ANALISIS CROMATOGRAFICO Pasos para realizar un anlisis cromatogrfico: - Indagar Sobre la Muestra: una idea general sobre los

posibles compuestos que la constituyen, para definir si la muestra requiere tratamiento previo para su conservacin o anlisis. - Tratamiento de la Muestra: deben recibir un tratamiento preliminar que puede consistir en una separacin, desecado, pirlisis, esterificacin, acilacin o un silanizado, extraccin en fase slida, - Seleccin de Condiciones para el Anlisis. Los posibles compuestos constituyentes de la muestra, permiten suponer: grupos funcionales presentes, polaridad, pesos moleculares, puntos de ebullicin, presin de vapor; que son propiedades necesarias para definir: tipo de columna, soporte, fase lquida estacionaria, temperatura del inyector, temperatura de la columna, gas portador, velocidad del gas, detector, amplificacin y cantidad de muestra para realizar la primera inyeccin. - Condiciones Instrumentales: calibracin y operacin del equipo de acuerdo con las instrucciones y normas de seguridad recomendadas por el fabricante segn la marca y modelo del cromatgrafo disponible. - Inyeccin y corrida de la muestra: puede ser necesario un anlisis previo para modificar las condiciones como: temperaturas, cantidad de muestra, flujo y tipo de gas, columna, tipo de detector. - Interpretacin del cromatograma: el cromatograma depende de variables tales como: velocidad de la carta, si se usa un registrador, amplificacin, poder de resolucin de la columna, cantidad de muestra inyectada, temperatura, presin, velocidad flujo, etc. No siempre sucede que el resultado de una primera inyeccin sea un cromatograma perfecto, por lo cual es necesario interpretarlo, variar condiciones para optimizarlo y hacerlo til para los fines analticos. Con tal propsito se deben considerar los siguientes factores que afectan los picos: 1. Presin del gas de arrastre: En una columna cromatogrfica para gas las partculas de empaquetamiento ofrecen una resistencia al flujo del gas de arrastre debido a la viscosidad finita del gas por lo cual hay un gradiente de presin a lo largo de la longitud de la columna. Este gradiente no tendr efecto sobre el volumen de retencin pero si sobre el tiempo de retencin debido al hecho de que el gas es compresible por tanto la rata volumtrica de flujo es ms grande a la salida que a la entrada. As el gradiente de velocidad es inevitable cuando hay un gradiente de presin en la columna. Se ha demostrado que una relacin de presin muy grande entre la entrada y salida de la columna (Pi/Po) tiene un efecto adverso en el trabajo de la columna y lo ms deseable para el diseo de las columnas es que la relacin de presiones se aproxime a la unidad. Esta es la razn por la cual las columnas trabajan mejor con presiones en exceso de atmsferas que bajo vaco. 2. Temperatura un cambio en la temperatura afecta:
a) El coeficiente de particin, b) La rata de flujo volumtrico para una relacin dada de Pi/Po,

Como resultado de estos factores, se puede demostrar que los tiempos de retencin relativos son ms grandes a bajas temperaturas que a altas temperaturas y as la reduccin en la temperatura aumenta la eficiencia de la columna. Por otro lado el uso de las bajas temperaturas resulta en un tiempo de anlisis mayor y fcilmente se sobrecarga la columna, siendo necesario inyectar cantidades pequeas de muestra. Resumen de los factores que afectan el anlisis cromatogrfico

ALGUNOS PROBLEMAS ANALIZADOS 1. La figura muestra un cromatograma obtenido de una primera inyeccin, y la temperatura de la columna ha sido considerablemente ms alta que la temperatura ambiente. Los picos estn sin resolver y aparecen en un tiempo muy corto despus de la inyeccin.

Cul de los siguientes factores se debe cambiar en primer lugar para mejorar considerablemente la resolucin de los picos en el cromatograma?
a. Reducir la presin del gas de arrastre b. Reducir la temperatura de la columna c. Cambiar la fase estacionaria d. Incrementar la longitud de la columna.

2. La figura muestra un cromatograma que se ha obtenido de una inyeccin

La resolucin es pobre y los picos estn muy confusos aunque el tiempo de anlisis y los tiempos de retencin son razonables. Una causa de una resolucin muy pobre es la falta de selectividad en el proceso cromatogrfico. Para mejorar la resolucin en este caso, para incrementar la separacin de los picos, qu seria lo aconsejable?
a. Reducir la presin del gas de arrastre. b. Reducir la temperatura de la columna. c. Usar una columna con una fase estacionaria diferente.

3. Consideremos el cromatograma presentado en la figura, la resolucin todava no es suficiente para dar completamente una separacin de los dos picos mayores, un mejoramiento en la eficiencia de la columna ayudar a este efecto. Esto se puede lograr bajando la temperatura del horno y encontrando una nueva rata de flujo de gas por ensayo y error (haciendo ensayos de exceso y defecto en la presin del gas). Una columna ms larga mejorara las cosas an ms. Desafortunadamente estos pasos prolongan el tiempo de anlisis que de por s ya es largo.

Para el caso en descripcin, puesto que conocemos el rea de cada pico que representa la cantidad de cada componente particular en la mezcla, cul sera una alternativa para mejorar la resolucin?
a. Usar menos muestra en la inyeccin b. Usar ms muestra en la inyeccin

c. Usar una columna conteniendo menor fase estacionaria. 4. Algunas veces los picos en el primer cromatograma aparecen en forma asimtrica y tambin la asimetra puede ser tal que la parte posterior del pico es ms inclinada que la parte anterior.

Este tipo de asimetra resulta cuando se usa una columna conteniendo muy pocos platos. Otras causas de asimetra pueden ser: 1. Una columna sobre cargada, la cual se puede corregir inyectando menos muestra. 2. Por descomposicin trmica de la muestra en la columna. Cmo podra rectificarse la descomposicin trmica de la muestra? a. Bajando la temperatura del horno. b. Aumentando la rata volumtrica (velocidad de flujo) del gas de arrastre. c. Disminuyendo la cantidad de fase estacionaria.
5. La asimetra de los picos no deber confundirse con la cola de los picos como en la figura

Esto puede interferir con el anlisis, y puede con frecuencia ser eliminado por uso de un eliminador de cola, y/o usarse una columna conteniendo ms material inerte de soporte. La causa de la cola puede ser:
a. Temperatura muy alta b. Uso de fase estacionaria incorrecta (equivocada) c. Inyeccin de mucha muestra. Este tipo de asimetra resulta cuando se usa una columna conteniendo muy pocos platos. Otras causas de asimetra pueden ser: d. Una columna sobrecargada, lo cual se puede corregir inyectando menos muestra. e. Por descomposicin trmica de la muestra en la columna.