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Qu descalcificamos?
Qu es la descalcificaci !
C" sis#e $%sica&e #e e la 'e&"ci de sales de calci" desde #e(id"s 'ic"s e es#"s c"&)" e #es * +ue s" l"s causa #es de la du'e,a * 'esis#e cia de s#"s- l" +ue i&)ide se' )'"cesad"s c"&" cual+uie' "#'" #e(id" )a'a c"'#e .is#"l/ic".
0id'"1ia)a#i#a
Es el )'i ci)al c"&)" e #e &i e'al de l"s #e(id"s calcificad"s. 2e&"ci &edia #e us" de %cid"s fue'#es #ales c"&" %c 3#'ic" " f'&ic" A/e #es +uela #es 4 EDTA 5 M#"d" elec#'"l3#ic"
Cuidad"s
0id'lisis de %cid"s ucleic"s 6'dida de ac#i7idad e ,i&%#ica Dis&i uci de la i &u "'eac#i7idad Descalcificaci i c"&)le#a Fi(aci )'"l" /ada Fi del )'"ces"
Recomendaciones
Fi(aci &%s la'/a La7ad" )'"l" /ad" 4 89 .'s. Mi 5 Ca&$i" dia'i" de la s"luci C" #'"l )e'&a e #e del )'"ces".
Calcificaciones patolgicas
a'#e'i"
Sarcoma de Ewing
El PAS-diastasa para glucgeno es necesario en los tumores de celular redondas, para distinguir el sarcoma de Ewing (PAS positivos) del neuroblastoma y del linfoma (en general, PAS negativos).
La impregnacin argntica para las fibras reticulares til para distinguir el sarcoma de Ewing del linfoma,
Tejido seo
Mara Eugenia Franco
Matriz orgnica (35%) Fibras de colgeno tipo I(90%) Matriz extracelular de naturaleza glicoproteica que proporcionan flexibilidad y resistencia al tejido
MEC
glicosaminoglicanos: glicosaminoglicanos: condroitncondroitn-sulfato + queratnsulfato + cido hialurnico. hialurnico. proteoglicanos de pequeo tamao protenas (no colgenas) exclusivas del hueso: Osteocalcina Osteocalcina (2% de la matriz orgnica) Osteopontina Osteopontina Sialoprotena Sialoprotena sea (BSP).
atriz inor!"nica
Principal elemento calcio, en forma de sales como el fosfato de calcio o hidroxiapatita. Estas sales, se observan al microscopio de luz como finos depsitos cristalinos.(sin teir) #os cristales de hidroxiapatita miden $ nm de espesor % hasta &' nm de lar!o, se depositan entre la matriz or!"nica.
Clulas del hueso Osteoblastos:responsables Osteoblastos:responsables de la formacin de tejido seo nuevo Osteocitos:osteoblastos steocitos:osteoblastos maduros y desarrollan una actividad menor Osteoclastos Osteoclastos: Osteoclastos: encargados de reabsorber o eliminar la materiasea. materiasea.
-ijacin
al
estudio )ue se va%a a realizar Tiempo de fijado, *+ hrs. como m,nimo #avar los tejidos antes de colocarlos en el descalcificador uestras voluminosas se seccionan antes de fijar (se puede usar sierra) Piezas dentarias, se seccionan los "pices % .o se realizan orificios laterales
TECNICAS DE DESCALCIFICACION
Descalcificadores
Orgnicos Agentes cidos Inorgnicos
Agentes quelantes
Ca1 !"#$%&'!#H%(
medio )cido
1 Ca+(+&"#$*++ H(#
+a extraccin cont,nua de los iones Ca- fosfato e hidroxilo e.ita que la hidroxiapatita alcance el equilibrioproduci/ndose su disolucin0
E !A Accin : quelacin de la hidro ia!atita a !H "#$ %rimera& '2 hora& e traccin de ca&i el ()* del calcio#
Se debe usar recipiente de plstico
VENTAJAS de EDTA
+,ita -ormacin de .ur.u/a& de CO2# La di-erencia con lo& de&calci-icadore& 0cido& e& que lo& ione& H1 no /ue2an un rol en la reaccin qu3mica A&e2ura la inte2ridad de la& e&tructura& intracelulare&#
Ana "orse
Es el mejor mtodo para usar en rutina, (con excepciones) Se prepara mezclando cido Frmico al 45% y Citrato de Na al 20% a partes iguales en el momento de usar El cido frmico disuelve el calcio liberndolo y el Citrato acta como quelante capturndolo
Uso del microondas: Acelera Acelera el proceso de desmineralizacin disminuyendo el tiempo en 3 o 4 veces La temperatura debe fijarse en 37 a 42 C Se recomienda el uso de microondas de laboratorio. Precaucin con los vapores txicos que se liberan al calentar el descalcificador
4tili5a corriente elctrica la que acelera el !roce&o de de&calci-icacin de la& &olucione& 0cida&6 7a que lo& ione& de calcio 7 otro& minerale& al &er remo,ido& !or la &olucin de&calci-icadora6 &on de&!la5ado& hacia lo& !olo& de la celda elctrica utili5ada#
Descalcificador electroltico
%ara com!ro.ar el trmino de la de&calci-icacin 8 9ec0nicamente !ro.ando &u dure5a con lo& dedo&6 u&ar una a2u/a 6 .i&tur3 o cualquier elemento cortante
Pruebas radiogrficas.
Prueba qumica: Se basa en que el oxalato de Ca es insoluble en H2O y soluciones acuosas alcalinas Ca2++ C2O42- + H2O CaC2O4. H2O
Se toman 5 ml de descalcificador usado (3 a 12 hrs. de uso) y se agrega hidrxido de amonio (N4OH) concentrado, mezclar. Agregar 5 ml de Oxalato de Amonio (NH4)2C2O4 x H2O acuoso a saturacin , agitar y esperar 15 a 30. Si hay opacidad la descalcificacin est incompleta , si es transparente el proceso de descalcificacin ha terminado Esta tcnica sirve tambin para EDTA
Despus de descalcificar con cidos, se recomienda pasar los cortes por Sulfato de Sodio al 5% para neutralizar !n todos los casos se recomienda la"ar profusamente en a#ua antes de comenzar la inclusi$n
IMPORTANTE: Cuando la muestra incluye tejido seo y tejido tumoral blando, es preciso separar un fragmento de tejido blando y tratarlo sin descalcificacin.
H-E
H-E
VAN GIESON
MASSON
VIMENTINA
ALFAALFA- ACTINA
DESCALCIFICACION con ANA MORSE
VIMENTINA
S-100
mellas microcalcificaciones
%ara lo& te/ido& que &e cortan &in decalci-icar &e u&a como medio de inclu&in:
Acr3lico :e&ina
9todo de inclu&in !ara corte con na,a/a (;#9# %3a Ca&telli 4# Catlica)
Na,a/a : acero &<!er duro con una cara !lana (ti!o D) alemana 9todo de inclu&in: 9e5cla de metilmetacrilato de&e&ta.ili5ado con una me5cla de NaCl 7 Na OH6 e&ta.ili5ado con Hidroquinona De&hidratacin en Alcohol = Acetona ():()6 > cam.io& (' d3a 7 ?) Im!re2nacin 9etilmetacrilato1 %la&toid N (alemania) @ cam.io& ( ' d3a) %olimeri5ar en e&tu-a a @"A (' d3a !ara otro) (molde -ra&co de !l0&tico6 el que -inalmente &e rom!e 7 queda el molde)
El hueso se estudia sin descalcificar #ara estudiar los efectos #ro$ocados #or el tratamiento con !etraciclina Se #uede calcular la edad con el estudio de los osteones En dientes% Caries de esmalte !raslucide& radicular Interaccin de materiales E!C'''''''''''
!e(idos que se #ueden estudiar sin descalcificar% Cresta ilaca )ie&as dentarias *uesos com#actos E!C
12/06/2013
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Tinciones
;ricrmico de 9a&&on H=+ ;am.in &e !uede e&tudiar &in tincin con !olari5acin
Utilidades
%aciente& con di0li&i& De!&ito de aluminio
sin decalcificar
PROBLEMAS
La zona de corte en descalcificador o en cido acetilsaliclico (aspirina) y luego se intenta el corte nuevamente CONSEJOS