DISCIPLINA DE HISTOLOGIA E EMBRIOLOGIA - 2005 Prof.a Lizeti T. O.

Ramalho MTODOS DE ESTUDO EM HISTOLOGIA 1 - GENERALIDADES: A histologia estuda os tecidos dos animais, engloba no somente a

estrutura microsc !ica dos tecidos, mas tamb"m a das c"lulas, rgos e sistemas de rgos# De$e-se entender %ue o cor!o " constitu&do !or c"lulas, matri' intercelular e uma subst(ncia )luida, o )luido e*tracelular ou )luido tissular# Este )luido tissular deri$ado do !lasma sangu&neo, trans!orta nutrientes, o*ig+nio e mol"culas de sinali'a,o# As mol"culas de sinali'a,o, os !rodutos de catabolismo e o di *ido de carbono in$ersamente so liberados !elas c"lulas e chegam aos $asos sanguineos e lin)-ticos atra$"s do )luido e*tracelular# . )luido e a matri' intercelular no so $is&$eis nas !re!ara,/es histol gicas de rotina, mas em histologia a sua !resen,a in$is&$el de$e ser com!reendida# 0 - 123.D.S 4.151EN3E 5SAD.S N. ES35D. DAS 42L5LAS E 3E4ID.S: m"todos de !re!ara,o alinham-se em dois gru!os: 0#1 - E*ame a )resco 67in $i$o78: 4onsiste na obser$a,o de c"lulas $i$as com a )inalidade de: $eri)icar di)erentes ti!os de mo$imentos, estrutura celular, a ati$idade )agocit-ria, os as!ectos de re!rodu,o celular, as!ectos de ingesto e e*cre,o de subst(ncias metab licas# E*#: Estudo do es!erma com a )inalidade de obser$ar a mobilidade do es!ermato' ide# 0#0# - 1"todos de estudo a! s a morte: 2 o m"todo mais comumente utili'ado em 9istologia, %ue !ermite a obten,o de !re!arados histol gicos !ermanentes 6l(minas8 !ara o estudo ao microsc !io# .s rgos, !or"m, na sua maioria so muito es!essos e !recisam ser redu'idos a cortes )inos, su)icientemente trans!arentes !ara serem analisados ao microsc !io de lu'# 4om!reende as !re!ara,/es )i*adas e coradas de tecidos ou rgos# Este " o m"todo de uso corrente na 9istologia# . material " submetido a uma se%:+ncia de tratamentos 6t"cnica histol gica8 a )im de ad%uirir condi,/es de ser analisado ao microsc !io de lu'# .b$iamente, o %ue se dese;a " le$ar ao microsc !io um !re!arado no %ual os tecidos este;am !er)eitamente !reser$ados, a!resentando a mesma estrutura e com!osi,o %u&mica %ue !ossu&am .s

%uando $i$os# 1as, a!esar dos cuidados tomados, este ob;eti$o no " alcan,ado, obser$ando-se em todos os !re!arados histol gicos certos arte)atos conse%:entes ao !rocessamento %ue so)reram# < - 324NI4AS 9IS3.L=GI4AS: <#1 - 4olheita do material: >ara )ins citol gicos e obten,o de boas !re!ara,/es histol gicas, o material de$e ser retirado de um animal anestesiado ou imediatamente a! s a sua morte# .s ti!os de colheitas so: a - ?i !sia: remo,o de tecido $i$o !ara !osterior an-lise histol gica# b - Necr !sia: remo,o do tecido morto !ara !osterior an-lise histol gica# c @ >un,o# d - Escari)ica,o: ras!agem# <#0 - Ai*a,o: A )i*a,o tem como ob;eti$o e$itar a destrui,o das c"lulas !or suas !r !rias en'imas 6aut lise8 ou !or bact"rias# As !e,as histol gicas 6tecidos8 de$em ser ade%uadamente tratados imediatamente a! s a sua retirada, $isando al"m disso endurecer os tecidos tornando-os mais resistentes Bs eta!as subse%uentes# <#0#1 - Cualidades de um bom )i*ador: a - ter um bom !oder de !enetra,oD b - matar instantaneamente as c"lulasD c - endurecer a !e,a !ara )acilitar a obten,o de cortes: d - de$e matar microorganismos %ue e$entualmente contaminam as !e,asD e - de$e conser$ar o m-*imo !oss&$el da estrutura celularD ) - de$e )acilitar a !osterior colora,o dos cortesD g - de$e insolubili'ar as !rote&nas, !ois estas so as !rinci!ais res!ons-$eis !ela estrutura das c"lulas e tecidos# <#0#0 - Agentes )i*adores Em 9istologia, utili'a-se %uase e*clusi$amente a )i*a,o %u&mica, !or meio das subst(ncias chamadas )i*adores# Ai*adores sim!les: cloreto de mercErio, -cido !&crico, alde&do ) rmico, tetr *ido de smio e glutaralde&do# 1isturas )i*adoras: ?ouin, l&%uido de 9ellF, Gendre, GenHer, alcool-"ter# 3amanho das !e,as: de$em ser !e%uenas, $ariando de < mm a 1 cm# . $olume do )i*ador: de$e ser de 0I $e'es o $olume da !e,a#

<#< - La$agem da >e,a: A !e,a de$e ser la$ada em -gua corrente durante 0J horas, a )im de remo$er o )i*ador# <#J - Incluso: A !e,a de$e ser inclu&da, a)im de se obter cortes su)icientemente )inos !ara serem obser$ados ao microsc !io# .s tecidos de$em ser embebidos e en$ol$idos !or subst(ncia de consist+ncia )irme# E*#: gelatina, celoidina# >ara)ina e resinas e!o*i# >ara a incluso da !e,a em !ara)ina " necess-rio !roceder a: a - Desidrata,o: retirada da -gua !resente nos tecidos, !ela !assagem em -lcoois crescentes: KI, LI, MI e Absoluto# b @ Dia)ani'a,o ou clari)ica,o: consiste em im!regnar a !e,a num sol$ente de !ara)ina, ou se;a, *ilol, ben'ol ou toluol# c - Im!regna,o ou embebi,o na !ara)ina: mergulha-se a !e,a em !ara)ina )undida 6NI o 48 no interior de uma estu)a# De$ido ao calor, o *ilol ou ben'ol e$a!oram e os es!a,os anteriormente ocu!ados !or eles so ocu!ados !ela !ara)ina# d - Incluso !ro!riamente dita e con)ec,o do bloco de !ara)ina com a !e,a en$ol$ida !ela mesma# <#O - 1icrotomia: A microtomia consiste na obten,o de cortes delgados !or meio de uma na$alha de a,o do micr tomo# A es!essura m"dia dos cortes " de < a L micrPmetros 6m8# Eta!as subse%uentes: a - ?anho 1aria a <KI 4, com ob;eti$o de no )ormar dobras no !re!aro# b - Ada!ta,o na l(mina c - Adeso do corte na l(mina: le$ar a estu)a a tem!eratura de <K a JII4# <#N - 4olora,o: " reali'ada com a )inalidade de obter contraste e e$idenciar os $-rios com!onentes estruturais na delgada )atia de tecido e ao n&$el do microsc !io# A maioria dos corantes usados em 9istologia com!ortam-se como -cidos ou bases# >ara se corar um corte embebido em !ara)ina de$e-se !roceder da seguinte maneira: a - Des!ara)inar o corte com *ilol 1 e *ilol 0 b - 9idratar o corte com -lcoois decrescentes: Absoluto - MI - KI e -gua destilada# c - 4olora,o !ro!riamente dita#

d - 1ontagem - tem a )inalidade de encerrar o corte entre a l(mina e a lam&nula, a)im de !roteg+-lo e conser$--lo# A subst(ncia usada como meio de montagem " o ?-lsamo# e - Estu)a - . *ilol e$a!ora, o b-lsamo seca e a lam&nula adere a l(mina# ) - Rotulagem - coloca,o de uma eti%ueta na l(mina com as !rinci!ais re)er+ncias do material# <#N#1 - Agentes 4orantes: 9emato*ilinaQEosina 69QE8, Aucsina, 3ricrPmico de 1allorF, 3ricrPmico de 1asson, 3ricrPmico de Gomori, 3ricrPmico de Shorr, 4orante de Leishman, Alo*ina, etc# A maior !arte dos materiais e*aminados !ela !rimeira $e' no curso de 9istologia, " com!osta !or cortes em !ara)ina corados com 9emato*ilina e Eosina 69QE8# A Eosina " um corante -cido e a 9emato*ilina, embora no se;a um corante b-sico, tem !ro!riedades muito semelhantes Bs dos corantes b-sicos# 4orante b-sico " a mol"cula %ue tem carga !ositi$a 6ou cargas !ositi$as8 na !or,o %ue !ossui cor, e, corante -cido " a mol"cula %ue tem carga negati$a na sua !or,o %ue !ossui cor# A cor do corante no tem rela,o com o )ato de o corante ser -cido ou b-sico# . )enPmeno em %ue determinado corante 6como o a'ul de toluidina8 muda de cor a! s reagir com determinado com!onente tecidual " denominado metacromasia# <#K - E*ce,/es: a - >ara o tecidos minerali'ados 6osso, dentina, cemento8, logo a! s a )i*a,o, a !e,a ter%ue ser descalci)icada# Agentes descalci)icadores: ED3A e 1orse 64itrato de S dio a 0IR e Scido ) rmico OIR em !artes iguais8# b - Do material obtido !or !un,o ou ras!ado, reali'a-se uma e*tenso ou es)rega,o, %ue em seguida de$er- ser )i*ado e de!ois corado, montado e rotulado# <#L - .utros 1"todos 5sados em 9istologia: - Radioautogra)ia: !ermite a locali'a,o de subst(ncias radioati$as nos tecidos# - 4ultura de tecidos: culti$o 7in $i$o7 !ara estudos de metabolismo de c"lulas# - 4entri)uga,o )racionada: !ermite isolar %uais%uer organelas e inclus/es celulares, !ara determinar sua com!osi,o %u&mica e estudar suas )un,/es in $itro#

- 4ariometria e citometria: !ermite $eri)icar o $olume do nEcleo e da c"lula res!ecti$amente# - 9istometria: !ermite contar as di)erentes estruturas de um tecido !or unidade de su!er)&cie# - 9isto%u&mica: tem !or base a locali'a,o de com!ostos ou radicais %u&micos em -reas es!ec&)icas de um tecido ou em com!onentes celulares# E*#: &ons, li!&dios, !rote&nas# - Inter!reta,o dos cortes: estudar um corte histol gico ao microsc !io, " !reciso ter em mente %ue a estrutura das c"lulas e tecidos est- alterada !ela t"cnicas histol gicas# E, tamb"m de %ue a delgada es!essura dos cortes cria um obst-culo ao estudo tridimensional dos tecidos e rgos, nos limitando B $isuali'ar em a!enas duas dimens/es# 3orna-se assim, necess-rio o estudo de cortes reali'ados em di)erentes dire,/es ou em cortes seriados# .utra di)iculdade encontrada " de %ue %uando se cora um !re!arado, a!enas algumas estruturas so e$idenciadas# >or isso " necess-rio o estudo de $-rias l(minas, coradas !or di)erentes t"cnicas, !ara se ter uma id"ia com!leta da com!osi,o e estrutura do tecido ou rgo em e*ame# LITR.: 9IS3.L.GIA ?SSI4A 1I#a ed# Uun%ueira V 4arneiro, Ed# Guanabara Woogan# .?SERTAXYES: Sites !ara com!lementa,o do estudo: htt!:QQZZZ#multi!olo#com#brQhistologia htt!:QQZZZ#$irtual#e!m#brQmaterialQhistologiaQ)rame#htm htt!:QQo!en-site#orgQScienceQ?iologFQ9istologFQ htt!:QQZberes)ord#hsc#Z$u#eduQhistol#htm[9IS3.L.G\:R0I1E39.DR0IAND R0I1I4R.S4.>\