4 INFORME DETERMINACION DE TRANSAMINASAS

I.

INTRODUCCION amino transferasas son enzimas que catalizan la

Las transaminasas o

transferencia de un grupo amino de un aminocido a un cetocido (reaccin de transaminacin), requieren de un grupo prosttico: el fosfato de piridoxal para la accin cataltica. Las que se determinan comnmente son

la transaminasa glutmico oxaloactia o aspartato amino transferasa (GOT o AST) y la transaminasa glutmico pirvica o alanino amino transferasa (GPT o ALT). Niveles bajos se detectan en pacientes dializados o con deficiencia de vitamina B6. Existen transaminasas de inters clnico ya que los valores de sus concentraciones en suero son empleados como indicadores de enfermedades cardiacas o hepticas. Las transaminasas se encuentran presentes en todos los tejidos pero en altas concentraciones en hgado, musculo esqueltico, rin, glbulos rojos y corazn. Su aumento se asocia con enfermedades que afectan dichos tejidos, tales como: hepatitis, cirrosis, infarto de miocardio, etc.

II.

MARCO TEORICO

Las transaminasa son enzimas intracelulares, ubicadas en el citoplasma y/o en las mitocondrias. Se encuentran en muchos tejidos, principalmente en el hgado, msculo cardaco y en el msculo estriado, en cantidades y proporciones diferentes. En estados normales se encuentran en el plasma en bajas concentraciones, pero en el caso de necrosis celular o alteracin de la membrana plasmtica pasan a la sangre en grandes cantidades, dependiendo de la extensin y profundidad del dao.

Los niveles sricos ms altos de estas enzimas se encuentran en las hepatitis virales, necrosis hepticas por medicamentos y en infartos del miocardio; sin embarg, casi todas las afecciones hepticas llevan consigo un alza de las transaminasas sricas. La determinacin de transaminasas sricas es muy til para el diagnstico precoz de hepatitis viral, en especial en casos de epidemia, para detectar casos de hepatitis anictrica. Tambin es importante en el control de la evolucin de la enfermedad heptica; as, la aparicin de alzas en la actividad de transaminasas en el curso de una hepatitis indica una recrudescencia, y la mantencin de los niveles por sobre lo normal sugiere cronicidad. Los valores de GOT son marcadamente elevados en pacientes con necrosis hepticas agudas (por ejemplo, hepatitis virales, medicamentosas o por productos qumicos). En estas situaciones los valores de GOT y GPT se encuentran elevados incluso antes de que aparezcan los primeros signos de ictericia. En el caso de dao agudo y masivo los valores de estas enzima pueden elevarse hasta cien veces el valor normal. Pacientes con cirrosis heptica, colestasis intraheptica o ictericia postheptica habitualmente experimentan elevaciones ms moderadas de GOT, dependiendo del grado de necrosis. En pacientes con cirrosis heptica los valores de GOT son ms elevados que los de GPT y el aumento de GOT es entre cuatro y cinco veces el valor normal. En la clula heptica la GOT se encuentra en el citosol y en la mitocondria; en cambio, la GPT est slo en el citosol. La relacin GOT/GPT, cuyo valor normal es 0,7, aumenta a medida que el dao se hace ms profundo y crnico. Valores normales: Se consideran valores normales de transaminasas (GOT y GPT) entre 12 U/L y 35 U/L.

III. DESCRIPCION DEL METODO A USARSE 1. Fundamento La determinacin de la transaminasa glutmico oxalactica o aspartato aminotransferasa (GOT) se basa en la siguiente reaccin:

L- aspartato + cetoglutarato

GOT

glutamato + oxalacetato

La determinacin de la transaminasa glutmico pirvica o alanina aminotransferasa (GPT) se basa en lasiguiente reaccin:

L alanina + cetoglutarato

GPT

glutamato + piruvato

Adicionar 2,4 dinitrofenilhidrazina, que en un medio alcalino nos da un complejo medible a 505 nm. Reaccin qumica de coloracin Oxalacetato o piruvato + 2,4 dinitrofenilhidrazina
medio alcalino

Hidrazona

2. Tcnica Rvo. Sustrato (GOT o GPT) Blanco 0.5 ml Muestra 0.5 ml

Colocar a bao mara a 37 por 3 minutos Suero Agua destilada 100 ul 0.1 ml 100 ul 0.1 ml

Incubar por 15 minutos a 37C y adicionar 2,4 DNFH 2,4 DNFH 0,5 ml 0.5 ml

Mezclar, incubar por 6 minutos a 37C Diluyente (NAOH) de enzima 5 ml 5 ml

Mezclar por inversin retirar del B.M. y leer a 505 nm. Concentracin de GOT Y GPT: construir curvas de calibracin de la reaccin enzimtica.

GOT Abs. 0 0.037 0.168 0.173 0.195 0.250 0.266 0.356 [ ] u/l 0 4,9 7 12 20 28 37 48 Abs. 0 0.023 0.046 0.111 0.145 0.172 0.217 0.252

GPT [ ] u/l 0 5 9 18 25 37 46 56

IV.

PROCEDIMIENTO Y RESULTADOS DE LA PRCTICA

MATERIALES: Espectrofotmetro Bao de agua a 37C Pipetas y micropipetas 1ml Tubos de ensayo Reactivos (GOT, GPT, 2,4 DNFH. NAOH) Suero (muestra) Papel milimetrado

V.

INTERPRETACION DEL RESULTADO:

En el primer grfico y en el segundo grfico, GOT Y GPT respectivamente se reconoce la presencia de un nivel de concentracin dentro de un rango normal, por lo cual, podemos deducir que nuestros compaeros no presentan ninguna complicacin a nivel del miocardio, heptico, etc.

VI.

CONCLUSION

Una elevacin de las enzimas celulares en el plasma es equiparable a una lesin celular. Es importante tener en cuenta que las enzimas cuyos niveles aumentan en suero raramente derivan de una necrosis celular sino que lo hacen por un grado sucesivo de liberacin debido a que la biosntesis enzimtica se conserva mientras la clula vive. En los casos extremos de necrosis, despus de un breve lapso, las actividades en el suero disminuyen por falta de nuevos aportes debido a una biosntesis proteica considerablemente disminuida o nula. Los valores obtenidos se encuentran dentro de los valores de referencia. VII. BIBLIOGRAFA

Gua prctica de laboratorio # 5 de Evaluacin del funcionalismo heptico. Bioqumica clnica 7mo semestre de Bioanlisis. Bioqumica Jos Laguna y Enrique Pia Garza.4ta. Edicin - JGH EDITORES Pginas Consultadas: 64, 107 y 108 Bioqumica de Harper Murray, Mayes, Granner y Roswell.15ava. Edicin EDITORIAL MANUAL MODERNO Pginas Consultadas: 356 y 357 Principios de Medicina Interna Harrison 13ava. Edicin EDITORIAL INTERAMERICANA Paginas consultadas: 438, 998.Edmundo Sterling

http://www.wienerlab.com.ar/wiener/catalogo/archivos/6306_transaminasas200_sp.pdf