Universidad Austral de Chile

Facultad de Ciencias Agrarias Escuela de Agronoma

Evaluacin fitopatolgica en cultivares de haba (Vicia faba L.) de crecimiento determinado, en Valdivia, Regin de los Ros

Memoria presentada como parte de los requisitos para optar al ttulo de Ingeniero Agrnomo

Herman Alberto Doussoulin Jara

VALDIVIA - CHILE 2010

PROFESOR PATROCINANTE:

____________________________________ Nancy Andrade S. Ing. Agr., M. Sc. Instituto de Produccin y Sanidad Vegetal

PROFESORES INFORMANTES:

____________________________________ Rodrigo Acua L. Ing. Agr., M.Sc., Dr. Hort. Instituto de Produccin y Sanidad Vegetal

___________________________________ Eduardo Valenzuela F. Lic. Cs., M. Sc., Dr. Cs. Instituto de Microbiologa

A mis padres por su cario y esfuerzo, a mi amigo German Huenchuan Vivar Q. E. P.D.

AGRADECIMIENTOS. Quiero agradecer en primer lugar y en forma especial a la profesora Nancy Andrade S. por su constante apoyo en la ejecucin de este trabajo, por sus sabios consejos y por la confianza que ha depositado en m. Tambin agradecer el apoyo y paciencia de mis profesores informantes Dr. Rodrigo Acua L. y Dr. Eduardo Valenzuela F., quienes siempre tuvieron una especial disposicin a mis requerimientos. A Nolberto Arismendi, por sus consejos y ayuda prestada en la realizacin de este trabajo. No quiero olvidar a nadie que influy en el desarrollo de este trabajo, al personal del Laboratorio de Fitopatologa del Instituto de Produccin y Sanidad Vegetal de la Facultad de Ciencias Agrarias, Mnica Almarza, Don Ramn Alarcn y Don Jos Crdenas, que con su alegra y buena disposicin hicieron que este trabajo fuese ms agradable y fcil de realizar. A mi madre quien con mucho esfuerzo a estado presente en cada etapa de mi vida, apoyndome en todo momento, muchas gracias por todo mam, te quiero mucho. A mi padre por siempre haberme dado los mejores consejos, que de una u otra forma han servido para poder ser una mejor persona, muchas gracias pap. A la Sra. Irene Hinrichs y Don Edmundo Prosser, por hacerme sentir como en casa durante estos seis aos, muchas gracias por los ricos almuerzos y buenos momentos. A mis amigos, por los momentos, alegras y apoyo dado en todo momento, a Claudio, Roberto, Ivn, Carlos (Caja), Negro, Pipo, Che Carlitos, Pato, Chein, Caro, Mono, Gustavo, Daniela, Eduardo, Ariel, muchas gracias; y como olvidar a nuestro gran amigo Chicho que por esas cosas de la vida en este momento no esta con nosotros, pero se que desde donde sea que este, puso todo de su parte para que hoy pueda estar escribiendo estas palabras. A Priscila, por su amor, cario, comprensin y compaa, que me han ayudado en este ltimo tiempo a afrontar de mejor forma las situaciones, te amo.

INDICE DE MATERIAS

Captulo RESUMEN SUMMARY 1 2 2.1 2.1.1 2.1.2 2.1.2.1 2.1.2.1.1 2.2 2.2.1 2.2.1.1 INTRODUCCIN REVISIN BIBLIOGRFICA Haba (Vicia faba L.) Utilizacin Hbitos de crecimiento Habas tipo baby Cultivares Retaca, Alarg y Verde Bonita Factores que afectan al cultivo del haba. Sanidad del cultivo Condiciones ambientales que favorecen el desarrollo de enfermedades 2.2.2 2.2.2.1 2.2.2.2 2.2.2.3 Mancha Chocolate Botrytis fabae y Botrytis cinerea Descripcin y morfologa. Condiciones ambientales predisponentes.

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Captulo 2.2.2.4 2.2.2.5 2.2.3 2.2.3.1 2.2.3.2 2.2.3.3 2.2.4 2.2.4.1 2.2.4.2 2.2.4.3 2.3 2.3.1 2.3.2 3 3.1 3.2 3.3 3.3.1 3.3.2 Ciclo del hongo Sntomas y signos. Cercosporiosis. Morfologa. Condiciones predisponentes. Sntomas. Roya del haba. Morfologa. Condiciones predisponentes. Sntomas y Signos. Manejo de enfermedades Control qumico. Tcnicas de manejo agronmico. MATERIAL Y METODO Ubicacin del ensayo Duracin del ensayo. Caractersticas del lugar del ensayo. Caractersticas qumicas del suelo en que se realiz el ensayo. Caractersticas climticas de la zona.

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Captulo 3.3.2.1 3.4 3.4.1 3.4.2 3.4.3 3.4.3.1 3.4.3.2 3.4.3.3 3.4.4 3.5 3.5.1 3.5.2 3.5.3 3.6 3.7 3.7.1 3.7.2 3.7.3 Caractersticas climticas durante la realizacin del ensayo. Materiales utilizados. Material vegetal. Medios de cultivo. Material de laboratorio. Equipos. Material de vidrio. Otros. Fertilizacin. Mtodo. Siembra y cosecha. Control de malezas. Control de plagas y enfermedades. Diseo experimental Parmetros a evaluar Presencia de patgenos Incidencia de patgenos (%) Relacin de la incidencia de enfermedades con cultivares, fecha de siembra (H y T) y densidad.

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Captulo 3.7.4 3.8 3.8.1 3.8.2 3.9 4 4.1 4.2 4.3 4.4 4.4.1 4.4.2 4.4.3 Rendimiento (kg m-2). Mtodo de evaluacin de enfermedades. Diagnostico de enfermedades. Protocolo para el diagnostico de enfermedades. Anlisis estadstico. PRESENTACION Y DISCUSIN DE RESULTADOS Sntomas presentes en el material vegetal colectado. Patgenos asociados al cultivo. Aparicin de enfermedades Incidencia de patgenos Incidencia de patgenos por fecha de siembra Efecto de la densidad de siembra sobre la incidencia de patgenos. Evaluacin de la incidencia de patgenos para los distintos cultivares. 4.5 5 6 7 Evaluacin del rendimiento. CONCLUSIONES BIBLIOGRAFIA ANEXOS

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INDICE DE CUADROS

Cuadro 1 Rendimientos por vaina, grano y rendimiento industrial de tres cultivares de crecimiento determinado. 2 3 Anlisis qumico del suelo del lugar utilizado para el ensayo. Antecedentes climticos de Valdivia desde marzo de 2009 hasta febrero de 2010 y promedios de 38 aos de los valores mensuales. 4 Incidencia de patgenos (% promedio), para las distintas fechas de siembra (7 de agosto, 1 de septiembre y 22 de septiembre). 5 Incidencia de patgenos (% promedio), por densidad de plantas (20, 30 y 40 plantas por m-2), para cada fecha de siembra. 6 Incidencia de patgenos (% promedio), para los cultivares en estudio (Alarg, Retaca y Verde Bonita). 7 Rendimientos (kg m-2), por fecha de siembra, densidad y cultivar

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INDICE DE FIGURAS

Figura 1 Superficie destinada al cultivo de haba por regin, durante la temporada 2006/2007. 2 3 4 5 6 7 Conidiforos de B. cinerea y B. fabae. Conidias de B. fabae y B. cinerea. Ciclo de Botrytis spp. Sntomas producidos por Cercospora en hoja de soja. Teleutospora de U. viciae fabae. Sntomas de la roya del haba (Izquierda, uredosoros y derecha teleutosoros. 8 Diseo de campo de las parcelas, con disposicin de cultivares, fechas de siembras y densidades. 9 10 11 12 13 14 Sntomas de hojas recolectadas y evaluadas en las colectas. Colonia y conidias de Alternaria sp. Colonia y Conidiforo de Cladosporium sp. Colonia y coinidias de Stemphylium sp. Colonia y conidiforo de B. fabae. Colonia y conidiforo de B. cinerea.

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Figura 15 16 Uredosporas y teleutosporas de U. viciae fabae Distribucin de la incidencia de B. fabae para las tres fechas de siembra. 17 Distribucin de la incidencia de B. cinerea para las tres fechas de siembra. 18 Distribucin de la incidencia de U. viciae fabae para las tres fechas de siembra 19 Relacin entre la incidencia de enfermedades y rendimiento, para las distintas fechas de siembra. 20 Relacin entre la incidencia de enfermedades y rendimiento, para las distintas densidades de siembra.

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INDICE DE ANEXOS

Anexo 1 Temperaturas medias mensuales (C) durante el perodo que se realiz el ensayo y de un ao promedio. 2 Precipitaciones durante el perodo en que se desarrollo el ensayo y un ao promedio. 3 Datos de incidencia de patgenos para la primera fecha de siembra, por cultivar y densidad (%). 4 Datos de incidencia de patgenos para la segunda fecha de siembra, por cultivar y densidad (%). 5 Datos de incidencia de patgenos para la tercera fecha de siembra, por cultivar y densidad (%). 6 Prueba H Prueba de Kruskal Wallis para la incidencia de B. fabae por fecha de siembra. 7 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. cinerea por fecha de siembra. 8 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de U. viciae fabae por fecha de siembra. 9 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. fabae por cultivar, en la primera fecha de siembra de siembra. 10 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. cinerea por cultivar, en la primera fecha de siembra.

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Anexo 11 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de U. viciae fabae por cultivar, en la primera fecha de siembra 12 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. fabae por densidad, para la primera fecha de siembra. 13 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. cinerea por densidad, para la primera fecha de siembra. 14 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de U. viciae fabae por densidad, para la primera fecha de siembra. 15 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. fabae por cultivar, en la segunda fecha de siembra de siembra. 16 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. cinerea por cultivar, en la segunda fecha de siembra. 17 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de U. viciae fabae por cultivar, en la segunda fecha de siembra. 18 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. fabae por densidad, para la segunda fecha de siembra. 19 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. cinerea por densidad, para la segunda fecha de siembra. 20 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de U. viciae fabae por densidad, para la segunda fecha de siembra. 21 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. fabae por cultivar, en la tercera fecha de siembra de siembra.

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Anexo

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Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. cinerea por cultivar, en la tercera fecha de siembra.

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Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de U. viciae fabae por cultivar, en la tercera fecha de siembra.

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Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. fabae por densidad, para la tercera fecha de siembra.

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Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. cinerea por densidad, para la tercera fecha de siembra.

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Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de U. viciae fabae por densidad, para la tercera fecha de siembra.

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Anlisis de varianza de rendimiento para fecha de siembra, densidad y cultivar.

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RESUMEN

La incorporacin de nuevas alternativas agrcolas para una zona determinada, conlleva a determinar qu factores agronmicos son favorables, y cules pueden ser limitantes para alcanzar el rendimiento potencial. Entre estos factores, determinar el grado de incidencia de sus principales enfermedades es fundamental. El objetivo de la presente investigacin, fue evaluar la incidencia de enfermedades fungosas afectando cultivares de haba tipo baby, introducidos en la zona de Valdivia. Se evalu la incidencia de enfermedades, el momento de aparicin de patgenos, y el rendimiento en funcin de la fecha de siembra (7 de agosto, 1 y 22 de septiembre de 2010), densidad (20, 30 y 40 plantas m-2) y cultivar (Retaca, Alarg y Verde Bonita). Este estudio se realiz en la Estacin Experimental Santa Rosa y el Laboratorio de Fitopatologa de la Universidad Austral de Chile, entre agosto de 2009 y enero de 2010. Entre las enfermedades de importancia que afectaron al cultivo, la mancha chocolate (Botrytis fabae y B. cinerea) fue la primera en aparecer, mientras hacia el final del ciclo del cultivo se present la roya del haba (Uromyces viciae fabae). La fecha de siembra temprana present una menor incidencia de B. fabae (14,1%), y U. viciae fabae (0,4%) comparado a fechas tardas de siembra (B. fabae 84,3%, U. viciae fabae 75,2%), a excepcin de B. cinerea que present una relacin opuesta de incidencia durante el desarrollo del cultivo (12.2% y 3,3%, respectivamente). La densidad de siembra y cultivar no influyeron en la incidencia de las enfermedades evaluadas. Siembras tempranas (7 de agosto y 1 de septiembre de 2010) y altas densidades de siembra (30 y 40 plantas m-2) alcanzaron los mayores rendimientos. Los cultivares presentaron rendimientos similares. Esto resultados sugieren que realizar siembras tempranas (agosto a principios de septiembre) en densidades de 30 y 40 pl m-2 presentarn una menor incidencia de los patgenos evaluados y maximizarn los rendimientos de haba baby en la zona de Valdivia.

SUMMARY

Incorporation of new crop alternatives in an area requires to determine which agronomic factors favour the crop, and which of them may be limiting factors to achieve the potential yield. Among these factors, to determine the degree of incidence of the main plant diseases is essential. The objective of this study was to assess the incidence of fungal diseases in baby faba-bean cultivars, which has been introduced in Valdivia area. Diseases incidence, time of pathogens appearances and yield were evaluated according to seeding date (August 7, September 1 and 22 of 2009), density (20, 30 and 40 plants m-2) and cultivar (Retaca, Alarga and Verde Bonita). This study was conducted at the Santa Rosa Experimental Station and at the Laboratory of Plant Pathology of the Universidad Austral de Chile, between August 2009 and January 2010. The chocolate spot disease (Botrytis fabae and B. cinerea) was the first fungal disease to appear and at the end of the cycle, bean rust (Uromyces viciae fabae) was observed. Early seeding date had a reduced incidence by B. fabae (14.1%) and U. viciae fabae (0.4%) compared to a late seeding date (B. fabae 84.3%; U. viciae fabae 75.2%), except for B. cinerea which had an inverse relationship of incidence during the crop period (12.2% and 3.3%, respectively). Plant density and cultivar did not affect the disease incidence of the three pathogens. Early seeding dates (August 7 and September 1 of 2010) and high densities (30 and 40 plants m-2) had the highest yields. Cultivars did not differ in yield. These results suggest that early sowing dates at high densities should reduce the pathogen incidence and maximize yields of baby fababean in Valdivia area.

1 INTRODUCCION

El haba (Vicia faba L.) es una planta leguminosa anual, cuyo uso principal es el consumo de granos y vainas en alimentacin humana y animal, destacando por su alto contenido de protena. La produccin de este cultivo en Chile se concentra principalmente en la zona centro del pas, siendo muy poco explotada en la zona sur, a pesar de que existiran condiciones agroecolgicas apropiadas para producirlas. Dado que existen muy pocos estudios que muestren el comportamiento de esta leguminosa en condiciones ms australes, surge la necesidad de evaluar la adaptacin de cultivares a las condiciones de la citada zona. Actualmente existen proyectos destinados a desarrollar el sector hortcola en la zona sur mediante la incorporacin de nuevas alternativas productivas. En este contexto, se plantea la introduccin de habas tipo baby, de crecimiento determinado y aptitud agroindustrial. La ventaja de estos cultivares es que presentan menor variabilidad del producto cosechado y adems son aptas para cosecha mecnica. Entre los factores limitantes para alcanzar el potencial de rendimiento de los cultivos, estn las enfermedades. Por ello, al introducir un nuevo cultivar, es fundamental analizar el grado de incidencia de sus principales antagonistas, siendo las ms importantes para el cultivo aquellas enfermedades de tipo fungosas. Para que se desarrolle una enfermedad se necesitan condiciones favorables de humedad, temperatura, inculo suficiente y una planta genticamente susceptible o predispuesta a ser afectada. Si no se dan estas condiciones mnimas, la probabilidad de que se presente la patologa ser muy baja. Sin embargo, no solo las condiciones antes mencionadas podran influir en la presencia de un patgeno, sino que, factores de manejo del mismo cultivo pueden predisponer en la incidencia de una enfermedad. Por lo tanto, en este estudio se postula que cultivares de haba de crecimiento determinado, introducidos en la Regin de los Ros, son afectados por distintas enfermedades.

El objetivo general de este estudio es evaluar la incidencia de enfermedades en cultivares de haba tipo baby, en Valdivia. Los objetivos especficos de este estudio son los siguientes: Determinar cules son los patgenos que pueden afectar al cultivo del haba en la zona. Establecer el momento en el cual comienzan a aparecer enfermedades en el cultivo. Evaluar si la fecha de siembra, densidad y cultivar, tienen algn efecto en la incidencia de enfermedades. Determinar cul o cules son las condiciones ambientales que favorecen la infeccin de patgenos en el cultivo. Evaluar la influencia en el rendimiento, de la fecha de siembra, densidad y cultivar y su relacin con la incidencia de enfermedades.

2 REVISION BIBLIOGRAFICA

2.1

Haba (Vicia faba L.)

El haba (Vicia faba L.) corresponde a una especie leguminosa anual, cultivada entre el otoo y la primavera; esta especie es un cultivo de estacin fra, muy rstico y con resistencia a heladas (WHITE, 1998 y FAIGUENBAUM, 2003). HEBBLETHWAITE (1983) indica que existen cuatro variedades botnicas de haba: minor, equina, major y una forma primitiva de haba denominada paucijuga. Sin embargo, existen otros autores que ubican a las tres primeras y la ltima en dos sub especies distintas: eu faba y paucijuga respectivamente. Vicia faba var. major, corresponde a las habas que poseen semillas de tamao grande. Esta variedad corresponde a las ms utilizadas para uso hortcola, sus semillas son grandes, anchas y planas, el peso promedio de cada semilla vara entre 1,2 y 1,8 g, sus vainas indehiscentes, miden entre 12 y 35 cm de largo y sus semillas tienen un largo de 3 a 5 cm. Las de semilla pequea (Vicia faba var. minor), son usadas principalmente en alimentacin animal, sus semillas tienen un peso promedio entre 0,3 y 0,7 g y miden entre 0,7 y 1,3 cm de largo. Vicia faba var. equina corresponde a las habas que poseen semillas de tamao mediano. El peso promedio de sus semillas vara entre 0,7 y 1,1 g y su largo va desde los 1,3 a 1,7 cm FAIGUENBAUM (2003). 2.1.1 Utilizacin. En el mundo, la principal forma de utilizacin del haba es como

leguminosa de grano, pero en varios pases, incluido Chile, su uso ms importante es como hortaliza. Los granos se consumen generalmente cocidos en ensalada y acompaando diferentes platos (Tapia, 1993 citado por APABLAZA, 2005). Como leguminosa de grano

es ocupada en alimentacin animal debido al alto contenido protico que esta presenta (NADAL, et al. 2004 y CREPON, et al., 2010). En Chile esta especie es cultivada para su utilizacin en verde, para su consumo directo, o para la elaboracin de producto congelado. La produccin de grano seco en Chile no tiene gran importancia, pero en Europa es muy demandada en alimentacin animal. El haba seca para consumo humano se ocupa como materia prima en la fabricacin de pan; adems es utilizada

para la obtencin de forraje, abono verde o cultivo de cobertura de suelo en otooinvierno (FAIGUENBAUM, 2003 y CREPON, et al. 2010). Segn CHILE, OFICINA DE DESARROLLO Y POLITICAS AGRARIAS (ODEPA) (2008), en Chile el promedio de superficie considerando el perodo 1995-2004 fue de 2468 hectreas, ocupndose un 85% de esta superficie para consumo fresco y el 15% restante para la obtencin de haba seca. Del 85% destinado a la produccin de haba para consumo fresco, un 30% est destinado a la industria de congelados FAIGUENBAUM (2003). Al ao 2007 la superficie nacional dedicada al cultivo de haba era de 1974 hectreas, siendo la Regin Metropolitana la principal productora con aproximadamente 830 hectreas (Figura 1). En cambio, en la Regin de Los Ros, la superficie destinada a la produccin de haba es alrededor de 30 hectreas, ocupando un dcimo lugar a nivel nacional (CHILE, INSTITUTO NACIONAL DE ESTADISTICAS (INE), 2007).

FIGURA 1 Superficie destinada al cultivo de haba por regin, durante la temporada 2006/2007. FUENTE: INE (2007). 2.1.2 Hbitos de crecimiento. CONFALONE (2008), indica que existen habas de crecimiento determinado e indeterminado. Las plantas de crecimiento indeterminado se caracterizan por presentar una floracin diferencial desde los nudos reproductivos

bsales a los apicales, caracterizndose por una maduracin de las vainas bastante desuniforme, por lo cual en los cultivos destinados a mercado fresco se deben realizar dos cosechas, a medida que vaya ocurriendo la madurez de las vainas (FAIGUENBAUM, 2003). En los cultivares destinados a la agroindustria se realiza una sola cosecha, lo que crea diversos problemas, por una parte se presentan dificultades para determinar el momento ptimo de cosecha y por otro, se desfavorece la calidad del producto, ya que se obtienen granos con distintos niveles de madurez (Nadal et al., 2005, citado por BRIONES, 2009). Las habas de crecimiento determinado se caracterizan por tener un menor tamao que las anteriores. Estas emiten un pice terminal con inflorescencia lo que provoca que la planta cese su crecimiento, provocando que la floracin ocurra de una sola vez, con lo cual tendran la ventaja de poder mecanizar la cosecha y obtener un producto de mejor calidad al tener una madurez ms homognea (NADAL et al., 2004). 2.1.2.1 Habas tipo baby. Las habas tipo baby, corresponden a especies de crecimiento determinado, cuyas semillas son de tamao pequeo, stas poseen una alta calidad y se pueden destinar para su consumo en fresco como a industria alimentara, tanto procesadora como congeladora. Los objetivos que se persiguen con la obtencin de este tipo de habas son: obtener materiales de alta calidad para consumo humano y que estn adaptados perfectamente a la recoleccin mecnica, a diferencia de los cultivares tradicionales de haba, stas al poseer un hbito de crecimiento determinado, producen sus inflorescencias en un mismo perodo de tiempo, lo que permite obtener una produccin ms homognea, tanto en tiempo como espacio (NADAL et al., 2004). 2.1.2.1.1 Cultivares Retaca, Alarg y Verde Bonita. Estos cultivares corresponden a habas de crecimiento determinado y fueron creados para la obtencin de habas tipo baby, las cuales a su vez son cosechadas en estados inmaduros, para ser destinados a la industria de congelados. La principal ventaja que presentan estos cultivares es su facilidad de cosecha, ya que, las vainas se encuentran concentradas en la parte superior del tallo y maduran al mismo tiempo. Los cultivares Retaca, Alarg y Verde Bonita, fueron desarrollados en el Instituto de Investigacin y Formacin Agraria y Pesquera (IFAPA) desde su centro Alameda del Obispo, en Crdoba, Espaa. La obtencin de estos cultivares fue a partir de un mutante de crecimiento determinado ti,

originado por mutacin con rayos X por Sjdin en Suecia hacia el ao 1965 y posteriormente introducido en los ochenta, a las lneas experimentales del programa de mejora del ICARDA (NADAL et al., 2004 y AVILA et al., 2007). RUIZ (2008), en una caracterizacin de la productividad de estos cultivares en la zona centro de Chile, observ rendimientos de aproximadamente 1300 kg ha-1 de grano fresco, para los tres cultivares (Retaca, Alarg y Verde Bonita) (Cuadro 1). CUADRO 1 Rendimientos por vaina, grano y rendimiento industrial de tres cultivares de crecimiento determinado. Parmetros Rendimiento vaina (kgha-1) Rendimiento grano (kgha-1) Rendimiento industrial (%) FUENTE: Adaptado de RUIZ (2008) . 2.2 Factores que afectan al cultivo del haba. El cultivo del haba puede estar afectado por factores ambientales, malezas, plagas y enfermedades, entre stas destacan: nemtodos fitoparsitos, bacterias, virus y hongos, siendo estos ltimos uno de los principales factores que pueden ver limitados los rendimientos potenciales del cultivo para una zona determinada (STODDARD et al., 2010). 2.2.1 Sanidad del cultivo. El cultivo del haba puede ser afectado por un conjunto de enfermedades, las cuales pueden involucrar cualquier parte de la planta, siendo las principales aquellas que se encuentran en la parte area, entre las principales se presentan, la mancha chocolate causada por hongos del gnero Botrytis (Botrytis fabae Sard. y Botrytis cinerea Pers. ex Fr.), Cercosporiosis causada por el hongo Cercospora zonata Winter, la roya del haba cuyo agente causal es Uromyces viciae fabae Shrt. y la antracnosis causada por Ascochyta fabae Speg. (HEBBLETHWAITE, 1983; AMIRA et al., 2003; FAIGUENBAUM, 2003 y STODDARD et al., 2010.). El ataque de estas Retaca 6.182 1.266 20,4 Alarg 7.137 1.252 17,6 Verde Bonita 7.245 1.350 18,5

enfermedades puede ser tan severo que puede llegar a causar una reduccin en el rendimiento de hasta un 100% si es que no se realiza un control adecuado. 2.2.1.1 Condiciones ambientales que favorecen el desarrollo de enfermedades. La presencia de una planta genticamente susceptible de ser afectada por un patgeno no asegura que este produzca una enfermedad en un cultivo determinado, esto dado por el efecto controlador que ejerce el medio ambiente en el establecimiento y desarrollo del patgeno en el tejido vegetal. Los factores ambientales ms importantes que influyen sobre el inicio y desarrollo de una enfermedad son la temperatura y humedad (AGRIOS, 2005), segn lo sealado por HARRISON, 1981; HEBBLETHWAITE, 1983; HARRISON, 1988 y AGRIOS, 2005, los patgenos se desarrollan dentro de ciertos rangos mnimos y mximos de temperatura y humedad, presentando un punto ptimo, en el cual el desarrollo de una etapa determinada se acelera. Un concepto que relaciona la humedad y temperatura en un slo factor, es el de dficit de presin de vapor (DPV), el cual es expresado en kPa y corresponde a la diferencia entre la cantidad de agua que contiene el ambiente en un momento determinado y la cantidad que este puede contener cuando esta saturado. Este factor entrega en un solo valor las condiciones ambientales bajo las cuales se desarrolla un patgeno

(PRENGER y LING, SF.). GROVE Y BOAL (1991) y MILLER et al. (2003) determinaron que el dficit de presin de vapor es un factor que explica de buena forma las condiciones ambientales necesarias para el desarrollo de un patgeno determinado. PRENGER y LING (SF), sealan que valores de dficit de presin de vapor por debajo de 0.2 kPa son crticos para el inicio y desarrollo de un patgeno determinado. 2.2.2 Mancha chocolate. Esta enfermedad es provocada por B. fabae y B. cinerea y puede aparecer en todos los lugares en donde se cultiven habas, siendo una de las patologas ms destructivas (HEBBLETHWAITE, 1983; PARRY, 1990; SAHILE et al., 2008 y STODDARD et al., 2010). Estos patgenos pueden provocar importantes prdidas y se han reportado disminuciones del rendimiento de ms de un 90% en el sur de Australia, 60% en Etiopia y Reino Unido y sobre el 50% en China (Bretag, 1992; Gorfu, 1996; Gladders, 1991; Liang, 1986, citados por DAVIDSON et al. 2007).

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2.2.2.1 Botrytis fabae Sard. Y Botrytis cinerea Pers ex Fr. Segn Ulloa y Hanlin (2000), citados por MILANCA (2001), AGRIOS (2005) y ELAD et. al (2007), la clasificacin taxonmica de B. cinerea y B. fabae es la siguiente: Dominio Eucariota, Reino Fungi,, Phylum Ascomycota, Orden Helotiales, Gnero Botrytis y Especies Botrytis fabae y Botrytis cinerea. 2.2.2.2 Descripcin y morfologa. Estos hongos se caracterizan por presentar conidias unicelulares y hialinas, las cuales, son producidas sobre conidiforos coloreados y diseminadas por el viento. El hongo presenta como estructura de resistencia esclerocios o micelio, los cuales se encuentran sobre restos de tejidos enfermos que persisten en el suelo (AGRIOS, 2005). Las colonias de B. fabae y B. cinerea son similares, sin embargo, estos pueden ser diferenciados en base al tamao de sus conidias o caractersticas morfolgicas del conidiforo. Las conidias de B. fabae presentan un tamao de 14-29 X 11-20 m, siendo estas ms largas que las de B. cinerea, que poseen una dimensin de16-25 X 13-16 m (Figura 2) (DAVIDSON et al. 2007; MORANTE, 2007 y MIRAZEI et al. 2008). En relacin a las caractersticas morfolgicas del conidiforo MORANTE (2007) indica que B. fabae presenta conidiforo hialino, con septaciones cercanas al pice; la misma estructura para B. cinerea posee color caf y no presenta las septaciones en la parte distal (Figura 3).

FIGURA 2 Conidifros de B. cinerea y B. fabae. FUENTE: Adaptado de MIRZAEI et al. (2008).

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FIGURA 3 Conidias de B. fabae y B. cinerea. FUENTE: Adaptado de MIRZAEI et al. (2008) 2.2.2.3 Condiciones ambientales predisponentes. La humedad y temperatura son factores necesarios para el desarrollo de la botritis. La germinacin de las conidias de B. fabae y B. cinerea se ve favorecida en forma lineal sobre 70% de humedad relativa, presentando ptimos alrededor del 80% para B. cinerea y entre 85 y 90% para B. fabae. Las temperaturas necesarias para la germinacin de la conidia varia entre 4 y 30 C, presentando ptimos alrededor de 15 C para B. cinerea y entre 15 y 20 C para B. fabae. (HARRISON, 1981; HEBBLETHWAITE, 1983; CREIGHTON et al., 1986; HARRISON, 1988 y Rewal and Grewal, 1989, citado por DAVIDSON et al., 2007). Para la germinacin de las conidias, es necesaria la presencia de agua libre en la superficie del tejido del hospedero (HEBBLETHWAITE, 1983 y AGRIOS, 2005). Botrytis se expande rpidamente tanto en la planta como en el cultivo a temperaturas entre 15 y 20 C, presentando un crecimiento de 3 a 4 mm diarios. Temperaturas superiores a 30 C e inferiores a 4 C, diminuyen el desarrollo del hongo, afectando la expansin de lesiones. Las lesiones aumentan de forma proporcional a una humedad relativa superior al 70% (Harrison 1980, citado DAVIDSON et al., 2007; HARRISON, 1981; HEBBLETHWAITE, 1983; HARRISON, 1988 y HAWTHORNE, et al., 2004). Otras

condiciones predisponentes para el ataque de botrytis, serian plantas debilitadas por factores tales como: suelos cidos, deficiencia de nutrientes, anegamientos (HEBBLETHWAITE, 1983).

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Botrytis es capaz de penetrar e invadir el tejido del hospedero, gracias a la accin de enzimas encargadas de degradar la pared celular. Las principales enzimas involucradas en la infeccin de este patgeno corresponden a pectinasas, celulasas y hemicelulasas, entre stas destacan: pectinmetilesterasas, endopoligalacturonasa, exopoligalacturonasas, lacasas, xilanosa y arabinosa, entre otras (KARS y VAN KAN, 2007). 2.2.2.4 Ciclo del hongo. El ciclo estacional de Botrytis comienza con la germinacin de esclerocios que han permanecido en restos de cultivos y plantas hospederas durante el perodo invernal. Los esclerocios producen micelio, el cual puede esporular originando conidias que son dispersadas por el viento o transportadas por vectores. La infeccin del hospedero ocurre a partir de la germinacin de las conidias que se han depositado sobre la superficie del mismo, desarrollndose inicialmente un micelio superficial, pero que luego puede invadir tejidos susceptibles. Bajo condiciones favorables el hongo produce abundante micelio y gran nmero de conidias, las cuales pueden causar infecciones posteriores y propagar el patgeno hacia otras plantas. Bajo condiciones limitantes o desfavorables al crecimiento, el patgeno produce esclerocios, que son las estructuras de resistencia para sobrevivir durante perodos adversos. Botrytis tambin puede invernar en forma de micelio en restos de plantas o rastrojos de cultivos. Al producirse condiciones climticas favorables, se reanuda el crecimiento del micelio o germinan los esclerocios, reinicindose el ciclo (Figura 4) (COLEY et al., 1980; AGRIOS, 2005 y HOLZ, et al., 2007).

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FIGURA 4 Ciclo de Botrytis spp. FUENTE: Adaptado de AGRIOS (2005). 2.2.2.5 Sntomas y signos. Segn PARRY (1990), los sntomas que produce este hongo se dividen en dos fases: una no agresiva y otra agresiva. La primera fase puede ser causada por otras especies del genero Botrytis, esta fase consiste en pequeas lesiones de color caf rojizo que usualmente se encuentran en las hojas, aunque los tallos y vainas pueden ser afectados. Las lesiones se distribuyen homogneamente sobre la superficie dando un aspecto de salpicado. FAIGUENBAUM (2003), agrega que, esta enfermedad puede aparecer en plantas en estados tempranos o avanzados de desarrollo, pero siempre en las hojas ms viejas, que son las que presentan una mayor susceptibilidad. La fase agresiva de esta enfermedad se caracteriza por que las lesiones son mucho ms grandes y oscuras en color, las lesiones se unen en grandes reas provocando la muerte del tejido y las hojas pueden ser totalmente destruidas (SMITH, 1992). 2.2.3 Cercosporiosis. Esta enfermedad afecta principalmente a las hojas, pero tambin puede afectar a tallos y vainas de las plantas. Las lesiones producidas en las hojas pueden llegar a cubrir gran parte del follaje, produciendo una defoliacin

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prematura de las plantas. Esta enfermedad no tiene un mayor impacto sobre la calidad de la semilla, pero si en el rendimiento y se ha estimado que en ataques graves, ste puede ser afectado de un 10 a 15% (AGRIOS, 2005 y SILLERO et al., 2010). La cercosporiosis es una de las enfermedades que afecta al cultivo del haba y es causada por el hongo Cercospora zonata Winter (AGRIOS, 2005 y STODDARD et al., 2010). 2.2.3.1 Morfologa. Dentro de las estructuras que forma Cercosopora destacan sus conidias hialinas, largas, cilndricas a filiformes, unicelulares, septadas y curvas, estas se forman en cortos conidiforos oscuros, los cuales crecen en grupos sobre la superficie del tejido afectado, generando grandes cantidades de conidias, que son diseminadas a travs del viento (BARNETT y HUNTER, 1987; AGRIOS, 2005 y MORANTE, 2007). 2.2.3.2 Condiciones predisponentes. El desarrollo de cercosporiosis, es favorecido en condiciones de ambiente hmedo y fri, creciendo en forma ptima desde 5 a 15 C y la humedad relativa necesaria para favorecer la infeccin esta sobre el 80% (MORANTE, 2007 y SILLERO et al., 2010). 2.2.3.3 Sntomas. Los sntomas producidos por esta enfermedad, corresponden a lesiones circulares a irregulares en la superficie de las hojas las cuales presentan un color caf rojizo, estas tienen un dimetro de 3 a 5 mm. Al avanzar la enfermedad los centros de las manchas se tornan de un color gris ceniza dejando una lesin irregular, las manchas posteriormente pueden llegar a coalecer produciendo grandes lesiones necrticas (Figura 5) (AGRIOS, 2005 y MORANTE, 2007). Las lesiones de carcter necrtico que produce Cercospora se deben a toxinas, especficamente cercosporina, la cual acta como un agente fotosensibilizante en las clulas vegetales, es decir, mata slo las clulas en presencia de luz (AGRIOS, 2005 y DAUB y EHRENSHAFT, 2000).

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FIGURA 5 Sntomas producidos por Cercospora en hoja de soja. Fuente: AGRIOS (2005). 2.2.4 Roya del haba. Esta enfermedad es producida por el hongo Uromyces viciae fabae (Pers.) J. Shrt., el cual taxonmicamente, pertenece al Phylum Basidiomycota, Orden Uredinales y Gnero Uromyces (AGRIOS, 2005 y SILLERO et al., 2010). Los ataques se producen a fines de la temporada de crecimiento del cultivo, por lo que los componentes del rendimiento no son mayormente afectados por la infeccin, las prdidas, por lo general, alcanzan un 15 a 20% (STODDARD et al., 2010), pero en combinacin con la mancha chocolate pueden producir prdidas desde un 30 a 50% (RICHARDSON, 2008). 2.2.4.1 Morfologa. Este patgeno se caracteriza por formar uredosporas de color amarillo con un tamao de 22-28 19-22 , adems forma teleutosporas de color marrn, las cuales tienen la particularidad de ser resistentes a condiciones adversas y es la estructura primaria de supervivencia del hongo entre las temporadas de cultivo, estas tienen un tamao de 25-40 18-26 , son pediceladas y unicelulares (Figura 6) (SILLERO et al., 2010).

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FIGURA 6 Teleutospora de U. viciae fabae. La barra representa 10 m. FUENTE: EMERAN et al. (2005). 2.2.4.2 Condiciones predisponentes. En las zonas de produccin donde los veranos son calurosos y secos, prevalecern sobre restos de cosecha infectados, convirtindose de esta forma las teleutosporas en la fuente primaria de inculo, estas germinan fcilmente con temperaturas entre 17 a 22 C y pueden permanecer viables hasta 2 aos en un estado de reposo (MORANTE, 2007). 2.2.4.3 Sntomas y signos. Los sntomas y signos caractersticos de esta enfermedad se presentan como pstulas de color caf marrn (conformadas por las masas de las uredosporas del hongo). Las pstulas se encuentran en el centro de un halo clortico presentes en el haz y envs de las hojas (Figura 7). En otros casos dentro de la clorosis se presentan varias pstulas dispuestas en crculos o irregularmente. (MORANTE, 2007). RICHARDSON (2008), agrega que a medida que la enfermedad avanza y en infecciones severas, las hojas se marchitan y caen, produciendo una defoliacin de la planta. En los tallos se producen pstulas similares a las de las hojas pero a menudo de mayor tamao. La penetracin en el tejido de U. viciae fabae, se produce a travs de una hifa especializada, la cual se genera del apresorio que se produce al germinar la uredospora en la cutcula del hospedero, a partir de esto, el patgeno produce una serie de enzimas que favorecen la penetracin y avance en el tejido, entre estas

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enzimas destacan: proteasas, celulasas, pectinmetilesterasas, poligalacturonatoliasas, entre otras (MENDGEN et al., 1996 y EMERAN et al., 2005).

FIGURA 7 Sntomas de la roya del haba (Izquierda, uredosoros y derecha teleutosoros. FUENTE: RICHARDSON (2008). 2.3 Manejo de enfermedades. Existen diferentes formas de manejar las enfermedades que afectan al cultivo del haba, destacando los mtodos de control qumico y biolgico, adems de las tcnicas de manejo agronmico (STODDARD et al., 2010), estos mtodos variaran notablemente de una enfermedad a otra, dependiendo del tipo de patgeno, hospedero y de la interaccin que se establece entre ellos (AGRIOS, 2005). 2.3.1 Control qumico. La utilizacin de fungicidas es una de las tcnicas ms utilizadas para el control de enfermedades que afectan a los cultivo, existiendo de esta forma una gran gama de productos qumicos, para el control de enfermedades en el cultivo del haba (STODDARD et al., 2010). Para el control de Botrytis spp. se pueden utilizar fungicidas del grupo de los benzimidazoles (STODDARD et al., 2010), pero debido a su uso repetido y continuo, se han desarrollado formas de resistencia en varias regiones del mundo, lo que llev a utilizar otro tipo de fungicidas que no presenten estos problemas de resistencia como lo son las dicarboximidas (ESTERIO Y AUGER, 1997 y STODDARD et al., 2010). Para el control de la cercosporiosis se puede utilizar clorotalonil y carbendazima y por ltimo, para el control de la roya (U. viciae fabae) se recomienda el uso de mancozeb, clorotalonil o cpricos (STODDARD et al., 2010).

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Al momento de tomar la decisin de utilizar productos qumicos para el control de enfermedades es importante considerar que la efectividad del control qumico, depende de una correcta eleccin de los fungicidas a emplear, por lo que se recomienda un control integrado. Tambin es importante poder realizar un monitoreo de los patgenos que podran afectar al cultivo, en funcin del riesgo de infeccin, de la presin de inculo del patgeno y las condiciones ambientales predisponentes para la enfermedad, para as determinar la poca y cantidad en que se utilizarn los qumicos (BUZETA, 1997, LATORRE et al., 2001 y STODDARD et al., 2010). 2.3.2 Tcnicas de manejo agronmico. El uso de plantas resistentes es uno de los mtodos ms eficientes de control de las enfermedades, teniendo en cuenta de que no siempre las tcnicas de manejo son eficientes y el valor de los fungicidas es relativamente alto. Actualmente se dispone de una gran cantidad de cultivares resistentes a enfermedades como la mancha chocolate y cercosporiosis (AGRIOS, 2005 y STODDARD et al., 2010). La rotacin de cultivos es otro mtodo utilizado en el control de enfermedades y en el se debe tener en cuenta los hospederos que tiene las distintas especies de patgenos. Un intervalo mnimo de rotacin es de cuatro aos para la mancha chocolate, roya del haba y cecosporiosis (STODDARD et al., 2010). Este mtodo de rotacin puede reducir totalmente la poblacin de un patgeno, siempre y cuando, estos sobrevivan nicamente sobre plantas vivas, o durante el tiempo que duren los residuos del hospedero, de lo contrario, esta prctica solo ayuda a reducir las poblaciones, lo que permite tener buenas producciones una vez pasado el tiempo de la rotacin (AGRIOS, 2005). Otro mtodo de control es el uso de semillas certificada y la desinfeccin de estas, ya que existen evidencias de que patgenos como B. fabae, B. cinerea, C. zonata y U. viciae fabae son trasmitidos en la semilla (STODDARD et al., 2010). La reduccin de la humedad relativa en el interior del cultivo a travs de una buena ventilacin, es una prctica que permite mantener baja la incidencia de enfermedades. Esto se logra con la utilizacin de bajas densidades de siembra, lo que permite que el cultivo tenga una buena aireacin (AGRIOS, 2005 y STODDARD et al., 2010). Por ltimo todas las tcnicas que tienden a mejorar el vigor de las plantas, incrementan la tolerancia de stas a enfermedades; de esta forma mantener niveles de fertilizacin adecuados, evitar anegamientos, riegos y buen espaciamiento, ayudan a reducir la

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incidencia de enfermedades en el cultivo (AGRIOS, 2005). HARRISON (1988), seala que se debern elegir las fechas de siembra pensando en las primeras heladas, ya que stas aumentan la susceptibilidad a enfermedades como la mancha chocolate.

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3 MATERIAL Y METODO

El presente estudio corresponde a parte del proyecto DID S-2009-68 que lleva por nombre, Evaluacin agronmica y fecha de siembra de nuevos germoplasmas de haba (Vicia faba L.) tipo determinados (Baby) con potencial agroindustrial para la regin de Los Ros. 3.1 Ubicacin del ensayo El ensayo de campo, se realiz en la Estacin Experimental Santa Rosa, perteneciente a la Universidad Austral de Chile, la cual se ubica aproximadamente a una altitud de 9 metros sobre el nivel del mar (m.s.n.m.), y entre los paralelos 39 45 30 a 39 47 30 Latitud Sur y los meridianos 73 14 55 a 73 13 5 Longitud Oeste (NISSEN, 1974). De acuerdo a la divisin poltico administrativa de Chile, la Estacin Experimental Santa Rosa se encuentra ubicada en la provincia y comuna de Valdivia, dcimo cuarta Regin de Los Ros. Las muestras recolectadas fueron analizadas y determinadas en el Laboratorio de Fitopatologa de la misma universidad. 3.2 Duracin del ensayo El ensayo fue establecido el 7 de agosto de 2009 y finaliz el 25 de febrero de 2010, con la cosecha de la ltima fecha de siembra. 3.3 Caractersticas del lugar del ensayo. El suelo en donde se realiz el ensayo corresponde a la serie Valdivia, los cuales corresponden a suelos profundos; de texturas moderadamente finas en superficie y finas en profundidad, presentan buen arraigamiento hasta los 70 cm y son suelos fuertemente cidos en superficie y ligeramente cidos en profundidad (CHILE, INSTITUTO NACIONAL DE INVESTIGACIN DE RECURSOS NATURALES (IREN), CORPORACION DE FOMENTO A LA PRODUCCION (CORFO) y UNIVERSIDAD AUSTRAL DE CHILE (UACH), 1978). 3.3.1 Caractersticas qumicas del suelo en que se realiz el ensayo. A travs de un anlisis qumico realizado en los Laboratorios del Instituto de Ingeniera Agraria y

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Suelos, dependiente de la Universidad Austral de Chile, se caracteriz el estado nutricional y la condicin del suelo, como se muestra en el Cuadro 2. CUADRO 2 Anlisis qumico del suelo del lugar utilizado para el ensayo. Parmetro pH en agua pH en CaCl2 Materia orgnica N-Mineral Fsforo Olsen Potasio intercambiable Sodio intercambiable Calcio intercambiable Magnesio intercambiable Suma de bases intercambiable Aluminio intercambiable CICE Saturacin de Aluminio Conductividad elctrica Extraccin con KCl 1M Olsen (bicarbonato de Na) Acetato de amonio pH 7,0 Acetato de amonio pH 7,0 Acetato de amonio pH 7,0 Acetato de amonio pH 7,0 Acetato de amonio pH 7,0 Extraccin con KCl 2M Mtodo (1:2,5) (1:2,5) % mg/kg mg/kg cmol+/Kg cmol+/Kg cmol+/Kg cmol+/Kg cmol+/Kg cmol+/Kg cmol+/Kg % S/cm Unidad Valor 5,5 5 16 42 18,7 65 0,23 2,77 0,39 3,56 0,18 3,74 4,8 236,2

FUENTE: INSTITUTO DE INGENIERA AGRARIA Y SUELOS, UNIVERSIDAD AUSTRAL DE CHILE (2009). 3.3.2 Caractersticas climticas de la zona. El clima de la zona corresponde al tipo templado hmedo, con precipitacin abundante la mayor parte del ao, la temperatura media anual es de 12,1 C, con una media mxima mensual de 16,9 C en el mes de enero y una media mnima mensual de 7,6 C en el mes de julio. Las precipitaciones van de alrededor de los 2.200 a 2.700 mm de agua cada anualmente, con un promedio de 2.351 mm concentrndose del 40 a 50% en los meses de invierno. (HUBER, 1970). 3.3.2.1 Caractersticas climticas durante la realizacin del ensayo. Durante el perodo en que se realiz el ensayo, se registr la informacin climtica mensual de precipitacin, humedad relativa, temperatura mnima, media y mxima (Cuadro 3) en la Estacin Meteorolgica de la Estacin Experimental Santa Rosa de la Universidad

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Austral de Chile. Esta informacin es comparada en el Cuadro 3 con un promedio de 38 aos de registros histricos de temperatura y precipitacin, los cuales fueron registrados en la Estacin Meteorolgica del Instituto de Geociencias de la Universidad Austral de Chile. CUADRO 3 Antecedentes climticos de Valdivia, desde marzo de 2009 hasta febrero de 2010 y promedios de 38 aos de los valores mensuales.

Temperatura (C)

Precipitacin (mm)

Humedad relativa (%)

Media

Media

Media Media

Media Media Histrica Ensayo Histrica Ensayo Histrica

Mes-ao Mxima Mnima

Ensayo Ensayo Ensayo

mar-09 abr-09 may-09 jun-09 jul-09 ago-09 sep-09 oct-09 nov-09 dic-09 ene-10 feb-10

22,07 18,50 13,43 10,20 10,48 12,23 14,20 14,34 14,47 18,83 20,68 20,28

8,42 8,70 5,79 3,67 1,67 6,14 2,45 4,95 5,91 8,14 9,44 9,17

15,07 13,41 9,57 7,14 5,71 9,18 8,23 9,78 10,23 13,44 15,15 14,59

14,7 12 10,3 8 7,7 8,3 9,5 11,5 13,7 15,9 16,9 16,6

26,6 112,4 283,9 419,7 170,8 508,8 113,5 217,2 158,7 126,4 42,7 157,0

84,4 157,9 341,6 391,6 376,4 299 188,1 149,6 108,3 89 61,3 59,9

79 84 90 88 89 88 80 81 80 78 74 76

74 83 88 89 88 86 78 75 72 68 67 69

3.4 Materiales utilizados. A continuacin se detallaran los materiales utilizados en este estudio. 3.4.1 Material vegetal. El material vegetal utilizado en el estudio correspondi a tres cultivares de habas (Vicia faba L.) tipo baby con hbito de crecimiento determinado, pertenecientes a la variedad botnica major, los cuales, fueron introducidos desde Espaa por el proyecto FIA (PI-C2005-1-A-15), siendo los nombres de estos cultivares,

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Retaca, Alarg y Verde Bonita, facilitados por la Dra. Cecilia Baginski, docente de la Universidad de Chile. 3.4.2 Medios de cultivo. El medio utilizado para realizar los aislamientos de los distintos hongos fue agar papa destroza (39 g APD Merck, en 1000 mL de agua destilada) + 2 a 3 gotas de Ac. lctico por cada 100 mL de medio. Este fue sometido a 121 C durante 15 a 20 minutos, para su esterilizacin. 3.4.3 Material de laboratorio. Se describen a continuacin los materiales utilizados en el laboratorio, para realizar la presente investigacin. 3.4.3.1 Equipos. Balanza digital Sartorius Basic Cientec (Modelo BA - 610), cmara de incubacin Heraeus (Modelo BK - 60), estufa de esterilizacin de aire caliente Memmert (Modelo ULM - 500), estufa de esterilizacin de aire caliente Orthmann, microscopio y lupa de la marca Motic. 3.4.3.2 Material de vidrio. Matraces Erlenmeyer (1000 mL), pipetas graduadas (10 mL), placas Petri (6 y 9 cm de dimetro), portaobjetos, tubos de vidrio y vasos

precipitados (25, 250, 500 y 1000 mL). 3.4.3.3 Otros. Agua destilada estril, agua destilada, asa de siembra, bandejas de plstico, bistur, bolsas plsticas, pinzas, etanol de 96, hipoclorito de sodio al 5% (producto comercial 5%), jeringas estriles (10 mL), papel secante, pelcula plstica, toalla Nova estril, mechero a gas y papel aluminio. 3.4.4 Fertilizacin. Se aplic el equivalente a 40 unidades de N, 260 unidades de P2O5 y 280 unidades de KCl, utilizando como fertilizantes Nitram, sper fosfato triple y muriato de potasio. El nitrgeno, fue aplicado en forma manual al momento de la siembra una vez tapados los surcos de semillas, el fsforo y el potasio, fueron aplicados en su totalidad sobre la hilera al momento de realizar la siembra, ste fue tapado con una parte de suelo para evitar el contacto con la semilla. 3.5 Mtodo. El mtodo utilizado en este estudio se detalla a continuacin: 3.5.1 Siembra y cosecha. Se realizaron tres siembras, las cuales, fueron realizadas en forma manual los das, 7 de agosto, 1 de septiembre y 22 de septiembre, del ao 2009. La distancia entre hileras utilizada fue de 35 cm y se distribuy una semilla cada

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10, 8,3 y 7,1 cm sobre la hilera, para lograr de esta forma densidades de 20, 30 y 40 plantas por m2. Posteriormente las semillas fueron tapadas, quedando a una profundidad entre 5 y 6 cm aproximadamente. La cosecha de la primera, segunda y tercera fechas de siembra, fueron realizadas en forma manual, los das 29 de diciembre de 2009, 6 de enero de 2010 y 25 de enero de 2010, respectivamente. El criterio de cosecha utilizado fue cuando el hilum del grano de haba estuviese color caf claro. 3.5.2 Control de malezas. Las malezas fueron controladas de forma qumica a travs de un herbicida de pre siembra, adems, se realiz control de forma mecnica y manual, manteniendo el cultivo con una baja presin de malezas durante todo su perodo de crecimiento. 3.5.3 Control de plagas y enfermedades. Las enfermedades no fueron controladas para ningn tratamiento, slo se realizaron aplicaciones para el control de pilme (Epicauta pilme Mol.). 3.6 Diseo experimental. El ensayo, se realiz con un diseo en parcelas subdividas, completamente aleatorizadas, con tres fuentes de variacin y tres niveles por cada tratamiento (Figura 3). La primera fuente hace referencia a las fechas de siembra (F1=7/8/2009; F2=1/9/2009 y F3=22/9/2009), la segunda a la densidad de siembra (20, 30 y 40 plantas m-2) y la ltima a los cultivares a utilizar en el estudio (Retaca, Alarg y Verde Bonita), en la Figura 8, se muestran las caractersticas del ensayo en terreno. La superficie de las parcelas fue de 30 m2 (3x10m) y cada tratamiento const de una superficie de 3.15 m2 (3,15x1m) por repeticin. La unidad experimental fue de 10 plantas por tratamiento y por repeticin, con tres repeticiones, se consideraron dos hileras borde por repeticin, para evitar el efecto borde.

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Bloque 1 Retaca 20 7 d e a g o s to Alarg 40 Verde Bonita 30 Verde Bonita 40

Bloque 2 Retaca 30 Alarg 20 Alarg 20

Bloque 3 Verde Bonita 30 Retaca 30

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Verde Bonita 1 d e s e p tie m b r e 20

Retaca 30

Alarg 20

Alarg 40

Retaca 30

Verde Bonita 40

Alarg 20

Retaca 30

Verde Bonita 20

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Retaca 2 1 d e s e p tie m b r e 20

Verde Bonita 30

Alarg 40

Alarg 20

Retaca 20

Verde Bonita 20

Alarg 20

Verde Bonita 30

Retaca 20

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FIGURA 8 Diseo de campo de las parcelas, con disposicin de cultivares, fechas de siembras y densidades. 3.7 Parmetros a evaluar. Los parmetros evaluados en el estudio son detallados a continuacin: 3.7.1 Presencia de patgenos. Se evalu la presencia de patgenos en el cultivo durante todo el desarrollo de ste, para determinar el momento de aparicin de los distintos agentes fitopatgenos.

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3.7.2 Incidencia de patgenos (%). Al momento de cosecha, se procedi a evaluar la incidencia de patgenos en la unidad experimental. Para ello se utiliz la formula que se detalla a continuacin: Incidencia (%)= Plantas enfermas x100 Total de Plantas 3.7.3 Relacin de la incidencia de enfermedades con los cultivares, fecha de siembra (H, T y DPV) y densidad. Se analizaron las caractersticas climticas

imperantes durante la realizacin del ensayo, con el fin de relacionar este factor con la presencia e incidencia de patgenos en el cultivo. El clculo del dpv se realiz a travs de la siguiente ecuacin: DPV=PVs-PVa PVs=0.61078xe[17.27*C/(237.3+C)] (kPa) PVa= (HR/100) x PVs En donde DPV corresponde al dficit de presin de vapor medido en kPa, PVs al vapor de agua del aire cuando esta saturado, PVa es el vapor de agua del aire en un momento dado, HR a la humedad relativa y C a la temperatura medida en grados Celsius. 3.7.4 Rendimiento (Kg m-2). Una vez realizada la cosecha se procedi a evaluar el rendimiento, con el fin de relacionarlo a la incidencia de enfermedades. Los granos fueron sometidos a 60 C durante 48 horas en una estufa de secado para la obtencin de peso seco. 3.8 Mtodo de evaluacin de enfermedades. Para la evaluacin de la presencia de las distintas enfermedades, se realizaron estimaciones visuales por fecha de siembra, cultivar y densidad. Estas estimaciones fueron realizadas una vez por semana, recolectando hojas con algn sntoma tpico de de enfermedad hasta el momento de cosecha, en donde se realiz la evaluacin final para ver la incidencia de enfermedades para los distintos tratamientos. 3.8.1 Diagnstico de enfermedades. El material vegetal colectado en cada tratamiento, fue trasladado en bolsas plsticas selladas e identificadas, al Laboratorio

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de Fitopatologa del Instituto de Produccin y Sanidad Vegetal, de la Facultad de Ciencias Agrarias de la Universidad Austral de Chile, en Valdivia, para diagnosticar las distintas enfermedades que podran afectar al cultivo y de esta forma comprobar la presencia o ausencia de patgenos en el cultivo. Para la identificacin de los hongos del gnero Botrytis, se utilizaron caractersticas morfolgicas descritas por VON ARX (1981); MIRZAEI et al. (2008) y MORANTE (2007). Para el caso de U. viciae fabae, la identificacin se realiz con las descripciones propuestas por CUMMINS (1978) y EMERAN et al. (2005) y para la caracterizacin de otros hongos, se utilizaron las claves descritas por BARNETT y HUNTER (1987). 3.8.2 Protocolo para el diagnstico de enfermedades. Para el diagnstico de las enfermedades presentes en el material vegetal colectado en campo, se utiliz el protocolo que se detalla a continuacin: 1. Cmaras hmedas a temperatura ambiente por 48 a 72 h y en paralelo siembras en medio de cultivo APD+Ac. Lctico al 2% (para evitar la proliferacin de bacterias) y agar malta. 2. Incubacin de las placas sembradas en estufa a 20 C +/- 2 C, hasta 10 das. 3. Preparacin microscpica del material vegetal de las cmaras hmedas y placas que present esporulacin. 4. Posterior identificacin con las claves descritas anteriormente. 3.9 Anlisis estadstico. Las variables de respuesta como porcentaje de incidencia de cada patgeno y rendimiento fueron sometidos a los supuestos de normalidad y homogeneidad de varianza (pruebas de Shapiro-Wilk y Levene). Slo los datos de rendimiento cumplieron con dichos supuestos, por lo que fueron analizados mediante un ANOVA para representar las diferencias entre los tratamientos. Adems, se realiz una separacin de medias mediante la prueba de Tuckey (P<0.05). Por otra parte, la incidencia (%) de patgenos, fue evaluada mediante la prueba de Kruskal-Wallis, y con una separacin de medianas a posteriori mediante la prueba de Nemenyi (P<0.05). Para el anlisis de datos de rendimiento e incidencia de patgenos se utilizaron los programas SPSS Statistics 17.0 y StatSoft Statistica 7.0, respectivamente

28

4 PRESENTACION Y DISCUSION DE RESULTADOS

4.1 Sntomas presentes en el material vegetal colectado. Se realizaron colectas de tejido vegetal con sntomas de enfermedades, las caractersticas que present este material fueron: manchas foliares y necrosis de hojas. Las manchas no cubran totalmente las hojas y slo se encontraban en los bordes de stas (Figura 9). En las hojas basales de las plantas y generalmente en el tejido senescente, se encontr una gran cantidad de microorganismos saprfitos.

FIGURA 9 Sntomas de hojas recolectadas y evaluadas en las colectas. 4.2 Patgenos asociados al cultivo. En los anlisis fitopatolgico realizados en laboratorio se logr constatar la presencia de patgenos asociados al cultivo para la zona en estudio. Estos corresponden a Botrytis fabae (Figura 13), Botrytis cinerea (Figura 14), causantes de la mancha

chocolate, ambos patgenos se encontraron principalmente en hojas de la parte media hacia abajo, afectando desde los bordes y centro de la lmina de los fololos. Uromyces viciae fabae causante de la roya del haba (Figura 15), adems present uredosporas y teleutosporas, distribuidas en las hojas de toda la planta. Sclerotinia sclerotiorum, se observ en algunas plantas del cultivo, produciendo una pudricin a nivel de cuello y debilitando las plantas afectadas. Por ltimo, se identific un complejo

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de hongos saprfitos, de los gneros Alternaria (Figura 10), Cladosporium (Figura 11) y Stemphylium (Figura 12), estos hongos se ubicaban principalmente en hojas basales senescentes o en hojas que presentaban algn tipo de dao mecnico. Para la zona de Valdivia, todos los patgenos asociados al cultivo en este ensayo se encuentran descritos por MUJICA Y VERGARA (1980). Sin embargo, slo B. fabae y U. viciae fabae estn sealados para haba. ANDRADE (2010)1 seala que en la zona, se ha observado el desarrollo de B. cinerea, S. sclerotiorum y hongos saprfitos afectando al cultivo.

FIGURA 10 Colonia y conidias de Alternaria sp. (40x)

ANDRADE, N. (2010). Ing Agr. M. Sc. Instituto de Produccin y Sanidad Vegetal, Universidad Austral de Chile. Comunicacin personal.

30

FIGURA 11 Colonia y conidiforo de Cladosporium sp. (40x)

FIGURA 12 Colonia y conidias de Stemphylium sp. (40x)

FIGURA 13 Colonia y conidiforo de B. fabae (40x).

31

FIGURA 14 Colonia y conidiforo de B. cinerea (40x).

FIGURA 15 Uredosporas y teleutosporas de U. viciae fabae (40x). 4.3 Aparicin de enfermedades en el cultivo. De acuerdo al procedimiento establecido en el punto 3.8.1, se realizaron colectas de material vegetal con el fin de determinar el momento de aparicin de enfermedades en el cultivo, de esta forma, se logr establecer cuales fueron las condiciones y fechas bajo la cuales comenzaron a aparecer los distintos patgenos (las condiciones ambientales imperantes durante el desarrollo del ensayo pueden ser revisadas en ANEXO 1 y 2), as, se logr determinar que uno de los primeros patgenos en aparecer es B. cinerea, el cual se encontr presente a partir de la segunda semana de noviembre, en todos los tratamientos. Las condiciones ambientales que antecedieron la aparicin de B. cinerea, fueron, una temperatura promedio de 8.5 C y humedad relativa de 80%, estas condiciones estn relacionadas con las condiciones trmicas

32

necesarias para que la conidia germine, la cual, necesita temperaturas ptimas de 15 C, con mnimas de 4 y mximas de 30 C, adems de humedades relativas sobre el 70% (Rewal and Grewal, 1989, citado por DAVIDSON et al., 2007). AGRIOS (2005), seala que las esporas de este patgeno necesitaran de agua libre para poder germinar, situacin que se present en los das anteriores a la deteccin del patgeno. El segundo patgeno en aparecer en el cultivo corresponde a B. fabae, el cual, se evidenci a partir de la primera semana de diciembre, para todos los tratamientos. Las condiciones ambientales que acompaaron la infeccin del patgeno indican temperaturas promedio de 11.6 C y humedad relativa promedio de 74%. Los resultados obtenidos para B. fabae concuerdan con lo sealado por Harrison (1980), citado por SMITH et al. (1992) y DAVIDSON et al (2007) que este microorganismo necesita de temperaturas entre 15 y 20 C para poder iniciar su infeccin, adems de humedad relativa desde 70%, pero con un ptimo entre 85 a 90%. Esto es

complementado por HEBBLETHWAITE (1983); HARRISON (1988); SMITH et al. (1992); HAWTHORNE et al. (2004); AGRIOS (2005) y SAHILE (2008) que mencionan que el inicio de la enfermedad producida por este patgeno se vera afectado bajo condiciones secas, ya que, se necesitara agua libre en la superficie de la hoja para poder germinar (lluvia), condicin que tambin se evidenci los das anteriores a la deteccin del patgeno. Uno de los ltimos patgenos en aparecer en el cultivo correspondi a U. viciae fabae, el cual pas desapercibido la mayor parte del ciclo del cultivo. Para la primera fecha de siembra, slo fue posible encontrarlo al momento de cosecha y con una muy baja presencia. Para la segunda y tercera fecha de siembra, fue posible determinar su presencia a partir de la primera semana de enero; las condiciones ambientales bajo las cuales se evidencia U. viciae fabae, indican temperaturas medias de 13 C y humedad relativa de 80%. Los resultados obtenidos en relacin a U. viciae fabae sugieren que este patgeno es uno de los que necesita de mayores temperaturas y humedad relativa para germinar, estos resultados son sustentados por Hering y Jospeht (1997), citados por VOEGELE (2006), quienes determinaron que este patgeno evidenciara uredosporas a temperaturas ptimas de 20 C, aunque, se pueden presentar entre los 5 y 26 C. MERSHA Y HAU (2008), aaden que para que se conserven las pstulas del patgeno es necesaria una humedad relativa entre 65 y 90%.

33

Los valores de dficit de presin de vapor obtenidos para B. cinerea, B, fabae y U. fabae son 0,22, 0,36 y 0,30 kPa respectivamente. Los resultados obtenidos para este factor son similares a lo sealado por MILLER et al. (2003) quien determin la condiciones bajo las cuales se desarrollaban ciertas especies de oidios, observando que la germinacin de esporas es ptima entre 0,22 y 0,34 Kpa. GROVE Y BOAL (1991) agrega que la germinacin puede ocurrir entre 0 y 0,8 Kpa, siendo ptima a medida que disminuye el DPV. Por lo tanto al utilizar el DPV como factor para determinar el momento de aparicin de enfermedades en el cultivo de haba, es importante poner especial atencin a las condiciones de dficit de presin de vapor a partir del mes de octubre para las especies del gnero Botrytis y a partir del mes de diciembre para U. viciae fabae. El patgeno, Sclerotinia sclerotiorum se evidenci a partir de la ltima semana de noviembre para la primera fecha de siembra; para la segunda y tercera fecha de siembra, se detect a partir de la primera y ltima semana de diciembre respectivamente. Los hongos saprfitos se desarrollaron durante todo el perodo de crecimiento del cultivo. 4.4 Incidencia de patgenos. Al momento de la cosecha, se realiz la evaluacin de incidencia de patgenos por cada tratamiento y los resultados obtenidos son presentados a continuacin. 4.4.1 Incidencia de patgenos por fecha de siembra. Se determin que para el patgeno B. fabae (Cuadro 4), s existen diferencias estadsticas para los datos provenientes de las distintas fechas de siembra (Kruskal - Wallis H(2)=60,19278; p=0,00001).

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CUADRO 4 Incidencia de patgenos (% promedio), para las distintas fechas de siembra (7 de agosto, 1 de septiembre y 22 de septiembre). Fecha de siembra 1 de septiembre 49,6 b 16,7 a 6,3 b

Patgeno B. fabae B. cinerea U. viciae fabae

7 de agosto 14,1 c 12,2 a 0,4 b

22 de septiembre 84,4 a 3,3 b 75,2 a

Diferentes letras en las filas indican diferencias significativas (p<0.05, Nemenyi).

Los valores ms altos de incidencia de B. fabae, se presentan en la tercera fecha de siembra, en donde, se registraron valores sobre el 50% en todas las repeticiones, concentrndose la mayor cantidad de datos entre el 80 y 90%. Adems, se puede ver que a medida que se retrasa la fecha de siembra la presencia de B. fabae en el cultivo aumenta (Figura 16).

100

80 Incidencia B. fabae (%)

60

40

20

0 FI F II Fecha F III

Mediana 25%-75% Min-Max

FIGURA 16 Distribucin de la incidencia de B. fabae para las tres fechas de siembra.

35

Los

resultados

obtenidos

se

relacionan

con

informacin

entregada

por

HEBBLETHWAITE (1983), MARCELLOS y CONSTABLES (1986) y SILLERO et al. (2010), quienes indican que siembras tempranas tendran una gran influencia en la baja incidencia de B. fabae. Este patgeno es altamente dependiente de las condiciones ambientales, expandindose rpidamente en la planta y en el cultivo con temperaturas entre los 15 y 20 C, con mnimas de 4 y mximas de 30 C; adems de presentar una relacin directa con la humedad ambiental, distribuyndose rpidamente sobre humedades relativas del 70% (Harrison 1980 citado por, DAVIDSON et al., 2007; HARRISON, 1981; HARRISON;1988; HEBBLETHWAITE, 1983; HAWTHORNE, et al., 2004 y SILLERO et al., 2010), lo que explicara el aumento de la presencia de este patgeno a medida que se atrasa la fecha de siembra. Para el patgeno B. cinerea, se determin que existen diferencias significativas (Kruskal Wallis H(2)=18,40541; p=0,0001) al analizar los datos provenientes de las distintas fechas de siembra, observndose la mayor presencia de este patgeno para la primera y segunda fecha de siembra (Cuadro 4). Los valores ms altos de B. cinerea, fueron registrados en la segunda fecha de siembra, en donde, los datos se encuentran concentrados entre un 10 y 25% de incidencia, la cual, puede llegar hasta 80%. La tercera fecha de siembra es la que presenta los valores ms bajos alcanzando un 20% de presencia del patgeno en el cultivo (Figura 17).

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100

80 Incidencia B. cinerea (%)

60

40

20

0 FI F II Fecha F III

Median 25%-75% Min-Max

FIGURA 17 Distribucin de la incidencia de B. cinerea para las tres fechas de siembra. Los resultados obtenidos para B. cinerea son similares a lo propuesto por HARRISON (1988), quien menciona que a medida que B. fabae aumenta rpidamente en el cultivo, B. cinerea igual lo hace, pero con una menor tasa de expansin. A medida que avanzan las lesiones de B. fabae estas pueden enmascarar a las de B. cinerea, lo que podra explicar la baja incidencia de este ltimo en la tercera fecha de siembra, ya que, segn lo propuesto por Mansfield (1980), citado por DAVIDSON et al. (2007), este patgeno es capaz de metabolizar fitoalexinas del husped ms rpidamente que B. cinerea evitando de esta forma que se acumulen en el tejido invadido, siendo de esta forma B. fabae ms agresiva que B. cinerea. Para el patgeno, U. viciae fabae se determin que existen diferencias significativas (Kruskal Wallis, H(2)=53,61694; p=0,00001) al analizar los datos provenientes de las fechas de siembra (Cuadro 4), siendo la primera y ltima fecha de siembra las que presentan una menor y mayor incidencia de este patgeno respectivamente. Los valores de la distribucin de la presencia de B. fabae para las distintas fechas de

37

siembra (Figura 18), indican que a medida que se retrasa la fecha de siembra la incidencia del patgeno aumenta, presentndose los valores ms altos para la tercera fecha de siembra, en donde se registraron valores entre 0 y 100%, concentrndose la mayor cantidad de datos entre el 40 y 100%. Para la primera y segunda fecha de siembra los valores de incidencia de U. viciae fabae son bajos, alcanzando mximos de 30% para la segunda fecha. Los resultados obtenidos en este ensayo son similares a lo mencionado por HANOUNIK y BISRI (1991) y MARCELLOS y CONSTABLES (1986), que U. viciae fabae se caracteriza por aparecer tarde en el cultivo, lo que se observ para las fechas uno y dos de siembra. Adems, la alta incidencia de este patgeno para la tercera fecha, es explicada por las mejores condiciones de temperatura y humedad que favorecieron el desarrollo de este patgeno, el cual, presenta un crecimiento ptimo con temperaturas cercanas a los 20 C, esta condicin fue lograda de mejor manera en la ltima fecha de siembra (Webb and Hawtin 1981, citado por HANOUNIK y BISRI, 1991). Para la tercera fecha de siembra el patgeno fue encontrado en estados ms tempranos de desarrollo (prefloracin), lo que permite un mayor tiempo de diseminacin del patgeno en el cultivo, razn por la cual, se observa una alta presencia de U. viciae fabae, esto es totalmente contrario a lo observado en la primera y segunda fechas de siembra, en las cuales, el patgeno se evidenci poco tiempo antes de la cosecha.

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100

80 Incidencia U. fabae (%)

60

40

20

0 FI F II Fecha F III

Mediana 25%-75% Min-Max

FIGURA 18 Distribucin de la incidencia de U. viciae fabae para las tres fechas de siembra. Las fechas tempranas de siembra pueden evitar altos niveles de inculo o las condiciones propicias para el desarrollo de una enfermedad en particular, por lo cual, existiran menores niveles de incidencia de patgenos (B. fabae, B. cinerea y U. viciae fabae) al adelantar la fecha de siembra, esto debido principalmente a las menores temperaturas existentes en este perodo (Kharabanda y Tewari, 1996 citados por, MIGAWER y BAKEER, 2003). Los valores ms altos de presencia de patgenos para las fechas ms tardas, podran ser explicados adems, por el hecho de que al momento en que estos fueron evidenciados las plantas de las ltimas siembras estaban en un estado menor de desarrollo, lo que determina un mayor tiempo a cosecha y por ende un mayor tiempo de diseminacin del patgeno en el cultivo. 4.4.2 Efecto de la densidad de siembra incidencia de patgenos. Se determin que no existen diferencias estadsticamente significativas (p<0.05) en cuanto al nivel de

39

incidencia de enfermedades en las distintas densidades (20, 30 y 40 pl m-2) utilizadas en el estudio, para la primera y segunda fecha de siembra. CUADRO 5 Incidencia de patgenos (% promedio), por densidad de plantas (20, 30 y 40 plantas por m-2), para cada fecha de siembra. 7 de agosto de 2009 Densidad (pl m-2) 30 20,0 a 11,1 a 1,1 a 1 de septiembre de 2009 Densidad (pl m-2) 30 46,6 a 18,8 a 5,5 a 22 de septiembre de 2009 Densidad (pl m-2) 30 90,0 a 3,3 a 81,1 a

Patgeno B. fabae B. cinerea U. viciae fabae

20 10,0 a 10,0 a 0,0 a

40 12,2 a 15,5 a 0,0 a

Patgeno B. fabae B. cinerea U. viciae fabae

20 53,3 a 8,8 a 6,6 a

40 48,8 a 22,2 a 6,6 a

Patgeno B. fabae B. cinerea U. viciae fabae

20 85,5 a 3,3 a 65,5 a

40 77,7 b 3,3 a 78,8 a

Diferentes letras en las filas indican diferencias significativas (p<0.05, Nemenyi).

En la tercera fecha de siembra (22 de septiembre de 2009), se observ que slo para B. fabae hubo diferencias significativas (Kruskal Wallis H(2)=7,379789; p =0,0250) en la incidencia del patgenos de las distintas densidades del cultivo (Cuadro 5), as la densidad de 40 pl m-2 fue la que registr una menor presencia de este patgeno. Los resultados provenientes de la presencia de enfermedades para las distintas densidades, no concuerdan por lo sealado en la literatura, la cual plantea que un incremento en la densidad de siembra se traducira en un aumento en la incidencia de enfermedades (AGRIOS, 2005; DAVIDSON et al., 2007 y SAHILE et al., 2008), ya que, una mayor poblacin producira un microclima en el interior del cultivo aumentando la

40

humedad relativa y temperaturas. A medida que el nmero de plantas en un cultivo es mayor, la competencia entre individuos aumenta, razn por la cual las plantas tienden a generar un menor nmero de estructuras con el fin de optimizar los recursos (AzconBieto y Talon, 2000 citados por, BRIONES, 2009). Datos publicados por BRIONES, (2009) sealan que cultivares de haba de crecimiento determinado que fueron sometidos a altas densidades de siembra, tendieron a producir un nmero menor de ramas por planta, lo que podra explicar que no existan diferencias entre la incidencia de enfermedades para las distintas densidades, ya que, las plantas sometidas a una menor densidad produciran una mayor cantidad de tallos, producindose as un clima al interior del cultivo similar al obtenido con altas densidades de siembra (menor nmero de tallos). Otros factores a considerar son que los cultivares de crecimiento determinado tienen una altura que no supera los 60 cm, lo que mejorara en cierta forma la aireacin del cultivo. Otro factor que pudo haber influido en los resultados es que se observ tendedura de plantas en los tratamientos con altas densidades (30 y 40 plantas m-2), lo que pudo haber modificado el microclima del cultivo. 4.4.3 Evaluacin de la incidencia de patgenos para los distintos cultivares. Los resultados de la evaluacin de incidencia de patgenos para los cultivares utilizados en el ensayo son presentados en el Cuadro 6. Se determin que no existen diferencias estadsticamente significativas en cuanto al nivel de incidencia de los patgenos para los cultivares utilizados en el ensayo, al aplicar la prueba de de Kruskal Wallis (p < 0.05). De los resultados obtenidos, se deduce que el patgeno que tuvo una mayor incidencia sobre los distintos cultivares corresponde a B. fabae seguido por U. viciae fabae y en ltimo lugar tenemos a B. cinerea, lo cual es similar a lo reportado por la literatura la que indica como los principales patgenos a B. fabae y U. viciae fabae (HEBBLETHWAITE, 1983, MORANTE, 2007; ELAD et al., 2007; SAHILE, 2008; SILLERO, 2010 y STODDARD et al., 2010). Los valores similares de incidencia para los distintos cultivares, sugieren una misma conformacin gentica en cuanto a la susceptibilidad o resistencia a enfermedades, sin

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embargo, de los datos obtenidos en este ensayo no es posible atribuir algn grado de susceptibilidad o resistencia para los distintos cultivares. CUADRO 6 Incidencia de patgenos (% promedio), para los cultivares en estudio (Alarg, Retaca y Verde Bonita). 7 de agosto de 2009 Cultivares Retaca 18,8 a 11,1 a 0,0 a 1 de septiembre de 2009 Cultivares Retaca 45,5 a 16,6 a 11,1 a 22 de septiembre de 2009 Cultivares Retaca 83,3 a 6,66 a 81,1 a

Patgeno B. fabae B. cinerea U. viciae fabae

Alarg 10,0 a 14,4 a 0,0 a

Verde Bonita 13,3 a 11,1 a 1,1 a

Patgeno B. fabae B. cinerea U. viciae fabae

Alarg 62,2 a 14,4 a 4,44 a

Verde Bonita 41,1 a 18,8 a 3,3 a

Patgeno B. fabae B. cinerea U. viciae fabae

Alarg 78,8 a 1,1 a 78,8 a

Verde Bonita 91,1 a 2,22 a 65,5 a

Diferentes letras en las filas indican diferencias significativas (p<0.05, Nemenyi).

4.5 Evaluacin del rendimiento. Se determin un efecto estadsticamente significativo (ANOVA Factorial F(2,54)=10,32; p=0,0001) entre las fechas de siembra, mostrando los mayores rendimientos la primera y segunda fecha de siembra (7 de agosto y 1 de septiembre de 2009), entre las cuales, no se observaron diferencias significativas (p< 0,05), la menor productividad del cultivo fue observada en la ltima fecha de siembra (22 de septiembre de 2009) (Cuadro 7). Al analizar los efectos de la densidad de plantas sobre el rendimiento, se observaron diferencias significativas (ANOVA Factorial F(2,54)=23,61; p=0,000), en donde los rendimientos ms altos fueron registrados por las mayores densidades (30 y

42

40 pl m-2). As mismo, no se presentaron diferencias estadsticamente significativas entre cultivares (p< 0,05), presentando en promedio un rendimiento de 0,32 a 0.36 kg m-2 de haba. CUADRO 7 Rendimientos (kg m-2), por fecha de siembra, densidad y cultivar. Rendimiento (kg m-2) Fecha de siembra 1 de septiembre 0,36 a Densidad (pl m-2) 30 0,36 a Cultivar Retaca 0,34 a

7 de agosto 0,38 a

22 de septiembre 0,28 b

20 0,26 b

40 0,41 a

Alarg 0,32 a

Verde Bonita 0,36 a

Diferentes letras en las filas indican diferencias significativas (p<0.05, Tukey).

El mismo efecto sobre el rendimiento de la fecha y densidad de siembra ha sido descrito por MARCELLOS y CONSTABLES (1986); SAXENA et al. (1991); TURK y TAWAJA (2002); LOPEZ-BELLIDO et al. (2005); NADAL y MORENO (2006) y BRIONES (2009), que reportaron un efecto positivo en el rendimiento gatillado por fechas tempranas de siembra y altas densidades de plantas. La evaluacin de incidencia de enfermedades para los distintos tratamientos demostr que siembras tempranas (7 de agosto y 22 de septiembre de 2009) presentan los valores ms bajo de incidencia para las enfermedades en general (mancha chocolate y roya del haba). Por otra parte, la ltima fecha de siembra es la que muestra la menor presencia de enfermedades. Al analizar los resultados de rendimiento e incidencia, se puede apreciar una relacin inversa entre estos factores, es decir que a medida que la incidencia de enfermedades aumenta (fechas ms tardas) el rendimiento se reduce (Figura 19). Sin embargo, los mayores rendimientos obtenidos en fechas ms tempranas de siembra se atribuyen principalmente a una mayor duracin de la etapa

43

de crecimiento vegetativo y llenado de grano, lo que determina una mayor productividad del cultivo (MARCELLOS y CONSTABLES, 1986; TURK y TAWAJA, 2002 y LOPEZ-BELLIDO et al., 2005), aunque las enfermedades pueden tener algn efecto, en este ensayo no es posible determinarlo.
0,5 100 90 0,4 Rendimiento (kg m )
-2

80 70

0,3

60 50

0,2

40 30

0,1

20 10

0 7 de agosto Rendimiento 1 de septiembre Mancha chocolate 22 de septiembre Roya del haba

FIGURA 19 Relacin entre la incidencia de enfermedades y rendimiento, para las distintas fechas de siembra ( Rendimiento Mancha chocolate). Los datos provenientes de la incidencia de enfermedades por densidad de siembra no mostraron variacin. Sin embargo, al analizar los resultados de rendimiento para este tratamiento, se aprecia que a medida que se aumenta la poblacin del cultivo el rendimiento se incrementa (Figura 20). Esto se debe principalmente al hecho de que la densidad de plantas modifica los componentes del rendimiento (nmero de plantas por unidad de superficie, tallos por planta, nudos reproductivos por tallo, vainas por nudo reproductivo, semillas por vaina y peso de las semillas), por lo cual, una mayor densidad, producir un aumento del rendimiento (LOPEZ-BELLIDO et al., 2005). Por otra parte, como se mencion en el punto 4.4.2 la incidencia de enfermedades no podra haber sido afectada por las variaciones de densidad, debido a que las plantas al ver limitado (mayores densidades) los recursos tienden a producir una menor cantidad Roya del haba

Incidencia de enfermedades (%)

44

de estructuras (ej. tallos), razn por la cual, el clima al interior del cultivo pudo haber sido similar.
0,5 100 Incidencia de enfermedades (%) 90 Rendimiento (kg m-2 ) 0,4 80 70 0,3 60 50 0,2 40 30 0,1 20 10 0

20 pl m-2
Rendimiento

30 pl m-2
Mancha chocolate

40 pl m-2
Roya del haba

FIGURA 20 Relacin entre la incidencia de enfermedades y rendimiento, para las distintas densidades de siembra ( Rendimiento Mancha chocolate). La reduccin de rendimiento para los distintos tratamientos, no puede ser atribuida en su totalidad a la presencia de enfermedades, debido a que en la respuesta del cultivo, pueden influir otros factores como la fecha de siembra y densidad que establecen distintas respuestas fisiolgicas de la planta, en la determinacin del rendimiento. El efecto de la incidencia de enfermedades sobre el rendimiento, no pudo ser determinado en este estudio, si bien se asume un grado de influencia, sta, no pudo ser cuantificada, debido a que el mtodo para determinar dicha relacin no fue el adecuado. Por lo que en futuros trabajos se recomienda que este factor sea considerado y se podra utilizar una escala de severidad de enfermedades para hacer este anlisis. Una vez finalizada la discusin referente a los resultados obtenidos en este ensayo es necesario indicar que la hiptesis planteada al iniciar este estudio no es rechazada ya que los cultivares de crecimiento determinado Retaca, Alarg y Verde Bonita, son Roya del haba

45

afectados por distintas enfermedades. Los resultados obtenidos corresponden al primer ao de evaluacin de este ensayo, razn por la cual, es necesario realizar futuras evaluaciones con el fin de validar los datos obtenidos.

46

5 CONCLUSIONES

De acuerdo a los resultados obtenidos en esta investigacin y bajo las condiciones en que se realizaron los ensayos se puede concluir lo siguiente: Los patgenos que afectaron al cultivo en el estudio fueron: Botrytis fabae, Botrytis cinerea, Uromyces viciae fabae y Sclerotinia sclerotiorum. Adems, fue posible encontrar una serie de hongos saprfitos tales como: Alternaria sp., Stemphylium sp. y Cladosporium sp. afectando a hojas senescentes.

Los primeros patgenos en infectar al cultivo fueron B. cinerea y B. fabae, los que se presentaron desde los primeros estadios de desarrollo. Despus de la etapa de floracin y aproximndose al momento de cosecha, se encontr el patgeno U. viciae fabae. Los hongos saprfitos se observaron durante todo el ciclo de crecimiento del cultivo.

Para la incidencia de patgenos que afectaron al cultivo, slo las fechas de siembra presentaron diferencias estadsticamente significativas, siendo las fechas tardas las que presentaron un mayor ataque de stos. No se registraron diferencias significativas en la incidencia de patgenos por densidad de siembra ni cultivar.

Las condiciones ambientales que favorecieron el inicio de la infeccin de patgenos en el cultivo fueron una alta humedad relativa (>70%), temperaturas mnimas desde 8 C, 11,5 C y 13 C y dficit de presin de vapor de 0,22, 0,36 y 0,30 kPa (desde el mes de octubre), para B. cinerea, B. fabae y U. viciae fabae, respectivamente.

Para el factor rendimiento, las fechas de siembra y densidades presentaron diferencias estadsticamente significativas, siendo las fechas tempranas (7 de agosto y 1 de septiembre) y altas densidades (30 y 40 pl m-2), las que

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presentaron los rendimientos ms altos. No se registraron diferencias significativas en el rendimiento por cultivar.

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BIBLIOGRAFIA

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ANEXOS

ANEXO 1 Temperaturas medias mensuales (C) durante el perodo que se realiz el ensayo y de un ao promedio.
18 16 Temperatura ( C) 14 12 10 8 6 4 2 0 mar09 abr09 may 09 jun09 jul09 ago09 s ep09 oc t09 nov09 dic 09 ene 10 feb10

Temperatura media ens ayo

Temperatura media his tric a

Durac in ens ayo

ANEXO 2 Precipitaciones durante el perodo en que se desarrollo el ensayo y un ao promedio.

600 P rec ipitac in (m m ) 500 400 300 200 100 0 mar-09 abr-09 may-09 jun-09 P rec ipitac in ens ayo jul-09 ago-09 sep-09 oct-09 nov-09 dic-09 ene-10 feb-10

P rec ipitac in his tric a

Durac in ens ayo

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ANEXO 3 Datos de incidencia de patgenos para la primera fecha de siembra, por cultivar y densidad (%).

Fecha de siembra 6/8/2009 Cultivar Alarg Densidad Repeticin B. fabae 20 1 2 3 30 1 2 3 40 1 2 3 Retaca 20 1 2 3 30 1 2 3 40 1 2 3 Verde Bonita 20 1 2 3 30 1 2 3 40 1 2 3 10 10 10 10 30 0 0 20 0 10 20 10 30 10 20 30 20 20 0 20 0 0 50 30 0 10 10 B. cinerea U. fabae 0 10 10 10 20 0 0 50 30 0 20 10 0 10 20 0 10 30 10 10 20 20 10 10 10 0 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 10 0 0 0

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ANEXO 4 Datos de incidencia de patgenos para la segunda fecha de siembra, por cultivar y densidad (%). Fecha de siembra 1/9/2009 Cultivar Alarg Densidad Repeticin B. fabae 20 1 2 3 30 1 2 3 40 1 2 3 Retaca 20 1 2 3 30 1 2 3 40 1 2 3 Verde Bonita 20 1 2 3 30 1 2 3 40 1 2 3 40 70 50 70 60 50 70 80 70 50 70 70 80 30 10 20 40 40 80 30 20 50 50 20 70 50 0 B. cinerea U. fabae 10 10 10 30 0 0 20 10 40 0 0 10 10 30 10 40 30 20 20 10 10 80 10 0 30 0 10 0 0 20 0 0 10 0 0 10 0 10 30 0 10 30 0 10 10 0 0 0 0 0 0 0 10 20

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ANEXO 5 Datos de incidencia de patgenos para la tercera fecha de siembra, por cultivar y densidad (%). Fecha de siembra 22/9/2009 Cultivar Alarg Densidad Repeticin B. fabae 20 1 2 3 30 1 2 3 40 1 2 3 Retaca 20 1 2 3 30 1 2 3 40 1 2 3 Verde Bonita 20 1 2 3 30 1 2 3 40 1 2 3 50 100 90 80 90 90 60 80 70 90 80 80 90 90 90 70 80 80 90 90 100 100 90 90 80 80 100 B. cinerea U. fabae 0 0 0 0 10 0 0 0 0 0 0 20 20 0 0 20 0 0 10 0 0 0 0 0 0 0 10 60 40 100 10 100 100 100 100 100 20 100 100 100 100 100 10 100 100 0 70 100 20 100 100 0 100 100

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ANEXO 6 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. fabae por fecha de siembra. Fecha 7 de agosto 1 de septiembre 22 de septiembre Muestras 27 27 27 Rangos promedios 16,8 40,1 66,1

Estadgrafo H (2) = 60,19278; p =0,00001

ANEXO 7 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. cinerea por fecha de siembra. Fecha 7 de agosto 1 de septiembre 22 de septiembre Muestras 27 27 27 Rangos promedios 46,4 50,4 26,2

Estadgrafo H (2) = 18,40541; p =0,0001

ANEXO 8 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de U. viciae- fabae por fecha de siembra. Fecha 7 de agostos 1 de septiembre 22 de septiembre Muestras 27 27 27 Rangos promedios 23,5 34,8 64,7

Estadgrafo H (2) = 53,61694; p =0,00001

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ANEXO 9 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. fabae por cultivar, en la primera fecha de siembra de siembra. Cultivar Alarg Retaca Verde Bonita Muestras 27 27 27 Rangos promedios 11,55 18,11 12,33

Estadgrafo H (2) = 3,930024 p =0,1402

ANEXO 10 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. cinerea por cultivar, en la primera fecha de siembra. Cultivar Alarg Retaca Verde Bonita Muestras 27 27 27 Rangos promedios 14,11 13,55 14,33

Estadgrafo H (2) =0,0515696 p =0,9745

ANEXO 11 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de U. viciae fabae por cultivar, en la primera fecha de siembra. Cultivar Alarg Retaca Verde Bonita Muestras 27 27 27 Rangos promedios 13,5 13,5 15

Estadgrafo H (2) = 2,000000 p =0,3679

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ANEXO 12 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. fabae por densidad, para la primera fecha de siembra Densidad 20 30 40 Muestras 27 27 27 Rangos promedios 11,88 16,88 13,22

Estadgrafo H (2) =2,053901 p =0,3581

ANEXO 13 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. cinerea por densidad, para la primera fecha de siembra Densidad 20 30 40 Muestras 27 27 27 Rangos promedios 13,27 14,22 14,50

Estadgrafo H (2) = 0,1318991 p =0,9362

ANEXO 14 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de U. viciae fabae por densidad, para la primera fecha de siembra Densidad Muestras Rangos promedios

20 30 40

27 27 27

13,5 15,0 13,5

Estadgrafo H (2) = 2,000000 p =0,3679

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ANEXO 15 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. fabae por cultivar, en la segunda fecha de siembra de siembra. Cultivar Alarg Retaca Verde Bonita Muestras 27 27 27 Rangos promedios 18.11 12.44 11.44

Estadgrafo H (2) = 3,814208 p =0,1485

ANEXO 16 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. cinerea por cultivar, en la segunda fecha de siembra. Cultivar Alarg Retaca Verde Bonita Muestras 27 27 27 Rangos promedios 13.55 14.72 13.72

Estadgrafo H (2) = 0,1239743 p =0,9399

ANEXO 17 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de U. viciae fabae por cultivar, en la segunda fecha de siembra. Cultivar Alarg Retaca Verde Bonita Muestras 27 27 27 Rangos promedios 12,83 17,61 11,55

Estadgrafo H (2) = 3,757377 p =0,1528

63

ANEXO 18 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. fabae por densidad, para la segunda fecha de siembra. Densidad 20 30 40 Muestras 27 27 27 Rangos promedios 15,05 13,0 13,94

Estadgrafo H (2) = 0,3123862 p =0,8554

ANEXO 19 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. cinerea por densidad, para la segunda fecha de siembra.

Densidad 20 30 40

Muestras 27 27 27

Rangos promedios 10,88 13,16 17,94

Estadgrafo H (2) = 4,037333 p =0,1328

ANEXO 20 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de U. viciae fabae por densidad, para la segunda fecha de siembra Densidad Muestras Rangos promedios

20 30 40

27 27 27

13,55 13,05 15,38

Estadgrafo H (2) = 0,5566063 p =0,7571

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ANEXO 21 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. fabae por cultivar, en la tercera fecha de siembra de siembra. Cultivar Alarg Retaca Verde Bonita Muestras 27 27 27 Rangos promedios 11,44 12,16 18,38

Estadgrafo H (2) = 4,607978 p =0,0999

ANEXO 22 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. cinerea por cultivar, en la tercera fecha de siembra.

Cultivar Alarg Retaca Verde Bonita

Muestras 27 27 27

Rangos promedios 12,33 16,0 13,66

Estadgrafo H (2) = 1,865741 p =0,3934

ANEXO 23 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de U. viciae- fabae por cultivar, en la tercera fecha de siembra. Cultivar Alarg Retaca Verde Bonita Muestras 27 27 27 Rangos promedios 14,38 15,38 12,22

Estadgrafo H (2) = 1,064525 p =0,5873

65

ANEXO 24 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. fabae por densidad, para la tercera fecha de siembra.

Densidad 20 30 40

Muestras 27 27 27

Rangos promedios 15,66 17,77 8,55

Estadgrafo H (2) = 7,379789 p =0,0250

ANEXO 25 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de B. cinerea por densidad, para la tercera fecha de siembra. Densidad 20 30 40 Muestras 27 27 27 Rangos promedios 14,0 14,0 14,0

Estadgrafo H (2) = 0,000000 p =1,000

ANEXO 26 Prueba de H de Kruskal Wallis para la incidencia de U. viciae fabae por densidad, para la tercera fecha de siembra

Densidad

Muestras

Rangos promedios

20 30 40

27 27 27

11,66 15,38 14,94

Estadgrafo H (2) = 1,678916 p =0,4319

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ANEXO 27 Anlisis de varianza de rendimiento para fecha de siembra, densidad y cultivar. Suma de cuadrados 0,044 0,754 0,284 0,070 3,545 0,528 0,774 Cuadrado medio F-Calc 0,022 0,377 0,142 0,018 1,772 0,132 0,065 0,077 0,290 4,921 1,855 0,229 23,136 1,722 0,842

Fuente Bloque Fecha Cultivar Fecha * Cultivar Densidad Fecha * Densidad Fecha * Cultivar * Densidad

GL 2 2 2 4 2 4 12 52 81

P-Valor 0,749 0,011 0,167 0,921 0,000 0,159 0,608

Error 3,984 Total 123,329 P < 0,05 indica diferencias significativas.