Universidad Autnoma de Nayarit Unidad Acadmica de Ciencias Qumico Biolgicas y Farmacuticas.

Laboratorio de Qumica Aromtica Practica #6 Aislamiento de Purinas: Cafena a partir de T negro, Caf tostado, Bebidas de cola y Energticas. Meja Macas Brallan Antonio Vela Flores Dalia Vernica Crespo Muro Mara Teresa Gutirrez Castro Osmar Miguel 4 B Q.F.B ____________________________________________ Prctica martes 25 de marzo del 2014

PRACTICA No. 6 AISLAMIENTO DE PURINAS: CAFENA A PARTIR DE T NEGRO, CAF TOSTADO, BEBIDAS DE COLA Y ENERGTICAS

OBJETIVOS Aislar la cafena a partir de bebidas de consumo cotidiano como son el t negro, refresco de cola y caf, usando una disolucin de NaOH y extraccin con diclorometano. Que el alumno revise las propiedades farmacolgicas de la cafena. Comparar el rendimiento y la pureza de la cafena aislada de diferentes productos comerciales. ANTECEDENTES La cafena es una droga que se produce naturalmente en las hojas y las semillas de muchas plantas. Tambin se la elabora artificialmente y se agrega a ciertos alimentos. Se define a la cafena como una droga porque estimula el sistema nervioso central, lo que aumenta el estado de alerta. En la mayora de las personas, la cafena produce un aumento temporal de la energa y una mejora del estado de nimo. Familia de las metil- xantinas? Las metil-xantinas o, simplemente, xantinas, son sustancias orgnicas alcaloides (metabolitos secundarios de las plantas) que producen, principalmente, una excitacin inmediata en la corteza cerebral y otras muchas afecciones fsicas expansivas y degenerativas, con su consumicin frecuente y abusiva. De tan consumidas y presentes en nuestra vida suelen pasar desapercibidas. Hay tres tipos de xantinas: la CAFEINA, la TEOBROMINA y la TEOFINAo TEOFILINA. La cafena la poseen en grado extremo el mate, el caf, l te, las bebidas energizantes y colas. La teobromina se encuentra, de modo eminente, en la planta del cacao (y en los chocolates dicen que eso es lo que le confiere su amargo sabor; los chocolates negros la poseen en mayor cantidad). Y las teofinas se hallan en l te verde y negro, y es un broncodilatador de efecto moderado (ya se habla de un posible potencial antiinflamatorio de esta metilxantina por su capacidad de dilatar los vasos perifricos) al tiempo que incrementa y sobre exige el trabajo cardiolgico. Tambin tiene efectos diurticos, y estimula directamente la corteza cerebral, produce sensacin de calor en la piel, y pesadez en las piernas y en los brazos.

Propiedades fsicas y qumicas de la cafena:

Formula qumica de la cafena: En cuento a las propiedades qumicas, sabemos que la cafena es un alcaloide que forma parte de la familia metilxantina. Cuando la cafena se encuentra en estado puro, su aspecto es de slido blanco, en forma de polvo. La frmula qumica de sta sustancia es C8H10N4O2, siendo su nombre cientfico 1,3,7-trimetilxantina. La teofilina, la cafena y la teobromina son tres alcaloides estrechamente relacionados que se producen en plantas de amplia distribucin geogrfica. La cafena, la teofilina y la teobromina son xantinas metiladas. Las frmulas estructurales de la xantina y sus tres derivados naturales son las siguientes:

El

orden

de

potencia

de

las

metilxantinas

naturales

es:

Teofilina >Cafena>Teobromina. Se ha preparado un gran nmero de derivados de las metilxantinas, examinndose su capacidad de inhibir las nucleotidofosfodiesterasas cclicas (inhibiendo la formacin de

AMP cclico) y antagonizar las acciones de la adenosina mediadas por receptores (Estas dos son las acciones celulares mejor caracterizadas de las metilxantinas). Uso de la cafena industrial: Su uso es considerado como doping en el deporte porque mejora el rendimiento fsico. Se encuentra en numerosos preparados antigripales en asociacin con otros frmacos. Se intenta conseguir de esta forma: 1. Potenciar el efecto de algunos analgsicos como la aspirina. 2. Hacer que el paciente sea estimulado fsica y psquicamente. De esta forma el paciente no solo se siente aliviado, si no tonificado. Adems tiene la sensacin de estar un poco ms despierto y un poco menos congestionado. No obstante, teniendo en cuenta que la cafena aumenta la secrecin gstrica y que el cido acetilsaliclico (la aspirina) es ulcero gnico, corremos un cierto riesgo de que tras la gripe o el resfriado tengamos un poco estropeado. La cafena se utiliza (o se ha utilizado) en el tratamiento de la migraa porque produce vasoconstriccin en los vasos peri craneales dilatados Tambin puede aliviar parcialmente los ataques de asma porque produce bronco dilatacin, aunque ahora se utilizan derivados sintticos de la teofilina (una base xntica relacionada perteneciente a la familia de la cafena). Por cierto, que la cafena se vende como preparado farmacutico indicado en estados de fatiga. Desde luego, que burradas pueden encontrarse en los prospectos de los medicamentos; si estas fatigado y te tomas un preparado con cafena acabars mucho peor de lo que estabas, porque la cafena acelera el gasto de recursos metablicos. Efectos de las Metilxantinas y contenido de cafena de cada alimento

La teofilina y la cafena son estimulantes poderosos del SNC La cafena ha sido considerada la ms potente de las metilxantinas; no obstante, la teofilina produce una estimulacin ms profunda del SNC. Las personas que ingieren cafena o bebidas que la contienen suelen experimentar menos somnolencia, menos fatiga y un flujo ms claro de pensamiento. A medida que la dosis de cafena o teofilina se aumenta, se producen signos de estimulacin progresiva del SNC, incluyendo nerviosismo o ansiedad, inquietud, insomnio, temblores a hiperestesia e inclusive se puede llegar a convulsiones, en ocasiones refractarias a los agentes anticonvulsivantes.

Las metilxantinas tambin estimulan los centros respiratorios medulares, ya que parecen aumentar la sensibilidad de estos centros al CO2 y de esta forma aumentan el volumen respiratorio minuto. La Teofilina puede producir disminuciones modestas en la resistencia vascular perifrica, una estimulacin cardaca poderosa y un aumento en la perfusin de la mayora de los rganos. A altas concentraciones tanto la cafena como la teofilina producen taquicardia e inclusive en los individuos sensibles pueden presentarse arritmias (aunque es raro). Las metilxantinas estimulan la secrecin de tanto cido gstrico como enzimas digestivas. Las bebidas descafeinadas tambin tienen un potente efecto estimulante, lo cual indica que el cafena no es el principal estimulante de esta secrecin.

EL CAF Y SUS RECETAS, una tabla del contenido de cafena que contienen algunas infusiones y alimentos. La cul es trascripta a continuacin. Los valores refieren a los miligramos de cafena por infusin / alimento.

MATERIAL. 1 Bao mara 1 Embudo de separacin con tapn 1 Esptula 1 Tela asbesto 1 vaso de pp. De 100mL 1 Probeta de 50mL 1 Agitador y 1 aro 1 vaso de pp. de 250mL 1 vaso de pp. de 50mL

REACTIVOS 1 Lata de refresco 5g de Caf tostado en polvo 5 sobrecitos de t negro Disolucin de NaOH conc.

NaOH Descripcin: El hidrxido de sodio es un slido blanco e industrialmente se utiliza como disolucin al 50 % por su facilidad de manejo. Es soluble en agua, desprendindose calor. Absorbe humedad y dixido de carbono del aire y es corrosivo de metales y tejidos. Peso molecular: 40.01g/mol Formula : NaOH Densidad: 2.13g/mL Toxicidad : Punto de fusin: 318.4C Punto de Ebullicin: 1388C Diclorometano Formula: CH2Cl2 Peso molecular: 84.9 Punto de ebullicin: 40C Punto de fusin: -95,1C Densidad: 1.3 Toxicidad: TLV = 100 ppm (350 mg/m3) STEL = 250 ppm (870 mg/m3) TWA = 50 ppm (174 mg/m3)

Descripcin: Lquido incoloro, de olor caracterstico Riesgos de salud: La sustancia irrita los ojos, la piel y el tracto respiratorio. La ingestin del lquido puede originar aspiracin dentro de los pulmones con riesgo de neumonitis qumica. La exposicin podra causar disminucin de la consciencia. La exposicin podra causar la formacin de carboxihemoglobina. Cafena Descripcin: La cafena es un psicoactivo alcaloide del grupo de las xantinas, slido cristalino,
blanco y de sabor amargo, que acta como una droga psicoactiva, levemente disociativa y estimulante por su accin antagonista no selectiva de los receptores de adenosina

Peso molecular: 194,19g/mol Densidad: 1,23 g/cm

Formula : C8H10N4O2 P.F : 238C ~ P.E: 178C

INICIO

T Negro

De refresco de coca cola

Caf tostado

Pese 5 bolsitas de te negro

Medir 50 ml en bureta y pasarlo a matraz Erlenmeyer, agitar hasta eliminar burbujas (CO2)

Pesa 5 g. de caf, molerlo y coloca en vaso de pp. 250 ml Coloca 30 ml de agua hirviendo y calentarlo

En vaso de p.p. de 250 ml aadir las bolsitas y coloque 30 ml de agua hirviendo Cheque el pH, sea 8 si no es agrega sosa

por 20 min con agitacin constante

Determine el pH
Verifique pH y coloca gotas de NaOH

hasta que sea de 8 Pase a embudo de separacin y agregar 10 ml de CH2Cl2 Repita el proceso 2 veces mas
Realice otras 2 infusiones con 30 ml de agua y verifique el pH sea alcalino. Filtre con embudo de vidrio por los restos de caf

Caliente en parrilla por 20 min y agite

Repita el proceso del calentar y agitar, para extraer mas cafena y separe la solucin. Si se forma la emulsin por agitacin violenta, espere mas tiempo para la separacin de la fase acuosa y orgnica

Colocar 30 ml aprox. De fase orgnica en vaso de pp de 100 ml, seque con Na2SO4 anhdrido y la fase orgnica vacela a vaso de pp. 50 ml previamente pesado Deje evaporar en campana. Determine rendimiento, punto de fusin y caractersticas de la cafena
Determine el peso del producto y su punto de fusin

Al lquido obtenido se extrae con 10 ml de CH2Cl2 triplicado, la fase orgnica es el producto deseado

Deje enfriar y aadir 10 ml de CH2Cl2 y repita el proceso 2 veces mas

El vaso de pp. el que se colocara la fase orgnica debe estar previamente pesado

Se recolecta la fase orgnica en vaso de pp de 100ml y se seca con Na2SO4 anhdrido. La fase orgnica se transfiere a vaso de pp de 50 ml , pesado antes.

Evaporar el disolvente en campana, obtiene agujas blancas

Evapore el lquido en campana. Determine el rendimiento, punto de fusin y caractersticas de la cafena

FIN

Observaciones:

Se realiz un mtodo totalmente diferente propuesto por los maestros. Se realiz un pesado de 10 gramos en vaso de precipitado de 250 ml y se le agrego agua y se puso a calentar hasta hervir (excediendo de 100 ml). Despus de hervir el agua se contaron 20 min y se estuvo agitando constantemente, disminuyendo el volumen de la solucin Se prepar una solucin al 10 % de acetato de plomo, se le agrego al solucin expuesta a hervir antes y se le agrego hasta que dejara de precipitar (aprox. 30 ml) Se filtr al vaco y se recolecto el sobrenadante, desechando el precipitado. Sobrenadante obtenido se le agrego carbonato de calcio, cambiando la coloracin de la solucin a un amarillo ms claro. Se calent por 5 min hasta que alcanzo el punto de ebullicin, despus se filtr al vaco obteniendo un sobrenadante caf claro (la solucin se filtr en caliente). El sobrenadante se puso a temperatura ambiente y se pas a un embudo de separacin, agregando 15 ml de dicloruro de metileno y se agito por un minuto, despus rompieron las emulsiones con el agitador y se pasaron a un vaso de precipitado, el cual contena sulfato de sodio anhdrido para recibirlo. En el vaso de precipitado peso 30.5472 g. Se adiciono 15 ml, agitando durante un minuto. Debido a la gran agitacin se form una gran emulsin, se trat de romperlo con una sal, pero no funciono. Despus se le adicionaron otros 10 ml de dicloruro de metileno y se rompi la emulsin, al final se decant el producto obtenido un precipitado amarillo. Se calent a bao mara hasta su sequedad total. Se formaron unas agujas de color amarillo en el fondo de vaso de precipitado.

La solucin de caf con el agua hirviendo.

La solucin de acetato de plomo con el caf, formando el precipitado.

Despus de filtrar al vaco, la solucin se le adiciono carbonato de calcio. Formando ese color

Sobrenadante obtenido despus de filtrar la solucin de carbonato de calcio

Embudo de separacin con el cloruro de metileno

Se agito y despus se rompen las emulsiones.

Lo que se tomo es la parte de abajo, que se estaba quitando la emulsion.

Producto obtenido, despus de separar los lquidos

La solucin se puso a bao mara, hasta sequedad

El producto final de las agujas de cafena.

CUESTIONARIO 1. Por qu es importante que el pH de la solucin sea alcalino? Debido a que estos a un pH bsico son solubles en presencia de ciertos disolventes como diclorometano(utilizado en la practica), benceno, ter etlico, acetato de etilo. Con esto permite obtener la extraccin de la cafena, con una mayor facilidad. 2. En cul de los 3 procedimientos realizados se obtuvo un mayor rendimiento de cafena? En nuestro caso se realiz un mtodo distinto para la extraccin de cafena el cual dio un rendimiento del 43.35 % , de cafena. 3. Qu otro disolvente se puede utilizar para poder extraer la cafena? Mientras se encuentre a un pH bsico se pueden utilizar el benceno, ter etlico, acetato de etilo, debido a que son ms solubles en solventes orgnicos no polares. Y si encuentran en forma de sales son ms solubles en solventes polares como el agua. 4. De qu otra forma se puede extraer a la cafena? La forma que nosotros obtuvimos la cafena, fue por extraccin lquido a liquido el cual permite que la cafena, se obtenga con una mayor pureza un con un buen rendimiento. Sera otra forma que se pudo extraer. 5. Proponga el mecanismo para la sntesis de purinas.

Se realiza el pesado del caf 10 gramos y se le adiciona 120 ml de agua hirviendo, Con el objeto de precipitar los taninos presentes en el extracto de caf, en vaso de precipitados donde se encuentra la solucin cruda, se le adicionan gota a gota una solucin de acetato de plomo al 10% hasta que no se observe la formacin de precipitado. A la solucin final se le adicionaron 5 g de carbonato de calcio y se calienta nuevamente a reflujo suave durante unos 5 minutos, evitando el sobrecalentamiento. Luego del calentamiento se debe proceder a una filtracin en caliente, inicialmente a travs de un filtro para caf convencional y luego utilizando un embudo Buchner provisto de un papel filtro franja negra. Luego de enfriar el filtrado (lquido filtrado) a temperatura ambiente, se debe proceder a extraer el alcaloide utilizando un embudo de separacin de 150-250 mL (Figura N3) con un porcin de 15 mL de cloruro de metileno (diclorometano), agitando la mezcla vigorosamente durante 1 minuto. Las capas se deben separar despus de varios minutos. Emulsiones podran estar presentes en la capa orgnica inferior, dicha emulsin puede romperse adicionando solucin de NaCl saturada o por simple agitacin. La capa orgnica obtenida se recoger en un Erlenmeyer seco que contiene un agente desecante (sulfato de sodio o magnesio

anhidro). El proceso de extraccin se repite por dos ocasiones ms con 15 mL de diclorometano y las fases orgnicas son nueva mente recolectadas en el Erlenmeyer inicial que contiene el agente desecante. Estos extractos deben quedar claros, sin mostrar signos visibles de la contaminacin del agua. Si algo de agua debe pasar a travs del filtro, repita el secado, con una nueva porcin de sulfato de magnesio. Filtrar los extractos para retirar el sulfato utilizado y recoger los extractos secos en un nuevo Erlenmeyer seco. Enjuague el magnesio sulfato con 15 a 20 mL de diclorometano fresco. Agite y elimine las emulsiones, separe el lquido y evapore a bao mara y observe las agujas de cafena.

Bibliografa:
Harborne, J. B. 1991. Phytochemical Methods. 3a ed. Chapman & Hall. Londres. 288 p. Ikan, R. 1991. Natural Products. A Laboratory guide. Academic Press New York. 293 P. Pavia, D.D., Lampman, G.M. y Kriz, G.S. Jr. 1976. Introduction to Organic Laboratory Techniques. W.B. Saunders Co. Filadelfia. 699 p. Soto, H. M. R. 2007. Fitoqumica, Manual de prcticas. Colegio de Postgraduados Campus Montecillos. 102 p.