P R CT I CA 5 E X TR A CCI N OBJETIVO Obtener los lpidos de la corteza cerebral y encfalo y fraccionarlos de acuerdo a su solubilidad en diferentes solventes orgnicos.

FUNDAMENTO El cerebro en la especie humana pesa 1,3 compuesto por unos g y es una masa de te!ido gris rosceo 1"" """ millones de clulas nerviosas o neuronas, conectadas
D E L PI D OS D E CE R E BR O

unas con otras y responsables del control de todas las funciones mentales. #a corteza cerebral presenta una capa denominada sustancia gris, de unos $ a 3mm de espesor, compuesta por capas de clulas amielnicas %sin vaina de mielina& 'ue cubren una sustancia interior de fibras mielnicas %con vaina blanca&, la sustancia blanca. #os componentes tpicos del sistema nervioso son los lpidos, contenidos principalmente en los cilindro( e!es de los nervios. El contenido total alcanza del 1$ al 1)* del peso fresco, apro+imadamente la mitad del peso seco. ,ara los distintos grupos de lpidos se han obtenido los siguientes valores %por ciento del peso en fresco& .osftidos /* , 0erebr1sidos $*, Esteroles 2*. En la sustancia blanca. 3*, 2*, 1($ *, respectivamente. En la sustancia gris- 2*, 1*, 1($*, respectivamente. El colesterol se encuentra ampliamente distribuido en todas las clulas del organismo, pero especialmente en las del te!ido nervioso. Es el constituyente de mayor importancia en las membranas celulares y de las lipoprotenas plasmticas. El nombre 'umico es 3( hidro+i()(/ colesteno. El hgado sintetiza ms o menos el 1"* del total en los seres humanos, el intestino cerca de 1)* y la piel una gran porci1n del resto. #os os ol!"#$os son lpidos comple!os, contienen adems de cidos grasos y un alcohol, un residuo de cido fosf1rico4 con frecuencia tienen bases nitrogenadas y otros sustituyentes. ,or e!emplo, los glicerofosfolpidos- donde el alcohol es el glicerol, y los

esfingofosfolpidos, cuyo alcohol es la esfingosina. 5on los principales constituyentes lipdicos de las membranas. #os %l&col!"#$os comple!os, lpidos 'ue contienen un cido graso, esfingosina y carbohidratos. #os glucolpidos estn distribuidos ampliamente en cada te!ido del cuerpo, en particular en el te!ido nervioso %en cerebro&. #os glucolpidos principales en los te!idos animales son los glucoesfingolpidos. 6stos contienen ceramida y uno o ms az7cares. #os dos ms sencillos son la galactosiceramida y la glucosilceramida. MATERIAL
' E(UIPO UTILI)ADO

8n vaso de precipitados, 0inco pipetas de plstico, 9res pipetas ,asteur, 0uatro tubos de centrfuga, 8na varilla de vidrio, 8na parrilla de calentamiento, 8na centrfuga.

REACTIVOS

EMPLEADOS

$,) g de cerebro de pollo, Etanol, Eter, :cetona.

PROCEDIMIENTO 1. ,esa tres tubos de 1) m#, mrcalos como fracci1n ;, ;; y ;;;. 2. ,esa en un papel aluminio $,) g de cerebro de pollo, pcalo y col1calo en un tubo de centrfuga, adiciona, 1 m# de acetona por cada ",)g de cerebro, homogeniza el te!ido por un minuto y centrifuga a 3 """ rpm. <ecanta el sobrenadante en el tubo r*cc#+, I, y a=ade al residuo $ m# de acetona y homogenizando nuevamente. 0entrifuga y coloca el sobrenadante con la fracci1n ;. Esta fracci1n corresponde colesterol. 3. <e!a el residuo a temperatura ambiente durante cinco minutos para evaporar la acetona.

2. :diciona 3 m# de ter al residuo, centrifuga por $ minutos a 3 """ rpm. 5. 0oloca el sobrenadante en otro tubo de centrfuga con la leyenda r*cc#+, II. 6sta contiene fosfolpidos, nuevamente realiza una e+tracci1n con ter y adiciona el sobrenadante a la fracci1n ;;. 6. Elimina los residuos de ter permitiendo su evaporaci1n a temperatura ambiente ba!o la campana de e+tracci1n y adiciona 3 ml de etanol caliente al 3)* %>" o0 apro+&. 7. :gita y centrifuga durante $ min a 3 """ rpm. 0olecta el sobrenadante en el tubo de la r*cc#+, III, la cual corresponde a glucolpidos. ?ealiza nuevamente una e+tracci1n con 3 m# de etanol. 8. 0alcula el volumen del residuo y agrega dos vol7menes de acetona, homogeniza y centrifuga %$ min a 3 """ rpm&. 0oloca el sobrenadante con la fracci1n ;. :diciona al residuo 3 m# de ter y agita por 2 minutos. 3. 0entrifuga %$ min a 3""" rpm& y coloca el sobrenadante en el tubo de la fracci1n ;; %fosfolpidos&. Esta e+tracci1n se repite dos veces ms y los sobrenadantes van al mismo tubo. 10. 0ada tubo se evapora a se'uedad sobre la parrilla. @O ,E?A;9:5 B8E #O5 ?E5;<8O5 5E B8EAE@. 11.,esa los tubos nuevamente y calcula la cantidad de producto obtenido en cada fracci1n. INVESTI-ACIN

PREVIA

1. Elabora una lista de disolventes orgnicos en orden de polaridad. 2. CBue son las constantes dielctricasD REFERENCIAS 5tevens, :lan, 9e+to y :tlas de Eistologa. Editorial AosbyF<oyma libros, 133). AatheGs y Han Eolde. Iio'umica. Editorial Ac JraG Eill(;nteramericana. $K Edici1n, $""1. 5tauton L. Iio'umica Adica. Edit. ;nteramericana, 13/3. Hoet <. y M. Iio'umica. Edit. Omega, Espa=a, 133$.