que dependem em grande medida de fatores hormonais e comportamentais. Quando a massa proteica endgena sofre variaes positivas ou negativas no seu valor global as protenas primariamente afetadas so, na esmagadora maioria dos casos, as protenas musculares. Por isso os fatores que afetam a sntese e a degradao das protenas musculares so importantes para compreender a regulao do balano azotado. A hormona do crescimento (tambm designada por somatotrofina), a testosterona e a insulina so hormonas que afetam positivamente a sntese das protenas musculares estimulando o processo de iniciao da traduo. Ao mesmo tempo, reforando o seu contributo para o incremento da massa proteica muscular, tm um papel inibidor na degradao atravs de aes que envolvem inibio da protelise que ocorre nos proteossomas. No entanto, num adulto saudvel, estas hormonas no provocam, por si s, incrementos na massa proteica muscular. Para aumentar a massa das protenas de um determinado grupo de msculos h que fazer exerccios de musculao, ou seja, fazer exerccios anaerbicos utilizando esse grupo de msculos. Este tipo de exerccios (levantamento de peso, corridas de sprint, etc.) provoca aumento do catabolismo durante o exerccio mas, durante o repouso que se lhe segue, a sntese proteica estimulada e, no balano global, h incremento da massa de protenas. Algumas molculas sinalizadoras extracelulares como as hormonas tiroideias, o cortisol e as citosinas inflamatrias tm efeitos opostos e provocam diminuio na massa das protenas dos msculos. Em consonncia com o efeito das hormonas tiroideias no metabolismo basal (as hormonas tiroideias aumentam o metabolismo basal), as hormonas tiroideias tambm tm um efeito positivo na taxa de sntese proteica mas, considerando o somatrio dos dois efeitos antagnicos, o efeito catablico predomina sobre o anablico. O contrrio acontece quando o indivduo pratica exerccios anaerbicos como. Nestes casos h aumento quer do processo de sntese quer dos processos de hidrlise, mas o somatrio positivo havendo incremento da massa proteica dos msculos envolvidos. 7- Sob efeito das hormonas acima referidas, do exerccio e de outros fatores a quantidade total de protenas do organismo aumenta (balano azotado positivo) nos indivduos (i) em fase de crescimento (crianas e adolescentes), (ii) que esto a engordar, (iii) que esto a recuperar aps um perodo de balano azotado negativo ou (iv) que, atravs de exerccio fsico anaerbico (ou ingerindo esteroides anabolizantes), esto a aumentar a sua massa muscular. Nos indivduos adultos que esto a engordar a maior parte do aumento da massa corporal deve-se acumulao de triacilgliceris no tecido adiposo, mas tambm ao aumento das protenas dos vasos que irrigam esse tecido e dos tecidos de sustentao incluindo os msculos. de esperar que haja balano azotado negativo (i) a partir dos 40-50 anos de idade, (ii) quando se diminui a atividade fsica ou (iii) quando se emagrece voluntariamente, (iv) em consequncia de dfice nutricional proteico e/ou proteico-calrico ou (v) em situaes de doena. A perda de massa muscular associado ao envelhecimento , pelo menos em parte, uma consequncia da diminuio da sensibilidade dos msculos aos efeitos anablicos do exerccio fsico mas tambm diminuio desse exerccio. Grande parte das doenas agudas e crnicas cursam com balano azotado negativo. Embora a diminuio do apetite e do exerccio possam ter um papel na diminuio da massa muscular, no so estes os fatores determinantes na maioria dos casos. A diminuio da massa muscular associada a muitas doenas (cancros, traumatismos acidentais ou cirrgicos, doenas infecciosas agudas e crnicas, etc.) uma componente da resposta adaptativa que leva hidrlise das protenas musculares, desta forma disponibilizando aminocidos para a sntese aumentada de protenas que ocorre no fgado (designadas por protenas de fase aguda) ou nos tecidos que esto em processo de cicatrizao [2]. Nestes processos participam as citosinas inflamatrias que, direta e indiretamente, provocam aumento nos processos de hidrlise e inibio da sntese das protenas musculares. As citosinas so produzidas por clulas do sistema imunolgico e aumentam em situao de inflamao. Os efeitos indiretos das citosinas inflamatrias envolvem a diminuio da sensibilidade aos efeitos anabolizantes da insulina e da somatotrofina e estimulao da secreo de cortisol. A diminuio da secreo de insulina no pncreas tambm pode ser um fator determinante. Neste contexto, clssico referir que, antes da introduo da teraputica insulnica, os doentes com diabetes tipo

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1 morriam num estado de caquexia: as protenas dos msculos iam desaparecendo enquanto os aminocidos constituintes se iam convertendo em glicose que, em grande parte, se perdia na urina. 8- Num indivduo adulto saudvel que mantm constante a sua massa muscular, de prever que a quantidade total de protenas tambm se mantm mais ou menos constante: nestas condies, os aminocidos excludos do ciclo de reutilizao so repostos por ingesto e incorporados nas protenas sintetizadas existindo balano azotado nulo. Quando a ingesto proteica no suficiente para repor os aminocidos que sofrem catabolismo h balano azotado negativo. No caso das crianas o balano azotado fisiologicamente positivo, mas uma ingesto deficiente de protenas provoca atraso no crescimento. Em situaes de subnutrio proteica pode surgir uma doena designada de kwashiorkor em que, alm do atraso de crescimento, h edemas nos membros e ascite (lquido no espao entre os dois folhetos do peritoneu). O edema e a ascite so provocados pela diminuio da produo de albumina no fgado. A albumina a protena mais abundante no plasma sanguneo e tem efeito osmtico que contrabalana a presso hidrulica que favorece a sada de lquido do plasma para o espao extracelular. Quando a concentrao plasmtica de albumina baixa este fator de reteno de lquido no plasma diminui e passa a predominar a presso hidrulica provocando edema e ascite. A perda de massa muscular que ocorre em situaes de dfice nutricional proteico-calrico como o que acontece nas situaes de greve de fome mais marcada que a simples omisso das protenas da dieta de um indivduo. No dfice nutricional proteico-calrico, para alm da perda obrigatria de aminocidos, h uma perda adicional que adaptativa e resulta da diminuio da insulina. Quando um indivduo inicia uma greve de fome a hidrlise das protenas musculares fica aumentada e fornece ao fgado aminocidos que so usados como substratos na sntese de glicose. Porque o glicognio se esgota em um ou dois dias de jejum, a gliconeognese tem, neste processo, um papel determinante na sntese da glicose que oxidada no crebro. No entanto, medida que o tempo de jejum se prolonga a protelise muscular diminui porque h diminuio da secreo de hormonas tiroideias. Esta diminuio da protelise relativamente ao que acontecia nos primeiros dias de jejum, acompanha-se duma diminuio da necessidade de fornecer glicose ao crebro: medida que o jejum se prolonga aumenta a sntese de corpos cetnicos que podem substituir at 2/3 das necessidades energticas do crebro. 9- Poderia pensar-se que cada uma das molculas de cada um dos aminocidos que se perde para o ciclo de reutilizao teria de ser substituda pela ingesto de uma molcula igual mas esta ideia, s parcialmente, verdadeira. (i) Alguns dos aminocidos excludos do ciclo no podem ser sintetizados pelo organismo humano pois no dispomos das enzimas indispensveis para o processo e nestes casos os aminocidos dizem-se nutricionalmente indispensveis (ou essenciais). Para substituir um determinado aminocido nutricionalmente indispensvel que sofreu catabolismo necessrio ingerir esse aminocido. Ou seja, no caso dos aminocidos nutricionalmente indispensveis, cada molcula perdida tem de ser substituda por uma igual. (ii) Alguns dos aminocidos excludos do ciclo podem ser repostos por sntese endgena a partir de intermedirios do metabolismo da glicose e, nestes casos, os aminocidos dizem-se nutricionalmente dispensveis (ou no essenciais). No entanto, deve notar-se que, embora o esqueleto carbonado provenha da glicose, o grupo azotado vem de outros aminocidos que tero de ser ingeridos em quantidade suficiente para colmatar as perdas de azoto. O esqueleto carbonado da alanina, por exemplo, provm do piruvato, mas o azoto da alanina tem de vir doutro aminocido. (iii) Um terceiro grupo de aminocidos (cistena e tirosina) forma-se a partir de aminocidos indispensveis (metionina e fenilalanina, respetivamente) e podero classificar-se como semi-indispensveis2 [1]. 10- No caso dos aminocidos sintetizados a partir de intermedirios do metabolismo da glicose (serina [3C,1N,1OH], glicina [2C,1N], alanina [3C,1N], aspartato [4C,1N], asparagina [4C,2N], glutamato [5C,1N], glutamina [5C,2N], prolina [5C,1N] e arginina [6C,4N]), embora o esqueleto carbonado possa ser formado a partir da glicose, os grupos azotados (amina, amida ou guanidina) resultam da transferncia direta ou indireta de grupos amina (ou amida) de aminocidos para esses intermedirios. Para que um indivduo adulto tenha a capacidade de manter constante a massa das suas protenas precisa de absorver, na forma de aminocidos, tantos tomos de azoto como os que perde na urina, nas fezes, nos genitais, nas secrees nasais ou na pele. Se a quantidade total de azoto ingerido (na forma de protenas) no for
Quem classifica faz um exerccio de organizao dos conhecimentos da forma que lhe d mais jeito. Tambm frequente chamarem cistena e tirosina condicionalmente indispensveis porque s so indispensveis se a dieta for pobre em metionina e fenilalanina, respetivamente.
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suficiente para colmatar o azoto excretado o indivduo fica em balano azotado negativo. Em geral, um dfice de aminocidos nutricionalmente dispensveis corresponde a uma ingesto quantitativamente inadequada de protenas: na presena de azoto aminoacdico em quantidade suficiente para formar os grupos azotados o organismo pode sintetizar um aminocido nutricionalmente dispensvel a partir de intermedirios do metabolismo glicdico e, nesta sntese, todos os outros aminocidos so, em ltima anlise, potenciais dadores de azoto. 11- Atravs da ao cataltica de variadas enzimas, os aminocidos podem libertar o azoto do seu grupo amina (ou de outros grupos azotados) na forma de amnio (NH4+). O io amnio a forma protonada do amonaco (NH3); o seu pKa cerca de 9,3, predominando, por isso, a forma protonada, quer no meio interno, quer na urina. A maioria do amnio (azoto inorgnico) formado d origem a ureia que se perde na urina, mas uma parte pode ser recuperado para o metabolismo por ao cataltica (i) da desidrognase do glutamato (ver Equao 1) e (ii) da sinttase da glutamina (ver Equao 2). Por ao destas enzimas o azoto inorgnico do amnio pode ser convertido em azoto aminoacdico. O glutamato [5C,1N] um aminocido dicarboxlico com 5 carbonos e difere do -cetoglutarato por ter, em vez do grupo cetnico, um grupo amina no carbono 2. A glutamina [5C,2N] difere do glutamato porque, em vez do grupo carboxlico em C5, tem um grupo amida nesse carbono. Equao 1 Equao 2 -cetoglutarato + NH4+ + NADPH glutamato + NADP+ + H2O glutamato + NH4+ + ATP glutamina + ADP + Pi

12- Para alm de poder ter origem na ao da desidrognase do glutamato (ver Equao 1), a sntese de glutamato tambm tem lugar em reaes de transaminao (ver Equao 3) em que diversos aminocidos cedem o grupo amina (azoto orgnico) ao -cetoglutarato gerando glutamato e os -cetocidos correspondentes. Assim, o glutamato e a glutamina (via sinttase da glutamina; ver Equao 2) podem formar-se endogenamente a partir de um intermedirio do ciclo de Krebs (o -cetoglutarato); sabendo-se que os intermedirios do ciclo de Krebs se podem formar a partir da glicose (via gliclise e carboxlase do piruvato) conclui-se que o glutamato e a glutamina so aminocidos nutricionalmente dispensveis. Equao 3 -aminocido X + -cetoglutarato glutamato + -cetocido X

13- A alanina [3C,1N] difere do piruvato porque, em vez do grupo cetnico no carbono 2, tem um grupo amina; o aspartato [4C,1N] difere do oxalacetato pela mesma razo. A sntese de alanina e aspartato o resultado da transferncia do grupo amina do glutamato para os -cetocidos correspondentes: o piruvato e o oxalacetato, respetivamente. A transamnase da alanina (ver Equao 4) e a transamnase do aspartato (ver Equao 5) catalisam, respetivamente, a formao de alanina e aspartato mas, como estas reaes so fisiologicamente reversveis, tambm intervm nos processos em que estes aminocidos perdem o grupo -amina para o -cetoglutarato. Existem muitas transamnases com especificidades distintas relativamente a um dos substratos, mas o outro substrato (quase) sempre o glutamato/cetoglutarato (ver Equao 3). Dependendo do sentido em que a reao esteja a ocorrer uma reao de transaminao pode servir para formar um determinado aminocido custa da converso do glutamato em -cetoglutarato ou para formar glutamato custa da converso de um determinado aminocido no seu cetocido correspondente. Uma caracterstica comum a todas as transamnases (e a muitas outras enzimas envolvidas no metabolismo aminoacdico) a presena de piridoxal- fosfato (derivado da vitamina B6) como grupo prosttico3. Equao 4 Equao 5 glutamato + piruvato -cetoglutarato + alanina glutamato + oxalacetato -cetoglutarato + aspartato

14- A serina [3C,1N,1OH] um aminocido que contm 3 carbonos e um grupo hidroxilo em C3. A glicina [2C,1N] o aminocido mais simples e contm apenas 2 carbonos. Transamnases com diferentes
No decurso do ciclo cataltico o piridoxal-fosfato que est, no incio do ciclo, ligado ao grupo 6-amina de um resduo de lisina da transamnase, converte-se em piridoxamina-fosfato, mas, no final do ciclo, regenera-se a forma original. Com quatro excees (lisina, prolina, triptofano e arginina) existem transamnases que (com maior ou menor eficcia) so capazes de catalisar a troca entre o grupo cetnico dos -cetocidos correspondentes e o grupo amina do glutamato.
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especificidades intervm no processo de sntese da serina a partir de 3-fosfoglicerato (um intermedirio da gliclise) e da glicina a partir de glioxilato (contm um grupo aldedo em vez do grupo amina no carbono ). No processo de sntese da serina a partir do 3-fosfoglicerato intervm primeiro uma desidrognase que converte o grupo hidroxilo do carbono 2 num grupo cetnico levando formao do 3fosfohidroxipiruvato (ver Equao 6) que substrato da transamnase da fosfoserina (ver Equao 7). A fosfoserina (formada aps a reao de transaminao) hidrolisada por uma fosftase com a consequente formao da serina (ver Equao 8). O glioxilato (aceitador de grupos amina em reaes de transaminao em que a alanina o dador da amina; ver Equao 9) pode resultar da oxidao do glicolato (que existe em muitas plantas comestveis) por ao da oxdase do glicolato (ver Equao 10)4. Equao 6 Equao 7 Equao 8 Equao 9 Equao 10 3-fosfoglicerato + NAD+ 3-fosfohidroxipiruvato + NADH glutamato + 3-fosfohidroxipiruvato -cetoglutarato + fosfoserina fosfoserina + H2O serina + Pi alanina + glioxilato piruvato + glicina glicolato + O2 glioxilato + H2O2

15- A reao catalisada pela hidroximetiltransfrase da serina (ver equao 11) para alm de permitir a sntese de glicina a partir de serina (e o inverso) tambm permite a metilao do tetrahidro-folato (H4folato): o N5,N10-metileno-H4-folato formado nesta reao indispensvel na sntese de timina e, portanto, do DNA. O facto de a glicina se poder formar a partir da serina (ver Equao 11) e de esta poder gerar-se a partir de um intermedirio da gliclise (3-fosfoglicerato; ver Equao 6, Equao 7 e Equao 8) permite compreender que, quer a serina, quer a glicina sejam aminocidos nutricionalmente dispensveis. Equao 11 serina + H4-folato glicina + N5,N10-metileno H4-folato

16- A prolina [5C,1N] o nico aminocido em que o grupo amina uma amina secundria (que liga os carbonos 2 e 5). A arginina [6C,4N] contm 6 carbonos mas um deles faz parte da estrutura do grupo guanidina [1C;3N] que se liga ao carbono 5. Quer a prolina quer a arginina podem ser sintetizadas a partir do glutamato. O glutamato pode, por reduo do grupo carboxlico C5, originar o semialdedo do glutamato e este composto pode seguir dois destinos distintos: (i) num deles (por reduo dependente do NADPH) d origem prolina e (ii) no outro origina a ornitina que, via ao cataltica das enzimas do ciclo da ureia, se converte em arginina. A converso do semialdedo do glutamato em ornitina catalisada pela transamnase da ornitina (ver Equao 12). Equao 12 glutamato + semialdedo do glutamato -cetoglutarato + ornitina

17- A arginina [6C,4N] sintetizada no ciclo da ureia. A arginina um intermedirio desse ciclo, concretamente o intermedirio que sofre hidrlise por ao da argnase levando formao de ureia [1C,2N] e ornitina [5C,2N]. No ciclo da ureia a ornitina converte-se em citrulina [6C,3N] que, por sua vez origina arginino-succinato [10C,4N]; o arginino-succinato que regenera a arginina. Assim, a ornitina, a citrulina, o arginino-succinato e a arginina so intermedirios do ciclo da ureia. No entanto, a arginina tambm dos aminocidos constituintes das protenas e, quando utilizada na sntese proteica (ou noutros processos, como a sntese de creatina ou de xido ntrico), a concentrao de arginina poderia baixar pondo em risco o funcionamento do ciclo. No entanto, tal como acontece no ciclo de Krebs, quando uma molcula de um intermedirio sai do ciclo, uma outra molcula de outro intermedirio formado a partir de compostos que no fazem parte do ciclo. A reao que diretamente alimenta a formao de intermedirios do ciclo da ureia j foi referida (ver Equao 12): catalisada pela transamnase da ornitina e permite a formao da ornitina a partir de semialdedo do glutamato. A ureia apenas sintetizada no fgado pois neste rgo que existe a argnase, uma hidrlase que catalisa a formao de ureia a partir da arginina. Embora o ciclo da ureia completo s exista no fgado, as enzimas que levam, a partir da glutamina
A glicina tambm pode formar-se a partir da colina (que resulta, maioritariamente, da hidrlise das lecitinas). Nesta via metablica a colina oxidada no grupo hidroxilo formando-se betana (trimetilglicina). A betana dadora de um metilo homocistena formando-se dimetilglicina (betana + homocistena dimetilglicina + metionina) que por sua vez pode ceder os dois restantes metilos ao tetrahidrofolato (H4-folato) gerando-se a glicina (dimetilglicina + H4-folato sarcosina + N5,N10-metileno-H4-folato; sarcosina + H4-folato glicina + N5,N10-metileno-H4-folato).
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(via glutamato) formao de ornitina e converso desta em citrulina tambm existem nos entercitos. Os entercitos captam glutamina do plasma e uma parte desta glutamina convertida em citrulina. A citrulina formada nos entercitos passa para o plasma sanguneo e pode ser captada pelo fgado mas tambm pelo rim. As enzimas do ciclo da ureia que catalisam a converso sequenciada de citrulina em argininosuccinato e deste em arginina (sinttase do arginino-succinato e arginino-succnase) existem nestes dois rgos e levam formao de arginina. As enzimas do ciclo da ureia, para alm do seu papel no catabolismo de todos os aminocidos tambm tm um papel anablico: a sntese de arginina. Estudos em leites mostraram que a velocidade de formao lquida de arginina (massa formada subtrada da parte que se converte em ureia e ornitina) inadequada para sustentar adequadamente a sntese proteica que est aumentada devido ao crescimento rpido que ocorre nos mamferos bebs. Embora no existam evidncias que o mesmo acontea nos bebs humanos [3] admite-se que possa ser assim e, por isso, a arginina , frequentemente, classificada como um aminocido condicionalmente indispensvel [1]. 18- A asparagina [4C,2N] difere do aspartato [4C,1N] porque, em vez do grupo carboxlico em C4, tem um grupo amida nesse carbono. De forma semelhante ao que acontece no caso da glutamina e do glutamato, a asparagina forma-se a partir do aspartato por ao cataltica da sinttase da asparagina (ver Equao 13). No entanto, ao contrrio do caso da sntese da glutamina em que o azoto incorporado azoto inorgnico, na sntese da asparagina, o dador do azoto a glutamina. Alm disso, na reao catalisada pela sinttase da asparagina, forma-se AMP e PPi e no ADP e Pi como no caso da sinttase da glutamina (ver Equao 2). Equao 13 aspartato + glutamina + ATP asparagina + glutamato + AMP + PPi

19- A fenilalanina [9C,1N] contm um anel benznico; a tirosina [9C,1N,1OH] deriva da fenilalanina por hidroxilao desse anel benznico. frequente classificar-se a tirosina como semi-indispensvel porque sintetizada a partir da fenilalanina, um aminocido nutricionalmente indispensvel. Uma deficincia nutricional de tirosina pode ser colmatada desde que ocorra a ingesto de fenilalanina em quantidade adequada para satisfazer as necessidades dos dois aminocidos. A reao de formao da tirosina catalisada pela hidroxlase da fenilalanina, uma oxignase de funo mista (ver Equao 14). Para que o processo possa continuar a dihidrobiopterina formada reduzida pelo NADPH numa reao catalisada por uma redtase (ver Equao 15). Equao 14 Equao 15 fenilalanina + tetrahidrobiopterina + O2 tirosina + dihidrobiopterina + H2O dihidrobiopterina + NADPH tetrahidrobiopterina + NADP+

20- O tomo de enxofre da cistena [3C,1N,1S] tem origem na metionina [5C,1N,1S], um aminocido indispensvel. Tal como no caso da tirosina, tambm a cistena pode ser classificada como semiindispensvel: as necessidades nutricionais de cistena podem ser colmatadas desde que ocorra a ingesto de metionina em quantidade adequada para satisfazer as necessidades dos dois aminocidos. Os carbonos da cistena tm origem na serina. O processo de sntese da cistena complexo porque se relaciona com a complexa via metablica da degradao da metionina (ver Equaes 16- 21). Durante o catabolismo da metionina forma-se um intermedirio (homocistena) que contm ainda 4 carbonos da metionina mas que, em vez do grupo metilo ligado ao carbono 4 por uma ligao sulfureto, contm um grupo tiol. Este intermedirio (homocistena) reage com a serina formando-se um composto (cistationina) que contm o tomo de enxofre entre os carbonos que derivaram da homocistena e os que derivaram da serina (ver Equao 19). A clivagem da cistationina (ver Equao 20) origina cistena (3 carbonos e azoto derivados da serina e o enxofre da homocistena) assim como NH3 e -cetobutirato (derivados da homocistena). Equao 16 Equao 17 Equao 18 Equao 19 Equao 20 Equao 21 ATP + metionina S-adenosil-metionina + Pi + PPi S-adenosil-metionina + aceitador S-adenosil-homocistena + aceitador metilado S-adenosil-homocistena + H2O homocistena + adenosina homocistena + serina cistationina cistationina cistena + NH3 + -cetobutirato -cetobutirato + NAD+ + CoA propionil-CoA + NADH + CO2

Embora a metionina seja um aminocido nutricionalmente indispensvel existe um mecanismo que permite "salvar" metionina em processo catablico: a homocistena aceitadora do grupo metilo do N5-

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metil-H4-folato regenerando-se metionina (sntase da metionina; ver Equao 22). O N5-metil-H4-folato forma-se por reduo dependente do NADPH que catalisada pela redtase do N5,N10-metileno-H4folato (ver Equao 23). Equao 22 Equao 23 N5-metil-H4-folato + homocistena H4-folato + metionina N5,N10-metileno-H4-folato + NADPH N5-metil-H4-folato + NADP+

21- Oito (valina, leucina, isoleucina, treonina, metionina, lisina, fenilalanina, triptofano) dos 20 aminocidos5 que so incorporados nas protenas aquando da sua sntese so, classicamente, classificados como nutricionalmente indispensveis. No entanto, excetuando os casos da lisina e do triptofano, existem transamnases que (com maior ou menor eficcia) so capazes de catalisar a troca entre o grupo cetnico dos -cetocidos correspondentes e o grupo amina do glutamato. Embora absurdo do ponto de vista econmico e muito pouco eficaz na esmagadora maioria dos casos, seria possvel usar os -cetocidos correspondentes para substituir na dieta uma grande parte dos aminocidos nutricionalmente indispensveis. A Equao 24, a Equao 25 e a Equao 26 mostram as reaes de transaminao que envolvem os aminocidos ramificados. Estas reaes so fisiologicamente reversveis, mas isto no significa que os aminocidos ramificados sejam nutricionalmente dispensveis. O -ceto-isocaproato, ceto- -metil-valerato e o -ceto-isovalerato formam-se (por transaminao) no primeiro passo do catabolismo dos aminocidos correspondentes (que fazem parte das protenas) e a reao em que a mesma transamnase catalisa a reao inversa apenas significa a recuperao de metabolitos intermedirios do processo catablico desses aminocidos. No caso da histidina tambm no existem, nos mamferos, vias metablicas de sntese, mas a excluso deste aminocido na dieta s provoca sintomas de dfice (surge anemia) aps um ms [4]. possvel que na origem desta resistncia esteja a capacidade de formar histidina a partir de carnosina, um dipeptdeo ( -alanil-histidina) abundante no tecido muscular. Embora alguns livros de texto classifiquem a histidina num grupo parte, de acordo com Kopple e Swendseid [4], a histidina um aminocido nutricionalmente indispensvel. Equao 24 Equao 25 Equao 26 -ceto-isocaproato + glutamato leucina + -cetoglutarato -ceto- -metil-valerato + glutamato isoleucina + -cetoglutarato -ceto-isovalerato + glutamato valina + -cetoglutarato

22- Tal como os aminocidos dispensveis tambm os aminocidos indispensveis sofrem catabolismo a uma velocidade que depende da atividade intrnseca das enzimas envolvidas e da concentrao do aminocido em causa. Para assegurar a manuteno da massa de protenas do organismo h, no s que ingerir uma quantidade total de aminocidos adequada (em mdia 50 g dia-1 num adulto saudvel com 70 kg), mas tambm que repor cada uma das molculas dos aminocidos indispensveis que se perderam. Tendo em conta as necessidades mnimas de cada um dos aminocidos indispensveis foram inventadas protenas padro: uma protena padro uma protena que, ingerida na quantidade mnima indispensvel para repor as perdas obrigatrias de azoto, contm a quantidade mnima de cada aminocido indispensvel para repor a perda individual de cada um destes aminocidos [1]. Se uma dieta contiver como nico constituinte proteico uma protena que no contm um aminocido indispensvel (caso da gelatina que no contm triptofano) a capacidade dessa dieta para colmatar as necessidades aminoacdicas nula. Todas as protenas endgenas contm pelo menos um resduo de triptofano e, por isso, nenhuma protena pode ser sintetizada na ausncia de triptofano e o mesmo poderia ser dito relativamente a cada um dos outros aminocidos indispensveis. Quando, no contexto de uma dieta equilibrada sob o ponto de vista energtico, se ingere como nica protena gelatina nenhum dos aminocidos que resultam da sua hidrlise intestinal pode ser usado na sntese proteica porque falta o triptofano. Nestas circunstncias, com a exceo do triptofano, todos os aminocidos aumentam de concentrao aumentando a velocidade da sua oxidao. Quando se ingere como nica protena gelatina a quantidade de azoto perdido igual perda obrigatria somada a toda a gelatina ingerida cujos aminocidos so tambm perdidos. No caso da gelatina o aminocido limitante da sua qualidade diettica o triptofano mas, no caso de outras protenas como, por exemplo, nas protenas do trigo e outros cereais, o aminocido limitante a lisina. No caso das protenas do trigo a lisina no est ausente, mas existe numa quantidade menor que a prevista nas protenas padro. A percentagem de lisina nas protenas de trigo cerca de metade da percentagem de lisina numa protena
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Ou 21, se considerarmos tambm o caso da selenocistena.

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padro: assim, para colmatar as necessidades de lisina usando exclusivamente protenas de trigo haveria que ingerir no 50 g de protena de trigo mas o dobro deste valor [1, 5]. 23- Um parmetro que costuma ser utilizado para avaliar a qualidade diettica das protenas o ndice qumico. Para calcular o ndice qumico de uma protena comea-se por determinar a percentagem de cada um dos aminocidos essenciais na protena em questo (massa de aminocido essencial/100 g de protena). Depois comparam-se essas percentagens com as percentagens correspondentes numa protena padro dividindo, para cada aminocido essencial, a percentagem na protena em anlise pela percentagem na protena padro. A cada aminocido essencial vai, assim, corresponder uma determinada frao que ser inferior a 1 se a protena em anlise for menos rica nesse aminocido que a protena padro. A frao de valor mais baixo o ndice qumico da protena em questo e o aminocido correspondente o aminocido limitante dessa protena. No caso das protenas do trigo, como j referido, o aminocido limitante a lisina, o ndice qumico pouco superior a 0,5 e para alimentar um indivduo adulto saudvel, usando exclusivamente, protenas de trigo, a ingesto proteica deveria ser cerca do dobro (1/0,5 = 2) da que seria necessria se o ndice qumico das protenas da dieta fosse 1 ou superior a 1 (como acontece no caso da maioria das protenas de origem animal). No caso da gelatina o ndice qumico zero e impossvel obter uma ingesto proteica adequada usando exclusivamente esta protena. Na realidade muito pouco comum que a dieta seja to montona que apenas contemple uma nica espcie vegetal. Na maioria dos casos o aminocido limitante num determinado alimento no o mesmo em dois alimentos de natureza distinta. Porque o aminocido limitante num determinado alimento pode no ser o aminocido limitante noutro alimento, a ingesto conjunta dos dois alimentos resulta num ndice qumico conjunto mais prximo de 1 (ou mesmo superior a 1). Um exemplo clssico de complementaridade entre protenas a mistura feijo e arroz. Os aminocidos limitantes da protena do feijo so os aminocidos sulfurados cistena e metionina e o ndice qumico 0,91; o aminocido limitante no caso do arroz a lisina e o ndice qumico 0,87. No entanto, uma mistura 50:50 de protenas de feijo e arroz resulta num ndice qumico superior a 1. Quando o ndice qumico superior a 1 no significa que seja suficiente ingerir menos protenas que as necessrias no caso de o ndice qumico ser 1: para manter o organismo em balano azotado nulo, a massa de azoto proteico ingerido deve ser sempre suficiente para contrabalanar as perdas. Um outro fator que influencia a qualidade diettica das protenas dos alimentos a sua digestibilidade, ou seja, a percentagem dos aminocidos das protenas que acabam de facto absorvidos no tubo digestivo. Em geral, devido ao facto de uma parte das protenas estar em grnulos que no so atacados nos processos digestivos, a digestibilidade das protenas de origem vegetal menor que as de origem animal. O fator digestibilidade tambm afetado pelos processos culinrios. 24- Em algumas protenas (como a peroxdase do glutatio) existem resduos de selenocistena [3C,1N,1Se] , um aminocido semelhante cistena e serina. Na selenocistena em vez do tomo de enxofre do grupo tiol (caso da cistena) ou do tomo de oxignio do grupo hidroxilo (caso da serina) existe um tomo de selnio. A sntese da selenocistena ocorre a partir da serina quando esta est ligada a um tRNA especfico que tem como anticodo a sequncia ACU e se denomina tRNASec (Sec a abreviatura de selenocistena). A reao catalisada por uma transfrase (ver Equao 27) em que o dador de selnio o seleno-fosfato (selnio ativado). O codo correspondente ao tRNASec (UGA) normalmente um codo de terminao mas em determinados RNA mensageiros contendo sequncias especficas (como o caso do RNAm codificador da peroxdase do glutatio) este codo liga-se ao anticodo do selenocisteinil-tRNASec ocorrendo a incorporao do aminocido selenocistena na estrutura da protena em processo de sntese. Equao 27 seleno-fosfato + seril-tRNASec selenocisteinil-tRNASec + Pi

25- Os aminocidos hidroxiprolina [5C,1N,1OH] e hidroxilisina [6C,2N,1OH] constituem casos especiais pois existem na estrutura do colagnio (a protena mais abundante dos mamferos) mas no existem no RNA codificador do colagnio codes para estes aminocidos. A sntese da hidroxiprolina e da hidroxilisina ocorre por ao de oxignases do retculo endoplasmtico (hidroxlases da prolina e da lisina) que catalisam a hidroxilao de resduos de prolina e lisina do colagnio durante o processo de acabamento ps-traduo (ver Equao 28). A vitamina C um cofactor das hidroxlases da prolina e da lisina e a deficincia de vitamina C leva formao de colagnio anormal. Equao 28 resduo prolil ou lisil + O2 + -cetoglutarato resduo hidroxiprolil ou hidroxilisil + succinato + CO2

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26- O caso do aminocido carboxiglutamato [6C,1N] (constituinte de vrias protenas como a protrombina e outras protenas envolvidas no processo de coagulao sangunea) tem algumas semelhanas com os casos da hidroxiprolina e hidroxilisina j que a sua formao resulta da transformao de resduos de glutamato aps a sntese da protena. A transformao envolve a atividade de uma oxignase (ver Equao 29) e uma reao no enzmica (ver Equao 30). Na ao da oxignase o oxignio molecular oxida a vitamina K que passa da forma hidroquinona forma epxido; simultaneamente, o carbono C4 de resduos de glutamato da protena ioniza-se a carbanio (carga -1) que aceitador de CO2. A regenerao da forma hidroquinona da vitamina K a partir da forma epxido envolve a ao de oxiredtases. Equao 29 Equao 30 resduo de glutamato + O2 + vitamina K (forma hidroquinona) resduo de glutamato na forma de carbanio + vitamina K (forma epxido) resduo de glutamato na forma de carbanio + CO2 resduo de carboxiglutamato

1. Levesque, C. L. & Ball, R. O. (2012) Protein and amino acid requirements in Biochemical, physiological and molecular aspects of human nutrition (Stipanuk, M. H. & Caudill, M. A., eds) pp. 331-356, Elsevier, St. Louis. 2. Kotler, D. P. (2000) Cachexia, Ann Intern Med. 133, 622-34. 3. Wu, G., Bazer, F. W., Davis, T. A., Kim, S. W., Li, P., Marc Rhoads, J., Carey Satterfield, M., Smith, S. B., Spencer, T. E. & Yin, Y. (2009) Arginine metabolism and nutrition in growth, health and disease, Amino Acids. 37, 153-68. 4. Kopple, J. D. & Swendseid, M. E. (1975) Evidence that histidine is an essential amino acid in normal and chronically uremic man, J Clin Invest. 55, 881-91. 5. Schaafsma, G. (2000) The protein digestibility-corrected amino acid score, J Nutr. 130, 1865S-7S.

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glicose

cistena na cistationina

colina betana dimetil-glicina

homocistena metionina 3-fosfoglicerato 3-fosfohidroxipiruvato serina glicina sarcosina

3-fosfoserina

glioxilato glicolato treonina

piruvato

alanina

oxalacetato

aspartato

asparagina arginina

prolina

ureia

Ciclo de Krebs

ornitina semiladedo do glutamato

NH3 + NAD(P)H NAD(P)+

Ciclo da ureia

argininosuccinato

Carbamilfosfato

citrulina

-ceto-glutarato

glutamato

glutamina

fenilalanina prolina

tirosina

hidroxiprolina

lisina

hidroxilisina

glutamato

carboxiglutamato

Seril-t-RNASec

Selenocisteinil-t-RNASec

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